JPH08507516A

JPH08507516A - 脂質及び脂質含有粒子のグリコシル化、及びそれから誘導される診断及び治療方法及び物質

Info

Publication number: JPH08507516A
Application number: JP6519948A
Authority: JP
Inventors: リチャードジェイブカラ; ヘレンヴラッサラー; アントニーセラミー
Original assignee: ザピコワーインスティテュートフォアメディカルリサーチ
Priority date: 1993-03-11
Filing date: 1993-11-12
Publication date: 1996-08-13
Also published as: EP0688209A1; AU5726294A; CA2157865A1; US5869534A; AU684258B2; WO1994020083A1; US5780615A

Abstract

(57)【要約】脂質及び脂質含有分子のin vivo酸化は、かかる脂質物質と、グルコースの如き還元糖、ＡＧＥ−ペプチドの如き進行グリコシル化最終産物、又は進行グリコシル化最終産物を生成する化合物とが同時反応してＡＧＥ−脂質として知られる物質又は粒子が生成することによって、開始されることが発見された。ＡＧＥ−脂質は、老化過程、褐色色素の異常生成、及び糖尿病及びアテローム硬化症の如き種々の疾患状態に関係があるとされてきた。診断方法が意図されており、異常状態の開始及び経過の検出から薬物発見アッセイまでの用途に及び、該検出では、脂質酸化、ＡＧＥ−脂質レベル、ＬＤＬレベル、アポリポタンパク質レベル、アポリポタンパク質レセプター結合等の変化を測定することができる。対応する治療方法及び医薬組成物が開示されており、それらは、脂質酸化の前述のマーカー全てのレベルを調節する能力を示す単独又は複数の活性成分に基づいている。

Description

【発明の詳細な説明】脂質及び脂質含有粒子のグリコシル化、及びそれから誘導される診断及び治療方法及び物質発明の技術分野本発明は、一般的には、タンパク質及びその他の生体分子の非酵素的グリコシル化及びその結果としてしばしば起こる進行グリコシル化最終産物（advancedgl ycosylation endproduct）（ＡＧＥ）に関し、特定的には、脂質−ＡＧＥの生成及びグリコシル化脂質とリポタンパク質がアテローム硬化症及び糖尿病の如き状態においてマーカー及びアクターとして果たすことができる役割に関する。発明の背景グルコース及びその他の還元糖は、タンパク質のアミノ基に非酵素的に濃度に依存して結合する。時間が経過すると、これら初期アマドリ付加物は、更に転位、脱水及び他のタンパク質との架橋を受けて、進行グリコシル化最終産物（ＡＧＥ）といわれる複雑な構造のファミリーとして蓄積する。本発明者らの初期の研究で端緒が開かれてから現在に至るまで、進行グリコシル化最終産物の役割及び臨床的意義の解明に向けて重要な進展があった。その結果、これまで老化過程又は糖尿病の如き疾患の病的作用が原因であるとされてきた多くの状態が、今日では、少なくとも部分的にin vivoでのＡＧＥの生成が原因であると認められている。進行グリコシル化は、真性糖尿病における如き比較的高い糖濃度の条件下で長い半減期を有する分子に起こる傾向がある。多数の研究が、老化の間に及び慢性疾患において起こる構造的及び機能的変化にＡＧＥが重要な役割を果たしていることを示唆している。更に、進行グリコシル化最終産物は、糖尿病及びその他の病んだ組織において正常組織よりも急速に生成することが注目される。糖尿病及び老化の如き状態の原因に対するタンパク質の進行グリコシル化の関係に関する一連の発見に照らして注目されてきた特定の領域は、血管病の発生と同時に起こる揃いの事象である。具体的には、アテローム硬化症性病斑及び溶血斑の形成が、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の酸化とＡＧＥの存在及び生成との間に存在する相互関係（それがあるとして）を解明する目的で幅広く調べられてきた状態の例である。低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の脂質成分の酸化で細胞ＬＤＬレセプターによるアポＢ成分の認識が減損し、そして酸化されたＬＤＬ（ｏｘ−ＬＤＬ）がマクロファージ“スカベンジャー”レセプターにより優先的に取り込まれる。血管壁マクロファージによるｏｘ−ＬＤＬの増進した飲食作用で、それらは初期のアテローム硬化症性病斑を特徴付ける脂質充満泡沫細胞に転換される。これまでの研究は、ＬＤＬのＡＧＥ修飾が脂質酸化の潜在力を高めることを示唆している。ＡＧＥの“ファミリー”には、単離して化学構造により特性決定できる種が含まれる。その幾つかは至極安定であるが、他のものは不安定であるか又は反応性である。ＡＧＥ−脂質も、安定、不安定又は反応性であり得る。内因性脂質に関連して用いる場合、ＡＧＥ−脂質化合物は典型的にはin vivo で非酵素的に生成する。しかしながら、ＡＧＥ−脂質化合物は、例えば、還元糖と適する脂質、例えば、アミノ基を有する脂質の混合物をインキュベートすることにより、又はＡＧＥ及びＡＧＥモデルの生体高分子への化学的カップリングの如き他のin vitroでの方法により、in vitroで生成させることもできる。還元糖と脂質の反応性基との間の反応が進行グリコシル化過程を開始する。この過程は、典型的には、還元糖とこの反応性基との間のシッフ塩基を生成する可逆反応で始まり、それが進んで共有結合アマドリ転位生成物を生成する。ひとたび生成すると、このアマドリ生成物は更に転位を受けてＡＧＥ修飾化合物を生成する。これら反応はゆっくり起こるが、脂質はin vivoで測定可能な量のＡＧＥを蓄積することができる。生成したＡＧＥ−脂質は、器官及び器官の部分の構造的及び／又は機能的完全性を低下させ、代謝を変化させ、又は宿主機能を他のやり方で低下若しくは害し得る。 Picardら（1992）Proc．Natl．Acad．Sci．USA，89:6876-6880は、マロニルジアルデヒド（ＭＤＡ）とアポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）つまりＬＤＬのタンパク質成分との間の反応を研究し、ＭＤＡに優先的に結合してアポＢへのそれの結合を阻止するアミノグアニジンの能力を測定するために実験を行った。これら実験の環境を確立するために、この著者は、内皮細胞又はＣｕ²⁺とのインキュベーションによって脂質過酸化を誘発した。しかしながら、アミノグアニジンが結合することが確認されている反応性アルデヒドを生成する脂質の生理的酸化はこの文献で用いられた手段によっては起こらないであろうから、Picardらの実験は、選ばれる個々のin vitro環境により制限される。より詳しくは、脂質の酸化的修飾は、脂肪酸残基内に存在する不飽和結合のフリーラジカル媒介酸化により進行することをin vitro研究が示唆している（12， 13）。多価不飽和脂肪酸は、対になった二重結合の間に位置するメチレン水素がラジカル触媒反応により容易に引き抜かれるので、酸化に対して特に敏感である。ジエン共役が起こってヒドロペルオキシドが生成する。これに続いて脂肪酸が分解し、反応性アルデヒドが生成し、そしてＬＤＬの場合にはアポタンパク質残基が共有結合で修飾される（12，14，15）。 in vivoで脂質酸化を開始する生化学的過程はまだあまり理解されていない。三重項酸素は正常な生理的条件下では弱い酸化体なので、in vitroでのＬＤＬの有意な酸化はマイクロモル濃度の銅の如き二価金属の添加後でしか起こらない。脂質酸化は、ＥＤＴＡの如き金属キレート剤が含まれることにより、これらインキュベーションにおいて完全に阻止される（15）。ＬＤＬ酸化は多様な細胞培養系内でも起こり、そして細胞リポキシゲナーゼの薬理学的ブロックにより部分的に阻害され得る（16）。しかしながら、in vivoでの脂質の酸化的修飾における反応性酸素種の正確な役割は確認されていない。血漿の低微量金属濃度、金属と堅く詰まった配位錯体を形成するリガンドの高い利用可能性、及び豊富な抗酸化能力は、金属触媒自動酸化及び反応性酸素種がin vivoでの脂質酸化の媒介に役割をまず果たしていないことを示唆している（17〜19）。ここに開示した更なる研究で、そこに提示された発見の重要性がより十分に明らかにされかつ同じく確認された。従って、本開示内容は、これら発見の提示と先に述べた本発明の種々の態様を更に詳述することに向けられている。発明の要旨本発明の第一の側面では、脂質のin vivo酸化がここで定義するＡＧＥ−脂質を生成するかかる脂質の反応により開始されることを確認した。従って、本発明は、ＡＧＥ−脂質の生成及び存在を制御することにより脂質のin vivo酸化を調節する方法に及ぶ。対応する診断用途は、ＡＧＥ、特にここで定義するＡＧＥ− 脂質の存在及び量を測定することによるin vivo脂質酸化の経過及び程度の測定が含まれる。本発明のＡＧＥ−脂質を用いてＡＧＥ−脂質の存在により特徴付けられる疾患状態を同定することができるアッセイが包含される。更に、そのようなアッセイを用いて治療を追跡することができるので、ＡＧＥ−脂質の存在により特徴付けられる所与の疾患状態のための投薬法を調整することができる。より詳しくは、脂質のin vivo酸化はアテローム硬化症の発症及び経過に関連するので、in vivo脂質酸化の制御はその治療のための戦略に相当する。かくして、本発明は、ＡＧＥ−脂質の生成を阻害することによりアテローム硬化症を治療する方法を含む。なおその上、哺乳動物におけるＡＧＥ−脂質レベルの測定は、アテローム硬化症の可能性又は発症を診断する方法又は該疾患の経過又は重さを測定する方法に相当する。上で述べたように、ＡＧＥ−脂質は、脂質レベルの変動が機能不全又は異常の存在又は発症を反映することができる種々の状態のマーカーとして有用である。ＡＧＥ−脂質は脂溶性でもあるので、一定の場合にはＡＧＥ部分自体を含む治療剤及びその他の剤を、膜及び上皮層を貫いて、例えば、患者の特定部位に治療のために輸送するのに、単独でも既知のキャリヤー及びリポソームの如き送達ビヒクルと組み合わせても有用である。興味のある特定部位は、ＡＧＥ−脂質又はその一部分を認識する少なくとも１種のＡＧＥレセプターを有する部位であることができる。脂質を進行グリコシル化最終産物又は進行グリコシル化最終産物を生成する化合物と前記ＡＧＥ−脂質を生成するのに十分な時間インキュベートすることを含む、ＡＧＥ−脂質を調製する方法も開示されている。ＡＧＥ−脂質を薬学的に許容できるキャリヤーと共に含む医薬組成物も開示されている。かかる医薬組成物は、ある場合には追加の活性物質を含んでもよく、そして経口、非経口又は局所、例えば、経皮、舌下、口腔又は経粘膜送達用に製剤して用いることができる。述べたように、この医薬組成物は一定の場合にはリポソームの形態であってもよい。更に、ＡＧＥ−脂質は治療的効用も示すので、老化高分子の取り込み又は除去を剌激するため、かかる活性による皮膚の若返り又は改編を促進するため、及び薬物送達手段として役立たせるために、制御された量を投与できるように上記のように製剤することができる。これに関連して、これらＡＧＥ−脂質及びそれらを含有する医薬組成物は、適切なとき及び適切な場所で製剤されそして投与されることができる。本発明の更なる態様は、ＬＤＬのin vivo酸化がＬＤＬ進行グリコシル化最終産物（ＡＧＥ−ＬＤＬ）の生成により同じく開始されるという付随的発見に関する。ＡＧＥ−ＬＤＬは、グルコース又は他の生体内寄宿還元糖（in vivo-reside nt reducing sugar）、進行グリコシル化最終産物、又はその活性断片との反応によって生成することができ、この活性断片には哺乳動物の血清中に循環するＡＧＥペプチドが含まれる。より詳しくは、ＡＧＥ−ＬＤＬの生成は、脂質成分とアポタンパク質成分のいずれか又は両方へのＡＧＥ部分の結合を含み、後者の場合にはＡＧＥ−アポＢが生成する。続いてこのアポＢは、ＡＧＥ修飾を受け易いそのレセプター結合ドメイン内にある部位を有する。この部位を治療戦略の部分としてＡＧＥ修飾から保護することができ、そして薬物発見アッセイ又は診断関係におけるレセプターアッセイの焦点として役立てることもできる。従って、本発明は、血清ＬＤＬ又はコレステロールレベルが異常である状態を診断又は追跡する方法であって、ＡＧＥ−脂質、ＡＧＥ−ＬＤＬ及びＡＧＥ−アポＢから選ばれるマーカーの存在及び量を測定することを含む方法を包含する。