CN110934864A - 4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用 - Google Patents

4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了4‑甲基‑6,7‑二甲氧基香豆素在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用。本发明通过药理实验发现了4‑甲基‑6,7‑二甲氧基香豆素具有优良的防治糖尿病肾病的新医药用途，为糖尿病肾病患者提供了新的防治候选药物。通过采用适当的载体，可将4‑甲基‑6,7‑二甲氧基香豆素作为活性组分的药物加工成口服剂或注射剂型等，制备方法简单、药物质量稳定且使用方便，便于工业应用。

Description

4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素在制备防治糖尿病肾病的药物 中的应用
技术领域
本发明涉及防治糖尿病肾病领域，特别是涉及4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用。
背景技术
糖尿病及糖尿病并发症(Diabetes chronic complications，DCC)已成为一种严重危害人类健康的疾病。随着人们生活习惯的改变，糖尿病及其并发症的患病率呈逐年上升的趋势，因此，对糖尿病及其并发症的防治，已成为人类研究的一项重要课题。
糖尿病是一种常见和多发性疾病，其对人体健康的危害主要表现在所导致的多种慢性并发症上，包括糖尿病肾病、糖尿病眼病、糖尿病心脏病、糖尿病神经病变及其它多种微血管病变等。据美国糖尿病协会(ADA)统计数据显示，3年以上的糖尿病患者，出现并发症的几率在46％以上；5年以上的糖尿病患者出现并发症的几率在61％以上；10年以上的糖尿病患者，出现并发症的几率高达98％。其中，糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy，DN)是临床常见和多发的糖尿病并发症，同时也是糖尿病患者主要的致残致死原因。随着糖尿病患者的增多，糖尿病并发症的致残、致死率也逐年升高。
对糖尿病及其并发症的治疗也给社会造成了重大的经济负担。据统计，2004年我国用于治疗糖尿病的直接医疗支出约为574.69亿元人民币，占当年卫生总支出的7.57％。在我国，伴有血管并发症的糖尿病患者的年度医疗费比没有并发症的患者高10倍多。近年来，虽然糖尿病并发症的诊断技术和治疗方法都有很大的提升，但患者的生存率去没有实质性的进步。因此，对糖尿病及其并发症的合理预防和治疗，已成为当今全球关注的焦点问题。
目前临床上主要采取对症治疗和联合用药，如降糖、降压、降脂、AR/AGEs抑制剂及肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)抑制剂等药物，虽然在一定程度上缓解糖尿病并发症血压高及蛋白尿等临床问题，但尚不能有效阻止病情进展和恶化，且容易出现高血钾、高肌酐血症等副作用，限制了其临床长期使用。所以，如何有效防治糖尿病并发症的发生，延缓和控制其发展，是当前医学界亟需解决的问题。
发明内容
基于上述问题，有必要提供一种新型防治糖尿病肾病的药物。
本发明提供了4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用。所述糖尿病肾病包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期糖尿病肾病。
在一些实施例中，所述药物的组成还包括药学上可接受的载体，所述4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素作为活性组分在所述药物中的重量百分比为0.1～99.5％。
在一些实施例中，所述载体为稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、助溶剂、防腐剂、香味剂或甜味剂中的至少一种。
在一些实施例中，所述赋形剂为水或注射用油；所述填充剂为淀粉、蔗糖、糊精、乳糖中的一种或多种；所述粘合剂为纤维素衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种；所述湿润剂为甘油；所述崩解剂为琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠；所述吸收促进剂为季铵化合物；所述表面活性剂为十六烷醇；所述吸附载体为高岭土或皂粘土；所述润滑剂为滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁或聚乙二醇；所述助溶剂为苯甲酸苄酯；所述防腐剂为苯甲醇。
在一些实施例中，上述药物的剂型为片剂、颗粒剂、粉剂、丸剂、胶囊或液体制剂。
本发明还提供了上述防治糖尿病肾病的药物的制备方法，包括如下步骤：
取4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素，加入药学上可接受的载体，混匀并制成常规剂型，即可。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1.本发明通过药理实验发现了4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素具有优良的防治糖尿病肾病的新医药用途，为糖尿病肾病患者提供了新的防治候选药物。
2.可通过采用适当的载体，将4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素作为活性组分的药物加工成口服剂或注射剂型等，使药物质量稳定，且使用方便。
