JPH08336394A - 多糖類の製造法 - Google Patents
多糖類の製造法Info
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- JPH08336394A JPH08336394A JP14635295A JP14635295A JPH08336394A JP H08336394 A JPH08336394 A JP H08336394A JP 14635295 A JP14635295 A JP 14635295A JP 14635295 A JP14635295 A JP 14635295A JP H08336394 A JPH08336394 A JP H08336394A
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- polysaccharide
- alcaligenes
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- polysaccharides
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 微生物による多糖類の製造に際して、培養物
中に色素を含まない多糖類を蓄積させることにより、多
糖類の精製工程を容易とするなど、多糖類を効率よく製
造する方法を提供する。 【構成】 アルカリゲネス属に属し、多糖類および色素
を生成する能力を併有する菌株を親株として変異処理に
より、色素を生成する能力が低下または欠失した微生物
を培地に培養し、培養物中に多糖類を生成蓄積させ、該
培養物より多糖類を採取する。
中に色素を含まない多糖類を蓄積させることにより、多
糖類の精製工程を容易とするなど、多糖類を効率よく製
造する方法を提供する。 【構成】 アルカリゲネス属に属し、多糖類および色素
を生成する能力を併有する菌株を親株として変異処理に
より、色素を生成する能力が低下または欠失した微生物
を培地に培養し、培養物中に多糖類を生成蓄積させ、該
培養物より多糖類を採取する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、多糖類の製造法に関す
るものである。多糖類は、食品、化粧品、衛生用品、土
壌改良剤またはコンクリート混和剤などに利用できる。
るものである。多糖類は、食品、化粧品、衛生用品、土
壌改良剤またはコンクリート混和剤などに利用できる。
【０００２】
【従来の技術】多糖類および色素を生成する能力を有す
る微生物を培養すると、培養物中に生成蓄積する多糖類
に色素が混入するため、該培養物から多糖類を採取する
場合に色素を除去する必要がある。多糖類から色素を除
去するには、有機溶媒などを用いて色素を抽出するなど
の工程が必要となる上に、該工程において多糖類のもつ
有用な物性が低下することがある。キサントモナス属に
属し、かつ黄色の色素を生成する能力を有しない微生物
を用いて多糖類を製造する方法（ＤＤ７７−１９６８０
９）は知られている。
る微生物を培養すると、培養物中に生成蓄積する多糖類
に色素が混入するため、該培養物から多糖類を採取する
場合に色素を除去する必要がある。多糖類から色素を除
去するには、有機溶媒などを用いて色素を抽出するなど
の工程が必要となる上に、該工程において多糖類のもつ
有用な物性が低下することがある。キサントモナス属に
属し、かつ黄色の色素を生成する能力を有しない微生物
を用いて多糖類を製造する方法（ＤＤ７７−１９６８０
９）は知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、微生
物による多糖類の製造に際して、培養物中に色素を含ま
ない多糖類を蓄積させることにより、多糖類の精製工程
を容易とするなど、多糖類を効率よく製造する方法を提
供することにある。
物による多糖類の製造に際して、培養物中に色素を含ま
ない多糖類を蓄積させることにより、多糖類の精製工程
を容易とするなど、多糖類を効率よく製造する方法を提
供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、アルカ
リゲネス属に属し、多糖類および色素を生成する能力を
併有する菌株を親株として変異処理により、色素を生成
する能力が低下または欠失した微生物を培地に培養し、
培養物中に多糖類を生成蓄積させ、該培養物より多糖類
を採取することを特徴とする、多糖類の製造法を提供す
ることができる。以下に本発明を詳細に説明する。本発
明における多糖類としては、アカリゲネス属に属する微
生物が生産する多糖類であれば、同一種類の単糖類から
構成される単純多糖類（ホモ多糖類）、複数の単糖類か
ら構成される複合多糖類（ヘテロ多糖類）、または単純
多糖類もしくは複合多糖類にウロン酸もしくはエステル
硫酸などを構成成分として含む、酸性多糖類などいずれ