この規定した方法は、例えば、アテローム硬化症及び糖尿病を診断又は追跡するのに用いることができる。対応する治療方法は、ＡＧＥ−ＬＤＬレベルを調節するのに役立つ物質の投与により、血清ＬＤＬ又はコレステロールレベルを調節するために、大方の場合にはそれを低下させるために、そして特にＡＧＥ−ＬＤＬの生成を阻害するために哺乳動物を治療することを含む。また、脂質代謝を調節する方法であって、かかる治療を必要とする哺乳動物における方法も包含される。この方法は、血清からの脂質の認識及び除去を修飾できる物質、より特定的には、ＬＤＬレセプターによるアポＢの認識及び結合を修飾できるような物質を前記哺乳動物に脂質代謝調節有効量投与することを含む。一般に、本発明の治療方法は、かかるin vivo酸化を受け易いいずれかの又は全ての脂質及び脂質関連物質に関係する進行グリコシル化最終産物の生成を阻害するために、ある物質又はかかる物質若しくは複数のかかる物質を含有する医薬組成物を投与することによる、in vivo脂質酸化、ＬＤＬレベル増加又はアポＢ修飾の阻害を意図している。かかる物質は進行グリコシル化のアンタゴニストを含み、それにはＡＧＥに対する抗体、ＡＧＥ−脂質に対する抗体、ＡＧＥ−ＬＤＬに対する抗体、ＡＧＥ−アポＢに対する抗体、並びに前述の抗原に結合して中和するであろう他のリガンドが含まれる。適する物質は、初期グリコシル化産物上の活性カルボニル基と反応性の物質から選択することもでき、好ましくは、アミノグアニジン、α−ヒドラジノヒスチジン、アミノグアニジンの類縁体、及びこれらのうちのいずれかを含有する医薬組成物から選択することができる。なお、これら全てはここで詳述されている。ここに記載する発明では、類似の様式で及び類似の目的に用いることができる追加の物質の発見が意図されている。別の態様では、ひとたび脂質のin vivo酸化が開始されると、それは脂質過酸化分解生成物の存在及び活性により進行する。これらには、脂質過酸化物、並びにマロニルジアルデヒド（ＭＤＡ）の如き高度反応性アルデヒドが含まれる。これらアルデヒドは、タンパク質と、例えば、利用可能なフリーのアミノ基を介して反応及び／又は架橋する。アミノグアニジンの如きＡＧＥ生成の阻害物質を用いて、これら反応性アルデヒドの活性をそれらとの直接反応により阻害することができる。従って、アテローム硬化症、又はＬＤＬレベル、コレステロールレベル若しくは脂質レベルが一般にあいにく高い他の状態の治療のための治療戦略は、in vivo脂質酸化の反応性アルデヒド生成物の活性を中和できる治療有効量の物質を投与することを含む。好ましい阻害物質には、上に列挙した物質及びアンタゴニスト、及びここに開示した他の物質が含まれる。従って、進行グリコシル化最終産物（ＡＧＥ）、特にかかる脂質及び脂質様部分に関連するＡＧＥの生成を制御することにより、脂質及び脂質様部分のin viv o酸化を調節及び制御することが本発明の主要な目的である。脂質−ＡＧＥ生成の存在及び程度を検出及び測定することにより、異常な脂質酸化が特色である状態を診断する方法を提供することが本発明の更なる目的である。ＡＧＥ−脂質の生成を測定及び阻害することにより、アテローム硬化症を診断及び治療する方法を提供することが本発明のなお更なる目的である。ＡＧＥ−脂質を含むＡＧＥの生成を阻害することにより、血清ＬＤＬレベルを低下させる方法を提供することが本発明のなお更なる目的である。ＡＧＥ−脂質に関連するアッセイを用いることにより、異常な脂質酸化を治療できる新規な薬物及び対応する物質を同定する方法を提供することが本発明のなお更なる目的である。一定の疾患及び皮膚の状態の如き状態を治療するためにＡＧＥ−脂質を用いること又は特定の生物活性部位に疾患治療性薬物を送達する目的で該ＡＧＥ−脂質部分を用いることが他の目的である。ＡＧＥ−脂質を同定すること及びその生成を即刻阻害する方法を特定すること又はこれらＡＧＥ−脂質の存在又は生物活性が宿主生物に有害である疾患状態を確認すること、又は該宿主生物内での疾患状態の存在の指標を特定することが本発明のなお更なる目的である。その他の目的及び効果は、以下の図面を参照しながら進む以下に続く詳細な説明を考慮すれば明らかとなろう。図面の簡単な説明図１は、種々の脂質を用いてグルコース及び／又はアミノグアニジンと共にインキュベートした経時ＡＧＥ化合物生成の３６０ｎｍにおける吸光度のグラフであり；図２は、種々の脂質を用いてグルコース及び／又はアミノグアニジンと共にインキュベートした蛍光強度のグラフであり；図３は、種々の脂質を用いてグルコース及び／又はアミノグアニジンと共にインキュベートしたＡＧＥ−脂質生成に関連する脂質酸化のグラフであり；図４は、５００ｍＭグルコースと共にインキュベートしたホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）の紫外及び可視吸収スペクトル（２００〜５００ｎｍ）の経時変化（０〜５０日間）のグラフであり；図５は、グルコース濃度の関数としてのＡＧＥ比吸光度のグラフであり；図６は、グルコース濃度の関数としてのＡＧＥ比蛍光のグラフであり；図７は、グルコース濃度の関数としての脂質酸化変化のグラフであり；図８Ａは、マロニルジアルデヒド（ビス〔ジエチルアセタール〕）（ＭＤＡ）（０〜２０μＭ）とアミノグアニジン（０〜５００μＭ）の間の濃度依存反応を示すグラフであり；図８Ｂは、ＡＧ濃度の関数としてのチオバルビツレート活性の阻害のグラフである。図９Ａ〜Ｃは、ＡＧＥと８人の血糖正常非糖尿病個体（○）及び真性糖尿病の１６患者の血漿から単離したヒトＬＤＬの酸化的修飾の比較測定のグラフである：図９Ａは、非糖尿病患者と糖尿病患者のＬＤＬアポタンパク質のＡＧＥ修飾を比較するものである。図９Ｂは、非糖尿病患者と糖尿病患者のＬＤＬ脂質のＡＧＥ修飾を比較するものであり；そして図９Ｃは、非糖尿病患者と糖尿病患者のＬＤＬの酸化的修飾を比較するものである。示した値は同じ測定を二重に行った平均値である。図１０Ａ〜Ｃは、ヒトＬＤＬ（2.5ｍｇ／ｍｌ）とグルコース（２００ｍＭ）との時間依存反応のグラフである。間隔を置いて、サンプルをＰＢＳ／ＥＤＴＡに対して透析し、ＡＧＥ測定のために脂質（図１０Ｂ）成分とアポタンパク質（図１０Ａ）成分に分け、又、ｏｘ−ＬＤＬ（図１０Ｃ）の存在についてアッセイした。２００ｍＭグルコースとインキュベートしたＬＤＬ（△）。２００ｍＭグルコース及び３００ｍＭアミノグアニジンとインキュベートしたＬＤＬ（▲）。単独でインキュベートしたＬＤＬ（○）。アミノグアニジンとインキュベートしたＬＤＬ（●）。示した値は同じ測定を二重に行った平均値である。図１１Ａは、ＬＤＬとＡＧＥ−ペプチドのインキュベーションをアミノグアニジンを共存させて又は共存させないで行った後に単離したアポＢ上へのＡＧＥの蓄積量であってＡＧＥ用特殊ＥＬＩＳＡで検出したものを図表化したヒストグラムを示す。図１１Ｂは、ＬＤＬとＡＧＥ−ペプチドのインキュベーションをアミノグアニジンを共存させて又は共存させないで行った後に単離した脂質画分中のＡＧＥの蓄積量であってＡＧＥ用特殊ＥＬＩＳＡで検出したものを図表化したヒストグラムを示す。図１２Ａは、非糖尿病（正常）又は異なる数の糖尿病性合併症を有する糖尿病のヒト研究用被験者、及び末期腎疾患（ＥＳＲＤ）を有する糖尿病患者から得られた血清ＬＤＬから単離したアポＢ上へのＡＧＥの蓄積量（ＡＧＥ用特殊ＬＩＳＡで検出した）を図表化したヒストグラムを示す。図１２Ｂは、非糖尿病（正常）又は異なる数の糖尿病性合併症を有する糖尿病のヒト研究用被験者、及び末期腎疾患（ＥＳＲＤ）を有する糖尿病患者から得られたＬＤＬから単離した脂質画分中のＡＧＥの蓄積量（ＡＧＥ用特殊ＥＬＩＳＡで検出した）を図表化したヒストグラムを示す。図１２Ｃは、非糖尿病（正常）又は異なる数の糖尿病性合併症を有する糖尿病のヒト研究用被験者、及び末期腎疾患（ＥＳＲＤ）を有する糖尿病患者から得られた血漿ＬＤＬ中の酸化ＬＤＬの蓄積量（ＭＤＡ当量として検出した）を図表化したヒストグラムを示す。図１３は、非糖尿病（正常）又は末期腎疾患を有するか若しくは有さない糖尿病のヒト研究用被験者から得られた血漿ＬＤＬから単離したアポＢ上へのＡＧＥの蓄積量（ＡＧＥ用特殊ＥＬＩＳＡで検出した）を図表化したヒストグラムを示す。図１４は、プラシーボに対するアミノグアニジンの２８日間試験の末日における糖尿病患者のＬＤＬレベル（処理前ベースラインのパーセントとして示した）の相対的低下を図表化したヒストグラムを示す。発明の詳細な説明用いた専門用語を簡略化するため及び本発明のより深い理解が容易になるようにここでは多数の略号を用いた。次の略号が代表的なものである。ここで用いる場合“ＡＧＥ−”という用語は、それが修飾する化合物であって進行グリコシル化最終産物又はＡＧＥを生成する化合物のいずれかとそのように修飾される脂質部分の如き化合物との反応生成物としての化合物のことをいう。ＡＧＥ−脂質は、ここで定義する脂質をＡＧＥ−ペプチドの如きＡＧＥと反応させることによりin vitroで生成させることも、脂質を還元糖、例えば、グルコースの如き化合物と、その脂質が修飾されてＡＧＥ−脂質が生成するまで反応させることによりin vitro又はin vivoのいずれかで生成させることもできる。 “脂質”はその慣用的意味において用いられ、アルコールのような有機溶媒中では程度の差はあるが多少とも可溶性であって、水性媒質中には比較的不溶性の物質のことをいう。かくして“脂質”という用語には、鎖の長さが約２炭素原子しかないものから約２８炭素原子もあるものまで変化する化合物が含まれる。更に、この化合物は飽和でも不飽和でもよく、そして直鎖の形でも分枝鎖の形でもまた非縮合環構造の形でも縮合環構造の形でもよい。更に、これら脂質化合物は、少なくとも１の一級アミノ基又は他の架橋可能な若しくは別の反応性の基がその分子内に存在する限り、場合によっては他の部分と連結していてもよい。 “脂質関連物質”という用語は、ここでは、慣用的に理解されかつ上で定義した脂質のみならず、脂質部分に関連して見出される粒子、凝集塊及びそれらの成分を包含する。ここに含められる脂質関連物質の例には、脂肪酸、ステロール型分子、トリグリセリド、リン脂質、及びアポリポタンパク質を含むリポタンパク質が含まれる。好ましい脂質関連物質は、ＡＧＥ反応性基として１又は２以上の一級アミノ基を含む。ＡＧＥ及びＡＧＥを生成する化合物と反応性の少なくとも１の一級アミノ基を含むことが特に好ましい。第一に興味のある脂質関連物質は、反応して進行グリコシル化最終産物を生成する物質である。その結果得られるＡＧＥには、便利でありかつ一貫性を持たせるため、ここでは“ＡＧＥ−脂質”の共通名称が与えられる。この名称は、文字通りに脂質部分のみとで生成するＡＧＥだけでなく、アポリポタンパク質の如き脂質関連物質とで生成するＡＧＥをもその範囲内に含むことになる。従って、本発明に従って“ＡＧＥ−脂質”という用語を用いる場合、かかる多様な物質をその範囲内に含めることを意図している。本発明の診断及び治療方法に肯定的に用いられるＡＧＥ−脂質の調製に好ましく用いられる脂質関連物質は、ホスファチジルエタノールアミンの如き一級アミノ基を含有するリン脂質化合物である。本発明にやはり有用な他の脂質関連物質は、リポタンパク質、特にアテローム硬化症に関係するもの、即ち、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、及びＬＤＬのタンパク質成分を含むアポリポタンパク質、特にアポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）である。ＡＧＥ−脂質を調製するのに用いることができるＡＧＥには、２−（２−フロイル）−４（５）−（２−フラニル）−１Ｈ−イミダゾール（ＦＦＩ）；５−ヒドロキシメチル−１−アルキルピロール−２−カルボアルデヒド（ピラリン）；非蛍光性モデルＡＧＥである１−アルキル−２−ホルミル−３,４−ジグリコシルピロール（ＡＦＧＰ）；カルボキシメチルリシン；及びペントシジンの如き種が含まれる。これら化合物は単離されており、そしてアマドリ反応物の生成後に生成する反応生成物として特性決定されている。しかしながら、ＡＧＥのin viv o生成及び脂質のＡＧＥ又はＡＧＥを生成する化合物とのインキュベーションは、上に列挙していないＡＧＥ種を生成するようである。従って、本発明はこれら明確な化合物に限定されない。というのは、他のＡＧＥ化合物が生成することもそれがここでの教示に従う役割を有することもあるからである。かくして、ＡＧＥという用語は、脂質と反応する進行グリコシル化最終産物だけでなく、その反応に従ってもたらされる特定の形態を意味することができる。