JPH08504830A

JPH08504830A - スピロスタニルグリコシド結晶質一水塩

Info

Publication number: JPH08504830A
Application number: JP6524222A
Authority: JP
Inventors: アリン，ダグラス・ジエイ・エム; ワトスン，ハリー・エイ・ジユニア; ザング，ジヨナサン・ビー
Original assignee: フアイザー・インコーポレイテツド
Priority date: 1993-04-28
Filing date: 1994-01-19
Publication date: 1996-05-28
Also published as: WO1994025479A1; NO954322D0; EP0696292A1; YU22694A; CA2161239A1; PL311278A1; LV11475A; HUT67142A; AU6295694A; NO954322L; IL109374A0; AP9400615A0; OA10715A; BR9406332A; HU9401209D0; CN1121722A; ZA942772B; FI941942A; SK135195A3; FI941942A0

Abstract

(57)【要約】血中コレステロール降下剤もしくはアテローム性動脈硬化症防止剤として有用である（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１−オンの結晶質一水塩につき開示する。

Description

【発明の詳細な説明】スピロスタニルグリコシド結晶質一水塩本発明は、ステロイドグリコシドおよびその使用方法、特に哺乳動物における血中コレステロール降下剤およびアテローム性動脈硬化症防止剤としての使用方法に関するものである。血中コレステロール降下活性を有する多くの既知製品は、たとえばポリスチレンの架橋合成ポリマー誘導体である。たとえば架橋した水不溶性の胆汁酸結合性ポリスチレン系樹脂（たとえばコレスチラミン（登録商標）剤）は砂のような「口内感触」を有し、したがって口当りが悪い。さらに、これら樹脂ビーズは典型的にはインビボでの効果が低い。すなわち、これら物質の有効血中コレステロール降下投与量は過剰であって、典型的には毎日１８〜２４ｇの処方製品である。血中コレステロール降下活性を有する他の既知のポリマーは天然物質キトサンおよびヨーロッパ特許出願公開第０２１２１４５号明細書に記載されたキトサン誘導体を包含する。しかしながら、これら物質の有効コレステロール降下投与量も多量である。他の公知の高コレステロール血症抑制剤はたとえば「アルファルファサポニン」のような植物抽出物を包含する。しかしながら、これら植物抽出物は種々の組成を有し、有意量の無用な化学物質を含有する。組成の変動に基づき、標準投与量を設定したり或いは存在する不純物を予測するのが困難である。すなわち、この種の抽出物は人間が使用するのに適していない。さらに、これら抽出物の精製は高価につく。代案として或る種の合成製造された純粋な「サポゲニン誘導」化合物、たとえばスピロスタン、スピロステンもしくはステロール誘導化合物から配合された物質は重量基準でアルファルファ抽出物よりも効果的にコレステロール吸収を抑制し、したがって合理的投与量で投与することができる。これら物質の化学組成は公知であると共に高純度で合成しうるので、これらは人間を含む温血動物が使用するのに適している。しかしながら多量に投与しなければ、純サポゲニンは有意にはコレステロール吸収を抑制しない。他の成分と配合した時にのみ、サポゲニンは所望の作用を示す。この種のサポゲニン化合物の例はチゴゲニンおよびジオスゲニンの化合物、特にそのグリコシドである。Ｐ．Ｋ．キンチア、ルー・Ｋ・バシレンコ、Ｇ．Ｍ．ゴリアヌ、Ｖ．Ａ．ボベイコ、Ｉ．Ｖ．スエチナ、Ｎ．Ｅ．マシュチエンコ、 Kim.Pharm.Zh．（１９８１）、第１５（９）巻、第５５頁は３−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）ヘコゲニンおよび血中コレステロール降下剤としてのその使用につき開示している。米国特許第４，６０２，００３号および第４，６０２，００５号明細書は或る種のステロイドグリコシド、特に３−Ｏ−（β−Ｄ−グルコピラノシル）チゴゲニンおよび３ −Ｏ−（β−Ｄ−セロビオシル）チゴゲニン、並びに高コレステロール血症を抑制するためのその使用につき開示している。３−Ｏ−（β−Ｄ−セロビオシル）チゴゲニンは、たとえばコレスチラミンと対比して優秀な血中コレステロール降下活性を有する。さらに、下記する或る種の他のステロイドグリコシドも公開されているが、これら刊行物は血中コレステロール降下活性を示していない。「ステロイドグリコシドの酸化防止剤および防黴活性の構造的特徴」、Ａ．Ｓ．ジモグロ；Ｉ．Ｎ．チョバン；Ｉ．Ｂ．ベルスカー；Ｐ．Ｋ．キンチア；Ｎ．Ｎ．バラショア；Bioo rg.Khim、第１１（３）巻、第４０８〜４１３頁（１９８５）はロコゲニンβ− Ｄ−ガラクトピラノシドおよびチゴゲニンβ−Ｄ−ラクトシドにつき開示している。