でもよい。これらの多糖類は、糖タンパク質、プロテオ
グリカンまたは糖脂質などを構成する糖鎖として複合糖
質を形成していてもよい。
リゲネス属に属し、多糖類および色素を生成する能力を
併有する菌株を親株として変異処理により、色素を生成
する能力が低下または欠失した微生物を培地に培養し、
培養物中に多糖類を生成蓄積させ、該培養物より多糖類
を採取することを特徴とする、多糖類の製造法を提供す
ることができる。以下に本発明を詳細に説明する。本発
明における多糖類としては、アカリゲネス属に属する微
生物が生産する多糖類であれば、同一種類の単糖類から
構成される単純多糖類（ホモ多糖類）、複数の単糖類か
ら構成される複合多糖類（ヘテロ多糖類）、または単純
多糖類もしくは複合多糖類にウロン酸もしくはエステル
硫酸などを構成成分として含む、酸性多糖類などいずれ
でもよい。これらの多糖類は、糖タンパク質、プロテオ
グリカンまたは糖脂質などを構成する糖鎖として複合糖
質を形成していてもよい。
【０００５】単糖類としては、グルコース、フラクトー
ス、マンノース、ガラクトース、フコース、アラビノー
ス、ラムノース、キシロースもしくはプシコースなどの
中性糖類またはグルコサミンもしくはガラクトサミンな
どのアミノ糖類が、ウロン酸としては、グルクロン酸、
ガラクツロン酸またはマンヌロン酸などが、エステル硫
酸としては、アリル硫酸、糖硫酸またはコリン硫酸など
があげられる。単純多糖類としては、セルロースまたは
β-1,3- グルカンなどが、複合多糖類としては、ウエラ
ンガム、サクシノグリカンまたは特開昭５６−４５９０
１号、特開昭５７−２０６３８２号、特開昭５８−７８
５９７号、特開平２−２９１２９２号もしくは特開平５
−３０１９０４号の公報に記載の多糖類などが、酸性多
糖類としては、ヒアルロン酸、ペクチンまたはコンドロ
イチン硫酸などがあげられる。
ス、マンノース、ガラクトース、フコース、アラビノー
ス、ラムノース、キシロースもしくはプシコースなどの
中性糖類またはグルコサミンもしくはガラクトサミンな
どのアミノ糖類が、ウロン酸としては、グルクロン酸、
ガラクツロン酸またはマンヌロン酸などが、エステル硫
酸としては、アリル硫酸、糖硫酸またはコリン硫酸など
があげられる。単純多糖類としては、セルロースまたは
β-1,3- グルカンなどが、複合多糖類としては、ウエラ
ンガム、サクシノグリカンまたは特開昭５６−４５９０
１号、特開昭５７−２０６３８２号、特開昭５８−７８
５９７号、特開平２−２９１２９２号もしくは特開平５
−３０１９０４号の公報に記載の多糖類などが、酸性多
糖類としては、ヒアルロン酸、ペクチンまたはコンドロ
イチン硫酸などがあげられる。
【０００６】本発明に用いられる微生物は、アルカリゲ
ネス属に属し、多糖類および色素を生成する能力を併有
する微生物から誘導され、かつ色素を生成する能力が低
下または欠失した変異株であれば、いずれの微生物でも
よい。このような変異株は、アルカリゲネス属に属し、
多糖類および色素を生成する能力を併有する微生物を寒
天培地上で単集落分離（single colony isolaion）して
コロニーの色調が白色に変化した菌株を選択するか、あ
るいは該微生物を液体培地中で培養し、多糖類を培養物
中に蓄積しても培養物または培養液が着色しないような
変異株を選択することにより分離することができる。
ネス属に属し、多糖類および色素を生成する能力を併有
する微生物から誘導され、かつ色素を生成する能力が低
下または欠失した変異株であれば、いずれの微生物でも
よい。このような変異株は、アルカリゲネス属に属し、
多糖類および色素を生成する能力を併有する微生物を寒
天培地上で単集落分離（single colony isolaion）して
コロニーの色調が白色に変化した菌株を選択するか、あ
るいは該微生物を液体培地中で培養し、多糖類を培養物
中に蓄積しても培養物または培養液が着色しないような
変異株を選択することにより分離することができる。
【０００７】変異株を分離する際に、アルカリゲネス属
に属し、多糖類および色素を生成する能力を併有する微
生物に、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグア
ニジン処理、紫外線照射など、通常の変異手段によっ
て、変異させた後に単集落分離を行うと、コロニーの形
態の多様性が増し、目的の菌株を見いだす頻度が向上す
る。本発明で用いられる微生物の、好適な例としては、
アルカリゲネス・レータス（Alcaligenes latus）Ｂ−
１６株（ＦＥＲＭ ＢＰ−２０１５）より分離したアル
カリゲネス・レータスＷＢ−１株、あるいはアルカリゲ
ネス・レータスＰ−１株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４４５９）
より分離したアルカリゲネス・レータスＷＰ−１株があ
げられる。これらの菌株は、ブダペスト条約に基づいて
