JPH09110724A - 前立腺癌処置のための組成物 - Google Patents
前立腺癌処置のための組成物Info
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- JPH09110724A JPH09110724A JP8233697A JP23369796A JPH09110724A JP H09110724 A JPH09110724 A JP H09110724A JP 8233697 A JP8233697 A JP 8233697A JP 23369796 A JP23369796 A JP 23369796A JP H09110724 A JPH09110724 A JP H09110724A
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- rhodamine
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- prostate cancer
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- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明はローダミン−１２３による前立腺癌
の処置を課題とする。 【解決手段】 前立腺癌は前立腺癌細胞のインビボ破壊
を及ぼすのに十分な量のローダミン−１２３（Ｒｈ１２
３）の経口投与により、又はＲｈ−１２３、エチルアル
コール、デキストロース及び水の静脈投与により患者に
おいて処置されうる。この処置溶液は９５容量％のエチ
ルアルコールと、５重量％のデキストロース水溶液を有
する５容量％の水の溶液の中にＲｈ−１２３のストック
溶液を混合することにより調製される。処置は患者の血
液中の前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）のレベルを測定する
ことにより管理される。
の処置を課題とする。 【解決手段】 前立腺癌は前立腺癌細胞のインビボ破壊
を及ぼすのに十分な量のローダミン−１２３（Ｒｈ１２
３）の経口投与により、又はＲｈ−１２３、エチルアル
コール、デキストロース及び水の静脈投与により患者に
おいて処置されうる。この処置溶液は９５容量％のエチ
ルアルコールと、５重量％のデキストロース水溶液を有
する５容量％の水の溶液の中にＲｈ−１２３のストック
溶液を混合することにより調製される。処置は患者の血
液中の前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）のレベルを測定する
ことにより管理される。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はローダミン−１２３
〔メチロ−（６−アミノ−３−イミノ−３Ｈ−キサンテ
ン−９−イル）安息香酸塩−塩化水素による前立腺癌を
処置するための組成物及び方法に関する。
〔メチロ−（６−アミノ−３−イミノ−３Ｈ−キサンテ
ン−９−イル）安息香酸塩−塩化水素による前立腺癌を
処置するための組成物及び方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】代謝性ホルモンの難治性前立腺癌はその
遅い複製速度を理由に化学療法に対しての応答は弱い。
この病気の処置は細胞分裂速度とは独立に又はＤＮＡも
しくはＲＮＡ代謝を妨害する能力とは独立に有効である
新規の試薬を必要とする。ローダミン−１２３（Ｒｈ−
１２３）は一のかかる試薬である。Ｒｈ−１２３は悪性
生存細胞のミトコンドリアの中に優先的に局在してお
り、その理由は正常細胞と悪性細胞とのプラズマ膜電位
における差、及びこの親油性分子上の正電荷を理由とす
る。従って、Ｒｈ−１２３は癌細胞に対して特異的に毒
性である。１９８６年において、我々は移植可能なラッ
ト前立腺腫瘍Ｒ３３２７−Ｈに対するジメチルスルホキ
シド（ＤＭＳＯ）の中に溶解したＲｈ−１２３の作用を
報告した（Ｄｕｎｎｉｎｇ）。Ｒｈ−１２３溶液を１５
mg／体重kgの投与量において５２日間にわたって１日置
きに皮下投与した。腺房細胞の著しい破壊的な変化が、
基底腫由来の細胞の破綻、細胞質の破壊、並びに空胞
化、更には繊維芽形状及び密度における変化を伴って、
認められた。
遅い複製速度を理由に化学療法に対しての応答は弱い。
この病気の処置は細胞分裂速度とは独立に又はＤＮＡも
しくはＲＮＡ代謝を妨害する能力とは独立に有効である
新規の試薬を必要とする。ローダミン−１２３（Ｒｈ−
１２３）は一のかかる試薬である。Ｒｈ−１２３は悪性
生存細胞のミトコンドリアの中に優先的に局在してお
り、その理由は正常細胞と悪性細胞とのプラズマ膜電位
における差、及びこの親油性分子上の正電荷を理由とす
る。従って、Ｒｈ−１２３は癌細胞に対して特異的に毒
性である。１９８６年において、我々は移植可能なラッ
ト前立腺腫瘍Ｒ３３２７−Ｈに対するジメチルスルホキ
シド（ＤＭＳＯ）の中に溶解したＲｈ−１２３の作用を
報告した（Ｄｕｎｎｉｎｇ）。Ｒｈ−１２３溶液を１５
mg／体重kgの投与量において５２日間にわたって１日置
きに皮下投与した。腺房細胞の著しい破壊的な変化が、
基底腫由来の細胞の破綻、細胞質の破壊、並びに空胞
化、更には繊維芽形状及び密度における変化を伴って、
認められた。
【０００３】１９９０年において、我々はＰ・ＡIII と
呼ばれる非常に悪性のアンドロゲン非依存性移植可能腫
瘍がＤＭＳＯに溶解しておいたＲｈ−１２３に対して非
常に感受性であることを報告した。腫瘍のＲｈ−１２３
処置は腫瘍細胞の著しい破壊をもたらし、正常細胞にお
ける毒性は認められなかった。未処置の感受性ロバンド
−ウィスター（Lobund-Wister : L-B ）ラットへの腫瘍
残余の注入は腫瘍増殖をもたらさなかった。
呼ばれる非常に悪性のアンドロゲン非依存性移植可能腫
瘍がＤＭＳＯに溶解しておいたＲｈ−１２３に対して非
常に感受性であることを報告した。腫瘍のＲｈ−１２３
処置は腫瘍細胞の著しい破壊をもたらし、正常細胞にお
ける毒性は認められなかった。未処置の感受性ロバンド
−ウィスター（Lobund-Wister : L-B ）ラットへの腫瘍
残余の注入は腫瘍増殖をもたらさなかった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】ＤＭＳＯは静脈内
（ｉ．ｖ．）服用にとって満足たるものではないため、
我々はＲＨ−１２３のアルコール水溶液をもくろみ、そ
れが前立腺癌の処置のためのｉ．ｖ．点滴にとって満足
たるものであった。
（ｉ．ｖ．）服用にとって満足たるものではないため、
我々はＲＨ−１２３のアルコール水溶液をもくろみ、そ
れが前立腺癌の処置のためのｉ．ｖ．点滴にとって満足
たるものであった。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、方法の観点に
おいては、前立腺癌を有する患者を処置するための方法
を提供し、これはローダミン−１２３（Ｒｈ−１２３）
を前立腺癌細胞のインビボ破壊を及ぼすのに十分な量で
投与することによる。好ましくは、Ｒｈ−１２３はエチ
ルアルコールと水との溶液において静脈内投与する。好
ましくは、この溶液はデキストロースを含み、そしてＲ
ｈ−１２３の各投与物は約２５０mlのＲｈ−１２３溶液
を約４時間にわたって患者に点滴することにより投与す
る。
おいては、前立腺癌を有する患者を処置するための方法
を提供し、これはローダミン−１２３（Ｒｈ−１２３）
を前立腺癌細胞のインビボ破壊を及ぼすのに十分な量で
投与することによる。好ましくは、Ｒｈ−１２３はエチ
ルアルコールと水との溶液において静脈内投与する。好
ましくは、この溶液はデキストロースを含み、そしてＲ
ｈ−１２３の各投与物は約２５０mlのＲｈ−１２３溶液
を約４時間にわたって患者に点滴することにより投与す
る。
【０００６】別の態様において、Ｒｈ−１２３は液体と
して、又はピルとして、例えば錠剤もしくはカプセルと
して経口投与する。好ましくは、このピルはＲｈ−１２
３を長期間かけて、即ち２〜２４時間かけて放出し、毒
性を回避せしめるものである。
して、又はピルとして、例えば錠剤もしくはカプセルと
して経口投与する。好ましくは、このピルはＲｈ−１２
３を長期間かけて、即ち２〜２４時間かけて放出し、毒
性を回避せしめるものである。
【０００７】好ましくは、患者を、その患者の体重kg当
り約０．５mgから出発して、約３０mgに至るまで、又は
毒性が観察されてしまうまでのいづれか早い方が認めら
れるまでＲｈ−１２３を徐々に増やし、Ｒｈ−１２３の
断続投与で処置する。この処置は、患者の血液中の前立
腺特異的抗原（ＰＳＡ）のレベルが、本発明に係る処置
を施す直前の患者において認められるレベルから有意義
に低下するまで続ける。
り約０．５mgから出発して、約３０mgに至るまで、又は
毒性が観察されてしまうまでのいづれか早い方が認めら
れるまでＲｈ−１２３を徐々に増やし、Ｒｈ−１２３の
断続投与で処置する。この処置は、患者の血液中の前立
腺特異的抗原（ＰＳＡ）のレベルが、本発明に係る処置
を施す直前の患者において認められるレベルから有意義
に低下するまで続ける。
【０００８】本発明は、組成物の観点においては、前立
腺癌を有する患者を処置するための溶液を提供する。こ
の溶液はエチルアルコールと、水に溶解してあるＲｈ−
１２３を含んで成る。好ましくは、この溶液は約５重量
％の糖、例えばデキストロース又はグルコースであって
代謝同化され易いものをも含む。
腺癌を有する患者を処置するための溶液を提供する。こ
の溶液はエチルアルコールと、水に溶解してあるＲｈ−
１２３を含んで成る。好ましくは、この溶液は約５重量
％の糖、例えばデキストロース又はグルコースであって
