JPH0873500A

JPH0873500A - ε−（γ−グルタミル）リジン架橋部位に対するモノクローナル抗体及び免疫学的測定法

Info

Publication number: JPH0873500A
Application number: JP20851394A
Authority: JP
Inventors: Tomoko Ootsuka; とも子大塚; Katsuya Seguro; 勝也脊黒; Masao Motoki; 正雄本木; Koji Ikura; 宏司伊倉; Ryuzo Sasaki; 隆造佐々木
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 1994-09-01
Filing date: 1994-09-01
Publication date: 1996-03-19

Abstract

(57)【要約】【目的】従来法と比して、ε-(γ−グルタミル）リジ
ン架橋部位のみを高感度、短時間に蛋白質の種類の差の
影響なく、簡便に検出・定量する手段、ε-(γ−グルタ
ミル）リジン架橋部位を無破壊で検出・定量する手段を
提供すること。【構成】 ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位に親和
性の高いモノクローナル抗体を用いて免疫学的測定法に
よりε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位を定量する。
抗ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位モノクローナル
抗体を用いて無破壊にε-(γ−グルタミル）リジン架橋
部位の分布を測定する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ε-(γ−グルタミル）
リジン架橋部位に対するモノクローナル抗体、これを用
いる免疫学的測定法、これに用いる測定用試薬及びキッ
トに関する。

【０００２】

【従来技術】ε-(γ−グルタミル）リジン架橋は、タン
パク質翻訳後修飾酵素の１つであり、アシル転移反応を
触媒する酵素であるトランスグルタミナーゼ（以下、Ｔ
Ｇase ：EC 2.3.2.13)により、ペプチド鎖中のグルタミ
ン残基とペプチド鎖中のリジン残基あるいは遊離リジン
間に形成されるイソペプチド架橋である。また、ε-(γ
−グルタミル）リジン架橋は、蛋白質を過激な条件で加
熱した際に、ペプチド鎖中のグルタミン残基とペプチド
鎖中のリジン残基間の脱水反応が起こり形成される。さ
らにまた、ε-(γ−グルタミル）リジン架橋には、蛋白
質、ペプチド等の分子内、分子間のみならず、ε-(γ−
グルタミル）リジン結合を持つグルタミンあるいはグル
タミン酸とリジンのジペプチドも含まれる。

【０００３】ＴＧase の安価な調製法が開発されたこと
により、食品、化成品、医薬等さまざまな分野におい
て、ＴＧase の応用が進められているが、ＴＧase の応
用を成功に導くには、酵素反応の進行度と製品の特性と
の関連性を熟知することが重要となる。一方、ＴＧase
の反応進行度と密接な関係にあるのが、酵素反応の生成
物であるε-(γ−グルタミル）リジン架橋量であり、そ
の量の多少により、製品の物性や特性に大きな変動が起
こる。従って、品質管理のため、製品中に生成するε-
(γ−グルタミル) リジン架橋を定量する必要がある。
また、魚肉、畜肉等の食品原料や細胞等の生体内に最初
から内在するＴＧaseの作用により生成するε-(γ−グ
ルタミル）リジン架橋の生成を知ることにより、食品原
料の品質管理や生体の活動状況のチェック等が可能にな
ると考えられる。従って、これらのε-(γ−グルタミ
ル）リジン架橋部位を測定することが重要である。更
に、食品の原料や最終製品そして細胞中等に、内在する
あるいは添加したＴＧase の作用で生成したε-(γ−グ
ルタミル）リジン架橋の分布の基礎知見を得ることによ
り、更なる応用の展開が期待され、これらの中に生成し
たε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位の分布状況を明
かにする手法が望まれている。

