JPH0919297A - 酵素水溶液および酵素の乾燥試薬 - Google Patents
酵素水溶液および酵素の乾燥試薬Info
- Publication number
- JPH0919297A JPH0919297A JP19123995A JP19123995A JPH0919297A JP H0919297 A JPH0919297 A JP H0919297A JP 19123995 A JP19123995 A JP 19123995A JP 19123995 A JP19123995 A JP 19123995A JP H0919297 A JPH0919297 A JP H0919297A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- catalase
- aqueous solution
- reagent
- enzyme
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 アスコルビン酸オキシダーゼの水溶液および
カタラーゼの水溶液の安定性を向上させる。 【構成】 アスコルビン酸オキシダーゼを０．１乃至１
０００Ｕ／ｍｌ、およびカルシウムイオンまたはヨウ素
イオンを０．０１乃至１００ｍＭの範囲で含むことを特
徴とするアスコルビン酸オキシダーゼの水溶液、および
カタラーゼを０．５乃至５０００Ｕ／ｍｌ、および二価
の鉄錯体を０．００１乃至１０ｍＭの範囲で含むことを
特徴とするカタラーゼの水溶液、並びにそれらを調製す
るための乾燥試薬。
カタラーゼの水溶液の安定性を向上させる。 【構成】 アスコルビン酸オキシダーゼを０．１乃至１
０００Ｕ／ｍｌ、およびカルシウムイオンまたはヨウ素
イオンを０．０１乃至１００ｍＭの範囲で含むことを特
徴とするアスコルビン酸オキシダーゼの水溶液、および
カタラーゼを０．５乃至５０００Ｕ／ｍｌ、および二価
の鉄錯体を０．００１乃至１０ｍＭの範囲で含むことを
特徴とするカタラーゼの水溶液、並びにそれらを調製す
るための乾燥試薬。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アスコルビン酸オキシ
ダーゼまたはカタラーゼの水溶液およびそれを調製する
ための乾燥試薬に関する。特に本発明は、体外診断薬に
用いるための上記酵素の水溶液および乾燥試薬に関す
る。
ダーゼまたはカタラーゼの水溶液およびそれを調製する
ための乾燥試薬に関する。特に本発明は、体外診断薬に
用いるための上記酵素の水溶液および乾燥試薬に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】アスコルビン酸オキシダーゼ（ＥＣ
１．１０．３．３、ＡＳＯＤ）は、Ｌ−アスコルビン酸
を分子状酸素を用いて酸化し、デヒドロアスコルビン酸
にする酵素である。大部分の体外診断薬では、アスコル
ビン酸オキシダーゼは、アスコルビン酸による発色系
（例、ペルオキシダーゼ発色系、ホルマザン発色系）へ
の干渉を除去するために用いられている。
１．１０．３．３、ＡＳＯＤ）は、Ｌ−アスコルビン酸
を分子状酸素を用いて酸化し、デヒドロアスコルビン酸
にする酵素である。大部分の体外診断薬では、アスコル
ビン酸オキシダーゼは、アスコルビン酸による発色系
（例、ペルオキシダーゼ発色系、ホルマザン発色系）へ
の干渉を除去するために用いられている。
【０００３】カタラーゼ（ＥＣ １．１１．１．６、Ｃ
ＡＴ）は、過酸化水素の分解反応を触媒する酵素であ
る。カタラーゼは、ほとんどの体外診断薬の前処理にお
いて生成する過酸化水素の分解に使用されている。過酸
化水素を生成する前処理としては、中性脂肪測定系にお
けるグリセロールの前処理や、クレアチニン測定系にお
けるクレアチンやザルコシンの前処理がある。
ＡＴ）は、過酸化水素の分解反応を触媒する酵素であ
る。カタラーゼは、ほとんどの体外診断薬の前処理にお
いて生成する過酸化水素の分解に使用されている。過酸
化水素を生成する前処理としては、中性脂肪測定系にお
けるグリセロールの前処理や、クレアチニン測定系にお
けるクレアチンやザルコシンの前処理がある。
【０００４】以上の二種類の酵素は、水溶液中で不安定
であるとの問題がある。特に、体外診断薬のような他の
成分との混合溶液中では、保存が難しい。このため、凍
結乾燥試薬を用いる体外診断薬では、試薬を水に溶解し
水溶液を調製してから直ちに使用する必要があった。液
状の体外診断薬では、保存の問題がさらに深刻である。
近年、液状の体外診断薬は、簡単かつ迅速に測定が実施
できるため、広く普及しはじめている。液状の体外診断
薬においては、水溶液の状態で酵素を長期間保存できる
方法の開発が不可欠である。
であるとの問題がある。特に、体外診断薬のような他の
成分との混合溶液中では、保存が難しい。このため、凍
結乾燥試薬を用いる体外診断薬では、試薬を水に溶解し
水溶液を調製してから直ちに使用する必要があった。液
状の体外診断薬では、保存の問題がさらに深刻である。
近年、液状の体外診断薬は、簡単かつ迅速に測定が実施
できるため、広く普及しはじめている。液状の体外診断
薬においては、水溶液の状態で酵素を長期間保存できる
方法の開発が不可欠である。
【０００５】従来の液状の体外診断薬では、酵素の保存
期間をとりあえず延長するために、使用する酵素の由来