先に述べたように、本発明は、脂質酸化及び代謝、及び前述の部分で定義した脂質関連物質上での進行グリコシル化最終産物（ＡＧＥ−脂質）のin vivo生成との間にある関係が存在するという発見に部分的に関連する。特に、ここに示すデータにより支持されるように、ＡＧＥ−脂質は、脂質酸化を開始し、ＬＤＬのアポリポタンパク質Ｂ部分と適切なＬＤＬレセプターの間の正常なレセプター結合を妨害することによりＬＤＬ浄化のための体内メカニズムの能率と作用を低下させ、そして低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の如き血漿脂質のレベルの増加をもたらすようである。この後の方の観察は、アポＢのＬＤＬレセプター結合ドメインに隣接するか又はその内側にあるＡＧＥ生成のための部位の存在を反映していると考えられる。アポＢ上でのＡＧＥの生成の結果、付随するＬＤＬレセプターとの相互作用の阻害でアポＢがマクロファージ“スカベンジャー”レセプターによる優先的取り込みを受け易くなり、その結果、ＬＤＬ分子がマクロファージにより貧欲に消費され、アテローム硬化症性溶血斑形成に寄与する望まれない泡沫細胞が生成するものと考えられる。従って、治療戦略として第一に興味深くかつ重要なのは、１を越える方法でアテローム硬化症を治療することである。第一は、血漿ＬＤＬレベルを増加するＡＧＥ生成及び脂質酸化を阻害することによるものであり；そして第二は、ＬＤＬレセプターによるアポＢ取り込みの十分な官能価を取り戻すこと、及びマクロファージによるＬＤＬの消費による望まれない泡沫細胞の生成を防ぐことである。本発明の追加の側面を形成する本発明による更なる発見は、脂質の酸化はＡＧＥ−脂質生成により開始されるのであるが、それが一定の脂質酸化副生成物の循環により更に永続するという観察結果である。また、マロニルジアルデヒド様化合物の如き脂肪酸酸化生成物も、フリーの利用可能なアミノ基との反応によってタンパク質修飾に関与する。従って、適切な中和剤との反応によりこれら酸化副生成物の活性を中和することが更なる治療戦略として望ましい。本発明の一部として、先に特定しかつここに詳細に列挙したアミノグアニジン、α−ヒドラジノヒスチジン、リシン及び対応する類縁体を含む進行グリコシル化の阻害物質が、in vivoで生成するＭＤＡ様副生成物とそのようなやり方で反応してそれらを中和し、もはやそれらがタンパク質の修飾に関与しないようにすることを見出しかつ確認した。本発明が作用の特定のメカニズムに限定され又は依存するとは考えられず、前述の部分は単に際立った阻害物質の有益な活性を観察したことを例を挙げて説明したものに過ぎない。上記の事柄からみて、本発明は、アミノグアニジンの如き物質を投与して、in vivoＡＧＥ−脂質生成を阻害して、引いては脂質酸化の開始を阻害し、そして進行中の脂質酸化のあらゆる副生成物と反応してこれら副生成物とタンパク質との反応を上記のように阻止するという、二元的治療戦略を包含する。より詳しくは、本発明は、脂質代謝を高めるか又は衰えさせるために、かかる代謝の制御及び調整を含む脂質代謝を調節する方法であって、かかる治療を必要とする哺乳動物又は宿主に、血清からの脂質の認識及び除去を修飾できる特定の物質又は特定の一群の物質を脂質代謝調節有効量投与することによる方法に関する。重要なことは、これら物質が、ＡＧＥ、特にＡＧＥ−脂質の生成を制御できることである。選り抜きの場合、例えば、治療のために予め決められた量のＡＧＥ−脂質を作用させて脂質代謝を調整するために宿主のシステムを剌激する場合には、この方法は、ここに詳細に記載した手段によるかかるＡＧＥ−脂質の投与を含む。進行グリコシル化を受け易い脂質は、先に列挙したように、アミン含有脂質、低密度リポタンパク質、及びアポリポタンパク質から選ばれ、特に最後に挙げた例ではアポＢが選ばれる。この方法は、患者において低密度リポタンパク質レベルを下げるために実施することができ、例えば、高コレステロール血症、アテローム硬化症、及び腎不全の予防及び／又は治療に適用可能である。この方法に用いることを意図する物質には、進行グリコシル化最終産物に対する抗体；進行グリコシル化最終産物に結合してそれを中和できる、ＡＧＥレセプター及びその活性断片を含むリガンド；及び進行グリコシル化最終産物の生成を阻害できる化合物からなる群から選ばれる物質が含まれる。適する抗体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、及びそれらの活性断片が含まれ、それら全ては以下に詳細に説明する通りである。これら物質は、効果的な脂質代謝を取り戻すために及び相応じて脂質酸化を抑えるために投与される。前述の部分は、脂質代謝が、ＬＤＬレセプターへのアポリポタンパク質、つまりアポＢの有効な結合により部分的に制御されることを認めるものであるから、本発明のこの側面に用いようと意図されるあらゆる化合物又は物質は、アポＢのレセプター結合ドメインと相互作用してそれに隣接する又はその内側でのＡＧＥの生成を防ぎ、そしてかかるレセプター結合ドメインがＬＤＬレセプターにより認識されるようにできるであろう。先に挙げたようにそして後に示す実施例のうちの１つにより支持されるように、かかるＡＧＥ−ペプチドが、ＡＧＥ−脂質の生成においてある肯定的な役割を持っており、そして脂質酸化の促進と加速及びその種々の成り行きに同じように関与していることが認められた。従って、かかる活性が阻害されなければならない場合には、かかるＡＧＥ−ペプチドをそれらとの反応によって中和して、それらが更なるＡＧＥ生成を促進するのを阻止することが望ましい。これに関連して、アミノグアニジン及びアミノグアニジン様阻害性化合物を投与することができる。上の治療戦略に付随するのが、測定可能な変量に脂質酸化を含むことができる状態の発症及び経過を確認するのに用いることができる有効な診断手順であって、脂質の進行グリコシル化の程度の検出及び測定に頼ることによるものである。より詳しくは、ＡＧＥ−脂質生成を本発明者らにより開発されたＡＧＥ−ＥＬＩＳＡの如き手段により検出して、ＡＧＥ−脂質生成の程度を確認し、それによって脂質酸化の程度及び血漿ＬＤＬレベルへの必然的作用を評価することができる。従って、脂質酸化及び血漿ＬＤＬレベルの測定可能な増加は高コレステロール血症の発生及び発症及びアテローム発生を示すであろうから、本法を有効に用いて血管病、特にアテローム硬化症の発生を診断及び追跡することができる。同様に、ＡＧＥ−脂質の存在は、糖尿病性網膜症、糖尿病及び非糖尿病性ニューロパシー等の如き糖尿病状態の発生及び存在も反映するから、本診断方法はこれら状態の発生及び重さをも測定するのに用いることができる。進行グリコシル化最終産物生成が、ＬＤＬレセプターによるアポＢの認識及びそれへのアポＢの結合によって低密度リポタンパク質を浄化する能力に影響を及ぼすという効果に関し、本発明は、アポＢのレセプター結合ドメイン、特に直ちにＡＧＥ生成を受け易いレセプター結合ドメインの部分の完全な同定を意図しておりかつ包含している。例えば、後に記載するように、本発明者らは、このレセプター結合ドメインの特定のセグメントが、アポＢとの進行グリコシル化最終産物の生成のための部位として最も役立ちそうなフランキングアルギニン残基を有するリシンをで明示していることを発見した。従って、このレセプター結合ドメインは、薬物発見アッセイの焦点として役立ち得る。そのアッセイでは、例えば、アポＢを固定化し、そしてその結合ドメイン上でのＡＧＥの生成を促す物質並びに試験を受けるある量の特定の薬物又は阻害性物質の両方とインキュベートする。次いで、その薬物がＡＧＥと結合しそれによってアポＢＡＧＥ生成を阻害するか又はアポＢと直接結合しそれによって同様のものを阻害するかのいずれかに役立つ程度を測定することができよう。この特有のアッセイをＬＤＬレセプターに関連させてレセプターアッセイとして立案して、アポＢレセプター結合ドメインをＡＧＥ／ＡＧＥ生成物質及び試験を受ける特定の薬物と共にインキュベートした後に無力化されるかどうかを確認することができよう。薬物発見アッセイについての両方の可能性がここで意図されており、本発明の範囲内であると考えられる。本発明の診断方法及び治療方法の両方が、ＡＧＥ−脂質の生成に影響力を有する物質の使用を意図している。これら物質の中で、ＡＧＥに対する抗体及び他のリガンドを調製して使用することができる。これら用語を以下で定義する。 “抗体”という用語には、特定のエピトープに結合する抗体及びその断片を含むあらゆるイムノグロブリンが含まれ、かかる一般的定義をここに適用しようとするものである。従って、この用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体及びキメラ抗体を包含し、この最後に挙げたものは米国特許第４,８１６,３９７号及び４,８１６,５６７号に更に詳細に記載されている。また“抗体結合部位”は、抗原に特異的に結合する重鎖及び軽鎖可変部及び超可変部から構成される抗体分子の構造部分である。好例となる抗体には、無傷イムノグロブリン分子、実質的に無傷のイムノグロブリン分子、及び活性な結合部位を含有するイムノグロブリン分子の部分の如き抗体分子が含まれ、それら部分には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂及びＦ（ｖ）のような当該技術分野で既知の部分が含まれる。これら部分はここに関係する治療方法に用いるのに好ましい。抗体分子のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）₂部分は、実質的に無傷の抗体分子でのそれぞれパパイン及びペプシンのタンパク質分解反応によって周知の方法により調製される。例えば、Theofilopolousらへの米国特許第４,３４２,５６６号を参照のこと。（ここで引用したこの文献の開示内容は参照によりここに組み入れられるものとする。）Ｆａｂ’抗体分子部分も周知であって、Ｆ（ａｂ’）₂部分から得られ、これら２つの重鎖部分を繋いでいるジスルフィド結合をメルカプトエタノールなどで還元した後に、得られたタンパク質メルカプタンをヨードアセトアミドの如き試薬でアルキル化するものである。その種々の文字通りの形の“モノクローナル抗体”という用語は、特定の抗原と免疫反応することができるただ１種の抗体結合部位を有する抗体のことをいう。かくして、モノクローナル抗体は、典型的には、それが免疫反応する何らかの抗原に対して単一の結合親和性を示す。それぞれが異なる抗原に対して免疫特異性である複数の抗体結合部位を有する抗体、例えば、二重特異性（キメラ）抗体を調製してもよい。同様に“リガンド”という用語には、ＡＧＥ結合パートナーに結合するであろうＡＧＥ誘導体のような物質が含まれ、それにはＡＧＥとアビジン又はビオチンとの反応により調製されるような物質、又は合成ＡＧＥ誘導体の調製物が含まれるであろう。この合成ＡＧＥ誘導体は、グルコース、グルコース−６−ホスフェート（Ｇ−６−Ｐ）、フルクトース及びリボースの如き還元糖；及びペプチド；タンパク質；及びウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、アビジン、ビオチン誘導体の如き他の生化学物質；及びアルカリ性ホスファターゼの如き酵素から調製することができる。同様に、進行グリコシル化を受けた酵素及び他のキャリヤーも、本発明のあらゆるアッセイにおいてリガンドとして役立つことができる。従って、炭水化物、タンパク質、合成ポリペプチド、脂質、及び生体適合性の天然樹脂及び合成樹脂の如きキャリヤー、及び同様物のあらゆる混合物を、進行グリコシル化最終産物を生成させるために糖と反応させることができ、そしてそれによってそれらは本法に有用であるといえる。本診断方法は、それらの範囲内に全ての前述の物質を含めるよう意図されている。 “ＡＧＥ結合パートナー”という用語は、抗ＡＧＥ抗体及び他の細胞性ＡＧＥ結合タンパク質又はＡＧＥのためのレセプターにまで及ぶことを意図しているので、ＡＧＥは、ペプチド、分子及び細胞上で見出され得ることになる。上で説明したように、本発明は、ＡＧＥ−脂質の調製及び種々の診断及び治療関係におけるその使用にまで及ぶ。ＡＧＥ−脂質の生成に関しては、ＡＧＥを生成する化合物は典型的には還元糖である。還元糖又はＡＧＥ自体が脂質と反応してＡＧＥ−脂質を生成する。しかしながら、in vitro法では、おそらく還元糖の如きＡＧＥを生成する化合物が用いられるだろう。還元糖の例には、グルコース、フルクトース、リボース及びグルコース−６−ホスフェートが含まれる。ＡＧＥ−脂質は、皮膚の治療、若返り又は改編において肯定的に用いることができる。