JPH08500108A - 癌の予防または治療用の抗癌治療組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、癌細胞に起因する損傷を有した患者の治療法と、未変性ホエータンパク質濃縮物の抗癌組成物としての適用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 癌の予防または治療用の抗癌治療組成物関連出願 この出願は１９９２年８月１３日付で出願された米国出願第９２９，３４７号 の一部継続出願であって、更にこれは１９８９年１０月４日付で出願された米国 出願第４１７，２４６号の分割および一部継続出願であり、更にこれは米国出願 第２８９，９７１号の一部継続出願であり、更にこれは米国出願第１８８，２７ ６号の一部継続出願である。この出願は１９９２年４月１０日付で出願された米 国出願第 号の一部継続出願でもあって、更にこれは１９９０年５月３ 日付で出願された米国出願第５６３，７９４号の一部継続出願であり、更にこれ は上記米国出願第２８９，９７１号の一部継続出願である。それら出願の内容は それら全体を引用することにより開示の一部とされる。発明の概要 本発明は、未変性ホエータンパク質濃縮物が高い免疫学的効果を有するという 意外な発見に基づいている。更に具体的には、この発明は、化学的に誘導された 癌の成長に対するホスト耐性における、未変性ホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ ）の経口投与の効果、および癌の阻害 に対するこのような経口投与の効果にも関する。 米国出願第２９８，９７１号および第４１７，２４６号明細書およびBounous ら“食餌ホエータンパク質はジメチルヒドラジン誘導性悪性腫瘍の成長を阻害す る”(1)において、我々は、食餌中ＷＰＣの連続給餌が、２４週間ジメチルヒド ラジン（ＤＭＨ）で処理されたマウスの結腸において、成長（腫瘍の数および大 きさ）を阻害することを示す実験を記載した。この抗腫瘍効果は、発癌物質に対 する標的細胞の耐性増加および／または癌細胞におけるＷＰＣの直接阻害効果に 起因していた。動物に最初２０週間のＤＭＨの際Purina食餌を与え、残り８週間 のＤＭＨ処理の際ＷＰＣ食餌に切り換えた、その後の一連の実験(2)では、癌細 胞におけるＷＰＣ給餌の阻害効果が示唆された。 つい最近(3)、フランスの科学者らはヒト癌細胞に対するＷＰＣの直接阻害効 果をインビトロで確認している。 事実、ヒト乳癌細胞によるインビトロの類似の研究では、牛血清アルブミン（Ｂ ＳＡ）が癌細胞複製の阻害因子であることが示されている(4)。 我々は、ＷＰＣのこの活性がＷＰＣのＢＳＡ分画中に存在するグルタミルシス テイン基（ＧＳＨ合成の基質）に特に依存していることも示している（米国出願 第５６３，７９４号）。興味あることに、システインデリバリー系オゾチアゾリ ジン‐４‐カルボキシレート（ＯＴＺ） （オゾチアゾリジン‐４‐カルボキシレート）の導入は、正常細胞でグルタチオ ン（ＧＳＨ）レベルを高めるが、ヒト腫瘍細胞でＧＳＨサイクルのフィードバッ ク阻害を起こすことがわかった(5)。ＯＴＺのこの差異のある効果は最近インビ ボで確認されている(6)。したがって以前に記載されたＷＰＣ(3)、更に具体的に はＢＳＡ(4)の直接阻害効果は、グルタミルシステインのような強力なシステイ ンデリバリー系のインキュベート時における放出により説明することができた。 したがって、我々は下記結論に到達した： １）ＢＳＡは、我々がＷＰＣのＧＳＨ促進活性に主に関与していることを見い 出した、ＷＰＣのタンパク質分画である。我々がＷＰＣの免疫増強および抗発癌 効果の基礎であると考えているこの活性は、ＷＰＣのＢＳＡ分画中に存在するグ ルタミルシステイン基（ＧＳＨ合成の基質）に特に依存している。 ２）ＢＳＡの分子量は６６，２６７であり、このためVilladsenに特許された 抗癌因子のＭＷ（ＭＷ５００〜２０，０００）と全く異なる。 ３）我々の初期の発見(1,2)は下記のように説明できる：ＤＭＨ処理時に、Ｗ ＰＣ給餌は細胞ＧＳＨを増加させることにより、発癌物質の作用から標的細胞を 保護している。加えて、ＧＳＨ合成用基質の利用性が増加すれば、形成された癌 細胞の複製を阻害することができる。 ４）我々は、今般、ＧＳＨ合成用基質を提供する上で、ＷＰＣにおける高レベ ルの血清アルブミン（ＢＳＡ）の重要性について立証した。我々は１０％以上の ＢＳＡを含有した未変性形の食餌ホエータンパク質濃縮物が抗腫瘍効果を発揮す ると結論付けることができる。図面の簡単な説明 図１は１０週、２７、２０および２１月齢目における未変性ホエータンパク質 (U-Lacp)給餌雄性マウスC57BL/6NIAN、変性ホエータンパク質(D-Lacp)、カゼイ ン、卵白タンパク質またはPurina食給餌対照群の肝臓グルタチオン含量について 示す。 図２は１０週、１７、２０および２１月齢目における未変性ホエータンパク質 (U-Lacp)給餌雄性マウスC57BL/6NIAN、変性ホエータンパク質(D-Lacp)、カゼイ ン、卵白タンパク質またはPurina食給餌対照群の心臓グルタチオン含量について 示す。 図３はマウスでの５×１０⁶ＳＲＢＣへの脾臓ＰＦＣ応答に関する様々な供給 源のホエータンパク質濃縮物およびカゼイン（２０ｇ／食餌１００ｇ）の効果に ついて示す。詳細な説明 定義 (a)ホエータンパク質 ホエータンパク質とは、ｐＨ４．６および２０℃でカ ゼインの沈降後に“乳清”またはホエー中に溶解している、乳タンパク質の群で ある。牛乳中の主要ホエータンパク質はβ‐ラクトグロブリン（βＬ）、α‐ラ クトアルブミン（αＬ）、免疫グロブリンおよび血清アルブミン（ＳＡ）である 。 ホエーからこのタンパク質混合物の工業分離産物は“ホエータンパク質濃縮物 ”（ＷＰＣ）または単離物と呼ばれる。我々の初期実験のほとんどで用いられた ＷＰＣは牛乳(″Danmark Protein A.S″のLacprodan-80)由来である。