JPH08505223A - ヒドロキシルアミンまたは酸化防止剤を含有する対照試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、改良された対照試薬に関する。これらの物質は、他の成分とともに酸化防止剤又はヒドロキシルアミン化合物を含み、それらの最も重要なものは、対照として作用する試薬に対する分析対象物の既知の量である。

Description

【発明の詳細な説明】 ヒドロキシルアミンまたは酸化防止剤を含有する対照試薬発明の分野 本発明は対照試薬に関する。より詳細には、組成物の有用性に悪影響を及ぼ すことなく、その対照試薬に含有される分析物質の安定性を向上させるように調 剤された対照試薬に関する。背景および先行技術 臨床分析研究において、研究者は、調べようとする特定の分析物質が存在す るかどうか、存在するのであればその量はどれくらいかを判定して、与えられた 試料を評価することを要求する。こうした情報は患者の診断および治療にきわめ て重要である。上記の分析は、自動化法を用いて、ますます頻繁に行なわれるよ うになっている。このような方法は多様であるが、一般に自動分析装置に入れる 前に試料の調製を必要とする。分析装置は、調べようとする一または複数の分析 物質を測定するために予め計画された様々な反応を実行し、特定の値またはそう した反応にともなう「シグナル」を測定するように構成されている。最新設備を 施した自動化システムは、こうした読みを分析物質の存在または濃度を表す値に 変換し、それによって調べようとする特定の分析物質の正確な判定結果を研究者 に提供する。 上記で概説した分析システムは、臨床目的で使用されるあらゆる分析システ ムと同様に、対照の使用を必要とする。この対照によって、研究者は使用したシ ステムの精度をチェックすることができる。ある特定の分析物質がわずかに極微 量存在し、レベルの微少な変化が正常と病的状態との相違を意味するような臨床 診 断において、満足できる対照試薬は、分析システムに必要不可欠な重大部分であ る。 対照試薬は、これをその対照として使用しようとする試料のタイプに可能な 限り類似していなければならない。例えば、血液や血清といった生物学的流体は 、非常に複雑な組成物であるが、生物学的流体に可能な限り近づくように、そし てそれに対する対照として機能するように企図された製剤の例が多数存在する。 この領域における特許文献から大ざっぱに抽出したものの中には、例えば、米国 特許第４，６７８，７５４号（Hoskins）；４，６４３，９７６号（Hoskins）； ４，５２９，７０４号（Tremnerら）；４，４３８，７０２号（Eng1erら）；４ ，４０５，７１８号（Rapkinら）：４，３７２，８７４号（Modrovich）；４， ３０１，０２８号（Barthら）；４，２７６，３７６号（Hundtら）；４，２６０ ，５７９号（Bartonら）；４，２３０，６０１号（Hell）；４，１９９，４７１ 号（Louderbackら）；４，１９３，７６６号（Dounoraら）；４，１２７，５０ ２号（LiMuttiら）；４，１２６，５７５号（Louderback）；４，１２３，３８ ４号（Hundtら）；４，１２１，９０５号（Maurukas）；４，０５４，４８８号 （Marbach）；４，０７８，８９２号（Steinbrink， Jr）；３，９７３，９１３ 号（Louderback）；３，９２０，５８０号（Mast）；３，９２０，４００号（Sc heibeら）；３，８５９，０４７号（Klein）；３，４６６，２４９号（Anderson ）；３，８５２，４１５号（Vandervoorde）；３，２７４，０６２号（Lou）； ３，２６０，６４８号（Fox）を包含する。上記特許においてなされたアプロー チは様々である。それらの多くは、一つの 分析物、または２〜３の関連した分析物からなる一群を定量するために有用な対 照試薬を教示する。その他は、より一般的なものもあり、当該分野における全般 的な改良に関する。