【０００４】従来知られているε-(γ−グルタミル）リ
ジン架橋の定量法としては、目的とする検体をホモジネ
ートし、脂質など不要成分を除去した後、検体に含まれ
る蛋白質を一般的な消化酵素でアミノ酸まで分解し、こ
の処理では分解されないε-(γ−グルタミル）リジン架
橋部分をジペプチド（ε-(γ−グルタミル）リジン）と
して液体クロマトグラフィー法にて定量する方法があ
る。しかし、この方法では、目的蛋白質をアミノ酸まで
分解する必要があり、複数の酵素で消化するため、それ
に要する時間は約１週間に及ぶ。更に分解後は、感度お
よび精度向上の為に、２種の液体クロマトグラフィーに
供する必要があり、それに要する時間は２日以上であ
る。しかもこの方法では、検体をブレンダーや消化酵素
で破壊してからε-(γ−グルタミル）リジン架橋を検出
する為、検体中のε-(γ−グルタミル）リジン架橋の分
布状態を検出できない。

【０００５】また、El Alaoui らによりε-(γ−グルタ
ミル）リジン架橋に対するモノクローナル抗体の調製が
報告されている（El Alaoui et al., Int. J. Cancer,
48,221-226 (1991)) 。このモノクローナル抗体は、α
位のアミノ基をブロックしたリジンをカルボジイミドで
Keyhole-Limpet Hemocyanin 等のキャリアタンパク質に
導入したものを抗原として調製されたものであるが、こ
の抗原中にはカルボジイミドで非特異的に架橋したアス
パラギン酸残基とリジンの架橋体、Ｎ末端のアミノ基と
アスパラギン酸やグルタミン酸残基側鎖間の架橋体等が
生じているためε-(γ−グルタミル）リジン架橋に対す
る特異性は充分なものではない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位を高感度に、
短時間、かつ簡便に検出・定量する手段、また検体を破
壊することなくε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位を
検出・定量する手段を提供することである。

【０００７】

【問題を解決するための手段】本発明者は上記課題を解
決するために鋭意検討した結果、架橋を受けた蛋白質の
種類に無関係にε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位の
みに高い親和性を有するモノクローナル抗体を見出し、
本発明を完成するに至った。本発明はε-(γ−グルタミ
ル）リジン架橋部位に対するモノクローナル抗体、この
モノクローナル抗体を用いることを特徴とするε-(γ−
グルタミル）リジン架橋部位の免疫学的測定法、このモ
ノクローナル抗体を含む、ε-(γ−グルタミル）リジン
架橋部位の免疫学的測定用試薬、このモノクローナル抗
体を含む、ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位の免疫
学的測定用キット、及びこのモノクローナル抗体を産生
するハイブリドーマを提供するものである。上記本発明
のモノクローナル抗体を利用すればε-(γ−グルタミ
ル）リジン架橋部位の検出・定量を容易に、かつ簡便に
行うことができる。

【０００８】本発明のε-(γ−グルタミル）リジン架橋
部位に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリド
ーマは例えば、ケーラーとミュルンシュタインの方法
（Koehler et al., Nature, 256, 495(1975)）によって
調製することができる。すなわち、ＴＧase でε-(γ−
グルタミル）リジン架橋を形成させたα_s1−カゼインで
動物を免疫し、この動物から抗体産生細胞を採取し、該
抗体産生細胞と骨髄腫細胞とを融合させ、該融合細胞を
培養して目的とする抗体を産生するハイブリドーマをス
クリーニングしクローニングすればよい。

【０００９】以下に抗ε-(γ−グルタミル）リジン架橋
部位モノクローナル抗体の調製法を示す。まずＴＧase
反応によって架橋させた精製α_s1−カゼインを動物に免
疫する。免疫動物としてはマウス、ラット、モルモッ
ト、ウサギ、ヒツジ等が例示されるが、特にBALB/cマウ
スが好ましい。免疫は、アジュバンドとして、例えばフ
ロイントアジュバンド結核死菌、核酸、ミョウバン等を
用い、腹腔内、皮下投与等によって行われる。投与回数
は何回でも良く、必要に応じて適当な間隔で投与する。
免疫動物の抗体価が上昇したら、最終免疫より３〜１０
日後に該動物の抗体産生細胞を採取する。抗体産生細胞
としては、脾臓、リンパ節、末梢血液等から分離した細
胞が使用できるが、特に脾臓が好ましい。融合時に使用
する細胞としては多くのほ乳類動物細胞株が使用できる
が、抗体産生細胞の調製に用いた動物と同種の動物の細
胞株、すなわち、マウス骨髄腫細胞としてはSP2/V-Ag1
4、P3-NS1/1-Ag4-1、 PuBul-Ou 、P3-X63-Ag8-U1 、X63
-Ag8 、X63-Ag8-6.5.3 、MPC11-45.6.TG.1.7 等を例示
することができる。

