JPH09253A - ノイラミニダーゼ２０５及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【構成】 下記の理化学的性質を有する新規なノイラミ
ニダーゼ２０５。 （１）作用および特異性：糖蛋白質、糖脂質、オリゴ糖
および多糖類の糖鎖の非還元末端に存在するシアル酸残
基を遊離する反応を触媒する。 （２）至適ｐＨ：５〜７ （３）至適温度：５０℃ 【効果】 微生物由来の新規なノイラミニダーゼ２０５
を提供することができ、大量に且つ安価にしかも夾雑蛋
白質の少ないノイラミニダーゼ溶液を提供することが可
能である。また、コロミン酸とシアル酸含有物質が混在
した試料中に存在する各成分由来のシアル酸量をこのノ
イラミニダーゼ２０５を用いて測定する場合、まずｐＨ
７．５以上でＭｇ²⁺等の二価金属イオンを添加した条件
でシアル酸量を求め、さらに、Ｍｇ²⁺無添加で同様な測
定を行なうことにより、各成分由来のシアル酸量をそれ
ぞれ測定することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規なノイラミニダーゼ
２０５、その製造方法ならびにノイラミニダーゼ２０５
生産能を有する微生物に関する。

【０００２】

【従来の技術】ノイラミニダーゼは、糖蛋白質、糖脂
質、オリゴ糖及び多糖類の糖鎖の非還元末端に存在する
シアル酸残基を遊離させる反応を触媒する酵素である。
ノイラミニダーゼは、血清等の生体液中のシアル酸含有
物質の定量に用いられることはよく知られ、ノイラミニ
ダーゼの供給源としては工業的規模で製造可能であり、
しかも活性の一定したものが得られること等の長所のた
め、微生物由来のものが大半を占めている。

【０００３】従来、微生物由来のノイラミニダーゼに関
しては、ビブリオ・コレラ（Vibriocholerae）、クロス
トリディウム・パーフリンゲン（Clostridium perfring
ens）、ストレプトコッカス・スピーシーズ（Streptoco
ccus sp.）、ストレプトマイセス・スピーシーズ（Stre
ptomyces sp.）等の微生物による培養液中への生産が知
られており、コリネバクテリウム・ディフテリア（Cory
nebacterium diphtheriae）、クレブシエラ・アエロゲ
ネス（Klebsiella aerogenes) 等では大部分が膜結合型
として存在することが知られている。ノイラミニダーゼ
は、シアル酸含有物質中のシアル酸を定量するときに用
いられたり、シアル酸を除去したアシアロ体の調製に広
く用いられている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、新規
なノイラミニダーゼ２０５、その製造方法及び該製造方
法に用いる新規な微生物を提供することである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を鑑み鋭意ノイラミニダーゼ生産菌を探索した結果、ビ
ブリオ属に属する微生物が、新規ノイラミニダーゼ２０
５を産生し、且つ高い酵素生産能を有することを見出
し、本発明を完成した

【０００６】即ち、本発明は、下記の理化学的性質を有
する新規なノイラミニダーゼ２０５である。 （１）作用及び特異性：糖蛋白質、糖脂質、オリゴ糖及
び多糖類の糖鎖の非還元末端に存在するシアル酸残基を
遊離させる反応を触媒する。 （２）至適ｐＨ：５〜７ （３）至適温度：５０℃ （４）分子量：約６５，０００

【０００７】さらに、本発明は、ビブリオ属に属し、ノ
イラミニダーゼ２０５生産能を有する微生物を培地に培
養し、培養物からノイラミニダーゼ２０５を採取するこ
とを特徴とするノイラミニダーゼ２０５の製造方法であ
る。

【０００８】さらにまた、本発明は、ノイラミニダーゼ
２０５生産能を有するビブリオ・スピーシーズＪＴ０２
０５である。

【０００９】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
新規なノイラミニダーゼ２０５は、ビブリオ・スピーシ
ーズＪＴ０２０５を培地に培養し、菌体外にノイラミニ
ダーゼ２０５を生産させ、これを採取することにより得
ることができる。

【００１０】本発明のノイラミニダーゼ２０５の一例で
ある、後述の実施例１で得られるノイラミニダーゼ２０
５の酵素的諸性質を以下に述べる。 （１）作用 糖鎖の非還元末端にα配位ケトシド結合したシアル酸を
加水分解的に遊離する。