その未変 性状態での使用はU-Lacpと示され、その変性状態での使用はD-Lacpと示される。 ラクトアルブミン（Ｌ）はＷＰＣを表すために伝統的に用いられてきた用語であ る。 (b)Ｃ＝カゼイン (c)ＳＲＢＣ＝羊赤血球 (d)ＰＦＣ＝プラーク形成細胞（脾臓）：脾臓中ＰＦＣの計数はＳＲＢＣ注射 に対する体液性免疫応答を評価するために用いられる。 (e)ＧＳＨ＝グルタチオン（Ｌ‐γ‐グルタミル‐Ｌ‐システイニルグリシン ） (f)ＤＭＨ＝１，２‐ジメチルヒドラジン (g)試験された規定処方食餌はタンパク質の種類のみが異なる。 (h)牛乳のホエーはタンパク質約６ｇ／ｌ、Ｎラクトースの ほとんど、ミネラルおよび水溶性ビタミンを含有している。これらの研究で用いられる食餌：下記表３参照 食餌は下記のように調製した：選択された純粋なタンパク質２０ｇ；コーンシ ロップ、コーン油、タピオカデンプン、ビタミンおよびミネラルを含有した製品 ８００５６無タンパク質食餌粉末５６ｇ(Mead-Johnson Co.Inc.,U.S.A.);コーン スターチ１８ｇ；小麦フスマ２ｇ；Nutramigenビタミン‐鉄プレミックス(Brist ol-Myers,Ontario,Canada)０．０５ｇ；ＫＣｌ ２．６５ｇ；ＮａＣｌ ０．８ ４ｇ。我々の処方食餌の炭水化物および脂質成分は同一である。様々な精製食餌 で唯一の変えた要素はタンパク質のそのタイプであった（タンパク質２０ｇ／食 餌１００ｇ）。食餌中におけるこの濃度で、試験されたすべての異なるタンパク 質は成長マウスに必須アミノ酸の１日要求量を供給した(8)。ビタミンおよびミ ネラルは各組の実験で同一であり、成長マウスに１日要求量を供給するために必 要な量で加えた(9,10)。下記表１は、マウス食餌で提示されるビタミン要求量と 、我々の処方の一部におけるそれらの含量に関する変動範囲について示している 。したがって、我々の実験で用いられるすべての処方食餌は正常体成長、血清タ ンパク質(9)、および脱毛、皮膚炎、白内障、運動失調、脂肪肝等の不存在で明 らかになるように、十分な栄養を供給するように考えられた。後者の症状は非常 に高齢のマウスに勿論存在し、老化プロセスと関係していた。 プラーク分析用の免疫 給餌マウスをInstitut Armand-Frappier,Laval des Rapides,Quebec,Canadaか ら毎週得られる５×１０⁶洗浄羊赤血球の静脈内注射により免疫した。プラーク形成細胞（ＰＦＣ）アッセイ ＩｇＭプラーク形成細胞を調べるために用いられた方法は、わずかな変更を加 えたこと以外、本質的にCunninghamおよびSzenberg(11)により記載された方法で あった。脾臓細胞懸濁液は、５０メッシュステンレススチールスクリーンに脾臓 を静かに詰め込み、１０％熱不活化子牛血清(Grand Island Biological Company ,Montreal,Quebec,Canada)で補充された平衡塩溶液（ＢＳＳ）において細胞を集 めることにより調製した。脾臓細胞を洗浄し、ＢＳＳで１５ｍｌに調整した。羊 赤血球を２回洗浄し、２０％濃度に調整した。補体源としてのモルモット血清(G rand Island Biological Company,Montreal,Quebec,Canada)をＢＳＳで１／１５ 希釈した。すべてのストック溶液を使用時まで氷水上に保った。試験では脾臓細 胞０．０５ｍｌ、羊赤血球０．１５ｍｌおよび補体溶液０．７５ｍｌを試験管中 ３７℃で混合した。全混合液を直ちに取出し、スライド室にいれ、加温パラフィ ンロウでシールし、３７℃で４５〜６０分間インキュベートした。プラーク形成 細胞の数をカウントし、脾臓当たりのそれらの総数は各サンプル（脾臓細胞０． ０５ｍｌ）中におけ るプラーク形成細胞の数に３００を掛けて見積もった。値は１０⁶当たりの脾臓 細胞よりもむしろ全器官当たりで表示するが、その理由はこの方が脾臓自体の機 能状態をより正確に反映すると思われるからである。 マウスは、通常では免疫後応答がピークにある５日目に、または動態研究では 免疫後３、４、５および６日目に、羊赤血球に対するプラーク形成細胞応答につ いてアッセイがなされた。統計 平均プラーク形成細胞値を食餌群の中で比較したが、２群を比較する場合には Student′s検定または３群以上の場合には分散の分析(ANOVA)を用いた。各群間 の分散の不均一のために、BrownおよびForsytheにより示された調整法を用いた 。脾臓グルタチオン含量 マウス脾臓９０mgをMettler PM-300計量器で秤量したが、各サンプルは９０mg から５mg（５％）以内の範囲内にある。次いでサンプルを５‐スルホサリチル酸 （５％w/v）中でホモゲナイズした。ホモゲネートを遠心機において１０，００ ０×ｇで５分間遠心した。アッセイはAnderson(12)の方法に従い同日に上澄を用 いて行った。値はμmol/湿潤組織ｇとして表示する。組織グルタチオンアッセイ マウス心臓または肝臓９０mgを５‐スルホサリチル酸 （５％w/w）中でホモゲナイズした。ホモゲネートを遠心機において１０，００ ０×ｇで５分間遠心する。アッセイはAnderson(12)の方法に従い同日に上澄を用 いて行う。値はμmol/湿潤組織ｇとして表示する。 １７月齢目にいずれかの食餌を始めてから３月後においてＧＳＨ含量は、D-La cp（変性ホエートタパク質Lacprodan-80）、カゼイン、卵白タンパク質またはPu rina食給餌対照群と比較してU-Lacp（未変性ホエータンパク質Lacprodan-80）給 餌マウスの肝臓および心臓で高いことがわかった（図１および図２）。Purina実 験食給餌マウスの心臓および肝臓におけるＧＳＨ値は１０週、１７、２０、２１ 月齢目に類似していた。U-Lacp食餌は３および４月間の連続給餌後に、心臓およ び肝臓のＧＳＨ含量を“正常”値よりも高めるらしい（図１および２）。 加えて、U-Lacp食餌で３週間後において脾臓ＧＳＨ含量は、D-Lacp、カゼイン または卵白タンパク質食給餌コントロールでの減少と比較して、若い成熟C3H/He Nマウスでリンパ球の抗原誘導性クローン拡張（expansion）中において増加して いる。