【００１０】細胞の融合は、抗体産生細胞と骨髄腫細胞
とを適当な個数及び割合で混合し、ポリエチレングリコ
ールを用いて行うことができる。また、電気融合法によ
っても行うことができる。生じたハイブリドーマはヒポ
キサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む培地
（以下、HAT 培地）中で生育する。融合しなかった抗体
産生細胞、骨髄腫細胞は共に死滅し、ハイブリドーマだ
けが個々のクローンから増殖してくる。スクリーニング
は酵素免疫測定法によって行うことができる。

【００１１】すなわち、マイクロプレートに吸着させた
ＴＧase で架橋したα_s1−カゼインと、培養したハイブ
リドーマの培養上清（ハイブリドーマ由来の抗体を含
む）を反応させ、洗浄し、適当に希釈した酵素標識抗マ
ウスIg抗体を加え、さらに洗浄後、適当な基質を加えて
反応させることにより、架橋したα_s1−カゼインと反応
する抗体を産生するハイブリドーマを選択することがで
きる。この際、同時に、無架橋のネイティブα_s1−カゼ
インを用いて上と同様の操作を行い、ネイティブα_s1−
カゼインとは反応しない抗体を産生するハイブリドーマ
を選択することによって、ネイティブα_s1−カゼインと
親和性が無く、ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位を
特異的に認識する抗体を産生しているハイブリドーマを
選択することができる。また、選択したハイブリドーマ
をモノクローン化する方法としてはFACS（Fluorescent
Activated Cell Sorter)を用いる方法やSoft Agar 等に
よる方法等があるが、例えばフィーダー細胞としてマウ
スの胸腺細胞を用いて、限界希釈法に数度かけることに
よりモノクローン化することが好ましい。

【００１２】本発明のモノクローナル抗体は、このよう
にして得られた上記モノクローン化ハイブリドーマを適
当な培地中で培養し、培養上清を塩析し、これをさらに
イオン交換クロマトグラフィー等で精製することにより
回収できる。しかし、必要に応じて全培養上清を用いる
こともできる。また、大量に取得する場合は上記クロー
ンをマウス腹腔内に移植、増殖させ、該動物の腹水中に
産生された該モノクローナル抗体を精製、回収すればよ
い。こうして得られたモノクローナル抗体を用いて免疫
化学的測定法を実施すればε-(γ−グルタミル）リジン
架橋部位が不純物の影響を受けにくく、簡便、迅速、か
つ高感度に定量される。

【００１３】本発明を適用することのできるε-(γ−グ
ルタミル）リジン架橋部位の免疫学的測定法としては、
特に限定されないが、例えば、本発明のモノクローナル
抗体と不溶性担体に吸着させたε-(γ−グルタミル）リ
ジンまたはε-(γ−グルタミル）リジン結合で架橋され
た蛋白質を用いた競合ELISA 法、または標識したε-(γ
−グルタミル）リジン結合で架橋された蛋白質と不溶性
担体に吸着した本発明のモノクローナル抗体を用いた競
合ELISA 法などがある。

【００１４】次に本発明による測定試薬及びε-(γ−グ
ルタミル）リジン架橋部位の測定方法、免疫組織染色に
よるε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位の検出方法を
具体的に説明する。

