JPH09227374A - ストレスタンパク質産生抑制組成物 - Google Patents
ストレスタンパク質産生抑制組成物Info
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- JPH09227374A JPH09227374A JP8067043A JP6704396A JPH09227374A JP H09227374 A JPH09227374 A JP H09227374A JP 8067043 A JP8067043 A JP 8067043A JP 6704396 A JP6704396 A JP 6704396A JP H09227374 A JPH09227374 A JP H09227374A
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Abstract
な産生や必要でないときに産生されることに起因する、
自己免疫疾患の予防および治療に効果を有し、また、食
品として多用されている安全な植物抽出物を有効成分と
するストレスタンパク質産生抑制組成物を提供すること
にある。 【解決手段】 植物抽出物を配合することを特徴とする
ストレスタンパク質産生抑制組成物。
Description
高いストレスタンパク質産生抑制組成物に関するもので
あり、詳しくは(+)−カテキン、(+)−ガロカテキ
ン、(−)−ガロカテキンガレート、(−)−エピカテ
キン、(−)−エピカテキンガレート、(−)−エピガ
ロカテキン、(−)−エピガロカテキンガレート、遊離
型テアフラビン、テアフラビンモノガレートA、テアフ
ラビンモノガレートB、テアフラビンジガレートより選
ばれる1種または2種以上の化合物を含有することを特
徴とするストレスタンパク質産生抑制組成物に関する。
生体の発生、加齢、自己免疫疾患などさまざまな生命現
象を制御することが報告されている(永田、最新医学、
11、p.6−p.7、1994)。さらに、ストレスタン
パク質は生体内の細胞が産生するタンパク質の折り畳み
をコントロールしたり、熱などによって変性または凝集
した自己タンパク質の修復を行っているとされている
(永田、最新医学、11、p.6、1994)。一方、自
己免疫疾患にストレスタンパク質が関与すると考えられ
るようになり、ストレスタンパク質の過剰な産生または
必要のないときの産生が問題となっている。これらの自
己免疫疾患としては、慢性関節リウマチ、多発性硬化
症、多発性筋炎、全身エリテマトーデス、慢性胃炎、バ
セドウ病、動脈硬化症などが挙げられる(吉開、最新医
学、11、p.73−p.74、1994)。
リンなどの植物フラボノイドがストレスタンパク質の産
生を特異的に阻害することが明らかになり、慢性関節リ
ュウマチ、多発性硬化症、多発性筋炎、全身エリテマト
ーデス、慢性胃炎、バセドウ病、動脈硬化症などへの利
用が考えられている。さらに、癌治療の一つである温熱
療法において、温熱によって誘導された癌細胞でのスト
レスタンパク質による温熱耐性を抑制することも明らか
になっている(Hosokawa et al., Mol. Cell Biol., 1
2,3490−3498,1992)。しかしながら、
これら植物フラボノイドは、ケルセチン、ゲニステイ
ン、ルテオリンがカシ属の樹木の樹皮、クローバーの花
に、ルチンがそばの全草に多く分布するといったよう
に、大量に取り出すことが困難なこと、アレルギーをひ
きおこす可能性があること、変異原性を有するものがあ
ること、また、味や風味が悪いこと等、実施上問題が大
きく十分であるとはいえなかった。このような状況下、
ストレスタンパク質の産生を低濃度で効率的に、しかも
特異的に抑制することが可能で、安全性の高い成分の出
現が強く望まれていた。
決し、ストレスタンパク質を効率的に抑制する安全性の
高いストレスタンパク質産生抑制組成物を得ることを目
的とする。
を鑑み、安全かつ低濃度で効果が得られることなどを考
慮して、慢性関節リュウマチ、多発性硬化症、多発性筋
炎、全身エリテマトーデス、慢性胃炎、バセドウ病、動
脈硬化症に対して有効な物質の探索を行い鋭意研究した
結果、(+)−カテキン、(+)−ガロカテキン、