本発明が属するのは後者のグループである。 上記で述べたように、当該技術の範囲内で、対照が対応すべき材料のタイプ に可能な限り近い対照試薬を調合する試みが行なわれている。その結果、対照試 薬は血液、血漿、または血清をベースにすることが多く、これらはヒト、または 哺乳動物（例えばウシ）由来である。 上記で述べたタイプの対照試薬はある欠点を有するが、それはすべての天然 物を基にした材料に固有のものである。上記のためおよび他の理由のために、技 術は無血清の対照試薬も企画し、利用した。一般に、このような水をベースとし た対照試薬は、それが生物学的試料に可能な限り近づくように、実質的な改変を 加える必要がある。そうした改変の例としては、高分子粘性剤の含有があり、そ れを含有することによって、このような試薬のレオロジー特性は生物学的試料に 可能な限り近づく。 あらゆる対照試薬に関わる主要な問題点は、調べようとする分析物がin sit uの化学反応を受け易いことであり、そのためこの対照を実際に使用する場合、 誤った結果を引き出す。このような化学反応の一例が単純酸化である。酸化され た分析物、または対照系の使用前に他の方法で反応している分析物は、シグナル 生成に変化を生じ、真の対照値からはずれる。一般に、これらの対照は、分析さ れるべき試料中の分析物相当量よりも大きなシグナルを生じる。 驚くべきことには、安定化された系を化学的にまったく乱すことなしに、上 記の問題を回避するような対照試薬を調製可能であることが、最近明らかになっ た。本発明は、より詳細には下記に詳述するが、少なくとも一つの酸化防止剤、 または一つのヒドロキシルアミンを、液体をベースとした対照試薬中に組み入れ ることに関する。ここで、この対照試薬は、既知量の少なくとも一つの分析物質 も含有する。こうして得られた材料は、以後、安定化対照試薬として言及するが 、あらゆる対照試薬と同様に有用である。図面の簡単な説明 第１図は、ウシ血清ベースの対照試薬と、毛細血管血液との相関曲線を表す 。 第２図は、対照試薬が血漿ベースである場合の相関曲線を示す。 第３図は、血液と、合成の無血清対照試薬との相関を表す。 第４図は、無血清対照を過酷な条件においた場合の相関を示す。 第５図も、過酷な条件においた後の相関を示す。 第６図も、過酷な条件においた後の相関を示す。望ましい実施態様の詳細な説明 以下の実施例においては、材料としてSERASUB（商標）を使用する。SERASUB は市販の合成血清代替物である；しかしながら、その組成は製造者の専有であっ て、発明者らには知らされておらず、したがってここでは報告されない。SERASU Bを用いて与えられる実施例を提示して、当今最も問題となっている要件を満足 させる。 実施例１ 「一部を除去した」（”ｓtripped”）ウシ血清を用いて、グルコース対照 試薬を調製した。この材料は、血清中のコレステロールを除去し、予め定量した グルコースを含有する。 対照材料を１００ｍｇ／ｄｌのＮ−ｔ−ブチルヒドロキシルアミン塩酸塩と 混合し、対照試薬を調製した。次に、この材料を、既知量のグルコースを含有す るよう予め調整した毛細血管血液試料に対してテストした。対照および血液試料 はともに、グルコース測定に関してよく知られたヘキソキナーゼアッセイ系を用 いた、表示システムを利用した同一の分析装置でテストした。 相関曲線を第１図に示す。この図は、本文記載の対照試薬が、記載の条件下 で毛細血管血液ときわめて類似した挙動をすることを示し、これはこの材料が対 照試薬として有用であることを示す。実施例２ 血漿をベースとする対照試薬を使用した。その調合法は下記の通りである： ｐＨ（０．１５Ｍ ＮａＣｌにおける１％溶液） ｐＨ ７．６ 吸光度 ７１０ｎｍでの吸光度 ０．０ ５７０ｎｍでの吸光度 ０．２ タンパク質 タンパク質 １５． ％ 電解質分析 ナトリウム ６７． ｍＥα／Ｌ カリウム ０．６ ｍＥα／Ｌ 塩素 １１． ｍＥα／Ｌ ０．９％（０．１５Ｍ）食塩水で７．３％タンパク質まで希釈した試料から得ら れた結果： ７．