JPH08503708A - イオン交換媒体によるタキサンの抽出 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、遊離タキサンとして通常検出されないタキサンの開裂及び回収のために吸着カラムを使用する方法である。その方法は、標準の検出可能なタキサン及び他の検出不可能なタキサン化合物を含有する第１の溶液を処理して、第１の溶液よりも高い割合で検出可能な標準タキサンを含有する第２の溶液を生成させる。この方法の第１の工程は、第１開口部及び第２開口部を有するカラムにイオン交換媒体を装填する工程である。次の工程は、カラムの第１開口部に第１の溶液を置き、第１の溶液をカラムの中のイオン交換媒体を通して第２開口部へ流す工程である。この様に、タキサン化合物はイオン交換反応によって標準タキサンに転化され、第２の溶液が形成される。次いで次の工程は、カラムの第２開口部から第２の溶液を収集し、第２の溶液から第１の溶液で検出可能であった標準タキサンよりも高い割合で標準タキサンを回収する。本溶液のイオン交換媒体は、イオン交換樹脂である。イオン交換樹脂は陰イオン交換樹脂と陽イオン交換樹脂からなる混合物であってもよい。陰イオン交換樹脂はＯＨ^-の形である。陽イオン交換樹脂はＨ⁺の形である。好ましくは、イオン交換樹脂はアルミナである。

Description

【発明の詳細な説明】 イオン交換媒体によるタキサンの抽出発明の分野 本発明は、天然草木の抽出物からのタキサン（taxane）の回収及び開裂に関す るものである。より詳細には、本発明は、検出可能なタキサン及び検出不可能な タキサンを含有する抽出されたタキサン物質から検出不可能なタキサンの単離方 法である。本発明の方法はより詳細には、検出可能な遊離タキサンに結合した一 般には検出されないタキサンの開裂及び回収のための、吸着カラムの使用に関す るものである。発明の背景 試験研究において、タキソールが様々な癌腫瘍に抗ガン活性を有することが示 されている。タキソールは天然物質であり、残念なことにセイヨウイチイの木等 のTaxus brevifolia種にほんの少しの濃度でしか見いだされていない。タキサン の供給に制限があること及びタキサンに対する商業的な需要が大きいことを考慮 して、化学者はイチイの木の抽出物からタキサンの収率を増やすために様々な方 法を探索するのにかなりのエネルギーを費やしている。特には、タキソール、バ カティンIII（BaccatinIII）、１０−デアセチルバカティンＶ、７−エピタキソ ール、１０−デアセチルバカティンIII及びセファロマニン（cephalomannine） （標準的なタキサン）及びタキサン科の他のものは、癌研究者の興味を引きつけ ている。タキソールは下記構造式を有する。 上記の同定された構造は、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって タキソールとして認識されている。しかしながら、タキソール又はタキソール環 、即ち炭素数２０の環状構造を含有する（標準的なタキサンではない）化合物の 中には、ＨＰＬＣによってタキソールとして認識されていないものもある。タキ サン環は他の大きい分子に結合し得るので、標準的な試験によっては標準的なタ キサンとして認識されないために、これらの化合物は承認されないであろう。例 えば、糖が結合したタキソールはＨＰＬＣによって標準的なタキサンとして容易 には認識されない。 文献（V．Senilh等、Journal of Natural Productｓ、４７巻、１３１−１３ ７頁、１９８４年参照）では単離され認識された７−キシロシルタキソール及び ７−キシロシル−１０デアセチルタキソール等の糖が結合したタキソールがある 。不溶性のタキソールは可溶性の結合された形でイチイの木の中で移動させられ ている可能性が高い。糖分子をタキソールに付加することにより、タキソールを 非常により可溶性にし、この様により容易に生のイチイの木の針状葉や小枝じゅ うに移動させることが期待されるであろう。 