を変更したり、酵素の使用量を増加させていた。酵素の
由来を変更する場合は、新たな酵素生産生物を探索する
必要がある。新たな生物の探索は非常に労力を要する
が、通常は酵素の保存期間をわずかに延長できる程度の
結果しか得られない。一方、酵素の使用量を増加させる
と、単に経費が増加するだけでなく、対外診断薬に悪い
影響を与える。例えば、試薬ブランクの値が上昇し、測
定精度が低下する。また、関連する成分（例えば、カタ
ラーゼに対して、その反応阻害に必要なＮａＮ3 のよう
な試薬）の量も多くなり、それらの成分により他の酵素
の安定性が低下する問題も生じる。
期間をとりあえず延長するために、使用する酵素の由来
を変更したり、酵素の使用量を増加させていた。酵素の
由来を変更する場合は、新たな酵素生産生物を探索する
必要がある。新たな生物の探索は非常に労力を要する
が、通常は酵素の保存期間をわずかに延長できる程度の
結果しか得られない。一方、酵素の使用量を増加させる
と、単に経費が増加するだけでなく、対外診断薬に悪い
影響を与える。例えば、試薬ブランクの値が上昇し、測
定精度が低下する。また、関連する成分（例えば、カタ
ラーゼに対して、その反応阻害に必要なＮａＮ3 のよう
な試薬）の量も多くなり、それらの成分により他の酵素
の安定性が低下する問題も生じる。
【０００６】ところで、特開平６−２８４８８６号公報
には、種々の酵素の溶液中での安定化方法が開示されて
いる。開示されている酵素と安定化剤との組み合わせ
は、以下の通りである。
には、種々の酵素の溶液中での安定化方法が開示されて
いる。開示されている酵素と安定化剤との組み合わせ
は、以下の通りである。
【０００７】
【表１】 ──────────────────────────────────── ○：有効とされる組み合わせ 安定化剤 マソ 硫塩 マカ リコリ酒グ グアアト ンル 酸化 グル ンハン石リ リルスリ ニビ ナナ ネシ 酸クゴ酸コ シギパプ トト トト シウ 塩酸酸塩｜ ンニラト ｜｜ リリ ウム 塩塩 ル ンギフ ルル ウウ ム塩 酸 ンァ 酵素名 ムム 塩 塩 酸ン ──────────────────────────────────── パーオキシダーゼ ○ コレステロールエステラーゼ ○ グリセロールキナーゼ ○○ ○ ○ マレートデヒドロゲナーゼ ○ ○ ビリルビンオキシダーゼ ○○ グルコースデヒドロゲナーゼ ○○ ○○ ラクテートデヒドロゲナーゼ ○ ○ ○○○○○ グルコースオキシダーゼ ○ ○ ○○ リポプロテインリパーゼ ○○ ────────────────────────────────────
【０００８】上記の表からも明らかなように、酵素と安
定化剤の組み合わせには、特に法則のようなものは認め
られない。特開平６−２８４８８６号公報でも、上記の
組み合わせはスクリーニング（言い換えれば、試行錯
誤）で得られたと説明している（段落番号の０００
６）。従って、上記〜以外の酵素である、アスコル
ビン酸オキシダーゼやカタラーゼについては、全く新し
く安定化剤あるいは安定化方法を研究する必要がある。
定化剤の組み合わせには、特に法則のようなものは認め
られない。特開平６−２８４８８６号公報でも、上記の
組み合わせはスクリーニング（言い換えれば、試行錯
誤）で得られたと説明している（段落番号の０００
６）。従って、上記〜以外の酵素である、アスコル
ビン酸オキシダーゼやカタラーゼについては、全く新し
く安定化剤あるいは安定化方法を研究する必要がある。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、アス
コルビン酸オキシダーゼまたはカタラーゼの水溶液の安
定性を向上させることである。本発明の他の目的は、調
製した水溶液の安定性が向上しているアスコルビン酸オ
キシダーゼまたはカタラーゼの乾燥試薬を提供すること
でもある。
コルビン酸オキシダーゼまたはカタラーゼの水溶液の安
定性を向上させることである。本発明の他の目的は、調
製した水溶液の安定性が向上しているアスコルビン酸オ
キシダーゼまたはカタラーゼの乾燥試薬を提供すること
でもある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明は、アスコルビン
酸オキシダーゼを０．１乃至１０００Ｕ／ｍｌ、および
カルシウムイオンまたはヨウ素イオンを０．０１乃至１
００ｍＭの範囲で含むことを特徴とするアスコルビン酸
オキシダーゼの水溶液を提供する。また、本発明は、ア
スコルビン酸オキシダーゼ、およびカルシウムイオンの
塩またはヨウ素イオンの塩をアスコルビン酸オキシダー
ゼ１Ｕ当り０．５乃至５０００ナノモルの範囲で含むこ
とを特徴とするアスコルビン酸オキシダーゼの乾燥試薬
を提供する。さらに、本発明は、カタラーゼを０．５乃
至５０００Ｕ／ｍｌ、および二価の鉄錯体を０．００１
乃至１０ｍＭの範囲で含むことを特徴とするカタラーゼ
の水溶液を提供する。さらにまた、カタラーゼ、および
二価の鉄錯体をカタラーゼ１Ｕ当り１乃至１００００ピ
コモルの範囲で含むことを特徴とするカタラーゼの乾燥
試薬も提供する。
酸オキシダーゼを０．１乃至１０００Ｕ／ｍｌ、および
カルシウムイオンまたはヨウ素イオンを０．０１乃至１
００ｍＭの範囲で含むことを特徴とするアスコルビン酸
オキシダーゼの水溶液を提供する。また、本発明は、ア