(−)−ガロカテキンガレート、(−)−エピカテキ
ン、(−)−エピカテキンガレート、(−)−エピガロ
カテキン、(−)−エピガロカテキンガレート、遊離型
テアフラビン、テアフラビンモノガレートA、テアフラ
ビンモノガレートB、テアフラビンジガレートより選ば
れる1種または2種以上の化合物がストレスタンパク質
の産生を抑制することを見い出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は(+)−カテキン、(+)−ガロカ
テキン、(−)−ガロカテキンガレート、(−)−エピ
カテキン、(−)−エピカテキンガレート、(−)−エ
ピガロカテキン、(−)−エピガロカテキンガレート、
遊離型テアフラビン、テアフラビンモノガレートA、テ
アフラビンモノガレートB、テアフラビンジガレートよ
り選ばれる、1種または2種以上の化合物を含有するこ
とを特徴とするストレスタンパク質産生抑制組成物に関
する。
質とは、細胞または生体が高温、遷移重金属、アミノ酸
誘導体、エネルギー代謝阻害剤、放射線などの環境要
因、細胞周期、細胞増殖、細胞分化、個体の発達などの
生理的要因、発熱、ウイルス感染、炎症、虚血、悪性腫
瘍、化学療法、外科手術などの病的要因などにさらされ
るか、またはそのような状況下において産生されるタン
パク質を指し、熱ショックタンパク質とも呼称される。
さらに具体的には、細胞または生体を上記の条件下に放
置したときに、その培養液中または体液中に産生され、
SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって、
分子量約90kDa 、約70kDa 、約60kDa 、ユビキノ
ン、および約27kDa に同定されるタンパク質を指す。
また、本発明におけるストレスタンパク質の産生抑制と
は、前記のストレス下において細胞または生体が特異的
に産生する分子量約90kDa 、約70kDa 、約60kDa
、ユビキノン、および約27kDa に同定されるタンパ
ク質のバンドの消失のことであり、好ましくは、約90
kDa および約70kDa に同定されるタンパク質のバンド
の消失により評価できる。
クリルアミドゲル電気泳動法としては、従来より知られ
ている方法を用いることができ、特に限定するものでは
ないが、例えば、電気泳動装置としてはディスク型電気
泳動装置,スラブ型電気泳動装置等が挙げられる。ポリ
アクリルアミドゲルの濃度は約90kDa と約70kDaの
バンドが効率的に検出できる濃度が選択でき、好ましく
は7.5%、10%、または12.5%である。パワー
サプライの電圧、泳動時間は良好な泳動像が得られるよ
うであれば、特に限定するものではない。また、分子量
マーカーについても、分子量が90kDa より大きく、2
0kDa より小さいタンパク質を2種類以上選択すればよ
く、ホスホリダーゼb(94kDa)、アルブミン(67kD
a)、オボアルブミン(43kDa)、カーボニック アンハ
イドラーゼ(30kDa)、トリプシン インヒビター(2
0kDa)、α−ラクトアルブミン(14.4kDa)等が挙げ
られる。
テキン、(+)−ガロカテキン、(−)−ガロカテキン
ガレート、(−)−エピカテキンガレート、(−)−エ
ピカテキン、(−)−エピカテキンガレート、(−)−
エピガロカテキン、(−)−エピガロカテキンガレ−
ト、テアフラビンモノガレートA、テアフラビンモノガ
レートB、テアフラビンジガレートより選ばれる1種ま
たは2種以上であればよく、好ましくは(+)−ガロカ
テキン、(−)−ガロカテキンガレート、(−)−エピ
カテキンガレート、(−)−エピガロカテキンガレー
ト、テアフラビンモノガレートA、テアフラビンモノガ
レートB、テアフラビンジガレートの1種または2種以
上の化合物であり、特に好ましくは(−)−ガロカテキ
ンガレート、(−)−エピカテキンガレート、(−)−
エピガロカテキンガレート、テアフラビンモノガレート
A、テアフラビンモノガレートB、テアフラビンジガレ
ートの1種または2種以上の化合物である。また、本発
明に用いられる化合物は、特に限定される化合物ではな
いが、市販の植物の葉、茎、根等の部位を熱水で抽出し