例えば、ＡＧＥ−脂質を、皮膚の小疾患を治療するのに又は皺の除去若しくは皺の除去の誘導の如き皮膚を若返らせるのに又は改編するのに有効な量を投与することができる。限定としてではなく説明としてであるが、ＡＧＥ−脂質を皮膚に施用すると、天然に存在するＡＧＥ−化合物を概して沈着部位から除去する能力を有する細胞、例えば、マクロファージを引き寄せることができる。その結果、in vivoで生成して天然に沈着したＡＧＥ−化合物を除去することができ、そしてＡＧＥ−脂質及び他のＡＧＥも、細胞、例えば、マクロファージ、Ｔ細胞及び内皮細胞及び線維芽細胞が、種々の物質、例えば、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＧＦ−１、ＰＤＧＦ及び他の化合物の如き、サイトカイン、成長因子及びエフェクター分子、及びコラゲナーゼを分泌するように誘導することができるので、それによって生物学的過程、例えば、皮膚改編及び創傷治癒を調節することができる。ＡＧＥ−脂質は、化粧用途又は医学用途のために局所製剤の形で、例えば、クリーム剤、ゲル剤又は軟膏剤の形で皮膚に施用しても、他の成分と共に医薬製剤中に組み入れてもよい。同様に、ここに記載したＡＧＥ−脂質化合物の局所用途には、皮膚の小疾患又は皮膚病の治療、例えば、皺、アクネ、創傷治癒等に有用な他の物質が含まれる。本発明のＡＧＥ−脂質を皮膚に施用して他の医薬品の効果又は用途を修飾することもできる。例えば、ＡＧＥ−脂質を、抗炎症又は抗感染症治療剤又は局所的若しくは経皮的に有効な他の化合物と共に皮膚に施用できよう。その上、かかるＡＧＥ−脂質は、一緒に投与した他の化合物の浸透性又は活性を高めることができる。更に、このＡＧＥ−脂質は、その系からのＡＧＥの除去に有効であるか又はその系からのかかる化合物の除去に機能する細胞又は他の内因性成分、例えば、抗体を引き寄せるように機能することができる。初期の部位にＡＧＥ−脂質を供給することにより、これら細胞及び他の成分をその施用領域に引き寄せて、他の有害な成分を除去するよう誘導することができる。本発明の他の側面は、あらゆる薬学的に許容できる形態、例えば、経皮、経口、非経口、局所形態（皮膚を経る形態、吸入、経粘膜、例えば、直腸、膣、口腔又は舌下形態）並びに他の投与経路により投与される他の投薬形態であることができる組成物に関する。かかる組成物は、典型的には、特定の疾患又は状態を治療するのに有効であるか、又は褐色色素及び他のアミロイド物質の生成を制御、低減又は排除しようと細胞若しくは抗体の活性を興味の対象である領域に引き寄せ、活性化又は誘導するのに有効であるＡＧＥ−脂質を含有する。この組成物中に存在するＡＧＥ−脂質の量、引いては投与される量は、治療下の特定の条件、並びに患者の年齢、体重及び状態に依存するであろう。また、本発明のＡＧＥ−脂質は、他の薬物又は治療剤の活性を高めるのに有用であり得る。例えば、ＡＧＥ−脂質を他の薬物と同時投与するか又は他の薬物と別々に投与して、ここで有用な好ましいＡＧＥ−脂質の脂溶性の効果を利用することができる。同様に、それら薬物を本質的に同時に用いて、ＡＧＥ−脂質及び／又は該他の薬物の活性を高める目的で、活性の薬理学的部位内で処理されなければならないか又はそこに必要であるか若しくは望まれる細胞又は他の生体成分、例えば、抗体を引き寄せることができる。本発明の他の側面は、リポソームの如き薬学的投薬形態に関する。リポソームは、ＡＧＥ−脂質の脂溶性、そのリポソームの相対的サイズ、そこに含有される他の治療剤の存在、意図する用途／活性の様式及び生体部位及び他の多数の要因に基づき、その外層上に存在するか又はその内部に入っているそのＡＧＥ−脂質と共に用いることができる。ここに記載した用途にとって好ましいＡＧＥ−脂質は、細胞性ＡＧＥ結合タンパク質又はＡＧＥ−レセプター並びに本発明に記載したＡＧＥ−脂質の他の物理的パラメーターを利用することができる。非限定的例として、合成及び天然に存在するＡＧＥ、つまりＦＦＩは、マクロファージ細胞により認識されそしてそれと反応性である（マクロファージ細胞はＦＦＩを認識するＡＧＥレセプターを有する）が、内皮細胞と特に反応性である訳ではない。かくして、ＡＧＥ−脂質を含有するリポソーム又は他の薬学的投薬形態をマクロファージ細胞を標的にするように送達しなければならない場合には、ＦＦＩ部分を含めることができる。このように、ＡＧＥレセプター活性の差及び異なるＡＧＥの反応性の差を利用することができる。同様に、本発明のＡＧＥ−脂質を用いてＡＧＥ−脂質に対する抗体を産生させることができ、そしてこれら抗体をここに記載する通りに用いることができる。例えば、哺乳動物にＡＧＥ−脂質から構成される免疫原を注射してからその哺乳動物の血清を採取することによって抗体生成を誘発することができる。かかる血清は、典型的には、ＡＧＥ−脂質を認識して結合する抗体を含有するであろう。これら抗体はポリクローナル抗体であっても本質的にモノクローナル抗体であってもよく、例えば、過免疫手順の如き適切な免疫感作手順を用いることによって調製することができる。従って、適切な融合、プレーティング、スクリーニング、分泌及び反復技術を用いて、用いた特定のＡＧＥ−脂質上の特異なエピトープを認識するモノクローナル抗体を得ることができる。このＡＧＥ−脂質、抗体及び組成物は、貯蔵食品又は他の生体物質の品質、保存又は分解の評価にも用いることができる。例えば、進行グリコシル化最終産物の存在及び濃度を確認することができる。この技術は、長期間の貯蔵で蓄積する進行グリコシル化最終産物の望ましくない濃度を確認するのに特に有用である。このＡＧＥ−脂質、抗体及び組成物は、一定の疾患の診断及び評価に用いることができる。例えば、体内の進行グリコシル化最終産物の位置及び濃度を確認できよう。この技術は、アテローム硬化症性溶血斑の如き進行グリコシル化最終産物の望ましくない濃度を確認するのに、又は真性糖尿病の如き疾患状態の合併症の確認にとって特に有用である。診断的に特に重要なのは、脂質が低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）であるＡＧＥ−脂質の確認である。ＬＤＬの場合には、グルコース又はＡＧＥ−ペプチドとのインキュベーションで、その脂質成分及びそのアポタンパク質成分の両方に連結したＡＧＥ部分が生成する。これらインキュベーションの間に酸化ＬＤＬ体がＡＧＥと同時に生成する。アミノグアニジン、並びにタンパク質の進行グリコシル化を阻害するための他の既知物質は、進行グリコシル化とこの酸化的修飾過程の両方を阻害する。糖尿病個体の血漿から単離したＬＤＬ検体を分析すると、アポタンパク質成分及び脂質成分の両方でＡＧＥのレベルが正常な非糖尿病個体と比較して増加していることが明らかになる。ＬＤＬ酸化のレベルもＡＧＥ修飾と有意に相関しており、進行グリコシル化がin vivoでの酸化脂質の生成に主要な役割を果たし得ること、及びこの活性はアミノグアニジンにより阻害されることを示している。かくして、標準的アッセイ操作による患者における高レベルのＡＧＥ−ＬＤＬの確認は、正確な糖尿病状態を確かめるためだけでなく、ＡＧＥ阻害物質での処置による如き治療法の効力を追跡するためにも用いることができる。特に好ましい態様においては、患者におけるＡＧＥ−ＬＤＬのレベルを用いて、その患者における糖尿病状態及び合併症の発症、重さ又は発生のおそれを診断することができる。更に、患者におけるＡＧＥ−ＬＤＬのレベルを用いて、その患者におけるアテローム硬化症及び関連状態の発症又は重さを診断することができる。この方法は、分析物に加えてＡＧＥ−脂質の１又は２以上の結合パートナー及び１又は２以上のリガンドを包含するアッセイを含む。従って、本アッセイ方法は、概して下記の工程を含む。Ａ．前記ＡＧＥ−脂質を含有する疑いがある少なくとも１の生体サンプルを調製し；Ｂ．前記サンプルに向けられた少なくとも１の対応する結合パートナーを調製し；Ｃ．前記サンプル、前記結合パートナーに対するリガンド及び前記結合パートナーからなる群から選ばれる物質に検出可能な標識を付し；Ｄ．工程Cからの標識物質を、標識されていない工程Ｃからの物質からなる群から選ばれる物質と接触させ；そしてＥ．前記未標識物質への前記標識物質の結合の程度について得られたサンプルを検査する。本発明による典型的な非競合アッセイでは、ＡＧＥ−脂質をメタノール中に容解させて乾燥によりアッセイプレート上に堆積させる。次いで、このアッセイプレートを水化してから抗ＡＧＥ第一抗体及びこの第一抗体に特異的な酵素結合第二抗体に曝す。適切な場合には洗浄工程を間に入れる。次いで、例えば、当該技術分野で周知の基質転化手順により酵素レベルを測定し、こうして並行して行ったスタンダードとの比較によりＡＧＥの量を測定することができる。本発明による典型的な競合アッセイでは、ＡＧＥ結合タンパク質又はＡＧＥレセプターを分析物及びリガンドと混合してから、そのリガンド又は分析物のいずれか又はそれら両方の結合活性を測定して興味の対象である進行グリコシル化最終産物の程度及び存在を確認する。このようにして、このアッセイの成分間の結合量の差をＡＧＥ−脂質の存在及び量を確認するために役立てる。本発明は、対応するＡＧＥ−脂質の存在を測定することにより、哺乳動物における剌激された自発性又は特発性病的状態の存在を検出する方法にも関する。より詳しくは、ここで説明した技術の如きアッセイ技術により、適切に標識した量のＡＧＥ−脂質に対するここに記載した少なくとも１の結合パートナーを用いて、ＡＧＥの活性を直接追跡することができる。また、ＡＧＥを用いて結合パートナー又はアンタゴニストを起こすことができ、それらを引き続き標識して媒質中に導入し、その中のＡＧＥの存在及び量について試験し、それによってその媒質を抜き取った宿主の状態を評価できよう。かくして、調製することができるＡＧＥ−脂質及びそれに対するあらゆる結合パートナーの両方を、例えば、未標識であっても、放射性付加、ナトリウム・ボロトリチイド（sodium borotritiide）での還元又は放射性ヨウ素化のいずれかにより標識されていてもよいＡＧＥに対するレセプター又は他のリガンドを用いるラジオイムノアッセイの如きイムノアッセイを含む種々の診断技術に関連させて用いることができる。イムノアッセイでは、ＡＧＥ−脂質に対するコントロール量の結合パートナーを調製して、酵素、蛍光を発する化合物及び／又は放射性元素の如きもので場合により標識し、次いで、哺乳動物の組織又は液体サンプル中に導入することができる。この標識物質又はその結合パートナーがサンプル内の部位と反応する機会を持った後、得られたものを既知技術により検査することができ、この既知技術は、付けた標識の性質で変動してもよい。これら研究用に最も普通に用いられる標識は、放射性元素、酵素、紫外光に曝したときに蛍光を発する化学物質、及びその他のものである。放射性元素の適する例には、³Ｈ、¹⁴Ｃ、³²Ｐ、³⁵Ｓ、³⁶Ｃｌ、⁵¹Ｃｒ、⁵⁷Ｃｏ、⁵⁸Ｃｏ、⁵⁹Ｆｅ、⁹⁰Ｙ、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、及び¹⁸⁶Ｒｅが含まれる。放射性標識の場合には、そうしたものは上のアイソトープの１種で調製され、既知の現在利用可能な計数操作を用いることができる。標識が酵素である場合は、検出は、現在利用されている比色法、分光光度法、蛍光分光光度法、温度測定法、電流滴定法又は気体測定法の当該技術分野で既知のいずれかの方法により行うことができる。酵素は、進行グリコシル化最終産物、それらの結合パートナー又はキャリヤー分子に、カルボジイミド、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド等の如き架橋分子との反応により結合させることができる。これら操作に用いることができる多くの酵素は既知であるので利用できる。好ましい酵素は、ペルオキシダーゼ、β−グルクロニダーゼ、β−Ｄ−グルコシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼ＋ペルオキシダーゼ、ヘキソキナーゼ＋ＧＰＤアーゼ、ＲＮＡアーゼ、グルコースオキシダーゼ＋アルカリ性ホスファターゼ、ＮＡＤオキシドレダクターゼ＋ルシフェラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ＋ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ＋ホスホエノールピルビン酸デカルボキシラーゼ、及びアルカリ性ホスファターゼである。米国特許第３,６５４,０９０号；３,８５０,７５２号；及び４,０１６,０４３号を他の標識物質及び方法を開示している例として引用する。