3.制备以4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素作为活性组分的药物的方法十分简便，便于工业应用。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的防治糖尿病并发症的药物组合物及其制备方法作进一步详细的说明。
本发明所述的4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素可通过化学合成方法制备而得。
4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素，分子量为220，分子式为C12H12O4的结构式如下：
Figure BDA0002326150300000031
实施例1：
一种防治糖尿病肾病的药物组合物，包括如下原料：
Figure BDA0002326150300000032
上述防治糖尿病肾病的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
将4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素过80目筛，与乳糖和淀粉混合，加入适量的水并将粉末制粒，干燥后，将此颗粒过筛并与适量水和硬脂酸镁混合，压片即得。
实施例2：
一种防治糖尿病肾病的药物组合物，包括如下原料：
4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素 1mg
微晶纤维素 500mg
淀粉 500mg，
上述防治糖尿病肾病的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
将4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素与各载体混合均匀后，加入适量水制软材，制粒、干燥、整粒、分装即得。
实施例3：
一种防治糖尿病肾病的药物组合物，包括如下原料：
Figure BDA0002326150300000033
Figure BDA0002326150300000041
上述防治糖尿病肾病的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
将4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素过80目筛，与乳糖、淀粉、糊精混合，加入预先配好的HPMC溶液制成软材，制粒，干燥，把湿润后的混合物过筛并干燥，再过筛整粒，加入硬脂酸镁，然后将混合物压片，每片重200mg，活性成分含量为20mg。该片剂用于高尿蛋白症、糖尿病肾病的防治，具有良好的效果。
实施例4：
一种防治糖尿病肾病的药物组合物，包括如下原料：
Figure BDA0002326150300000042
上述防治糖尿病肾病的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
将4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素过80目筛，与糊精、乳糖和淀粉按等量倍增法混合均匀，加入预先配好的HPMC溶液制成软材，制粒，干燥，整粒，装胶囊即得。
实施例5：
一种防治糖尿病肾病的药物组合物，包括如下原料：
4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素 50mg
微晶纤维素 500mg
淀粉 450mg
上述防治糖尿病肾病的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
将4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素与各载体混合均匀后，加入适量水制软材，制粒、干燥、整粒、分装即得。
实施例6：
一种防治糖尿病肾病的药物组合物，包括如下原料：
Figure BDA0002326150300000051
上述防治糖尿病肾病的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
将4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素过80目筛，与糊精和淀粉按等量倍增法混合均匀，加入预先配好的HPMC溶液制成软材，制粒，干燥，整粒，装胶囊即得。
实施例7：
一种防治糖尿病肾病的药物组合物，包括如下原料：
4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素 200mg
HPMC 2mg。
上述防治糖尿病肾病的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素过80目筛，加入预先配好的HPMC溶液(HPMC加入适量水配制成质量浓度3％的HPMC)制成软材，制粒，压片即得。
实施例8：
一种防治糖尿病肾病的药物组合物，包括如下原料：
Figure BDA0002326150300000052
上述防治糖尿病肾病的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
将4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素过80目筛，与糊精、乳糖和淀粉按等量倍增法混合均匀，加入预先配好的HPMC溶液制成软材，制粒，干燥，整粒，装胶囊即得。
实施例9：
一种防治糖尿病肾病的药物组合物，包括如下原料：
Figure BDA0002326150300000061
上述防治糖尿病肾病的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