老Ｃ57BL/6NIAマウスでは、U-Lacp食餌の長期給餌が肝臓および心臓ＧＳ Ｈレベルで中度だが持続的な増加を起こす（図１および図２）。ＷＰＣのＧＳＨ 増加活性はその未変性形(U-Lacp)に限定される。 この性質は単にＷＰＣの高システイン含量によるものではない。その理由は、 類似システインを含むもう１つのタンパク質源（卵白）（表２参照）がこの生物 学的活性を示さないからである。U-Lacpのこの性質は体重、血清タンパク質およ び食物消費量で評価したところでは、その栄養効力に特に依存しておらず、その 天然形におけるタンパク質の一次、二次および三次構造に依存しているようであ る。 以前に議論され、グルタチオン濃度の細胞内レベルを増加させる方法の一部は 、グルタチオン枯渇の初期相に関連した危険性のために、毒性(13)があるかまた は危険である(14,15)。γ−グルタミルシステイン(16)、アチアゾリジン(17)、 またはグルタチオンエステル(18)を使用する方法（米国特許第４，７８４，６８ ５号）では短期的治療に興味ある可能性を与える。しかしながら、細胞グルタチ オンの持続的な上昇を起こすそれらの長期有効性は示されず、それらの長期使用 の毒性可能性も反証されなかった。実際に、グルタチオンおよびグルタチオンジ スルフィドは発癌性および変異誘発性に関して最も一般的に用いられる短期試験 で陽性であることがわかった(13)。生合成酵素活性の減少よりも、むしろＧＳＨ 前駆体、システインの欠如が、老化動物でみられるＧＳＨの欠乏に関与している ことをとりわけ示す最近のデータは、我々の発明に関係してくるものである(19) 。同様に、 長期エタノール給餌ラットの肝臓におけるサイトゾルＧＳＨの減少は、γ−グル タミルシステインシンテターゼ活性の能力の制限に起因していないようである(2 0)。 図１および２のデータは、コントロールPurina給餌マウスにおける肝臓および 心臓グルタチオンの濃度が経時的に非常に安定していることを示す。他方、組織 ＧＳＨの中度だが持続的な上昇が、栄養上同等のホエータンパク質(U-Lacp)食で 給餌されたマウスでみられた。微量のグルタチオンだけが尿中に排出され、グル タチオンから容易に生じうる分解産物は排出されない(21)。達しうる細胞グルタ チオン濃度の変化の大きさはかなり制限されるが、これはこの分子の臨界的重要 性とそれに付随する厳格な調節コントロールをおそらく反映している。グルタチ オン自体はＧＳＨ合成酵素で負のフィードバックとして働き、ＧＳＨ濃度を増加 させる細胞能力を明らかに制限する(22)。グルタチオンレダクターゼはその主要 な還元型でＧＳＨを維持する（≧９０％）。これは、還元グルタチオン（ＧＳＨ ）が膜を通過できないことからこの機能状態を維持し、かつ細胞濃度をコントロ ールするように働くが、酸化型（ＧＳＳＧ）は流入でき、かつ流入して全グルタ チオンを減少させる。これらの酵素以外にも、γ−グルタミルトランスペプチダ ーゼ（ＧＧＴ）はＧＳＨ代謝にとって重要である。ＧＧＴは細胞膜レベルでグル タミル部分の再利用経路として働き、ＧＳＨ合 成で用いられるようにそれらをサイトゾル中に戻す。この酵素の活性増加はいく つかの細胞系および悪性組織におけるＧＳＨ濃度上昇と関連していた(23,24)。 ＧＳＨ上昇を起こすビタミンＢ₁（チアミン）を食餌中に含有させることが有 利である。チアミンはＮＡＤＰＨを生じるペントースリン酸分路のトランスケト ラーゼ反応に関与している（ＧＳＳＧはＮＡＰＰＨ；ＧＳＨレダクターゼにより ＧＳＨに逆還元される）。 ビタミンＢ₂（リボフラビン）も、また、有利な添加物である。フラビンモノ ヌクレオチド（ＦＭＮ）およびフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）はリ ボフラビンから連続的に合成され、ＧＳＨレダクターゼに関与している。 一部の乳、特にニュージーランド産の乳はセレンが少ない。セレンはＧＳＨペ ルオキシダーゼ中に含まれている。セレンが欠乏している哺乳動物は、ペルオキ シダーゼ活性が著しく減少している。したがって、その抗癌効果にとり有利なグ ルタチオン形成には十分なレベルのセレンを要する。 我々が１日摂取量として未変性ホエータンパク質６０ｇの投与量レベルを想定 するならば、ビタミンＢ₁、ビタミンＢ₂およびセレンの推奨レベルは下記のとお りである： ビタミンＢ₁ 1.5〜2.0mg ビタミンＢ₂ 1.7〜2.2mg セレンメチオニン 40〜60mcg 細胞ＧＳＨの小さな増加効果は予想以上である。例えば、様々な化学療法剤へ の耐性に関して、インビトロで選択されるヒトおよびネズミ腫瘍細胞系には多く の報告がある。これら細胞系のうちいくつかにおいて、細胞ＧＳＨは、薬物耐性 のレベルがしばしばかなり大きい、例えば３０倍も大きい、という事実(24,25,2 6)にもかかわらず、薬物感受性親細胞系と比較して一律的に２倍に増加している 。これらの細胞系において、合成の選択的阻害による細胞ＧＳＨの枯渇は耐性細 胞に薬物感受性を回復させる。これはＧＳＨ枯渇が薬物治療期間中ずっと維持さ れさえすれば有効である。 細胞ＧＳＨが非常に厳格に調節され、２倍の増加が最大のようであり、ＧＳＨ の小さな増加効果が様々なＧＳＨ利用酵素（例えば、グルタチオンペルオキシダ ーゼ、グルタチオン‐Ｓ‐トランスフェラーゼ）により増幅されうるという事実 からすれば、富ホエーで給餌された動物で観察されるＧＳＨ濃度の再現性ある変 化は生物学上重要である。この増加の慢性的性質は、この効果に有意に貢献する であろう。 我々の発見によれば、カゼイン食で給餌されたマウスにおいてＤＭＨ誘導結腸 癌腫の数および大きさがPurina給餌コントロールと比較して各々３割および４割 減少し たことが示されている（下記表３）。しかしながら、類似した栄養効力のホエー タンパク質食で給餌されたマウスにおいて、ＤＭＨ誘導結腸癌腫の数および大き さがPurina給餌コントロールと比較して１／４に減少した（下記表３）。