JPH09255572A

JPH09255572A - ケモカイン受容体拮抗剤

Info

Publication number: JPH09255572A
Application number: JP8069500A
Authority: JP
Inventors: Susumu Honda; 進本多; Tomoyuki Fujisawa; 朋行藤澤; Harumi Oohayashi; ハル実大林
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1996-03-26
Filing date: 1996-03-26
Publication date: 1997-09-30

Abstract

(57)【要約】【課題】優れたケモカイン受容体拮抗剤の提供。【解決手段】一般式【化１】〔式中、Ａ環は置換されていてもよいベンゼン環を、Ｒ
¹は置換されていてもよい炭化水素基を、Ｒ³およびＲ⁴
は置換されていてもよいＣ_1-6炭化水素基を示す〕で表
わされる化合物またはその塩を含有してなるケモカイン
受容体拮抗剤。【効果】優れたケモカイン受容体拮抗作用を有してお
り、例えば、ウイルス性疾患あるいは感染性疾患、腫
瘍、アレルギー性疾患、炎症性疾患、糖尿病性疾患、中
枢性疾患、高脂血症、高コレステロール血症、透析によ
る血小板減少症、脊髄損傷、骨粗鬆症、潰瘍性大腸炎、
消化性潰瘍、敗血症（ショック）、肺・心臓における再
潅流障害、不安定狭心症、一過性脳虚血発作、心弁膜
症、臓器移植後拒絶反応、血管形成術後再狭搾、全身性
エリテマトーデス、多発性硬化症、腎不全、子宮内膜
症、肺繊維症、成人呼吸遍迫症候群などに対する優れた
治療・予防効果を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ベンズアゾシン化
合物等を含有してなるケモカイン受容体拮抗剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】ケモカイン（chemokine, chemotactic c
ytokineの略）は、白血球に対する遊走活性を有する一
群のタンパク質である（クリティカル・レビュース・イ
ン・イムノロジー（Critical Reviews in Immunology）
12:17-46 (1992); カレント・オピニオン・イン・イム
ノロジー（Current Opinion in Immunology）6:865-873
(1994)）。近年、ケモカインが炎症の急性期および慢性
期においてその病態の発症、進展、および増悪に関与し
ていることが明らかにされつつある。ケモカインはいず
れも４個のシステインをもち、１番目と２番目のシステ
インの間に１個のアミノ酸が挿入されたＣＸＣケモカイ
ンサブファミリー（αケモカインサブファミリー）と１
番目と２番目のシステインが隣接したＣＣケモカインサ
ブファミリー（βケモカインサブファミリー）に分かれ
る。ＣＣケモカインサブファミリーには、ＲＡＮＴＥＳ
（regulated on activation, normal T expressed and
secreted）、ＭＩＰ−１α（macrophage inflammatory
protein 1α）、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１（monocyte
chemoattractant protein 1）、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−
３、Ｉ−３０９などがある。ＣＣケモカインは、単球、
リンパ球、好酸球、好塩基球、肥満細胞に作用してこれ
らの細胞を遊走させ、また脱顆粒や種々の炎症性メディ
エーターの放出などの作用をもつ。ＣＣケモカインのう
ち、ＭＩＰ−１αおよびＲＡＮＴＥＳに高い親和性を示
すヒトＭＩＰ−１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体（ＣＣＣＫ
Ｒ−１と略称する場合もある）の構造は、１９９３年に
明らかになった（セル（Cell）72:415-425(1993);ジャ
ーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（J. E
xp. Med.）177:1421-1427(1993)）。その後、ＭＩＰ−
１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体はＭＣＰ−３に対する受容体
でもあることが報告された（ジャーナル・オブ・バイオ
ロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）270:16491-
16494 (1995)）。

【０００３】一方、慢性関節リウマチ患者滑膜組織で、
ＲＡＮＴＥＳおよびＭＩＰ−１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体
のｍＲＮＡの発現量が亢進していることが観察され（ラ
ンセット（Lancet）343:547-548(1994)）、また心臓移
植後の心血管の内膜肥厚部位でＲＡＮＴＥＳのｍＲＮＡ
の発現量が亢進したので（サーキュレイション（Circul
ation）82:III-699(1990)）、該疾患にＲＡＮＴＥＳが
関与することが示唆される。さらに、腎移植拒絶時に移
植部位でＲＡＮＴＥＳｍＲＮＡの発現およびＲＡＮＴ
ＥＳタンパク量が増加したので（ランセット（Lancet）
343:209-211(1994)）、臓器移植拒絶にＲＡＮＴＥＳが
関与すると考えられる。また、リウマチ患者滑液中にＭ
ＩＰ−１αタンパクが増加することが報告され（ジャー
ナル・オブ・クリニカル・インベスチゲイション（J. C
lin. Invest.）93:921-928(1994)）、マウスコラーゲン
関節炎実験において抗ＭＩＰ−１α抗体の投与が、関節
炎の発症を遅らせさらに症状を寛和させた（ジャーナル
・オブ・クリニカル・インベスチゲイション（J. Clin.
Invest.）95:2868-2876(1995)）。さらに、抗ＭＩＰ−
１α抗体の投与はマウス実験的自己免疫性脳脊髄炎（マ
ウス実験的アレルギー性脳脊髄炎）にも有効であった
（ジャーナル・オブ・イムノロジー（J. Immunol.）15
5:5003-5010(1995)）。したがって、ＭＩＰ−１αも慢
性関節リウマチの発症に関与し、また多発性硬化症にも
関与すると推察される。好酸球、好塩基球および肥満細
胞は、炎症部位への集積、活性化によって、アレルギー
性疾患の発症、進展、および増悪に関わる。ＲＡＮＴＥ
Ｓは、好酸球の遊走因子でもあり（ジャーナル・オブ・
イムノロジー（J. Immunol.）176:587(1992); ジャーナ
ル・オブ・イムノロジー（J. Immunol.）176:1489(199
2)）、ヒトにＲＡＮＴＥＳを皮内注射すると単核球と好
酸球の浸潤がみられた（ファセブジャーナル（FASEB
J.）9:A804(1995)）。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】以上のことから、これ
らのＣＣケモカインの作用を阻害する拮抗剤は、慢性関
節リウマチ、動脈硬化、気管支喘息、アトピー性皮膚
炎、多発性硬化症、腎炎などの治療・予防剤として用い
ることができる。しがしながら、現在ＣＣケモカインの
作用を阻害する拮抗剤の報告はない。また、いくつかの
ベンズアゾシン化合物が鎮痛作用を有することが知られ
ている（ジャーナル・オブ・ヘテロサイクリック・ケミ
ストリー（J. Heterocycl. Chem.）9:1057-1059(197
2)、ジャーナル・オブ・ヘテロサイクリック・ケミスト
リー（J. Heterocycl. Chem.）9:1065-1069(1972)）
が、これらの化合物がＣＣケモカイン受容体拮抗作用を
示すことは全く報告されていない。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題に鑑み、ＭＩＰ−１α、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−３な
どのＣＣケモカインによって惹起される疾患を阻害する
新規な薬剤を開発するために、種々の化合物を用いて研
究を重ねた結果、公知のベンズアゾシン化合物にＣＣケ
モカイン受容体拮抗作用を見出した。本発明者らは、こ
れらの知見に基づいて、さらに検討を重ねた結果、本発
明を完成するに至った。

【０００６】すなわち、本発明は（１）一般式

【化３】〔式中、Ａ環は置換されていてもよいベンゼン環を、Ｒ
¹は置換されていてもよい炭化水素基を、Ｒ²およびＲ³
はそれぞれ置換されていてもよいＣ_1-6炭化水素基を示
す〕で表わされる化合物またはその塩を含有してなるケ
モカイン受容体拮抗剤、

