JPH08501568A

JPH08501568A - 炭水化物結合性蛋白質の抗炎症性、寛容原性および免疫刺激性特性

Info

Publication number: JPH08501568A
Application number: JP6508558A
Authority: JP
Inventors: スミス，リチャード; ディー．ハーゼ，ルイス; ディー．アームストロング，グレン
Original assignee: アルバータリサーチカウンスル
Priority date: 1992-10-02
Filing date: 1993-10-04
Publication date: 1996-02-20
Also published as: DE69317435D1; AU665126B2; EP0666757B1; KR950703355A; US5453272A; ATE163857T1; WO1994007516A1; AU5105593A; DE69317435T2; EP0666757A1; CA2144850A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体、特にα−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造に結合可能な蛋白質の投与による炎症性応答の抑制、抗原に対する耐性の誘発、抗原に対する免疫応答の剌激、および例えば転移に関連する細胞付着の抑制または増強の方法に向けられるものである。このようなα−２，６シアル酸およびα−２，６シアル酸結合性蛋白質または断片もしくは誘導体を含有する医薬も開示される。

Description

【発明の詳細な説明】炭水化物結合性蛋白質の抗炎症性、寛容原性および免疫剌激性特性発明の背景１．発明の分野本発明は、炭水化物結合性蛋白質の投与による免疫応答または細胞相互作用の増強または阻害に向けられるものである。特に、本発明は炭水化物結合性蛋白質の投与による炎症性応答の抑制、抗原に対する耐性の誘発、抗原に対する免疫応答誘発の調節、および細胞付着の阻害または増強に向けられる。２．参考文献全ての刊行物、特許および特許出願のこれらの開示を、ここに参考としてそのまま取り入れる。３．技術状況哺乳動物細胞に関わる重要な工程、例えば成長、移動、形態学的進化、および分化等は、細胞表面に作用する細胞外信号により部分的に制御されている^1-3。ある種の外部刺激は、細胞外液体を介して細胞に到達するが、一方で他のシグナルは隣接するかまたは接近する細胞表面から受け取られ、直接的細胞−細胞接触を通してそれらの影響を及ぼす⁴，⁵。特定の細胞表面レセプタは、特定の結合を介して付着する細胞の分子的シグナルを感じとることができ、またその結合を細胞応答に翻訳する生化学的機構が存在することを示唆する証拠がある。例えば、複雑な細胞表面の相互作用は、病原の標的組織への結合^6,7、精子−卵子結合⁸、免疫系における細胞間の相互作用^9, ¹⁰ 、および胚発達間の細胞認識¹¹等の直接的過程を補助するものと考えられている。加えて、細胞−細胞認識における欠陥は、新生物転換および転移を特徴づける制御されない細胞成長および死の原因となるものと考えられている^12,13。別の証拠は、細胞認識工程が、糖複合体の炭水化物鎖またはグリカン部分に媒介されることを示唆している^4,14-16。例えば、一方の細胞の表面糖複合体の、他の細胞の相補的炭水化物結合性蛋白質（レクチン）に対する結合は、特異的相互作用の開始を引き起こし得る。炭水化物結合性蛋白質の一つの重要な群は、セレクチン（ＬＥＣ−ＣＡＭ）蛋白質（レクチン＋ＥＧＦ＋相補的制御領域−細胞付着分子）である。これらの蛋白もしくは機能的に類似する蛋白またはレクチンは、細胞−細胞接触の媒介によって、および白血球の管外遊出によって、免疫応答（炎症性応答を含む）における臨界適役割を演じるであろう^17-22。特定の炭水化物リガンドは、セレクチン蛋白質および他のレクチン類について、推定されるレセプタ構造の部分として同定されている^17-25。同定される構造は、α−２，６およびα−２，３シアル酸構造を含む。セレクチン蛋白質および／または他のレクチン類との相互作用による炎症の調節、免疫抑制および抗原に対する耐性の誘導のためのオリゴ糖およびそれらの誘導体の使用は、開示されている^26-28。セレクチンＧＭＰ−１４０から誘導されたペプチド類であって、ＧＭＰ−１４０および他のセレクチン類の結合を阻害するものも記述されている²⁹。発明の要約本発明は、ある種の炭水化物結合性蛋白質、例えばレクチンが、哺乳動物に投与された場合に特定の免疫応答および細胞相互作用を増強あるいは阻害するという発見に向けられるものである。特に本発明は、炭水化物結合性蛋白質が、炎症性応答の阻害、抗原に対する免疫応答の調節、抗原に対する長期耐性の誘発および細胞付着の抑制または増強のために、哺乳動物に対して投与され得るという発見に向けられるものである。本発明は、末端シアル酸基またはそのような末端シアル酸基を含む分子を結合可能な炭水化物結合性蛋白質が、特定の免疫応答または細胞付着の阻害または増強の手段として、哺乳動物に対して投与され得るという発見に特に向けられるものである。更に特定的には、本発明は、末端結合α−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造を結合可能なレクチン類が、炎症性応答、抗原に対する免疫応答の誘発の調節、および抗原に対する長期耐性の誘発を含む種々の免疫応答の増強または阻害のために哺乳動物に投与され得るという発見に向けられるものである。加うるに、本発明は、α−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造を結合可能な炭水化物結合性蛋白質が、細胞付着の抑制または増強のために哺乳動物に投与され得るという発見に向けられるものである。従って、方法の側面の一つにおいて本発明は、末端α−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造を結合可能な、例えばレクチンまたはその断片もしくは誘導体等の炭水化物結合性蛋白質の少なくとも１種の免疫調節に有効な量との組合せにおいて、抗原を投与することによる、該抗原に対する免疫応答の誘発の調節方法に向けられるものである。方法の側面における他の一つでは、本発明は、抗原の投与、およびそれに続く末端α−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造を結合可能な、例えばレクチンまたはその断片もしくは誘導体等の炭水化物結合性蛋白質の少なくとも１種の投与による、該抗原に対する長期耐性の誘発方法に向けられるものである。方法の側面における更に別の１側面では、本発明は、末端α−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造を結合可能な、例えばレクチンまたはその断片もしくは誘導体等の炭水化物結合性蛋白質の少なくとも１種の投与による、例えば腫瘍細胞の転移および炎症に関連する特定の細胞の付着現象の増強または阻害方法に向けられるものである。方法の側面におけるまた更に別の面では、本発明は、末端α−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造を結合可能な、例えばレクチンまたはその断片もしくは誘導体等の炭水化物結合性蛋白質の１種以上の投与による、肺炎症および／または肺損傷の治療に向けられるものである。図面の簡単な記述図１ａは、ＣＤ２マーカーを発現しているヒト末梢血白血球（ＰＢＬ’ｓ）（Ｅ−ロゼッタ型Ｔ細胞）に対する百日咳トキシン（ＰＴ）のビオチニル化β−サブユニットの結合のフローサイトメトリー分析を示す。図１ｂは、ＣＤ１１ｂマーカーを発現しているヒトＰＢＬ（顆粒球／単球）に対する百日咳トキシン（ＰＴ）のビオチニル化β−サブユニットの結合のフローサイトメトリー分析を示す。図１ｃは、ＣＤ１９マーカーを発現しているヒトＰＢＬ（Ｂ細胞）に対する百日咳トキシン（ＰＴ）のビオチニル化β−サブユニットの結合のフローサイトメトリー分析を示す。図２ａは、ＣＤ２マーカーを発現しているヒトＰＢＬ（Ｅ−ロゼッタ型Ｔ細胞）に対する百日咳トキシン（ＰＴ）のビオチニル化Ｓａｍｂｕｃｕｓｎｉｇｒａアグルチニン（ＳＮＡ）の結合のフローサイトメトリー分析を示す。図２ｂは、ＣＤ１１ｂマーカーを発現しているヒトＰＢＬ（顆粒球／単球）に対するビオチニル化ＳＮＡの結合のフローサイトメトリー分析を示す。