ＤＭＨ 誘導結腸腫瘍は、損傷の種類および化学療法応答特性に関するかぎり、ヒトでみ られる場合と類似していると思われる(27,28)。 カゼインと比較したホエータンパク質の抗癌効果の優位性は、我々の以前の研 究で報告されている(1)。牛乳中におけるタンパク質の約８０％はカゼインであ り、残り２０％はホエータンパク質である(29,30)。加えて、伝統的なカゼイン 調製方法を用いれば、カゼインと一緒に共沈するホエータンパク質の量は、乳中 に存在するホエータンパク質の全量の約４０〜６０％である(31)。したがって、 カゼインでみられる小さな抗癌効果はそれと共沈する比較的（対カゼイン）少量 のホエータンパク質のためであると考えられる。乳製品の抗腫瘍活性がタンパク 質分画中、更に具体的には我々の発明が実証しているように、乳のホエータンパ ク質成分中にあることは、上記研究から明らかである。 この食餌ＷＰＣ補給の有益な効果は、それが他の供給源からの患者タンパク質 摂取物の一部または全部に交換される範囲で高められる。生存率研究：生物活性はＷＰＣの未変性コンホメーショ ンに依存している （ａ）限定期間中における老齢マウスの生存率： 我々の研究によれば、雄性C57BL/6NIAマウスの５５％が死んだときに終りとす る、６〜７月間の限定観察期間中における平均生存時間は、栄養上同等のPurina マウス食で給餌された“コントロール”と比較して、老化開始時（２１月齢）に 未変性ホエータンパク質(U-Lacp)食餌を始めたマウスで約３０％伸びることが示 された。Purina給餌マウスの生存曲線はカゼイン食給餌マウスの場合と非常に似 ていた。しかしながら、その後の４月間は、マウスの未変性ホエータンパク質食 餌を変性ホエータンパク質濃縮物(D-Lacp)食餌に切り換えた。この期間中、残存 ホエータンパク質食給餌マウスの死亡時間はそれらのカゼイン食またはPurina給 餌対照群の場合と類似するようになった。研究の中で、ＰＦＣ形成の反復バイオ アッセイから、図３で示されたように、ホスト免疫増強とＷＰＣの未変性状態と の間に相関性を確認した。第二の研究において、生存曲線間の差異が狭まり始め たときに、その栄養性が保存されているにもかかわらずＷＰＣの免疫増強性質は 存在しなかった(D-Lacp)。全研究を通じて、有意の群間差異はカロリー摂取量お よび体重でみられなかった。寿命は個体のゲノムに主に依存しているため、限定 期間中における死の遅れが全体の寿命に影響を与えたようではない。 しかしながら、少くとも食餌の免疫増強効果に関して、この研究は試験(U-Lac p)食餌からコントロール(D-Lacp)食餌への単一方向交差（single direction cro ss-over）とみなすことができ、（図３および表１１で示されるように）老齢マ ウスの生存率に関するＷＰＣの生物活性がその未変性状態に依存して、我々の研 究で用いられたＰＦＣアッセイと直接相関していることを示している。 （ｂ）ＤＭＨ誘導結腸癌のあるマウスの短期および長期生存率： ＤＭＨ処理マウスにおいて、我々は食餌タンパク質の種類に関連して実験の終 了までに、２８週間終了までの死亡率と生存時間との間の差異に気づいた。最初 の７月間の研究中に、未変性ホエータンパク質(U-Lacp)給餌マウスはカゼインお よびPurina群でこの期間の最後のあたりに観察された死亡率３３％と比較して死 亡なしであった。その後の４月間では、ホエータンパク質のマウスに変性ホエー タンパク質(D-Lacp)を給餌した。この後の期間中、D-Lacp食餌はカゼイン食餌と 比較して生存率に関し好ましい効果を有するようであった（下記表４）。 研究の中で、脾臓ＰＦＣの反復バイオアッセイを行い、以前に報告されたよう な免疫機能に関する食餌の生理学的効果とこれら効果の安定性について証明した 。U-Lacp給餌の免疫増強効果は研究の最初７月間ずっと確認された。しかしなが ら、その後の４月間(D-Lacp)ではU-Lacp給餌マウスで既に観察された免疫増強効 果がなかった。U-Lacp食餌またはD-Lacp給餌に関するＰＦＣ応答の値は図３で示 された場合と一致した。したがって、この研究から、腫瘍担持マウスの生存率に 関するＷＰＣの生物活性がその未変性状態に依存しており、我々の研究で用いら れたＰＦＣアッセイと直接相関しているという仮説を確認できた。 a)カイ（Chi）二乗分析による有意性：ホエータンパク質 vs. Purina vs.カゼ イン p<0.05 b)最初マウス１２匹／群 c)発癌物質の初回投与からの生存時間（週）。ホエータンパク質およびカゼイン はPurinaと有意に異なる（Mantel-Cox検定 p<0.01）。 d)未変性ホエータンパク質は３〜２８週目に用いた。変性ホエータンパク質は２ ８週目から終了時まで用いた。 表３および４にまとめられた上記実験では、未変性ＷＰＣの供給源としてLacp rodan 80を用いた： 細菌汚染に関する安全性の許容標準に合う最も穏やかな（lenient）やり方で 処理された乳から調製された未変性形のホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）を用 いるのが好ましい。極端に高い溶解指数は存在するタンパク質が本質的に未変性 であることを示し、このため限外濾過 方法が穏やかなものであることを証明した(31)。試験された他の市販源からの濃 縮物中に含有されるタンパク質は、濃縮物の比較的高い溶解性で示されるように 、ほとんど未変性形であったが、これらの混合物中における血清アルブミンおよ び免疫グロブリンの含量は活性レベル以下である(31)。これらの非常に熱不安定 なタンパク質は高い低温殺菌温度により変性され、このためホエーから沈降して 、部分的に失われる。 我々の研究では、脾臓グルタチオンを半分に減少させるＳ（ｎ‐ブチル）ホモ システインスルホキシイミンの投与がホエータンパク質給餌マウスの体液性免疫 応答を有意に減少させることも明らかにした。