【０００７】（２）塩が、一般式

【化４】〔式中、Ｒ⁶は水素原子または置換されていてもよい炭
化水素基を、Ｘ^-はアニオン原子を、他の記号は第
（１）項と同意義を示す〕で表わされる化合物である第
（１）項記載のケモカイン受容体拮抗剤、

【０００８】（３）Ａ環が水酸基で置換されたベンゼン
環である第（１）項記載の拮抗剤、（４）Ｒ¹で示され
る炭化水素基がＣ_1-15炭化水素基である第（１）項記載
の拮抗剤、（５）Ｒ¹で示される炭化水素基がＣ_2-6アル
ケニル基またはＣ_7-13アラルキル基である第（１）項記
載の拮抗剤、（６）Ｒ²およびＲ³がメチル基である第
（１）項記載の化合物、（７）Ｒ⁶で示される炭化水素
基がＣ_1-15炭化水素基である第（２）項記載の拮抗剤、
（８）Ｒ⁶で示される炭化水素基がＣ_2-6アルケニル基ま
たはＣ_7-13アラルキル基である第（２）項記載の拮抗
剤、（９）Ｘ^-がハロゲンイオンである第（２）項記載
の拮抗剤、（１０）ケモカインがＣＣケモカインである
第（１）項記載の拮抗剤、（１１）ＣＣケモカインがＲ
ＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１αまたはＭＣＰ−３である第
（１０）項記載の拮抗剤、および（１２）ケモカイン受
容体拮抗剤が、アレルギー性疾患、動脈硬化症、気管支
喘息、アトピー性皮膚炎、多発性硬化症、慢性関節リウ
マチまたは炎症性疾患の治療・予防剤であるである第
（１）項記載の拮抗剤を提供する。

【０００９】上記の式〔Ｉ〕において、Ａ環で示される
ベンゼン環が有していてもよい置換基としては、例え
ば、置換されていてもよい水酸基、ハロゲン原子などで
置換されていてもよいＣ_1-15アルキル（例、メチル，エ
チル，プロピル，イソプロピル，ブチル，イソブチル，
ｓ−ブチル，ｔ−ブチル，ペンチル，ヘキシル，ヘプチ
ル，オクチル，ノニル，デシル，ウンデシル，ドデシ
ル，トリデシル，テトラデシル，ペンタデシル等が挙げ
られ、このうちＣ_1-6アルキルが好ましい）、Ｃ_3-7シク
ロアルキル（例、シクロプロピル，シクロブチル，シク
ロペンチル，シクロヘキシル等）、Ｃ_2-10アルケニル
（例、ビニル，アリル，２−メチルアリル，２−ブテニ
ル，３−ブテニル，３−オクテニル等、このうちＣ_2-6
アルケニルが好ましい）、Ｃ_2-10アルキニル（例、エチ
ニル，２−プロピニル，３−ヘキシニル等、このうちＣ
_2-6アルキニルが好ましい）、Ｃ_3-10シクロアルケル
（例、シクロプロペニル，シクロペンテニル，シクロヘ
キセニル等、このうちＣ_3-7シクロアルキルが好まし
い）、Ｃ_6-14アリール（例、フェニル，ナフチル等）、
Ｃ_7-15アラルキル（例、ベンジル，フェニルエチル，ト
リチル等）、ニトロ、メルカプト、オキソ、チオキソ、
シアノ、カルバモイル、カルボキシル、Ｃ_1-5アルコキ
シ−カルボニル（例、メトキシカルボニル，エトキシカ
ルボニル等）、スルホ、ハロゲン原子（フッ素、塩素、
臭素、ヨウ素）、

【００１０】Ｃ_1-6アルキルチオ（例、メチルチオ，エ
チルチオ，ｎ−プロピルチオ，イソプロピルチオ，ｎ−
ブチルチオ，ｔ−ブチルチオ等）、Ｃ_6-14アリールチオ
（例、フェニルチオ等）、Ｃ_1-6アルキルスルフィニル
（例、メチルスルフィニル，エチルスルフィニル等）、
Ｃ_6-14アリールスルフィニル（例、フェニルスルフィニ
ル等）、Ｃ_1-6アルキルスルホニル（例、メチルスルホ
ニル，エチルスルホニル等）、Ｃ_6-14アリールスルホニ
ル（例、フェニルスルホニル等）、アミノ、Ｃ_1-6アシ
ルアミノ（例、アセチルアミノ，プロピオニルアミノ
等）、モノ−またはジ−Ｃ_1-4アルキルアミノ（例、メ
チルアミノ，エチルアミノ，ｎ−プロピルアミノ，イソ
プロピルアミノ，ｎ−ブチルアミノ，ジメチルアミノ，
ジエチルアミノ等）、Ｃ_3-8シクロアルキルアミノ
（例、シクロプロピルアミノ，シクロブチルアミノ，シ
クロペンチルアミノ，シクロヘキシルアミノ等）、Ｃ
_6-14アリールアミノ（例、アニリノ等）、Ｃ_1-6アルキ
ルカルボニル（例、ホルミル，アセチル，ヘキサノイル
等）、Ｃ_6-14アリール−カルボニル（例、ベンゾイル
等）、炭素原子以外に酸素、硫黄、窒素等から選ばれた
ヘテロ原子を１ないし４個含む５ないし６員複素環基
（例、２−または３−チエニル，２−または３−フリ
ル，３−，４−または５−ピラゾリル，２−，４−また
は５−チアゾリル，３−，４−または５−イソチアゾリ
ル，２−，４−または５−オキサゾリル，３−，４−ま
たは５−イソオキサゾリル，２−，４−または５−イミ
ダゾリル，１，２，３−または１，２，４−トリアゾリ
ル，１Ｈまたは２Ｈ−テトラゾリル，２−、３−または
４−ピリジル，２−，４−または５−ピリミジル，３−
または４−ピリダニジル，キノリル，イソキノリル，イ
ンドリル等）もしくはその縮合環基などが用いられる。
なかでも、置換されていてもよい水酸基などが好まし
い。置換の数は１ないし４個、好ましくは１ないし２個
である。

【００１１】上記のＡ環で示されるベンゼン環の置換基
として用いられる「置換されていてもよい水酸基」とし
ては、例えば、式 −ＯＲ⁴ 〔式中、Ｒ⁴は水素原子、置換されていてもよい炭化水
素基または置換されていてもよいアシル基を示す〕で表
わされる基などが用いられる。Ｒ⁴で示される置換され
ていてもよい炭化水素基の炭化水素基としては、例え
ば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロ
アルキル基、アリール基、アラルキル基などが用いら
れ、なかでもＣ_1-19炭化水素基などが好ましく、特にＣ
_1-15炭化水素基などが好ましい。アルキル基としては、
例えば、Ｃ_1-15アルキル基（例、メチル，エチル，プロ
ピル，イソプロピル，ブチル，イソブチル，sec−ブチ
ル，tert−ブチル，ペンチル，ヘキシル，ヘプチル，オ
クチル，ノニル，デシル，ウンデシル，ドデシル，トリ
デシル，テトラデシル，ペンタデシル等）などが用いら
れ、なかでも、メチル，エチル，プロピル，イソプロピ
ル，ブチル，ｔ−ブチル，ペンチル，ヘキシル等のＣ
_1-6アルキル基などが好ましい。アルケニル基として
は、例えば、Ｃ_2-10アルケニル基（例、ビニル，アリ
ル，２−メチルアリル，２−ブテニル，３−ブテニル，
３−オクテニル等）などが用いられ、なかでも、ビニ
ル，ブタジエニル，ヘキサトリエニル等のＣ_2-6アルケ
ニル基などが好ましい。アルキニル基としては、例え
ば、Ｃ_2-10アルキニル基（例、エチニル，２−プロピニ
ル，イソプロピニル，ブチニル、ｔ−ブチニル，３−ヘ
キシニル等）などが用いられ、なかでもＣ_2-6アルキニ
ル基などが好ましい。シクロアルキルとしては、例え
ば、シクロプロピル，シクロペンチル，シクロヘキシル
等のＣ_3-7シクロアルキル基などが好ましい。アリール
基としては、例えば、フェニル，ナフチル，アントラセ
ニル等のＣ_6-14アリール基などが用いられる。アラルキ
ルとしては、例えば、ベンジル，フェニルエチル，ベン
ツヒドリール，トリチル等のＣ_7-19アラルキル基などが
用いられ、なかでもＣ_7-13アラルキルなどが好ましい。
これら炭化水素基の中でも、Ｃ_1-6アルキル基が好まし
い。