平成６年４月２１日付で工業技術院生命工学工業技術研
究所にそれぞれＦＥＲＭ ＢＰ−４６５１およびＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−４６５０として寄託されている。
に属し、多糖類および色素を生成する能力を併有する微
生物に、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグア
ニジン処理、紫外線照射など、通常の変異手段によっ
て、変異させた後に単集落分離を行うと、コロニーの形
態の多様性が増し、目的の菌株を見いだす頻度が向上す
る。本発明で用いられる微生物の、好適な例としては、
アルカリゲネス・レータス（Alcaligenes latus）Ｂ−
１６株（ＦＥＲＭ ＢＰ−２０１５）より分離したアル
カリゲネス・レータスＷＢ−１株、あるいはアルカリゲ
ネス・レータスＰ−１株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４４５９）
より分離したアルカリゲネス・レータスＷＰ−１株があ
げられる。これらの菌株は、ブダペスト条約に基づいて
平成６年４月２１日付で工業技術院生命工学工業技術研
究所にそれぞれＦＥＲＭ ＢＰ−４６５１およびＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−４６５０として寄託されている。
【０００８】本発明の微生物による多糖類の生産は、通
常の微生物の培養法にて実施可能であるが、好適な例と
して特開平２−２９１２９２号公報または特開平４−２
００３８９号公報に記載されている培養法が用いられ
る。本発明の微生物に用いられる培地としては、炭素
源、窒素源、無機物、その他使用菌株の必要とする栄養
素を程よく含有するものならば、合成培地または天然培
地いずれも使用可能である。炭素源としては、グルコー
ス、フラクトース、シュクロース、マルトース、ラクト
ース、糖蜜、セルロース加水分解物、粗糖加水分解物も
しくは澱粉加水分解物などの炭水化物、ピルビン酸、酢
酸、フマル酸、リンゴ酸もしくは乳酸などの有機酸な
ど、ヘミセルロース、澱粉もしくはコーンスターチなど
の天然高分子またはオリーブなどの油類などが用いられ
る。
常の微生物の培養法にて実施可能であるが、好適な例と
して特開平２−２９１２９２号公報または特開平４−２
００３８９号公報に記載されている培養法が用いられ
る。本発明の微生物に用いられる培地としては、炭素
源、窒素源、無機物、その他使用菌株の必要とする栄養
素を程よく含有するものならば、合成培地または天然培
地いずれも使用可能である。炭素源としては、グルコー
ス、フラクトース、シュクロース、マルトース、ラクト
ース、糖蜜、セルロース加水分解物、粗糖加水分解物も
しくは澱粉加水分解物などの炭水化物、ピルビン酸、酢
酸、フマル酸、リンゴ酸もしくは乳酸などの有機酸な
ど、ヘミセルロース、澱粉もしくはコーンスターチなど
の天然高分子またはオリーブなどの油類などが用いられ
る。
【０００９】窒素源としては、アンモニア、塩化アンモ
ニウム、硝酸アンモニウムもしくは硫酸アンモニウムな
どの各種無機塩類、尿素などの有機酸のアンモニウム
塩、アミン、その他の窒素化合物、ペプトン、トリプト
ン、酵母エキス、肉エキス、麦芽エキス、コーンスティ
ープリカー、カゼイン加水分解物、大豆粕加水分解物ま
たは、各種発酵菌体もしくはその消化物などが用いられ
る。無機物としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二
カリウム、硫酸マグネシウム、リン酸マグネシウム、塩
化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅また
は炭酸カルシウムなどが用いられる。
ニウム、硝酸アンモニウムもしくは硫酸アンモニウムな
どの各種無機塩類、尿素などの有機酸のアンモニウム
塩、アミン、その他の窒素化合物、ペプトン、トリプト
ン、酵母エキス、肉エキス、麦芽エキス、コーンスティ
ープリカー、カゼイン加水分解物、大豆粕加水分解物ま
たは、各種発酵菌体もしくはその消化物などが用いられ
る。無機物としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二
カリウム、硫酸マグネシウム、リン酸マグネシウム、塩
化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅また
は炭酸カルシウムなどが用いられる。
【００１０】その他の栄養素としては、必要に応じてア
ミノ酸、微量金属塩などが用いられる。培養は、振盪培
養または通気攪拌培養などの好気的条件下にて、温度１
５〜４０℃、ｐＨ４〜１０で、通常１〜１０日間行う。
培養終了後、培養物をそのまま用いてもよいし、培養物
を遠心分離または濾過などにより分離し、菌体および多
糖類を含む混合物（以下、混合物という）として用いて