格別な酵素検出物質は、ヤギの体内で調製されイソチオシアネートを介してアルカリ性ホスファターゼと結合した抗ウサギ抗体である。多くの蛍光物質が既知であるので標識として用いることができる。これらには、例えば、フルオレセイン、ローダミン及びオーラミンが含まれる。格別の蛍光検出物質は、ヤギの体内で調製しイソチオシアネートを介してフルオレセインと結合させた抗ウサギ抗体である。本ＡＧＥ−脂質を用いてそれ自体に対する抗体を作ることができ、その抗体は周知のハイブリドーマ技術を含む標準的方法により産生させそして単離することができる。その抗体は、あたかもそれらが抗原であるかのように別の種の体内で抗体を生じさせるのに用いることができる。両方の型の抗体を用いて、食品中であろうと哺乳動物の体内であろうと脂質塊内のＡＧＥ−脂質の量及び位置を確認することができる。便宜上、ＡＧＥ−脂質に対する抗体をここではＡｂ₁といい、別の種の体内で起こった抗体をＡｂ₂ということにする。グリコシル化を受けた疑いがある脂質塊内のグリコシル化の度合いは、かかる確認に適用可能な通常の免疫学的操作により確認することができる。多くの有用な操作が既知である。特に有用である３種のそのような操作では、検出可能な標識で標識されたＡＧＥ−脂質、検出可能な標識で標識された抗体Ａｂ₁、又は検出可能な標識で標識された抗体Ａｂ₂のいずれかが用いられる。それら操作は、次の等式により略述することができる。＊印はその粒子が標識されていることを示し、そして“Ａ１”はＡＧＥ−脂質を表す。Ａ．Ａ１^*＋Ａｂ₁＝Ａ１^*Ａｂ₁ Ｂ．Ａ１＋Ａｂ₁ ^*＝Ａ１Ａｂ₁ ^* Ｃ．Ａ１＋Ａｂ₁＋Ａｂ₂ ^*＝Ａ１Ａｂ₁Ａｂ₂ ^* これら操作及びそれらの適用は当業者に全くよく知られているので、本発明の範囲内で用いることができる。“競合”操作、つまり操作Ａは、米国特許第３, ６５４,０９０号及び３,８５０,７５２号に記載されている。操作Ｃ、つまり“ サンドイッチ”操作は、米国再発行特許第３１,００６号及び米国特許第４,０１６,０４３号に記載されている。“二重抗体”又は“ＤＡＳＰ”操作の如きなお他の操作が知られている。各場合において、ＡＧＥ−脂質物質は１又は２以上の抗体又は結合パートナーと複合体を形成し、その複合体の１構成要素が検出可能な標識で標識されている。複合体が形成されたという事実及び、必要ならその量は、標識の検出に適用できる既知の方法により確認することができる。上記の事柄から、Ａｂ₂の特徴的な特性はそれがＡｂ₁と反応するということであることが分かるであろう。これは、１種の哺乳動物種の体内で生じたＡｂ₁を別の種の体内で抗原として用いて抗体Ａｂ₂を生じさせたからである。例えば、Ａｂ₁をウサギの体内で生じさせ、そしてヤギの体内でＡｂ₁を抗原として用いてＡｂ₂を生じさせることができる。従って、Ａｂ₂はヤギの体内で生じた抗ウサギ抗体となろう。従って、食品中であろうと動物の体内であろうとサンプル中のＡＧＥ−脂質を明示するための検査キットであって、下記のものを含むキットを調製することができる。（a）予め決められた量の少なくとも１の標識された免疫化学反応性成分であって、ＡＧＥ−脂質又はＡＧＥ結合パートナーを検出可能な標識に直接又は間接に付けることにより得られた成分；（b）他の試薬；及び（c）前記キットを使用するための指図書。より具体的には、この診断検査キットは下記のものを含む。（a）既知量の一般に固相に結合して免疫吸着剤を形成しているか又は代わりに適当な標識に結合したＡＧＥ−脂質（又は結合パートナー）、又は複数のそうした成分など（又はそれらの結合パートナー）；（b）必要なら他の試薬；及び（c）前記検査キットを使用するための指図書。更なる態様では、この検査キットを上で述べた目的のために調製して用いることができる。それは、予め決められた手順（例えば“競合”、“サンドイッチ” 、“二重抗体”など）に従って使われるものであり、下記のものを含む。（a）ＡＧＥ−脂質又はその結合パートナーを検出可能な標識にカップリングさせることにより得られた標識成分；（b）その少なくとも１の試薬が結合パートナー又は固定化結合パートナーである１又は２以上の追加の免疫化学試薬であって、結合パートナーが（i）標識成分（a）と結合できる結合パートナー；（ii）標識成分（a）の結合パートナーと結合できる結合パートナー；（iii）少なくとも１の測定されるべき成分と結合できる結合パートナー；及び（iv）少なくとも１の測定されるべき成分の少なくとも１の結合パートナーと結合できる結合パートナー；からなる群から選ばれる免疫化学試薬；及び（c）該ＡＧＥ−脂質とそれに対する特異性結合パートナーの間の免疫化学反応の１又は２以上の成分の検出及び／又は測定のための手順を行うための指図書。例として、固相アッセイ系又はキットは、固体支持体を、結合した結合パートナーと標識ＡＧＥ−脂質又は結合したＡＧＥ−脂質と標識結合パートナーのいずれかと共に含むことができる。次いで、アッセイされるべきサンプルをその結合した又は未結合の試薬と接触させると、その標識物質とサンプル中の未標識結合パートナー間の競合反応で、従属量の前者が固体支持体上に停留するであろう。そこで、それを正確に定量的に同定することができる。特定の競合アッセイ系のこの説明は、発明の実施可能な開示を提示する義務の履行において、説明だけの目的でここに示したものである。本発明では、その精神及び範囲に属する種々の診断手順が意図されていることを理解すべきである。先に説明したように、本発明は、メイラード及び非酵素的グリコシル化過程の進行を完全に阻害しないとしてもそれを遅らせようとして、グリコシル化を受けている脂質を処理する潜在的な方法を包含する。この方法は、グリコシル化進行中の脂質塊に投与したときに、それらの構造及び／又は反応性により、その脂質の継続的グリコシル化を促進するというよりもむしろ阻害することに役立つアンタゴニストの開発を含む。例えば、この発明のＡＧＥ−脂質を、それらの抗原との架橋潜在力のためにアジュバントとして、そしてＡＧＥの除去をもたらすためにマクロファージを活性化するマクロファージ剌激物質としても用いることができる。脂質−ＡＧＥをアジュバントとして用いると、それは“弱小”である抗原と反応又は架橋する。抗原へのＡＧＥ−脂質の添加は、ＡＧＥ−脂質部分の存在のために強い反応をもたらす抗原をもたらし、かくしてもとの抗原の免疫原性が向上する。本発明はこの方法に限定されるどころか、むしろそれをその範囲内に包含するものである。先に述べたように、食細胞は、特定の化学構造体を認識してそれらに結合するその表面上のレセプターにより、異常な高分子を認識して除去することができる。このようにしてひとたび異常高分子を認識すると、食細胞はその高分子を吸収し、次いでそれを分解することができる。ある場合においては、食細胞は、その分子又は粒子を吸収できない場合にそれを細胞外で分解する助けとするため又はかかる分解を共に行う他の細胞を作るために、更に酵素及び他の因子を分泌することができる。損傷を受けたタンパク質が除去された後は、正常組織の新たな成長が続いて起こり、そして害された領域の正常機能を回復することができる。体内の食細胞は多数の型の白血球を含む。白血球の１つの型である単球は、骨髄中で作られ、しばらくの間血中を循環したあと組織に入って、そこでマクロファージになる。先に説明したように、本発明は、単球及びマクロファージを含む食細胞を剌激化合物に曝して、認識及び親和性に関するこれら細胞の能力及び進行グリコシル化最終産物を分解する能力を強化することにより修飾することができるという発見にまで及ぶ。特に、これら細胞を一定の剌激化合物に曝すと、これら細胞上で発生するレセプターの数が増加すること及びそれによって進行グリコシル化最終産物の認識及び分解に関するこれら細胞の能力及び効率が増加することが分かった。本発明のＡＧＥ−脂質は、剌激化合物として機能することができる。従って、本発明のこの方法は、一般に、動物身体を剌激物質ＡＧＥ−脂質に曝し、その身体、特にその食細胞を活性化し、そして進行グリコシル化を受けた標的高分子の認識及び除去を向上させることを含む。種々の治療方法及び用途がここでは適用可能である。１つの好ましい用途は、哺乳動物におけるアミロイド又は褐色色素の如きタンパク質性又は脂肪性堆積物の処置又は除去のための用途である。ＡＧＥ−脂質、ＡＧＥ−脂質に対する抗体、又はＡＧＥ−脂質の生成を阻害する化合物を、かかる治療を必要とする哺乳動物に、前記褐色色素を処置、除去又はその除去を起こさせるのに有効な量投与する。他の好ましい用途は、皮膚障害、例えば、皺の治療又は予防のための用途である。ＡＧＥ−脂質、ＡＧＥ−脂質に対する抗体、又はＡＧＥ−脂質の生成を阻害する化合物を、哺乳動物に、皺の治療又は予防に有効な量投与することができる。全ての投与形態が可能であり、最も好ましい投与経路は、薬学的に許容できる投薬形態での局所適用である。本発明を作用の特定のメカニズムに限定するものではないが、このＡＧＥ−脂質は、直接的に作用して正又は負の代謝効果を有することも、例えば、サイトカイン又はマクロファージ細胞又は免疫媒介物質の活性に影響を及ぼすなどにより間接的に作用して、例えば、それがまた、望ましい治療効果を生み出すことができる。やはり先に述べたように、本発明は、タンパク質の進行グリコシル化の阻害物質として以前に同定された一定の化合物も脂質進行グリコシル化最終産物の生成を阻害し、更にマロニルジアルデヒド様脂肪酸酸化生成物と直接反応するという発見に及ぶ。タンパク質内での進行グリコシル化最終産物生成のこれら阻害物質は、米国特許第４,７５８,５８３号に幅広く記載されており、その開示内容は参照によりここに組み入れられるものとする。これら化合物には、初期グリコシル化産物のカルボニル基と反応する化合物が含まれる。かかる進行グリコシル化阻害物質の代表例は、アミノグアニジン、リシン及びα−ヒドラジノヒスチジンである。これら特有の化合物に加えて、タンパク質の進行グリコシル化を阻害できる他の物質が同様に同定されており、同じように脂質の進行グリコシル化を阻害するのに利用可能である。これら物質は、米国特許第４，９０８，４４６号；４，９８３，６０４号；５，１４０，０４８号；５，１７５，１９２号；５，１１４，９４３号；５，１３７，９１６号；５，１３０，３３７号；５，１００，９１９号；及び５，１０６，８７７号に記載されており、その開示内容も同様に参照によりここに組み入れられるものとする。従って、かかる化合物には、例えば、次の一般式を有する種々のヒドラジン誘導体及びそれらの薬学的に許容できる酸付加塩が含まれる。〔式中、Ｒは式の基であり、そしてＲ₁は水素又は１〜６炭素原子の低級アルキル基、ヒドロキシエチル基であるか、又はＲ₂若しくはＲ₄と一緒に２〜４炭素原子の低級アルキレン橋を形成してもよく；Ｒ₂は水素、アミノ、ヒドロキシ、１〜６炭素原子の低級アルキル基、又はＲ₁若しくはＲ₃と一緒になって２〜４炭素原子の低級アルキレン橋であり；Ｒ₂は式（式中、ｎは２〜７の整数であり、Ｒ₆とＲ₇は独立して１〜６炭素原子の低級アルキル基であるか又はシクロアルキルの一部若しくは少なくとも１が窒素である１〜２ヘテロ原子を含有する複素環の一部を一緒に形成し、そして前記ヘテロ原子の２つ目は窒素、酸素及び硫黄からなる群から選ばれる。但し、該複素環の前記ヘテロ原子の２つ目が窒素であってピペラジン環を形成するときは、それは該ピペラジン環の１つ目の窒素上の化合物の部分と同一の置換基により場合により置換されていてもよい。）のアミノルキレン基であってもよく；Ｒ₃は水素、１〜６炭素原子の低級アルキル基、又はＲ₂若しくはＲ₄と一緒になって２〜４炭素原子の低級アルキレン橋であり；Ｒ₄は水素、１〜６炭素原子の低級アルキル基、又はＲ₁若しくはＲ₃と一緒になって２〜４炭素原子の低級アルキレン橋であり、又はアミノ基であり；Ｒ₅は水素又は１〜６炭素原子の低級アルキル基である。但し、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、及びＲ₅の少なくとも１が水素以外のものであるか；又はＲが１０炭素原子までのアシル又は低級アルキルスルホニル基でＲ₁が水素である。〕ここにいう低級アルキル及び低級アルコキシ基は、１〜６炭素原子を含有し、メチル、メトキシ、エチル、エトキシ、プロピル、プロポキシ、ブチル、ブトキシ、ペンチル、ペンチルオキシ、ヘキシル、ヘキシルオキシ及び対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。ここにいうアシル部分は、２〜１０炭素原子を含有する低級アルキル、アリール、及びヘテロアリールカルボン酸の残基である。それらは、アセチル、プロピオニル、ブタノイル、バレリル、ヘキサノイル及び対応するそれらの高級鎖及び分枝鎖類縁体により代表される。