図２ｃは、ＣＤ１９マーカーを発現しているヒトＰＢＬ（Ｂ細胞）に対するビオチニル化ＳＮＡの結合のフローサイトメトリー分析を示す。図３ａは、ＣＤ２マーカーを発現しているヒトＰＢＬ（Ｅ−ロゼッタ型Ｔ細胞）に対するビオチニル化Ｍａａｃｋｉａａｍａｒｅｎｓｉｓアグルチニン（ＭＡＡ）の結合のフローサイトメトリー分析を示す。図３ｂは、ＣＤ１１ｂマーカーを発現しているヒトＰＢＬ（顆粒球／単球）に対するビオチニル化ＭＡＡの結合のフローサイトメトリー分析を示す。図３ｃは、ＣＤ１９マーカーを発現しているヒトＰＢＬ（Ｂ細胞）に対するビオチニル化ＭＡＡの結合のフローサイトメトリー分析を示す。図４は、ビオチニル化レクチン類、特にＳＮＡおよびＭＡＡの、シアリルルイスＡＳｙｎｓｏｒｂ^TM（ＣｈｅｍｂｉｏｍｅｄＬｔｄ）を用いた腫瘍細胞系への結合の投与量依存的阻害を示す。図５は、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）により活性化されたヒトＰＢＬに対するビオチニル化ＳＮＡの結合を研究するフローサイトメトリーアッセイの結果を示す。図６は、ＳｕｐｅｒＣａｒｒｉｅｒ（商標）（ＳＣ）抗原により免疫され、続いてＳＮＡＮ百日咳トキシン（ＰＴ）のβ−オリゴマー、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が投与されるか、または免疫されないＢａｌｂ／ｃマウス群において観察されたヒヅメ腫脹により測定されるＤＴＨ炎症応答を示す。図７は、ＳＣにより免疫され、次いで種々の投与量のＳＮＡ、ＰＢＳを投与されるか、または免疫されずにＳＣ抗原に攻撃されるＢａｌｂ／ｃマウス群において観察されたヒヅメ腫脹により測定されるＤＴＨ炎症応答を示す。図８は、ＳＮＡとの組合せにおいてＳＣを投与されたＢａｌｂ／ｃマウス群において観察されたヒヅメ腫脹により測定されるＤＴＨ炎症応答の発達を示す。図９は、百日咳トキシンのβ−サブユニットとの組合せにおいてＳＣを投与されたＢａｌｂ／ｃマウス群において観察されたヒヅメ腫脹により測定されるＤＴＨ応答の発達を示す。図１０は、ＳＮＡ、百日咳トキシン（ＰＴ）のβ−オリゴマーもしくはＰＢＳにより免疫されるか、または免疫されず、次いで４週間後にＳＣ抗原にて再攻撃されるＢａｌｂ／ｃマウス群におけるヒヅメ腫脹により測定されるＤＴＨ応答に対する長期効果を示す。図１１ａは、種々の炭水化物結合性蛋白質が有するヒト腫瘍細胞（Ｕ９３７細胞）のヒト膿帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）への付着に対する効果の試験を表す。図１１ｂは、種々の炭水化物結合性蛋白質が有する多形核細胞（ＰＭＮ）のヒト膿帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）への付着に対する効果の試験を表す。図１２は、Ｅ．ｃｏｌｉリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を鼻腔内的に投与され、続いてＳＮＡ、百日咳トキシンβ−オリゴマー（ＰＴ）、シアリルルイスＡ（ＳＬｅＡ）、およびシアリルルイスＸ（ＳｌｅＸ）を投与されたＢａｌｂ／ｃマウス群における肺重量の減少百分率を示す。図１３は、ＰＢＳ中のＯＶＡ（アルブミン、鶏卵、Ｓｉｇｍａ）およびＤＤＡ（ジメチルオクタデシルアンモニウムブロマイド、Ｋｏｄａｋ）により免疫され、続いてＳｌｅＸ、ノイラミニダーゼ、ＰＢＳの投与を受けるか、または免疫されないＢａｌｂ／ｃマウス群におけるヒヅメ腫脹応答を示す。図１４は、Ｅ．ｃｏｌｉリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を鼻腔内的に投与され、続いてノイラミニダーゼ、サルファターゼ、ベーターグルクロニダーゼ、ＡＲＣ１９９、ＡＲＣ２００を投与されたＢａｌｂ／ｃマウス群における肺重量の減少百分率を示す。図１５は、Ｅ．ｃｏｌｉリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を鼻腔内的に投与され、続いてノイラミニダーゼ、サルファターゼ、ベーターグルクロニダーゼ、ＡＲＣ１９９、ＡＲＣ２００を投与されたＢａｌｂ／ｃマウス群における肺洗浄中の顆粒球減少を示す。好ましい実施態様の詳細な記述本発明は、ある種の炭水化物結合性蛋白質が、哺乳動物に投与された場合に炎症性応答の抑制、抗原に対する耐性の誘発、抗原に対する免疫応答の誘発の調節および、例えば腫瘍細胞の転移に関与する細胞付着現象の阻害または増強において有効であるという発見に向けられるものである。１．定義ここで使用されるように、以下の用語は下記の意味を有する： “炎症性応答”または“炎症性疾患”は、特異的および非特異的防御系に関連する免疫反応を指す。特異的防御反応は、抗原に対する特異的免疫系反応である。特異的防御系反応の例は、ウイルス、アレルゲン等の抗原に対する抗体応答および遅延型過敏症を含む。非特異的防御系反応は、一般に免疫学的記憶が不能な白血球により媒介される炎症性応答である。このような細胞は、マクロファージ、好酸球および好中球を含む。非特異的反応の例は、蜂に剌された直後の腫脹、および細菌感染部位のＰＭＮ白血球の集合（例えば細菌性肺炎における肺浸潤および膿瘍における膿汁形成）を含む。本発明の範囲内における他の“炎症性応答”または“炎症性疾患”は、例えばリュウマチ性関節炎、狼瘡、多発性硬化症、虚血後白血球媒介組織損傷（再潅流損傷）、凍傷または凍傷ショック、急性白血球媒介肺損傷（ＡＲＤＳ）、喘息、外傷性ショック、敗血性ショック腎炎等の自己免疫疾患、ならびにアトピー性皮膚炎、乾癖、および炎症性腸炎を含む急性および慢性の炎症を含む。アテローム性動脈硬化症、および血栓等の種々の血小板−媒介病変も“炎症性応答”または “炎症性疾患”の定義の包含される。加えて、“炎症性応答”または“炎症性疾患”は、結腸癌、および黒色腫を含む特定の例を有する循環する腫瘍細胞の付着を含んでもよい。 “シアル酸”は、５−アミノ−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−ノヌロン酸（“Ｎｅｕ５Ａｃ”）およびその誘導体を指す。ここにおけるシアル酸誘導体の誘導体を記述する命名法は、Ｒｅｕｔｅｒら³⁴に示されている。サッカライド単位の化学修飾は、この技術で周知である。例えば、化学修飾されたシアル酸誘導体は、９−アジド−Ｎｅｕ５Ａｃ、９−アミノ−Ｎｅｕ５Ａｃ、９−デオキシ−Ｎｅｕ５Ａｃ、９−フルオロ−Ｎｅｕ５Ａｃ、９−ブロモ−Ｎｅｕ５Ａｃ、８−デオキシ−Ｎｅｕ５Ａｃ、８−エピ−Ｎｅｕ５Ａｃ、７−デオキシ−Ｎｅｕ５Ａｃ、７−エピ−Ｎｅｕ５Ａｃ、７−８−ビス−エピ−Ｎｅｕ５Ａｃ、４−Ｏ−メチル−Ｎｅｕ５Ａｃ、４−Ｎ−アセチル−Ｎｅｕ５Ａｃ、４，７−ジ−デオキシ−Ｎｅｕ５Ａｃ、４−ウノ−Ｎｅｕ５Ａｃ、３−ヒドロキシ− Ｎｅｕ５Ａｃ、３−フルオロ−Ｎｅｕ５Ａｃ酸を含み、ならびにＮｅｕ５Ａｃの６−チオ類似体がこの技術において知られている。このようなシアル酸誘導体の調製方法は、１９９２年５月２６日出願の通常に譲渡される処理番号０００４７５−００５、米国特許出願番号０７／８８９，０１７に教示があり、この出願は、ここに参考としてその全体を取り入れる。 “α−２，６シアル酸構造”は、末端Ｎｅｕ５Ａｃα（２，６）ガラクトース配列またはその誘導体を含む分子を指す。α−２，６シアル酸構造を含む分子は、セレクチンおよび他のレクチンについての推定されるレセプタ構造の一部を含むものとして同定される。 “α−２，３シアル酸構造”は、末端Ｎｅｕ５Ａｃα（２，３）ガラクトース配列またはその誘導体を含む分子を指す。α−２，３シアル酸構造を含む分子は、同様にセレクチンおよび他のレクチンについての推定されるレセプタ構造の一部を含むものとして同定される。 “炭水化物結合性蛋白質”は、哺乳動物細胞の表面に含まれる炭水化物構造に対して結合しうる非免疫原の任意の蛋白質、特にレクチンまたはその断片もしくは誘導体を指す。一般的には、本願においては“炭水化物結合性蛋白質”は、末端のシアル酸構造、特にはα−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造またはその誘導体を結合可能な蛋白質を指す。 “レクチン類”は、しばしば植物から得られ、２個以上の炭水化物結合性部位を有する非免疫原の炭水化物結合性蛋白質またはその誘導体もしくは断片を指す。これらの結合蛋白質は、典型的には細胞を凝集させ、複合炭水化物を沈殿させる能力を有する。