５％タンパク質でのコレステロール コレステロール １１１． ｍｇ／ｄｌ ７．０％タンパク質での鉄 鉄 １０２． μｇ／ｄｌ Ａ／Ｇ比 Ａ／Ｇ比 １．２ グルコース ２． ｍｇ／ｄｌ ＢＵＮ ０． ｍｇ／ｄｌ クレアチニン ０．０ ｍｇ／ｄｌ 尿酸 ０．０ ｍｇ／ｄｌ アルブミン ４．０ ｓ／ｄｌ グロブリン ３．３ ｓ／ｄｌ カルシウム ０．９ ｍｇ／ｄｌ 無機リン ０．１ ｍｇ／ｄｌ トリグリセリド ２． ｍｇ／ｄｌ アルカリホスファターゼ ０． ｕ／ｌ ＳＧＯＴ ０． ｕ／ｌ ＳＧＰＴ ４． ｕ／ｌ ＬＤＨ １７． ｕ／ｌ 総ビリルビン ０．１ ｍｇ／ｄｌ 上記材料をつぎに、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１０ｍｇ ／ｄｌ）と混合し、実施例１のように血液試料に対してテストした。第２図は、 この材料に関して得られた相関曲線を表し、血漿対照が毛細血管血液に非常に類 似することを示す。実施例３ ４７．５ｇのSERASUB、２．５ｇＭＥＳ／ＣＡＰＳ（比率８％：９２％）、 および０．０１５ｇＮ−ｔ−ブチルヒドロキシルアミン塩酸塩（最終濃度：３０ ｍｇ／ｄｌ）を混合することによって対照試薬を調製した。この調合品を、毛細 血管血液に対してテストし、その結果を第３図に示す。ここでも、血液と対照と の間には、良好な相関関係が存在する。実施例４ 実施例３の対照試薬の安定性を調べるために、同様の調合品を調製した。詳 細には、１９０ｇのSERASUB、１０ｇの１Ｍ ＭＥＳ／ＣＡＰＳ、および０．２ ４ｇのＮ−ｔ−ブチルヒドロキシルアミン塩酸塩を混合し、５５℃の温度に３日 間さらすことによって負荷をかける。負荷をかけた試薬を毛細血管血液に対して テストし、結果を第４図に示す。これらは、温度負荷にも関わらず、対照試薬が 依然として有用であることを示す。実施例５ 上記の調合品を５５℃で９−１０日間の負荷にさらすことによって、対照試 薬の安定性の限界を調べた。第５図は、こうした 過酷な負荷によって初めて相関関係が崩れ始めることを示す。実施例６ 室温で９日間おくことによって試薬に負荷をかけ、同様のテストを行なった 。第６図は、こうした負荷は相関関係について重大な問題には至らないことを示 す。 前述の実施例は、担体、既知量の調べようとする分析対象物、ならびにヒド ロキシルアミンおよび酸化防止剤からなる群から選択された添加物を含有する対 照試薬を調製することができることを示す。「ヒドロキシルアミン」という用語 は、本文では、ヒドロキシルアミン基を含有するあらゆる化合物を指す。したが って、このような化合物群は、ＲＮＨＯＨと表すことができ、ここでＲは必要に 応じて置換することができる。例えば、”Ｒ”が水素であるとき、その化合物は ヒドロキシルアミンである。本発明に包含される他の化合物は、Ｎ−ｔ−ブチル ヒドロキシルアミン、Ｏ−ｔ−ブチルヒドロキシルアミン、Ｏ−ベンジルヒドロ キシルアミン、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドロ キシルアミン、およびＮ，Ｎ−ジエチルヒドロキシルアミンを包含する。また、 ヒドロキシルアミン塩も上記名称に包含されるが、ＨＣｌおよびＨ₂ＳＯ₄塩とい った酸付加塩が望ましい。 本文で用いられる「酸化防止剤」は、過酸化物、ケトン、アルデヒドおよび 酸といった化合物が、単量体状態ではこのような化合物群を含有しない材料から 生成するのを妨げる一群の化合物および物質を広く指す。実際上は、臨床分析で 使用するシステムにおいて、以下のような反応を必要とするために、酸化防止剤 を 使用する： ここで、”Ｒ”は、調べようとする反応物質である。発生する望ましくない反応 は、以下を包含する： 酸化防止剤は、反応の間に入ることによって後者の反応が起こるのを防ぐ： 上記のように機能する酸化防止剤のなかには、”ＢＨＡ”（３−ｔ−ブチル−４ −ヒドロキシアニソール）、”ＢＨＴ”（２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチル フェノール）、”ＴＢＨＱ”（２−（１，１−ジメチル）−１，４−ベンゼンジ オール）、”ＰＱ”（ゴール酸プロピル、すなわち、３，４，５−トリヒドロキ シル安息香酸）、およびトコフェロール群の分子、すなわち、ビタミンＥおよび その誘導体がある。