【００１１】（２）基質特異性 （試験方法）α２−３シアリルラクトース、α２−６シ
アリルラクトース、コロミン酸、糖脂質（ガングリオシ
ドＧＭ３、ＧＤ３）、糖蛋白質（ムチン、フェツイン）
を基質として用い、これらに含まれるシアル酸量を１０
０ｎｍｏｌに統一し、０．００１〜０．００５単位のノ
イラミニダーゼ２０５によって基質から遊離するシアル
酸量を測定することで各基質への作用の差を比較する。
具体的には、１００ｎｍｏｌのシアル酸を含む基質溶液
２５μｌと０．００３単位／５μｌの酵素液を５０ｍＭ
イミダゾール塩酸バッファー（ｐＨ７．５）＋２０ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ₂中、３７℃、１０分間作用させた後、遊
離したシアル酸量をＴＢＡ法で定量し、各基質から遊離
されたシアル酸量を、α２−３シアリルラクトースを基
質とした場合を基準として比較する。

【００１２】（結果）結果は表１の通りである。

【表１】 ─────────────────────────── 基質 相対反応速度（％） ─────────────────────────── α２−３シアリルラクトース 100 α２−６シアリルラクトース 37.9 コロミン酸 51.4 ガングリオシドＧＭ３ 74.5 ガングリオシドＧＤ３ 76.5 フェツイン 117 ムチン 45.5 ───────────────────────────

【００１３】表１から、本発明のノイラミニダーゼ２０
５は、α２−３，α２−６、α２−８結合したシアル酸
を含むシアリルラクトース、コロミン酸、糖脂質、糖蛋
白質によく作用し、これらのシアロ糖複合体の各種Ｎ−
アセチルノイラミン酸ケトシドを加水分解できる。

【００１４】（３）作用最適ｐＨ 最適ｐＨは、３７℃、１０分間の反応で、ｐＨ５〜７の
間にある。

【００１５】（４）安定ｐＨ範囲 ４℃、２４時間では、ｐＨ５〜１０においても活性の低
下はほとんど見られない。

【００１６】（５）力価の測定方法 ノイラミニダーゼの酵素活性は、反応液中に遊離される
シアル酸量をチオバルビツール酸（ＴＢＡ）法によって
求める。すなわち、５０ｍＭ イミダゾール塩酸バッフ
ァー（ｐＨ７．５）中、１％濃度（ｗ／ｖ）にコロミン
酸を溶解した基質溶液２５μｌと５μｌの酵素液を加え
て３７℃、１０〜２０分間作用させる。この反応溶液に
２５ｍＭのメタ過ヨウ素酸ナトリウムを１２５μｌ加え
て３７℃、３０分間インキュベートした後、２％（ｗ／
ｖ）亜ヒ素酸ナトリウム溶液を１００μｌを添加、０．
１Ｍ チオバルビツール酸１ｍｌを加え、沸騰水浴中、
７分３０秒間加熱後、氷冷し、ｎ−ブタノール：塩酸
（９５：５）２ｍｌを加え、遠心分離後の紫紅色の上清
の５４９ｎｍにおける吸光度を測定する。上記測定条件
で、１分間に１μｍｏｌのシアル酸を遊離させる酵素量
を１単位とした。

【００１７】（６）作用最適温度 ｐＨ５．０、１０分間の反応で、５０℃に至適温度があ
る（図１）。

【００１８】（７）温度安定性 ｐＨ５．０、１０分間の反応で５０℃までは安定である
が５０℃以上では部分的に失活する。

【００１９】（８）分子量 ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる測定で分子量は約６５，００
０、セファクリルＳ−２００ＨＲ（ファルマシア製）を
用いたゲル濾過法で測定したところ、約６２，０００で
ある。

【００２０】（９）等電点 等電点をPhast System (ファルマシア製) でPhast-Gel
IEF 4.0-6.5 を用いて測定した結果、４．８であった。

【００２１】（１０）Ｎ末端アミノ酸配列 Ｎ末端アミノ酸配列はアプライドバイオシステムズ社の
自動アミノ酸配列分析装置（モデル４７０Ａ）に供して
以下のように決定できる。 ＶＡＰＮＶＲＤＶＶＶＦＱＧＧＥＧＧ