代謝同化され易いものをも含む。
【０００９】本発明は更に前立腺癌を処置するうえで利
用される投与溶液を調製するためのストック溶液をも提
供する。このストック溶液はエチルアルコール（好まし
くは９５％のエチルアルコールと５％の水）の中に溶解
されたＲｈ−１２３を含んで成る。このストック溶液中
のＲｈ−１２３の濃度はml当り約５〜約２５mgである。
用される投与溶液を調製するためのストック溶液をも提
供する。このストック溶液はエチルアルコール（好まし
くは９５％のエチルアルコールと５％の水）の中に溶解
されたＲｈ−１２３を含んで成る。このストック溶液中
のＲｈ−１２３の濃度はml当り約５〜約２５mgである。
【００１０】
【発明の実施の形態】以降に、 １）マウスにおけるＤＭＳＯ、アルコール−グルコース
及びＲｈ−１２３の毒性； ２）Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロソウレア（ＭＮＵ）及びテ
ストステロンプロピオネート（ＴＰ）の注射によりＬ−
Ｗラットにおいて生成された自発性ラット前立腺癌に及
ぼすＲｈ−１２３の作用；並びに ３）様々なヒト前立腺癌細胞系に及ぼすＲｈ−１２３の
作用；の我々の研究を説明する。
及びＲｈ−１２３の毒性； ２）Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロソウレア（ＭＮＵ）及びテ
ストステロンプロピオネート（ＴＰ）の注射によりＬ−
Ｗラットにおいて生成された自発性ラット前立腺癌に及
ぼすＲｈ−１２３の作用；並びに ３）様々なヒト前立腺癌細胞系に及ぼすＲｈ−１２３の
作用；の我々の研究を説明する。
【００１１】これらの研究には、クローン原性（効率的
プレーティング）、Ｒｈ−１２３取込み及び保持、並び
にＲｈ−１２３誘導化細胞傷害能に及ぼすＲｈ−１２３
の作用が含まれる。これらの研究はEastman Kodak Comp
any （Rochester, NY ）から購入した分子量３８０．８
３を有するレーザー級のＲｈ−１２３（Ｃ 21Ｈ17Ｃｌ
Ｎ2 Ｏ3 ）で行った。Ｒｈ−１２３は以下の構造式を有
する：
プレーティング）、Ｒｈ−１２３取込み及び保持、並び
にＲｈ−１２３誘導化細胞傷害能に及ぼすＲｈ−１２３
の作用が含まれる。これらの研究はEastman Kodak Comp
any （Rochester, NY ）から購入した分子量３８０．８
３を有するレーザー級のＲｈ−１２３（Ｃ 21Ｈ17Ｃｌ
Ｎ2 Ｏ3 ）で行った。Ｒｈ−１２３は以下の構造式を有
する：
【００１２】
【化１】
【００１３】マウスに対する毒性試験 Ｒｈ−１２３，ＤＭＳＯ及びアルコール−グルコースの
ための２種類の溶媒の毒性を生後６０日目のスイス−ウ
ェブスター−マウス（Simonsen Laboratories,Inc., Gi
lroy, CA ）で試験した。各溶媒に同して５匹のマウス
を用意し、それぞれ１２グループ当り２．０，７．５，
１５及び２０mg／kg体重のＲｈ−１２３投与量を与え
た。Ｒｈ−１２３を有する及び有さない溶媒を、蒸留水
中の５０容量％のＤＭＳＯ、及び蒸留水中の５重量％の
グルコース溶液中の５容量％のアルコールの濃度におい
て投与した。このグルコースはデキストロース、フルク
トース又は代謝同化し易い任意の適当な糖と交換してよ
い。Ｒｈ−１２３の濃度は５mg／mlとした。適当なコン
トロールを用意した。そのマウスには２週間にわたって
１日置きに皮下注射を施した。
ための２種類の溶媒の毒性を生後６０日目のスイス−ウ
ェブスター−マウス（Simonsen Laboratories,Inc., Gi
lroy, CA ）で試験した。各溶媒に同して５匹のマウス
を用意し、それぞれ１２グループ当り２．０，７．５，
１５及び２０mg／kg体重のＲｈ−１２３投与量を与え
た。Ｒｈ−１２３を有する及び有さない溶媒を、蒸留水
中の５０容量％のＤＭＳＯ、及び蒸留水中の５重量％の
グルコース溶液中の５容量％のアルコールの濃度におい
て投与した。このグルコースはデキストロース、フルク
トース又は代謝同化し易い任意の適当な糖と交換してよ
い。Ｒｈ−１２３の濃度は５mg／mlとした。適当なコン
トロールを用意した。そのマウスには２週間にわたって
１日置きに皮下注射を施した。
【００１４】５匹のマウスのうち３匹がＤＭＳＯ中の２
０mg／kgのＲｈ−１２３の投与量で死亡した。５匹のマ
ウスのうちの１匹はＤＭＳＯ中の１５mg／kgのＲｈ−１
２３で死亡した。５匹のマウスのうち２匹は５０％のＤ
ＭＳＯのみで死亡した。希釈剤としてアルコール−グル
コース溶液を用ると、このマウスは罹病することなく、
２週間にわたり１日置きに与える２０mg／kgのＲｈ−１
２３の投与量に対して寛容を示した。
０mg／kgのＲｈ−１２３の投与量で死亡した。５匹のマ
ウスのうちの１匹はＤＭＳＯ中の１５mg／kgのＲｈ−１
２３で死亡した。５匹のマウスのうち２匹は５０％のＤ
ＭＳＯのみで死亡した。希釈剤としてアルコール−グル
コース溶液を用ると、このマウスは罹病することなく、
２週間にわたり１日置きに与える２０mg／kgのＲｈ−１
２３の投与量に対して寛容を示した。
【００１５】ラットの前立腺癌 Ｌ−Ｗラットの前立腺内及び精嚢内で発症した誘導型自
発性ラット前立腺癌に及ぼすＲｈ−１２３の効果を調べ
るため、１３匹のラットに酸性化ＭＮＵを静脈内的に接
種せしめた（３０mg／kg体重（ＢＷ））。一回のＭＮＵ
接種の後、ラットそれぞれにシラスチックチューブの中
にシールされた５０mgのＴＰを皮下移植した。３つのＴ
Ｐ移植片を２ヶ月毎に施した。４〜６ヶ月の潜伏期間の
後、小さな触知可能な腫瘍が腹部において検出された。
次いでそのラットにＲｈ−１２３（１５mg／kgＢＷ）を
１日置きに６回の投与にわたって皮下投与した。Ｒｈ−
１２３を５mg／mlの濃度において、滅菌水中の５％（容
量）のエタノール−５％（重量）のグルコース溶液に溶
かした。これらのラットを、最後のＲｈ−１２３投与の
１週間後に殺し、そしてその組織を１０％のホルマリン
の中で固定した。
発性ラット前立腺癌に及ぼすＲｈ−１２３の効果を調べ
るため、１３匹のラットに酸性化ＭＮＵを静脈内的に接
種せしめた（３０mg／kg体重（ＢＷ））。一回のＭＮＵ
接種の後、ラットそれぞれにシラスチックチューブの中
にシールされた５０mgのＴＰを皮下移植した。３つのＴ
Ｐ移植片を２ヶ月毎に施した。４〜６ヶ月の潜伏期間の
後、小さな触知可能な腫瘍が腹部において検出された。
次いでそのラットにＲｈ−１２３（１５mg／kgＢＷ）を
１日置きに６回の投与にわたって皮下投与した。Ｒｈ−
１２３を５mg／mlの濃度において、滅菌水中の５％（容
量）のエタノール−５％（重量）のグルコース溶液に溶
かした。これらのラットを、最後のＲｈ−１２３投与の
１週間後に殺し、そしてその組織を１０％のホルマリン
の中で固定した。
【００１６】前立腺複合体の腫瘍塊の中で大きな変化は
認められなかった。処理を施してラットの前立腺複合体
の顕微鏡観察は、著しい細胞性及び腺房破壊、ピクノー
ゼ、細胞形質不鮮明、並びに上皮内嚢胞形成を有する腫
瘍組織を示した。処置の効果を図１〜４に示す。図１は
未処理の自発性ラット前立腺複合腺癌（ＡＲＰＣＡ）を
示す。顕著な仁を有する不規則な核が注目される。細胞
質は豊富となっており、そしてはっきりしている。図２
は１日置きで６回の投与によりＲｈ−１２３（１５mg／
kg・ｂｗ）で処理したＡＲＰＣＡに対する作用を示す。
細胞質の容積は大きく縮小し、そして核は小さくなり、
そして見えにくくなっていた。嚢胞形成は双方の腺房に
おいて示された（矢印）。図３は図２に記載の通りに処
理したＡＲＰＣＡを示す。２つの核の間の細胞の大きな
嚢胞が示された。図４は図２について説明した通りに処
理したＡＲＰＣＡを示す。細胞質のよごれ及び染色性の
低下が注目される。核の明瞭性も失われている。ヘモト
キシリン−及びエオシン−染色切片を示す。図１〜４に
示す写真のオリジナルの倍率は４００倍である。その腫
瘍塊のサイズは小さくなっておらず、おそらくは死んだ
及び死にかけている細胞の蓄積残がいを理由とする。正
常にふち取りされた組織は変化を示さなかった。従っ
て、Ｒｈ−１２３は正常な組織に対する有害な作用のな
い有能な抗腫瘍等であることがわかった。
認められなかった。処理を施してラットの前立腺複合体
の顕微鏡観察は、著しい細胞性及び腺房破壊、ピクノー
ゼ、細胞形質不鮮明、並びに上皮内嚢胞形成を有する腫
瘍組織を示した。処置の効果を図１〜４に示す。図１は
未処理の自発性ラット前立腺複合腺癌（ＡＲＰＣＡ）を
示す。顕著な仁を有する不規則な核が注目される。細胞
質は豊富となっており、そしてはっきりしている。図２
は１日置きで６回の投与によりＲｈ−１２３（１５mg／
kg・ｂｗ）で処理したＡＲＰＣＡに対する作用を示す。
細胞質の容積は大きく縮小し、そして核は小さくなり、
そして見えにくくなっていた。嚢胞形成は双方の腺房に
おいて示された（矢印）。図３は図２に記載の通りに処
理したＡＲＰＣＡを示す。２つの核の間の細胞の大きな
嚢胞が示された。図４は図２について説明した通りに処
理したＡＲＰＣＡを示す。細胞質のよごれ及び染色性の
低下が注目される。核の明瞭性も失われている。ヘモト
キシリン−及びエオシン−染色切片を示す。図１〜４に
示す写真のオリジナルの倍率は４００倍である。その腫
瘍塊のサイズは小さくなっておらず、おそらくは死んだ
及び死にかけている細胞の蓄積残がいを理由とする。正
常にふち取りされた組織は変化を示さなかった。従っ
て、Ｒｈ−１２３は正常な組織に対する有害な作用のな
い有能な抗腫瘍等であることがわかった。
【００１７】インビトロでのヒト前立腺癌細胞の研究 Ｒｈ−１２３毒性のアッセイは、３種類のヒト前立腺癌
細胞系ＰＣ−３（Kaighn ME, Narayan KS, Ohnuki Y.