もよい。さらに必要に応じて、培養物または混合物をア
ルカリ処理や熱処理などによって溶解した後、エタノー
ル沈澱法など通常の多糖類の分離精製法を用いることに
より溶解液から多糖類を回収し、これを用いてもよい。
ミノ酸、微量金属塩などが用いられる。培養は、振盪培
養または通気攪拌培養などの好気的条件下にて、温度１
５〜４０℃、ｐＨ４〜１０で、通常１〜１０日間行う。
培養終了後、培養物をそのまま用いてもよいし、培養物
を遠心分離または濾過などにより分離し、菌体および多
糖類を含む混合物（以下、混合物という）として用いて
もよい。さらに必要に応じて、培養物または混合物をア
ルカリ処理や熱処理などによって溶解した後、エタノー
ル沈澱法など通常の多糖類の分離精製法を用いることに
より溶解液から多糖類を回収し、これを用いてもよい。
【００１１】本発明における培養物または混合物は色素
をほとんど、あるいはまったく含まない。すなわち、本
発明における微生物を培養して得られる混合物をロータ
リーエバポレーターなどで乾燥させ、さらに１００メッ
シュ以下に粉砕して得られる乾燥粉末標品のエタノール
抽出物（以下、本発明の微生物由来のエタノール抽出物
という）は、該微生物の親株から同様の方法で得られる
エタノール抽出物（以下、親株由来のエタノール抽出物
という）が吸光極大をとる波長において、実質的に光を
吸収しない。たとえば、目的とする色素について、吸光
極大を示す波長のうち最大の吸光度を示す波長（以下、
最大吸光極大を示す波長という）付近、好ましくは最大
吸光極大を示す波長から−１０〜１０ｎｍの範囲内の波
長、さらに好ましくは最大吸光極大を示す波長における
吸光度を色素量として表した場合、本発明の微生物由来
のエタノール抽出物の色素量は親株由来のエタノール抽
出物の色素量と比べて、１／１０以下の値しか示さな
い。以下に本発明の実施例を示す。
をほとんど、あるいはまったく含まない。すなわち、本
発明における微生物を培養して得られる混合物をロータ
リーエバポレーターなどで乾燥させ、さらに１００メッ
シュ以下に粉砕して得られる乾燥粉末標品のエタノール
抽出物（以下、本発明の微生物由来のエタノール抽出物
という）は、該微生物の親株から同様の方法で得られる
エタノール抽出物（以下、親株由来のエタノール抽出物
という）が吸光極大をとる波長において、実質的に光を
吸収しない。たとえば、目的とする色素について、吸光
極大を示す波長のうち最大の吸光度を示す波長（以下、
最大吸光極大を示す波長という）付近、好ましくは最大
吸光極大を示す波長から−１０〜１０ｎｍの範囲内の波
長、さらに好ましくは最大吸光極大を示す波長における
吸光度を色素量として表した場合、本発明の微生物由来
のエタノール抽出物の色素量は親株由来のエタノール抽
出物の色素量と比べて、１／１０以下の値しか示さな
い。以下に本発明の実施例を示す。
【００１２】
実施例１ 変異株の分離 ブイヨン寒天培地（粉末ブイヨン２％、寒天２％）（極
東製薬製）に生育したアルカリゲネス・レータスＢ−１
６株（以下、Ｂ−１６株という）を、グルコース１％を
含むブイヨン培地３０ｍｌを入れた３００ｍｌ容三角フ
ラスコに植菌し、３０℃で２４時間振盪培養を行った。
培養終了後、遠心分離により菌体を回収し、これを希釈
してブイヨン寒天培地に塗布し、細胞の９０％程度が死
滅するような処理条件で紫外線を照射した。紫外線照射
後、３０℃で２〜５日間培養して生じたコロニーのう
ち、Ｂ−１６株の特徴である黄色のコロニーではなく、
白色のコロニーを形成した菌株を選択し、釣菌分離し
た。このようにして得た変異株をＧＹ培地〔グルコース
20g/Ｌ、KH2PO4 4.5g/Ｌ、K2HPO4 1.5g/Ｌ 、NaCl 0.1
g/Ｌ 、MgSO4 ・7H2O 0.2g/Ｌ、尿素 1.0g/Ｌ 、酵母エ
キス（シグマ社製）0.5g/Ｌ、(pH7.2) 〕５０ｍｌを入
れた３００ｍｌ容三角フラスコに植菌し、３０℃で３日
間振盪培養し、培養物が白色を呈する菌株であるアルカ
リゲネス・レータスＷＢ−１株（以下、ＷＢ−１株とい
う）を選抜した。また、Ｂ−１６株に代えて黄色のコロ
ニーを形成するアルカリゲネス・レータスＰ−１株（以
下、Ｐ−１株という）を用いること以外は上記と同様に
行って、アルカリゲネス・レータスＷＰ−１株（以下、
ＷＰ−１株という）を選抜した。
東製薬製）に生育したアルカリゲネス・レータスＢ−１
６株（以下、Ｂ−１６株という）を、グルコース１％を
含むブイヨン培地３０ｍｌを入れた３００ｍｌ容三角フ
ラスコに植菌し、３０℃で２４時間振盪培養を行った。
培養終了後、遠心分離により菌体を回収し、これを希釈
してブイヨン寒天培地に塗布し、細胞の９０％程度が死
滅するような処理条件で紫外線を照射した。紫外線照射
後、３０℃で２〜５日間培養して生じたコロニーのう
ち、Ｂ−１６株の特徴である黄色のコロニーではなく、
白色のコロニーを形成した菌株を選択し、釣菌分離し