【００１２】Ｒ⁴で示される置換されていてもよいアシ
ル基のアシル基としては、例えば、式−ＣＯ-Ｒ⁵（式
中、Ｒ⁵は置換されていてもよい炭化水素基または置換
されていてもよい炭化水素オキシ基を示す）で表わされ
る基などが用いられ、Ｃ_1-15脂肪族カルボン酸から誘導
されるアシル基（Ｃ_1-15アシル基）などが好ましい。上
記炭化水素基および炭化水素オキシ基における炭化水素
基としては、上記のＲ⁴で示されるアルキル基、アルケ
ニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール
基、アラルキル基などの炭化水素基と同様のものが用い
られる。アシル基としては、具体的には、例えば、Ｃ
_1-15アシル基が好ましく、例えば、Ｃ_1-6アルキルカ
ルボニル基（例、ホルミル、アセチル、プロピオニル、
イソプロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリ
ル、イソバレリル、ピバロイル、ヘキサノイル等）、
Ｃ_3-6アルケニルカルボニル基（例、アクリロイル、メ
タクリロイル、クロトノイル、イソクロトノイル等）、
Ｃ_3-7シクロアルキル−カルボニル基（例、シクロプ
ロパンカルボニル、シクロブタンカルボニル、シクロペ
ンタンカルボニル、シクロヘキサンカルボニル等）、
Ｃ_6-14アリール−カルボニル基（例、ベンゾイル、ナフ
トイル等）、Ｃ_7-13アラルキル−カルボニル基（例、
フェニルアセチル、フェニルプロピオニル、フェニルブ
チリル等）、Ｃ_6-14アリール−Ｃ_2-6アルケニルカル
ボニル基（例、シンナモイル、アトロポイル等）、Ｃ
_1-6アルコキシ−カルボニル基（例、アセトキシ，エト
キシカルボニル等）、Ｃ_6-14アリール−オキシカルボ
ニル基（例、ベンズオキシカルボニル等）、Ｃ_7-13ア
ラルキル−オキシカルボニル基（例、ベンジルオキシカ
ルボニル等）などが用いられる。なかでも、炭素数Ｃ
_1-6アルキルカルボニル基、Ｃ_1-6アルコキシ−カルボニ
ル基などが好ましい。

【００１３】上記のＲ⁴またはＲ⁵で示される炭化水素
基、およびＲ⁴で示される炭化水素基オキシ基の炭化水
素基は、次の置換基を有していてもよい。（ｉ）炭化水素基の中でもシクロアルキル基、アリール
基ならびにアラルキル基の置換基としては、例えば、ハ
ロゲン原子で置換されていてもよいＣ_1-15アルキル
（例、メチル，エチル，プロピル，イソプロピル，ブチ
ル，イソブチル，ｓ−ブチル，ｔ−ブチル，ペンチル，
ヘキシル，ヘプチル，オクチル，ノニル，デシル，ウン
デシル，ドデシル，トリデシル，テトラデシル，ペンタ
デシル等が挙げられ、このうちＣ_1-6アルキルが好まし
い）、Ｃ_3-7シクロアルキル（例、シクロプロピル，シ
クロブチル，シクロペンチル，シクロヘキシル等）、Ｃ
_2-10アルケニル（例、ビニル，アリル，２−メチルアリ
ル，２−ブテニル，３−ブテニル，３−オクテニル等、
このうちＣ_2-6アルケニルが好ましい）、Ｃ_2-10アルキ
ニル（例、エチニル，２−プロピニル，３−ヘキシニル
等、このうちＣ_2-6アルキニルが好ましい）、Ｃ_3-10シ
クロアルケル（例、シクロプロペニル，シクロペンテニ
ル，シクロヘキセニル等、このうちＣ_3-7シクロアルキ
ルが好ましい）、Ｃ_6-1 ₄アリール（例、フェニル，ナフ
チル等）、Ｃ_7-13アラルキル（例、ベンジル，フェニル
エチル，トリチル等）、ニトロ、ヒドロキシル、メルカ
プト、オキソ、チオキソ、シアノ、カルバモイル、カル
ボキシル、Ｃ_1-5アルコキシ−カルボニル（例、メトキ
シカルボニル，エトキシカルボニル等）、スルホ、ハロ
ゲン原子（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、Ｃ_1-6アル
コキシ（例、メトキシ，エトキシ，プロポキシ，イソプ
ロポキシ，ブトキシ，イソブトキシ，ｓ−ブトキシ，ｔ
−ブトキシ等）、Ｃ_6-10アリールオキシ（例、フェノキ
シ等）、

【００１４】Ｃ_1-6アルキルチオ（例、メチルチオ，エ
チルチオ，ｎ−プロピルチオ，イソプロピルチオ，ｎ−
ブチルチオ，ｔ−ブチルチオ等）、Ｃ_6-14アリールチオ
（例、フェニルチオ等）、Ｃ_1-6アルキルスルフィニル
（例、メチルスルフィニル，エチルスルフィニル等）、
Ｃ_6-14アリールスルフィニル（例、フェニルスルフィニ
ル等）、Ｃ_1-6アルキルスルホニル（例、メチルスルホ
ニル，エチルスルホニル等）、Ｃ_6-14アリールスルホニ
ル（例、フェニルスルホニル等）、アミノ、Ｃ_1-6アシ
ルアミノ（例、アセチルアミノ，プロピオニルアミノ
等）、モノ−またはジ−Ｃ_1-4アルキルアミノ（例、メ
チルアミノ，エチルアミノ，ｎ−プロピルアミノ，イソ
プロピルアミノ，ｎ−ブチルアミノ，ジメチルアミノ，
ジエチルアミノ等）、Ｃ_3-8シクロアルキルアミノ
（例、シクロプロピルアミノ，シクロブチルアミノ，シ
クロペンチルアミノ，シクロヘキシルアミノ等）、Ｃ
_6-14アリールアミノ（例、アニリノ等）、Ｃ_1-6アルキ
ルカルボニル（例、ホルミル，アセチル，ヘキサノイル
等）、Ｃ_1-6アルキルカルボニルオキシ（例、アセトキ
シ，プロピオニルオキシ等）、Ｃ_6-14アリール−カルボ
ニル（例、ベンゾイル等）、炭素原子以外に酸素、硫
黄、窒素等から選ばれたヘテロ原子を１ないし４個含む
５ないし６員複素環基（例、２−または３−チエニル，
２−または３−フリル，３−，４−または５−ピラゾリ
ル，２−，４−または５−チアゾリル，３−，４−また
は５−イソチアゾリル，２−，４−または５−オキサゾ
リル，３−，４−または５−イソオキサゾリル，２−，
４−または５−イミダゾリル，１，２，３−または１，
２，４−トリアゾリル，１Ｈまたは２Ｈ−テトラゾリ
ル，２−、３−または４−ピリジル，２−，４−または
５−ピリミジル，３−または４−ピリダニジル，キノリ
ル，イソキノリル，インドリル等）もしくはその縮合環
基などが用いられる。置換の数は１ないし６個、好まし
くは１ないし３個、さらに好ましくは１ないし２個であ
る。