これは食餌ホエータンパク質の免 疫増強効果でグルタチオンの重要な役割に関する別の証拠としてうけとられた(3 2)。 組織グルタチオン濃度はγ‐グルタミルシステインの投与により増加するであ ろう。細胞内グルタチオンはマウスにおいて皮下(s.c.)注射の４０〜６０分間後 に腎臓で約５０％増加し、２時間後にコントロール値に戻った(33)。投与された γ‐グルタミルシステインは細胞中にそのまま輸送され、グルタチオンシンテタ ーゼ用の基質として働く(33)。 食物タンパク質のアミノ酸配列決定に関する進歩は、ホエータンパク質中グル タミルシステイン基の存在とグルタチオン促進との関連可能性について我々が研 究でき るようにした。確かに、牛乳からのホエータンパク質濃縮物は、マウスに給餌さ れたときに組織グルタチオンを増加させないカゼインとは異なり、実質量のグル タミルシステイン基を含有している(35)。グルタミルシステイン基は血清アルブ ミン分画中に主に存在している（６基／分子）。グルタミルシステイン基は動物 および植物食用タンパク質中で極めてまれである。食用タンパク質のアミノ酸配 列決定に関してすべての入手しうるデータの詳細な調査は、ジスルフィド結合の ある Gly-Cys基が、ホエータンパク質の一部と、３０，０００モル重量分子中 にこれらの基を２つ含んだ卵白のオボムコイド分画とに実際上限定されることを 示している(31)。 我々の最近(31)のデータは、最大溶解性（未変性コンホメーション）と、更に 重要なことには大きな相対濃度の熱不安定牛血清アルブミン（≧１０％）および 免疫グロブリンとを示す食餌ホエータンパク質濃縮物給餌マウスで、体液性免疫 応答が最大であることを更に明らかにしている。加えて、この種類のホエータン パク質濃縮物で給餌されたマウスはもっと高レベルの組織ＧＳＨを示す。分子の 未変性コンホメーションに関係するようなグルタミルシステイン基（食物タンパ ク質ではまれ）と特異的な分子内結合が、タンパク質混合物のグルタチオン促進 活性で鍵因子であると考えられる。 日本の最近の実験(36)では、我々の未変性ホエータン パク質濃縮物（ＷＰＣ）（商標名″Immunocal″が付されている）２５ｇ／食餌 １００ｇで４週間給餌されたBALB/c雄性マウスの脾臓細胞が純粋カゼイン２５ｇ ／食餌１００ｇの等カロリー食餌で給餌されたマウス（３．６９×１０⁶±０． ５０）よりもインビトロで高い対ＳＲＢＣ免疫応答性と高含量のL3T4+細胞（１ ２．５８×１０⁶±１．３６）を有することが明らかにされている。同様に、脾 臓L3T4+/LYt-2+比は未変性ＷＰＣ給餌マウスで１．３６±０．０７、カゼイン給 餌コントロールで０．５５±０．０７であった(p<0.001)。逆に、我々のＷＰＣ 中における乳の低度の低温殺菌に起因した熱感受性血清アルブミンおよび免疫グ ロブリンの比較的高い濃度は、原料乳により近いパターンを表している。これら のデータは、未変性コンホメーションの血清アルブミンのような熱不安定Gly-Cy s含有タンパク質が、ホエータンパク質濃縮物の生物活性にとり重大な要素であ るという仮説を支持している。 純粋タンパク質含有率７５％（残りのほとんどはラクトース、わずかな脂肪お よび水分）、溶解指数（ｐＨ４．６）９９．５％を有する適切な牛ホエータンパ ク質濃縮物（ＷＰＣ）は″Service de recherche sur lesaliments du Minister e de l′agriculture du Quebec″,St-Hyacinthe,Quabec,Canadaにより調製した 。ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定された全ホエータンパク 質に関するタンパク質組成はβ−ラクトグロブリン５９．１±４．０、α‐ラク トアルブミン６．６±０．７、血清アルブミン９．７±１．０、免疫グロブリン ２４．６±２．６（平均±ＳＤ）であった。溶解指数は好ましくは９９％以上で あるべきである。 全ホエータンパク質の約１０％の血清アルブミンは、試験された他の市販ホエ ータンパク質濃縮物でみられる対応値のほぼ２倍であった。１０％以上の血清ア ルブミンレベルが免疫系を改善する上で高度に有利であると考えられる。 血清アルブミンは体内グルタチオン合成用の基質であるグルタミルシステイン をかなりの量で含有している。 グルタチオンの役割は論文″The Biological Activityof Undenatured Dietary Whey Proteins:Role of Glutathione″,Clin.Invest.Med.,14:296-309,1991(31) で詳細に記載されており、これはその全体で引用することにより本明細書の開示 の一部とされる。 全ホエータンパク質の約２５〜３０％範囲内の免疫グロブリンも重要である。 ７２℃で１３秒間の低温殺菌で２８±２％の免疫グロブリンレベルになった。我 々は７２℃で１３秒間低温殺菌された乳で１４±１％もの高い血清アルブミンレ ベルに達しうることを発見した。 細菌分析では、ブドウ球菌、サルモネラ、B.cereusまたは大腸菌は、″Servic e de recherche sur les alimen ts du Ministere de l′agriculture du Quebec″により調製されたＷＰＣまた は７２℃で１３秒間低温殺菌されたサンプルで単離されなかった。他のサンプル は乳を６３℃で３０分間加熱することにより調製したが、良好な結果であった。 ヘパリン処理血液３０mlを、１０⁷細胞／試験管となるように調整された血液 単核リン酸緩衝液のグルタチオン含量を調べるために用いてよい。遠心後、水９ ００mlをペレットに加えて、すべての細胞を溶解させる。各部分に１ml中最終濃 度３％で３０％スルホサリチル酸を加える。１５分間のインキュベート後、サン プルを遠心し、透明上澄をAnderson(37)の方法による生化学アッセイに用いる。 値はナノモル(nMol)ＧＳＨ／１０⁷細胞として表示する。