アシル基は、１又は２以上の二重結合及び／又は追加の酸性官能基、例えば、グルタリル又はスクシニルを含有してもよい。上にいうヘテロアリール基は、３〜６炭素原子及び酸素、窒素又は硫黄の如き１又は２以上のヘテロ原子を含有する芳香族複素環基を包含する。この発明のこれら化合物の低級アルキルスルホニル基は１〜７炭素原子を含有する基であって、メチルスルホニル、エチルスルホニル、ｎ−プロピルスルホニル、ｔ−ブチルスルホニル等により代表される。ここで用いる“アリール”という用語は、フェニル基、及び６〜１０炭素原子を含有し、クロロ、ブロモ、フルオロ、カルボキシ、低級アルキル、ヒドロキシ、又は低級モノアルキルアミノ、低級ジアルキルアミノ、及び低級アルコキシの中から選ばれる１又は２以上の置換基により置換された低級アルキル置換フェニル基のことをいう。従って、ここで確認すると“進行グリコシル化の阻害物質”という用語は、アミノグアニジン、リシン及びα−ヒドラジノヒスチジンの如き化合物と、前述の部分において一般的に表しまた他の関連特許出願及び米国特許第４,９８３,６０４号に続いて発行された特許及びそれらに関係があるものに含まれ得る他の物質の両方を含めることを意図している。以下の実施例では、アテローム硬化症へのＡＧＥ−脂質の効果を、グルコースとアミン含有脂質、つまりホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）との反応により証明した。ＥＤＴＡの存在下、窒素雰囲気下で生理的ｐＨ及び生理的温度で、グルコース（５〜５００ｍＭ）は時間と濃度に依存してＰＥと反応し、ＡＧＥの分光特性を有する脂溶性生成物を生成する。ＡＧＥの生成は、ＡＧＥ関連吸光度及び蛍光に平行する反応速度で脂肪酸酸化を誘発した。グルコースをホスファチジルコリン（ＰＣ）と共にインキュベートしても、そのアミンがブロックされているためグルコースと反応してAＧＥ生成を開始することができないので、分光的変化も脂肪酸酸化ももたらされなかった。アミノグアニジンは脂質−ＡＧＥ生成及びＰＥの脂質酸化を阻止した。やはり本発明を特定の反応メカニズムに限定するものではないが、アミノグアニジンは２つのメカニズムにより脂肪酸酸化を阻害したのかも知れない。つまり、第一に脂質随伴ＡＧＥ（lipid-associated AGE）の生成を阻害した。第二にマロニルジアルデヒド様脂肪酸酸化生成物との直接反応を阻害した。従って、反応性基、例えば、一級アミノ基を含有する脂質は、還元糖と容易に反応してＡＧＥを生成し、これが脂肪酸酸化を誘発する。アミノグアニジンは脂質随伴ＡＧＥの生成を阻害した。そしてマロニルジアルデヒド様脂肪酸酸化生成物と直接反応する。上記の事柄の更なる詳細及び追加の検討を以下に示す。実施例１脂質が反応して進行グリコシル化最終産物を生成できるか及びそれがどの程度までなのかを確認するために、脂質であるホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジルコリンを糖、好ましくは還元糖と接触させて一緒にインキュベートした。その後、このインキュベーション混合液のアリコートを脂質随伴ＡＧＥ又は脂質結合ＡＧＥ（lipid-attached AGE）の存在の証拠について以下に記載した通りにアッセイした。方法ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ；Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン，ジオレオイル）（１，２−ジ〔（シス）−９−オクタデセノイル〕−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）又はホスファチジルコリン（ＰＣ；Ｌ−α−ホスファチジルコリン，ジオレオイル）（１，２−ジ〔（シス）−９ −オクタデセノイル〕−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）の形の脂質をグルコース（Ｇｌｕ）（Ｌ−Ｄ−グルコース）と共に次の通りにインキュベートした：ＣＨＣｌ₃溶液中の１０ｍｇのＰＥ又はＰＣを濃縮乾固した。このサンプルにＥＤＴＡ（１ｍＭ）を含有するＮａＰＯ₄緩衝液（１００ｍＭ，ｐＨ７.４）中のグルコース（０.５Ｍ）１ｍｌを添加した。この溶液を凍結／融解及びＮ₂ガスでの飽和により予め脱気した。その封管を音波処理浴に３０分間浸けることによって乾固した脂質をこのグルコース溶液中に分散させた。次いで、封管を３７℃で暗所に置き、所定時間インキュベートした。並行してインキュベーションを続けている別々の封管（アリコート）を間隔を置いて取り出し、分析用に脂質を次の通りに抽出した。アリコートを１ｍｌのクロロホルム／メタノール（２：１）で1０分間震盪した。有機層を分離した後、この抽出を２回繰り返した。次いで、有機層を氷冷した脱気Ｈ₂Ｏで２回逆抽出した。留去後、脂質をクロロホルム／メタノール（１：１）中に再溶解して吸収分光法（ＯＤ_200-800又はＯＤ₃₆₀）；又は蛍光分光法（励起波長（Ｅｘ）３６０ｎｍ、発光波長（Ｅｍ）４４０ｎｍ）により分析した。その結果を図１及び２に示す。図１は、３６０ｎｍにおける吸光度の時間依存的増加を示しており、この吸収はＡＧＥ及びＡＧＥ含有化合物に特性的なものである。図１に示すように、ＰＥのグルコースとのインキュベーションでＡＧＥ典型吸収を有する物質が有意に蓄積するが、ＰＣのグルコースとのインキュベーションでは殆ど何も生じない。この結果は、ＡＧＥ生成にはＰＥに代表されるフリーのアミノ基が要求されるが、ＰＣのブロックされたアミノ基ではＡＧＥ生成を可能にする反応性が欠けていることを示唆している。図１は、ＯＤ₃₆₀物質の生成がグルコース濃度に依存していることを示しており、ＰＥの５０ｍＭグルコースとのインキュベーション後では、５００ｍＭグルコースとの並行インキュベーション後よりも低いＡＧＥ比吸光度が見られる。図１は、O.5Ｍグルコース及び0.1ＭアミノグアニジンとのＰＥのインキュベーションのＡＧＥ比ＯＤ₃₆₀値がアミノグアニジンなしでのＰＥとグルコースの並行インキュベーションよりも低いことにより示されるように、タンパク質上でのＡＧＥ生成の阻害物質であるアミノグアニジンが、ＡＧＥ−脂質生成を阻害することも示している。図２は、同じ組のサンプルでの蛍光強度の並行測定を示している。その結果及び結論は上と同じである。ＰＥとグルコースのインキュベーションではＡＧＥ− 脂質が自発的に生成するが、ＰＣとグルコースのインキュベーションでは生成しない。ＡＧＥ−脂質生成はグルコース濃度依存性であり、そしてアミノグアニジンはＡＧＥ典型蛍光物質の蓄積により追跡されるようにＡＧＥ−脂質生成を阻害する。図４は、ＰＥを0.5Ｍグルコースと共に上記の通りインキュベートしたときに時間の経過で起こる紫外及び可視吸収スペクトル（２００〜５００ｎｍ）の変化を示している。これら変化は、ＡＧＥ及びＡＧＥ様発色基の生成に特性的なものである。図５及び６は、ＡＧＥ−脂質生成のインキュベーション混合液中のグルコース濃度への依存性を示している。ＰＥをグルコースと５０日間インキュベートすると、ＡＧＥ比吸光度（図５）及びＡＧＥ比蛍光（図６）が生じる。脂質酸化のグルコース濃度依存性を図７に示す。実施例２ＡＧＥ−脂質生成が脂質酸化の変化と関係していることを証明するために、上記のインキュベーションからのサンプル中のマロニルジアルデヒド（ＭＤＡ）様脂肪酸酸化生成物の蓄積量を測定した。方法脂質過酸化生成物をチオバルビツール酸反応性物質法により定量した（ＴＢＡＲＳ；Proc．Natl．Acad．Sci．USA 81:3883-3887）。簡単に説明すると、０.１ｍｌの脂質抽出物を０.２ｍｌのＴＢＡ試薬（０.３７％チオバルビツール酸、１０％トリクロロ酢酸）に添加して１００℃に３０分間加熱した。次いで、ｎ−ブタノール抽出可能物質（１ｍｌ）を蛍光分光光度法（５１５ｎｍで励起して５５３ｎｍで発光）により分析した。チオバルビツール酸反応性物質を、二重に行った実験サンプルと０.１〜２０ｎｍｏｌのＭＤＡのアッセイを二重に行って得たＭＤＡ標準曲線との比較により定量した。酸化的修飾値をＭＤＡ当量（pｍＭＤＡ（当量）／μｇ脂質）として表した。結果図３及び７は、脂質酸化がＡＧＥ−脂質生成と共に増加したことを示している。具体的には、ＰＥのグルコースとのインキュベーションで、時間（図３）及びグルコース濃度（図７）に依存して脂質酸化が起こった。ＰＣのグルコースとのインキュベーションでは、殆ど又は全く脂質酸化が起こらず（図３）、そしてアミノグアニジンは、ＰＥ／グルコースインキュベーション（図３）において酸化を阻害した。実施例３脂質上でのＡＧＥの生成をＡＧＥ用特殊ＥＬＩＳＡにより更に評価した。方法脂質（ＰＥ又はＰＣ）を上記の通りにグルコースとインキュベートした。ＡＧＥ含量は、特異性抗ＡＧＥ抗体を用いるＥＬＩＳＡにより定量した（Makitaら， J．Biol．Chem.（1992），267:5133-5138を参照のこと）。タンパク質連結ＡＧＥ（protein-linked AGE）は、グルコースのＢＳＡとのインキュベーションにより合成したＡＧＥスタンダードを用いる競合ＥＬＩＳＡにより測定した。このＥＬＩＳＡでは、１.０ＵのＡＧＥ活性は１.０μｇのＡＧＥ−ＢＳＡスタンダードに等価である抗体反応性物質の量と定義される。脂質誘導ＡＧＥを直接非競合ＥＬＩＳＡで次の通り測定した。各サンプルについて、１００μｌアリコートの脂溶性物質（メタノール中に溶解したもの）を三重にして丸底９６ウェルプレートに添加して溶媒を留去した。次いで、ウェルをＰＢＳ／０.０５％ツィーン２０で３回洗浄した。抗血清（最終希釈度１／１０００）を添加し、プレートを室温で１時間インキュベートし、そしてウェルを洗浄して競合ＥＬＩＳＡについて記載した通りに処理した。抗ＡＧＥ血清の代わりに免疫前血清でコントロールサンプルを作った。結果は、０.３ｎｇ／ｍｌから３μｇ／ｍｌまでの濃度範囲でプレートに吸収させたＡＧＥ−ＢＳＡスタンダードの希釈液をアッセイすることにより得た標準曲線に関連させて定量した。結果表１は、ホスファチジルエタノールアミンからのＡＧＥ−脂質の生成をコントロール脂質ホスファチジルコリン（アミノ基がブロックされているので還元糖グルコースとの反応が妨げられると考えられる）と対照して示すものである。実施例４アミノグアニジンとマロニルジアルデヒドの間の反応実施例２は、ＡＧＥ脂−質生成は、ＭＤＡ様物質の濃度の増加により測定して脂質酸化の平行する増加を伴うことを示した。この脂質の酸化が、脂質酸化を開始するのに普通用いられる銅の如き金属の添加なしに起こったことは注目に値する。アミノグアニジンがＭＤＡ様アルデヒドと直接反応してそれらとタンパク質との反応を阻止できることを証明するために、アミノグアニジンをＭＤＡとインキュベートした。方法マロンアルデヒド・ビス（ジエチルアセタール）をＨ₂Ｏで希釈することによりマロニルジアルデヒド（ＭＤＡ）標準溶液（０.５ｍｌ）を調製した。アミノグアニジン・ＨＣ１（０.５ｍｌ）を添加してから、上記のＴＢＡ試薬０.２ｍl を添加した。この溶液を室温で１０分間インキュベートして前述の部分で記載した比蛍光によりＴＢＡＲＳを測定した。結果結果を図８Ａ及びＢに示す。図８Ａは、アミノグアニジン量の増加によるＭＤＡのチオバルビツレート反応性（相対蛍光により示される）の漸進的阻害を示している。かくして、アミノグアニジンは、反応性アルデヒドがタンパク質アミノ基の修飾に広範に関与できる前にそれを消滅させることによって、脂質酸化生成物によるタンパク質修飾を阻害することができる。図８Ｂは、図８Ａからの一組のデータをプロットしたもので、添加したアミノグアニジンの濃度を高めることによって固定初期量（１０ｍＭＭＤＡ）のチオバルビツレート活性の阻害（Ａ）が増加することを示している。実施例５進行グリコシル化とin vivoでのＬＤL酸化の間の関係を更に明らかにするために、非糖尿病又は糖尿病個体のいずれかから得た血漿からＬＤＬを単離して、脂質−ＡＧＥ、アポタンパク質-ＡＧＥ、及び酸化的修飾の存在について分析した。これら検体は、８人の血糖正常非糖尿病コントロールとＩ型又はII型真性糖尿病の１６患者から得た。方法血漿ＬＤＬ（ｄ＝１.０２５〜１.０６３ｇ／ｍｌ）を２.７ｍＭＥＤＴＡを用いて逐次超遠心分離（sequential ultracentrifugation）により健康な非高血糖個体及び真性糖尿病の患者から単離した。単離して再遠心分離したＬＤＬを、２.７ｍＭＥＤＴＡと０.２ｍＭＢＨＴを含有するＰＢＳに対してよく透析した。ＬＤＬを更に進めて使用する前に無菌濾過しそしてタンパク質含量をローリー法により測定した。