【００１５】ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位の含
有量の測定法：架橋したα_s1−カゼインを適当な不溶性
担体（例えばプラスチック容器）に固定化する（以下こ
れを“固定化抗原”という）。ついで、ε-(γ−グルタ
ミル）リジン架橋部位を特異的に認識するモノクローナ
ル抗体（１次抗体）および標識抗体（２次抗体）の不溶
化担体への非特異的吸着を防ぐために適当な物質（例え
ば牛血清アルブミン）で不溶化担体の表面を被覆する。
このようにして得られた固定化抗原を１次抗体と検体を
含む溶液と一定時間及び温度で接触させ反応させる。１
次抗体がこの間に不溶化抗原中のε-(γ−グルタミル）
リジン架橋部位と結合する。また、１次抗体は溶液に含
まれる検体のε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位とも
結合する。次いで適当な洗浄液で洗った後、適当な標識
物質で標識した１次抗体に対する２次抗体の溶液（例え
ば水溶液）を、固定化抗原に結合した１次抗体と一定時
間及び温度で接触させ２次抗体と反応させる。これを適
当な洗浄液で洗い、ついで不溶性担体上に存在する２次
抗体の標識された標識物質の量を測定する。かくしてそ
の値から検体試料中のε-(γ−グルタミル）リジン架橋
部位の量を算出することができる。

【００１６】測定試薬の構成：本発明の測定試薬は、架
橋したα_s1−カゼインを吸着させた不溶性担体と１次抗
体、標識された２次抗体とより主として構成されるが、
この測定法を簡便に行うために、これらの抗体以外に種
々の補助剤も含めてキットを形成することができる。か
かる補助剤としては例えば、試薬を溶解させる為の溶解
剤、不溶化担体を洗浄するために使用される洗浄剤、抗
体の標識物質として酵素を使用した場合、酵素活性を測
定するための基質、その反応停止剤、等の免疫学的測定
試薬のキットに通常使用されるものが挙げられる。本発
明の測定に使用される不溶化担体としては、例えばポリ
スチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステ
ル、ポリアクリルニトリル、ポリビニルクロライド、フ
ッ素樹脂、架橋デキストラン、ポリサッカライドなどの
高分子、その他紙、硝子、金属、アガロース及びこれら
の組み合わせなどを例示することができる。

【００１７】不溶化担体の形状としては、例えばマイク
ロプレート、トレイ状、球状、繊維状、棒状、盤状、容
器状、セル、試験管などの種々の形状が挙げられる。ま
た標識物質としては放射性物質、酵素又は蛍光物質を利
用するのが有利である。放射性物質としては¹²⁵I、
¹³¹I、¹⁴Ｃ、³Ｈなどを、酵素としてはアルカリフォス
ファターゼ、ペルオキシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼ、グルコースオキシダーゼ、アセチルコリンステラ
ーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、チロ
シナーゼなど、また蛍光物質としてはフルオレッセイン
イソチオシアネート、テトラメチルローダミンイソチオ
シアネートなどを利用することができるが、本発明はこ
れらに例示したものに限定されるものではなく、免疫学
的測定方法に使用されているものであれば、他のもので
も使用できる。

【００１８】免疫組織染色によるε-(γ−グルタミル）
リジン架橋部位の検出法：適当な大きさに刻んだかまぼ
こを固定液（４％パラフォルムアルデヒド、４％ショ
糖、0.1 Ｍカコジル酸ナトリウム−ＨＣｌ緩衝液（ｐ
Ｈ７．２））に４℃、一昼夜浸漬し固定化する。固定標
本を蒸留水で洗浄し、エタノール系列で脱水後、エポン
８１２に包埋する。包埋した標本を超ミクロトームによ
りスライスして１μm の切片を調製し、ゼラチンをコー
トしたスライドガラスにマウントし、これをナトリウム
メトキシドを用いて脱レジンを行い、２％ヤギ血清で15
分間、非特異抗原のブロッキングを行う。１次抗体の反
応は抗ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位モノクロー
ナル抗体（10μg/ml）で、４℃、72時間行った。洗浄
後、ビオチン化抗マウスIgG 抗体で室温、20分反応し、
ストレプトアビジン−ビオチン複合体で室温、20分反応
する。発色はＤＡＢ溶液（0.125% ジアミノベンジン、
0.002 ％過酸化水素水、 0.05M Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ
（ｐＨ７．６））で10分間行い、脱水、封入後、微分干
渉顕微鏡により観察を行う（ＡＢＣ法）。