レクチン類は、それらの炭水化物結合特異性に基づいて分類され、この技術においては周知である。 “急性呼吸困難症候群”または“ＡＲＤＳ”は、白血球媒介肺損傷を有する炎症症状を指す。 “再潅流損傷”は、白血球媒介組織損傷を有する炎症症状を指す。本願における“百日咳トキシン”または“ＰＴ”は、百日咳の病因物質であるＢｏｒｄｅｔｅｌｌａｐｅｒｔｕｓｓｉｓにより産生されるビルレンス因子の一つである百日咳トキシン（ＰＴ）のβサブユニットまたはβオリゴマーを指す。この蛋白質は、α−２，６シアル酸構造およびα−２，３シアル酸構造の両者に結合する。 “Ｓａｍｂｕｃｕｓｎｉｇｒａアグルチニン”または“ＳＮＡ”は、ニワトコのキナ皮から得られ、ガラクトースにα（２，６）−結合する末端シアル酸を含むオリゴサッカライドに対して高い親和性をもって結合するが、末端α−２，３シアル酸構造を含む分子を結合しないヘマグルチニン−型植物レクチンを指すか、またはα−２，６シアル酸構造を結合可能な断片もしくは誘導体を指す。 “Ｍａａｃｋｉａａｍｕｒｅｎｓｉｓアグルチニン”または“ＭＡＡ”は、 α−２，３シアル酸構造を含む分子を結合するＭａａｃｋｉａａｍｕｒｅｎｓｉｓの種子に含まれる植物ロイコアグルチニン型レクチン、またはα−２，３シアル酸構造を結合可能な断片もしくは誘導体を指す。 “ノイラミニダーゼ”は、糖蛋白質および糖脂質のオリゴサッカライド鎖の末端におけるガラクトース−Ｎ−アセチルノイラミン酸結合を加水分解し、これによってα−２，６シアル酸構造を含む分子を結合可能なＮ−アセチルノイラミン酸、またはα−２，６シアル酸構造を結合可能な断片もしくは誘導体を遊離する。 “フコシダーゼ”は、糖蛋白質および糖脂質のオリゴサッカライド鎖からフコースを切断し、これはα−２，３シアル酸構造を含む分子、またはα−２，３シアル酸構造を結合可能な断片もしくは誘導体を結合可能である。 “β−ガラクトシダーゼ”は、ＧｌｃＮＡｃ骨格を破壊する酵素であり、これはα−２，３シアル酸構造を含む分子、またはα−２，３シアル酸構造を結合可能な断片もしくは誘導体を結合可能である。 “サルファターゼ”は、炭水化物から硫酸基を切断する酵素である。 “細胞媒介免疫応答”は、細胞−細胞相互作用により媒介される哺乳動物免疫応答を指す。この用語に含まれるものは、遅延型過敏症応答（ＤＴＨ）等の抗原に対する細胞媒介炎症性応答、ならびに心筋梗塞、ウイルス−誘発肺炎、ショックおよび後遺症（例えば多器官不全）、急性呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、アレルギー性応答等の細胞媒介炎症性応答である。一般的に、細胞媒介免疫応答は、白血球媒介応答である。 “液性免疫応答”は、抗原−抗体相互作用に関連する哺乳動物免疫応答を指す。 “ＤＴＨ炎症応答”または遅延型過敏症応答は、単核細胞−富有炎症および抗原的攻撃後に起こる腫脹を生じるＴ細胞媒介反応である。 “耐性”または“免疫学的耐性”は、同様な条件（例えば投与量等）において特定の抗原により引き出される最初の免疫応答に比較して、第２の、または引き続く抗原的攻撃において前記抗原に対して哺乳動物に誘発される低減された免疫応答を指す。本発明において“耐性”は、抗原の投与および引き続く、α−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造に結合する炭水化物結合性蛋白質の１種以上の投与により得られるであろう。２．有用性いずれの理論にも制限されることなく、主題の炭水化物結合性蛋白質は免疫応答に多様に影響する。炭水化物結合性蛋白質は、それが免疫系の特定の抗原に対する最初の曝露と同時に投与された場合に、哺乳動物が該抗原について“教育” されることを阻害しうる。また、炭水化物結合性蛋白質は、免疫系の該抗原に対する第２回または後の曝露の後に投与された場合に、細胞媒介免疫応答分泌期（例えばＤＴＨ応答の炎症成分）を阻害しうる。さらに、主題の炭水化物結合性蛋白質は、免疫系の該抗原に対する第２回または後の曝露の後に投与された場合に、耐性を誘導し得る。更に、α−２，６シアル酸構造を結合し、あるいはα２，３−シアル酸構造を結合する炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の投与は、α−２，６およびα−２，３構造を含むＬＥＣ−ＣＡＭ蛋白質および他のレクチンのそれに対する推定されるレセプタに対する結合に影響を与える。本発明は、特に、例えばレクチン等の非免疫原の炭水化物結合性蛋白質または α−２，６および／またはα−２，３シアル酸構造に結合可能な断片もしくは誘導体の投与による、哺乳動物における特定の免疫応答または細胞相互作用の増強または阻害方法を提供する。 α−２，６および／またはα−２，３シアル酸構造を結合可能なレクチン等の蛋白質は、この技術で既知である。α−２，６および／またはα−２，３シアル酸構造を結合可能な蛋白質は、例えば百日咳トキシン（ＰＴ）のβ−サブユニット、Ｓａｍｂｕｃｕｓｎｉｇｒａアグルチニン（ＳＮＡ）、ノイラミニダーゼ、サルファターゼ、フコシダーゼ、Ｍａａｃｋｉａａｍｕｒｅｎｓｉｓアグルチニン（ＭＡＡ）、β−ガラクトシダーゼ、およびα−２，６および／またはα −２，３シアル酸構造を結合可能な断片または誘導体を含む。しかしながら、本発明は特定の例示される炭水化物結合性蛋白質の使用に限定されるものではなく、むしろα−２，６および／またはα−２，３シアル酸構造を結合可能な任意の断片または誘導体の使用を包含するものであり、これは哺乳動物に投与された場合に、免疫応答および細胞相互作用、特に炎症性応答または症状、抗原に対する耐性、抗原に対する免疫応答の調節の増強または阻害、ならびに例えば転移および炎症に関与する細胞付着現象の阻害または増強を生じる。リガンド間の結合の慣用のアッセイ方法により、α−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造を結合可能な他の蛋白質を同定することは、十分に通常の技術水準にある。このような方法は、例えば競合結合アッセイおよびレセプタ結合アッセイを含む。本発明は、特に、Ｐｅａｒｃｅ−Ｐｒａｔｔら³¹ に記述される結合を使用して炭水化物結合特異性を測定する。従って、本発明は更に、種々の免疫応答および細胞相互作用、例えば炎症、抗原耐性、抗原応答の調節または細胞付着を誘発または抑制し得る蛋白質が、それらのα−２，６および／またはα−２，３シアル酸構造を結合する能力に基づいて推定的に同定され得る方法を提供する。本発明において使用するために好適な蛋白質は、α−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造を結合しうるであろう。しかしながら、有効な蛋白質の付加的な必須条件は、インビボ投与について適切であることを含むであろう。特に、該炭水化物結合性蛋白質は、毒性であってはならず、また典型的には約０．５−５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である所望の投与量において十分に溶解性でなければならない。これに関連して、試験を行った炭水化物結合性蛋白質の一つ、特定的にはＭＡＡが毒性を有することが見い出された。しかしながら、例えば化学的誘導、変異生成、または組換え技術により、毒性を有さず、しかもα−２，３シアル酸構造を結合可能なＭＡＡの誘導体を生成させることが可能であろう。従って、本発明は、例えばレクチン等のα−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造を結合する能力を維持しつつそれらが非毒性となるように修飾された、 α−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造を結合可能な蛋白質の断片または誘導体をも意図するものである。同様にして、所望の投与量において充分に溶解しない炭水化物結合性蛋白質は、例えば親水性残基の付加または変異生成により可溶化され得る。蛋白質の可溶化方法はこの技術において既知である。本発明は、特に、好−炎症的に有効量の、α−２，６および／またはα−２，３シアル酸構造またはそのようなシアル酸構造を含む分子を結合可能なレクチン等の１種以上の蛋白質を投与することによる、炎症性応答または疾患の抑制方法を提供するものである。本発明により治療可能な炎症性応答または疾患は、特異的および非特異的防御系が関与する炎症性免疫反応を含む。