【００２２】（１１）二価金属イオンの存在下における
基質特異性 （試験方法）５０ｍＭ イミダゾール塩酸（ｐＨ７．
５）中にコロミン酸、α２−３シアリルラクトース、ガ
ングリオシドＧＭ３、フェツインをそれぞれシアル酸含
量として１００ｎｍｏｌ含む基質溶液２５μｌに０．０
０３単位の酵素液５μｌ加えて３７℃、１０分間反応さ
せる。また、５０ｍＭ イミダゾール塩酸バッファー
（ｐＨ７．５）＋２０ｍＭ ＭｇＣｌ₂中で同様の反応
を行い、反応で生じたシアル酸量をＴＢＡ法で測定す
る。

【００２３】（結果）結果は表２の通りである。

【表２】 ─────────────────────────── 基質 活性 (ΔOD₅₄₉/10min.) ───────────── (-Mg²⁺) (20mM Mg²⁺) ─────────────────────────── α２−３シアリルラクトース 0.681 0.650 コロミン酸 0.002 0.334 ガングリオシドＧＭ３ 0.510 0.497 フェツイン 0.792 0.760 ───────────────────────────

【００２４】表２により、本発明の新規なノイラミニダ
ーゼ２０５は、コロミン酸が基質である場合を除いて、
反応液中のＭｇＣｌ₂の存在に関わらず、ほぼ同程度の
シアル酸を遊離させた。一方、コロミン酸に本酵素を作
用させた場合、ＭｇＣｌ₂を反応液中に添加しない場合
はシアル酸をほとんど遊離しなかったが、ＭｇＣｌ₂を
添加した場合はシアル酸を遊離する。よって、本発明の
ノイラミニダーゼ２０５は、コロミン酸に作用する場合
に限り、反応液に二価金属イオンを添加することによっ
てその活性が上昇する。しかし、ｐＨが７．５以上の範
囲では二価金属イオンを反応液中に加えなければ本酵素
はコロミン酸に対してほとんど作用しない。一方、その
他の基質例えば、シアリルラクトースに対してはｐＨ
７．５以上でも二価金属イオンの添加、無添加に関わら
ず本酵素は作用する。

【００２５】従って、本発明のノイラミニダーゼ２０５
は上記の特有の性質を利用し、以下に述べるようなシア
ル酸含有物質の選択的検出方法に利用できる。即ち、ｐ
Ｈ７．５以上の条件で、コロミン酸とシアリルラクトー
スをはじめとするシアル酸含有物質が混在する試料中の
シアル酸含量を測定する場合に、二価金属イオンを添加
せずに測定すればコロミン酸由来以外のシアル酸量（Ｓ
１）が求められ、二価金属イオンを添加して測定すれば
試料中の全シアル酸量（Ｓ２）が求められる。さらに、
両者の差（Ｓ２−Ｓ１）からはコロミン酸由来のシアル
酸量が算出される。今までの技術でこの様な測定行なう
にはコロミン酸に作用しないノイラミニダーゼと全ての
基質に対して作用するノイラミニダーゼの２種類の酵素
を準備する必要があった。しかし、本発明の新規なノイ
ラミニダーゼ２０５を用いれば一種類の酵素だけで上記
のようなコロミン酸由来のシアル酸含量の測定を行なう
ことができる。

【００２６】上記のノイラミニダーゼ２０５の製造に用
いる微生物としては、例えばビブリオ・スピーシーズＪ
Ｔ０２０５が挙げられる。このビブリオ・スピーシーズ
ＪＴ０２０５は海洋性細菌であり、本発明者らが相模湾
の海水から分離採取したものである。この微生物、ＪＴ
０２０５の天然界からのスクリーニング方法を以下に示
す。

【００２７】海水、海砂、もしくは海泥を微生物源とし
て、直接、コロミン酸、バクト イースト ニトロゲン
ベース W/O アミノアシッド、および海水からなる
滅菌培地に接種する。本培地で増殖した微生物は常法に
したがってシングルコロニーアイソレーションした後、
得られた微生物の培養液を酵素源として、常法によりノ
イラミニダーゼ２０５活性を測定し、該酵素活性を示す
菌株より本菌株を得ることができる。