上述したと同様の論文には、アルミナ吸着カラムをタキサンを含有する抽出物 の精製に使用することが述べられている。Senilh等のJournal of Natural Produ cts、４７巻、第１号、１３１頁、１月〜２月、１９８４年の論文では、相対的 に精製されたタキサン試料をアルミナカラムを通したことが明らかである。この 論文によると、ミセル即ち粗タキサン試料をエタノールでTaxus brevifoliaのバ イオマスから抽出したことが報告されている。次いで、粗抽出物を蒸発させて、 次いでＨ₂Ｏ／ＣＨ₂Ｃｌ₂を使用して液／液分配させた。次に分離した水相を捨 てて、分離した有機相を様々な溶媒と混合した。その後は、比較的精製された状 態にあるタキサン物質をシリカゲルカラムを次いでアルミナカラムを通した。 この論文によると、抽出物から回収されたタキソールが増加するかについて報 告されているかは明らかでない。増加に関する報告がないのは多分、液／液分配 の水相を捨てるという事実のためである。検出不可能なタキサンは水に可溶であ ると推定されるので、次いでこれら水可溶性タキサンはＨ₂Ｏ／ＣＨ₂Ｃｌ₂に よる液／液分配工程の水相と共に多分捨てられた。この様に、糖が結合したタキ サン等の可溶性タキサンが捨てられてしまっているので、収率の増加については 報告され得なかった。抽出物中に存在するが容易には検出できないタキサンを単 離、精製及び開裂させる方法の必要が残っている。本発明の要約 本発明の利点は、未精製のタキサン混合物中に存在するタキサンを単離するこ とである。 更に他の本発明の利点は、これらタキサンの大部分がバカティンIIIに転化さ せられるように抽出物中のタキサンを処理することである。 更に本発明の他の利点は、期待される基準の収率よりも抽出物中のタキサンの 収率を増加させることである。 本発明の他の利点は、遊離タキソール又は遊離バカティンIII又は他の遊離し た標準タキサンに結合した結合タキサン物質を転化することである。 最も広い形の本発明によると、検出可能な標準タキサンを一定割合含有する第 １の溶液を処理して、第１の溶液よりも検出可能な標準タキサンを高い割合で含 有する第２の溶液を生成させる方法において、第１開口部と第２開口部とを有す るカラムに吸着剤充填媒体を装填する工程；カラムの第１開口部に第１の溶液を 置き、第１の溶液を充填媒体を通して第２開口部へ送りそれによって第２の溶液 を形成する工程；カラムの第２開口部から第２の溶液を収集する工程；及び第２ の溶液から第１の溶液で検出可能であった標準タキサンよりも高い割合で回収す る工程を含有する方法が含まれる。好ましい実施態様の詳細な説明 最も広い形において本発明は、天然草木からタキサン物質を回収する方法に関 するものである。より詳細には本発明は、イオン交換媒体を使用して第１の溶液 に存在する検出可能なタキサンだけでなく、検出不可能なタキサンを回収する方 法に関するものである。本発明の好ましい実施態様において、タキサン物質を含 有するTaxus brevifolia種からの樹皮又は針状葉の両方のバイオマスにメタノー ル又はエタノール等の溶媒を流すことによって、ミセルを生じさせている。ミセ ルは多量の溶媒と低濃度のタキサン物質を含有する。ミセル又は第１の溶液中に 含有されるタキサンの量は、バイオマスに利用可能なタキサンが１００％である と見なされる。針状葉抽出物を使用するとより収率が高くなる。針状葉は大量の 糖が結合したタキサン（即ち水可溶性タキサン）を、木の中でタキサンを移動さ せるのに必要とすることが仮説されている。 バイオマスから抽出された第１の溶液を、外標準又は内標準を使用して高圧液 体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって、タキソール、バカティンIII、１ ０−デアセチルタキソール及び１０−デアセチルバカティンIII等の標準タキサ ン類として分析する。ＨＰＬＣの結果を、元のバイオマス中のこれらのタキサン の量ｌｇ当たりのマイクログラムに変換した。