【００１９】また、洗浄した固定標本をLowicryl Ｋ４
Ｍで包埋する。包埋した標本を超ミクロトームによりス
ライスして超薄切片を作製し、ニッケルグリッドにマウ
ントする。脱レジン後、洗浄した切片を同様にブロッキ
ングし、１次抗体反応後、洗浄し、ヤギ抗マウスIgG 抗
体(IgG-Gold)(2次抗体）で室温、１時間反応を行った
後、第二の反応のため上述の１次抗体反応、及び２次抗
体の反応を繰り返し行った。切片は蒸留水でよく洗浄
し、酢酸ウランとクエン酸鉛の二重電子染色し、フォル
ムバール膜（電子線による標本の変化等を防ぐために標
本の表面を覆う膜）で補強した後、電子顕微鏡（日立 H
-600) で観察する（金コロイド法）。かくしてかまぼこ
ゲル組織中の抗ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位モ
ノクローナル抗体の結合した部位を認めることができ
る。

【００２０】

【実施例】以下、実施例により本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれらに限定されるものではない。

【実施例１】抗ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位抗体産生ハイブ
リドーマ及びモノクローナル抗体の調製

【００２１】ＴＧase 反応によって架橋させた精製α_s1
−カゼイン100 μg をフロイントコンプリートアジュバ
ンドと共にBALB/cマウスの腹腔内及びFoot padに免疫
し、２週間後さらにフロイントインコンプリートアジュ
バンドと共に同様に腹腔内に免疫し、さらに３週間後96
μg を同様にアジュバンド無しで免疫した。３日後に脾
臓を摘出し、骨髄腫細胞(SP2）とポリエチレングリコー
ルにより細胞融合を行った。これをＨＡＴ培地で２週間
培養した後、上清中の抗体を検定し、抗体産生ハイブリ
ドーマを限界希釈法によりクローニングした。このハイ
ブリドーマはＧＬ１と命名され、平成６年５月24日付け
で工業技術院生命工学技術研究所に寄託され、その受託
番号はＦＥＲＭＰ−１４３２６である。

【００２２】得られたハイブリドーマＧＬ１を培養し、
マウス腹腔に投与し、２週間後に腹水を採取し、Protei
n-A を用いたカラムクロマトグラフィーにより精製し
た。クローニングの各段階に、ε-(γ−グルタミル）リ
ジン架橋部位のみに高い親和性を示す画分を選択するこ
とによって、本発明のε-(γ−グルタミル）リジン架橋
部位のみに特異的に結合するモノクローナル抗体が得ら
れた。このようにして得られたモノクローナル抗体は以
下の性質を有する。 (a) 免疫グロブリンの種類：IgM (b) 分子量：９７０，０００ダルトンこうして得られた本発明のモノクローナル抗体は、ε-
(γ−グルタミル）リジン架橋部位以外の部位、例え
ば、α-(γ−グルタミル）リジン架橋部位、ε-(α−グ
ルタミル）リジン架橋部位、α-(α−グルタミル）リジ
ン架橋部位には結合しなかった（図５）。このハイブリ
ドーマＧＬ１の産生する抗ε-(γ−グルタミル）リジン
架橋部位モノクローナル抗体を用いて、種々の蛋白質
（α_s1−カゼイン、β−カゼイン、フィブリン及び１１
ｓ（大豆グロブリン蛋白質））について、ネイティブの
ものと、ＴＧase で架橋させたものとのELISA の結果を
図１〜図４に示す。また本発明のモノクローナル抗体は
上述したようにε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位以
外の部位には結合しないことを示す結果を図５に示す。

【００２３】

【実施例２】抗ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位モノクローナル
抗体を用いたε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位の測
定 96穴イムノプレート（Nunc社製）に架橋したα_s1−カゼ
イン（10μg/ml）溶液を50μｌずつ分注し37℃で２時間
放置した。このうち過剰量の非結合架橋α_s1−カゼイン
を除去し、1%オバルブミン含有PBS を250 μl/well分注
し、37℃で２時間放置した。次に非結合オバルブミンを
除去し、ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位を含有す
る検体、抗ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位モノク
ローナル抗体を含有する溶液を各ウェルに100 μ/Well
分注し、室温で２時間放置した。洗浄後、アルカリフォ
スファターゼ標識抗マウスIgM （cappel社製）溶液を50
μl/Well分注し、37℃で２時間放置した。洗浄後P-ニト
ロフェニルリン酸ナトリウム（1mg/ml）を100 μ/Well
添加、37℃で30分加温し、各ウェルの405nm の吸光度を
測定した。濃度既知のε-(γ−グルタミル）リジンペプ
チドを用いた結果、図６に示すようにε-(γ−グルタミ
ル）リジンの測定が可能であった。また、これを検量線
として検体中のε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位の
定量が可能であった。