上記に議論したように、そのような症状は、ウイルスアレルゲン等の抗原に対する抗体応答、遅延型過敏症、リュウマチ性関節炎、狼瘡、虚血後白血球媒介組織損傷（再潅流損傷）、凍傷または凍傷ショック、急性白血球媒介肺損傷（例えば、急性呼吸困難症候群）、喘息、外傷性ショック、敗血性ショック腎炎等の自己免疫疾患、ならびにアトピー性皮膚炎、乾癬、および炎症性腸炎を含む急性および慢性の炎症を含む。更に本発明により治療されうる炎症性疾患は、アテローム性動脈硬化症、および血栓等の血小板−媒介病変も包含されうる。特に興味ある炎症性症状は、遅延型炎症性反応、再潅流損傷、および急性−白血球媒介肺損傷（ＡＲＤＳ）を含む。本発明は、炎症性応答または疾患が、α−２，６および／またはα−２，３シアル酸構造に結合可能な例えばレクチン等の蛋白質またはその断片もしくは誘導体の１種以上の有効量を投与することにより抑制されうる一般的方法を提供するものである。しかしながら、特に本発明は、炎症性応答または疾患が、百日咳トキシンのβ−サブユニット（ＰＴ）、Ｓａｍｂｕｃｕｓｎｉｇｒａアグルチニン（ＳＮＡ）、Ｍａａｃｋｉａａｍｕｒｅｎｓｉｓの非毒性誘導体、フコシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ノイラミニダーゼならびにα−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造を結合可能なそれらの誘導体または断片から選択される１種以上の蛋白質の有効量投与することにより治療または抑制されうる方法を提供するものである。更に本発明は、α−２，６および／またはα−２，３シアル酸構造を結合可能な蛋白質または断片もしくは誘導体の１種以上の有効量を投与することによる、哺乳動物における免疫応答および細胞付着現象の剌激または阻害のための一般的方法を提供するものである。このような免疫応答は、細胞媒介および液性免疫応答を含む。既に論じたように、このような免疫応答は、特に炎症性応答または炎症性疾患を含む。本発明は、更にα−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造に結合可能な例えばレクチン等の炭水化物結合性蛋白質の１種以上のとの組合せにおいて、哺乳動物に抗原を投与することを含む抗原に対する免疫応答の誘発に影響を与える方法を提供するものである。例えば、ＳＮＡは抗原と共に投与された場合に、該抗原に対する免疫応答の誘発を調節することが見い出された。従って、主題の炭水化物結合性蛋白質は、ワクチン、人工器官または組織移植物、同種異系器官および組織移植物と共に、それに含まれる外来性抗原に対する免疫応答を調節する手段として投与され得る免疫調節剤としての利用可能性を有するであろう。更に、主題のα−２，６および／またはα−２，３結合蛋白質は、特定の抗原により免疫された哺乳動物に投与された場合に前記抗原に対して長期耐性を誘導することが見い出された。特に、抗原により免疫された哺乳動物に対するＳＮＡの投与は、同抗原による引き続く攻撃に対して前記動物の低減された免疫応答を示すことが見い出された。従って、主題の炭水化物結合性蛋白質、特にＳＮＡは、免疫寛容剤としての利用性を有する。このような性質が与えられた場合に、このような炭水化物結合性蛋白質、またはその断片もしくは誘導体、特にＳＮＡは、“免疫寛容性”誘導アレルゲンの投与はアレルギー性疾患の治療手段として知られていることから、アレルギー性疾患の治療に特に好適であろう。本発明は更に、ある種の細胞型、特に腫瘍細胞および多形核細胞（ＰＭＮ）の内皮細胞に対する付着、の阻害あまたは増強方法を提供するものである。これに関連して、ＳＮＡ蛋白質が、インビトロにおいて表面にＥ−セレクチン（ＥＬＡＭ−１）を発現する内皮細胞に対するＰＭＮおよび腫瘍細胞の結合を増強することが見い出された。これと対照的に、百日咳トキシン（ＰＴ）のβ−オリゴマーは、ＥＬＡＭ−１を発現する内皮細胞に対するＰＭＮおよび腫瘍細胞の結合を阻害する。腫瘍転移は、腫瘍細胞のセレクチン保有細胞に対する付着に関連すると考えられている。従って、α−２，６および／またはα−２，３シアル酸構造の哺乳動物に対する投与は、転移阻害方法を提供する。例えば、主題の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体は、外科処置の間に循環系に放出され得る腫瘍細胞の転移の阻害方法として、腫瘍の外科処置または生検の前、間または後に投与され得る。炎症性反応または疾患の抑制に関連する方法において、主題の炭水化物結合性蛋白質または断片もしくは誘導体は、一般に炎症性応答の開始後、１−１５時間にて投与され、または好ましくは炎症の始まりから約１−１０時間で投与される。抗原に対する免疫応答の誘発の調節に関する方法において、主題の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体は、抗原と共に投与されるであろう。抗原に対する長期耐性の誘発に関する方法において、主題の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体は、一般的に抗原に対して免疫されている哺乳動物に投与されるであろう。好ましくは炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体は、抗原の曝露後約１−１５時間、更に好ましくは抗原の曝露後１−１０時間で投与される。しかしながら、これらの時間は、特定の抗原、および投与される炭水化物結合性蛋白質に依存して変化しうる。転移阻害に関連する方法において、主題の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体は、一般的に腫瘍外科処置または生検の約５時間前から腫瘍外科処置または生検の約１５時間後までの範囲内において、または腫瘍外科処置もしくは生検の間に投与されるであろう。一般的に、主題の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体は、例えば筋肉内または脈管内経路等、非経口的に投与されるであろう。しかしながら、例えば、経口、経皮、直腸的、気管内的、鼻腔内的剤型を含む他の剤型も好適である。例えば、鼻腔内的および気管内的剤型は、治療される炎症症状が急性呼吸困難性症候群（ＡＲＤＳ）等の肺炎症に関連する場合に好ましいであろう。対照的に経口剤型は、治療される炎症症状が例えば炎症性腸疾患等の消化管に関連する場合に好ましいであろう。本発明において使用される医薬組成物は、一般的に、α−２，６シアル酸構造および／またはα−２，３シアル酸構造に結合可能な蛋白質またはその断片もしくは誘導体の１種以上の有効量を、医薬的に許容される担体および／または賦形剤との組合せにおいて含む。特定の医薬的に許容される担体および賦形剤は、投与剤型に依存して変化するであろう。例えば、非経口的投与形態はリン酸緩衝食塩水を含んでよく、一方鼻腔内的剤型は吸入剤を含み、経口投与剤は、腸陽性被覆を有するであろう。適当な担体および賦形剤、ならびに異なる投与形態の剤型の選択は、医薬技術において充分に通常の技術水準にある。主題の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体は、好ましくは約０．５から５０ｍｇ／ｋｇ体重まで、最も好ましくは５−１０ｍｇ／ｋｇの範囲の投与量をもって投与される。一般的に本発明の方法は、主題の炭水化物結合性蛋白質の単独投与の投与に関連する。しかしながら、本発明は、主題の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の反復投与も包含する。主題の炭水化物結合性蛋白質の反復投与は、リュウマチ性関節炎等の慢性または持続的炎症性疾患、急性または慢性炎症、乾癬、炎症性腸炎、ならびに狼瘡、多発性硬化症またはリュウマチ性関節炎等の炎症性応答を伴う自己免疫疾患の治療において望ましいものである。３．例本発明およびその優位点を完全に例示するために、以下の例が示され、これらの例は例示のみを意図するものであって、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。例１−１１は数種の炭水化物結合性蛋白質の炭水化物結合性、抗炎症的性質および免疫調節的性質を例示する。これらの例において使用される蛋白質は、百日咳トキシンのβ−サブユニット、ニワトコの木の樹皮から単離されたＳａｍｂｕｃｕｓｎｉｇｒａレクチン、Ｍａａｃｋｉａａｍｕｒｅｎｓｉｓからのレクチンおよびノイラミニダーゼである。