「或る種の新規なステロイドβ−Ｄ−グルコピラノシド、β−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸および誘導体の製造および性質」、Ｊ．Ｊ．シュナイダー；カーボハイドレート（Carb.）・リサーチ、第１７巻、第１９９〜２０７頁（１９７１）はチゴゲニンβ−Ｄ−グルコピラヌロノシドにつき開示している。「プロスタグランジンシンセターゼ抑制剤としての活性を有するステロールグリコシド」、Ｋ．Ｈ．ペゲル、Ｈ．ウオーカー；米国特許第４，２６０，６０３号明細書（１９８１年４月７日）はヘコゲニンβ−Ｄ−グルコピラノシドを開示している。「合成グリコシドの溶血性」、Ｒ．セガル；Ｆ．シュド；Ｉ．ミロ−ゴールドツワイク；ジャーナル・ファーマスーチカル（J．Pham.）・サイエンス、第６７（１１）巻、第１５８９〜１５９２頁（１９７８）はチゴゲニンβ−Ｄ− マルトシド、チゴゲニンβ−Ｌ−フコピラノシド、スミラゲニンβ−マルトシドおよびチゴゲニンα−Ｌ−ラムノシドにつき開示している。「Capsicum Annuum IIの根からのステロイドグリコシド：カプシコシドの構造」、Ｅ．Ｖ．グツ；Ｐ．Ｋ．キンチア；Ｇ．Ｖ．ラズレウスキー；Khim．Prir．Soedin．、第（２）巻、第２４２〜２４６頁（１９８７）はチゴゲニンα−Ｄ−アラバノピラノシドおよびチゴゲニンβ−Ｄ−ガラクトピラノシドを開示している。「Cornus Florida L．からの殺軟体動物性サポニン」、Ｋ．ホステットマン；Ｍ．ホステットマン−カルダス；Ｋ．ナカニシ；エルベチカ・ヒミカ・アクタ（Helv．Chim．Acta）、第６１巻、第１９９０〜１９９５頁（１９７８）はスミラゲニンβ−Ｄ−ガラクトピラノシドを開示している。「数種類のユリ目植物からのステロイドサポニン」、Ｃ．ヤング；Ｋ．リー；Ｙ．ディング；ユナン・チウ・ヤンジウ・ゼングカン（Yunnan Zhiwu Yanjiu Zengkan）、別冊第３巻、第１３〜２３頁（１９９０）は（２５Ｓ）−ヘコゲニンセロビオシドを開示している。「炭素−１３ＮＭＲ分光分析におけるグリコシド化シフトを用いるキラル性第二級アルコールにおける第二ヒドロキシ基の絶対配置の決定」、Ｓ．セオ；Ｙ．トミタ；Ｋ．トリ；Ｙ．ヨシムラ；ジャーナル・アメリカン・ケミカル・ソサエティ、第１００（１１）巻、第３３３１〜３３３９頁（１９７８）はスミラゲニンβ−グルコシドおよびスミラゲニンα−グルコシドを開示している。「Aspa ragus Officinalisからのステロイドグリコシド」、Ｇ．Ｖ．ラズレウスキー；Ｇ．Ｍ．ゴリアヌ；Ｐ．Ｋ．キンチア；Dokl.Akad.Nauk.SSSR、第２３１（６）巻、第１４７９〜８１頁（１９７６）はサルササポゲニンβ− グルコシドを開示している。優秀な血中コレステロール降下活性を有する他のステロイドグリコシドが１９９２年６月２６日付け出願の米国特許出願第０７／９０４，９１４号明細書に開示されている。この米国特許出願は（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（β−Ｄ− セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１−オンの二水塩、並びに血中コレステロール降下剤およびアテローム性動脈硬化症防止剤としてのその使用につき開示している。発明の要点本発明の１面は、血中コレステロール降下剤またはアテローム性動脈硬化症防止剤として有用であるスピロスタニルグリコシドの結晶質一水塩に向けられる。結晶は式を有する。他の１面において本発明は、次のＸ線回折ｄ−間隔：を有する結晶質スピロスタニルグリコシドである。好ましくは上記ｄ−間隔を有する結晶質スピロスタニルグリコシドは一水塩である。他の１面において本発明は、第１図のＸ線回折パターンを有する結晶質スピロスタニルグリコシドである。さらに他の１面において本発明は哺乳動物における高コレステロール血症もしくはアテローム性動脈硬化症を抑制するための医薬組成物に向けられ、この組成物は式Ｉの結晶質化合物と医薬上許容しうるキャリヤとからなっている。この種の医薬組成物は、上記Ｘ線回折ｄ−間隔または第１図のＸ線回折パターンを有する式Ｉの結晶質化合物で構成することができる。さらに他の１面において本発明は、高コレステロール血症もしくはアテローム性動脈硬化症に罹患した哺乳動物に対し、高コレステロール血症もしくはアテローム性動脈硬化症を抑制する量の式Ｉの結晶質化合物を投与することによる、哺乳動物における高コレステロール血症もしくはアテローム性動脈硬化症の抑制方法に向けられる。さらに他の１面において本発明は、式Ｉの結晶質化合物の製造方法に向けられる。この方法は適する溶剤（好ましくはメタノール）からの結晶化からなっている。