た。このようにして得た変異株をＧＹ培地〔グルコース
20g/Ｌ、KH2PO4 4.5g/Ｌ、K2HPO4 1.5g/Ｌ 、NaCl 0.1
g/Ｌ 、MgSO4 ・7H2O 0.2g/Ｌ、尿素 1.0g/Ｌ 、酵母エ
キス（シグマ社製）0.5g/Ｌ、(pH7.2) 〕５０ｍｌを入
れた３００ｍｌ容三角フラスコに植菌し、３０℃で３日
間振盪培養し、培養物が白色を呈する菌株であるアルカ
リゲネス・レータスＷＢ−１株（以下、ＷＢ−１株とい
う）を選抜した。また、Ｂ−１６株に代えて黄色のコロ
ニーを形成するアルカリゲネス・レータスＰ−１株（以
下、Ｐ−１株という）を用いること以外は上記と同様に
行って、アルカリゲネス・レータスＷＰ−１株（以下、
ＷＰ−１株という）を選抜した。
【００１３】実施例２ 多糖類の生産 ＷＢ−１株およびＷＰ−１株を、ＦＧ培地〔グルコース
20g/Ｌ、グリシン 0.6g/Ｌ 、KH2PO4 4.5g/Ｌ 、K2HPO
4 1.5g/Ｌ 、NaCl 0.1g/Ｌ 、MgSO4 ・7H2O 0.2g/Ｌ、尿
素 1.0g/Ｌ 、FeSO4 10mg/Ｌ、(pH7.2) 〕１０ｍｌを入
れた６０ｍｌ容太型試験管（直径２５ｍｍ×長さ２００
ｍｍ）に植菌し、３０℃で３日間、振盪培養した。Ｂ−
１６株およびＰ−１株も同様な方法で培養した。培養終
了後、それぞれの菌株について、以下の方法を用いて多
糖類の生産量および色素量を測定した。多糖類の生産量
は培養液の全量を可溶化後、硫酸カルバゾール法にて測
定し、グルクロン酸量として表した。色素量は培養液１
０ｍｌにエタノール２０ｍｌを加えて攪拌して抽出を行
った後、遠心分離によって上清を回収し、回収した上清
を減圧濃縮し、濃縮物をエタノールで５ｍｌになるよう
に希釈した。このエタノール溶液を４５０ｎｍにて吸光
度を測定し、色素量をＯＤ450 値として表した。
20g/Ｌ、グリシン 0.6g/Ｌ 、KH2PO4 4.5g/Ｌ 、K2HPO
4 1.5g/Ｌ 、NaCl 0.1g/Ｌ 、MgSO4 ・7H2O 0.2g/Ｌ、尿
素 1.0g/Ｌ 、FeSO4 10mg/Ｌ、(pH7.2) 〕１０ｍｌを入
れた６０ｍｌ容太型試験管（直径２５ｍｍ×長さ２００
ｍｍ）に植菌し、３０℃で３日間、振盪培養した。Ｂ−
１６株およびＰ−１株も同様な方法で培養した。培養終
了後、それぞれの菌株について、以下の方法を用いて多
糖類の生産量および色素量を測定した。多糖類の生産量
は培養液の全量を可溶化後、硫酸カルバゾール法にて測
定し、グルクロン酸量として表した。色素量は培養液１
０ｍｌにエタノール２０ｍｌを加えて攪拌して抽出を行
った後、遠心分離によって上清を回収し、回収した上清
を減圧濃縮し、濃縮物をエタノールで５ｍｌになるよう
に希釈した。このエタノール溶液を４５０ｎｍにて吸光
度を測定し、色素量をＯＤ450 値として表した。
【００１４】結果を第１表に示す。
【００１５】
【表１】 なお、Ｂ−１６株およびＷＢ−１株の培養液から色素量
の測定で用いた方法と同じ方法で得られたエタノール溶
液の吸光スペクトルを、それぞれ図１（Ａ）および図１
（Ｂ）に示す。図１（Ａ）と（Ｂ）に示されるように、
Ｂ−１６株の培養液から得られるエタノール溶液では、
４３３ｎｍ、４５７ｎｍおよび４８８ｎｍで吸光極大が
認められ、４５７ｎｍで最大の吸光極大が認められたの
に対して、ＷＢ−１株の培養液から得られるエタノール
溶液では、これらの波長で吸光極大が認められなかっ
た。
の測定で用いた方法と同じ方法で得られたエタノール溶
液の吸光スペクトルを、それぞれ図１（Ａ）および図１
（Ｂ）に示す。図１（Ａ）と（Ｂ）に示されるように、
Ｂ−１６株の培養液から得られるエタノール溶液では、
４３３ｎｍ、４５７ｎｍおよび４８８ｎｍで吸光極大が
認められ、４５７ｎｍで最大の吸光極大が認められたの
に対して、ＷＢ−１株の培養液から得られるエタノール
溶液では、これらの波長で吸光極大が認められなかっ
た。
【００１６】実施例３ 多糖類の乾燥粉末標品の製造 ＷＢ−１株およびＷＰ−１株を、それぞれＧＹ培地１０
ｍｌを入れた６０ｍｌ容太型試験管（直径２５ｍｍ×長
さ２００ｍｍ）に植菌し、３０℃、２４時間振盪培養し
た。この培養液全量をＦＧ培地３００ｍｌを入れた１Ｌ
三角フラスコに移し、３０℃で２４時間振盪培養した。
ＦＧ培地２．７Ｌを入れた５Ｌ容培養槽（ミツワバイオ
システム社製）に、上記種培養液３００ｍｌ全量をそれ
ぞれ植菌し、３０℃、通気量３．０Ｌ／分、攪拌５００
ｒｐｍの条件で５日間培養した。Ｂ−１６株およびＰ−
１株も同様な方法で培養した。培養終了後、多糖類の生
産量は実施例２と同様な方法を用いて測定した。それぞ
れの菌株が生産する多糖類の乾燥粉末標品として、培養
物の直接乾燥粉末標品および培養物のエタノール処理乾
燥粉末標品を以下の方法を用いて調製した。
ｍｌを入れた６０ｍｌ容太型試験管（直径２５ｍｍ×長
さ２００ｍｍ）に植菌し、３０℃、２４時間振盪培養し