この第１の溶液中のタキサンのマ イクログラムは、元のバイオマス中のタキソール、バカティンIII、１０−デア セチルタキソール及び１０−デアセチルバカティンIII等の標準タキサンの収率 を１００％と見なす基準収率である。更に、本発明に従ってこの第１の溶液を処 理すると、理論上の１００％収率を超えることもあるほどこれらの標準タキサン が思いもかけずに高収率で得られる。 第１の溶液の基準収率を上回るという結果を生じる本発明の能力は２つのこと を意味する。１つは、元のミセル抽出物中で標準タキサンとして検出されなかっ たタキサンを含有する物質が第１の溶液中にあるに違いないということである。 ２つ目は、本発明はこれらの検出不可能なタキサン物質からタキソール又はバカ ティンIII又は１０−デアセチルタキソール又は１０−デアセチルバカティンIII を生じさせているに違いないということである。この検出不可能なタキサン物質 は、タキサン環を含有するが、その環に結合する他の化合物のために容易には標 準タキサンとして認識されないタキサン化合物から最も誘導されそうである。こ の型の検出不可能なタキサン物質の例としては、前述した７−キシロシルタキソ ールが挙げられ得る。 結合したタキサンとは一般に、タキソール環即ち炭素数２０の環構造を含有す るが分子が標準タキサンとして分析しないような余分な化学的構造を有する分子 のことを呼ぶ。一方遊離タキサンとは、タキソール、１０−デアセチルバカティ ンIII、バカティンIII、１０−デアセチルタキソール等のタキサンとして、外標 準によって確立されている保持時間でＨＰＬＣによって検出可能なタキサンのこ と である。 現在、本発明を使用して遊離標準タキサンとなる第１の溶液中の結合したタキ サンは単離されていない。しかしながら、結合したタキサンを遊離標準タキサン に転化する方法を見いだした。 第１の溶液を処理して結合したタキサンを遊離タキサンを含有する第２の溶液 に転化する方法では、イオン交換媒体が使用される。アルミナ及びイオン交換樹 脂、イオン交換媒体の両型をミセル抽出物のタキサン収率を増加させるために上 手に使用した。アルミナカラム タキサンを含有する抽出物を精製する試みの過程において、様々なアルミナカ ラムを使用した。タキサンの収率は驚くことに様々であった。商業的に入手可能 なアルミナの中には低収率を示すものもあったが、一方タキサンの理論上の基準 収率を超える収率を示すものもあった。必要な塩基特性を有するようにアルミナ を注意深く製造すると、高収率が得られることが徐々に明らかになった。更に、 第１の溶液をアルミナと接触させる温度及び時間を望ましい結果を得るために調 節し得ることを見いだした。 一般に、第１の溶液を室温（２５〜２７℃）でアルミナカラムで通す場合、結 合したタキソールを遊離タキソールに転化するために必要な接触時間は１〜４時 間であった。しかしながら、アルミナゲルの温度が３０〜７０℃まで上げられた 場合、１０〜６００秒程の短い接触時間で十分にタキサンの収率を増加させられ た。従来技術で一般に使用されている方法によって接触時間を短くする。例えば 、カラムを通る流体を速く引くために真空を使用し得るし、又は流体がカラムを 通る速度を加速するために流体の高圧流を使用し得る。 実験の過程の間、アルミナの温度を７０℃よりも上げた。これらの温度は驚く ことに期待していなかった結果を示した。カラムから抜き出した第２の溶液を分 析し、その結果は遊離タキソールが高収率を示していなかった。その代わりに、 加熱したアルミナによると全てのタキソールが遊離のバカティンIIIに、また１ ０−デアセチルタキソールが遊離の１０−デアセチルバカティンIIIに実質的に 転化された。驚いたことに、遊離のバカティンIIIがほんの少しだけエピマー化 してい た。これらのタキサンの収率の増加は、まず初めに１つの活性を有するアルミナ 物質によって生じた。 「最高の１つの活性」として呼ばれている活性を有する第２のアルミナを使用 すると、この第２のアルミナ（商業的に入手可能）は第１のアルミナよりもより 驚くべき結果を示した。