本方法の好適面においては、（３β，５ α，２５Ｒ）−３−［（β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１− オンを、充分な量のメタノール中で充分な時間にわたりスラリー化させ、冷却に際して、（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１−オン一水塩を生成させる。すなわち本発明は、熱力学上安定な結晶型の（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１−オンを提供することにより当業界に有意な進歩を与える。安定結晶型を得ることは、この化合物の開発および調節の検査を容易化させる。さらに結晶型は取扱いおよび処方（たとえば錠剤化）上の優秀な特徴を有する。比較として、非晶質または実質的に非晶質の化合物は粘着性の粘土の様な濃度を有しており濾過が極めて困難である。式Ｉの化合物は、ここでは式Ｉで示した絶対的立体化学を有する単一のエナンチオマーとして規定される。他の特徴および利点については、本明細書および請求項、並びに本発明の具体例を示す添付図面から明かとなるであろう。図面の簡単な説明第１図は本発明による好適結晶のＸ線回折パターンを示す。発明の詳細な説明典型的には周囲条件（たとえば２３℃；５０％相対湿度）にて式Ｉの所望の結晶質化合物は一水塩である。しかしながら、結晶質化合物は非化学量論的水和物として記載することもできる。何故なら、結晶質物質をどのように乾燥したか、及び結晶質物質を露呈させる相対湿度に応じて、種々の量の水を含有する結晶が単離されているからである。すなわち一水塩が「通常」の一層安定な状態であるが、一水塩は相対湿度に応じ水を獲得または喪失することがある。水の量の約０．５モル当量から約２モル当量までの相対的変化によっては、粉末Ｘ線回折パターンにより証明されるように、結晶構造は変化しないと思われる。たとえば６２％の相対湿度にて結晶は二水塩に一致する４．５％の水を含有することができ、しかもＸ線回折パターンは所望の結晶型に一致する。無水化合物でさえＸ線回折パターンにより証明される所望の結晶構造を示しうることもある。すなわち、所望の結晶は吸湿性として記載することができる。本発明を一層明瞭に理解するために、所望結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す第１図を参照することができる。第１図においては、強度（Ｙ）（ｃｐｓ）を２θ（Ｘ）（度）に対してプロットする。実質的に純粋（約５％未満の水以外の不純物）な非晶質（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１−オン（たとえば二水塩、一水塩）は、非晶質物質を適する溶剤、好ましくはメタノールまたはメタノール−水（下記するように水は化合物重量の１０％までとすることができる）に溶解させ、次いで結晶化させて所望の結晶型に変換される（明瞭には所望の結晶相への変換は非晶質物質の溶解および所望結晶型の沈澱を含む）。好ましくは非晶質出発物質は約１０重量％未満の水を有し、特に約１〜約４重量％の水を含有することが好ましい。典型的には、水の或る程度は水和物として結晶に組み込まれる。或いは、結晶化は無水条件下で行うこともでき、水和物は周囲湿度に露出すると容易に形成する。好ましくは溶剤に対する化合物の濃度は約１：１００〜約１：１０％重量／容積である。特に好ましくは濃度は約１：１００〜約４：１００％である。好ましくは溶解温度は室温（たとえば１７〜３０℃）から還流温度の範囲で変化し、６０℃〜還流温度が一層効率的である。典型的には、高温度を約８〜２４時間にわたり維持する。高温度で溶解させた場合は、得られた懸濁物を室温まで冷却すると共に結晶を約１２〜６０時間にわたり粒状化させ、次いで慣用手段により、好ましくは濾過および減圧乾燥により回収する。典型的には、脱アセチル化（後記製造例１に説明）により生成させた粗製の（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン −１１−オンを、所望結晶の上記製造の前に適する溶剤からの再沈澱により精製する。好ましくは溶剤はアセトニトリル、塩化メチレン、テトラヒドロフラン、Ｃ₁〜Ｃ₅ケトン、Ｃ₁〜Ｃ₄有機酸もしくはＣ₁〜Ｃ₄アルコールの単独または０〜６０重量％の水との組合せである。特に好ましくは溶剤は約５０／５０〜約９０／１０の重量比におけるｎ−プロパノール／水である。典型的には溶剤に対する化合物の濃度は約１：１００〜約５：１００％重量／容量、好ましくは約１：１００〜約１：１０％である。一般に粗製の脱アセチル化生成物（実質的に非晶質の特性を有する）を所望の溶剤と混合し、約１０〜６０分間にわたり好ましくは還流温度まで加熱し（室温でも充分であるが）、不溶性物質（不純物）を慣用の濾過方法（たとえば珪藻土を助剤とする）により濾別する。溶液を冷却し、得られた懸濁物を濾過により回収する。（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１−オンは、１９９２年６月２６日付け出願の米国特許出願第０７／９０４，９１４号（参考のためここに引用する）に開示された方法により作成される。