ら：Establishment and characterization of ahuman p
rostatic carcinoma cell line, Invest Urol 17 : 16-
23, 1979 ），ＤＵ−１４５（Stone KR, Mickey D, Wun
derli H, ら：Isolation of a human prostatic carcin
oma cell line (DU145), Int J Cancer 21 : 274-281,
1978 ）、及びＬＮＣａＰ（Horoszewitz J, Leong S, K
awinski E, ら：LNCap model of human prostatic carc
inoma, Cancer Res 43 : 1809-1818, 1983 ）と、正常
な成人前立腺由来の我々の研究室において誘導した非腫
瘍原性二倍体前立腺繊維芽細胞株（ＮＰＦ−２０９）と
で行った。ＮＰＦ細胞はコントロールとして、つまり比
較のために利用した。これらの細胞をディスポーザブル
プラスチック培養槽の中で、１０％の胎児牛血清（FBS;
HyClone Labs, Inc., Logan, UT由来）の付加されたダ
ルベッコ改良イーグル培地及びハムＦＩ２（DMEM/F12;
Sigma ChemicalCo, St. Louis, MO由来）の１：１の混
合物中で維持した。３−〔４，５−ジメチルチアゾール
−２−イル〕−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロ
ミド（ＭＴＴ），ＤＭＳＯ及びその他の化学試薬もSigm
a から入手した。
細胞系ＰＣ−３（Kaighn ME, Narayan KS, Ohnuki Y.
ら：Establishment and characterization of ahuman p
rostatic carcinoma cell line, Invest Urol 17 : 16-
23, 1979 ），ＤＵ−１４５（Stone KR, Mickey D, Wun
derli H, ら：Isolation of a human prostatic carcin
oma cell line (DU145), Int J Cancer 21 : 274-281,
1978 ）、及びＬＮＣａＰ（Horoszewitz J, Leong S, K
awinski E, ら：LNCap model of human prostatic carc
inoma, Cancer Res 43 : 1809-1818, 1983 ）と、正常
な成人前立腺由来の我々の研究室において誘導した非腫
瘍原性二倍体前立腺繊維芽細胞株（ＮＰＦ−２０９）と
で行った。ＮＰＦ細胞はコントロールとして、つまり比
較のために利用した。これらの細胞をディスポーザブル
プラスチック培養槽の中で、１０％の胎児牛血清（FBS;
HyClone Labs, Inc., Logan, UT由来）の付加されたダ
ルベッコ改良イーグル培地及びハムＦＩ２（DMEM/F12;
Sigma ChemicalCo, St. Louis, MO由来）の１：１の混
合物中で維持した。３−〔４，５−ジメチルチアゾール
−２−イル〕−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロ
ミド（ＭＴＴ），ＤＭＳＯ及びその他の化学試薬もSigm
a から入手した。
【００１８】Ｒｈ−１２３を高純水（Milli Q, Millipo
re(orp., Bedford, MA）の中で２mg／mlで溶解し、そし
て使用前に０．２μｍの濾過により除菌して細胞培養の
ための標準溶液とした。以下の２通りのインビトロアッ
セイをＲｈ−１２３処置の後の細胞生存性を評価するた
めに利用した： ｉ）クローナルアッセイ手順によるコロニー形成（Peeh
l DM, Ham RG : Clonal growth of human keratinocyte
s with small amounts of dialyzed serum（少量の透析
血清によるヒトケラチン細胞のクローン増殖）In Vitro
16 : 526-538,1980 ）；及び ii）従来述べられている技術を利用するＭＴＴアッセイ
により決定される細胞生存性（Alley MC, Scudiero DA,
Monks A, ら：Feasibility of frug screening with p
anels of human tumor cell lines using a microcultu
re tetrazoliumassay（マイクロカルチャーテトラゾリ
ウムアッセイを利用してのヒト腫瘍細胞系パネルの薬剤
スクリーニングの可能）、Cancer Res 40 : 589-601, 1
988)。
re(orp., Bedford, MA）の中で２mg／mlで溶解し、そし
て使用前に０．２μｍの濾過により除菌して細胞培養の
ための標準溶液とした。以下の２通りのインビトロアッ
セイをＲｈ−１２３処置の後の細胞生存性を評価するた
めに利用した： ｉ）クローナルアッセイ手順によるコロニー形成（Peeh
l DM, Ham RG : Clonal growth of human keratinocyte
s with small amounts of dialyzed serum（少量の透析
血清によるヒトケラチン細胞のクローン増殖）In Vitro
16 : 526-538,1980 ）；及び ii）従来述べられている技術を利用するＭＴＴアッセイ
により決定される細胞生存性（Alley MC, Scudiero DA,
Monks A, ら：Feasibility of frug screening with p
anels of human tumor cell lines using a microcultu
re tetrazoliumassay（マイクロカルチャーテトラゾリ
ウムアッセイを利用してのヒト腫瘍細胞系パネルの薬剤
スクリーニングの可能）、Cancer Res 40 : 589-601, 1
988)。
【００１９】処置細胞のクローン原性能 処置を施したヒト前立腺癌細胞のクローン原性能を、６
０mmのディスポーザブル皿の中に２４時間植え付けてお
いた細胞で決定した（１〜２×１０2 細胞／皿）。細胞
をトリプリケートのセットで最終濃度１〜５０μｇ／ml
のＲＨ−１２３に２４，４８、又は７２時間曝露した。
それらを洗い、そしてＲｈ−１２３フリー培養培地で１
０〜１４日間再インキュベートし、次いで固定し、染色
し、そして８個以上の細胞より成るコロニーを数えた。
データーは、平行に行ったコントロール（未処値）培養
物において観察されたコロニー数と対比させて図５〜１
０に示し、そしてそれらは反復実験により確認された結
果を示している。
０mmのディスポーザブル皿の中に２４時間植え付けてお
いた細胞で決定した（１〜２×１０2 細胞／皿）。細胞
をトリプリケートのセットで最終濃度１〜５０μｇ／ml
のＲＨ−１２３に２４，４８、又は７２時間曝露した。
それらを洗い、そしてＲｈ−１２３フリー培養培地で１
０〜１４日間再インキュベートし、次いで固定し、染色
し、そして８個以上の細胞より成るコロニーを数えた。
データーは、平行に行ったコントロール（未処値）培養
物において観察されたコロニー数と対比させて図５〜１
０に示し、そしてそれらは反復実験により確認された結
果を示している。
【００２０】Ｒｈ−１２３に基づくヒト前立腺癌細胞の
細胞障害能 Ｒｈ−１２３処理に基づく細胞障害能は９６穴ディスポ
ーザブルマイクロタイタープレートの中でのヒト前立腺
癌細胞増殖により決定した。これらの細胞をウェル当り
２．５〜４×１０3 細胞で植え付け、そして２〜３日間
正常培養培地の中で増殖させて対数増殖期の細胞を獲得
した。次いでこれらの細胞を、第１列に適量の滅菌Ｒｈ
−１２３ストック溶液（滅菌水中の９５容量％のエチル
アルコール中の２５mg／mlのＲｈ−１２３）を加え、そ
して自動分注器による細胞の次の列の中での系列希釈に
より各実験についての所望の濃度域を得ることで、０〜
８０μｇ／mlの域にわたる様々なＲｈ−１２３濃度（各
濃度当り８ウェルのセット）に曝露した。各プレート
は、コントロール培養を担うＲｈ−１２３に曝露されて
いない一列の細胞を有していた。細胞障害能の決定は１
〜８日間のＲｈ−１２３曝露期間の間、毎日行った。各
試験時に２枚のマイクロタイタープレートを使い、一方
は即時生存評価のために用い、そして他方は曝露をとめ
てからＲｈ−１２３処置細胞が復活そして増殖する能力
を試験するために用いた。このため、処理プレートのウ
ェルから培地を完全に取り除き、そしてそのウェルを無
血清培地で洗い、次いでＤＭＥＭ／ＦＩ２培養培地を含
む新鮮な１０％のＦＢＳ（胎児牛血清）と２〜５日間イ
ンキュベーションし、その後細胞生存性決定した。
細胞障害能 Ｒｈ−１２３処理に基づく細胞障害能は９６穴ディスポ