スコルビン酸オキシダーゼ、およびカルシウムイオンの
塩またはヨウ素イオンの塩をアスコルビン酸オキシダー
ゼ１Ｕ当り０．５乃至５０００ナノモルの範囲で含むこ
とを特徴とするアスコルビン酸オキシダーゼの乾燥試薬
を提供する。さらに、本発明は、カタラーゼを０．５乃
至５０００Ｕ／ｍｌ、および二価の鉄錯体を０．００１
乃至１０ｍＭの範囲で含むことを特徴とするカタラーゼ
の水溶液を提供する。さらにまた、カタラーゼ、および
二価の鉄錯体をカタラーゼ１Ｕ当り１乃至１００００ピ
コモルの範囲で含むことを特徴とするカタラーゼの乾燥
試薬も提供する。
【００１１】［アスコルビン酸オキシダーゼの安定化］
液状の体外診断薬として用いる場合、アスコルビン酸オ
キシダーゼの水溶液は、アスコルビン酸オキシダーゼを
０．１乃至１０００Ｕ／ｍｌの範囲、好ましくは０．１
乃至１００Ｕ／ｍｌの範囲、さらに好ましくは、１乃至
１００Ｕ／ｍｌの範囲、最も好ましくは５乃至５０Ｕ／
ｍｌの範囲で含む。本発明では、上記の水溶液に、カル
シウムイオンまたはヨウ素イオンを０．０１乃至１００
ｍＭの範囲、好ましくは０．０１乃至１０ｍＭの範囲、
さらに好ましくは０．０５乃至５ｍＭの範囲、最も好ま
しくは０．１乃至２ｍＭの範囲で添加する。カルシウム
イオンとヨウ素イオンとを併用してもよい。
液状の体外診断薬として用いる場合、アスコルビン酸オ
キシダーゼの水溶液は、アスコルビン酸オキシダーゼを
０．１乃至１０００Ｕ／ｍｌの範囲、好ましくは０．１
乃至１００Ｕ／ｍｌの範囲、さらに好ましくは、１乃至
１００Ｕ／ｍｌの範囲、最も好ましくは５乃至５０Ｕ／
ｍｌの範囲で含む。本発明では、上記の水溶液に、カル
シウムイオンまたはヨウ素イオンを０．０１乃至１００
ｍＭの範囲、好ましくは０．０１乃至１０ｍＭの範囲、
さらに好ましくは０．０５乃至５ｍＭの範囲、最も好ま
しくは０．１乃至２ｍＭの範囲で添加する。カルシウム
イオンとヨウ素イオンとを併用してもよい。
【００１２】本発明者の研究によると、水溶液中のＣａ
2+イオンまたはＩ- イオンがアスコルビン酸オキシダー
ゼの安定化に作用するため、Ｃａ2+イオンおよびＩ- イ
オンの対イオンについて特に制限はない。従って、対外
診断薬の反応を阻害しないアニオン（Ｃａ2+の対イオ
ン）またはカチオン（Ｉ- の対イオン）を適宜選択して
用いることができる。アニオンの例としては、ハロゲン
イオン（例、Ｃｌ- ）や低級脂肪酸イオン（例、酢酸イ
オン）を挙げることができる。カチオンの例としては、
アルカリ金属イオン（例、Ｋ+ ）を挙げることができ
る。
2+イオンまたはＩ- イオンがアスコルビン酸オキシダー
ゼの安定化に作用するため、Ｃａ2+イオンおよびＩ- イ
オンの対イオンについて特に制限はない。従って、対外
診断薬の反応を阻害しないアニオン（Ｃａ2+の対イオ
ン）またはカチオン（Ｉ- の対イオン）を適宜選択して
用いることができる。アニオンの例としては、ハロゲン
イオン（例、Ｃｌ- ）や低級脂肪酸イオン（例、酢酸イ
オン）を挙げることができる。カチオンの例としては、
アルカリ金属イオン（例、Ｋ+ ）を挙げることができ
る。
【００１３】体外診断薬として凍結乾燥試薬を用いる場
合、カルシウムイオンの塩またはヨウ素イオンの塩をア
スコルビン酸オキシダーゼ１Ｕ当り０．５乃至５０００
ナノモルの範囲、好ましくは０．５乃至５００ナノモル
の範囲、さらに好ましくは、１乃至２００ナノモルの範
囲、最も好ましくは１０乃至２００ナノモルの範囲で使
用する。凍結乾燥試薬は、水に溶解して水溶液として使
用する。その水溶液は上記の規定の濃度範囲となるよう
に調整する。塩を形成するための対イオンは、上記の水
溶液中の対イオンと同様である。カルシウムイオンの塩
の例としては、塩化カルシウムおよび酢酸カルシウムを
挙げることができる。ヨウ素イオンの例としては、ヨウ
化カリウムを挙げることができる。
合、カルシウムイオンの塩またはヨウ素イオンの塩をア
スコルビン酸オキシダーゼ１Ｕ当り０．５乃至５０００
ナノモルの範囲、好ましくは０．５乃至５００ナノモル
の範囲、さらに好ましくは、１乃至２００ナノモルの範
囲、最も好ましくは１０乃至２００ナノモルの範囲で使
用する。凍結乾燥試薬は、水に溶解して水溶液として使
用する。その水溶液は上記の規定の濃度範囲となるよう
に調整する。塩を形成するための対イオンは、上記の水
溶液中の対イオンと同様である。カルシウムイオンの塩
の例としては、塩化カルシウムおよび酢酸カルシウムを
挙げることができる。ヨウ素イオンの例としては、ヨウ
化カリウムを挙げることができる。
【００１４】［カタラーゼの安定化］液状の体外診断薬
として用いる場合、カタラーゼの水溶液は、カタラーゼ
を０．５乃至５０００Ｕ／ｍｌの範囲、好ましくは５乃
至５０００Ｕ／ｍｌの範囲、さらに好ましくは、１０乃
至１０００Ｕ／ｍｌの範囲、最も好ましくは１００乃至
１０００Ｕ／ｍｌの範囲で含む。本発明では、上記の水
溶液に、二価の鉄錯体を０．００１乃至１０ｍＭの範
囲、好ましくは０．００５乃至５ｍＭの範囲、さらに好
ましくは０．０１乃至１ｍＭの範囲、最も好ましくは
０．０１乃至０．２ｍＭの範囲で添加する。
として用いる場合、カタラーゼの水溶液は、カタラーゼ
を０．５乃至５０００Ｕ／ｍｌの範囲、好ましくは５乃
至５０００Ｕ／ｍｌの範囲、さらに好ましくは、１０乃