将4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素溶解于苯甲酸苄酯中，加入苯甲醇，再加入注射用油定量，过滤，灭菌，灯检，即得注射剂。该注射剂用于糖尿病肾病及其并发症的防治，具有良好的效果。
实施例10：
一种防治糖尿病肾病的药物组合物，包括如下原料：
Figure BDA0002326150300000062
上述防治糖尿病肾病的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
将4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素过80目筛，与糊精、乳糖和淀粉按等量倍增法混合均匀，加入预先配好的HPMC溶液制成软材，制粒，干燥，整粒，装胶囊即得。
实施例11：
对4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素用于药理实验，以证实其对糖尿病肾病的防治作用。
(一)4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对高糖及AGEs诱发的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响
肾小球系膜细胞是肾小球中最活跃的反应性细胞，其病理变化在糖尿病肾病的发生和发展中居于中心地位，是糖尿病肾病的靶细胞。因此采用体外高糖和AGEs培养大鼠肾小球系膜细胞，观察4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响。
1材料与试剂
大鼠肾小球系膜细胞株HBZY21(武汉细胞生物研究所提供)；DMEM培养基(GIBCO)；新生牛血清(杭州四季青血清厂)；Thiazolyl噻唑蓝(Amresco分装)；二甲亚砜(AR级，上海久仡化学试剂有限公司)。CO2培养箱(NAPC05410，PERCISION SCIENTIFIC)；XSZ-D2倒置显微镜(重庆光学仪器厂)；超净工作台(苏州百神科技网络系统有限公司，苏州市洁净技术研究所)；Microplate Spectrophometer(SPECTRA max190，美国AD公司)；医用离心机(LDZ5-2，北京医用离心机厂)。
2实验方法
2.1模型的建立
取对数生长期大鼠肾小球系膜细胞制成单细胞悬液，以100μL/孔接种于96孔板，细胞数5×104/孔，37℃，5％CO2培养箱培养24h后，换用100μL无血清的DMEM，再孵育24h使细胞生长同步进入休止期(同步化)。弃去细胞上清液，分别加入100μL含不同浓度的葡萄糖和AGEs的含血清DMEM培养基，每组设置6个重复，于培养箱中分别按时间梯度培养。MTT法观察不同浓度葡萄糖或AGEs对鼠肾小球系膜细胞增殖的影响。结果表明，0.25mg/mL AGEs或20mM葡萄糖浓度，培养24h时肾小球系膜细胞增殖效果最好，作为本实验造模条件。
2.2高糖诱发的大鼠肾小球系膜细胞增殖实验
取96孔板培养的同步化过的细胞(细胞培养方法同2.1)，每孔均加入葡萄糖终浓度为25mM的高糖DMEM培养基0.1mL，再向孔内分别添加0.1mL梯度稀释的4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素(终浓度为5μg/mL:10μg/mL)，每个稀释度6个复孔。以只加普通DEME培养基(葡萄糖终浓度5.5nM)为正常对照组，以加葡萄糖终浓度为25mM的高糖DMEM培养基为高糖组。于37℃5％CO2培养箱培养24h后，MTT法测定细胞增殖情况。
2.3AGEs诱发的大鼠肾小球系膜细胞增殖实验
每孔均加入终浓度为0.25mg/mL AGEs的DMEM培养基0.1mL，再向孔内分别添加0.1mL梯度稀释的4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素(终浓度为10nM，100nM)，每个稀释度6个复孔。以只加DEME培养基为正常对照组，以加DEME培养基和终浓度为0.25mg/mL AGEs为AGEs组。于37℃5％CO2培养箱培养24h后，MTT法测定细胞增殖情况。
3实验结果
3.1 4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对高糖诱发的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响
从表1可以看出，25mM葡萄糖能显著促进大鼠肾小球系膜细胞增殖，4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素均能显著抑制高糖作用下的大鼠系膜细胞的增殖，，这表明4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素可以在糖尿病肾病早期治疗中发挥一定作用。
表1 4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对高糖诱发的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响(
Figure BDA0002326150300000081
n＝6)
Figure BDA0002326150300000082
与高糖组比较：*P<0.05。
3.2 4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对AGEs诱发的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响