て得られる画分を酢酸エチルで向流分配して得られる。
るものではないが、ツバキ科、バラ科、キク科、シソ科
などの植物があげられ、好ましくはツバキ科であり、特
に好ましくは、ツバキ科の緑茶、紅茶またはウーロン茶
などであり、最も好ましくは緑茶である。本発明に用い
られる化合物の製造法は、特に限定されるするものでは
ないが、茶葉を40℃から95℃、好ましくは80℃か
ら95℃の熱水、エタノール、アセトンなどの水溶性有
機溶媒抽出すればよく、また前記抽出物を水と酢酸エチ
ルで向流分配してもよい。さらに、その後酢酸エチル層
を用いてカラムクロマトグラフィー等を行うことによっ
て、(+)−カテキン、(+)−ガロカテキン、(−)
−ガロカテキンガレート、(−)−エピカテキン、
(−)−エピカテキンガレート、(−)−エピガロカテ
キン、(−)−エピガロカテキンガレート、遊離型テア
フラビン、テアフラビンモノガレートA、テアフラビン
モノガレートB、テアフラビンジガレート等まで精製し
てよい。
特に限定するものではないが、セファデックスLH−2
0等のデキストラン誘導体を担体としたクロマトグラフ
ィー、ポリアミドを担体としたクロマトグラフィー、シ
リカゲルを担体としたクロマトグラフィー、ポリスチレ
ン系樹脂を担体としたクロマトグラフィー等があげられ
る。これらは単独、または組み合わせることによって目
的とする化合物を分離することが可能である。また、好
ましくは、水と酢酸エチルで向流分配したのちに、デキ
ストラン誘導体、ポリスチレン系樹脂、ポリアミドを担
体としたクロマトグラフィーを組み合わせることがあげ
られる。特に好ましくは、水と酢酸エチルで向流分配し
たのちに、ポリスチレン系樹脂、デキストラン誘導体を
担体としたクロマトグラフィーを組み合わせることであ
る。本発明に用いられる化合物のストレスタンパク質産
生抑制組成物への含有量は、特に限定するものではない
が、好ましくは0.01%から90%であり、特に好ま
しくは1%から80%である。食品または飼料に添加す
る場合は、0.0001%から80%であり、好ましく
は0.001%から50%である。
含まれていることや、う蝕、高脂血症等に効果があるこ
とから、これらに関与する疾病予防のために数多くの食
品にすでに使用されているため、その安全性は非常に高
い。本発明のストレスタンパク質産生抑制組成物は、保
存性を高めるために、エタノールなどの抗菌または静菌
剤を併用してもよい。また、抗酸化性を高めるためにア
スコルビン酸、アスコルビン酸塩、クエン酸、クエン酸
塩、トコフェロールなどの抗酸化剤を併用してもよい。
さらには投与しやすいように、糖類、アミノ酸類、調味
料、デンプン類、タンパク質類、脂質類、色素、香料、
水などを併用してもよい。本発明のストレスタンパク質
産生抑制組成物の剤型は、特に限定するものではない
が、単独で用いてもよく、キャンディー、キャラメル、
チョコレート、ゼリー、アイスクリーム、ヨーグルト、
チューインガム、焼菓子、もち、生菓子、コーヒー、
茶、ジュース、乳飲料、アルコール飲料、ふりかけ、佃
煮、惣菜、ドレッシング、マヨネーズ、醤油、ソース、
ケチャップ、みそ汁、スープ、米飯、錠剤、乳化液、乾
燥卵具材、ハンバーグ、食パン、家畜用飼料、ペットフ
ード、水産動物用飼料などに添加して用いてもよい。次
に実施例をあげて、本発明品を詳しく説明するが、これ
によって限定されるものではない。
抽出し、さらに酢酸エチルー水の向流分配によって抽出
し、ストレスタンパク質産生抑制組成物(本発明品1)
を得た。得られた本発明品1をポリスチレン系樹脂およ
びデキストラン誘導体を担体としたクロマトグラフィー
を組み合わせることによって、ストレスタンパク質産生
抑制組成物((+)−カテキン、本発明品2)2g、ス
トレスタンパク質産生抑制組成物((+)−ガロカテキ
ン、本発明品3)1g、ストレスタンパク質産生抑制組
成物((−)−ガロカテキンガレート、本発明品4)3
g、ストレスタンパク質産生抑制組成物((−)−エピ
カテキン、本発明品5)2g、ストレスタンパク質産生
抑制組成物((−)−エピカテキンガレート、本発明品
6)3g、ストレスタンパク質産生抑制組成物((−)