第２のアルミナを通した後の第２の溶液は、僅か５０℃ で遊離のバカティンIIIの収率が４４９％であった。実験過程の終わりの頃に、 外部加熱を加えることは結合したタキサンをバカティンIII等の遊離標準タキサ ンに速く転化するのに必要ではないことを見いだした。アルミナカラムを使用前 に調整しない場合、第１の溶液をアルミナと接触させると発熱反応を起こす。こ の発熱反応は制御されないが、タキサンを遊離したタキソールの形に転化するの に十分な熱を効果的に与える。 また、第１の溶液を注意深く調製したイオン交換樹脂を通すことによって、遊 離タキソール及び遊離バカティンIIIが思いもかけない高収率で生じた。イオン 交換樹脂を通した樹皮抽出物から得る第１の溶液の収率はしばしば基準収率の１ １５％であり、針状葉の抽出から得る第１の溶液の収率はしばしば基準収率の１ ５０％であった。 イオン交換樹脂が結合したタキソールを遊離タキソールに転化する機構は、ア ルミナが結合したタキソールを遊離タキソールに転化する機構と同じであると考 えられる。その機構は多分、塩基性触媒作用による大きな分子からタキサン環の 開裂である。この機構は多分、タキサンの７位から糖分子を開裂させるのに作用 する。キシロール環はこの様に開裂させるのが難しいとして知られており、陰イ オン交換樹脂がこの機構の触媒として最も適当である。 陰イオン及び陽イオン交換樹脂としてイオン交換媒体において使用される樹脂 の最も一般的な型は、ジビニルベンゼンを架橋したポリスチレンポリマーである 。陽イオン交換樹脂はスルホン酸で誘導され、陰イオン交換樹脂は４級アンモニ ウム基で誘導される。陽イオン交換樹脂及び陰イオン交換樹脂は、どんな陰イオ ン及び陽イオンでも望まれているもので装荷させられ得る。例えば、典型的な脱 イオン水精製系では、Ｈ⁺及びＯＨ^-に変えるように予め調整された陰イオン及び 陽イオンを含有する混合床脱イオンカートリッジを含む。 陰イオン交換樹脂は結合したタキソールを遊離タキソールへ転化する際に使用 される触媒であると仮定されている。この仮定は更には、単独で陰イオン交換樹 脂を使用すると遊離タキサンの収率が増加するという事実によっても支持されて いる。しかしながら、タキサン物質のエピマー化を避けるために、脱イオン水精 製系の様に、Ｈ⁺及びＯＨ^-に変えるように予め調整された陰イオン及び陽イオン からなる混合床が望ましい。 ＯＡｃ^-（アセテート）等のＯＨ^-よりも弱い陰イオン交換体を陰イオン樹脂に 装荷する場合は、陽イオン交換（Ｈ⁺）の存在を除き得るということが予想され ていた。弱い陰イオン樹脂が使用される場合は、ＯＡｃ^-（アセテート）陰イオ ン交換体がタキサンの収率を増加させることが示されたが、これらの収率はＯＨ^- 及びＨ⁺交換を有する樹脂からなる混合床から得られる収率程印象的ではなかっ た。 イオン交換物質の再生は、陽イオン交換樹脂及び陰イオン交換樹脂が分離され 混合されていない場合には簡単であるので、第１の溶液を別々に陰イオン樹脂及 び陽イオン樹脂を通す実験を行った。陰イオン交換樹脂（ＯＡｃ^-）及び陽イオ ン交換樹脂（Ｈ⁺）を２つの別々のカラムに装填し、抽出物をそれぞれに通した 。驚いたことに、抽出物を通す順序に係わらず、樹脂の混合床によって示された タキサン物質の大幅な増加は見られなかった。事実、第１の通過の後別々の物質 に溶液を通過させると遊離タキサンに減少が見られた。 別な方法で定義されなくても、本明細書中で使用される科学的また技術的用語 は全て一般に本発明が属する当業者に理解される通りの意味を有する。本明細書 中に記載されたものと同様の又は等しい方法及び物質は本発明の範囲内と考えら れる。以下にそれに制限されないが実施例を与える。実施例Ｉ 残渣０．０５ｇ／ｍｌを含有するTaxus brevifoliaの樹皮からのメタノール抽 出物６５ｍｌを試料物質とした（試料Ｉ）。この試料はＨＰＬＣで検出されたタ キソールを６０８５μｇ有していた。バカティンIIIはこの試料には検出されな かった。この試料を加熱したアルミナカラムを通した。