た。この培養液全量をＦＧ培地３００ｍｌを入れた１Ｌ
三角フラスコに移し、３０℃で２４時間振盪培養した。
ＦＧ培地２．７Ｌを入れた５Ｌ容培養槽（ミツワバイオ
システム社製）に、上記種培養液３００ｍｌ全量をそれ
ぞれ植菌し、３０℃、通気量３．０Ｌ／分、攪拌５００
ｒｐｍの条件で５日間培養した。Ｂ−１６株およびＰ−
１株も同様な方法で培養した。培養終了後、多糖類の生
産量は実施例２と同様な方法を用いて測定した。それぞ
れの菌株が生産する多糖類の乾燥粉末標品として、培養
物の直接乾燥粉末標品および培養物のエタノール処理乾
燥粉末標品を以下の方法を用いて調製した。
【００１７】培養液３００ｍｌをロータリーエバポレー
ターで乾燥し、乾燥物を乳鉢で粉砕して１００メッシュ
以下の粉末を１〜１．６ｇ取得し、これらを培養物の直
接乾燥粉末標品（以下、直接乾燥標品という）とした。
培養液３００ｍｌに精製水２００ｍｌを加え、これに塩
化ナトリウムを０．５Ｍになるように加えて攪拌の後、
エタノールを０．７容加えて攪拌し、沈澱物を遠心分離
によって回収し、ロータリーエバポレーターで乾燥し
た。乾燥物を乳鉢で粉砕して、１００メッシュ以下の粉
末を０．６〜１．１ｇ取得し、これらを培養物のエタノ
ール処理乾燥粉末標品（以下、エタノール処理標品とい
う）とした。
ターで乾燥し、乾燥物を乳鉢で粉砕して１００メッシュ
以下の粉末を１〜１．６ｇ取得し、これらを培養物の直
接乾燥粉末標品（以下、直接乾燥標品という）とした。
培養液３００ｍｌに精製水２００ｍｌを加え、これに塩
化ナトリウムを０．５Ｍになるように加えて攪拌の後、
エタノールを０．７容加えて攪拌し、沈澱物を遠心分離
によって回収し、ロータリーエバポレーターで乾燥し
た。乾燥物を乳鉢で粉砕して、１００メッシュ以下の粉
末を０．６〜１．１ｇ取得し、これらを培養物のエタノ
ール処理乾燥粉末標品（以下、エタノール処理標品とい
う）とした。
【００１８】直接乾燥標品およびエタノール処理標品に
ついて、精製水を加えてそれぞれ２ｇ／Ｌ水溶液を調製
し、各々の水溶液１０ｍｌにエタノール２０ｍｌを加
え、攪拌して抽出した後、遠心分離して上清を回収し、
回収した上清を減圧濃縮した。濃縮物をエタノールで５
ｍｌになるようにそれぞれ希釈し、このエタノール溶液
を４５０ｎｍにて吸光度を測定し、色素量をＯＤ450 値
として表した。多糖類の生産量ならびに直接乾燥標品お
よびエタノール処理標品に含まれる色素量を第２表に示
す。
ついて、精製水を加えてそれぞれ２ｇ／Ｌ水溶液を調製
し、各々の水溶液１０ｍｌにエタノール２０ｍｌを加
え、攪拌して抽出した後、遠心分離して上清を回収し、
回収した上清を減圧濃縮した。濃縮物をエタノールで５
ｍｌになるようにそれぞれ希釈し、このエタノール溶液
を４５０ｎｍにて吸光度を測定し、色素量をＯＤ450 値
として表した。多糖類の生産量ならびに直接乾燥標品お
よびエタノール処理標品に含まれる色素量を第２表に示
す。
【表２】
【００１９】実施例４ 多糖類の物理化学的性質 実施例３で調製したＷＢ−１株、ＷＰ−１株、Ｂ−１６
株およびＰ−１株が生産する培養物に由来するエタノー
ル処理標品について、それぞれ吸水率および粘性を測定
した。吸水率は、特開平２ー２９１２９２号公報に記載
のティーバックテスト法に従い、以下の方法を用いて測
定した。まず、不織布で作った容器に４０ｍｇのエタノ
ール処理標品を入れ、精製水に２時間浸漬した後、１時
間静置して水切りし、吸水後の重量を測定した。次に、
１０５℃で２４時間乾燥して水分を完全に除去した後、
乾燥重量を測定した。エタノール処理標品の吸水後の重
量と乾燥重量との差を吸水量とし、吸水率は吸水量の乾
燥重量に対する倍率として表した。
株およびＰ−１株が生産する培養物に由来するエタノー
ル処理標品について、それぞれ吸水率および粘性を測定
した。吸水率は、特開平２ー２９１２９２号公報に記載
のティーバックテスト法に従い、以下の方法を用いて測
定した。まず、不織布で作った容器に４０ｍｇのエタノ
ール処理標品を入れ、精製水に２時間浸漬した後、１時
間静置して水切りし、吸水後の重量を測定した。次に、
１０５℃で２４時間乾燥して水分を完全に除去した後、
乾燥重量を測定した。エタノール処理標品の吸水後の重
量と乾燥重量との差を吸水量とし、吸水率は吸水量の乾
燥重量に対する倍率として表した。
【００２０】粘性は、エタノール処理標品を１ｇ／Ｌに
溶かした水溶液の粘度を、Ｂ型粘度計で測定した。結果
は第３表に示すとおり、ＷＢ−１株およびＷＰ−１株が
生産する培養物に由来するエタノール処理標品は、それ
ぞれＢ−１６株およびＰ−１株が生産する培養物に由来
するエタノール処理標品と同様の吸水率および粘性を有
していた。
溶かした水溶液の粘度を、Ｂ型粘度計で測定した。結果
は第３表に示すとおり、ＷＢ−１株およびＷＰ−１株が
生産する培養物に由来するエタノール処理標品は、それ
ぞれＢ−１６株およびＰ−１株が生産する培養物に由来