特に、本発明の化合物は次のように製造することができる：（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（ヘプタアセチル−β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１−オンを求核性塩基（たとえばナトリウムメトキシドもしくはシアン化カリウム）との組合せにより、たとえばメタノール、テトラヒドロフラン、ｎ−プロパノールもしくはその混液のような溶剤中で約４０〜１００℃（典型的には還流温度）の高温度および０．５〜約５０ｐｓｉ（典型的には大気圧）の圧力下で約０．２５〜約３時間にわたり脱アセチル化して（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１ −オンを得る。（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（ヘプタアセチル−β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１−オンは、臭化ヘプタアセチル−β−Ｄ−セロビオシルと（３β，５α，２５Ｒ）−３−ヒドロキシスピロスタン−１１オンとを非プロトン性かつ反応不活性の無水溶剤（たとえばアセトニトリル）中で約２０〜約１００℃の温度にて約０．５〜約１２時間にわたり０．５〜約４当量の弗化亜鉛の存在下にカップリングさせて製造する。上記反応の出発物質（たとえば過アセチル化糖ハロゲン化物）は容易に入手することができ、或いは有機化学の常法を用いて当業者により容易に合成することができる。特に、（３β，５α，２５Ｒ）−３−ヒドロキシスピロスタン−１１ −オンはアルドリッチ・ケミカル・カンパニー社、ミルウォーキー、ＷＩから或いはステラロイド・インコーポレーション社、ウィルトン、ＮＨから入手することができる。さらに、一般に（３β，５α，２５Ｒ）−３−ヒドロキシスピロスタン−１１−オンの製造法はＬ．Ｆ．フィーザーおよびＭ．フィーザー、ステロイド、ラインホールド・パブリッシング・コーポレーション社、ニューヨーク（１９５９）並びにそこに示された引例に見られるが、以下に示す刊行物は特定の指針を与える。（３β，５α，２５Ｒ）−３−ヒドロキシスピロスタン−１１−オンは、ジャーナル・ケミカル・ソサエティ（１９５６）、第４３３０頁に記載された方法を用いて（３β，５α，２５Ｒ）−３，１２−ジヒドロキシスピロスタン−１１−オンを脱アセチル化すると共に生成物をカルシウムおよびアンモニアによりジャーナル・ケミカル・ソサエティ（１９５６）、第４３３４頁に記載された方法を用い還元して製造することができる。（３β，５α，２５Ｒ）−３，１２−ジヒドロキシスピロスタン−１１−オンは、ヘコゲニンを米国特許第３，１７８，４１８号（その開示を参考のためここに引用する）明細書に記載された方法を用いてモノ臭素化し、次いでジャーナル・ケミカル・ソサエティ（１９５６）、第４３３０頁に記載された方法で加水分解して製造することができる。これにより得られかつ不整炭素原子を有する式Ｉの化合物は、その物理化学的な相違点に基づき自体公知の方法（たとえばクロマトグラフィーおよび／または分別結晶化）によりジアステレオマーまで分離することができる。本発明の化合物はコレステロール吸収の強力な抑制剤であり、したがって哺乳動物（特に人間）における高コレステロール血症抑制剤としての治療的使用に適する。高コレステロール血症は一般的な心臓血管、脳血管もしくは末梢血管の各障害の発生に緊密に関係するので、副次的にこの化合物はアテローム性動脈硬化症、特に動脈硬化症の発生を防止する。この化合物の高コレステロール血症抑制活性は標準法に基づく方法により示すことができる。たとえばコレステロールの腸内吸収を抑制するこの化合物のインビボ活性は、メルコアおよびハーウェルの方法［ジャーナル・リピッド・リサーチ（１９８５）、第２６巻、第３０６〜３１５頁］により決定することができる。活性は、雄ゴールデン・シリアン・ハムスターにおける対照と比較したコレステロール吸収を減少させる血中コレステロール降下剤の量により決定することができる。雄ゴールデン・シリアン・ハムスターに対し、コレステロールフリーの食餌（対照動物）または１％コレステロールおよび０．５％コール酸を補充した食餌を４日間にわたり投与する。翌日、ハムスターを１８時間にわたり絶食させ、次いで０．２５％のメチルセルロースと０．６％のツイーン８０と１０％のエタノールとを含有する１．５ｍＬの水を経口投与し（対照動物）、或いはさらに所望濃度の試験すべき化合物をも含有する経口投与量を投与する。投与の直後にハムスターには第２回の１．５ｍＬの１％［Ｈ³］コレステロール（２．０μＣｉ／動物；２１０ｄｐｍ／ｎモル）と０．５％コール酸とを含有する液体ハムスター食餌を与え、さらに２４時間にわたり絶食させる。この第２回の絶食時間の後、ハムスターを殺して肝臓を切除し、鹸化させ、次いで所定量を過酸化水素の添加により脱色し、放射能を評価する。全肝臓放射能を、測定された肝臓重量に基づいて計算する。