例１ −−百日咳トキシンのβ−サブユニット、ＳａｍｂｕｃｕｓｎｉｇｒａアグルチニンおよびＭａａｃｋｉａａｍｕｒｅｎｓｉｓアグルチニンの炭水化物結合特性百日咳トキシン（ＰＴ）のβ−サブユニットは以前に記述されているようにしてビオチニル化され³⁰、一方ビオチニル化Ｓａｍｂｕｃｕｓｎｉｇｒａアグルチニン（ＳＮＡ）およびビオチニル化Ｍａａｃｋｉａａｍｕｒｅｎｓｉｓアグルチニン（ＭＡＡ）は、商業的に入手された（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）。結合アッセイは、先に報告されているようにして行われた³¹。要約すれば、マイクロタイタープレートのウエルを５ｍＭのＭｇＣｌ₂および１５ｍＭのＮａＮ₃を含む５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ６．８）中の５０μｌのＢＳＡ接合体（５０μｇ／ｍｌ）にて、４℃で１６時間被覆した。該溶液を吸引除去し、０．０５パーセントのＴｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中の１パーセントＢＳＡ、１０μｌにて置換した。室温（ＲＴ）にて２−３時間インキュベートした後、該マイクロタイターウエルを３００μｌのＰＢＳＴにて４回洗浄した。次いで、ＰＴβ−サブユニット−ビオチン、ＳＮＡ−ビオチンまたはＭＡＡ−ビオチン（１／２００希釈）をマイクロタイターウエルに加えた。ＲＴにて１時間インキュベート後、プレートをＰＢＳＴにて４回洗浄した。アビジン−パーオキシダーゼ（ＰＢＳＴ中の１ｍｇ／ｍｌ溶液の１／３０００希釈物を１００μｌ）を加え、次いで０．１パーセントＨ₂Ｏ₂ ｖ／ｖを含む５ｍＭクエン酸緩衝溶液、ｐＨ４．２中の１ｍＭＡＢＴＳからなる酵素基質溶液をプレートに加えた。３０分間発色せしめ、次いでＴｉｔｅｒｔｅｋＭｕｌｔｉｓｋａｎ^TMプレート読取装置にて４０５ｎｍで測定した。結果は、表１−３に記述され、結合は骨格αＮｅｕＡｃ（２−３）βＧａｌ（１−４）βＧｌｃＮＡｃ−ＢＳＡまたはαＮｅｕＡｃ（２−６）βＧａｌ（１−４）βＧｌｃＮＡｃ−ＢＳＡのいずれかに相対的な百分率で示されている。表１から分かるように、ＰＴβ− オリゴマー−ビオチンは、シアリルルイスＸおよびシアリルルイスＡの両者と結合する。更に興味深いことに、ＰＴβ−オリゴマー−ビオチンが、αＮｅｕＡｃ（２−６）βＧａｌ（１−４）βＧｌｃＮＡｃ−ＢＳＡ骨格に最も高い親和性をもって結合することが観察された。例２−−ヒト白血球母集団上の炭水化物結合領域の発現末梢血白血球（ＰＢＬ’ｓ）を健常の提供者から得た。ＰＢＬ’ｓをｌｘ１０⁶ の細胞を含むサンプルに分別し、次いでこれらを、赤色蛍光色素にて標識された細胞特異的マーカーに対するモノクローナル抗体の飽和濃度と混合し、氷上に１時間置いた。次いで、これらの細胞を洗浄し、ビオチニル化炭水化物結合性蛋白質にて着色した。次いで、ビオチニル化レクチンに特異的に結合する緑色蛍光標識アビジンを、細胞に添加した。該細胞を、フローサイトメーター（Ｃｏｕｌｔｅｒ^TM ＰｒｏｆｉｌｅＩＩ）にて分析した。この実験の結果は、図１−３に示されている。図１は、百日咳トキシンのビオチニル化Ｂ−サブユニットが、ヒトＰＢＬ’ｓに弱く結合することを例示しており、更に特定的には、ＣＤ２マーカーを発現する細胞（Ｅ−ロゼッタ型Ｔ細胞）に６．６パーセント（図１ａ）、ＣＤ１１ｂマーカーを発現する細胞（顆粒級／単球）に４．４パーセント（図１ｂ）、およびＣＤ１９マーカーを発現する細胞（Ｂ細胞）にはより低く３．５パーセント（図１ｃ）である。図２は、ビオチニル化ＳＮＡが、ヒトＰＢＬ’ｓに強く結合することを例示しており、更に特定的には、ＣＤ２マーカーを発現する細胞（Ｅ−ロゼッタ型Ｔ細胞）に５１．９パーセント（図２ａ）、ＣＤ１１ｂマーカーを発現する細胞（顆粒級／単球）に３９．７パーセント（図２ｂ）、およびＣＤ１９マーカーを発現する細胞（Ｂ細胞）にはより低く１１．９パーセント（図２ｃ）である。図３は、ビオチニル化ＭＡＡが、ヒトＰＢＬ’ ｓに強く結合することを例示しており、更に特定的には、ＣＤ２マーカーを発現する細胞（Ｅ−ロゼッタ型Ｔ細胞）に４３．５パーセント（図３ａ）、ＣＤ１１ｂマーカーを発現する細胞（顆粒級／単球）に３１．３パーセント（図３ｂ）、およびＣＤ１９マーカーを発現する細胞（Ｂ細胞）にはより低く１９．２パーセント（図３ｃ）である。例３ −−標識炭水化物結合性蛋白質のｓｙｎｓｏｒｂに結合されたシアリルルイスＡによる着色の阻害腫瘍細胞系ＨＬ６０ヒトおよびＵ９３７マウス由来の細胞を、例２に略述したと同様に特異的ビオチニル化レクチンＳＮＡおよびＭＡＡについて着色した。細胞の分別量を、シアリルルイスＡＳｙｎｓｏｒｂ^TM（ＣｈｅｍｂｉｏｍｅｄＬｔｄ）または非標識Ｓｙｎｓｏｒｂ^TM（ＣｈｅｍｂｉｏｍｅｄＬｔｄ）の存在下でも着色した。図４は、シアリルルイスＡＳｙｎｓｏｒｂ^TM（ＣｈｅｍｂｉｏｍｅｄＬｔｄ）が、投与量に依存して両細胞系に対するＳＮＡおよびＭＡＡの結合を阻害しうることを示している。結果は、ＳＮＡおよびＭＡＡの対照結合の百分率で表されている。従って、この結果はこれらの炭水化物結合性蛋白質が炭水化物構造シアリルルイスＡに結合可能であることを示している。例４ −−ＰＨＡによる活性化前後におけるヒト白血球母集団上の炭水化物結合領域の発現末梢血白血球（ＰＢＬ）を健常の提供者から得た。次いで、ＰＢＬを１０パーセントのＡＢ血清を追加したＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ）中で、ＰＨＡ１０ μｇ／ｍｌの存在下、または不存在下で５パーセントＣＯ₂内、３７℃にて２４時間培養した。次いで、刺激を受けた細胞および休止細胞の分別量を、赤色蛍光色素−１（ＲＤ−１）により標識された細胞特異的マーカーに対するモノクローナル抗体の飽和濃度によって着色し、氷上に１時間置いた。次いでこれらの細胞を洗浄し、ビオチニル化ＳＮＡに特異的に結合する緑色蛍光標識アビジンを、細胞に加えた。次いでこれらの細胞を、フローサイトメーター（Ｃｏｕｌｔｅｒ^TM ＰｒｏｆｉｌｅII）にて分析した。この実験の結果は、ビオチニル化ＳＮＡが種種のヒトＰＢＬ母集団に結合し、またこれらの細胞のＰＨＡによる活性化が、ＳＮＡが結合可能な炭水化物の発現に影響を与えることを例示している（図５）。例５ −−ＤＴＨ炎症性応答の阻害ＤＴＨ炎症性応答を、ＳｍｉｔｈおよびＺｉｏｌａ³²により記述されているようにしてマウスヒヅメ腫脹アッセイを使用して測定した。要約すれば、Ｂａｌｂ／ｃマウス群を、強い哺乳動物炎症性ＤＴＨ応答を誘発することが示されているＳｕｐｅｒＣａｒｒｉｅｒ（商標）（ＰｉｅｒｃｅＲｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌ，ＵＳＡ６１１０５）、１０μｇを用いて免疫した。７日後に、マウスの各群に対して１０または２０μｇのＳｕｐｅｒＣａｒｒｉｅｒ（商標）を用いてヒヅメに攻撃を加えた。生じた炎症性ヒヅメ腫脹を、攻撃から２４時間後に、ＭｉｔｕｔｏｙｏＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇマイクロメーターにて測定した。炎症性ＤＴＨ応答に対する炭水化物結合性蛋白質の影響を評価するために、マウスの群はヒヅメへの攻撃から５時間後に、尾部静脈に注射された１０μｇの蛋白質を投与された。対照群は、未処置のままであるか、または１００μＬのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を投与された。この実験の結果は、図６に示されている。百日咳トキシンのβ−サブユニットは、炎症を対照マウスに比べて７６パーセント低減し、一方においてＳＮＡは炎症を対照マウスに比べて６１．５パーセント低減した。例６ −−炭水化物結合性蛋白質ＳＮＡの抗−炎症性の投与量依存性４群のマウスを、上記例５に記述したのと同様にしてＳｕｐｅｒＣａｒｒｉｅｒ（商標）（ＳＣ）を用いて初期免疫および攻撃に付した。ヒヅメに対する攻撃から５時間後に、群に対してＰＢＳ中に０．０ｇ、１．０、５．０または１０．０μｇのＳＮＡを含む１００μｌの溶液を静脈内的に注射した。各投与群についてのＤＴＨ応答を、攻撃から２４時間後に測定し、図７に示した。ＰＢＳまたは１．０μｇのレクチンを投与された群は、実質的に正の対照群と同程度のヒヅメ腫脹を示したが、５．０または１０．０μｇのＳＮＡを投与された群はそれぞれＰＢＳ対照の６１％および４０％のヒヅメ腫脹の低減を示した。