ーザブルマイクロタイタープレートの中でのヒト前立腺
癌細胞増殖により決定した。これらの細胞をウェル当り
２．５〜４×１０3 細胞で植え付け、そして２〜３日間
正常培養培地の中で増殖させて対数増殖期の細胞を獲得
した。次いでこれらの細胞を、第１列に適量の滅菌Ｒｈ
−１２３ストック溶液（滅菌水中の９５容量％のエチル
アルコール中の２５mg／mlのＲｈ−１２３）を加え、そ
して自動分注器による細胞の次の列の中での系列希釈に
より各実験についての所望の濃度域を得ることで、０〜
８０μｇ／mlの域にわたる様々なＲｈ−１２３濃度（各
濃度当り８ウェルのセット）に曝露した。各プレート
は、コントロール培養を担うＲｈ−１２３に曝露されて
いない一列の細胞を有していた。細胞障害能の決定は１
〜８日間のＲｈ−１２３曝露期間の間、毎日行った。各
試験時に２枚のマイクロタイタープレートを使い、一方
は即時生存評価のために用い、そして他方は曝露をとめ
てからＲｈ−１２３処置細胞が復活そして増殖する能力
を試験するために用いた。このため、処理プレートのウ
ェルから培地を完全に取り除き、そしてそのウェルを無
血清培地で洗い、次いでＤＭＥＭ／ＦＩ２培養培地を含
む新鮮な１０％のＦＢＳ（胎児牛血清）と２〜５日間イ
ンキュベーションし、その後細胞生存性決定した。
【００２１】ヒト前立腺癌細胞の生存性の決定 マイクロタイタープレート中のヒト前立腺癌細胞の生存
性の決定は、細胞の０．４mg／mlのＭＴＴとの３７℃で
４時間のインキュベーション、その後の培地の除去、次
いで細胞結合色素の１５０μｌのＤＭＳＯの中での溶解
により行った。次いでプレートをＥｍａｘプレジション
マイクロタイタープレートリーダー（Molecular Device
s Corporation, Menlo Park, CA ）によりＡ５４０nmで
測定した。ＭＴＴは生存細胞中のミトコンドリアにより
不溶性ホルマザンへと還元される。細胞結合色素はＤＭ
ＳＯにより溶解され、そして５４０nmの波長での吸収に
より光学的に定量される。ＯＤ５４０nm測定値は試験サ
ンプル中に存在している生存細胞の数の尺度となる。Ｒ
ｈ−１２３処理に基づく増殖阻害は各マイクロタイター
プレート上のコントロール（未処理）培養ウェルにより
得られる測定値と比較して決定した。結果を各細胞系に
より２〜３回の反復実験により確認した。
性の決定は、細胞の０．４mg／mlのＭＴＴとの３７℃で
４時間のインキュベーション、その後の培地の除去、次
いで細胞結合色素の１５０μｌのＤＭＳＯの中での溶解
により行った。次いでプレートをＥｍａｘプレジション
マイクロタイタープレートリーダー（Molecular Device
s Corporation, Menlo Park, CA ）によりＡ５４０nmで
測定した。ＭＴＴは生存細胞中のミトコンドリアにより
不溶性ホルマザンへと還元される。細胞結合色素はＤＭ
ＳＯにより溶解され、そして５４０nmの波長での吸収に
より光学的に定量される。ＯＤ５４０nm測定値は試験サ
ンプル中に存在している生存細胞の数の尺度となる。Ｒ
ｈ−１２３処理に基づく増殖阻害は各マイクロタイター
プレート上のコントロール（未処理）培養ウェルにより
得られる測定値と比較して決定した。結果を各細胞系に
より２〜３回の反復実験により確認した。
【００２２】インビトロでのヒト前立腺癌細胞によるＲ
ｈ−１２３の保持 ヒト前立腺癌細胞によるＲｈ−１２３保持は、ＥＰＩＣ
ＳプロフィールIIフローサイトメーター（Coulter Cor
p., Miami, FL）を利用するフローサイトメトリーによ
り決定した。半集密細胞培養物をＲｈ−１２３に１時間
曝露し、洗い、そしてＲｈ−１２３フリー培養培地の中
で２４時間インキュベーションした。Ｒｈ−１２３取込
み及び保持は、１時間のＲｈ−１２３曝露の直後及びＲ
ｈ−１２３曝露をやめてから２４時間後に集めた１０，
０００個の細胞の蛍光強度（４８８nmの励起波長）によ
り決定した。
ｈ−１２３の保持 ヒト前立腺癌細胞によるＲｈ−１２３保持は、ＥＰＩＣ
ＳプロフィールIIフローサイトメーター（Coulter Cor
p., Miami, FL）を利用するフローサイトメトリーによ
り決定した。半集密細胞培養物をＲｈ−１２３に１時間
曝露し、洗い、そしてＲｈ−１２３フリー培養培地の中
で２４時間インキュベーションした。Ｒｈ−１２３取込
み及び保持は、１時間のＲｈ−１２３曝露の直後及びＲ
ｈ−１２３曝露をやめてから２４時間後に集めた１０，
０００個の細胞の蛍光強度（４８８nmの励起波長）によ
り決定した。
【００２３】インビトロでのヒト前立腺癌細胞に対する
Ｒｈ−１２３細胞障害能 図５〜１０は、１〜７日間の０〜８０μｇ／mlのＲｈ−
１２３に対する曝露を経て調べた様々なヒト前立腺癌細
胞による反復実験で得られたデーターを示す。図５〜８
は、広域（０〜８０μｇ／ml）のＲｈ−１２３濃度での
様々な細胞により観察された細胞障害作用を対比させて
いる。図９〜１０はやや狭い域（０〜１６μｇ／ml）の
Ｒｈ−１２３濃度をカバーする異なる実験由来のデータ
ーを示す。
Ｒｈ−１２３細胞障害能 図５〜１０は、１〜７日間の０〜８０μｇ／mlのＲｈ−
１２３に対する曝露を経て調べた様々なヒト前立腺癌細
胞による反復実験で得られたデーターを示す。図５〜８
は、広域（０〜８０μｇ／ml）のＲｈ−１２３濃度での
様々な細胞により観察された細胞障害作用を対比させて
いる。図９〜１０はやや狭い域（０〜１６μｇ／ml）の
Ｒｈ−１２３濃度をカバーする異なる実験由来のデータ
ーを示す。
【００２４】図５はＰＣ−３前立腺癌細胞に対する０〜
８０μｇ／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝露の作用を示
す。このデーターは、１，２，３，５又は７日間にわた
る様々なＲｈ−１２３濃度に対する曝露を経て存在して
いる生存細胞の％として示す（コントロール（未処理）
姉妹ウェル中の生存細胞に対して示す）。各Ｒｈ−１２
３濃度について示す値は８又は１６のデュリプリケート
ウェルの平均である。細胞の生存性は上記の通りにして
決定した。略語Ｒｈ１ｄ，Ｒｈ２ｄ，Ｒｈ３ｄ，Ｒｈ５
ｄ及びＲｈ７ｄはそれぞれ１，２，３，５又は７日間連
続してＲｈ−１２３に対して曝露した細胞を意味する。
Ｒｈ１ｄ／Ｒ３ｄは、１日Ｒｈ−１２３に曝露され、次
いで３日間正常増殖培地の中で回復させられ、その後細
胞生存評価された細胞を意味する。Ｒｈ３ｄ／Ｒ５は、
３日間Ｒｈ−１２３曝露し、そして５日間回復させ、細
胞生存評価した細胞を意味する。Ｒｈ７ｄ／Ｒ３は、７
日間Ｒｈ−１２３曝露し、そして３日間正常増殖培地の
中で回復させ、次いで細胞生存評価した細胞を意味す
る。
８０μｇ／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝露の作用を示
す。このデーターは、１，２，３，５又は７日間にわた
る様々なＲｈ−１２３濃度に対する曝露を経て存在して
いる生存細胞の％として示す（コントロール（未処理）
姉妹ウェル中の生存細胞に対して示す）。各Ｒｈ−１２
３濃度について示す値は８又は１６のデュリプリケート
ウェルの平均である。細胞の生存性は上記の通りにして
決定した。略語Ｒｈ１ｄ，Ｒｈ２ｄ，Ｒｈ３ｄ，Ｒｈ５
ｄ及びＲｈ７ｄはそれぞれ１，２，３，５又は７日間連
続してＲｈ−１２３に対して曝露した細胞を意味する。
Ｒｈ１ｄ／Ｒ３ｄは、１日Ｒｈ−１２３に曝露され、次
いで３日間正常増殖培地の中で回復させられ、その後細
胞生存評価された細胞を意味する。Ｒｈ３ｄ／Ｒ５は、
３日間Ｒｈ−１２３曝露し、そして５日間回復させ、細
胞生存評価した細胞を意味する。Ｒｈ７ｄ／Ｒ３は、７
日間Ｒｈ−１２３曝露し、そして３日間正常増殖培地の
中で回復させ、次いで細胞生存評価した細胞を意味す
る。
【００２５】図６はＬＮＣａｐ前立腺癌細胞に対する０
〜８０μｇ／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝露の効果を
示す。このデーターは図５に記載と同じ実験から得、そ
して同一の略語及びその他の詳細を適用する。
〜８０μｇ／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝露の効果を
示す。このデーターは図５に記載と同じ実験から得、そ
して同一の略語及びその他の詳細を適用する。
【００２６】図７はＤＵ−１４５前立腺癌細胞に対する
０〜８０μｇ／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝露の効果
を示す。このデーターは図５に記載のと同じ実験に由来
する。
０〜８０μｇ／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝露の効果
を示す。このデーターは図５に記載のと同じ実験に由来
する。
【００２７】図８はＮＰＦ非腫瘍原性二倍体前立腺細胞