【００２８】このようにして得られるＪＴ０２０５の菌
学的性質を以下に示す。 菌学的性質： １）形態 （１）細胞の形態は桿菌で、大きさは1 ×0.5 〜2 ×1 μm （２）運動性を示し、鞭毛を有する。 （３）グラム染色性は陰性 （４）胞子は形成しない。 ２）生理的性質 （１）生育温度 ４℃では生育せず ３０℃では生育する ３５℃では生育する ４０℃では生育せず （２）集落の色調 特徴的集落色素を産生せず。 （３）Ｏ−Ｆテスト Ｆ （４）カタラーゼテスト 陽性 （５）オキシダーゼテスト 陽性 （６）グルコースからガスの生成 無し （７）Ｖ−Ｐ反応 陰性 （８）ゼラチン分解能 有り （９）デンプン分解能 有り （１０）硝酸塩還元能 有り （１１）発光性 無し （１２）酸素に対する態度 通性嫌気性 （１３）ＰＨＢの蓄積 β−ヒドロキシ酪酸を基質 有り グルコースを基質 無し （１４）β−ヒドロキシ酪酸の利用能 有り （１５）ＮａＣｌ要求性 有り （１６）リパーゼ活性 有り （１７）マンニトールの資化性 有り （１８）プテリジン誘導体に対する感受性 １０μｇ 感受性 １５０μｇ 感受性 （１９）キノン系 Ｑ−８ （２０）菌体内ＤＮＡのＧＣ含量（モル％）^* ４６ （２１）アルギニンジヒドラーゼ活性 有り （２２）資化性 Ｄ−キシロース − Ｌ−アラビノース − Ｄ−マンノース ＋ シュークロース ＋ セロビオース ＋ Ｄ−グルコン酸塩 ＋ ヘプタン酸 ＋ Ｄ−ソルビトール − エタノール − γ−アミノ酪酸 − Ｌ−プロリン ＋ プトレスシン − 注）＊：ＨＰＬＣ法によって行なった。

【００２９】このＪＴ０２０５菌株の上記の菌学的性質
について、バージーズ マニュアルオブ デタミネイテ
ィブ バクテリオロジー第９改正（１９９４）を用いて
検討した結果、ＪＴ０２０５菌株はビブリオ属に属する
微生物であると同定された。

【００３０】次いでこのＪＴ０２０５菌株の菌学的性質
をビブリオ属に属する類縁の公知種と比較検討したとこ
ろ、表３に示すとおり、ＪＴ０２０５の菌学的性質はそ
の全項目においてビブリオ・ツビアッシー（Vibrio tub
iashii）のそれらとほぼ一致していることが判った。し
かし、ビブリオ・ツビアッシーのType strain であるAT
CC 19109は、コロミン酸を資化することができず、ノイ
ラミニダーゼの酵素活性は認められなかった。したがっ
て、ＪＴ０２０５菌株は、ビブリオ属に属する公知種と
は明らかに区別され、新菌種であると認定し、ビブリオ
・スピーシーズＪＴ０２０５と同定した。そして、この
ビブリオ・スピーシーズＪＴ０２０５は、工業技術院生
命工学工業技術研究所に平成７年５月３０日に寄託し、
その寄託番号はＦＥＲＭ ＢＰ−５１１７である。

【００３１】

【表３】

【００３２】本発明におけるビブリオ・スピーシーズＪ
Ｔ０２０５を培養するには、通常のこの分野の微生物の
一般的な栄養培地を使用できるが、ＮａＣｌ要求性の細
菌であるため、０．５％以上、好ましくは３％程度のＮ
ａＣｌを培地に加える必要があり、天然海水や人工海水
に栄養源として０．２〜２%程度のコロミン酸あるいは
Ｎ−アセチルマンノサミンと０．１〜１％程度の酵母エ
キスを添加した培地を使用することができる。

【００３３】培養は、２０〜３０℃で２０〜４８時間好
気的に行なわれ、これにより培養液中にノイラミニダー
ゼ２０５が生成、蓄積される。培養液からのノイラミニ
ダーゼ２０５の採取時期は、ノイラミニダーゼ２０５の
産生量が菌の増殖とともに増加するので適宜、設定すれ
ば良い。

【００３４】培養物中に産生されるノイラミニダーゼ２
０５は、培養終了後の培養物をそのまま遠心分離して菌
体を除去し、得られる上清を粗酵素液として採取するこ
ともできる。この粗酵素液はさらに酵素の分野で通常用
いられている方法で精製することができる。この精製方
法としては、例えば、硫安分画法や限外濾過膜を用いて
酵素を濃縮した後、イオン交換カラムクロマトグラフィ
ー、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー等で行なえば良
い。