血液リンパ球部分もフ ロー細胞測定により調べてよい。 アルブミンおよび免疫グロブリンを含めた全血清タンパク質もビューレット（ Biuret）法により調べてよい。免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）、免疫グロブリンＧ （ＩｇＧ）および免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）のレベルは免疫比濁分析により測 定してよい。 ホエータンパク質濃縮物の血清アルブミン成分中におけるグルタミルシステイ ン基の存在は、未変性ＷＰＣのタンパク質混合物のグルタチオン促進および免疫 増強活性に関する鍵因子であると考えられる。我々の実験室研 究は、他の供給元からのホエータンパク質濃縮物が、それらが類似した栄養効力 を示したとしても、有意の生物活性を生じなかったことを示している。これら製 品の血清アルブミン濃度％は（平均±ＳＤとして）各々Promod（Ross研究所）で ４±１、Alacen 855(New Zealand Dairy）で４±１、Lacprodan-80（Danmark Pr oteinにより１９８９年から生産されている）で４．８±１、Sapro（Sapro,Mont real）で４±０．１、Savorpro-75(Golden Cheese,CA,USA)で４±１、Bioisolat e(Lesueur,Isolates,Minneapolis)［８］で５±１およびPromix(Dumex,Quebec) で４．３±１である。同様に、他の熱不安定タンパク質、免疫グロブリンの含量 はこの研究で用いられた未変性ＷＰＣの約半分の値であった。 結果は、未変性ホエータンパク質が、免疫細胞でグルタチオン補給用の特定栄 養物を供給することにより他の形の療法に対するアジュバントに相当しうること を示している。 歴史的には今日まで、乳中の細菌および胞子は熱処理（低温殺菌）で減少させ た。これを有効とするために、その方法では血清アルブミンおよび免疫グロブリ ンの最も熱不安定で推定上生物活性な分画の相当量の凝乳で不可避的に変性を、 ひいては後に沈降および喪失を生じた。 我々の目的は、細菌含量の許容安全標準に合う原料の場合にできるだけ近い割 合およびコンホメーションでタ ンパク質を含有したホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）を得ることである。今日 まで、我々は熱不安定性ホエータンパク質を保存するために乳の最低許容レベル の熱処理を利用してきた。 熱処理の代替法は膜精密濾過（microfiltration）に基づく方法である。Bacto catch(Alfa-Laval Ltd.,Scarborough,Ontario)を利用して、我々は細菌含有率が 原インプットレベルの０．５％以下に減少した脱脂乳の特別な膜精密濾過による 透過液を得ることができる。 次いでこの透過液をレンネットで処理し、ホエー上澄中のタンパク質を寛大な 操作により濃縮して、望ましい未変性ホエータンパク質濃縮物を得る。膜精密濾 過概念は熱不安定ホエータンパク質を保存する適切な方法として乳の加熱処理に 代わる方法であるが、技術および装置は時間と共に改良してよい。 表５および６は、我々が商標名「Immunocal」と呼ぶ改良未変性ＷＰＣを生産 する方法を概略的に示している。表７は、ＷＰＣの供給源と比較したImmunocal の特性を示し、かつ、３週間食餌処理の結果をも示した、比較チャートである。 我々は、未変性ホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）が化学誘導癌、典型的には ジメチルヒドラジンのような発癌物質で促進される結腸癌のような癌の予防に有 益であることを、我々の研究の結果として結論付けた。このよ うな細胞の複製を阻害することも、化学誘導癌細胞のような癌細胞を有する患者 の治療にとり有用である。ヒトの場合の大体の投与量は約８〜４０g/日、好まし くは２０〜４０g/日の範囲内である。３０〜４０g/日を投与することが特に有益 である。少くとも１０±１％の濃度で血清アルブミンを有するＷＰＣを用いると 特に有利であることが確立された。血清アルブミンは少くとも９％、最も好まし くは少くとも９．５％である。 公開文献が示しているように、マウスで実験上ジメチルヒドラジンにより誘導 された結腸の腫瘍は、損傷の種類および化学療法への応答性に関して、ヒトの結 腸癌に類似している(27,28)。 顆粒球／リンパ球（Ｇ／Ｌ）比が末期癌の場合に増加して患者の状態と相関し ているという発見(38)は、この重要なパラメーターに影響を与えるかもしれない 因子の関心を促した。 例えば、体外循環を用いた顆粒球枯渇はウサギで移植腫瘍の大きさを有意に減 少させることが明らかにされた(39)。マウスによる最近の実験研究は、Ｇ／Ｌ式 の第二パラメーターが食餌手段により影響をうける可能性を示唆している。天然 未変性形の血清アルブミンのような、ホエーの最も熱感受性な分子を保存するよ うに調製されたホエータンパク質濃縮物で給餌されたマウスは、肺炎双球菌感染 (40,1)および癌の発癌物質誘導(1)に対する耐性増加によって一部現わされる高 い免疫応答を示した(35)。 これは我々が未変性ＷＰＣと呼ぶ産物である。未変性ＷＰＣ給餌マウスの免疫 反応増加は、インビトロで移されたナイーブ細胞で持続することがわかった(36) 。血清アルブミンは６つのグルタミルシステイン基を含み(31)、このためグルタ チオン（ＧＳＨ）合成用の特別な基質を与える(33,34)。これらの基は食物タン パク質に極めてまれである(31)。 動物実験における末変性ＷＰＣの好ましい効果は、組織グルタチオンレベルの 持続的上昇と関係していた(41)。しかしながら、この効果はリンパ球プールの抗 原性クローン拡張時に脾臓細胞においてより明白なところはどこもなかった(32) ：これらの実験は、免疫増強活性、即ち食餌未変性ＷＰＣのリンパ球増殖増大、 が類似抗原攻撃時にカゼイン給餌コントロールでみられる現実のＧＳＨ減少と比 較してリンパ球で観察されるＧＳＨの産生量増大と関係していることを明らかに 示している(32)。