コレステロール吸収の程度を、投与の２４時間後に肝臓中に存在する経口投与物として投与された全放射能の比率として現す。化合物のアテローム性動脈硬化症防止作用は、ウサギ大動脈における脂質沈着を減少させる薬剤の量により決定することができる。雄ニュージーランド白ウサギに、０．４％コレステロールと５％落花生油とを含有する食餌を１週間にわたり給餌する（１日１回の給餌）。１週間後に何匹かのウサギ（対照群）に食餌を与え続け、残余のウサギには所望濃度の試験すべき化合物が補充された食餌を与える。８．５週間の後、薬物処理を中断し、ウサギにコレステロール含有食餌をさらに２週間にわたり与え、次いでコレステロールフリーの食餌に５週間にわたり切り換える。ウサギを殺して大動脈を胸弓（thoracic arch）から腸骨分岐に到るまで切除する。大動脈から外膜を除去し、長手方向に切開し、次いでホルマン等により記載されたようにスダン（Sudan）ＩＶで染色する［Lab．Invet．（１９５８）、第７巻、第４２〜４７頁］。染色した表面積の比率をオプチマス・イメージ・アナライジング・システム（イメージ・プロセシング・システムス社）を用いる密度測定法により定量する。脂質沈着の減少を、対照ウサギ群と対比した薬剤処理群における染色された表面積比率の減少によって示す。本発明による化合物の投与は、化合物を腸管腔に供給する任意の方法により行うことができる。これら方法は経口ルート、十二指腸ルートなどを包含する。勿論、投与するステロイドグリコシドの量は処置する検体、病状の程度、投与の方式および担当医の判断に依存する。しかしながら、有効投与量は０．７１〜２００ｍｇ／ｋｇ／１日、好ましくは２〜５０ｍｇ／ｋｇ／１日、特に好ましくは２〜７ｍｇ／ｋｇ／１日の範囲である。平均７０ｋｇの人間につき、この投与量は０．０５〜１４ｇ／１日、好ましくは０．１４〜３．５ｇ／１日、特に好ましくは０．１４〜０．５ｇ／１日の範囲である。好適である経口投与につき医薬組成物は溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、持続的放出組成物などの形態とすることができる。所定の投与方式に応じ医薬組成物は固体、半固体または液体投与形態物、たとえば錠剤、丸薬、カプセル、粉末、液体、懸濁液などとすることができ、好ましくは正確な投与量の単一投与に適する単位投与形態物とすることができる。医薬組成物は慣用の医薬用キャリヤもしくは賦形剤および活性成分としての本発明の化合物を含む。さらに、これは他の医療剤もしくは医薬剤、キャリヤ、アジュバントなどをも含むことができる。本発明による医薬組成物は０．１〜９５％の化合物、好ましくは１〜７０％の化合物を含有することができる。いずれにせよ、投与すべき組成物もしくは処方物は所定量の本発明による化合物を高コレステロール血症防止上もしくはアテローム性動脈硬化症防止上有効量にて含有する。固体医薬組成物につき慣用の無毒性固体キャリヤはたとえば医薬級のマニトール、乳糖、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、ショ糖、炭酸マグネシウムなどを包含する。液体医薬投与組成物は、ステロイドグリコシドを溶解もしくは分散させ或いは調合し、次いでこれを必要に応じたとえば水、薬用塩類、デキストロース水溶液、グリセリン、エタノールなどのキャリヤ中にて医薬用アジュバントと混合し、これにより溶液もしくは懸濁液を形成させて製造することができる。所定量の活性成分を有する各種の医薬組成物の製造方法は当業者にとって公知であるか、或いは明かである［たとえばレミントン・ファーマスーチカル・サイエンシス、マック・パブリッシング・カンパニー社、イースター、ｐａ、第１５版（１９７５）参照］。実施例１結晶質（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（β−Ｄ− セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１−オンパドル撹拌の３つ首丸底フラスコにて、部分結晶化からの未乾燥ケーキ（下記製造例Ａ参照）（上記参照）を５００ｍＬのメタノールに懸濁させた。この懸濁物はカール・フィッシャー分析により２．５％の水を含有した。撹拌懸濁物を１６時間にわたり加熱還流させ、室温まで冷却し、次いで４８時間にわたり粒状化させた。標記化合物を濾過により単離し、減圧乾燥して１６．１ｇ（８１％回収率）得た。試料の粉末Ｘ線回折は、所望結晶型の標記化合物が単離されたことを示した。同様に製造した物質を次のように分析した。熱重量分析（加熱速度３０℃／ｍｉｎ）は１００℃にて１．８％の重量損失および３００℃にて３．０％の重量損失を示した。カール・フィーッシャー滴定により測定された水含有量は１．４％であった。乾燥した物質に対する示差走査熱量測定（加熱速度２０℃／ｍｉｎ）は２つの小さい吸熱（約２１１℃および２９５℃）を示し、次いで分解した。Ｃ₃₉Ｈ₆₂Ｏ₁₄・１Ｈ₂Ｏの分析：計算値：Ｃ６０．６１；Ｈ８．３５実測値：Ｃ６０．８１；Ｈ８．