【００３５】本発明のビブリオ・スピーシーズＪＴ０２
０５よりノイラミニダーゼ２０５を生産する具体的方法
は、該微生物を天然海水中に１％Ｎ-アセチルマンノサ
ミン、０．６７％ バクト イースト ニトロゲン ベ
ース ｗ／ｏ アミノ アシッド（Ｄｉｆｃｏ社製）を
加えた培地中で培養温度１５〜３５℃、好ましくは２０
〜３０℃、ｐＨ６．８〜８．８、好ましくは７．２〜
８．２、培養時間、１０〜４８時間、好ましくは１６〜
３６時間培養することにより行われる。

【００３６】目的とする酵素は主に菌体外に分泌される
ため、培養液を遠心分離して菌体を除去すれば、高いノ
イラミニダーゼ活性（約１単位／ｍｌ）を有する粗酵素
液が得られる。さらに、この時点での酵素の比活性は約
５０単位／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎであり、この値は現在
市販されているノイラミニダーゼの中でも高品質のもの
に相当する。さらに、研究や検査に使用する際に問題と
なるプロテアーゼや各種グリコシダーゼ活性をほとんど
含まないことが確認された。すなわち本発明のビブリオ
・スピーシーズＪＴ０２０５を用いれば、培養液上清を
直接、酵素液として用いることができることから、ノイ
ラミニダーゼを安価でしかも簡便に製造することができ
るという優れた利点を有している。

【００３７】

【実施例】以下に実施例をあげて本発明を具体的に説明
する。ただし、本発明はこれらの実施例に限定されるも
のではない。 〔実施例１〕 本発明のノイラミニダーゼ２０５の製造 (1) 酵素の採取 天然海水３５０ｍｌを１２１℃で１５分間滅菌した後、
蒸留水で３ｇのコロミン酸と２ｇのバクト イースト
ニトロゲン ベース ｗ／ｏ アミノ アシッドを溶解
して、滅菌フィルターを用いて無菌的に添加した。これ
に、ビブリオ・スピーシーズＪＴ０２０５の前培養液３
ｍｌを接種し、好気的培養条件下で２７℃で４８時間培
養した。培養終了後、培地を８，０００ｘｇで１５分間
遠心し、菌体を除去して上清液３００ｍｌを得た。この
上清を粗酵素液とした。この粗酵素液の活性と比活性は
それぞれ、０．９６単位／ｍｌ、５０単位／ｍｇ ｐｒ
ｏｔｅｉｎであった。

【００３８】(2) 酵素の精製 上記(1) において得られた粗酵素液を以下の操作で精製
した。粗酵素液３００ｍｌを充分量の２５ｍＭ イミダ
ゾール塩酸バッファー（ｐＨ７．５）に対して透析した
後、同じバッファーで平衡化した５０ｍｌのＱＡＥ−ト
ヨパールを加えて穏やかに撹拌しながら酵素を吸着させ
た。これを空カラムに移して担体と上澄みを分けた。担
体は１００ｍｌの２５ｍＭ イミダゾール塩酸バッファ
ー（ｐＨ７．５）で洗浄後、２５ｍＭ イミダゾール塩
酸バッファー＋０．５Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ７．５）で担
体に吸着している酵素を溶出させた。活性画分はまとめ
て透析後、２５ｍＭ イミダゾール塩酸バッファー（ｐ
Ｈ７．５）で平衡化したＭｏｎｏ−Ｑ（ファルマシア
製）に付加し、吸着させ、０〜０．５Ｍ ＮａＣｌのリ
ニアーグラジエントで溶出した。溶出後の活性画分は、
さらにゲル濾過にかけることにより、電気泳動的に単一
バンドの精製ノイラミニダーゼ２０５ ２．１ｍｇを取
得した。この精製酵素の比活性は１１３単位／ｍｇprot
ein であり、出発粗酵素液に比べ精製度が約２倍に上昇
し、その収率は５６％であった。

【００３９】〔試験例１〕 二価金属イオンのノイラミ
ニダーゼ２０５の酵素活性への影響 精製したノイラミニダーゼ２０５の酵素活性に対する二
価金属イオンの影響を詳細に検討するために、基質とし
てコロミン酸を用い、５０ｍＭイミダゾール塩酸バッフ
ァー（ｐＨ７．５）中、各種の二価金属イオン（Ｍ
ｇ²⁺，Ｃｏ²⁺，Ｃｕ ²⁺，Ｚｎ²⁺，Ｂａ²⁺，Ｃａ²⁺，Ｓｒ
²⁺）をそれぞれ２０ｍＭ濃度になるように添加してノイ
ラミニダーゼ２０５の活性を測定した。具体的には、１
％（ｗ／ｖ）濃度のコロミン酸溶液（５０ｍＭイミダゾ
ール塩酸（ｐＨ７．５）中）２２μｌと０．００３単位
／５μｌの酵素液と２００ｍＭの二価金属イオン溶液３
μｌからなる反応溶液を３７℃、１０分間インキュベー
トした後、遊離したシアル酸量をＴＢＡ法で定量し、二
価金属イオンの替わりに５０ｍＭイミダゾール塩酸バッ
ファー（ｐＨ７．５）を３μｌ添加して活性を測定した
コントロール値を基準として比較した。結果を表４及び
図２に示す。