における０〜８０μｇ／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝
露の効果を示す。Ｒｈ−１２３処理に基づく増殖阻害
は、図５，６及び７に示す腫瘍原性細胞により観察され
たものよりもはるかに低いことに注目すべきである。図
８についてのデーターは図５のデーターについて説明し
たものと同じ実験から得た。
における０〜８０μｇ／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝
露の効果を示す。Ｒｈ−１２３処理に基づく増殖阻害
は、図５，６及び７に示す腫瘍原性細胞により観察され
たものよりもはるかに低いことに注目すべきである。図
８についてのデーターは図５のデーターについて説明し
たものと同じ実験から得た。
【００２８】生存細胞の減少は１．２５〜２μｇ／mlほ
どの低い濃度で２日間以上Ｒｈ−１２３に対して曝露し
た３タイプのヒト前立腺癌細胞（ＰＣ−３，ＬＮＣａＰ
及びＤＵ−１４５）の全てにおいて著しかった。反対
に、ＮＰＦ非腫瘍原性二倍体細胞の生存性は長いＲｈ−
１２３曝露を経た後でさえも比較的高く維持された。細
胞障害作用の程度の３種のヒト前立腺癌細胞系において
若干異なっていた。ＰＣ−３細胞はＲｈ−１２３曝露に
対して最も感受性であるようであった。ＤＵ−１４５細
胞は、ＰＣ−３又はＬＮＣａＰ細胞のいづれよりも強い
ようであった。１０μｇ／mlより高いＲｈ−１２３濃度
においては細胞に対する細胞障害作用の有意義な上昇は
なかった（図５〜８）。Ｒｈ−１２３フリー正常増殖培
地の中でインキュベートしたＲｈ−１２３処理前立腺癌
細胞の回復は弱かった。生存細胞の相対的な低下は同じ
か又は一層急となり、正常増殖培地への復帰にかかわら
ず、生存細胞の持続減少又は増殖阻害が示唆される（図
５〜８を参照のこと）。
どの低い濃度で２日間以上Ｒｈ−１２３に対して曝露し
た３タイプのヒト前立腺癌細胞（ＰＣ−３，ＬＮＣａＰ
及びＤＵ−１４５）の全てにおいて著しかった。反対
に、ＮＰＦ非腫瘍原性二倍体細胞の生存性は長いＲｈ−
１２３曝露を経た後でさえも比較的高く維持された。細
胞障害作用の程度の３種のヒト前立腺癌細胞系において
若干異なっていた。ＰＣ−３細胞はＲｈ−１２３曝露に
対して最も感受性であるようであった。ＤＵ−１４５細
胞は、ＰＣ−３又はＬＮＣａＰ細胞のいづれよりも強い
ようであった。１０μｇ／mlより高いＲｈ−１２３濃度
においては細胞に対する細胞障害作用の有意義な上昇は
なかった（図５〜８）。Ｒｈ−１２３フリー正常増殖培
地の中でインキュベートしたＲｈ−１２３処理前立腺癌
細胞の回復は弱かった。生存細胞の相対的な低下は同じ
か又は一層急となり、正常増殖培地への復帰にかかわら
ず、生存細胞の持続減少又は増殖阻害が示唆される（図
５〜８を参照のこと）。
【００２９】クローン原性アッセイ（図１１〜１４）
は、ＰＣ−３及びＬＮＣａＰ細胞のコロニー増殖が１０
μｇ／mlのＲｈ−１２３に対する曝露を経て大いに抑制
されることを示した。Ｒｈ−１２３に基づく増殖抑制は
ＤＵ−１４５細胞においてはあまり著しくなかった。３
種の癌細胞系全てにおけるコロニー増殖の完全抑制が、
７２時間にわたる１０μｇ／mlのＲｈ−１２３曝露を経
て認められた。７２時間の曝露の後、最大抑制（コント
ロールの２８％）を伴う正常ヒト成人前立腺繊維芽細胞
の弱い投与量−依存性抑制が認められた。総合的な抑制
は５０μｇ／mlへの７２時間の曝露の後でさえも達成さ
れなかった（データーは示さず）。
は、ＰＣ−３及びＬＮＣａＰ細胞のコロニー増殖が１０
μｇ／mlのＲｈ−１２３に対する曝露を経て大いに抑制
されることを示した。Ｒｈ−１２３に基づく増殖抑制は
ＤＵ−１４５細胞においてはあまり著しくなかった。３
種の癌細胞系全てにおけるコロニー増殖の完全抑制が、
７２時間にわたる１０μｇ／mlのＲｈ−１２３曝露を経
て認められた。７２時間の曝露の後、最大抑制（コント
ロールの２８％）を伴う正常ヒト成人前立腺繊維芽細胞
の弱い投与量−依存性抑制が認められた。総合的な抑制
は５０μｇ／mlへの７２時間の曝露の後でさえも達成さ
れなかった（データーは示さず）。
【００３０】上記のデーターはフローサイトメトリーに
より得られるＲｈ−１２３保持とよく相関する（以下の
表を参照のこと）。有意義な量のＲｈ−１２３（７３〜
６４％）が、Ｒｈ−１２３を除いた２４時間後に、３種
類の癌細胞系により保持された。反対に、ＮＰＦ細胞に
より取込まれたＲｈ−１２３の９０％より多くが薬剤を
除去してから２４時間以内に失われていた。即ち、これ
らのデーターは、処理した前立腺癌細胞に対するＲｈ−
１２３の強められた毒性が、それらの薬剤の選択的保持
に基づいていることを示唆する。
より得られるＲｈ−１２３保持とよく相関する（以下の
表を参照のこと）。有意義な量のＲｈ−１２３（７３〜
６４％）が、Ｒｈ−１２３を除いた２４時間後に、３種
類の癌細胞系により保持された。反対に、ＮＰＦ細胞に
より取込まれたＲｈ−１２３の９０％より多くが薬剤を
除去してから２４時間以内に失われていた。即ち、これ
らのデーターは、処理した前立腺癌細胞に対するＲｈ−
１２３の強められた毒性が、それらの薬剤の選択的保持
に基づいていることを示唆する。
【００３１】以下の表は色素フリー培地中での２４時間
のＲｈ−１２３の細胞保持を示す。相対的色素保持は、
Ｒｈ−１２３ラベル化細胞を色素フリー培地の中で２４
時間回復させた後の平均蛍光のシフトから計算した。平
均蛍光値は１０μｇ／mlのＲｈ−１２３による１時間の
ラベル化を１００％として標準化した。
のＲｈ−１２３の細胞保持を示す。相対的色素保持は、
Ｒｈ−１２３ラベル化細胞を色素フリー培地の中で２４
時間回復させた後の平均蛍光のシフトから計算した。平
均蛍光値は１０μｇ／mlのＲｈ−１２３による１時間の
ラベル化を１００％として標準化した。
【００３２】 表 （色素フリー培地中で２４時間後のＲｈ−１２３の保持） ────────────────────────────────── 細胞系 ％Ｒｈ−１２３保持率 ────────────────────────────────── ヒト前立腺癌腫 ＤＵ−１４５ ２３ ＬＮＣａＰ 集団１ ２４ 集団２ ６４ ＰＣ−３ ４０ 正常前立腺繊維芽細胞 ＮＰＦ−２０９ ９ ──────────────────────────────────
【００３３】インビトロでの細胞に対するＲｈ−１２３
の破壊的作用は幾人かの著者により報告されているが
（Lampidis, ら：Selective killing of carcinoma cel
ls invitro by lipophilic-cationic compounds: A cel
lular basis, Biomed Pharmacother 39:220-226, 1985;
Lampidis, ら：Selective toxicity of Rhodamine-123
in carcinoma cells in vitro, Cancer Res 43:716-72
0, 1983; Bernal, ら：Rhodamine-123 selectively red
uces clonal growth of carcinoma cells in vitro, Sc
ience 218:1117-1118, 1982; Bernal, ら：Anticarcino
ma activity invivo of Rhodamine-123, a mitochondri
al-specific dye, Science 222:169-172, 1983）、イン
ビボでの固体腫瘍に対するその作用の報告は少ない（He
rr, ら：Anticarcinoma activity of Rhodamine-123 ag
ainst a murine renal adenocarcinoma, Cancer Res 4
8:2061-2063, 1988）。我々の以前に報告した研究（Arc
adiJA: Rhodamine-123 as effective agent in rat pro
state tumor R3327-H, Urology 28:501-503, 1986; Arc
adi JA: Use of Rhodamine-123 in the treatmentof th
e Pollard III rat prostate adenocarcinoma, Surg On
col 44:103-108, 1990 ）及びＲｈ−１２３により効果
的に処理した移植可能腫瘍によるラットの大がかりな研
究は、Ｒｈ−１２３がラットにおける移植された前立腺
腫瘍を破壊できることを示唆した。
の破壊的作用は幾人かの著者により報告されているが
（Lampidis, ら：Selective killing of carcinoma cel
ls invitro by lipophilic-cationic compounds: A cel