１５ｍｍ×３０ｃｍのカ ラム、被覆されたウエストコンデンサーにアルミナ（商業的に入手可能な）を２ ５ ｇ装填した。このアルミナは活性１を有していた。活性数を下げれば下げるほど より強力にアルミナが結合する。このアルミナの表面積は１５０〜２００ｍ²／ ｇ、メッシュサイズは５０〜２００μ、ｐＨ範囲は７．４〜９．０であった。ア ルミナを５５〜６０℃に再循環熱浴で加熱し、次いで純粋なメタノール５０ｍｌ をカラムを通して調整した。乾燥した吸着媒体と接触させて置く場合溶媒が熱を 生じるので、調整は温度の制御をするために必要である。アルミナを調整した後 、試料を５〜１５分間カラムを通させた。その後カラムをメタノール２０ｍｌで すすいだ。全混合溶液（溶液Ｉ）を収集し、ＨＰＬＣで分析した。 タキソールの基準収率を超える遊離のタキソールの付加的な収率は、アルミナ がタキサン環から分子を開裂させて、ＨＰＬＣで検出可能な遊離のタキソールを 第２の溶液中に形成するからであると推定される。比較的に遊離タキソールの増 加が低いのは、試料抽出物を形成するために使用したバイオマスのためである。 イチイ種の樹皮は多分、イチイ種の針状葉よりも結合したタキソール、特には糖 が結合したタキソールを非常に低い量でしか含有していない。実施例II Taxus brevifoliaの針状葉からの三種のメタノール抽出物を試料物質とした。 第１の試料は６５ｍｌで、タキソールを２５０μｇ及びバカティンIIIを３３４ μｇ有していた（試料１）。第２の試料は２０ｍｌで、タキソールを１４４．２ μｇ及びＨＰＬＣで検出されたバカティンIIIを２５．５μｇ有していた（試料 ２）。第３の試料はタキソールを５．０４ｇ及びＨＰＬＣで検出されたバカティ ンIIIを１．２３ｇ有していた（試料３）。試料をアルミナカラムを通した。１ ５ｍｍ×３０ｃｍのカラムにアルミナ（商業的に入手可能な）を２５ｇ装填した 。 アルミナを再循環熱浴で加熱し、次いで純粋なメタノール５０ｍｌをカラムを 通して調整した。アルミナを調整した後、試料１を１５〜２０ｐｓｉの真空圧力 下で１分間カラムを通させた。好ましい実施態様において、接触時間が短いのは 加圧された試料（２０〜４０ｐｓｉ）をカラムを通すからである。その後、カラ ムをメタノール２０ｍｌですすいだ。全混合溶液（溶液１）をＨＰＬＣで分析し た。その結果によると、元の試料１で検出不可能であった遊離バカティンIIIが １０００μｇ以上あることが示されている。 このアルミナを室温で保持し、純粋なメタノール２０ｍｌをカラムを通して調 整した。アルミナを調整した後、試料２をカラムを通した。その後、カラムを室 温でメタノール２０ｍｌですすいだ。全混合溶液（溶液２）をＨＰＬＣで分析し た。ＨＰＬＣの結果により、遊離タキソールが８μｇ、遊離バカティンIIIが２ １μｇ増えたことが示された。 しかしながら、アルミナカラムを加熱せずに、この実験はどんな調整もせずに 行った。それ故に、この実験は熱の制御もせずに行なわれた。試料３がアルミナ にあたると発熱反応が起こった。熱を制御しなかったので、遊離タキソールが驚 くべき収率となった。タキサン環からのタキソールの側鎖が開裂しない程熱は不 充分であったが、タキソール環からの大きい結合した分子が開裂する程に熱は十 分であったことが明らかである。すすいで引っ張りだされた溶液（溶液３）のＨ ＰＬＣ分析では、遊離タキソールが約４ｇ増えたことを示していた。実施例III １つの試料、Taxus brevifoliaの針状葉からのメタノール抽出物が試料物質で あった。この試料を加熱したアルミナカラムを通した。１５ｍｍ×３０ｃｍのカ ラムは、カラムに装填されたアルミナ（商業的に入手可能な）２５ｇを保持する ために綿栓を有していた。このアルミナを５０℃に再循環熱浴で加熱し、次いで 水１０％及びメタノール９０％からなる溶液５０ｍｌをカラムを通して調整した 。アルミナを調整した後、試料を短時間即ち約１０〜６００秒間カラムを通させ た。その後カラムをメタノール２０ｍｌですすいだ。全混合溶液をＨＰＬＣで分 析し、その結果は元の第１の溶液の基準収率１００％と比較してバカティンIII が４００％に増加していた。