するエタノール処理標品と同様の吸水率および粘性を有
していた。
【表３】
【００２１】実施例３で調製したＷＢ−１株、ＷＰ−１
株、Ｂ−１６株およびＰ−１株が生産する培養物に由来
するエタノール処理標品について、それぞれ５ｇ／Ｌの
１０ｍｌ水溶液になるように、７０℃で攪拌しながら溶
解した。室温に冷却した後、エタノール３０ｍｌを加
え、沈澱物を回収した。回収した沈澱物を、０．０２５
％水酸化ナトリウム水溶液１０ｍｌに懸濁し、１２１℃
で１５分間加熱した後、７０℃で３０分間攪拌しながら
処理を行い、固形物をできるだけ溶解させた。溶解液は
４０，０００ｇ×４０分の遠心分離を行って沈澱物を除
去した後、０．１Ｎ塩酸で中和し、ロータリーエバポレ
ーターを用いて濃縮した。濃縮物に純水を加えて１０ｍ
ｌとした後、７０℃で再び溶解させた。溶解液にエタノ
ール３０ｍｌを加え、再び沈澱物を得た。上記の溶解操
作および沈澱操作を３回ずつ繰り返し、多糖類を精製し
た。最後に得られた沈澱物を常温にて真空乾燥し、これ
を乳鉢で粉砕して１００メッシュ以下の粉末を取得し、
これを多糖類の精製乾燥粉末標品（以下、精製標品とい
う）とした。
株、Ｂ−１６株およびＰ−１株が生産する培養物に由来
するエタノール処理標品について、それぞれ５ｇ／Ｌの
１０ｍｌ水溶液になるように、７０℃で攪拌しながら溶
解した。室温に冷却した後、エタノール３０ｍｌを加
え、沈澱物を回収した。回収した沈澱物を、０．０２５
％水酸化ナトリウム水溶液１０ｍｌに懸濁し、１２１℃
で１５分間加熱した後、７０℃で３０分間攪拌しながら
処理を行い、固形物をできるだけ溶解させた。溶解液は
４０，０００ｇ×４０分の遠心分離を行って沈澱物を除
去した後、０．１Ｎ塩酸で中和し、ロータリーエバポレ
ーターを用いて濃縮した。濃縮物に純水を加えて１０ｍ
ｌとした後、７０℃で再び溶解させた。溶解液にエタノ
ール３０ｍｌを加え、再び沈澱物を得た。上記の溶解操
作および沈澱操作を３回ずつ繰り返し、多糖類を精製し
た。最後に得られた沈澱物を常温にて真空乾燥し、これ
を乳鉢で粉砕して１００メッシュ以下の粉末を取得し、
これを多糖類の精製乾燥粉末標品（以下、精製標品とい
う）とした。
【００２２】精製標品を２Ｎ硫酸により構成糖に加水分
解した後、ＣａｒｂｏＰａｃ ＰＡ１を装着したダイオ
ネクス４５００ｉ型イオンクロマトグラフィーを用いて
分離し、パルスドアンペロメトリーにより構成糖の検出
および定量を行った。多糖類の定量は、特開平２−２９
１２９２号公報に記載のエタノール沈澱法によるもの
と、硫酸カルバゾール法により定量したグルクロン酸の
値を４倍した数値のいずれかを用いた。結果は第４表に
示すとおり、ＷＢ−１株およびＷＰ−１株が生産する培
養物に由来する精製標品は、それぞれＢ−１６株および
Ｐ−１株が生産する培養物に由来する精製標品と同様な
構成糖の組成を有していた。
解した後、ＣａｒｂｏＰａｃ ＰＡ１を装着したダイオ
ネクス４５００ｉ型イオンクロマトグラフィーを用いて
分離し、パルスドアンペロメトリーにより構成糖の検出
および定量を行った。多糖類の定量は、特開平２−２９
１２９２号公報に記載のエタノール沈澱法によるもの
と、硫酸カルバゾール法により定量したグルクロン酸の
値を４倍した数値のいずれかを用いた。結果は第４表に
示すとおり、ＷＢ−１株およびＷＰ−１株が生産する培
養物に由来する精製標品は、それぞれＢ−１６株および
Ｐ−１株が生産する培養物に由来する精製標品と同様な
構成糖の組成を有していた。
【表４】
【００２３】
【本発明の効果】本発明により、微生物による多糖類の
製造に際して培養物中に色素を含まない多糖類を蓄積さ
せることにより、多糖類の精製工程を容易とするなど、
多糖類を効率よく製造する方法が提供される。
製造に際して培養物中に色素を含まない多糖類を蓄積さ
せることにより、多糖類の精製工程を容易とするなど、
多糖類を効率よく製造する方法が提供される。
【図１】（Ａ）は、Ｂ−１６株の培養液から得られるエ
タノール溶液の吸光スペクトルを示す。（Ｂ）は、ＷＢ
−１株の培養液から得られるエタノール溶液の吸光スペ
クトルを示す。
タノール溶液の吸光スペクトルを示す。（Ｂ）は、ＷＢ
−１株の培養液から得られるエタノール溶液の吸光スペ
クトルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:05） (72)発明者 倉根 隆一郎 茨城県つくば市東１丁目１番３号 工業技 術院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 穴澤 秀治 東京都練馬区南大泉４丁目19番18号 (72)発明者 近間 芳典 東京都町田市本町田815 (72)発明者 中川 智 東京都町田市中町３丁目９番９号 (72)発明者 野畑 靖浩 三重県四日市市別名６丁目６番９号 伯東 株式会社四日市研究所内
Claims (4)
- 【請求項１】 アルカリゲネス属に属し、多糖類および