【００１５】（ii）炭化水素基の中でもアルキル基、ア
ルケニル基およびアルキニル基の置換基としては、例え
ば、前記したＣ_3-7シクロアルキル、Ｃ_3-10シクロアル
ケル、ニトロ、ヒドロキシル、メルカプト、オキソ、チ
オキソ、シアノ、カルバモイル、カルボキシル、Ｃ_1-5
アルコキシ−カルボニル、スルホ、ハロゲン原子、Ｃ
_1-6アルコキシ、Ｃ_6-14アリールオキシ、Ｃ_1-6アルキル
チオ、Ｃ_6-14アリールチオ、Ｃ_1-6アルキルスルフィニ
ル、Ｃ_6-14アリールスルフィニル、Ｃ_1-6アルキルスル
ホニル、Ｃ_6-14アリールスルホニル、アミノ、Ｃ_1-6ア
シルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ_1-4アルキルアミノ、
Ｃ_3-8シクロアルキルアミノ、Ｃ_6-14アリールアミノ、
Ｃ_1-6アルキルカルボニル、Ｃ_1-6アルキルカルボニルオ
キシ、Ｃ_6-14アリール−カルボニル、炭素原子以外に酸
素、硫黄、窒素等から選ばれたヘテロ原子を１ないし４
個含む５ないし６員複素環基もしくはその縮合環基など
が用いられる。置換の数は１ないし６個、好ましくは１
ないし３個、さらに好ましくは１ないし２個である。

【００１６】Ａ環としては、式

【化５】〔式中、Ｒは置換されていてもよい水酸基を示す〕で表
わされる環が好ましい。Ｒで示される置換されていても
よい水酸基としては、前記のＡ環で示されるベンゼン環
の置換基として例示した置換されていてもよい水酸基
（例えば、式−ＯＲ⁴で表わされる基など）と同様のも
のが用いられる。

【００１７】Ｒ¹で示される置換されていてもよい炭化
水素基としては、前記のＲ⁴で示される置換されていて
もよい炭化水素基と同様のものが用いられる。具体的に
は、Ｒ¹で示される炭化水素基としては、Ｃ_1-15炭化水
素基が好ましく、例えば、Ｃ_1-6アルキル基、Ｃ_2-6アル
ケニル基、Ｃ_7-13アラルキル基が好ましく、特にＣ_2-6
アルケニル基、Ｃ_7-13アラルキル基が好適である。該炭
化水素基の置換基としては、例えば、水酸基、Ｃ_1-6ア
ルコキシ−カルボニルオキシ基、Ｃ_3-7シクロアルキル
基などが好ましい。Ｒで示される置換された炭化水素基
としては、例えば、Ｃ_3-7シクロアルキル基で置換され
たＣ_1-6アルキル基や、水酸基またはＣ_1-6アルコキシ−
カルボニルオキシ基で置換されたＣ_7-13アラルキル基が
好ましい。

【００１８】Ｒ²またはＲ³で示される置換されていても
よいＣ_1-6炭化水素基のＣ_1-6炭化水素基としては、例え
ば、Ｃ_1-6アルキル基、Ｃ_2-6アルケニル基、Ｃ_2-6アル
キニル基などが用いられ、なかでもＣ_1-6アルキル基な
どが好ましく、特にＣ_1-15炭化水素基などが好ましい。
Ｃ_1-6アルキル基としては、例えば、メチル，エチル，
プロピル，イソプロピル，ブチル，イソブチル，sec−
ブチル，tert−ブチル，ペンチル，ヘキシルなどが用い
られ、なかでも、メチル，エチル，プロピル，イソプロ
ピルなどのＣ１−３アルキル基が好ましく、特にメチル
基が好適である。Ｃ_2-6アルケニル基としては、例え
ば、ビニル，アリル，２−メチルアリル，２−ブテニ
ル，３−ブテニル，３−オクテニル等などが用いられ
る。Ｃ_2-6アルキニル基としては、例えば、エチニル，
２−プロピニル，イソプロピニル，ブチニル、ｔ−ブチ
ニル，３−ヘキシニルなどが用いられる。これらＣ_1-6
炭化水素基の置換基としては、例えば、ニトロ、ヒドロ
キシル、メルカプト、オキソ、チオキソ、シアノ、カル
バモイル、カルボキシル、Ｃ_1-3アルコキシ−カルボニ
ル、スルホ、ハロゲン原子、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｃ_1-4ア
ルキルカルボニルオキシ、Ｃ_1-3アルキルチオ、Ｃ_1-3ア
ルキルスルフィニル、Ｃ_1-3アルキルスルホニル、アミ
ノ、Ｃ_1-6アシルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ_1-4アルキ
ルアミノ、Ｃ_1-6アルキルカルボニル、Ｃ_1-6アルキルカ
ルボニルオキシなどが用いられる。置換の数は１ないし
６個、好ましくは１ないし３個、さらに好ましくは１な
いし２個である。

【００１９】化合物〔Ｉ〕の塩としては、例えば、一般
式

【化６】〔式中、Ｒ⁶は水素原子または置換されていてもよい炭
化水素基を、Ｘ^-はアニオン原子を、Ａ環、Ｒ¹、Ｒ²お
よびＲ³は前記と同意義を示す〕で表わされる酸付加塩
が好ましく、特に、一般式

【００２０】

【化７】〔式中、Ｒ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁶およびＸ^-は前記と同
意義を示す〕で表わされる酸付加塩が好適である。

【００２１】Ｒ⁶で示される置換されていてもよい炭化
水素基としては、Ｒ¹で示される置換されていてもよい
炭化水素基と同様のものが用いられる。該炭化水素基と
しては、Ｃ_1-15炭化水素基などが好ましく、例えば、Ｃ
_1-6アルキル基、Ｃ_2-6アルケニル基、Ｃ_7-13アラルキル
基などが用いられる。なかでも、Ｃ_2-6アルケニル基、
Ｃ_7-13アラルキル基が好適である。該炭化水素基の置換
基としては、例えば、水酸基、Ｃ_1-6アルコキシ−カル
ボニルオキシ基、Ｃ_3-7シクロアルキル基などが好まし
い。Ｒ⁶またはＲ⁷で示される置換された炭化水素基とし
ては、例えば、Ｃ_3-7シクロアルキル基で置換されたＣ
_1-6アルキル基や、水酸基またはＣ_1-6アルコキシ−カル
ボニルオキシ基で置換されたＣ_7-13アラルキル基が好ま
しい。より具体的には、Ｒ¹およびＲ⁶としては、一方が
Ｃ_2-6アルケニル基（例えば、−ＣＨ₂ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ
₃）ＣＨ₃など）で、他方が水酸基もしくはＣ_1-6アルコ
キシ−カルボニルオキシ基などで置換されていてもよい
Ｃ_7-13アラルキル基（例えば、ベンジル基など）である
場合が好ましい。Ｘ^-で示されるアニオン原子として
は、例えば、ハロゲンイオン（例えば、塩素イオン、臭
素イオン、ヨウ素イオンなど）、硫酸イオン、硝酸イオ
ン、リン酸イオン、ギ酸イオン、酢酸イオン、クエン酸
イオン、フマール酸イオン、シュウ酸イオン、酒石酸イ
オン、マレイン酸イオン、コハク酸イオン、リンゴ酸イ
オンなどが用いられ、なかでも臭素イオンなどのハロゲ
ンイオンが好適である。