【００２４】

【発明の効果】本発明の抗ε-(γ−グルタミル）リジン
架橋部位モノクローナル抗体は、ε-(γ−グルタミル）
リジン架橋部位のみに特異的に結合し、ε-(γ−グルタ
ミル）リジン架橋部位以外の部位、例えば、α-(γ−グ
ルタミル）リジン架橋部位、ε-(α−グルタミル）リジ
ン架橋部位、α-(α−グルタミル）リジン架橋部位等に
は結合しない。また本発明のモノクローナル抗体は、検
体を破壊することなく、微量あるいは不純物を含むよう
な蛋白質溶液等のε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位
をELISA で測定することを可能にする。そして、非破壊
であるため、免疫組織化学染色に用いることが可能であ
る。さらに、担体樹脂に結合させればアフィニティーク
ロマトグラフィーにてεー(γ−グルタミル）リジン架橋
部位を有する蛋白質を特異的に精製することが可能であ
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】ハイブリドーマＧＬ１の産生する本発明の抗ε
-(γ−グルタミル）リジン架橋部位モノクローナル抗体
を用い、α_S1−カゼインのネイティブのものとＴＧase
で架橋させたものとのELISA の結果を示す図面である。

【図２】ハイブリドーマＧＬ１の産生する本発明の抗ε
-(γ−グルタミル）リジン架橋部位モノクローナル抗体
を用い、β−カゼインのネイティブのものとＴＧase で
架橋させたものとのELISA の結果を示す図面である。

【図３】ハイブリドーマＧＬ１の産生する本発明の抗ε
-(γ−グルタミル）リジン架橋部位モノクローナル抗体
を用い、フィブリンのネイティブのものとＴＧase で架
橋させたものとのELISA の結果を示す図面である。

【図４】ハイブリドーマＧＬ１の産生する本発明の抗ε
-(γ−グルタミル）リジン架橋部位モノクローナル抗体
を用い、１１ｓのネイティブのものとＴＧase で架橋さ
せたものとのELISA の結果を示す図面である。

【図５】本発明の抗ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部
位モノクローナル抗体は、ε-(γ−グルタミル）リジン
架橋部位以外の部位には結合しないことを示す結果を示
す図面である。

【図６】本発明の抗ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部
位モノクローナル抗体を用いて得られる、濃度既知のε
-(γ−グルタミル）リジンペプチドに対するELISA の結
果を示すものであり、これを用いるとε-(γ−グルタミ
ル）リジン架橋部位を定量的に求め得ることを示す図面
である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｂ // Ｃ１２Ｎ 15/02 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者伊倉宏司京都府長岡京市泉が丘24−８ (72)発明者佐々木隆造京都府京都市左京区田中東高原町14

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】 ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位に
対するモノクローナル抗体。
【請求項２】標識された請求項１記載のモノクローナ
ル抗体。
【請求項３】不溶性担体に吸着された請求項１記載の
モノクローナル抗体。
【請求項４】請求項１、２又は３記載のモノクローナ
ル抗体を用いることを特徴とするε-(γ−グルタミル）
リジン架橋部位の免疫学的測定法。
【請求項５】標識抗原を利用する請求項４記載の測定
法。
【請求項６】請求項１、２又は３記載のモノクローナ
ル抗体を含む、ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位の
免疫学的測定用試薬。
【請求項７】請求項１、２又は３記載のモノクローナ
ル抗体を含む、ε-(γ−グルタミル）リジン架橋部位の
免疫学的測定用キット。
【請求項８】さらに(a）溶解剤、(b）洗浄剤及び(c）
酵素活性測定用の基質からなる群から選ばれる少なくと
も１種を含む請求項７記載のキット。