从表2可以看出，0.25mg/mL AGEs能显著促进大鼠肾小球系膜细胞增殖，4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素能显著抑制AGEs诱发的大鼠系膜细胞的增殖，，这表明4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素可以在糖尿病肾早期治疗中发挥一定作用。
表2 4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对AGEs诱发的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响(
Figure BDA0002326150300000083
n＝6)
Figure BDA0002326150300000084
与AGEs比较：*P<0.05。
(二)4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对链脲佐菌素(STZ)诱发的糖尿病肾病模型大鼠的影响。
1材料与试剂
链脲佐菌素(STZ)制作的糖尿病肾病模型的Wistar大鼠(由南方医科大学实验动物中心提供)；BIOBASE-PEARL分立式全自动生化分析仪(山东BIOBASE公司)。
2实验方法
将确认为糖尿病肾病模型的Wistar大鼠，随机分为10组，每组10只，即：模型组；4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素(6、2、0.7mg/kg)；阳性对照组(氨基胍，100mg/kg)。另取正常Wistar大鼠10只为正常对照组。
每天各组同体积不同浓度灌胃给予相应药物或生理盐水1次，连续给药14周。给药结束后，代谢笼收集24小时尿液，计算尿量，并测定尿液中总蛋白、微白蛋白、肌酐含量；眼眶取血，全自动生化仪测定各生化指标；10％甲醛固定，留作病理组织学检查。所有测定结果用
Figure BDA0002326150300000094
表示，采用组间t检验进行统计学分析。
3实验结果
3.1对STZ糖尿病肾病模型大鼠尿量、尿蛋白及肌酐的影响
从表3可以看出，中高剂量4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素能显著减少STZ糖尿病肾病模型大鼠的尿量、尿蛋白、微量白蛋白以及尿肌酐。
表3 4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对STZ糖尿病肾病模型大鼠尿蛋白、尿肌酐等的影响(
Figure BDA0002326150300000091
n＝10)
Figure BDA0002326150300000092
与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01。
3.2对STZ糖尿病肾病模型大鼠血清生化指标的影响
从表4可以看出4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素能显著降低糖尿病肾病模型动物血清中甘油三酯、MDA、Scr、BUN、AGEs、LDL水平，显著提高血清中SOD的活性。
表4 4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对STZ糖尿病肾病大鼠血清脂质、尿素氮、肌酐肾组织脂质过氧化的影响(
Figure BDA0002326150300000093
n＝10)
Figure BDA0002326150300000101
与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01。
SOD：超氧化物岐化酶；MDA：丙二醛；Scr：血肌酐；BUN：血尿素氮；AGEs：终末糖基化产物；LDL：低密度脂蛋白。
3.3对STZ糖尿病肾病模型大鼠病理组织学的影响
从表5可以看出，4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素各剂量组均能显著减少由STZ诱发的糖尿病肾病模型大鼠中细胞外基质增生和TGFβ-1的表达，降低损伤病理学评分，且合用效果略优于单用。
表5 4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对STZ糖尿病肾病模型大鼠病理组织学的影响(
Figure BDA0002326150300000102
n＝10)
Figure BDA0002326150300000103
与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01。
结果表明本发明药物组合物的活性成分对抗糖尿病肾病发生、发展细胞病理环节，对STZ糖尿病肾病模型大鼠有保护作用；还可降低肾脏氧化应激程度、减少终末糖基化产物引起纤维化。
(三)4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素降低糖尿病心肌病变大鼠心肌细胞Ca2+超载作用
糖尿病心肌病变大鼠心肌细胞Ca2+超载是心肌功能受损的直接原因。
建立糖尿病心肌病大鼠模型：健康Wistar大鼠，随机选取10只作为正常对照组，其余为模型组。模型组采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法诱发大鼠糖尿病，连续注射5周后形成2型糖尿病模型，喂养10周后形成糖尿病心肌病变模型。
1实验方法
将造模成功的Wistar大鼠，随机分为10组，每组10只，即：正常组；模型组；4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素高中低剂量组(6、2、0.7mg/kg)；阳性对照组(盐酸二甲双胍，100mg/kg)。治疗4周后，采用Ca2+荧光指示剂Fura-2，测定激发波长340/380nm的荧光值，以F340/F380比值反映大鼠心肌细胞内钙浓度。