至１０００Ｕ／ｍｌの範囲、最も好ましくは１００乃至
１０００Ｕ／ｍｌの範囲で含む。本発明では、上記の水
溶液に、二価の鉄錯体を０．００１乃至１０ｍＭの範
囲、好ましくは０．００５乃至５ｍＭの範囲、さらに好
ましくは０．０１乃至１ｍＭの範囲、最も好ましくは
０．０１乃至０．２ｍＭの範囲で添加する。
【００１５】鉄錯体は、ニトロソ（ニトロシル）基を有
することが好ましい。二価の鉄錯体の例としては、ニト
ロプルシッド（ペンタシアノニトロシル鉄（II）酸の
塩）、ニトロソ−ＰＳＡＰ（２−ニトロソ−５−［Ｎ−
ｎ−プロピル−Ｎ−（３−スルホプロピル）アミノ］フ
ェノール）−Ｆｅ2+錯体およびニトロソ−ＥＳＡＰ（２
−ニトロソ−５−［Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロ
ピル）アミノ］フェノール）−Ｆｅ2+錯体を挙げること
ができる。ニトロプルシッドは、Ｍ2 ［Ｆｅ（ＣＮ）5
（ＮＯ）］の式（ただし、Ｍは一価の金属）で示され
る。この鉄イオンを二価とする考え方と三価とする考え
方があるが、本明細書では、二価として扱う。ニトロプ
ルシッドの対イオンについて特に制限はない。従って、
対外診断薬の反応を阻害しないカチオンを適宜選択して
用いることができる。カチオンの例としては、アルカリ
金属イオン（例、Ｎａ+ 、Ｋ+ ）を挙げることができ
る。
することが好ましい。二価の鉄錯体の例としては、ニト
ロプルシッド（ペンタシアノニトロシル鉄（II）酸の
塩）、ニトロソ−ＰＳＡＰ（２−ニトロソ−５−［Ｎ−
ｎ−プロピル−Ｎ−（３−スルホプロピル）アミノ］フ
ェノール）−Ｆｅ2+錯体およびニトロソ−ＥＳＡＰ（２
−ニトロソ−５−［Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロ
ピル）アミノ］フェノール）−Ｆｅ2+錯体を挙げること
ができる。ニトロプルシッドは、Ｍ2 ［Ｆｅ（ＣＮ）5
（ＮＯ）］の式（ただし、Ｍは一価の金属）で示され
る。この鉄イオンを二価とする考え方と三価とする考え
方があるが、本明細書では、二価として扱う。ニトロプ
ルシッドの対イオンについて特に制限はない。従って、
対外診断薬の反応を阻害しないカチオンを適宜選択して
用いることができる。カチオンの例としては、アルカリ
金属イオン（例、Ｎａ+ 、Ｋ+ ）を挙げることができ
る。
【００１６】体外診断薬として凍結乾燥試薬を用いる場
合、二価の鉄錯体をカタラーゼ１Ｕ当り１乃至１０００
０ピコモルの範囲、好ましくは５乃至５０００ピコモル
の範囲、さらに好ましくは、１０乃至１０００ピコモル
の範囲、最も好ましくは２５乃至５００ピコモルの範囲
で使用する。凍結乾燥試薬は、水に溶解して水溶液とし
て使用する。その水溶液は上記の規定の濃度範囲となる
ように調整する。
合、二価の鉄錯体をカタラーゼ１Ｕ当り１乃至１０００
０ピコモルの範囲、好ましくは５乃至５０００ピコモル
の範囲、さらに好ましくは、１０乃至１０００ピコモル
の範囲、最も好ましくは２５乃至５００ピコモルの範囲
で使用する。凍結乾燥試薬は、水に溶解して水溶液とし
て使用する。その水溶液は上記の規定の濃度範囲となる
ように調整する。
【００１７】［体外診断薬の試薬系］前述したように、
アスコルビン酸オキシダーゼおよびカタラーゼは、様々
な体外診断薬の前処理において使用されている。アスコ
ルビン酸オキシダーゼあるいはカタラーゼを使用する試
薬系の例（酵素成分）を以下に挙げる。
アスコルビン酸オキシダーゼおよびカタラーゼは、様々
な体外診断薬の前処理において使用されている。アスコ
ルビン酸オキシダーゼあるいはカタラーゼを使用する試
薬系の例（酵素成分）を以下に挙げる。
【００１８】（１）クレアチニン測定系におけるクレア
チンの前処理試薬 クレアチナーゼ、ザルコシンオキシダーゼ、アスコルビ
ン酸オキシダーゼおよびカタラーゼ （２）総コレステロール測定系における試薬Ａ コレステロールオキシダーゼおよびアスコルビン酸オキ
シダーゼ （３）総コレステロール測定系における試薬Ｂ コレステロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼおよび
カタラーゼ （４）遊離コレステロール測定系における試薬Ａ アスコルビン酸オキシダーゼ （５）遊離コレステロール測定系における試薬Ｂ コレステロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼおよび
カタラーゼ （６）リン脂質測定系における試薬Ａ ホスホリパーゼおよびアスコルビン酸オキシダーゼ （７）リン脂質測定系における試薬Ｂ コリンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼおよびカタラー
ゼ （８）尿酸測定系における試薬Ａ ペルオキシダーゼ、アルコルビン酸オキシダーゼおよび
カタラーゼ
チンの前処理試薬 クレアチナーゼ、ザルコシンオキシダーゼ、アスコルビ
ン酸オキシダーゼおよびカタラーゼ （２）総コレステロール測定系における試薬Ａ コレステロールオキシダーゼおよびアスコルビン酸オキ
シダーゼ （３）総コレステロール測定系における試薬Ｂ コレステロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼおよび
カタラーゼ （４）遊離コレステロール測定系における試薬Ａ アスコルビン酸オキシダーゼ （５）遊離コレステロール測定系における試薬Ｂ コレステロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼおよび
カタラーゼ （６）リン脂質測定系における試薬Ａ ホスホリパーゼおよびアスコルビン酸オキシダーゼ （７）リン脂質測定系における試薬Ｂ コリンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼおよびカタラー
ゼ （８）尿酸測定系における試薬Ａ ペルオキシダーゼ、アルコルビン酸オキシダーゼおよび
カタラーゼ
【００１９】液状の体外診断薬は、１０℃以下の冷暗所
にて少なくも一年間の安定性が必要である。また、凍結
乾燥品は、溶解後（溶液調製後）少なくとも２週間、通
常は１か月の安定性が必要とされる。本発明の酵素水溶
液および乾燥試薬は、このような要求を充分に満足する
ものである。なお、下記の実施例では、３５℃にて安定
性の試験を実施する。３５℃にて３週間保存した状態
は、おおよそ１０℃以下の冷暗所にて１年間保存した状
態に対応する。
にて少なくも一年間の安定性が必要である。また、凍結
乾燥品は、溶解後（溶液調製後）少なくとも２週間、通
常は１か月の安定性が必要とされる。本発明の酵素水溶
液および乾燥試薬は、このような要求を充分に満足する
ものである。なお、下記の実施例では、３５℃にて安定
性の試験を実施する。３５℃にて３週間保存した状態
は、おおよそ１０℃以下の冷暗所にて１年間保存した状
態に対応する。
【００２０】
［実施例１］ 「アスコルビン酸オキシダーゼ活性の測定」下記の試薬
溶液（１）を調製した。
溶液（１）を調製した。
【００２１】 ──────────────────────────────────── 試薬溶液（１） ──────────────────────────────────── Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（Ｔ ＡＰＳ） ５０ｍＭ Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン （ＴＯＯＳ） ２ｍＭ クレアチナーゼ（ＣＲ） ５０Ｕ／ｍｌ ザルコシンオキシダーゼ（ＳＯＸ） １０Ｕ／ｍｌ アスコルビン酸オキシダーゼ（ＡＳＯＤ） １０Ｕ／ｍｌ ｐＨ ８．２ ────────────────────────────────────
【００２２】試薬溶液（１）に対して、ヨウ化カリウム
０．５ｍＭまたは５ｍＭを添加した溶液あるいは酢酸カ
ルシウム２ｍＭまたは１０ｍＭを添加した溶液を調製し
た。各溶液を３５℃で４週間保存し、７日毎にアスコル
ビン酸オキシダーゼ活性（μ／ｍｌ）を測定した。結果
を図１のグラフに示す。図１に示される結果から明らか
なように、ヨウ化カリウムあるいは酢酸カルシウムの添
加は、アスコルビン酸オキシダーゼの水溶液の安定性を
顕著に向上させる。
０．５ｍＭまたは５ｍＭを添加した溶液あるいは酢酸カ
ルシウム２ｍＭまたは１０ｍＭを添加した溶液を調製し
た。各溶液を３５℃で４週間保存し、７日毎にアスコル
ビン酸オキシダーゼ活性（μ／ｍｌ）を測定した。結果
を図１のグラフに示す。図１に示される結果から明らか
なように、ヨウ化カリウムあるいは酢酸カルシウムの添
加は、アスコルビン酸オキシダーゼの水溶液の安定性を
顕著に向上させる。
【００２３】［実施例２］ 「クレアチニン量の測定」下記の試薬溶液（２）および
（３）を調製した。
（３）を調製した。
【００２４】 ──────────────────────────────────── 試薬溶液（２） ──────────────────────────────────── Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（Ｔ ＡＰＳ） ５０ｍＭ Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン （ＴＯＯＳ） ２ｍＭ クレアチナーゼ（ＣＲ） ５０Ｕ／ｍｌ ザルコシンオキシダーゼ（ＳＯＸ） １０Ｕ／ｍｌ アスコルビン酸オキシダーゼ（ＡＳＯＤ） １０Ｕ／ｍｌ カタラーゼ（ＣＡＴ） ２００Ｕ／ｍｌ ｐＨ ８．２ ────────────────────────────────────
【００２５】 ──────────────────────────────────── 試薬溶液（３） ──────────────────────────────────── Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（Ｔ ＡＰＳ） ５０ｍＭ ４−アミノアンチピリン（４−ＡＡＰ） ２ｍＭ ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ） ２０Ｕ／ｍｌ アジ化ナトリウム ０．１％ ｐＨ ８．０ ────────────────────────────────────
【００２６】次に、測定サンプルとして、８０ｍｇ／ｄ
ｌのクレアチニン水溶液（標準液）および標準液に、２
００ｍｇ／ｄｌのアスコルビン酸を添加したものを準備
した。試薬溶液（１）に対して、ヨウ化カリウム０．５
ｍＭまたは５ｍＭを添加した溶液あるいは酢酸カルシウ