【００２２】化合物〔Ｉ〕のＲ¹、Ｒ²またはＲ³に酸性
基（例えば、カルボキシル基など）または塩基性基（例
えば、アミノ基など）を有している場合、さらに塩とし
て用いてもよく、好ましくは薬理学的に許容される塩が
用いられる。このような塩としては、化合物〔Ｉ〕が酸
性基を有する場合、例えばアルカリ金属（例、ナトリウ
ム、カリウム等）との塩、アルカリ土類金属（例、カル
シウム、マグネシウム等）との塩などの塩基付加塩が挙
げられる。化合物〔Ｉ〕が塩基性基を有する場合、例え
ば無機酸（例、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、酢酸
等），有機酸（例、酢酸、プロピオン酸、クエン酸、フ
マール酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、コハク酸、
リンゴ酸、メタンスルホン酸等）などの酸との塩などの
酸付加塩が用いられる。

【００２３】上記した化合物〔Ｉ〕の中でも、Ａ環とし
ては、式

【化８】〔式中、Ｒ⁴は前記と同意義を示す〕で表わされる基が
好ましく、Ｒ⁴としては、例えば、水素原子、Ｃ_1-6アル
キル基またはＣ_1-6アルコキシ−カルボニル基などが好
ましく、特に、水素原子が好適である。

【００２４】Ｒ¹としては、Ｃ_3-7シクロアルキル基で
置換されたＣ_1-6アルキル基、Ｃ_2-6アルケニル基、
水酸基またはＣ_1-6アルコキシ−カルボニルオキシ基で
置換されたＣ_7-13アラルキル基が好ましい。具体的に
は、シクロプロピルメチル基、−ＣＨ₂ＣＨ＝ＣＨ（Ｃ
Ｈ₃）ＣＨ₃、ベンジル基、フェニルエチル基などが好ま
しい。Ｒ²およびＲ³としては、メチル基などのＣ_1-3ア
ルキル基が好ましい。

【００２５】化合物〔Ｉ〕が塩を形成する場合は、一般
式

【化９】〔式中、Ｒ、Ｒ¹、Ｒ⁶およびＸ^-は前記と同意義を示
す〕で表わされる化合物が好ましい。

【００２６】Ｒとしては、式−ＯＲ⁴¹（式中、Ｒ⁴¹は水
素原子、Ｃ_1-6アルキル基またはＣ_1-6アルコキシ−カル
ボニル基を示す）で表わされる基が好ましく、特に、水
酸基が好適である。Ｒ¹およびＲ⁶としては、一方がＣ
_2-6アルケニル基（例えば、−ＣＨ₂ＣＨ＝ＣＨ（Ｃ
Ｈ₃）ＣＨ₃など）で、他方が水酸基またはＣ_1-6アルコ
キシ−カルボニルオキシ基などで置換されていてもよい
Ｃ_7-13アラルキル基（例えば、ベンジル基など）である
場合などが好ましく、特に、一方が−ＣＨ₂ＣＨ＝ＣＨ
（ＣＨ₃）ＣＨ₃で、他方がベンジル基である場合が好適
である。Ｘ^-としては、例えば、臭素イオン、ヨウ素イ
オンなどが好ましく、特に臭素イオンが好適である。

【００２７】化合物〔Ｉ〕の好適な具体例として下記の
化合物を挙げることができる。〔化合物１〕

【化１０】

【００２８】〔化合物２〕

【化１１】

【００２９】

【発明の実施の態様】化合物〔Ｉ〕またはその塩は、公
知の方法、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法に
より製造することができる。例えば、ジャーナル・オブ
・メディシナル・ケミストリー（J. Med. Chem.）12:69
4-696(1969)、ジャーナル・オブ・ヘテロサイクリック
・ケミストリー（J. Heterocycl. Chem.）9:1057-1059
(1972)、ジャーナル・オブ・ヘテロサイクリック・ケミ
ストリー（J. Heterocycl. Chem.）9:1065-1069(1972)
などに記載されている方法あるいはそれに準じる方法に
従って製造することができる。化合物〔Ｉ〕が不斉炭素
を有する場合には立体異性体が存在しうるが、それらの
各立体異性体およびそれらの混合物も本発明に含まれ
る。また、その置換基に不斉炭素を有する場合にも立体
異性体が存在しうるが、それらの各立体異性体およびそ
れらの混合物も本発明に含まれる。

【００３０】化合物〔Ｉ〕またはその塩は、ケモカイン
受容体拮抗作用を有しており、ケモカイン受容体拮抗剤
として有用である。ここでケモカインとしては、ＣＸＣ
ケモカイン（αケモカイン）とＣＣケモカイン（βケモ
カイン）がある。ＣＸＣケモカインは、好中球、好塩基
球、線維芽細胞などに作用してこれらの細胞を遊走さ
せ、例えば、ＩＬ−８（インターロイキン８）、ＧＲＯ
（growth-related cytokine）、ＮＡＰ−２（neutrophi
l activating peptide 2）などがある。ＣＣケモカイン
は、単球、リンパ球、好酸球、好塩基球、肥満細胞に作
用してこれらの細胞を遊走させ、また脱顆粒や種々の炎
症性メディエーターの放出などの作用を有しており、例
えば、ＲＡＮＴＥＳ（regulated on activation, norma
l T expressed and secreted）、ＭＩＰ−１α（macrop
hage inflammatory protein 1α）、ＭＩＰ−１β、Ｍ
ＣＰ−１（monocyte chemoattractant protein 1）、Ｍ
ＣＰ−２、ＭＣＰ−３、Ｉ−３０９などがある。化合物
〔Ｉ〕またはその塩は、特に、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−
１α、ＭＣＰ−３などのＣＣケモカインとケモカイン受
容体との結合を効率よく阻害することができる。

【００３１】このように化合物〔Ｉ〕またはその塩は、
ケモカインとケモカイン受容体との結合を阻害するケモ
カイン受容体拮抗作用を有しているので、ケモカイン受
容体拮抗剤として、例えば、前記したＣＣケモカインの
作用を抑制することができる。例えば、種々のウイルス
性疾患あるいは感染性疾患（例えば、急性ウイルス性脳
炎、急性バクテリア性髄膜炎、ヘリコバクター・ピロリ
感染症、肺炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、単純ヘ
ルペスウイルス感染症、水痘−帯状疱疹ウイルス感染
症、エイズ感染症、インフルエンザ感染症、侵襲性ブド
ウ状球菌感染症、結核など）、腫瘍（例えば、膀胱ガ
ン、乳ガン、子宮けいガン、慢性リンパ性白血病、慢性
骨髄性白血病、大腸ガン、多発性骨髄腫、悪性骨髄腫、
前立腺ガン、肺ガン、胃ガン、ホジキン病など）、アレ
ルギー性疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、アレルギー
性鼻炎など）、炎症性疾患（例えば、動脈硬化症、心臓
移植後に発症する動脈硬化、（慢性）関節リウマチ、腎
炎など)、糖尿病性疾患（例えば、糖尿病、糖尿病性腎
症、糖尿病性合併症、糖尿病性網膜症、糖尿病性網膜
炎、糖尿病性細小血管症など）、中枢性疾患（例えば、
アルツハイマー病、てんかん、発熱、疼痛、痴呆な
ど）、高脂血症、高コレステロール血症、透析による血
小板減少症、脊髄損傷、骨粗鬆症、潰瘍性大腸炎、消化
性潰瘍、敗血症（ショック）、肺・心臓における再潅流
障害、不安定狭心症、一過性脳虚血発作、心弁膜症、臓
器移植後拒絶反応、血管形成術後再狭搾、全身性エリテ
マトーデス、多発性硬化症、腎不全、子宮内膜症、肺繊
維症、成人呼吸遍迫症候群などの治療・予防に有用であ
り、特にアレルギー性疾患、炎症性疾患の治療・予防に
有用である。