３２製造例Ａ（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（β−Ｄ− セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１−オン脱アセチル化（３β,５α, ２５Ｒ）−３−［（ヘプタアセチル−β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１−オン（６．５７ｇ、６．２６ミリモル）とナトリウムメトキシド（６８ｍｇ、１．２５ミリモル）とメタノール（３５ｍＬ）とテトラヒドロフラン（７５ｍＬ）との混合物を１時間にわたり加熱還流させ、次いで室温にて１２時間撹拌した。白色沈殿物が３０分間以内に生成した。最終懸濁物を減圧濃縮して６．０ｇの粗生成物を得た。この物質をフラッシュクロマトグラフィー（溶出剤：クロロホルムに続き８：２のクロロホルム：メタノール）により精製して２．７１ｇ（５７％収率）の標記化合物を得た。¹ ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ：5.22（d,J=5Hz,1H），5.00（m,3H），4.64（ s,1H），4.58（t,J=5Hz,1H），4.54（t,J=6Hz,1H），4.34（q,J=8Hz,1H），4.27 （d,J=8Hz,1H），4.23（d,J=8Hz,1H），3.68-2.94（m,15H），2.34（m,2H），2. 08-0.81（m,23H），0.92（s,3H），0.86（d,J=7Hz,3H），0.72（d,J=6Hz,3H）， 0.59（s,3H）。ＤＥＰＴ¹³ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ：210.4(s)，108.8（s），103.6（d ），100.6（d），81.1（d），80.6（d），77.2（d），76.9（d），76.5（d），7 5.5（d），75.1（d），73.7（d）， 73.6（d），70.5（d），66.4（t），63.5（d），61.5（t），60.9（t），50.5（ d），57.1（t），54.7（d），44.3（s），44.1（d），41.7（d），36.8（d），3 5.6（t），35.2（s），34.0（t），32.6（t），31.3（s），30.2（d），29.2（t ），28.9（t），28.2（t），17.5（q），17.3（q），14.8（q），12.3（q）。ＩＲ（ＫＢｒ）：3407（s），1700（m）cm^-1。高分解能ＦＡＢＭＳ（ｍ／ｅ）：Ｃ₃₉Ｈ₆₂Ｏ₁₄Ｎａの計算値：777.4037，実測値777.4108。分析：Ｃ₃₉Ｈ₆₂Ｏ₁₄・２Ｈ₂Ｏの計算値：Ｃ59.22，Ｈ8.41；実測値：Ｃ59.48，Ｈ8.48。ＭＰ：＞300℃。パドル撹拌の３つ首丸底フラスコに上記反応により製造した２０ｇの脱アセチル化生成物と６００ｍＬのｎ−プロパノールと４００ｍＬの水とを充填した。この懸濁物を加熱還流させ、その時点で溶液が生成した。この溶液に２．０ｇの珪藻土を添加した。還流温度を維持しながら不溶性物質を濾過（スペックフリー濾過）により除去した。濾液を全容積が６００ｍＬとなるまで大気圧蒸留し、次いで室温まで冷却した。この懸濁物のカール・フィーッシャー分析は４０．５％の水を含有することを示した。得られた懸濁物を１時間にわたり粒状化させ、部分結晶化した生成物（中間相）を濾過により回収した。部分結晶化したが、生成物は所望のＸ線回折パターンを示さなかった。製造例Ｂ（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（ヘプタアセチル −β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１−オン遊離スピロスタンの弗化亜鉛促進カップリング乾燥アセトニトリル（１７５ｍＬ）における（３β，５α，２５Ｒ）−３−ヒドロキシスピロスタン−１１−オン（３．０ｇ、６．９７ミリモル）と無水弗化亜鉛（２．８８ｇ、２７．９ミリモル）との懸濁物を、蒸留による７５ｍＬのアセトニトリルの除去により乾燥させた。この懸濁物を冷却し、臭化ヘプタアセチル−β−Ｄ−セロビオシル（９．７５ｇ、１３．９ミリモル）を添加し、得られた懸濁物を６５℃まで３時間加熱した。室温まで冷却した後、塩化メチレン（１５０ｍＬ）を添加し、懸濁物を１０分間撹拌し、次いで濾過した。濾液を減圧濃縮して１０ｇの粗生成物を得た。この物質を８：２のクロロホルム：メタノールに溶解し、シリカゲルに予備吸着させ、次いでフラッシュクロマトグラフィー（溶出剤：１：１の酢酸エチル：ヘキサンに続き純酢酸エチル）により精製して６．８１ｇ（９３％収率）の標記物質を得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：5.11（複合，2H），5.05（t，J=9Hz，1），4.90 （t，J=9Hz，1H），4.83（t，J=8Hz，1H），4.49（複合，4H），4.34（dd，J=4. 