−エピガロカテキン、本発明品7)2g、ストレスタン
パク質産生抑制組成物((−)−エピガロカテキンガレ
ート、本発明品8)4g、ストレスタンパク質産生抑制
組成物(遊離型テアフラビン、本発明品9)2g、スト
レスタンパク質産生抑制組成物(テアフラビンモノガレ
ートA、本発明品10)1g、ストレスタンパク質産生
抑制組成物(テアフラビンモノガレートB、本発明品1
1)1g、ストレスタンパク質産生抑制組成物(テアフ
ラビンジガレート、本発明品12)1gを得た。
発明品2)を用いて、COLO320 DM細胞のストレスタンパ
ク質の産生抑制試験を行なった。COLO 320DM細胞を
ミニマム エッセンシャル メディウム(10%ウシ胎
児血清、15mM NaHCO3 含有)中、37℃、5%二酸化
炭素−95%空気の条件下、1.2×105 /mlの細胞
濃度、25cm2 のガラスフラスコ中で24〜48時間前
培養した。培養細胞の加温の1時間前に培養系に1、5
00μM となるように本発明品2を添加した。培養細胞
の加熱は、42〜43℃で60分間または45℃で15
分間行なった。なお、ここでの本発明品2の濃度は、CO
LO 320 DM 細胞を本発明品2含有の同培地中で72時間
培養し、細胞数の変動のない濃度(1、500μM)を選
定した。培養細胞は100μCiの35S−メチオニン
(Specific activity 、>1、000Ci/mmol)でラ
ベルし、冷却したリン酸緩衝食塩水で洗浄した。培養細
胞は、1% ノニデット P−40、0.15mM食
塩、5mMエチレンジアミンテトラアセテート、2mM
フェニルメチルスルフォニル フルオライド、2mMN-
メチルマレイミド、1μg/mlペプスタチン、1μg
/mlロイペプチンを含む50mMトリス−塩酸緩衝液
(pH8.0)を用いて破壊した。さらに、ストレスタ
ンパク質は細胞破壊液を12,000×gで20分間遠
心し、Laemmliの方法(U.K. Laemmli, Nature, 227, 68
0, 1970)でSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
を行って検出した。分子量マーカーには、ホスホリダー
ゼb(94kDa)、アルブミン(67kDa)、オボアルブミ
ン(43kDa)、カーボニックアンハイドラーゼ(30kD
a)、トリプシンインヒビター(20kDa)、α−ラクトア
ルブミン(14.4kDa)を用いた。これらの結果は図1
に示した。
て出現する約90kDa と約70kDaのバンドがストレス
タンパク質であり、このバンドが消失することによって
ストレスタンパク質の産生が抑制されたことを示す。本
試験例では、加温によって生じるストレスタンパク質を
示したが、その他にも遷移重金属、アミノ酸誘導体、エ
ネルギー代謝阻害剤、放射線などの環境要因、細胞周
期、細胞増殖、細胞分化、個体の発生などの生理的要
因、発熱、ウイルス感染、炎症、虚血、悪性腫瘍、化学
療法、外科手術などの病的要因のいずれかの要因による
ストレスタンパク質においても適用でき、何ら限定され
るものではない。 試験例2 実施例1で得た本発明品1〜12を用いて、試験例1と
同様の方法でストレスタンパク質の産生抑制効果を調べ
た。なお、それぞれの濃度は試験例1と同様の方法によ
って設定した。これらの濃度は1μM から1、500μ
M の範囲内であった。これらの結果は表1に示した。
トレスタンパク質産生抑制組成物を細胞培養系に添加
し、加熱処理することによって、培養細胞のストレスタ
ンパク質の産生が抑制されることが示された。 試験例3 ストレスタンパク質産生抑制組成物(本発明品1)10
g、75%果糖ぶどう糖液糖15g、クエン酸0.2
g、オレンジオイル0.001g、ペンタグリセリンモ
ノミリスチン酸エステル0.001g、ペンタグリセリ
ンモノステアリン酸エステル0.001gとを均質に混
合し、乳化液を得た。
05g、加糖脱脂練乳11g、果糖ぶどう糖4g、ネオ
ソフトP−301を0.5g、水100g、ヨークフレ
ーバー少量、レモンフレーバー少量を混合した後に、9
5℃まで加温して瓶に充填し、飲料を得た。 試験例5 ストレスタンパク質産生抑制組成物(本発明品6)0.