色素を生成する能力を併有する菌株を親株として変異処
理により、色素を生成する能力が低下または欠失した微
生物を培地に培養し、培養物中に多糖類を生成蓄積さ
せ、該培養物より多糖類を採取することを特徴とする多
糖類の製造法。 - 【請求項２】 微生物が、アルカリゲネス・レータスＷ
Ｂ−１株（ＦＥＲＭＢＰ−４６５１）またはアルカリゲ
ネス・レータスＷＰ−１株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４６５
０）である請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 アルカリゲネス・レータスに属し、多糖
類および色素を生成する能力を併有する菌株を親株とし
て変異処理により、色素を生成する能力が低下または欠
失した微生物。 - 【請求項４】 微生物が、アルカリゲネス・レータスＷ
Ｂ−１株（ＦＥＲＭＢＰ−４６５１）またはアルカリゲ
ネス・レータスＷＰ−１株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４６５
０）である請求項３記載の微生物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14635295A JP3731010B2 (ja) | 1995-06-13 | 1995-06-13 | 多糖類の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14635295A JP3731010B2 (ja) | 1995-06-13 | 1995-06-13 | 多糖類の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08336394A true JPH08336394A (ja) | 1996-12-24 |
| JP3731010B2 JP3731010B2 (ja) | 2006-01-05 |
Family
ID=15405777
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14635295A Expired - Lifetime JP3731010B2 (ja) | 1995-06-13 | 1995-06-13 | 多糖類の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3731010B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002030243A (ja) * | 2001-01-30 | 2002-01-31 | Hakuto Co Ltd | 水性インキ組成物 |
| JP2002121538A (ja) * | 2000-10-13 | 2002-04-26 | Hakuto Co Ltd | 増粘剤およびこれを配合した化粧料 |
| JP2003055641A (ja) * | 2001-08-10 | 2003-02-26 | Hakuto Co Ltd | 増粘剤 |
| JP2012062476A (ja) * | 2011-10-31 | 2012-03-29 | Hakuto Co Ltd | 増粘剤の製造方法 |
| JP2013177627A (ja) * | 2013-05-31 | 2013-09-09 | Hakuto Co Ltd | 増粘剤 |
-
1995
- 1995-06-13 JP JP14635295A patent/JP3731010B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002121538A (ja) * | 2000-10-13 | 2002-04-26 | Hakuto Co Ltd | 増粘剤およびこれを配合した化粧料 |
| JP2002030243A (ja) * | 2001-01-30 | 2002-01-31 | Hakuto Co Ltd | 水性インキ組成物 |
| JP2003055641A (ja) * | 2001-08-10 | 2003-02-26 | Hakuto Co Ltd | 増粘剤 |
| JP2012062476A (ja) * | 2011-10-31 | 2012-03-29 | Hakuto Co Ltd | 増粘剤の製造方法 |
| JP2013177627A (ja) * | 2013-05-31 | 2013-09-09 | Hakuto Co Ltd | 増粘剤 |
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|---|---|
| JP3731010B2 (ja) | 2006-01-05 |
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