ム２ｍＭまたは１０ｍＭを添加した溶液を調製した。各
溶液を３５℃で４週間保存し、７日毎に、自動分析装置
（日立７０５０型）で測定サンプルのクレアチニン量
（ｍＡｂｓ＝ミリ吸光度）を測定した。測定サンプルを
使用せずに、試薬溶液のみを混合した場合（ブランク）
では、測定値は８．３〜１１．９の範囲であり、添加剤
の有無および保存期間に関して大きな変化は認められな
かった。次に（アスコルビン酸を含まない）標準液を測
定した値は、１４４５．９〜１４７７．４の範囲であ
り、添加剤の有無および保存期間に関して大きな変化は
認められなかった。最後に、アスコルビン酸を含む標準
液を測定した。その結果を図２に示す。図２に示される
結果から明らかなように、無添加の場合は、３５℃で３
週間保存すると、アスコルビン酸オキシダーゼが失活す
ることにより、アスコルビン酸の影響が表れ、クレアチ
ニンの測定値が低下することがわかる。
ｌのクレアチニン水溶液（標準液）および標準液に、２
００ｍｇ／ｄｌのアスコルビン酸を添加したものを準備
した。試薬溶液（１）に対して、ヨウ化カリウム０．５
ｍＭまたは５ｍＭを添加した溶液あるいは酢酸カルシウ
ム２ｍＭまたは１０ｍＭを添加した溶液を調製した。各
溶液を３５℃で４週間保存し、７日毎に、自動分析装置
（日立７０５０型）で測定サンプルのクレアチニン量
（ｍＡｂｓ＝ミリ吸光度）を測定した。測定サンプルを
使用せずに、試薬溶液のみを混合した場合（ブランク）
では、測定値は８．３〜１１．９の範囲であり、添加剤
の有無および保存期間に関して大きな変化は認められな
かった。次に（アスコルビン酸を含まない）標準液を測
定した値は、１４４５．９〜１４７７．４の範囲であ
り、添加剤の有無および保存期間に関して大きな変化は
認められなかった。最後に、アスコルビン酸を含む標準
液を測定した。その結果を図２に示す。図２に示される
結果から明らかなように、無添加の場合は、３５℃で３
週間保存すると、アスコルビン酸オキシダーゼが失活す
ることにより、アスコルビン酸の影響が表れ、クレアチ
ニンの測定値が低下することがわかる。
【００２７】［実施例３］ 「カタラーゼ活性の測定」下記の試薬溶液（４）を調製
した。
した。
【００２８】 ──────────────────────────────────── 試薬溶液（４） ──────────────────────────────────── Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（Ｔ ＡＰＳ） ５０ｍＭ ３−ヒドロキシ−２，４，６−トリヨード安息香酸（ＨＴＩＢ） ３ｍＭ クレアチナーゼ（ＣＲ） １００Ｕ／ｍｌ ザルコシンオキシダーゼ（ＳＯＸ） １０Ｕ／ｍｌ カタラーゼ（ＣＡＴ） ２００Ｕ／ｍｌ ｐＨ ８．２ ────────────────────────────────────
【００２９】試薬溶液（４）に対して、下記の化合物を
添加した溶液を調製した。 ──────────────────────────────────── 添加物 添加量 ──────────────────────────────────── ニトロプルシッドＮａ ０．０１ｍＭおよび０．１ｍＭ ニトロソＰＳＡＰ ０．０１ｍＭおよび０．１ｍＭ ニトロソＰＳＡＰ−Ｆｅ（II）錯体 ０．０１ｍＭおよび０．１ｍＭ ニトロソＥＳＡＰ ０．０１ｍＭおよび０．１ｍＭ ニトロソＥＳＡＰ−Ｆｅ（II）錯体 ０．０１ｍＭおよび０．１ｍＭ ────────────────────────────────────
添加した溶液を調製した。 ──────────────────────────────────── 添加物 添加量 ──────────────────────────────────── ニトロプルシッドＮａ ０．０１ｍＭおよび０．１ｍＭ ニトロソＰＳＡＰ ０．０１ｍＭおよび０．１ｍＭ ニトロソＰＳＡＰ−Ｆｅ（II）錯体 ０．０１ｍＭおよび０．１ｍＭ ニトロソＥＳＡＰ ０．０１ｍＭおよび０．１ｍＭ ニトロソＥＳＡＰ−Ｆｅ（II）錯体 ０．０１ｍＭおよび０．１ｍＭ ────────────────────────────────────
【００３０】各溶液を３５℃で４週間保存し、７日毎に
カタラーゼ活性（μ／ｍｌ）を測定した。結果を図３の
グラフに示す。図３に示される結果から明らかなよう
に、無添加あるいはニトロソＰＳＡＰおよびニトロソＥ
ＳアＰを添加した試料は、カタラーゼの活性が低下する
が、ニトロプルシッドＮａ、ニトロソＰＳＡＰ−Ｆｅ
（II）錯体またはニトロソＥＳＡＰ−Ｆｅ（II）錯体を
添加した試料では、カタラーゼの失活が認められない。
カタラーゼ活性（μ／ｍｌ）を測定した。結果を図３の
グラフに示す。図３に示される結果から明らかなよう
に、無添加あるいはニトロソＰＳＡＰおよびニトロソＥ
ＳアＰを添加した試料は、カタラーゼの活性が低下する
が、ニトロプルシッドＮａ、ニトロソＰＳＡＰ−Ｆｅ
（II）錯体またはニトロソＥＳＡＰ−Ｆｅ（II）錯体を
添加した試料では、カタラーゼの失活が認められない。
【００３１】［実施例４］ 「クレアチニン量の測定」下記の試薬溶液（５）および
（６）を調製した。
（６）を調製した。