5 & 12.5Hz，1H），4.04（t，J=13Hz，1H），4.03（t，J=11Hz，1H），3.72（t ，J=9.5Hz，1H），3.65（m，1H），3.56（m，1H），3.45（m，1H），2.47（m，1 H），2.22（s，2H），2.08（s，3H），2.06（s，3H），2.00（s，6H），1.99（s ，6H），1.96（s，3H），2.00-1.00（m，22H），0.98（s，3H），0.92（d，J=7H z，3H）)，0.77（d，J=7Hz，3H），0.68（s，3H）。ＤＥＰＴ¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃)δ：209.9（s），170.5（s），170.3（s），170.2（s），169.9（s）， 169.8（s），169.5（s），169.3（s），169.0（s），109.2（s），100.8（d）， 99.4（d），90.0（s），80.6（d），79.4（d），76.6（d），75.3（s），72.9（ d），72.6（d），72.5（d），71.9（d），71.8（d），71.6（d），67.8（s），6 6.9（t），64.4（d），62.1（t），61.5（t），60.8（s），60.7（d），57.6（t ），55.7（d），44.8（d），44.3（s），41.8（d），36.9（d），35.6（t），35 .2（s），34.1（t），32.7（t），31.3（t），31.2（t），30.2（d），29.0（t ），28.7（t），28.0（t），20.9（q），20.7（q），20.6（q），20.5（q），20 .5（q），17.1（q），17.0（q），14.2（q），12.0（q）。ＩＲ（ＫＢｒ）：1756（s），1706（m）cm^-1。ＭＳ（ｍ／ｅ）： 1049（M+H）。分析：Ｃ₅₃Ｈ₇₆Ｏ₂₁・Ｈ₂Ｏの計算値：Ｃ59.65，Ｈ7.37；実測値Ｃ59.86，Ｈ7.25。ＭＰ：210-212℃。製造例Ｃ（３β，５α，１２β，２５Ｒ）スピロスタン −３，１２−ジオール−１１−オン（３β，５α，１１β，２５Ｒ）−１１−ブロモスピロスタン−３−オール−１２−オン：ガラスライニングされた反応器に５０ガロンのメタノールを充填し、次いで表面下に塩酸ガスを７．７ｋｇ（５．０当量）が充填されるまで吹込んだ。この吹込みが完了した後、反応器に１８．８ｋｇ（４２．２モル）の（３β，５α，２５Ｒ）スピロスタン−３−オール−１２−オン（ヘコゲニン）と５０ガロンのメタールと１０ガロンの塩化メチレンとを充填した。この混合物を１０℃まで冷却し、１０ガロンの塩化メチレンにおける８．４ｋｇの臭素（５２．７モル、１．２５当量）の溶液を２時間かけて添加しながら約１０℃のポット温度を維持した。添加が完了した後、反応物を室温まで加温し、２時間撹拌した。この時点におけるＴＬＣは反応の完結を示した。反応物を５０ガロンの水で希釈し、次いで１０分間撹拌した。層を分離させた後、水層を３０ガロンの塩化メチレンで２回抽出した。３つの有機抽出物を合して３０ガロンの水で２回、３０ガロンの飽和ブラインで１回洗浄し、次いで７．０ｋｇの硫酸マグネシウムにより脱水した。脱水剤を３０インチのラップ（Lapp）で濾過して除去し、次いで３０ガロンの塩化メチレンで２回洗浄した。濾液と洗液とを合して全容積が７ガロンとなるまで大気圧蒸留した。１０ガロンづつのメタノール添加を２回行い、次いで連続蒸留した。最終容積が１０ガロン未満に達した後、混合物を室温まで冷却した。得られた懸濁物を２時間にわたり粒状化させ、３０インチのラップで濾過し、濾過ケーキを３ガロンづつのメタノールで２回洗浄した。４５〜５０℃にて濾過ケーキを減圧乾燥して１２．６ｋｇ（５８．６％収率）の標記化合物を得た。（３β，５α，１２β，２５Ｒ）スピロスタン−３，１２−ジオール−１１−オン：ガラスライニングされた反応器に１２．４ｋｇの（３β，５α，１１β，２５Ｒ）−１１−ブロモスピロスタン−３−オール−１２−オン（２４．３４モル）と３３ガロンのｔ−ブタノールと３３ガロンの水と７．５ｋｇ（１８９モル、７．７５当量）の水酸化ナトリウムペレットとを充填した。反応物を１．５時間にわたり還流温度に加熱、次いで４．５時間にわたり還流を維持し（ポット温度は８３℃）、次いで室温まで冷却した。この時点におけるＴＬＣは反応の完結を示した。反応物を蒸留してｔ−ブタノールを除去した。これを減圧蒸留と大気圧蒸留との両者により行った。濃縮に際し、３２．５ガロンの水を２回添加した。ｔ−ブタノールが除去された後、水性懸濁物を室温まで冷却し、２時間にわたり粒状化させた。懸濁物を３０インチのラップで濾過し、３ガロンづつの水で２回洗浄し、濾過ケーキを６０℃にて空気乾燥させた。これにより１１．１ｋｇの標記化合物を得た。製造例Ｄ（３β，５α，２５Ｒ）スピロスタン−３−オール−１１−オン（３β，５α，１２β，２５Ｒ）−３，１２−ジアセトキシスピロスタン−１１ −オン：ガラスライニングされた反応器に２６ガロンのピリジンと２６ガロンの無水酢酸と１１．