【００３２】化合物〔Ｉ〕またはその塩は、安全で毒性
が低いので、そのままあるいは自体公知の方法に従っ
て、薬理学的に許容される担体を混合した医薬組成物、
例えば錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含
む）、散剤、顆粒剤、カプセル剤、（ソフトカプセルを
含む）、液剤、注射剤、坐剤、徐放剤などとして、経口
的または非経口的（例、局所、直腸、静脈投与等）に、
ヒトまたは哺乳動物（例えば、サル、ウシ、ウマ、ヒツ
ジ、ブタ、イヌ、ネコ、ウサギ、トリ、ラット、マウ
ス、モルモットなど）に投与することができる。本発明
の拮抗剤における化合物〔Ｉ〕またはその塩の含有量
は、製剤全体の約０.１〜１００重量％である。該投与
量は、投与対象、投与ルート、疾患などによっても異な
るが、例えば、（慢性）関節リウマチ治療剤として、成
人（体重６０ｋｇとして）に対し、経口剤として１日あ
たり有効成分として約０.１〜５００ｍｇ、好ましくは
約１〜１００ｍｇ、さらに好ましくは約５〜１００ｍｇ
であって、１日１回〜数回に分けて投与することができ
る。本発明の拮抗剤の製造に用いられてもよい薬理学的
に許容される担体としては、製剤素材として慣用の各種
有機あるいは無機担体物質があげられ、例えば、固形製
剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤；液状製剤
における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝
剤、無痛化剤などが用いられる。また、必要に応じて、
防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、吸着剤、湿潤剤な
どの添加物を用いることもできる。

【００３３】賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、Ｄ
−マンニトール、デンプン、コーンスターチ、結晶セル
ロース、軽質無水ケイ酸などが用いられる。滑沢剤とし
ては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン
酸カルシウム、タルク、コロイドシリカなどが用いられ
る。結合剤としては、例えば、結晶セルロース、白糖、
Ｄ−マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピル
セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポ
リビニルピロリドン、デンプン、ショ糖、ゼラチン、メ
チルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウ
ムなどが用いられる。崩壊剤としては、例えば、デンプ
ン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセ
ルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、
カルボキシメチルスターチナトリウム、Ｌ−ヒドロキシ
プロピルセルロースなどが用いられる。溶剤としては、
例えば、注射用水、アルコール、プロピレングリコー
ル、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油などが用い
られる。溶解補助剤としては、例えば、ポリエチレング
リコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、
安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、
コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウ
ム、クエン酸ナトリウムなどが用いられる。

【００３４】懸濁化剤としては、例えば、ステアリルト
リエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリ
ルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウ
ム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリン
などの界面活性剤；例えば、ポリビニルアルコール、ポ
リビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナト
リウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロー
ス、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピル
セルロースなどの親水性高分子などが用いられる。等張
化剤としては、例えば、ブドウ糖、Ｄ−ソルビトー
ル、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトールな
どが用いられる。緩衝剤としては、例えば、リン酸塩、
酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩などの緩衝液などが用いら
れる。無痛化剤としては、例えば、ベンジルアルコール
などが用いられる。防腐剤としては、例えば、パラオキ
シ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルア
ルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソル
ビン酸などが用いられる。抗酸化剤としては、例えば、
亜硫酸塩、アスコルビン酸などが用いられる。

【００３５】

【実施例】本発明は、さらに以下の参考例および実施例
によって詳しく説明されるが、これらの例によって本発
明が何ら限定されるものではない。本明細書で用いられ
る略号は当該分野で慣用的に使用されるものであり、以
下にその例を示す。ＤＮＡ：デオキシリボ核酸ｃＤＮＡ：相補的デオキシリボ核酸ＲＮＡ：リボ核酸ｍＲＮＡ：メッセンジャーリボ核酸ＢＳＡ：ウシ血清アルブミンＣＨＯ：チャイニーズハムスター卵巣ＤＭＥＭ：ダルベッコ変法イーグル培地ＦＢＳ：ウシ胎児血清ＳＤＳ：ドデシル硫酸ナトリウムＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水

【００３６】後述の参考例１で得られた形質転換体エシ
ェリヒアコリ(Escherichia coli)ＪＭ１０９／ｐＣＣ
Ｒは、平成７年１２月１９日から通商産業省工業技術院
生命工学工業技術研究所（ＮＩＢＨ）に寄託番号ＦＥＲ
ＭＢＰ−５３４２として寄託されており、また平成７
年１２月２８日から財団法人発酵研究所（ＩＦＯ）にＩ
ＦＯ１５９０９として寄託されている。後述の参考例
２で得られたＣＨＯ／ＣＣＲは、平成７年１２月１９日
から通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所（Ｎ
ＩＢＨ）に寄託番号ＦＥＲＭＢＰ−５３４３として寄
託されており、また平成７年１２月２８日から財団法人
発酵研究所（ＩＦＯ）にＩＦＯ５０４５９として寄託
されている。

【００３７】

【参考例１】ヒトＭＩＰ−１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体発
現ベクターの構築ＰＣＲ（polymerase chain reaction）法によりヒト腺
ｃＤＮＡライブラリー（U-937 cells activated by PM
A, クロンテック・ラボラトリーズ社, Palo Alto, CA,
USA）から、Neoteらの報告（セル（Cell）72:415-425(1
993)）のKpn I(392)〜Hinc II(886)に相当する約５００
ｂｐのＤＮＡ断片を得た。これをプローブとして、ヒト
ＭＩＰ−１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体ｃＤＮＡを得て、λ
gt 11のEcoR I 部位にクローン化した。翻訳領域の全塩
基配列を決定し、Neotoらの報告と完全に一致している
ことを確認した。なお、塩基配列の決定は全て蛍光ＤＮ
Ａシークエンサー（Model 373A, Applied Biosystems I
nc., Foster City, CA, USA）により行った。クローン
化されたヒトＭＩＰ−１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体ｃＤＮ
Ａを、以下のようにして動物細胞発現用ベクターである
pAKKO-111HのSal IおよびNhe I部位に導入し、プラスミ
ドｐＣＣＲを構築した。まず、上記のλgt 11をEcoR I
で処理することにより２つの断片を得た。これらをｐＵ
Ｃ１９（宝酒造、京都）のEcoRI部位に導入し、プラス
ミドｐＣＲ１とプラスミドｐＣＲ２を得た。次に、５'
側と３'側の非翻訳領域に切断部位がある制限酵素 TthI
II I と Bst XI を用いてｐＣＲ１とｐＣＲ２の一方のE
coR I部位を削除した。非翻訳領域のEcoR I部位を削除
したこれら２つのプラスミドをSal I -EcoR IおよびXba
I-EcoR Iで消化することにより、２つのＤＮＡ断片を
得た。これらをpAKKO-111HのSal IとNhe I部位に導入し
てヒトＭＩＰ−１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体発現プラスミ
ドｐＣＣＲを得た。該プラスミドｐＣＣＲを大腸菌エシ
ェリヒアコリ（Escherichia coli）ＪＭ１０９に導入
し、形質転換体エシェリヒアコリ（Escherichia col
i）ＪＭ１０９／ｐＣＣＲを得た。

【００３８】

【参考例２】ヒトＭＩＰ−１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体発
現ＣＨＯ細胞株の樹立ヒトＭＩＰ−１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体発現プラスミド
ｐＣＣＲを、CellPhect transfection kit（ファルマシ
ア・バイオテック社, Uppsala, Sweden）を用いてリン
酸カルシウム法により、以下のようにＣＨＯ（ｄｈｆｒ
^-）細胞へ導入した。ＣＨＯ（ｄｈｆｒ^-）細胞を直径１
０ｃｍのシャーレで核酸（+）の非選択培地（MEM-α wi
th RNA and DNA（ギブコ BRL, Life Technologies In
c., GrandIsland, NY, USA）／10%透析FBS（ギブコ BR
L））にて２４時間培養した。このＣＨＯ（ｄｈｆｒ^-）
細胞にｐＣＣＲＤＮＡとリン酸カルシウムの共沈懸濁
物と滴下し、６時間培養した。非選択培地で２回洗浄し
非選択培地を加えて２日間さらに培養し、核酸（−）の
選択培地で４倍に拡大して培養を継続した。３〜４日ご
とに新しい選択培地と交換しながら培養を続け、出現し
たコロニー（dhfr＋形質転換した細胞）を得た。これら
の細胞に対する ¹²⁵I-RANTES（デュポン社, Wilmingto
n, DE, USA）の結合量を調べ、結合量の大きいクローン
を限界希釈法により再クローン化し、ヒトＭＩＰ−１α
／ＲＡＮＴＥＳ受容体を高発現している細胞株ＣＨＯ
（ＣＣＲ）を得た。