例７ −−免疫応答の誘発に対する炭水化物結合性蛋白質の効果免疫応答の誘発に対して該炭水化物結合性蛋白質が有する効果を試験するために、免疫の時点（ヒヅメ攻撃の前）においてＳＮＡまたは百日咳トキシンのＢ− サブユニットのいずれかを添加して例５に概略を記したようにマウスを免疫し、また攻撃した。図８は、炭水化物結合性蛋白質が免疫応答の誘発を調節する能力を有すると考えられることを示している。しかしながら図９は、百日咳トキシンのＢ−サブユニットがこの性質を有さず、ＳＣに対する免疫応答の誘発について影響しないことを示している。このことは、従来の研究において、百日咳トキシン全体が、免疫剌激性を有することを示唆する事実を無視するものである。例８ −−炭水化物結合性蛋白質による長期耐性の誘発例５において炭水化物結合性蛋白質を用いて処置されたマウスと同じ群を、初期免疫から４週間後にＳＣにて攻撃した。未処置の対照は、通常の程度のヒヅメ腫脹をもって応答したが、一方では、ＳＮＡにより処置された群は、ＰＢＳ対照群に比べて５２パーセントのヒヅメ腫脹の低減を示した（図１０）。しかしながら、百日咳トキシンのＢ−サブユニットにて処置された群は、対照より１００パーセント増大した応答を有した。細胞媒介免疫応答の抑制を与えることに加えて、上記のデータは、この発明の炭水化物結合性蛋白質ＳＮＡを用いた処置が、同じ抗原による更なる攻撃に対する耐性を付与することを示している。例９ −−ＥＬＡＭ−１依存性細胞の活性化脈管内皮への付着に対する炭水化物結合性蛋白質の効果この例は、炭水化物結合性蛋白質が、活性化脈管内皮へのＥＬＡＭ−１依存性細胞の付着を阻害しうるか否かを試験するものである。特定的には、インビトロ細胞結合アッセイは、Ｌｏｗｅら¹⁸により記述されている様にして行われた。概略を記述すると、臍帯静脈内皮細胞（ＣｅｌｌＳｙｓｔｅｍｓ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ，ＵＳＡから購入したＨＵＶＥＣｓ）を、ＥＬＡＭ−１を発現させるためにＴＮＦ（１０μｇ／ｍｌ）にて剌激した。ＨＵＶＥＣに対してＥＬＡＭ−１依存性の様式で結合することが示されているヒト腫瘍細胞系、ヒト多形核細胞（ＰＭＮ）またはＨＬ６０を、ＨＵＶＥＣに対するＥＬＡＭ−１依存性結合に対してＳＮＡが有する効果を測定するために使用した。図１１ａおよびｂは、これらの化合物がＨＵＶＥＣに対するＥＬＡＭ−１依存性結合に対して有する効果を例示するこの例の結果を示している。百日咳トキシンのＢ−オリゴマーは、ＨＵＶＥＣに対するＰＮＭおよびＨＬ６０の両者の結合を阻害する。このことは、刊行されている技術に一致する。しかしながら、ＳＮＡは、ＨＵＶＥＣに対するＰＮＭおよびＨＬ６０の両者の結合を改善する。この結合の増強が与えられた場合に、ＳＮＡが細胞交差結合剤として機能する多機能性レクチンであることが要求される。これと同じ型の活性化は、細胞付着を増強し、しかもインビボにおいて炎症を阻止することができるＰＭＮ上のシアリルルイスＸ決定基に対する抗体についても報告されている。例１０ −−Ｅ．ｃｏｌｉＬＰＳに起因する肺損傷に対する炭水化物結合性蛋白質および他の化合物の効果Ｅ．ｃｏｌｉＬＰＳ（リポポリサッカライド）に起因する肺損傷を、マウスにＥ．ｃｏｌｉＬＰＳを鼻腔内的に与えてから２４時間後に切開したマウスの肺重量を計測することにより測定した。特定的には、８−１０週令のＢａｌｂ／ｃマウスの群を５０μｌのＰＢＳ中の５μｇ／マウスのＥ．ｃｏｌｉＬＰＳを用いて軽い麻酔下で鼻腔内的に感作させた。５時間後に、２００μｌのＰＢＳ中の５０μｇ／マウスのＳＮＡ、１００μｇ／マウスのＳＮＡ、１０μｇ／マウスの百日咳トキシンβサブユニット、２０μｇ／マウスの百日咳トキシンのβサブユニット（ＬｉｓｔＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．ＵＳＡ）、２００μｇ／マウスのＳｌｅＸ、または２００μｇ／マウスのＳｌｅＡを静脈内に投与した。２４時間後にマウスを犠牲にし、肺を取り出して重量を測定した。この実験の結果を図１２に表してある。これらの結果は、ＳＮＡ化合物がＤＴＨ肺炎症性応答において約３７％の低減を与え、百日咳トキシン（ＰＴ）がＤＴＨ炎症性応答において約２２％の低減を与えることを示している。ＳｌｅＸおよびＳｌｅＡの投与は、ＤＴＨ炎症性応答において約３０％の低減をもたらした。従って、これらの結果は主題の炭水化物結合性蛋白質が、肺炎症の低減に好適であること、特に急性呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）等の抗原の曝露に起因する肺炎症に好適であることを示している。例１１ −−ＯＶＡ誘発ＤＴＨ炎症応答に対するノイラミニダーゼ投与の効果この例は、ＯＶＡ（アルブミン、鶏卵、ＳＩＧＭＡ）により誘発されるＤＴＨ炎症性応答に対する他のα−２，６シアル酸結合蛋白質、ノイラミニダーゼの効果を試験するものである。ＤＴＨ炎症性応答は、Ｓｍｉｔｈら³²により記述されているヒヅメ腫脹アッセイを使用して再度測定された。特に、８−１０週令の約２０−２５グラムの体重のＢａｌｂ／ｃマウス、１０匹の群を、マウスあたり１００μｌのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）中の、１００μｇのＯＶＡ（アルブミン、鶏卵、ＳＩＧＭＡ）およびＤＤＡ（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロマイド、ＫＯＤＡＫ）にて免疫し、ここにおいて投与は、後足筋肉に筋内的に行われた。７日後に、各群のマウスは２０μｌのＰＢＳ中の２０μｇのＯＶＡを用いてヒヅメへの攻撃を受けた。生じた炎症性ヒヅメ腫脹を、ＭｉｔｕｔｏｙｏＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇマイクロメーターにて再度測定した。炎症性ＤＴＨ応答に対する主題の炭水化物結合性蛋白質の効果を評価するために、マウス群は２００μｌのＰＢＳ中の１００μｇ／マウスのＳｌｅＸ／マウス、０．５単位／マウスのノイラミニダーゼ、または１．０単位／マウスのノイラミニダーゼを投与された。対照群は未処置のままであるか、２００μｌのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）の投与を受けた。得られた結果は、図１３に示されている。ノイラミニダーゼにより処置された群においては、ＤＴＨ炎症応答は対照群に比較して１．０単位のノイラミニダーゼを投与された群で約２０％、対照群と比較して０．５単位のノイラミニダーゼを投与された群で約５５．６％であった。従って、これらの結果はＤＴＨ炎症性応答における低減は、投与されたノイラミニダーゼの量に対して比例的であり、またノイラミニダーゼはインビボで投与された場合に抗原により誘発されるＤＴＨ炎症性応答を阻害することを示している。例１２ −−Ｅ．ｃｏｌｉＬＰＳに起因する肺損傷に対するノイラミニダーゼ、サルファターゼおよびβ−グルクロニダーゼの効果Ｅ．ｃｏｌｉＬＰＳ（リポポリサッカライド）に起因する肺損傷を、マウスにＥ．ｃｏｌｉＬＰＳを鼻腔内的に与えてから２４時間後に切開したマウスの肺重量を計測することにより測定した。特定的には、８−１０週令のＢａｌｂ／ｃマウスの群を５０μｌのＰＢＳ中の１０μｇ／マウスのＥ．ｃｏｌｉＬＰＳを用いて軽い麻酔下で鼻腔内的に感作させた。４時間後に、２００μｌのＰＢＳ中の１００μｇ／マウスのＡＲＣｌ９９、１００μｇ／マウスのＡＲＣ２００、０．５Ｕ／マウスのノイラミニダーゼ（タイプII、Ｓｉｇｍａ）、１．０Ｕ／マウスのサルファターゼ（カサガイ由来のタイプIV、Ｓｉｇｍａ）、または１．０Ｕ／マウスのベータ−グルクロニダーゼ（Ｅ．ｃｏｌｉ由来のタイプＸ−Ａ、Ｓｉｇｍａ）を静脈内に投与した。２４時間後にマウスを犠牲にし、肺を取り出して重量を測定した。この実験の結果を図１４に表してある。これらの結果は、ノイラミニダーゼがＤＴＨ肺炎症性応答において約５８％の低減を与え、サルファターゼがＤＴＨ炎症性応答において約４０％の低減を与え、ベータ−グルクロニダーゼがＤＴＨ炎症性応答において２２％の低減を与えることを示している。ＡＲＣ１９９およびＡＲＣ２００の投与は、ＤＴＨ炎症性応答においてそれぞれ約２０％および４７％の低減をもたらした。これらのマウスからの肺洗浄中の顆粒球移動に対するこれらの酵素の効果を図１５に表してある。