lular basis, Biomed Pharmacother 39:220-226, 1985;
Lampidis, ら：Selective toxicity of Rhodamine-123
in carcinoma cells in vitro, Cancer Res 43:716-72
0, 1983; Bernal, ら：Rhodamine-123 selectively red
uces clonal growth of carcinoma cells in vitro, Sc
ience 218:1117-1118, 1982; Bernal, ら：Anticarcino
ma activity invivo of Rhodamine-123, a mitochondri
al-specific dye, Science 222:169-172, 1983）、イン
ビボでの固体腫瘍に対するその作用の報告は少ない（He
rr, ら：Anticarcinoma activity of Rhodamine-123 ag
ainst a murine renal adenocarcinoma, Cancer Res 4
8:2061-2063, 1988）。我々の以前に報告した研究（Arc
adiJA: Rhodamine-123 as effective agent in rat pro
state tumor R3327-H, Urology 28:501-503, 1986; Arc
adi JA: Use of Rhodamine-123 in the treatmentof th
e Pollard III rat prostate adenocarcinoma, Surg On
col 44:103-108, 1990 ）及びＲｈ−１２３により効果
的に処理した移植可能腫瘍によるラットの大がかりな研
究は、Ｒｈ−１２３がラットにおける移植された前立腺
腫瘍を破壊できることを示唆した。
【００３４】上記の我々の研究及び我々の論文（Arcad
i, ら：Studies of Rhodamine-123:Effect on Rat Pros
tate Cancer and Human Prostate Cancer Cells in Vit
ro,Journal of Surgical Oncology, 59:86-93 (1995))
においても報告した研究は、Ｒｈ−１２３を短時間にわ
たって与える投与による自発性ラット前立腺癌の細胞破
壊を実証し、そして更に３種類のヒト前立腺癌細胞系の
優先的な感受性も実証する。
i, ら：Studies of Rhodamine-123:Effect on Rat Pros
tate Cancer and Human Prostate Cancer Cells in Vit
ro,Journal of Surgical Oncology, 59:86-93 (1995))
においても報告した研究は、Ｒｈ−１２３を短時間にわ
たって与える投与による自発性ラット前立腺癌の細胞破
壊を実証し、そして更に３種類のヒト前立腺癌細胞系の
優先的な感受性も実証する。
【００３５】以下のプロトコールは、患者の前立腺癌を
処置するための手順を述べる。
処置するための手順を述べる。
【００３６】プロトコール 認定基準：１）代謝性ホルモン耐性前立腺癌腫 ２）上昇するＰＳＡ 排除基準：１）既知の心筋症 ２）劣った機能評点 ３）限られた生存期待（＜９０日） 試験パラメーター：一週間の投与期間中ＣＰＫ，ＥＫＧ及びクレアチンを３回： 週毎：履歴、身体、機能評点、ＣＢＣ、生化学プロフィール 、ＰＳＡ，ＥＫＧ ストック溶液：水中の９５％のエタノール（容量）２５mg／ml 最終調製品：最終濃度５％のエタノールに表示の投与量（以下参照）を５ＤＷ（ 滅菌水中の５重量％のデキストロース）に添加 投与法：４時間のｉ．ｖ．点滴又は約１００ml／hrのいづれかゆっくりした方
【００３７】
【表１】
【００３８】承認及び排除のための表示の基準にかけた
後、患者を上記のプロトコールのパートＡ、次いでパー
トＢに従う４−週サイクルで処置した。第１週目の処置
投与中、慣用のＣＰＫ，ＥＫＧ及びクレアチン測定を患
者について３回行い、毒性の徴候を調べた。週ベース
で、患者を慣用の身体検査、並びに完全血液総数、生化
学プロフィール、ＥＫＧ及びＰＳＡ測定にかけた。例え
ば、代謝性ホルモン耐性前立腺癌腫を有する患者は約１
００ng／mlのＰＳＡレベルを有しうる。正常なＰＳＡ測
定値は通常約４ng／ml未満と考えられている。
後、患者を上記のプロトコールのパートＡ、次いでパー
トＢに従う４−週サイクルで処置した。第１週目の処置
投与中、慣用のＣＰＫ，ＥＫＧ及びクレアチン測定を患
者について３回行い、毒性の徴候を調べた。週ベース
で、患者を慣用の身体検査、並びに完全血液総数、生化
学プロフィール、ＥＫＧ及びＰＳＡ測定にかけた。例え
ば、代謝性ホルモン耐性前立腺癌腫を有する患者は約１
００ng／mlのＰＳＡレベルを有しうる。正常なＰＳＡ測
定値は通常約４ng／ml未満と考えられている。
【００３９】パートＡの第１週目のプロトコール中、患
者を検診し、そして上記の様々な試験にかけるが、Ｒｈ
−１２３は投与しない。第１週目の終了時において、即
ち最初４週サイクル（Ａ／１）の開始時において、体重
kg当り１mgのＲｈ−１２３に相当する投与量を患者に与
える適量のストック溶液を加えておいた２５０mlの５Ｄ
Ｗ（滅菌水中の５重量％のデキストロース）の４時間の
ｉ．ｖ．点滴を与えた。例えば、もし患者が体重７０kg
であるなら、２５０mlの５ＤＷに２．８mlのストック溶
液（９５％のエチルアルコール及び５％の水中の２５mg
／mlのＲｈ−１２３）を加え、７０mgのＲｈ−１２３及
び約１容量％のエチルアルコールを含む２５２．８mlの
処理溶液を調製する。追加のエチルアルコールは、Ｒｈ
−１２３が溶液のままとなっていることを確実なものと
するために全部で約５容量％となるまで加えてよい。
者を検診し、そして上記の様々な試験にかけるが、Ｒｈ
−１２３は投与しない。第１週目の終了時において、即
ち最初４週サイクル（Ａ／１）の開始時において、体重
kg当り１mgのＲｈ−１２３に相当する投与量を患者に与
える適量のストック溶液を加えておいた２５０mlの５Ｄ
Ｗ（滅菌水中の５重量％のデキストロース）の４時間の
ｉ．ｖ．点滴を与えた。例えば、もし患者が体重７０kg
であるなら、２５０mlの５ＤＷに２．８mlのストック溶
液（９５％のエチルアルコール及び５％の水中の２５mg
／mlのＲｈ−１２３）を加え、７０mgのＲｈ−１２３及
び約１容量％のエチルアルコールを含む２５２．８mlの
処理溶液を調製する。追加のエチルアルコールは、Ｒｈ
−１２３が溶液のままとなっていることを確実なものと
するために全部で約５容量％となるまで加えてよい。
【００４０】第５週目の開始時において、即ち第２の４
週サイクル（Ｂ／５）の開始時において、同じ手順を踏
んで体重kg当り２mgのＲｈ−１２３の投与量を患者に与
えた。投与量は９週目の開始時において２５０mlの５Ｄ
Ｗに１４mlのストック溶液を加え、３５mgのＲｈ−１２
３及び約５容量％のエチルアルコールを含む２６５mlの
処理溶液を調製することにより、５mg／kgまで増やし
た。１３週目の開始時での１０mg／kgの投与量及びその
後の各投与量に関し、処理溶液を十分なる５ＤＷで希釈
し、エチルアルコールの濃度を約５容量％にするが、し
かしながら患者によっては、この溶液は最大１０容量％
のアルコール含有量で利用してよい。この手順は、患者
が毒性の徴候を示すまで、又は投与量が３０mg／kgのレ
ベルに至るまで、上記のプロトコールのパートＡに表示
の通りに続ける（約５容量％のエチルアルコールを含む
全部で１６７５．８mlの処理溶液に関して、１５９１．
８mlの５ＤＷ中の８４mlのストック溶液）。
週サイクル（Ｂ／５）の開始時において、同じ手順を踏
んで体重kg当り２mgのＲｈ−１２３の投与量を患者に与
えた。投与量は９週目の開始時において２５０mlの５Ｄ
Ｗに１４mlのストック溶液を加え、３５mgのＲｈ−１２
３及び約５容量％のエチルアルコールを含む２６５mlの
処理溶液を調製することにより、５mg／kgまで増やし
た。１３週目の開始時での１０mg／kgの投与量及びその
後の各投与量に関し、処理溶液を十分なる５ＤＷで希釈
し、エチルアルコールの濃度を約５容量％にするが、し
かしながら患者によっては、この溶液は最大１０容量％
のアルコール含有量で利用してよい。この手順は、患者
が毒性の徴候を示すまで、又は投与量が３０mg／kgのレ
ベルに至るまで、上記のプロトコールのパートＡに表示
の通りに続ける（約５容量％のエチルアルコールを含む
全部で１６７５．８mlの処理溶液に関して、１５９１．
８mlの５ＤＷ中の８４mlのストック溶液）。
【００４１】むろん、パートＡ処置はより低いレベルの
Ｒｈ−１２３、即ち、所望するなら０．２〜０．５mg／
kg体重で始めてもよい。従って、この処理溶液は約０．