全ての遊離タキソールがバカティンIIIに転化され たことが明らかである。これは、タキソール及びおそらく他のタキサンを含有す る粗タキサン抽出物をバカティンIIIに転化させることのできる方法である。実施例IV Dowex-１ｘ８として商業的に入手可能な陰イオン交換樹脂をＯＨ^-の形になる ように処理した。陰イオン交換樹脂を２Ｍの水酸化ナトリウム２００ｍｌを樹脂 に通すことによってＯＨ^-の形に転化した。次いで、濾液のｐＨが８未満になる まで脱イオン水を樹脂に通すことによって、残りの塩基性溶液をその樹脂から洗 い落とした。 Dowex-５０ｘ８として商業的に入手可能な陽イオン交換樹脂をＨ⁺の形になる ように処理した。陽イオン交換樹脂を１Ｍ〜３Ｍの塩酸を多量に樹脂に通すこと によってＨ⁺の形に転化した。次いで、濾液のｐＨが６を超えるようになるまで 脱イオン水を樹脂に通すことによって、残りの酸性溶液をその樹脂から洗い落と した。 次に、Dowex-５０ｘ８（Ｈ⁺）２ｇをDowex-１ｘ８（ＯＨ-）２ｇと混合して、 均一な混合樹脂床を形成した。ＨＰＬＣ分析による遊離タキソールを４３３ｍｇ 含有するTaxus brevifoliaの樹皮からのメタノール抽出物２５ｍｌ（溶液IV）を 、 ５分間室温で樹脂からなる混合床を通して濾過した。次いで、樹脂を純粋なメタ ノール２５ｍｌですすぎ、得られた混合溶液をＨＰＬＣで分析した（溶液IV）。 イオン交換樹脂によって示された遊離バカティンIII及び遊離タキソールの収 率の増加は、アルミナカラムを使用して得られた結果の収率の増加と同様である 。実施例Ｖ Dowex-１ｘ８として商業的に入手可能な陰イオン交換樹脂をＯＡｃ^-（アセテ ート）の形になるように処理した。陰イオン交換樹脂を２Ｍの水酸化ナトリウム ２００ｍｌを樹脂に通すことによってＯＨ^-の形にまず初めに転化した。次いで 、濾液のｐＨが８未満になるまで脱イオン水を樹脂に通すことによって、残りの 塩基性溶液をその樹脂から洗い落とした。この陰イオン交換樹脂を希酢酸溶液（ ０．５〜２Ｍ）を樹脂に通すことによってＯＡｃ^-の形に転化し、酸残渣を脱イ オン水で洗い落とした。 Dowex-５０ｘ８として商業的に入手可能な陽イオン交換樹脂をＨ⁺の形になる ように処理した。陽イオン交換樹脂を１Ｍ〜３Ｍの塩酸を多量に樹脂に通すこと によってＨ⁺の形に転化した。次いで、濾液のｐＨが６を超えるようになるまで 脱イオン水を樹脂に通すことによって、残りの酸性溶液をその樹脂から洗い落と した。 Dowex-５０ｘ８（Ｈ⁺）４ｇ及びDowex-１ｘ８（ＯＡｃ^-）４ｇを使用して、２ つの別々の樹脂床を形成した。ＨＰＬＣ分析による遊離タキソールを２１４９μ ｇ、遊離バカティンIIIを２１８μｇ、遊離１０−デアセチルバカティンIIIを１ ２００μｇ含有するTaxus brevifoliaの樹皮からのメタノール抽出物７６ｍｌ（ 試料Ｖ）を、室温で樹脂からなる陰イオン床を通して濾過した。濾過時間は約５ 分であった。次いで、樹脂を純粋なメタノール２５ｍｌですすぎ、得られた混合 溶液をＨＰＬＣで分析した。結果を溶液Ｖ₁として示す。 次に、溶液Ｖ，を室温で樹脂からなる陽イオン床を通し、純粋なメタノール２ ５ｍｌですすぎ、得られた混合溶液（溶液Ｖ₂）をＨＰＬＣで分析した。次いで 、溶液Ｖ₂を再度陰イオン床次いで再度陽イオン床を通した。陰イオン床を最初 に通したことによって、遊離タキソールが増加した。しかしながら、結果は、最 初に陰イオン床を通した後それぞれのカラムに通すと、遊離タキソール、遊離バ カティンIII及び遊離１０−デアセチルバカティンIIIが一貫して減少することを 示した。 陰イオンＯＡｃ^-交換樹脂は、第１の通過で遊離タキサンの増加を示す。遊離 バカティンIII及び１０−デアセチルバカティンIIIタキソールは陽イオンＨ⁺交 換体に通すと減少し始める。陰イオン床を最初に通して得られた収率の増加は、 樹脂の混合床又はアルミナの実験で示されたものよりも実質的に少なかった。 