【００３９】

【参考例３】結合アッセイによるヒトＭＩＰ−１α／Ｒ
ＡＮＴＥＳ受容体発現の確認９６ウェルマイクロプレート（Nunc, Roskilde, Denmar
k）に５x１０⁴／１００μｌ/wellの実施例２で記述した
ＣＨＯ／ＣＣＲ細胞またはベクタープラスミドpAKKO-11
1HをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞（mock transfect
ants）をまき２４時間培養した。培地を除き、DMEM/0.5
%BSA で希釈した５ｎＭの¹²⁵I-RANTESあるいは¹²⁵I-MIP
-1αを５０μｌ/well加え、室温で３０分間インキュベ
ートした。その後、２００μｌ/wellのＰＢＳで２回洗
浄し、１００μｌ/wellの0.1 NNaOH/1% SDSを加えて細
胞に結合したリガンドを溶出した。結合量の測定はγ
−カウンター（Cobra II, Packard Instrument Compan
y, Meriden, CT, USA）で行った。その結果、ＣＨＯ
（ＣＣＲ）細胞に対して、¹²⁵I-RANTESおよび¹²⁵I-MIP-
1αは結合よく結合した。これに対して、mock transfec
tantsに対する結合量はいずれも低値であった。

【００４０】

【参考例４】種々のＣＣケモカインに対するヒトＭＩＰ
−１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体発現ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ
（ＣＣＲ）細胞）の遊走９６ウェルマイクロケモタキシスチャンバー（NeuroPro
be, Inc., Cabin John, MD, USA）を用いて参考例２で
記述したＣＨＯ（ＣＣＲ）細胞の遊走アッセイを行っ
た。ポアサイズ５μｍのポリカーボネートフレームフィ
ルター（NeuroProbe）を、ＰＢＳで希釈した１０μｇ/
ｍｌのウシフィブロネクチン溶液に室温で１０分間浸漬
したのち風乾することにより前処理を施した。下室にDM
EM/0.5% BSAに溶解した３７μｌの種々の濃度のＣＣケ
モカイン（RANTES、MIP-1α、MIP-1β、MCP-1、MCP-3
（いずれもPepro Tech））を添加し、上室に１ｘ１０⁶c
ells/mlのＣＨＯ（ＣＣＲ）細胞を２００μｌ添加し
て、３７℃で4時間インキュベートした。フィルター下
面に遊走したＣＨＯ（ＣＣＲ）細胞をDiff-Quick (国際
試薬，神戸)で固定染色し、プレートリーダー（Bio-Rad
Laboratories, Richmond, CA, USA）で５９５ｎｍの吸
光度を測定した。その結果、ＣＨＯ（ＣＣＲ）細胞はＲ
ＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１αおよびＭＣＰ−３に対して濃
度依存的に遊走することがわかった。しかしながら、Ｍ
ＩＰ−１βやＭＣＰ−１に対しては遊走しなかった。

【００４１】

【参考例５】ＣＨＯ（ＣＣＲ）細胞による細胞内Ｃａ²⁺
アッセイ参考例２のＣＨＯ（ＣＣＲ）細胞をmodified Gey's buf
fer(MGB)（5mM KCl, 147mM NaCl, 0.22mM KH₂PO₄, 1.1m
M Na₂HPO₄, 5.5mM glucose, 0.3mM MgSO₄, 1mMMgCl₂, 1
0mM HEPES, pH7.4）で２回洗浄したのち、５ｘ１０⁶/ml
になるようにMGBに懸濁した。蛍光指示薬であるfura-PE
3/AM (Teflabs, Austin, TX, USA)終濃度２μＭになる
ように添加して室温で30分間放置することにより細胞内
に取り込ませた。１mM CaCl₂を含むMGBで２回洗浄した
のち、５ｘ１０⁶/mlになるように1mM CaCl₂を含むMGBに
懸濁した。細胞内Ｃａ²⁺濃度の測定はF-2000分光蛍光光
度計（日立製作所、東京）で行った。ＣＨＯ（ＣＣＲ）
細胞を100nM RANTESで刺激することにより、細胞内Ｃａ
²⁺濃度の一過性の上昇が観察された。この上昇はmock t
ransfectantsではみられなかった。ＣＨＯ（ＣＣＲ）細
胞は、ＲＡＮＴＥＳのみならず、ＭＩＰ−１αにも応答
して細胞内Ｃａ²⁺濃度が一過性に上昇したが、ＭＩＰ−
１βに対する応答性は低く、ＭＣＰ−１にはほとんど応
答しなかった。

【００４２】

【参考例６】ジャーナル・オブ・ヘテロサイクリック・
ケミストリー（J. Heterocycle. Chem.）9:1057-1059(1
972)のEXPERIMENT(20)に従って、化合物１および化合物
２が製造される。

【００４３】〔化合物１〕

【化１２】

【００４４】〔化合物２〕

【化１３】

【００４５】

【実施例１】化合物１（１００ｍｇ），ラクトース１６
５ｍｇ，コーンスターチ２５ｍｇ，ポリビニールアルコ
ール４ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム１ｍｇを用
いて、常法により錠剤を製造する。

【実施例２】化合物１（５ｇ）を注射用蒸留水に溶か
し、全量１００ｍｌとした。この液を０.２２μｍのメ
ンブランフィルター(住友電気工業（株）又はザルトリ
ウス社製)を用いて無菌濾過し、洗浄滅菌済バイアルに
２ｍｌずつ分注し、これを常法により凍結乾燥し、１０
０ｍｇ／バイアルの凍結乾燥注射剤を製造する。

【実施例３】化合物２（１００ｍｇ），ラクトース１６
５ｍｇ，コーンスターチ２５ｍｇ，ポリビニールアルコ
ール４ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム１ｍｇを用
いて、常法により錠剤を製造する。

【実施例４】化合物２（５ｇ）を注射用蒸留水に溶か
し、全量１００ｍｌとした。この液を０.２２μｍのメ
ンブランフィルター(住友電気工業（株）又はザルトリ
ウス社製)を用いて無菌濾過し、洗浄滅菌済バイアルに
２ｍｌずつ分注し、これを常法により凍結乾燥し、１０
０ｍｇ／バイアルの凍結乾燥注射剤を製造する。

【００４６】

【実施例５】ヒトＭＩＰ−１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体発
現CHO細胞（ＣＨＯ（ＣＣＲ）細胞）を用いた¹²⁵I-RANT
ES 結合阻害活性の測定９６ウェルマイクロプレート（CulturPlate, Packard）
に参考例２に記述したＣＨＯ（ＣＣＲ）細胞を５ｘ１０
⁴/１００μｌ/wellでまき２４時間培養した。培地を除
いた後、３５μｌ/wellのDMEM/0.5% BSA、ついでDMEM/
0.5% BSAで希釈した化合物１および２を５μｌ/well、
さらに１０μｌ/wellの¹²⁵I-RANTES（終濃度１００〜２
００ｐＭ）を順次添加し、室温で３０〜４０分間インキ
ュベートした。その後２００μｌ/wellのＰＢＳで２回
洗浄し、２５μｌ/wellのエタノールを添加して撹拌し
た。さらに、２００μｌ/wellのシンチレーター（Micro
Scint-20, Packard）を添加して撹拌したのち、細胞に
結合した¹²⁵I-RANTESの放射活性をTopCount（Packard）
で測定した。被験化合物を添加しない場合の結合量を１
００％、ベクタープラスミドpAKKO-111Hをトランスフェ
クトしたＣＨＯ細胞（mock transfectants）への結合を
０％とし、¹²⁵I-RANTESの結合を５０％阻害する濃度（I
C₅₀値）を求め、その結果を下記の表１に示した。上記
の方法で測定した結果、化合物１および２がＣＨＯ（Ｃ
ＣＲ）細胞に対する¹²⁵I-RANTESの結合を阻害すること
を見出した。化合物１および２は、ＣＨＯ（ＣＣＲ）細
胞に対する¹²⁵I-MIP-1αの結合をも阻害した（表１）。