２〜約５容量％のエチルアルコールを含むであろう。処
理溶液中のアルコール濃度が患者の快適又は寛容レベル
を超えるなら、この溶液は５ＤＷで許容のレベルにまで
希釈し、そして４時間より長い時間にわたって投与して
よい。いづれにせよ、約４００mlを超える溶液を有する
処理溶液を投与するためには、点滴は約１００ml／hr以
下の速度において通常行う。
Ｒｈ−１２３、即ち、所望するなら０．２〜０．５mg／
kg体重で始めてもよい。従って、この処理溶液は約０．
２〜約５容量％のエチルアルコールを含むであろう。処
理溶液中のアルコール濃度が患者の快適又は寛容レベル
を超えるなら、この溶液は５ＤＷで許容のレベルにまで
希釈し、そして４時間より長い時間にわたって投与して
よい。いづれにせよ、約４００mlを超える溶液を有する
処理溶液を投与するためには、点滴は約１００ml／hr以
下の速度において通常行う。
【００４２】例えば、もし患者が９週目及び１２週目の
間に毒性の徴候を示したら（即ち、第３の４週サイクル
（Ａ／９）中、パートＡのもとでの投与量が５mg／kgで
あり、そして毒性が生じたら、）、毒性の徴候が消失す
るまで処置をやめる。その場合、患者をパートＢのプロ
トコールに従って処置する。即ち、体重kg当り２mgのＲ
ｈ−１２３の単独投与（即ち、パートＡのプロトコール
のもとで患者に与えた最大の無毒性投与量）を、各サイ
クルについての表示の頻度で１日置きに、最終処置（こ
れは２１週目から始まる）まで、その患者が事前に重度
な毒性徴候を示さないか又は患者のＰＳＡレベルが約４
を下まわらない限り、施す。例えば、第１サイクル（Ｂ
／１）の第１週目の開始時に、患者に表示の投与量を第
１日目に、最初の４週サイクルに関する全部で一回の投
与で与える。次いで、第５週目の開始時（第２の４週サ
イクル、Ｂ／５）において、患者に１日目及び３日目に
第２の４週サイクルに関する全部で２回の投与で与え
る。この手順を必要に応じて２１週目の開始時（第６サ
イクル、Ｂ／２１）まで続け、このときには患者は１
日、３日、５日、７日、９日及び１１日目において第６
の４週サイクルに関する全部で６回の投与を受ける。そ
の後、患者を上記の通りの試験でモニターし、そしてこ
の処置を必要に応じて反復し、その者のＰＳＡレベルを
約４以下に保たれるようになるか、又は毒性時点のいづ
れかが最初にくるまで続ける。
間に毒性の徴候を示したら（即ち、第３の４週サイクル
（Ａ／９）中、パートＡのもとでの投与量が５mg／kgで
あり、そして毒性が生じたら、）、毒性の徴候が消失す
るまで処置をやめる。その場合、患者をパートＢのプロ
トコールに従って処置する。即ち、体重kg当り２mgのＲ
ｈ−１２３の単独投与（即ち、パートＡのプロトコール
のもとで患者に与えた最大の無毒性投与量）を、各サイ
クルについての表示の頻度で１日置きに、最終処置（こ
れは２１週目から始まる）まで、その患者が事前に重度
な毒性徴候を示さないか又は患者のＰＳＡレベルが約４
を下まわらない限り、施す。例えば、第１サイクル（Ｂ
／１）の第１週目の開始時に、患者に表示の投与量を第
１日目に、最初の４週サイクルに関する全部で一回の投
与で与える。次いで、第５週目の開始時（第２の４週サ
イクル、Ｂ／５）において、患者に１日目及び３日目に
第２の４週サイクルに関する全部で２回の投与で与え
る。この手順を必要に応じて２１週目の開始時（第６サ
イクル、Ｂ／２１）まで続け、このときには患者は１
日、３日、５日、７日、９日及び１１日目において第６
の４週サイクルに関する全部で６回の投与を受ける。そ
の後、患者を上記の通りの試験でモニターし、そしてこ
の処置を必要に応じて反復し、その者のＰＳＡレベルを
約４以下に保たれるようになるか、又は毒性時点のいづ
れかが最初にくるまで続ける。
【００４３】Ｒｈ−１２３はその他のｉ．ｖ．投与の手
順により患者に投与してよい。例えば、前立腺癌を有す
る患者へのＲｈ−１２３の投与の慣用の方法は、液体溶
液形態又はピル、例えば錠剤もしくはカプセルのいづれ
かでの経口投与により、前立腺癌細胞を患者の血液のＰ
ＳＡ測定数が処置を始める前に認められていたレベルよ
りも実質的に低いレベルに至るまで下がる程度にまでイ
ンビボ破壊させるようにすることにある。もし患者がＲ
ｈ−１２３の経口投与由来の毒性作用に感受性であるな
ら、医薬品は腸内錠剤又はカプセルの中に含ませる。そ
れにおいてはＲｈ−１２３の粒子に長期間にわたって
（即ち、体重kg当り２〜１５mgのＲｈ−１２３を約２〜
約２４時間の間隔で）小腸の中で放出されるようにコー
ティングが施されている。必要な時間放出を供するため
のカプセル又は錠剤への医薬品の製剤化は当業者に公知
の日常の手順により行われる。
順により患者に投与してよい。例えば、前立腺癌を有す
る患者へのＲｈ−１２３の投与の慣用の方法は、液体溶
液形態又はピル、例えば錠剤もしくはカプセルのいづれ
かでの経口投与により、前立腺癌細胞を患者の血液のＰ
ＳＡ測定数が処置を始める前に認められていたレベルよ
りも実質的に低いレベルに至るまで下がる程度にまでイ
ンビボ破壊させるようにすることにある。もし患者がＲ
ｈ−１２３の経口投与由来の毒性作用に感受性であるな
ら、医薬品は腸内錠剤又はカプセルの中に含ませる。そ
れにおいてはＲｈ−１２３の粒子に長期間にわたって
（即ち、体重kg当り２〜１５mgのＲｈ−１２３を約２〜
約２４時間の間隔で）小腸の中で放出されるようにコー
ティングが施されている。必要な時間放出を供するため
のカプセル又は錠剤への医薬品の製剤化は当業者に公知
の日常の手順により行われる。
【００４４】理想的には、Ｒｈ−１２３に対する患者の
寛容性が樹立された後に、その患者に前立腺癌細胞の増
殖を阻止し、且つその患者のＰＳＡレベルが安全な値で
保たれるよう、即ち、４又は５ng／ml未満となるように
適当なレベル及び間隔でＲｈ−１２３の予防投与を与え
てよい。
寛容性が樹立された後に、その患者に前立腺癌細胞の増
殖を阻止し、且つその患者のＰＳＡレベルが安全な値で
保たれるよう、即ち、４又は５ng／ml未満となるように
適当なレベル及び間隔でＲｈ−１２３の予防投与を与え
てよい。
【図１】未処理の自発性ラット前立腺複合体腺癌（ＡＲ
ＰＣＡ）を示す、図面に代わる顕微鏡写真。
ＰＣＡ）を示す、図面に代わる顕微鏡写真。
【図２】Ｒｈ−１２３により、１５mg／kg体重の率で１
日置き、６回の投与で処理したＡＲＰＣＡの、図面に代
わる顕微鏡写真。
日置き、６回の投与で処理したＡＲＰＣＡの、図面に代
わる顕微鏡写真。
【図３】図２に示す通りに処理したＡＲＰＣＡの、図面
に代わる顕微鏡写真。
に代わる顕微鏡写真。
【図４】図２に示す通りに処理したＡＲＰＣＡの、図面
に代わる顕微鏡写真。
に代わる顕微鏡写真。
【図５】ＰＣ−３前立腺癌細胞における０〜８０μｇ／
mlの濃度域のＲｈ−１２３曝露の効果を示すグラフ。
mlの濃度域のＲｈ−１２３曝露の効果を示すグラフ。
【図６】ＬＮＣａＰ前立腺癌細胞における０〜８０μｇ
／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝露の効果を示す。
／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝露の効果を示す。
【図７】ＤＵ−１４５前立腺癌細胞における０〜８０μ
ｇ／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝露の効果を示す。
ｇ／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝露の効果を示す。
【図８】ＮＰＦ非腫瘍原性二倍体前立腺癌細胞における
０〜８０μｇ／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝露の効果
を示す。
０〜８０μｇ／mlの濃度域でのＲｈ−１２３曝露の効果
を示す。
【図９】０〜１６μｇ／mlの濃度で１〜７日間のＲｈ−
１２３曝露に基づくＰＣ−３前立腺癌細胞における増殖
阻害を示すグラフ。
１２３曝露に基づくＰＣ−３前立腺癌細胞における増殖
阻害を示すグラフ。
【図１０】０〜１６μｇ／mlの濃度で１〜７日間のＲｈ
−１２３曝露に基づくＮＰＦ非腫瘍原性前立腺繊維芽細
胞における増殖阻害を示す。
−１２３曝露に基づくＮＰＦ非腫瘍原性前立腺繊維芽細
胞における増殖阻害を示す。
【図１１】ＮＰＦ非腫瘍原性前立腺細胞におけるコロニ
ー増殖に及ぼすＲｈ−１２３の効果を示す三次元棒グラ
フ。
ー増殖に及ぼすＲｈ−１２３の効果を示す三次元棒グラ
フ。
【図１２】ＰＣ−３前立腺癌細胞におけるコロニー増殖
に及ぼすＲｈ−１２３の効果を示す図１１に類似の棒グ
ラフ。
に及ぼすＲｈ−１２３の効果を示す図１１に類似の棒グ
ラフ。
【図１３】ＤＵ−１４５前立腺癌細胞におけるコロニー
増殖に及ぼすＲｈ−１２３の効果を示す図１１及び１２
に類似の棒グラフ。
増殖に及ぼすＲｈ−１２３の効果を示す図１１及び１２