05g、果糖ぶどう糖液糖24g、クエン酸結晶0.6
g、クエン酸3ナトリウム0.08g、L−アスコルビ
ン酸0.1g、グレープフルーツフレーバー0.1gを
水100gに溶解させ、炭酸水100mlと混合した後
に瓶に充填し、飲料を得た。
5g、卵黄粉末140g、全卵粉末110g、脱脂粉乳
50g、特選新浮粉40g、上白糖30g、フレバロン
中華20g、サンレシチンA1 6.3g、リポタイド
0.8g、フジミックスE−20N 0.18g、スクラ
ンブルエッグR 40g、加糖加塩全卵76g、ニュト
ロレイン25.5g、4%重炭酸アンモニウム溶液65
gを均質に混合し、マイクロ波加熱を行った後に熱風乾
燥して乾燥卵具材を得た。 試験例7 ストレスタンパク質産生抑制組成物(本発明品8)0.
05g、牛肉35g、豚肉25g、タマネギ15g、パ
ン粉6g、粒状植物タンパク質2g、全卵液15g、塩
1g、胡椒0.1g、水8.4gを均質に混合した後
に、オーブンで200℃15分間加熱して、ハンバーグ
を得た。
05g、強力粉500g、砂糖20g、塩10g、ショ
ートニング20g、イースト10g、イーストフード
0.5g、脱脂粉乳5g、水300gを均質に混合した
後に、40℃で1時間発酵して成型した。さらに、湿度
70から80%、37℃で40分間発酵し、オーブンで
205℃、40分間加熱して、食パンを得た。 試験例9 ストレスタンパク質産生抑制組成物(本発明品10)
0.2g、L−アスコルビン酸3g、フラクトオリゴ糖
1g、動物性油脂2g、ブドウ糖8g、砂糖4g、魚粉
7g、脱脂大豆粕5g、パン粉7g、小麦粉30g、脱
脂粉乳33gを均質に混合し、家畜用飼料を得た。
0.05g、L−アスコルビン酸1g、食塩1g、ソル
ビン酸0.8g、フマル酸2g、プロピレングリコール
1.6g、炭酸カルシウム2.8g、リン酸2g、動物
性脂肪2g、チーズ粉5g、大豆タンパク質単離物15
g、小麦粉55gを均質に混合し、ペットフードを得
た。
g、水産用ビタミン剤25g、ビール酵母60gを均質
に混合し、水産動物用飼料を得た。 試験例12 ストレスタンパク質産生抑制組成物(本発明品1)50
g、炭酸カルシウム15g、結晶セルロース10g、乳
糖5gを均質に混合し、1錠が200mgとなるような
錠剤を得た。
g、醤油80g、ごま油20g、キサンタンガム0.1
g、ペンタグリセリンモノミリスチン酸エステル0.2
5g、ペンタグリセリンモノステアリン酸エステル0.
25gを均質に混合し、乳化液を得た。
(+)−カテキン、(+)−ガロカテキン、(−)−ガ
ロカテキンガレート、(−)−エピカテキン、(−)−
エピカテキンガレート、(−)−エピガロカテキン、
(−)−エピガロカテキンガレート、遊離型テアフラビ
ン、テアフラビンモノガレートA、テアフラビンモノガ
レートB、テアフラビンジガレート等の精製品またはこ
れらの混合物を細胞培養系に添加することによって、培
養細胞のストレスタンパク質の産生が抑制される。ま
た、本発明の化合物は従来食品として多用されてきたこ
とから安全性が極めて高く、食品添加物として従来の製
品に添加するだけでよいことから、極めて有用である。
パク質の産生抑制作用の図である。
Claims (1)
- 【請求項1】 (+)−カテキン、(+)−ガロカテキ
ン、(ー)−ガロカテキンガレート、(−)−エピカテ
キン、(−)−エピカテキンガレート、(−)−エピガ
ロカテキン、(−)−エピガロカテキンガレート、遊離
型テアフラビン、テアフラビンモノガレートA、テアフ
ラビンモノガレートB、テアフラビンジガレートより選
ばれる1種または2種以上の化合物を含有することを特
徴とするストレスタンパク質産生抑制組成物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP8067043A JPH09227374A (ja) | 1996-02-28 | 1996-02-28 | ストレスタンパク質産生抑制組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP8067043A JPH09227374A (ja) | 1996-02-28 | 1996-02-28 | ストレスタンパク質産生抑制組成物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH09227374A true JPH09227374A (ja) | 1997-09-02 |
Family
ID=13333435
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP8067043A Pending JPH09227374A (ja) | 1996-02-28 | 1996-02-28 | ストレスタンパク質産生抑制組成物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
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