ＧＳＨ、事実上すべての細胞でみられるトリペプチドチオール 、が主要なフリーラジカル酸素スカベンジャーである(42)。更に具体的には、リ ンパ球のＧＳＨ含量はそれらの増殖を調節するオキシダントおよびチオールの能 力と相関しているらしい(43)。この意味で、細胞内ＧＳＨの調節は免疫応答性に 影響を与えるようである(44,45)。 これらの実験は、活性増殖のための抗原刺激が存在するときに、リンパ球にお ける食餌ホエータンパク質の増強効果が特に明らかであることを更に示している 。 しかしながら、食餌未変性ＷＰＣとリンパ球産生との間のこの独特な関係は正 常非免疫マウスでも明らかである。３週間の食餌処理後に、未変性ＷＰＣ２０ま たは３０ｇ／食餌１００ｇで給餌されたマウスの脾臓重量と脾臓重量：体重比は 、カゼイン、大豆タンパク質または魚タンパク質２０または３０ｇ／食餌１００ ｇを含有し た栄養上同等の食餌で給餌されたマウスの対応値よりも適度に高かった(46)。更 に具体的には、脾臓当たりの細胞数は等量のカゼイン、小麦、大豆および魚タン パク質で給餌されたマウスの対応値よりも未変性ＷＰＣ給餌マウスで高かった(3 5)。 更に詳細な研究では、２５％未変性ＷＰＣ食給餌マウスの脾臓における有核細 胞の数がコントロール２５％カゼイン食給餌マウスの対応値よりも有意に高いこ とを示した。興味あることに、観察された変化はＴ細胞集団の倍加と特に関係し ており、特にL3T4⁺部分集団は４倍に増加したが、Ｂ細胞の数は未変化であった( 36)。この後者の発見は、未変性ＷＰＣの効果が骨髄における一次Ｂリンパ球産 生の速度に中心的に発揮されず、免疫増強効果が特にＴ細胞依存性抗原に応答し てみられることを示す他の研究と一致している(47)。 リンパ球における未変性ＷＰＣの上記効果は、実験腫瘍においてこの形の食餌 法で観察される阻害効果をよく説明している。最近の実験は、食餌中未変性ＷＰ Ｃの連続給餌が２４週間ジメチルヒドラジン（ＤＭＨ）処理したマウスの結腸で 腫瘍の成長（数および大きさ）を阻害することを示した(1)。この抗腫瘍効果は 、発癌物質に対する標的細胞の耐性増加および／または腫瘍増殖に対する食餌未 変性ＷＰＣの直接阻害効果に起因していた。動物にＤＭＨの最初２０週間は標準 実験食で給餌し、そ の後ＤＭＨ処理の残り８週間は未変性ＷＰＣ食に切り換えるその後の一連の実験 (2)では、癌細胞についての未変性ＷＰＣ給餌の阻害効果を明らかに示している 。 正常動物の末梢リンパ組織における未変性ＷＰＣの増強効果は、血中リンパ球 総数の有意な変化と関連していないことが注目される(36,46)。循環リンパ球の 総数に関する変動の不在は健常人でもみられた（大塚製薬）。 未変性ＷＰＣのグルタミルシステイン基による細胞ＧＳＨ合成の誘導は、癌患 者でこの産物の他の興味深い効果を示すかもしれない。確かに、システイン送達 系ＯＴＺ（オゾチアゾリジン‐４‐カルボキシレート）の導入は、正常細胞でＧ ＳＨレベルを高めるが、ヒト腫瘍細胞でＧＳＨサイクルのフィードバック阻害を 起こすことがわかった(5)。 臨床試験は日本で大塚製薬により準備された。臨床チームはマサカズ・アダチ 博士により指揮されていた。臨床試験は進行段階の末期癌を有する患者５例に行 なわれた。その要約レポートは下記表８に再現され、血球およびグルタチオンレ ベルの実験データは患者４例に関して表９で示されている。各患者の投与量レベ ルは３０g/日であった。 表８で示されたように、全患者のリンパ球数は、未変性ホエータンパク質濃縮 物の投与時に増加した。進行段階にある他の患者２例は消化の問題のために試験 から外 した。以前の研究では、リンパ球数が癌患者で下がると、正常レベルへのリンパ 球数の回復が不可能であるかもしれないと報告していた。リンパ球数の増加はＧ ／Ｌ比を改善する能力ゆえに重要である。 表８および９で示された結果は健常者と対照的であり、彼らは（１４例の試験 に基づくと）０．３４±０．０２のグルタチオンＰＭＮレベル、０．０６６±０ ．００６のグルタチオンＲＢＣレベル、６６４０±１７００（７）ＷＢＣ、２２ ００±４６０のリンパ球数、１．８５±０．４５のＧ／Ｌ比および２５．４±３ ．３のＰｌｔを通常有する。 表１０は表８および９で記載された試験で用いられた未変性ＷＰＣの細菌分析 、並びにタンパク質分布および溶解度について示す。 結論として、癌患者へのＷＰＣの投与は血中リンパ球の数を増加させ、Ｇ／Ｌ 比を減少させるらしい。リンパ球濃度は、初めは非常に低いが、正常値に戻る傾 向がある。以前に記載された実験的証拠(38,39)に基づくと、ＷＰＣで観察され た効果は癌細胞増殖の阻害を示唆している。 表８および９で記載された試験に続く未変性ＷＰＣの試験では、下記観察をし た： （１）患者Ｆは医者の検査で確認しえた固形腫瘍を腹部に有し、彼女は化学療 法をうけた。彼女は未変性ＷＰ Ｃを使うことが困難であり、治療から離脱しかかっていた。しかしながら、彼女 が未変性ＷＰＣを摂取しているかぎり、彼女のリンパ球数は増加し、腫瘍マーカ ー数の増加でさえも減少の徴候を示すことがわかった。 （２）患者Ｇは照射後に癌の局部再発のため治療した。彼女は１９９２年１１ 月に放射線治療をうけた。未変性ＷＰＣの投与は１２月４日に始めた。彼女のリ ンパ球は１２月３日〜１９９３年１月２０日の間に９６０から１３１０に改善し た。２月３日現在、再発はなく、彼女のリンパ球は１３７０、Ｇ／Ｌは３．１で あった。 （３）患者Ｈは局部腫瘍のため放射線療法をうけた。未変性ＷＰＣの投与は１ ９９２年１２月１６日に始めた。 そのとき、試験結果は下記のとおりであった： WBC 2700 Lym. 480 G/L 4.6 P/t 9.5 １２月２４日の結果： CEA 11.0 WBC 4320 Lym. 910 G/L 3.7 P/t 10.7 １月２０日の結果： CEA 7.1 WBC 3420 Lym. 830 p/t 11.5 ２月３日の結果： CEA 5.2 WBC 33.3 Lym. 86.0 G/L 2.5 P/t 11.5 患者の経過は良好である。 （４）患者“Ｉ”は縦隔、頸および全脳で放射線療法をうけた。未変性ＷＰＣ の投与は１９９２年１２月１日に開始した。彼のリンパ球は１１月２６日の３４ ０から１月１３日の９３０まで増加した。彼のＧ／Ｌ比は１２．１から４．４に 減少し、ＷＢＣは４５００から５１００に増加した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 33/24 9454−4Ｃ 38/16 ＡＢＹ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｈ Ｕ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＭＧ，ＭＮ ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ， ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． リンパ球数を増加させるために十分な量の、少くとも９％の血清アルブ ミンを含有した未変性ホエータンパク質濃縮物を患者へ投与することを含んでな る、治療の必要な患者における癌の治療法。 ２． 血清アルブミンが少くとも９．５％である、請求項１に記載の方法。 ３． Ｇ／Ｌ比を低下させる、請求項２に記載の方法。 ４． １日投与量レベルが８〜４０ｇの範囲である、請求項１に記載の方法。 ５． １日投与量レベルが２０〜４０ｇの範囲である、請求項２に記載の方法 。 ６． １日投与量レベルが３０〜４０ｇの範囲である、請求項５に記載の方法 。 ７． 未変性ホエータンパク質濃縮物が乳中に存在する実質上すべてのタンパ ク質を未変性状態で含有している、請求項２に記載の方法。 ８． ジメチルヒドラジンにより誘導される種類の結腸の損傷を有する患者に おける癌の治療法であって、リンパ球数を増加させるために十分な量の少くとも ９．５％の血清アルブミンを含有した未変性ホエータンパク質濃縮物を上記患者 へ投与することを含んでなる方法。 ９． 未変性ホエータンパク質濃縮物が約１０％以上 のレベルで血清アルブミンを含有している、請求項８に記載の方法。 １０． 損傷が、ジメチルヒドラジンにより促進される場合と類似した結腸の 損傷である、請求項８に記載の方法。 １１． セレンが未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり約４０〜６０mc g（セレンメチオニンとして計算）の量で投与される、請求項８に記載の方法。 １２． ビタミンＢ₁が未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり約１．５ 〜２．０mgの量で投与される、請求項８に記載の方法。 １３． ビタミンＢ₂が未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり約１．７ 〜２．２mgの量で投与される、請求項８に記載の方法。 １４． 下記： ビタミンＢ₁約１．５〜２．０mg ビタミンＢ₂約１．７〜２．２mg セレン約４０〜６０mcg（セレンメチオニンとして計算） が未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たりで投与される、請求項８に記載の 方法。 １５． ８〜４０ｇ範囲の１日投与量で、少くとも９．５％の血清アルブミン を含有した未変性ホエータンパク質濃縮物を患者へ投与することを含んでなる、 哺乳動物でジメチルヒドラジンにより誘導される種類の結腸 癌の予防法。 １６． 癌を有する患者のリンパ球数を増加させるために十分な量の、少くと も９．５％の血清アルブミンを含有した未変性ホエータンパク質濃縮物の使用。 １７． 癌を有する患者のＧ／Ｌ比を減少させるために十分な量の、少くとも ９．５％の血清アルブミンを含有した未変性ホエータンパク質濃縮物の使用。 １８． 癌を有する患者の治療用薬剤の製造に関する、リンパ球数を増加させ るために十分な量の、少くとも９．５％の血清アルブミンを含有した未変性ホエ ータンパク質濃縮物の使用。 １９． 癌を有する患者のＧ／Ｌ比を減少させるために十分な量の、少くとも ９．５％の血清アルブミンを含有した未変性ホエータンパク質濃縮物の使用。 ２０． １日の投与量レベルが２０〜４０ｇの範囲である、請求項１６〜１９ のいずれか一項に記載の使用。 ２１． １日の投与量レベルが約３０ｇである、請求項１６〜１９のいずれか 一項に記載の使用。 ２２． 未変性ホエータンパク質濃縮物が乳から製造され、原料乳中に存在す る実質上すべてのタンパク質を含有している、請求項１６〜２１のいずれか一項 に記載の使用。 ２３． 未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり約１．５〜２．０mgの量 のビタミンＢ₁を更に含有して いる、請求項１６〜２２のいずれか一項に記載の使用。 ２４． 未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり約１．７〜２．２mgの量 のＢ₂を更に含有している、請求項１６〜２３のいずれか一項に記載の使用。 ２５． 少くとも９．５％の血清アルブミンおよび原料乳中に存在する実質上 すべてのタンパク質を含有している、乳から製造された未変性ホエータンパク質 濃縮物２０〜４０ｇを含んでなる、癌を有する患者のリンパ球数を増加させ、か つ、Ｇ／Ｌ比を減少させるための癌患者投与用組成物。 ２６． 最終製品の少くとも９．５％の血清アルブミン含有率を留め、かつ、 ブドウ球菌、サルモネラ、B.cereusおよび大腸菌を実質上含まないように、十分 低い温度および十分短い時間で脱脂乳を低温殺菌し、次いで濾過および濃縮して 未変性ホエータンパク質濃縮物粉末を得る工程を含んでなる、患者のリンパ球数 を増加させ、かつ、Ｇ／Ｌ比を減少させるための癌患者投与用組成物の製造法。