に類似の棒グラフ。
【図１４】ＬＮＣａＰ前立腺癌細胞におけるコロニー増
殖に及ぼすＲｈ−１２３の効果を示す図１１〜１３に類
似の棒グラフ。
殖に及ぼすＲｈ−１２３の効果を示す図１１〜１３に類
似の棒グラフ。
【手続補正書】
【提出日】平成８年８月３０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１】
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２
【補正方法】変更
【補正内容】
【図２】
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３
【補正方法】変更
【補正内容】
【図３】
【手続補正４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４
【補正方法】変更
【補正内容】
【図４】
Claims (19)
- 【請求項１】 前立腺癌細胞のインビボ破壊を及ぼすの
に十分な量のローダミン−１２３のエチルアルコールと
水との溶液の静脈内投与を含んで成る、前立腺癌を処置
するための方法。 - 【請求項２】 前立腺癌を有する患者を処置するための
方法であって前記患者の血液中のＰＳＡレベルを測定
し、その患者と前立腺癌細胞のインビボ破壊を及ぼすの
に十分な量のローダミン−１２３を投与し、そしてその
後患者の前立腺癌細胞の破壊を確認するために患者のＰ
ＳＡレベルを測定することを含んで成る方法。 - 【請求項３】 前記処置の前後に患者のＰＳＡレベルを
測定し、次いで患者の血液中のＰＳＡレベルを実質的に
下げるのに十分なローダミン−１２３を投与する工程を
含む、請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 前記溶液を約２５０mlの容量で注射する
ことを含む、請求項１又は３記載の方法。 - 【請求項５】 ローダミン−１２３の投与を約４時間で
完了させる、請求項１〜４のいづれか１項記載の方法。 - 【請求項６】 患者を１日置きに体重kg当り約３０mg以
下のローダミン−１２３で処置する、請求項１〜５のい
づれか１項記載の方法。 - 【請求項７】 患者を体重kg当り約０．２〜約１５mgの
ローダミン−１２３で処置する、請求項１〜５のいづれ
か１項記載の方法。 - 【請求項８】 患者にローダミン−１２３の溶液を少な
くとも２４時間の間隔で投与し、そしてローダミン−１
２３に基づく毒性の徴候を患者が示すまでその量を増や
し、そしてその後その毒性を及ぼす量及び速度より少な
い量及び速度で患者にローダミン−１２３を投与する、
請求項１〜７のいづれか１項記載の方法。 - 【請求項９】 前立腺癌を有する患者を処置するための
方法であって、エチルアルコールと、水に溶解したロー
ダミン−１２３とを含んで成る溶液。 - 【請求項１０】 代謝同化され易い溶解糖を含む、請求
項９記載の溶液。 - 【請求項１１】 前記糖がデキストロース、グルコース
及びフルクトースより成る群から選ばれる、請求項１０
記載の溶液。 - 【請求項１２】 前記糖が約５重量％に相当する量で存
在している、請求項１０又は１１記載の溶液。 - 【請求項１３】 前記エチルアルコールが約０．２〜約
５容量％の量で存在している、請求項９〜１２のいづれ
か１項記載の溶液。 - 【請求項１４】 前立腺癌を処置するための投与溶液を
調製するためのストック溶液であって、エチルアルコー
ルに溶解したローダミン−１２３を含んで成るストック
溶液。 - 【請求項１５】 前記溶液が約９５容量％のエチルアル
コール及び約５容量％の滅菌水を含む、請求項１４記載
のストック溶液。 - 【請求項１６】 前記ローダミン−１２３が約４〜約２
５mg／mlの溶液の量で存在している、請求項１４又は１
５記載の溶液。 - 【請求項１７】 約２時間より長い時間にわたって、且
つ患者の前立腺癌細胞のインビボ破壊を及ぼすのに十分
な量において患者により吸収されるローダミン−１２３
を放出するピル中のローダミン−１２３の経口投与を含
んで成る、前立腺癌を有する患者の処置のための方法。 - 【請求項１８】 前記ピルが患者の体重kg当り約０．２
〜約３０mgのローダミン−１２３を放出する、請求項１
７記載の方法。 - 【請求項１９】 前記ローダミン−１２３が約２４時間
以内で放出される、請求項１７又は１８記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US51600495A | 1995-08-16 | 1995-08-16 | |
| US08/516004 | 1995-08-16 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09110724A true JPH09110724A (ja) | 1997-04-28 |
Family
ID=24053711
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8233697A Pending JPH09110724A (ja) | 1995-08-16 | 1996-08-16 | 前立腺癌処置のための組成物 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7008961B1 (ja) |
| EP (1) | EP0761216B1 (ja) |
| JP (1) | JPH09110724A (ja) |
| AT (1) | ATE253908T1 (ja) |
| AU (1) | AU6207196A (ja) |
| BR (1) | BR9603454A (ja) |
| CA (1) | CA2183015A1 (ja) |
| DE (1) | DE69630639T2 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| WO2003020977A2 (en) * | 2001-08-31 | 2003-03-13 | The University Court Of The University Of Glasgow | Nucleotide repeats assay |
| US20070292478A1 (en) * | 2004-08-30 | 2007-12-20 | Popowski Youri | Medical Implant Provided with Inhibitors of Atp Synthesis |
| WO2008115088A1 (fr) * | 2007-03-16 | 2008-09-25 | Evgeny Pavlovich Germanov | Utilisation de rhodamine 6g en tant que médicament destiné au traitement de néoplasies malignes et d'amyloïdoses |
| US20120122966A1 (en) * | 2009-04-14 | 2012-05-17 | Mikhail Vladimirovich Kutushov | Use of organic dyes as analgesic agents |
| US11474098B2 (en) | 2017-12-22 | 2022-10-18 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Drug target for preventing pathologic calcium overload in cardiomyocytes and methods of screening for same |
| WO2023003497A1 (ru) * | 2021-07-23 | 2023-01-26 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект" | Соединения с лизосомотропной и противовирусной активностью |
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|---|---|---|---|---|
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| US5189029A (en) * | 1990-04-23 | 1993-02-23 | Bo-Dekk Ventures, Ltd. | Indacene compounds and methods for using the same |
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-
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