ノイラミニダーゼは肺洗浄中の顆粒球を約６７％低減し、サルファターゼは顆粒球を約２５％低減し、またベータ−グルクロニダーゼは顆粒球を約１８％低減した。ＡＲＣ１９９およびＡＲＣ２００の投与は、それぞれ顆粒球の約５０％および４５％の低減を生じた。従って、これらの結果は主題の酵素が、肺炎症の低減に好適であること、特に急性呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）等の抗原の曝露に起因する肺炎症に好適であることを示している。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９４年９月２９日【補正内容】請求の範囲１．哺乳動物における炎症性応答抑制用の医薬組成物の調製のための、α−２，６シアル酸構造を結合する炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の少なくとも１種の使用。２．前記炎症性応答が、遅延型過敏症（ＤＴＨ）炎症性応答、急性呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、再潅流損傷または敗血性ショックに関連する請求の範囲第１項に記載の使用。３．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、前記炎症性応答の開始後約１−１５時間で投与される請求の範囲第１項に記載の使用。４．該炭水化物結合性蛋白質が、百日咳β−サブユニット（ＰＴ）、Ｓａｍｂｕｃｕｓｎｉｇｒａアグルチニン（ＳＮＡ）、ノイラミニダーゼ、サルファターゼ、フコシダーゼ、およびβ−ガラクトシダーゼならびにそれらの断片または誘導体からなる群から選択される請求の範囲第１項に記載の使用。５．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、α−２，３シアル酸構造に対しても結合可能である請求の範囲第１項に記載の使用。６．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、約０．５− ５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の投与量をもって投与される請求の範囲第１項に記載の使用。７．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、非経口的、経口的、鼻腔内的、気管内的または経皮的に投与される請求の範囲第１項に記載の使用。８．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、脈管内的または筋内的に投与される請求の範囲第１項に記載の使用。９．該抗原に対する免疫応答の誘発の調節のための医薬組成物の調製のための、α−２，６シアル酸構造を結合可能な炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の少なくとも１種の使用であって、哺乳動物が該蛋白質との組合せにおいて該抗原により免疫されることを含む使用。１０．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、α−２，３シアル酸構造に対しても結合可能である請求の範囲第９項に記載の使用。１１．前記免疫応答が、液性または細胞媒介免疫応答を含む請求の範囲第９項に記載の使用。１２．前記抗原がアレルゲンを含む請求の範囲第９項に記載の使用。１３．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、Ｓａｍｂｕｃｕｓｎｉｇｒａレクチン（ＳＮＡ）を含む請求の範囲第９項に記載の使用。１４．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、更にα−２，３シアル酸構造に対しても結合可能である請求の範囲第９項に記載の使用。１５．免疫が、非経口的、経口的、鼻腔内的、気管内的または経皮的に行われる請求の範囲第９項に記載の使用。１６．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の投与量が、約０．５−５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である請求の範囲第９項に記載の使用。１７．免疫が脈管内的または筋内的に行われる請求の範囲第９項に記載の使用。１８．哺乳動物における抗原に対する耐性誘発用の医薬組成物調製のための、 α−２，６シアル酸構造を結合可能な炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の少なくとも１種の使用であって、該蛋白質が既に抗原に曝露された哺乳動物に投与される使用。１９．該抗原がアレルゲンを含む請求の範囲第１８項に記載の使用。２０．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、前記抗原への曝露から約１−１５時間後に投与される請求の範囲第１８項に記載の使用。２１．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、α−２，３シアル酸構造にも結合可能である請求の範囲第１８項に記載の使用。２２．該炭水化物結合性蛋白質が、百日咳β−サブユニット（ＰＴ）、Ｓａｍｂｕｃｕｓｎｉｇｒａアグルチニン（ＳＮＡ）、ノイラミニダーゼ、サルファターゼ、フコシダーゼ、およびβ−ガラクトシダーゼならびにそれらの断片または誘導体からなる群から選択される請求の範囲第１８項に記載の使用。２３．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の投与量が、約０．５−５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で投与される請求の範囲第１８項に記載の使用。２４．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、非経口的、鼻腔内的、気管内的、経皮的または経口的に投与される請求の範囲第１８項に記載の使用。２５．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、非経口的に投与される請求の範囲第２４項に記載の方法。２６．肺炎症または敗炎症性疾患の治療または阻害用の医薬組成物調製のための、α−２，６シアル酸構造を結合可能な炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の少なくとも１種の使用。２７．該哺乳動物が、急性呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）を有する請求の範囲第２６項に記載の使用。２８．前記蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、非経口的、気管内的、鼻腔内的、経口的または経皮的に投与される請求の範囲第２６項に記載の使用。２９．該炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、百日咳β− サブユニット（ＰＴ）、ＳＮＡ、ノイラミニダーゼ、サルファターゼ、フコシダーゼ、およびβ−ガラクトシダーゼからなる群から選択される請求の範囲第２６項に記載の使用。３０．該炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、更にα−２，３シアル酸構造に結合可能である請求の範囲第２６項に記載の使用。３１．哺乳動物に、α−２，６シアル酸構造を結合可能な炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の少なくとも１種の、抗転移的に有効な量を投与することを含んでなる転移阻止使用。３２．該炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、α−２，３シアル酸構造にも結合可能である請求の範囲第３１項に記載の使用。３３．投与が、腫瘍の外科処置または生検の前、間または後に行われる請求の範囲第３１項に記載の使用。３４．投与が、腫瘍の外科処置または生検の前約５時間から腫瘍の外科処置または生検後約１５時間までの範囲において行われる請求の範囲第３１項に記載の使用。３５．哺乳動物が、結腸癌または黒色腫を有する請求の範囲第３１項に記載の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 38/46 ＡＢＮ 39/39 ＡＤＵ 9284−4Ｃ 9455−4ＣＡ６１Ｋ 37/54 ＡＢＮ 9455−4Ｃ 37/46 ＡＢＡ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＫ，ＬＵ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＵＳ (72)発明者アームストロング，グレンディー. カナダ国ティー６シー１ピー９アルバータ，エドモントン，91 アベニュー 7951