【００４７】

【実施例６】ヒトＭＩＰ−１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体発
現ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ（ＣＣＲ）細胞）の遊走アッセイ
における化合物１の阻害活性参考例４に述べた方法により、ＲＡＮＴＥＳに対するＣ
ＨＯ（ＣＣＲ）細胞の遊走アッセイにおけるベンズアゾ
シン化合物の阻害活性を調べた。下室にはDMEM/0.5% BS
Aに溶解した３７μｌの４０ｎＭのＲＡＮＴＥＳあるい
はＭＣＰ−３を添加し、上室にまずDMEM/0.5% ＢＳＡで
希釈した種々の濃度の化合物１を１００μlを添加し、
ついで２ｘ１０⁶cells/mlのＣＨＯ（ＣＣＲ）細胞を１
００μｌ添加して、３７℃で４時間インキュベートし
た。フィルター下面に遊走したＣＨＯ（ＣＣＲ）細胞を
Diff-Quickで固定染色し、プレートリーダーで５９５ｎ
ｍの吸光度を測定した。いずれの測定も２度行った。下
室に４０ｎＭの濃度のＲＡＮＴＥＳを添加し上室に化合
物１を添加しない場合の吸光度を１００％、下室にDMEM
/0.5% BSAのみを添加し上室に化合物１を添加しない場
合の吸光度を０％として、ＣＨＯ（ＣＣＲ）細胞の遊走
を５０％阻害する濃度（IC₅₀値）を求めた。表１に示し
たように、化合物１のＩＣ₅₀値は、ＲＡＮＴＥＳによる
遊走に対して０.５μＭ、ＭＩＰ−１αによる遊走に対
して３μＭ、ＭＣＰ−３による遊走に対して０.３μＭ
であった。

【００４８】

【実施例７】ヒトＭＩＰ−１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体発
現ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ（ＣＣＲ）細胞）による細胞内Ｃ
ａ²⁺アッセイにおける化合物１の阻害活性参考例５に述べた方法により、細胞内Ｃａ²⁺アッセイに
おける化合物１の阻害活性を調べた。すなわち、ＣＨＯ
（ＣＣＲ）細胞懸濁液に種々の濃度の化合物１を添加
し、その１５０秒後に１０ｎＭのＲＡＮＴＥＳを添加し
て、ＲＡＮＴＥＳの誘因する細胞内Ｃａ²⁺濃度の上昇に
対するベンズアゾシン化合物の作用を調べた。その結
果、細胞内Ｃａ²⁺濃度の上昇を５０％抑える化合物１の
濃度（IC₅₀値）は０.４μＭ（表１）であることがわか
った。また、化合物１の添加のみでは、細胞内Ｃａ²⁺濃
度上昇の一過性の上昇は認められなかった。さらに、化
合物１は１０nMのＭＩＰ−１αによる細胞内Ｃａ²⁺濃度
の上昇をも抑制し、そのIC₅₀値は０.４μＭであった
（表１）この結果は、実施例５および実施例６の結果とともに、
化合物１はヒトＭＩＰ−１α／ＲＡＮＴＥＳ受容体に対
してアゴニストして作用せず、アンタゴニストとして作
用することを示す。また、化合物１はヒトＭＩＰ−１α
／ＲＡＮＴＥＳ受容体のリガンドであるならばＲＡＮＴ
ＥＳ、ＭＩＰ−１αあるいはＭＣＰ−３など種類を問わ
ずその活性を阻害することを示す。

【００４９】

【表１】

【００５０】

【発明の効果】本発明のケモカイン受容体拮抗作用を有
する化合物〔Ｉ〕またはその塩を含有するケカイン受容
体拮抗剤は、ウイルス性疾患あるいは感染性疾患、腫
瘍、アレルギー性疾患、炎症性疾患、糖尿病性疾患、中
枢性疾患、高脂血症、高コレステロール血症、透析によ
る血小板減少症、脊髄損傷、骨粗鬆症、潰瘍性大腸炎、
消化性潰瘍、敗血症（ショック）、肺・心臓における再
潅流障害、不安定狭心症、一過性脳虚血発作、心弁膜
症、臓器移植後拒絶反応、血管形成術後再狭搾、全身性
エリテマトーデス、多発性硬化症、腎不全、子宮内膜
症、肺繊維症、成人呼吸遍迫症候群などの治療・予防剤
として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 31/435 ＡＢＣＡ６１Ｋ 31/435 ＡＢＣＡＢＥＡＢＥＡＢＦＡＢＦＡＢＪＡＢＪＡＢＮＡＢＮＡＢＲＡＢＲＡＢＹＡＢＹＡＣＡＡＣＡＡＣＤＡＣＤＡＣＪＡＣＪＡＣＬＡＣＬＡＣＶＡＣＶＡＤＮＡＤＮＡＤＰＡＤＰＡＤＵＡＤＵＡＤＸＡＤＸＡＤＹＡＤＹ // Ｃ０７Ｄ 221/26 Ｃ０７Ｄ 221/26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式【化１】〔式中、Ａ環は置換されていてもよいベンゼン環を、Ｒ
¹は置換されていてもよい炭化水素基を、Ｒ²およびＲ³
はそれぞれ置換されていてもよいＣ_1-6炭化水素基を示
す〕で表わされる化合物またはその塩を含有してなるケ
モカイン受容体拮抗剤。
【請求項２】塩が、一般式【化２】〔式中、Ｒ⁶は水素原子または置換されていてもよい炭
化水素基を、Ｘ^-はアニオン原子を、他の記号は請求項
１と同意義を示す〕で表わされる化合物である請求項１
記載のケモカイン受容体拮抗剤。
【請求項３】Ａ環が水酸基で置換されたベンゼン環であ
る請求項１記載の拮抗剤。
【請求項４】Ｒ¹で示される炭化水素基がＣ_1-15炭化水
素基である請求項１記載の拮抗剤。
【請求項５】Ｒ¹で示される炭化水素基がＣ_2-6アルケニ
ル基またはＣ_7-13アラルキル基である請求項１記載の拮
抗剤。
【請求項６】Ｒ²およびＲ³がメチル基である請求項１記
載の化合物。
【請求項７】Ｒ⁶で示される炭化水素基がＣ_1-15炭化水
素基である請求項２記載の拮抗剤。
【請求項８】Ｒ⁶で示される炭化水素基がＣ_2-6アルケニ
ル基またはＣ_7-13アラルキル基である請求項２記載の拮
抗剤。
【請求項９】Ｘ^-がハロゲンイオンである請求項２記載
の拮抗剤。
【請求項１０】ケモカインがＣＣケモカインである請求
項１記載の拮抗剤。
【請求項１１】ＣＣケモカインがＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ
−１αまたはＭＣＰ−３である請求項１０記載の拮抗
剤。
【請求項１２】ケモカイン受容体拮抗剤が、アレルギー
性疾患、動脈硬化症、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、
多発性硬化症、慢性関節リウマチまたは炎症性疾患の治
療・予防剤である請求項１記載の拮抗剤。