【００３２】 ──────────────────────────────────── 試薬溶液（５） ──────────────────────────────────── Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（Ｔ ＡＰＳ） ５０ｍＭ ３−ヒドロキシ−２，４，６−トリヨード安息香酸（ＨＴＩＢ） ３ｍＭ クレアチナーゼ（ＣＲ） １００Ｕ／ｍｌ ザルコシンオキシダーゼ（ＳＯＸ） １０Ｕ／ｍｌ アスコルビン酸オキシダーゼ（ＡＳＯＤ） １０Ｕ／ｍｌ カタラーゼ（ＣＡＴ） ２００Ｕ／ｍｌ ｐＨ ８．２ ────────────────────────────────────
【００３３】 ──────────────────────────────────── 試薬溶液（６） ──────────────────────────────────── Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（Ｔ ＡＰＳ） ５０ｍＭ ４−アミノアンチピリン（４−ＡＡＰ） ２ｍＭ ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ） ２０Ｕ／ｍｌ アジ化ナトリウム ０．１％ ｐＨ ８．０ ────────────────────────────────────
【００３４】次に、測定サンプルとして、５ｍｇ／ｄｌ
のクレアチニン水溶液および５ｍｇ／ｄｌのクレアチン
水溶液を準備した。試薬溶液（５）に対して、実施例３
で用いた各種化合物を添加した溶液を調製した。各溶液
を３５℃で４週間保存し、７日毎に、自動分析装置（日
立７０５０型）で測定サンプルのクレアチニン量（ｍＡ
ｂｓ）を測定した。測定サンプルを使用せずに、試薬溶
液のみを混合した場合（ブランク）では、測定値は５．
６〜９．８の範囲であり、添加剤の有無および保存期間
に関して大きな変化は認められなかった。次に、クレア
チニン水溶液を測定した値は、１２０．５〜１３０．４
の範囲であり、添加剤の有無および保存期間に関して大
きな変化は認められなかった。最後に、クレアチン水溶
液を測定した。その結果を図４に示す。図４に示される
結果から明らかなように、無添加あるいはニトロソＰＳ
ＡＰおよびニトロソＥＳＡＰを添加した試料は、３５℃
で２週間保存すると、カタラーゼが失活することによ
り、クレアチンの前処理が不完全となり、発色が起きて
いる。
のクレアチニン水溶液および５ｍｇ／ｄｌのクレアチン
水溶液を準備した。試薬溶液（５）に対して、実施例３
で用いた各種化合物を添加した溶液を調製した。各溶液
を３５℃で４週間保存し、７日毎に、自動分析装置（日
立７０５０型）で測定サンプルのクレアチニン量（ｍＡ
ｂｓ）を測定した。測定サンプルを使用せずに、試薬溶
液のみを混合した場合（ブランク）では、測定値は５．
６〜９．８の範囲であり、添加剤の有無および保存期間
に関して大きな変化は認められなかった。次に、クレア
チニン水溶液を測定した値は、１２０．５〜１３０．４
の範囲であり、添加剤の有無および保存期間に関して大
きな変化は認められなかった。最後に、クレアチン水溶
液を測定した。その結果を図４に示す。図４に示される
結果から明らかなように、無添加あるいはニトロソＰＳ
ＡＰおよびニトロソＥＳＡＰを添加した試料は、３５℃
で２週間保存すると、カタラーゼが失活することによ
り、クレアチンの前処理が不完全となり、発色が起きて
いる。
【図１】アスコルビン酸オキシダーゼ活性の測定結果を
示すグラフである。
示すグラフである。
【図２】クレアチニン量の測定結果を示すグラフであ
る。
る。
【図３】カタラーゼ活性の測定結果を示すグラフであ
る。
る。
【図４】クレアチニン量の測定結果を示すグラフであ
る。
る。
Claims (4)
- 【請求項１】 アスコルビン酸オキシダーゼを０．１乃
至１０００Ｕ／ｍｌ、およびカルシウムイオンまたはヨ
ウ素イオンを０．０１乃至１００ｍＭの範囲で含むこと
を特徴とするアスコルビン酸オキシダーゼの水溶液。 - 【請求項２】 アスコルビン酸オキシダーゼ、およびカ
ルシウムイオンの塩またはヨウ素イオンの塩をアスコル
ビン酸オキシダーゼ１Ｕ当り０．５乃至５０００ナノモ
ルの範囲で含むことを特徴とするアスコルビン酸オキシ
ダーゼの乾燥試薬。 - 【請求項３】 カタラーゼを０．５乃至５０００Ｕ／ｍ
ｌ、および二価の鉄錯体を０．００１乃至１０ｍＭの範
囲で含むことを特徴とするカタラーゼの水溶液。 - 【請求項４】 カタラーゼ、および二価の鉄錯体をカタ
ラーゼ１Ｕ当り１乃至１００００ピコモルの範囲で含む
ことを特徴とするカタラーゼの乾燥試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19123995A JPH0919297A (ja) | 1995-07-04 | 1995-07-04 | 酵素水溶液および酵素の乾燥試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19123995A JPH0919297A (ja) | 1995-07-04 | 1995-07-04 | 酵素水溶液および酵素の乾燥試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0919297A true JPH0919297A (ja) | 1997-01-21 |
Family
ID=16271221