非糖尿病患者グループ（ｎ＝８）は平均年齢が３４.６±９.６歳であった。糖尿病グループ（ｎ＝１６）はＩ型糖尿病の５患者とII型糖尿病の１１患者からなった。平均年齢は５５.５±１６.３歳で、糖尿病の平均期間は１１ .９±５.６年であった。平均ヘモグロビンＡ_1cレベルは１０.０％±１.７％であった。Ｐ値は、グループ間の比較について統計的な不対スチューデントｔ検定（ unpaired Student's t-test）により計算した。結果ＬＤＬを酸化的修飾について分析してから、ＡＧＥ−ＥＬＩＳＡ測定（図９）のために脂質成分とアポタンパク質成分に分画した。前の検討と一致して、糖尿病個体からのＬＤＬは、非糖尿病個体からのＬＤＬよりも有意に大きな酸化的修飾を受けたことが認められた〔正常、つまり非糖尿病（ＮＬ）：（ｎ＝８）３. ７±１.２５ｐｍＭＤＡ当量／μｇＬＤＬ；糖尿病（ＤＭ）：（ｎ＝１６）６.８ ±１.２ｐｍＭＤＡ当量／μｇＬＤＬ（平均値士ＳＤ），Ｐ＜０.０００１〕。意義深いことには、糖尿病ＬＤＬ検体中の脂質連結ＡＧＥ及びアポタンパク質連結ＡＧＥの両方が、非糖尿病個体から得られたＬＤＬ検体に比較して顕著に高くなっていることが分かった。脂質−ＡＧＥレベルは、糖尿病患者において殆ど４倍に上昇した〔正常、つまり非糖尿病（ＮＬ）：（ｎ＝８）０.１１±０.０３ユニットのＡＧＥ／μｇ脂質；糖尿病（ＤＭ）：（ｎ＝１６）０.４１±０.２５ユニットのＡＧＥ／μｇ脂質，Ｐ＜０.００５〕。アポタンパク質−ＡＧＥレベルは、糖尿病サンプルにおいて約２倍に上昇した〔ＮＬ：（ｎ＝８）０.００２８± ０.０００６ユニットのＡＧＥ／μｇアポタンパク質；ＤＭ：（ｎ＝１６）０.００６８±０.００４ユニットのＡＧＥ／μｇアポタンパク質，Ｐ＜０.０００１〕。これら測定は、ＬＤＬ酸化とＡＧＥ−脂質及びＡＧＥ−アポタンパク質のレベルとの間の量的割合が類似であることを明らかにした。この量的割合は、in vit roでのＬＤＬインキュベーション中に認められたもの（図１０）と類似であった。また、アポタンパク質随伴ＡＧＥのレベルに比較して脂質−ＡＧＥのレベルが目立って増加したようであった。これらデータを直線回帰分析して、ＡＧＥ修飾レベルとＬＤＬ酸化の間に有意な相関関係があることが明らかになった。ＡＧＥ−アポタンパク質対ＬＤＬ酸化の測定について、この分析はｒ＝０.５２及びＰ＜０.０１の相関係数を示した。ＡＧＥ−脂質対ＬＤＬ酸化の測定については、対応する値はｒ＝０.６３及びＰ＜０.００５であった。実施例６アポＢのレセプター結合ドメイン内の連続した塩基性残基（Arg-Lys-Arg）はＡＧＥ生成の反応性部位として役立ち、従ってＬＤＬ浄化の正常な経路を妨げるかも知れないということも仮定した。この仮定に取りかかるために、進行グリコシル化の薬理学的阻害物質であるアミノグアニジン（ＡＧ）の２８日試験に登録した１０人の糖尿病患者のＬＤＬレベルを調べた。アミノグアニジン（ＡＧ）の２８日試験に登録した１０人の糖尿病患者のＬＤＬレベルを実施例３のＡＧＥ用特殊ＥＬＩＳＡにより測定した。ＡＧ療法の効力は、進行グリコシル化の循環マーカーであるヘモグロビン−ＡＧＥ（Ｈｂ−ＡＧＥ）のレベルの低下により評価した。結果を図１４及び以下の表２に示す。表２には、Ｈｂ−ＡＧＥに関連する追加データも含まれている。ＡＧＥ生成の阻害は、図１４に示すようにＬＤＬレベルの３０％低下を伴った。この検討は、進行グリコシル化が高いＬＤＬレベルの原因となり得ること、及びアミノグアニジン療法がＬＤＬ浄化の向上に役立つので糖尿病患者におけるアテローム発生のおそれを少なくできることを示唆している。実施例７ヒトＡＧＥ−ペプチドが血漿リポタンパク質と反応できるかどうか確認するために、糖尿病血清から単離したＡＧＥ−ペプチドをＡＧＥ阻害物質アミノグアニジン（３００ｍＭ）の存在下又は不存在下でヒトＬＤＬと１４日間インキュベートし、結果をコントロール（ＬＤＬのみ）及びＬＤＬのグルコースとの並行インキュベーションと比較した。ＬＤＬのアポＢ画分及び脂質画分中のＡＧＥレベルを実施例３のＡＧＥ用特殊ＥＬＩＳＡ操作により測定し、結果を以下の表３及び図１１Ａ及び１１Ｂに示した。更に、ＬＤＬ酸化を実施例４における通りに測定して、ＡＧＥ生成がＬＤＬ酸化に平行していることが分かった。以下の表３に示すように、ＬＤＬのアポＢ画分及び脂質画分のＡＧＥ含量の顕著な増加がコントロールサンプルと比較した時間の関数として認められた。これら値はグルコースを用いて得られるものを遥に越えた。ＡＧＥ生成はＬＤＬ酸化に平行した。ＡＧＥ阻害物質アミノグアニジンの存在下では、ＡＧＥ生成だけでなく脂質酸化も顕著に阻害された。要するに、循環ＡＧＥ−ペプチドは、グルコース以上にそしてグルコースと無関係に、ＡＧＥ−脂質及び血漿ＬＤＬの酸化的修飾の重要なin vivo供給源である。アミノグアニジンは、高いＡＧＥ−ペプチドレベル及び高脂血症がアテローム硬化症の加速に因果的に結び付いている糖尿病患者に治療的利益があるといえる。実施例８実施例３のＡＧＥ用特殊EＬＩＳＡを用いて、正常コントロール（ｎ＝１７）及び糖尿病患者（ｎ＝４３）から単離したＬＤＬのアポＢ成分及び脂質成分に付いたＡＧＥ部分を測定した。結果を以下の図４に示す。これら患者サンプル中の脂質酸化の検討を反映する追加データを図１２Ａ〜１２Ｃに示す。これらデータは、循環ＡＧＥ−ＬＤＬレベルが糖尿病性合併症の数及び重さと密接に相関していることを示しており、ＡＧＥ修飾と糖尿病のミクロ及びマクロ両方の血管合併症の間の原因病理学的関係を支持するものである。というのは、複数の合併症を有する糖尿病患者からのＬＤＬは、正常コントロールに比較して、５倍高いレベルのＡＧＥ−脂質及び殆ど３倍高いレベルのＡＧＥ−アポＢを含有したからである。重い糖尿病性末期腎疾患（ＥＳＲＤ）を有する糖尿病患者は、腎臓に関する問題のない糖尿病患者に比較して、ＡＧＥ修飾ＬＤＬの顕著な上昇を示した。これら結果は、ＡＧＥ−脂質修飾が各グループの患者内の脂質酸化の比例的増加と関連したことも示している（非糖尿病患者：３.７ｎｍoｌ／ｍｇ；０〜１合併症：５.２ｎｍｏｌ／ｍｇ；＞４合併症：８.４ｎｍoｌ／ｍｇ〔ｎｍｏｌＭＤＡ当量／ｍｇＬＤＬとして測定した〕）。実施例９追加の患者集団を調べて上の実施例８で集めて評価したデータに累加するデータを得た。従って、循環ＡＧＥ−低密度リポタンパク質のレベルを測定するために、アポタンパク質Ｂ、つまり血漿ＬＤＬを実施例８に記載した選抜患者から採取した。簡単に説明すると、ＬＤＬをメタノール−エーテル１：３（Ｖ／Ｖ）で脱脂した。アポＢをプロテイナーゼＫ（１ｍｇ／ｍｌ）を用いて３７℃で２４時間インキュベートすることにより消化した。これらサンプルを７０℃で１時間加熱することにより不活性化した。実施例３に記載したＥＬＩＳＡによりＡＧＥレベルを測定した。結果を図１３に示す。ＡＧＥ−ペプチドのin vivo“反応性”の尺度を得るために、ＡＧＥレベルを糖尿病患者又は糖尿病でない患者の短命血漿タンパク質、つまりアポタンパク質Ｂ上で測定した。図１３に示すように、ＡＧＥ−アポＢの顕著な上昇が、正常者（２.８±０.５ＡＧＥＵ／ｍｇ）及び腎機能が正常な糖尿病患者（平均３.９± １.０ＡＧＥＵ／ｍｇ）に比較して、ＥＳＲＤを有する糖尿病患者（平均６９.４ ±２１.７ＡＧＥＵ／ｍｇ，ｐ＜０.０００１）並びに非糖尿病患者（平均２７. ６±１６.５ＡＧＥＵ／ｍｇ，ｐ＜０.０００１）からのＬＤＬ中に見出された。ＥＳＲＤを有する非糖尿病患者は正常血糖であり正常レベルのＨｂＡ_1cを有するので、これらデータは、グルコースがＡＧＥ修飾の唯一の源ではないことを明確に示唆している。これは、上の実施例８で認められた観察結果を確証するものである。考察ここに示したデータは、コラーゲン及びリポタンパク質の如き鍵となるタンパク質と“反応”する内因性ＡＧＥ−ペプチドの能力を消し去ることからなる、血漿ＡＧＥのレベルの上昇とＥＳＲＤに関連する加速された血管病との間の重要な連鎖を提供する。ＬＤＬアポタンパク質Ｂは、長い間アテローム硬化症に関係があるとされてきた短命血漿タンパク質である。ＡＧＥ−ペプチドによるＡＧＥ− アポＢのin vivoでの生成が効率的であることから、ＡＧＥ−ペプチドの“毒性 ”についてのin vivoマーカーの可能性が示唆された。循環ＡＧＥ−アポＢに関する患者データはこの考えを支持した。ＥＳＲＤを有する患者における血漿ＬＤＬ／アポＢのＡＧＥ修飾のレベルは、正常被験者のレベルに比較して有意に上昇した（非糖尿病（ＥＳＲＤ）患者については１０倍そして糖尿病（ＥＳＲＤ）患者については２５倍）。血液中のＬＤＬ粒子の半減期は比較的短いので、ＥＳＲＤ患者におけるＡＧＥ修飾の度合いを、血漿中に見出される周囲のグルコース又は他の“中間体”グリコシル化産物だけに帰することはできない。非糖尿病ＥＳＲＤ患者におけるこれら物質の寄与も、これら非糖尿病患者におけるグルコースレベル及びＨｂＡ_1cレベルが正常なので、ありそうにない。その代わり、主な役割をいわゆる“ＡＧＥ−ペプチド”又は低分子量血液保持ＡＧＥ−修飾種（blood-borne AGE-modified specles）に帰することはできる。これは、糖尿病であろうとなかろうとＥＳＲＤ患者におけるＡＧＥ−ペプチドの比較的高いレベルにより支持される。この考えの更なる裏付けが、正常な腎機能を有する糖尿病患者において、高いＨｂＡ_1cに反映される彼らの高血糖にも拘らず、ＡＧＥ−アポＢが比較的穏やかに上昇することにより与えられる。この解釈は、腎機能の不存在が、高血糖を原因とするＡＧＥ生成の速度の増加よりも全血清ＡＧＥ蓄積に重要な役割を果たしているという議論と一致する。それは、尿排泄物により測定して、腎機能が維持されている限り腎臓による血清ＡＧＥの浄化が正常者と糖尿病患者の間であまり相違しないことを示す結果により更に支持される。次の刊行物は、広く進行グリコシル化最終産物とかかる産物が関係する反応に関するものである。次の一覧表の刊行物は上記の刊行物を補足するもので示した番号により前述の明細書中の同じ参考文献に対応する。この発明は、その精神又はその本質的な特徴から逸脱することなく他の形態で具体化し又は他のやり方で実施することができる。従って、本開示内容は、全ての点において、添付の請求の範囲により示される発明の範囲を説明するものとして考慮されるべきで限定的なものとして考慮されるべきではなく、均等の意義及び範囲内に属する全ての変更をその中に包含することが意図されている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 31/195 ＡＢＸ 9455−4Ｃ 31/70 9454−4Ｃ 35/16 7431−4Ｃ 38/00 ＡＤＡＧ０１Ｎ 33/53 Ｓ 8310−2Ｊ // Ａ６１Ｋ 39/395 Ｄ 9284−4ＣＮ 9284−4Ｃ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＫ，ＵＡ，ＶＮ (72)発明者ヴラッサラーヘレンアメリカ合衆国ニューヨーク州 11964 シェルターアイランドラムアイランドドライヴ（番地なし) (72)発明者セラミーアントニーアメリカ合衆国ニューヨーク州 11964 シェルターアイランドラムアイランドドライヴ（番地なし) 【要約の続き】

Claims