０ｋｇの（３β，５α，１２β，２５Ｒ）スピロスタン−３，１２− ジオール−１１−オン（製造例Ｃ）とを充填した。この混合物を２時間にわたり還流させ（ポット温度１２８℃）、次いで室温まで冷却した。反応物を全容積が１５ガロンとなるまで減圧蒸留した（蒸留の際のポット温度は約４５℃）。この懸濁物を２５ガロンの酢酸で希釈し、さらに全容積が１５ガロンとなるまで減圧蒸留した（終了時におけるポット温度は約８０℃）。混合物を８７ガロンの水で希釈し、室温まで冷却した。５時間の粒状化の後、標記化合物を３０インチのラップでの濾過により単離し、次いで３ガロンの水で２回洗浄した。濾過ケーキを減圧下に６０℃で乾燥させて１２．２ｋｇ（９３．３％）を得た。（３β，５α，２５Ｒ）スピロスタン−３−オール−１１−オン：ステンレス鋼反応器を、内部コイルに液体窒素通過させることにより−８０℃ まで冷却した。アンモニア５４．５ｋｇ（８０Ｌ、３，２００モル、１７０当量）を反応器に添加充填した。アンモニア充填を開始すると同時に、ガラスライニングされた反応器に１０．０ｋｇの（３β，５α，１２β，２５Ｒ）−３，１２−ジアセトキシスピロスタン−１１−オン（１８．８４モル）と４０ガロンのＴＨＦとを充填した。この溶液を、全容積が２６ガロンに達するまで大気圧蒸留した。アンモニア充填が完了した後、２．８ｋｇのカルシウム屑（６９．０グラム原子、３．７当量）を３０分間かけて添加しながら、−５０℃のポット温度を維持した。この添加が完了した際、（３β，５α，１２β，２５Ｒ）−３，１２−ジアセトキシスピロスタン−１１−オンのＴＨＦ溶液を２０分間かけて添加し（添加の終了時におけるポット温度は−３５℃）、次いで１．０ガロンのＴＨＦでリンスした。反応混合物を−３５〜−４０℃にて３０分間撹拌した。反応物が−３５〜−４０℃にある際、３．３３Ｌのブロモベンゼン（４．９８ｋｇ、３１．７モル、１．６８当量）を添加し、次いで３．３３Ｌの水を添加した。この添加の後、反応器からのアンモニアの蒸留を開始した。この蒸留液を水洗浄器（Water scrubber）に向けた。アンモニアが全て除去された後、反応物（この時点で２４℃）をガラスライニングされた反応器に移し、次いで４ガロンのＴＨＦでリンスした。溶液とリンス液とを合して濃厚油状物まで減圧蒸留した。これに３５ガロンのメタノールと３．３ｋｇ（５９モル）の水酸化カリウムペレットとを添加した。この混合物を１時間にわたり加熱還流させ、冷却し、次いで１０Ｌの酢酸と４４ガロンの水とを充填した。この懸濁物をさらに室温まで冷却し、１時間にわたり粒状化させた。３０インチのラップでの濾過により標記化合物を単離し、次いで５ガロンの３：１の水／メタノールで洗浄した。５５℃で減圧乾燥して７．０５ｋｇ（８６．９％）を得た。以上、本発明を実施例につき説明したが、本発明はこれら実施例のみに限定されず、本発明の思想および範囲を逸脱することなく種々の改変をなしうることが了解されよう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＪＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＶ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ (72)発明者ザング，ジヨナサン・ビーアメリカ合衆国、コネテイカツト・06333、イースト・ライム、チヤーター・オーク・ドライブ・８

Claims

【特許請求の範囲】１．式を有するスピロスタニルグリコシドの結晶質一水塩。２．Ｘ線回折ｄ−間隔：を有する結晶質スピロスタニルグリコシド。３．スピロスタニルグリコシドが一水塩である請求の範囲第２項に記載の結晶質スピロスタニルグリコシド。４．第１図のＸ線回折パターンを有する結晶質スピロスタニルグリコシド。５．請求の範囲第１項に記載のスピロスタニルグリコシドの結晶質一水塩と医薬上許容しうるキャリヤとを含む哺乳動物における高コレステロール血症もしくはアテローム性動脈硬化症を抑制するための医薬組成物。６．結晶質一水塩がＸ線回折ｄ−間隔：を有する請求の範囲第５項に記載の医薬組成物。７．結晶質一水塩が第１図のＸ線回折パターンを有する請求の範囲第５項に記載の医薬組成物。８．高コレステロール血症もしくはアテローム性動脈硬化症に罹患した哺乳動物に対し、高コレステロール血症もしくはアテローム性動脈硬化症を抑制する量の請求の範囲第１項に記載のスピロスタニルグリコシドの結晶質一水塩を投与することを含む哺乳動物における高コレステロール血症もしくはアテローム性動脈硬化症の抑制方法。９．（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１−オンをメタノール中にスラリー化させ、次いで結晶質（３β，５α，２５Ｒ）−３−［（β−Ｄ−セロビオシル）オキシ］スピロスタン−１１ −オン一水塩を形成させることを含む結晶質ステロイドグリコシドの製造方法。１０．メタノール溶液を加熱し、冷却して結晶を形成させる請求の範囲第９項に記載の方法。