Claims

【特許請求の範囲】１．哺乳動物に、α２，６シアル酸構造を結合可能な炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の少なくとも１種の、炎症性応答抑制に有効な量を投与することを含んでなる哺乳動物における炎症性応答の抑制方法。２．前記炎症性応答が、遅延型過敏症（ＤＴＨ）炎症性応答、急性呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、再潅流損傷または敗血性ショックに関連する請求の範囲第１項に記載の方法。３．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、前記炎症性応答の開始後約１−１５時間で投与される請求の範囲第１項に記載の方法。４．該炭水化物結合性蛋白質が、百日咳β−サブユニット（ＰＴ）、Ｓａｍｂｕｃｕｓｎｉｇｒａアグルチニン（ＳＮＡ）、ノイラミニダーゼ、サルファターゼ、フコシダーゼ、およびβ−ガラクトシダーゼならびにそれらの断片または誘導体からなる群から選択される請求の範囲第１項に記載の方法。５．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、α−２，３シアル酸構造に対しても結合可能である請求の範囲第１項に記載の方法。６．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、約０．５− ５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の投与量をもって投与される請求の範囲第１項に記載の方法。７．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、非経口的、経口的、鼻腔内的、気管内的または経皮的に投与される請求の範囲第１項に記載の方法。８．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、脈管内的または筋内的に投与される請求の範囲第１項に記載の方法。９．哺乳動物を、α−２，６シアル酸構造を結合可能な炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の少なくとも１種の、抗体に対する免疫応答の誘発を調節するために有効な量との組合せにおいて該抗原により免疫することを含んでなる該抗原に対する免疫応答の誘発の調節方法。１０．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、α−２，３シアル酸構造に対しても結合可能である請求の範囲第９項に記載の方法。１１．前記免疫応答が、液性または細胞媒介免疫応答を含む請求の範囲第９項に記載の方法。１２．前記抗原がアレルゲンを含む請求の範囲第９項に記載の方法。１３．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、Ｓａｍｂｕｃｕｓｎｉｇｒａレクチン（ＳＮＡ）を含む請求の範囲第９項に記載の方法。１４．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、更にα−２，３シアル酸構造に対しても結合可能である請求の範囲第９項に記載の方法。１５．免疫が、非経口的、経口的、鼻腔内的、気管内的または経皮的に行われる請求の範囲第９項に記載の方法。１６．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の投与量が、約０．５−５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である請求の範囲第９項に記載の方法。１７．免疫が脈管内的または筋内的に行われる請求の範囲第９項に記載の方法。１８．抗原に既に曝露された哺乳動物に、α−２，６シアル酸構造を結合可能な炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の少なくとも１種の、抗体に対する抗原性耐性の誘発をするために有効な量を投与することを含んでなる該抗原に対する耐性の誘発方法。１９．該抗原がアレルゲンを含む請求の範囲第１８項に記載の方法。２０．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、前記抗原への曝露から約１−１５時間後に投与される請求の範囲第１８項に記載の方法。２１．前記少なくとも１種の炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、α−２，３シアル酸構造にも結合可能である請求の範囲第１８項に記載の方法。２２．該炭水化物結合性蛋白質が、百日咳β−サブユニット（ＰＴ）、Ｓａｍｂｕｃｕｓｎｉｇｒａアグルチニン（ＳＮＡ）、ノイラミニダーゼ、サルファターゼ、フコシダーゼ、およびβ−ガラクトシダーゼならびにそれらの断片または誘導体からなる群から選択される請求の範囲第１８項に記載の方法。２３．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の投与量が、約０．５−５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で投与される請求の範囲第１８項に記載の方法。２４．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、非経口的、鼻腔内的、気管内的、経皮的または経口的に投与される請求の範囲第１８項に記載の方法。２５．前記炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、非経口的に投与される請求の範囲第２４項に記載の方法。２６．肺炎症または敗炎症性疾患をもつ哺乳動物に、α−２，６シアル酸構造を結合可能な炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の少なくとも１種の、抗炎症的に有効な量を投与することを含んでなる肺炎症の治療または阻止方法。２７．該哺乳動物が、急性呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）を有する請求の範囲第２６項に記載の方法。２８．前記蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、非経口的、気管内的、鼻腔内的、経口的または経皮的に投与される請求の範囲第２６項に記載の方法。２９．該炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、百日咳β− サブユニット（ＰＴ）、ＳＮＡ、ノイラミニダーゼ、サルファターゼ、フコシダーゼ、およびβ−ガラクトシダーゼからなる群から選択される請求の範囲第２６項に記載の方法。３０．該炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、更にα−２，３シアル酸構造に結合可能である請求の範囲第２６項に記載の方法。３１．哺乳動物に、α−２，６シアル酸構造を結合可能な炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体の少なくとも１種の、抗転移的に有効な量を投与することを含んでなる転移阻止方法。３２．該炭水化物結合性蛋白質またはその断片もしくは誘導体が、α−２，３シアル酸構造にも結合可能である請求の範囲第３１項に記載の方法。３３．投与が、腫瘍の外科処置または生検の前、間または後に行われる請求の範囲第３１項に記載の方法。３４．投与が、腫瘍の外科処置または生検の前約５時間から腫瘍の外科処置または生検後約１５時間までの範囲において行われる請求の範囲第３１項に記載の方法。３５．哺乳動物が、結腸癌または黒色腫を有する請求の範囲第３１項に記載の方法。