【特許請求の範囲】１．哺乳動物における脂質酸化を調節する方法であって、前記哺乳動物内のＡＧＥの生成を制御できる物質を前記哺乳動物に脂質酸化調節有効量投与することを含む方法。２．前記脂質酸化を阻害する方法を含む請求項１の方法であって、前記物質が前記ＡＧＥの生成を阻害できる方法。３．前記ＡＧＥがＡＧＥ−脂質を含む、請求項１又は２のいずれかの方法。４．前記ＡＧＥ−脂質が、脂質関連物質から生成され、そして前記脂質関連物質がアミン含有脂質、低密度リポタンパク質、及びアポリポタンパク質から選ばれる、請求項３の方法。５．前記アポリポタンパク質がアポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）を含む、請求項４の方法。６．前記哺乳動物内において低密度リポタンパク質レベルを低下させる方法を含む、請求項２の方法。７．末期腎疾患を予防及び／又は治療する方法を含む、請求項２の方法。８．アテローム硬化症を予防及び／又は治療する方法を含む、請求項２の方法。９．高コレステロール血症を予防及び／又は治療する方法を含む、請求項２の方法。 10．哺乳動物における脂質代謝を調節する方法であって、血清からの脂質及び脂質関連物質の認識及び除去を修飾できる物質をかかる処置を必要とする哺乳動物に脂質代謝調節有効量投与することを含み、前記物質がＡＧＥの生成、蓄積及び／又は活性を制御できる方法。 11．前記物質が、進行グリコシル化最終産物に対する抗体、進行グリコシル化最終産物に結合でき及び／又はそれを中和できるリガンド、進行グリコシル化最終産物のためのレセプター、及び進行グリコシル化最終産物の生成を阻害できる化合物からなる群から選ばれる、請求項10の方法。 12．進行グリコシル化最終産物の生成を阻害できる前記化合物が、初期グリコシル化産物上の活性カルボニル基と反応できる、請求項11の方法。 13．前記化合物が、アミノグアニジン、α−ヒドラジノヒスチジン、リシン、アミノグアニジンの類縁体、及びそれら混合物からなる群から選ばれる、請求項12 の方法。 14．前記類縁体が下式のヒドラジン誘導体及びそれらの薬学的に許容できる酸付加塩からなる群から選ばれる、請求項13の方法。〔式中、Ｒは式の基であり、そしてＲ₁は水素又は１〜６炭素原子の低級アルキル基、ヒドロキシエチル基であるか、又はＲ₂若しくはＲ₄と一緒に２〜４炭素原子の低級アルキレン橋を形成してもよく；Ｒ₂は水素、アミノ、ヒドロキシ、１〜６炭素原子の低級アルキル基、又はＲ₁若しくはＲ₃と一緒になって２〜４炭素原子の低級アルキレン橋であり；Ｒ₂は式（式中、ｎは２〜７の整数であり、Ｒ₆とＲ₇は独立して１〜６炭素原子の低級アルキル基であるか又はシクロアルキルの一部若しくは少なくとも１個が窒素である１〜２ヘテロ原子を含有する複素環の一部を一緒に形成し、そして前記ヘテロ原子の２つ目は窒素、酸素及び硫黄からなる群から選ばれる。但し、該複素環の前記ヘテロ原子の２つ目が窒素であってピペラジン環を形成するときは、それは該ピペラジン環の１つ目の窒素上の化合物の部分と同一の置換基により場合により置換されていてもよい。）のアミノルキレン基であってもよく；Ｒ₃は水素、１〜６炭素原子の低級アルキル基、又はＲ₂若しくはＲ₄と一緒になって２〜４炭素原子の低級アルキレン橋であり；Ｒ₄は水素、１〜６炭素原子の低級アルキル基、又はＲ₁若しくはＲ₃と一緒になって２〜４炭素原子の低級アルキレン橋であり、又はアミノ基であり；Ｒ₅は水素又は１〜６炭素原子の低級アルキル基である。但し、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄及びＲ₅の少なくとも１が水素以外のものであるか；又はＲが１０炭素原子までのアシル又は低級アルキルスルホニル基でＲ₁が水素である。〕 15．哺乳動物における脂質代謝を調節する方法であって、血清からの脂質及び脂質関連物質の認識及び除去を修飾できる物質をかかる処置を必要とする哺乳動物に脂質代謝調節有効量投与することを含み、前記物質が進行グリコシル化最終産物によるアポＢのＬＤＬレセプター結合ドメインのブロックを阻害できる方法。 16．前記物質が進行グリコシル化最終産物に優先的に結合できる、請求項15の方法。 17．前記物質が、進行グリコシル化最終産物に対する抗体、及び進行グリコシル化最終産物のためのレセプターからなる群から選ばれる、請求項16の方法。 18．前記アポＢのＬＤＬレセプター結合ドメインが、進行グリコシル化最終産物の生成に服する少なくとも１の活性部位を含有し、そして前記物質が、前記進行グリコシル化最終産物が前記部位において生成するのを阻害できる、請求項15の方法。 19．前記物質が前記部位における前記進行グリコシル化最終産物の生成を前記部位に優先的に結合することにより阻害することができる、請求項18の方法。 20．哺乳動物におけるin vivo脂質代謝の経過及び程度を評価する方法であって、前記哺乳動物内のＡＧＥ−脂質の存在及び量を測定することを含む方法。 21．前記ＡＧＥ−脂質がin vitro操作により測定される、請求項20の方法。 22．下記工程を含む、請求項20の方法。Ａ．前記ＡＧＥ−脂質が存在する疑いがある前記哺乳動物から取った少なくとも１の生体サンプルを調製し；Ｂ．工程Ａの生体サンプル及びＡＧＥ−脂質又はＡＧＥ保有脂質関連物質に対する結合パートナーからなる群から選ばれる物質を適する支持体上に固定化し、そして固定化されていない物質の１つを標識し；Ｃ．前記サンプルを前記結合パートナーと、前記結合パートナーが前記サンプル中に存在するＡＧＥ−脂質又はＡＧＥ保有脂質関連物質のいずれかに結合するのに十分な時間インキュベートし；Ｄ．あらゆる未結合物質を工程Ｃから取り除き；そしてＥ．前記サンプルに結合した標識の量をスタンダードと比較する。 23．前記結合パートナーが、ＡＧＥのためのレセプター、及び前記ＡＧＥ−脂質と反応性であるか又はそれに結合できる抗体からなる群から選ばれる、請求項22 の方法。 24．前記ＡＧＥ−脂質に対する前記抗体が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、及びキメラ抗体からなる群から選ばれる、請求項23の方法。 25．前記哺乳動物内の低密度リポタンパク質のレベルを追跡する方法を含む、請求項20の方法。 26．アテローム硬化症、血管病、糖尿病、糖尿病性腎症、及び高コレステロール血症から選ばれる病的状態の可能性又は発症を診断し、及び／又は経過及び重さを追跡する方法を含む、請求項20の方法。 27．アポＢ上のＬＤＬレセプター結合ドメインのブロックを阻止する薬物又はその他の存在物の能力を試験する方法であって、未結合ＬＤＬレセプター結合ドメインを有するある量のアポＢを適する媒質中に配置し、前記結合ドメイン上でＡＧＥを生成できるある量の物質を同時に添加し、そして生成するＡＧＥ−アポＢがあればその量を測定することを含む方法。 28．ＡＧＥ反応性基を含有する脂質を進行グリコシル化最終産物又は進行グリコシル化最終産物を生成する化合物と反応させた反応生成物を含むＡＧＥ−脂質。 29．脂質のＡＧＥ反応性基が一級アミノ基である、請求項28のＡＧＥ−脂質。 30．脂質部分が、アミン含有脂質、リポタンパク質、及びアポリポタンパク質からなる群から選ばれる、請求項29のＡＧＥ−脂質。 31．進行グリコシル化最終産物又は進行グリコシル化最終産物を生成する化合物が還元糖から誘導される、請求項28のＡＧＥ−脂質。 32．進行グリコシル化最終産物を生成する化合物が、グルコース、フルクトース、リボース及びグルコース−６−ホスフェートからなる群から選ばれる、請求項 31のＡＧＥ−脂質。 33．ＡＧＥ反応性基を含有する脂質又は脂質関連物質を進行グリコシル化最終産物又は進行グリコシル化最終産物を生成する化合物とインキュベートすることを含むＡＧＥ−脂質を製造する方法。 34．脂質又は脂質関連物質が、アミン含有脂質、リポタンパク質、及びアポリポタンパク質からなる群から選ばれる、請求項33の方法。 35．請求項28のＡＧＥ−脂質を薬学的に許容できるキャリヤーと共に含む医薬組成物。 36．ＡＧＥ−脂質が、ＡＧＥ−リン脂質、ＡＧＥ−低密度リポタンパク質、及びＡＧＥ−アポリポタンパク質からなる群から選ばれる、請求項35の医薬組成物。 37．ＡＧＥ−脂質又は薬学的に許容できるキャリヤーが治療に活性な化合物を経皮送達するのに有効である、請求項35の医薬組成物。 38．局所、経口又は注射投与に適する、請求項35の医薬組成物。 39．リポソームの形態にある、請求項37の医薬組成物。 40．哺乳動物の皮膚を若返らせる方法であって、前記哺乳動物に有効量の請求項 28のＡＧＥ−脂質を投与することを含む方法。 41．ＡＧＥ−脂質が、ＡＧＥ−リン脂質、ＡＧＥ−低密度リポタンパク質、及びＡＧＥ−アポリポタンパク質からなる群から選ばれる、請求項40の方法。 42．ＡＧＥ−脂質が局所投与で皮膚を若返らせるのに有効である、請求項40の方法。 43．進行グリコシル化最終産物を哺乳動物の生物活性部位に送達する方法であって、前記哺乳動物に請求項28のＡＧＥ−脂質を投与することを含む方法。 44．薬物を少なくとも１のＡＧＥレセプターを有する生物活性部位に送達する方法であって、前記薬物を請求項28のＡＧＥ−脂質と混合し、そして該薬物及びＡＧＥ−脂質を哺乳動物に、前記薬物を前記生物活性部位に送達するのに有効な量で投与することを含む方法。 45．脂質含有食品中の腐敗を検出する方法であって、前記食品のサンプルをＡＧＥ−脂質を認識する抗体と混合して前記サンプル中のＡＧＥ−脂質の存在又は量を検出し、そして検出したＡＧＥ−脂質の量をスタンダードと比較することを含む方法。 46．哺乳動物の身体からＡＧＥ−脂質を除去する方法であって、前記哺乳動物にＡＧＥ−脂質に対する抗−抗体又は第二結合パートナーを投与して、該動物の細胞浄化系（マクロファージ）を活性化する免疫複合体を生成させて、前記免疫複合体及び関連ＡＧＥ（進行グリコシル化最終産物）を除去する方法。 47．ＡＧＥ−脂質が、ＡＧＥ−リン脂質、ＡＧＥ−低密度リポタンパク質、及びＡＧＥ−アポリポタンパク質からなる群から選ばれる、請求項46の方法。 48．進行グリコシル化を受けた標的高分子を動物の身体から隔離又は除去するのを促進する組成物であって、該身体に前記高分子を認識及び除去するその活性を高めさせることができるＡＧＥ−脂質を含む組成物。 49．ＡＧＥ−脂質及びそれに対する特異性結合パートナーからなる群から選ばれる成分の１種の検出及び／又は測定のために、予め決められた手順に従って用いられる検査キット。 50．下記のものを含む、請求項49の検査キット。ａ．ＡＧＥ−脂質を検出可能な標識にカップリングさせることにより得られた標識成分；ｂ．その少なくとも１の試薬が結合パートナー又は固定化結合パートナーである１又は２以上の追加の免疫化学試薬であって、結合パートナーが（i）標識成分ａと結合できる結合パートナー；（ii）標識成分ａの結合パートナーと結合できる結合パートナー（iii）少なくとも１の測定されるべき成分と結合できる結合パートナー；及び（iv）少なくとも１の測定されるべき成分の少なくとも１の結合パートナーと結合できる結合パートナー；からなる群から選ばれる免疫化学試薬；及びｃ．ＡＧＥ−脂質とそれに対する特異性結合パートナーの間の免疫化学反応の１又は２以上の成分の検出及び／又は測定のための手順を行うための指図書。 51．ＡＧＥ−脂質が、ＡＧＥ−リン脂質、ＡＧＥ−低密度リポタンパク質、及びＡＧＥ−アポリポタンパク質からなる群から選ばれる、請求項49の検査キット。 52．糖尿病性合併症の存在又は発症を検出する方法であって、そのような状態が疑われる患者においてＡＧＥ−低密度リポタンパク質レベルを測定することを含む方法。 53．アテローム硬化症又は他の関連状態の存在又は発症を検出する方法であって、そのような状態が疑われる患者においてＡＧＥ−低密度リポタンパク質レベルを測定することを含む方法。 54．患者における酸化脂質の生成を阻害する方法であって、かかる治療を必要とする患者に有効量のアミノグアニジン又はその類縁体を投与することを含む方法。 55．前記類縁体が、リシン、α−ヒドラジノヒスチジン及び下式のヒドラジン誘導体及びそれらの薬学的に許容できる酸付加塩からなる群から選ばれる、請求項 54の方法。〔式中、Ｒは式の基であり、そしてＲ₁は水素又は１〜６炭素原子の低級アルキル基、ヒドロキシエチル基であるか、又はＲ₂若しくはＲ₄と一緒に２〜４炭素原子の低級アルキレン橋を形成してもよく；Ｒ₂は水素、アミノ、ヒドロキシ、１〜６炭素原子の低級アルキル基、又はＲ₁若しくはＲ₃と一緒になって２〜４炭素原子の低級アルキレン橋であり；Ｒ₂は式（式中、ｎは２〜７の整数であり、Ｒ₆とＲ₇は独立して１〜６炭素原子の低級アルキル基であるか又はシクロアルキルの一部若しくは少なくとも１が窒素である１〜２ヘテロ原子を含有する複素環の一部を一緒に形成し、そして前記ヘテロ原子の２つ目は窒素、酸素及び硫黄からなる群から選ばれる。但し、該複素環の前記ヘテロ原子の２つ目が窒素であってピペラジン環を形成するときは、それは該ピペラジン環の１つ目の窒素上の化合物の部分と同一の置換基により場合により置換されていてもよい。）のアミノアルキレン基であってもよく；Ｒ₃は水素、１〜６炭素原子の低級アルキル基、又はＲ₂若しくはＲ₄と一緒になって２〜４炭素原子の低級アルキレン橋であり；Ｒ₄は水素、１〜６炭素原子の低級アルキル基、又はＲ₁若しくはＲ₃と一緒になって２〜４炭素原子の低級アルキレン橋であり、又はアミノ基であり；Ｒ₅は水素又は１〜６炭素原子の低級アルキル基である。但し、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄及びＲ₅の少なくとも１が水素以外のものであるか、又はＲが１０炭素原子までのアシル又は低級アルキルスルホニル基でＲ₁が水素である。〕 56．進行グリコシル化最終産物酸化脂質が、ＡＧＥ−リン脂質、ＡＧＥ−低密度リポタンパク質、及びＡＧＥ−アポリポタンパク質からなる群から選ばれる、請求項54の方法。