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19123995A Withdrawn JPH0919297A (ja) | 1995-07-04 | 1995-07-04 | 酵素水溶液および酵素の乾燥試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0919297A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002233363A (ja) * | 2001-02-08 | 2002-08-20 | Unitika Ltd | アスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法および生体成分測定用試薬 |
-
1995
- 1995-07-04 JP JP19123995A patent/JPH0919297A/ja not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002233363A (ja) * | 2001-02-08 | 2002-08-20 | Unitika Ltd | アスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法および生体成分測定用試薬 |
| JP4620881B2 (ja) * | 2001-02-08 | 2011-01-26 | ユニチカ株式会社 | アスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法および生体成分測定用試薬 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4543326A (en) | Stabilization of oxidase | |
| JPH0577399B2 (ja) | ||
| Matsubara et al. | Spectrophotometric determination of hydrogen peroxide with titanium 2-((5-bromopyridyl) azo)-5-(N-propyl-N-sulfopropylamino) phenol reagent and its application to the determination of serum glucose using glucose oxidase | |
| JPH0310696A (ja) | 体液成分の測定方法 | |
| JP2854995B2 (ja) | 尿酸測定用試薬組成物 | |
| US4910134A (en) | Ascorbic acid decomposing method | |
| EP0100217B1 (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| JPH04229192A (ja) | 安定な水性ｎａｄｈ試薬及びキット | |
| US4695539A (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| US4801538A (en) | Process for determining superoxide dismutase activity | |
| JPH0919297A (ja) | 酵素水溶液および酵素の乾燥試薬 | |
| JP4691627B2 (ja) | 非特異的発色の抑制方法 | |
| US5474908A (en) | Method of enzymatically measuring hydrogen peroxide and reagent therefor | |
| US5246836A (en) | Peroxidase catalyzed enzyme assay by sample prg-treatment | |
| US5436133A (en) | Enzyme assay of biochemical substances | |
| JPH0115280B2 (ja) | ||
| JPH05308968A (ja) | 液状の尿酸オキシダーゼ酵素の安定化方法 | |
| JP4058475B2 (ja) | クレアチニン又はクレアチン測定方法及び測定試薬並びにｍタンパク影響回避剤 | |
| US5108733A (en) | Stabilized trinder reagent | |
| JPH0815430B2 (ja) | アスコルビン酸オキシダ−ゼの安定化法 | |
| JP2534859B2 (ja) | 生体物質のエンザイムアツセイ | |
| US4695540A (en) | Quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| US5206006A (en) | Stabilized trinder reagent | |
| JPS5822200B2 (ja) | 血清成分の測定方法 | |
| JP3070726B2 (ja) | 溶液中のザルコシンオキシダーゼの安定化方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20021001 |