担体の選択は、当業者に任されている。上記の議論によって 示されたように、対照試薬は、例えば血漿、血清、血液、水または他の流体材料 を基にすることができる。生物学的試料を担体として使用する場合には（例えば 血漿）、ウシ血漿または血清といった他の哺乳動物由来の材料を用いることがで きるが、ヒト由来の材料が望ましい。しかしながら対照試薬は、必ずしも溶液状 態で調製される必要はなく、例えば、材料を上に記載した他の成分に添加するこ とによって、例えば懸 濁液または乳濁液を調製することも可能である。ポリマーおよびコポリマーを上 記の他の成分と混合して、そうした懸濁液または乳濁液をつくることもできる。 また、凍結乾燥品、粉末、錠剤などのような、液体を含まない対照試薬の調合品 を得ることも可能である。必要ならば、対照試薬を検査担体に、または他の方式 の分析装置に組み入れることもできる。必要に応じて、追加の成分を対照試薬に 添加することもできる。これらには、防腐剤、殺生物剤、ポリスチレンスルホネ ートのような粘性剤、緩衝剤、染料などを包含してよい。対照試薬に関する技術 的段階によって示されるような他の添加物を、同様に活性成分と結合することも できる。これらは当業者に公知であると考えられる。 明細書および実施例は、本発明を説明するものであって、これを限定するも のでないこと、および、本発明の精神および範囲の内に於て、他の態様が当業者 に示唆されることが理解されるであろう。

【手続補正書】特許法第１８４条の７第１項 【提出日】１９９４年４月１１日 【補正内容】 請求の範囲（補正後） １．グルコースおよびコレステロールからなる群から選択される分析物質を定量 するために有用な対照試薬であって、本質的に、 （i）既知量のグルコースまたはコレステロール、 （ii）（ａ）ヒドロキシルアミン基を含有する化合物；（ｂ）２，６−ジ−ｔ− ブチル−４−メチルフェノール；（ｃ）２−（１，１−ジメチル）−１、４−ベ ンゼンジオール；（ｄ）３，４，５−トリヒドロキシル安息香酸；（ｅ）ビタミ ンＥおよび（ｆ）ビタミンＥ誘導体からなる群から選択される添加物、並びに （iii）流体担体物質 からなる対照試薬。 ２．上記添加物がヒドロキシルアミン基含有化合物である、請求項１記載の対照 試薬。 ３．上記ヒドロキシルアミン基含有化合物が、ヒドロキシルアミン、Ｎ−ｔ−ブ チルヒドロキシルアミン、Ｏ−ｔ−ブチルヒドロキシルアミン、Ｏ−ベンジルヒ ドロキシルアミン、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒ ドロキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドロキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルヒ ドロキシルアミンおよびそれらの酸付加塩、からなる群から選択される、請求項 ２記載の対照試薬。 ４．上記分析物質がグルコースである、請求項１記載の対照試薬。 ５．上記分析物質がコレステロールである、請求項１記載の対照試薬。 ６．上記流体担体物質が血清である、請求項１記載の対照試薬。 ７．上記流体担体物質が血漿である、請求項１記載の対照試薬。 ８．上記流体担体物質が水である、請求項１記載の対照試薬。 ９．上記ヒドロキシルアミン基含有化合物が、Ｎ−ｔ−ブチルヒドロキシルアミ ンである、請求項３記載の対照試薬。 １０．上記ヒドロキシルアミン基含有化合物が、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドロキシル アミンである、請求項３記載の対照試薬。 １１．上記対照試薬が、粘性剤も含有する、請求項１記載の対照試薬。 １２．上記対照試薬が、防腐剤も含有する、請求項１記載の対照試薬。 １３．上記対照試薬が、殺生物剤も含有する、請求項１記載の対照試薬。 １４．上記対照試薬が、緩衝剤も含有する、請求項１記載の対照試薬。 １５．乳濁液の形態である、請求項１記載の対照試薬。 １６．上記添加物が、（ａ）２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルフェノール； （ｂ）２−（１，１−ジメチル）−１、４−ベンゼンジオール；（ｃ）３，４， ５−トリヒドロキシル安息香酸；（ｄ）ビタミンＥまたはビタミンＥ誘導体であ る、請求項１記載の対照試薬。 １７．グルコースおよびコレステロールからなる群から選択される分析物質を定 量するために有用な凍結乾燥された対照試薬であって、本質的に、 （i）既知量のグルコースまたはコレステロール、および （ii）（ａ）ヒドロキシルアミン基を含有する化合物；（ｂ）２ ，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルフェノール；（ｃ）２−（１，１−ジメチル ）−１，４−ベンゼンジオール；（ｄ）３，４，５−トリヒドロキシル安息香酸 ；（ｅ）ビタミンＥおよび（ｆ）ビタミンＥ誘導体からなる群から選択される添 加物、 からなる対照試薬。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 タブ，デイヴィッド アメリカ合衆国 46250 インディアナ州 インディアナポリス ヘイグ ロード 9115番地 (72)発明者 ディーボールド，エリック アメリカ合衆国 46250 インディアナ州 インディアナポリス ヘイグ ロード 9115番地

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．（i）既知量の定量すべき分析物質、 （ii）ヒドロキシルアミン化合物および酸化防止剤からなる群から選択される添 加物、 （iii）担体物質、 を含んでなる、分析物質の定量に有用な対照試薬。 ２．上記添加物がヒドロキシルアミン化合物である、請求項１記載の対照試薬。 ３．上記添加物が酸化防止剤である、請求項１記載の対照試薬。 ４．上記分析物質がグルコースである、請求項１記載の対照試薬。 ５．上記分析物質がコレステロールである、請求項１記載の対照試薬。 ６．上記担体物質が血清である、請求項１記載の対照試薬。 ７．上記担体物質が血漿である、請求項１記載の対照試薬。 ８．上記担体物質が水である、請求項１記載の対照試薬。 ９．上記ヒドロキシルアミン化合物が、ヒドロキシルアミン、Ｎ−ｔ−ブチルヒ ドロキシルアミン、Ｏ−ｔ−ブチルヒドロキシルアミン、Ｏ−ベンジルヒドロキ シルアミン、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドロキ シルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドロキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルヒドロキ シルアミンおよびそれらの酸付加塩からなる群から選択される、請求項２記載の 対照試薬。 １０．上記ヒドロキシルアミン化合物が、Ｎ−ｔ−ブチルヒドロキシルアミンで ある、請求項９記載の対照試薬。 １１．上記ヒドロキシルアミン化合物が、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒド ロキシルアミンである、請求項９記載の対照試薬。 １２．上記酸化防止剤がＢＨＡ、ＢＨＴ、ＴＢＨＱ、およびＰＱからなる群から 選択される、請求項３記載の対照試薬。 １３．さらに粘性剤を含んでなる、請求項１記載の対照試薬。 １４．さらに防腐剤を含んでなる、請求項１記載の対照試薬。 １５．さらに殺生物剤を含んでなる、請求項１記載の対照試薬。 １６．さらに緩衝剤を含んでなる、請求項１記載の対照試薬。 １７．乳濁液の形態である、請求項１記載の対照試薬。 １８．凍結乾燥品の形態である、請求項１記載の対照試薬。