3实验结果
从表6可以看出，单用及合用不同浓度的4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素各剂量组均能显著降低糖尿病心肌病变大鼠心肌细胞内Ca2+超载作用。
表6 4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素降低糖尿病心肌病变大鼠心肌细胞内Ca2+超载作用(x±s，n＝10)
Figure BDA0002326150300000111
与模型组比较：*P<0.05。
(四)4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对大鼠糖尿病周围神经病变的治疗作用
周围神经传导速度(NVC)减慢是糖尿病周围神经病变的一个可靠的指标。运动神经传导速度(MNCV)、感觉神经传导速度(SNCV)的检测对早期诊断有重要价值，而糖尿病周围神经病变的治疗效果取决于早期诊断。
建立糖尿病周围神经病变大鼠模型：健康Wistar大鼠，随机选取10只作为正常对照组，其余为模型组。模型组采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法诱发大鼠糖尿病，连续注射5周后形成2型糖尿病模型，喂养8周后形成糖尿周围神经病变模型。
1实验方法
将造模成功的Wistar大鼠，随机分为10组，每组10只，即：正常组；模型组；4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素高中低剂量组(6、2、0.7mg/kg)；阳性对照组(盐酸二甲双胍，100mg/kg)。治疗4周后，采用电极刺入法测定运动及感觉神经传导速度。
2实验结果
4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对大鼠糖尿病周围神经病变的治疗作用。
从表7可以看出，4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素各组均能显著加快糖尿病神经病变大鼠的神经传导速度。
表7 4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对糖尿病神经病变大鼠神经传导速度的影响(
Figure BDA0002326150300000121
n＝10)
Figure BDA0002326150300000122
与高糖组比较：*P<0.05,**P<0.01。
(五)4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对糖尿病大鼠视网膜中央动脉血流动力学的药效学评价
1实验方法
将确认为糖尿病模型的Wistar大鼠，继续基础饲料喂养3个月，测定大鼠视网膜血流动力学参数，若出现血流动力学参数的异常则可据《中药新药治疗糖尿病视网膜病变的临床研究指导原则》确定为模型动物进入糖网病的亚临床期。
预防性实验中取注射STZ72小时后血糖升至16.7mmol/L的糖尿病模型大鼠，以空腹血糖随机分为10组，每组10只，即：模型组；4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素高中低剂量组(6、2、0.7mg/kg)；阳性对照组(多贝斯，100mg/kg)。另取正常Wistar大鼠10只为正常对照组。每天各组同体积不同浓度灌胃给予相应药物或生理盐水1次，连续给药24周。给药结束后，采用30mg/kg戊巴比妥钠注射剂麻醉大鼠，用Sequoia512型彩色多普勒超声仪测定每只大鼠右眼视网膜中央动脉(CRA)的血流动力学，包括收缩期峰值血流速度(Max)、舒张末期流速(Min)、平均血流速度(TAMx)。所有测定结果用
Figure BDA0002326150300000131
表示，采用组间t检验进行统计学分析。
治疗性实验中取亚临床期糖网病模型大鼠，以血流动力学指标随机分为10组，每组10只，即：模型组；4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素高中低剂量组(6、2、0.7mg/kg)；阳性对照组(多贝斯，100mg/kg)。另取正常Wistar大鼠10只为正常对照组。每天各组同体积不同浓度灌胃给予相应药物或生理盐水1次，连续给药12周。给药结束后，采用30mg/kg戊巴比妥钠注射剂麻醉大鼠，用Sequoia512型彩色多普勒超声仪测定每只大鼠右眼视网膜中央动脉(CRA)的血流动力学，包括收缩期峰值血流速度(Max)、舒张末期流速(Min)、平均血流速度(TAMx)。所有测定结果用
Figure BDA0002326150300000132
表示，采用组间t检验进行统计学分析。
2实验结果
从表8可以看出，模型组大鼠CRA血流流速明显降低，Max、Min、TAMx均非常显著低于同期正常对照组，反映视网膜血流灌注和供血严重不足，与模型组比较，本发明药物组合物各剂量组大鼠CRA血流流速明显增加，各剂量组均有非常显著性意义。结果表明，4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素各剂量组均能显著改善糖尿病大鼠视网膜中央动脉血流灌注和供血不足，对糖尿病性视网膜病变有显著的预防作用。
表8 4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对糖尿病性视网膜病变大鼠CRA血流动力学的影响(预防组)(
Figure BDA0002326150300000133
n＝10)
Figure BDA0002326150300000134