従って、本発明は本発明の好ましい実施態様に関してある程度詳細に記載され ている。しかしながら、本発明は従来技術に照らして解釈される以下の請求項に よって定義されるので、本明細書中に含まれる発明の概念から逸脱しない限り、 本発明の好ましい実施態様を修正又は変更しても良いことを認識すべきである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＺ， ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＭＧ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＫ ，ＵＡ，ＵＺ (72)発明者 ワークマン，クリストファー ティー. アメリカ合衆国 80302 コロラド州ボウ ルダー，ナンバー 201，エイティーンス ストリート 903 (72)発明者 ヘンダーソン，ドニア エル. アメリカ合衆国 80304 コロラド州ボウ ルダー，ナンバー 595，ナインティーン ス ストリート 4500

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．検出可能な標準タキサン及び他のタキサン化合物を含有する第１の溶液を 処理して、該第１の溶液よりも検出可能な標準タキサンを高い割合で含有する第 ２の溶液を生成させる方法において、以下の工程、 第１開口部と第２開口部とを有するカラムにイオン交換媒体を装填する工程、 カラムの第１開口部に第１の溶液を置き、第１の溶液をイオン交換媒体を通し て該開口部へ送り、それによって該タキサン化合物を第２の溶液が形成されるイ オン交換反応によって標準タキサンに転化する工程、 カラムの該第２開口部から該第２の溶液を収集する工程、及び、 第２の溶液から該第１の溶液で検出可能であったよりも高い割合の標準タキサ ンを回収する工程を特徴とする前記方法。 ２．該イオン交換媒体が鉄イオン交換樹脂である、請求項１に記載の方法。 ３．該イオン交換樹脂が陰イオン交換樹脂と陽イオン交換樹脂からなる混合物 である、請求項２に記載の方法。 ４．該陰イオン交換樹脂がＯＨ^-の形である、請求項３に記載の方法。 ５．該陽イオン交換樹脂がＨ⁺の形である、請求項３に記載の方法。 ６．該イオン交換媒体がアルミナである、請求項１に記載の方法。 ７．該アルミナを５０℃より高い温度に加熱して、それによて第２の溶液が主 としてバカティンIIIの形のタキサンを含有する、請求項６に記載の方法。 ８．該イオン交換媒体が２５℃である、請求項１に記載の方法。 ９．第１の溶液が該検出可能な標準タキサン、他のタキサン化合物、残渣及び 溶媒を含有する、請求項１に記載の方法。 10． 該溶媒がアルコールである、請求項９に記載の方法。 11． 該第２の溶液中の該標準タキサンがタキソールの形である、請求項１に 記載の方法。 12． 該第２の溶液中の該標準タキサンがバカティンIIIの形である、請求項 １に記載の方法。 13． 基準量の遊離標準タキサン及び少量の結合したタキサンを含有する抽出 物を処理して、基準量を超える遊離標準タキサンを含有する第２の溶液を生成さ せる方法において、以下の工程、 カラムに装填させられるように適合させられたイオン交換媒体を供給する工程 、 媒体をカラムに装填する工程、 抽出物をカラムを通すようにして、抽出物を媒体とカラム内で接触させて、結 合したタキサンを遊離標準タキサンに転化する工程、及び、 抽出物中の基準量のタキサンを超える量の遊離標準タキサンを含有する第２の 溶液をカラムから収集する工程を特徴とする前記方法。 14． 該基準量の標準タキサンが収率１００％であり、該第２の溶液中の該遊 離標準タキサンの量がタキサンの収率１１５％を超える、請求項１３に記載の方 法。 15． 該媒体がイオン交換樹脂である、請求項１３に記載の方法。 16． 該媒体がアルミナゲルである、請求項１３に記載の方法。 17． 該イオン交換媒体を１２５℃より高い温度まで上げ、かつ該第２の溶液 中の該遊離標準タキサンがバカティンIIIの形である、請求項１３に記載の方法 。