【００４０】

【表４】 ──────────────────────── 二価金属イオン 活性 (ΔOD₅₄₉/10min.) ──────────────────────── コントロール ０．１８ Ｍｇ²⁺ １．８１ Ｃｏ²⁺ １．５８ Ｃｕ²⁺ １．３８ Ｚｎ²⁺ １．００ Ｂａ²⁺ １．１０ Ｃａ²⁺ ０．５２ Ｓｒ²⁺ ０．６１ ──────────────────────── この表４から、ノイラミニダーゼ２０５は二価金属イオ
ンによりその酵素活性が高められることが判る。

【００４１】〔試験例２〕 本発明のノイラミニダーゼ
２０５のｐＨによる作用性 コロミン酸に作用しないｐＨ範囲を明らかにするため、
各ｐＨ範囲でのＭｇＣｌ₂存在下、非存在下での活性を
以下のようにして調べた。すなわち、２５μｌの１％コ
ロミン酸溶液を５μｌの０．００３単位の酵素液と以下
のバッファー中で反応させた。別個に、各バッファーに
２０ｍＭのＭｇＣｌ₂を添加した溶液中での活性を測定
した。その結果を図３に示す。図３からＭｇＣｌ₂無添
加の場合にコロミン酸にほとんど作用しないｐＨ範囲は
７．５以上であった。したがってｐＨ７．５以上かつＭ
ｇＣｌ₂無添加の条件でコロミン酸に本酵素を作用させ
れば、コロミン酸に作用させずに他のシアル酸含有物質
由来のシアル酸量を測定できる。

【００４２】

【発明の効果】本発明により、ビブリオ・スピーシーズ
ＪＴ０２０５を好気的条件下で培養することによってノ
イラミニダーゼ２０５を菌体外に大量に、且つ夾雑蛋白
の少ない状態で提供することができる。また、コロミン
酸とシアル酸含有物質が混在した試料中に存在する各成
分由来のシアル酸量をこのノイラミニダーゼ２０５を用
いて測定する場合、まずｐＨ７．５以上でＭｇ²⁺等の二
価金属イオンを添加した条件でシアル酸量を求め、さら
に、Ｍｇ²⁺無添加で同様な測定を行なうことにより、各
成分由来のシアル酸量をそれぞれ測定することができ
る。この測定方法は、従来このような場合２種類の酵素
を使用していた方法に比較してノイラミニダーゼ２０５
の単一の酵素により測定できるものであり、極めて優れ
た方法である。

【図面の簡単な説明】

【図１】ノイラミニダーゼ２０５の各温度による作用性
を示す図。

【図２】ノイラミニダーゼ２０５活性への二価金属イオ
ンの影響を示す図。

【図３】基質をコロミン酸とした場合における、ノイラ
ミニダーゼ２０５の各ｐＨ範囲での酵素活性（ＭｇＣｌ
₂存在下、非存在下）を示す図。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の理化学的性質を有する新規なノイ
   ラミニダーゼ２０５。 （１）作用及び特異性：糖蛋白質、糖脂質、オリゴ糖及
   び多糖類の糖鎖の非還元末端に存在するシアル酸残基を
   遊離させる反応を触媒する。 （２）至適ｐＨ：５〜７ （３）至適温度：５０℃ （４）分子量：約６５，０００（ＳＤＳ−ＰＡＧＥによ
   る測定）
2. 【請求項２】 ビブリオ属に属し、ノイラミニダーゼ２
   ０５生産能を有する微生物を培地に培養し、培養物から
   請求項１記載のノイラミニダーゼ２０５を採取すること
   を特徴とするノイラミニダーゼ２０５の製造方法。
3. 【請求項３】 ノイラミニダーゼ２０５生産能を有する
   ビブリオ・スピーシーズＪＴ０２０５。