Figure BDA0002326150300000141
与模型组比较：*P<0.05,**P<0.01。
从表9可以看出，模型组大鼠CRA血流流速明显降低，Max、Min、TAMx均非常显著低于同期正常对照组，反映视网膜血流灌注和供血严重不足，与模型组比较，本发明药物组合物各剂量组大鼠CRA血流流速明显增加，各剂量组均有非常显著性意义。结果表明，4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素各组均能显著改善糖尿病大鼠视网膜中央动脉血流灌注和供血不足，对糖尿病性视网膜病变有显著的治疗作用，且合同效果优于单用。
表9 4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素对糖尿病性视网膜病变大鼠CRA血流动力学的影响(治疗组)(
Figure BDA0002326150300000142
n＝10)
Figure BDA0002326150300000143
与模型组比较：*P<0.05,**P<0.01。
结果表明本发明药物组合物的活性成分对糖尿病性视网膜病变具有预防和治疗作用。
(六)4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素下调高糖培养心肌成纤维细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)表达
转化生长因子-β1(TGF-β1)的异常分泌和结缔组织生长因子(CTGF)的异常表达均是心肌纤维化病变中最重要的促诱发因子之一。高血糖、高胰岛素血症及胰岛素抵抗等代谢紊乱均可刺激TGF-β1分泌。TGF-β1通过受体刺激心脏成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维连接蛋白，下调蛋白水解酶活性，抑制纤溶酶原、胶原酶原、基质酶原等酶原激活物的产生，减少胶原降解，增加心肌组织外基质的含量，最终使细胞外基质在细胞间沉积，使心肌变僵硬，舒张功能障碍，最终出现心力衰竭。
1实验方法
分离1～3d Wistar大鼠心肌成纤维细胞并培养，传代至第二代时用于实验。将所有细胞分为10组，随机分为10组，每组均加入葡萄糖终浓度为25mM的高糖DMEM培养基0.1mL，再分别添加0.1mL梯度稀释的4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素(终浓度分别为10nM,100nM)。以只加普通DEME培养基(葡萄糖终浓度5.5nM)为正常对照组，以加葡萄糖终浓度为25mM的高糖DMEM培养基为高糖组。各组细胞均刺激24h，用胰酶消化，抽提总RNA、反转录cDNA，以反转录cDNA为模板扩增各组细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA。
2实验结果
从表10可以看出，25mM葡萄糖能显著升高Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA，4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素可以下调高糖培养心肌成纤维细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)表达。
表10 4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素下调高糖培养心肌成纤维细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)
表达(
Figure BDA0002326150300000151
n＝10)
Figure BDA0002326150300000152
与模型组比较：*P<0.05。
综上药理结果表明：本发明所提供的药物组合物对治疗糖尿病并发症具有较好的预防和治疗作用。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (5)

1.4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的组成还包括药学上可接受的载体，所述4-甲基-6,7-二甲氧基香豆素在所述药物中的重量百分比为0.1～99.5％。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述载体为稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、助溶剂、防腐剂、香味剂、甜味剂中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述赋形剂为水或注射用油；所述填充剂为淀粉、蔗糖、糊精、乳糖中的一种或多种；所述粘合剂为纤维素衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种；所述湿润剂为甘油；所述崩解剂为琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠；所述吸收促进剂为季铵化合物；所述表面活性剂为十六烷醇；所述吸附载体为高岭土或皂粘土；所述润滑剂为滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁或聚乙二醇；所述助溶剂为苯甲酸苄酯；所述防腐剂为苯甲醇。
5.根据权利要求1至4任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为片剂、颗粒剂、粉剂、丸剂、胶囊或液体制剂。
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