JPH08301776A

JPH08301776A - 上皮細胞の分化促進剤

Info

Publication number: JPH08301776A
Application number: JP7131162A
Authority: JP
Inventors: Shinya Nagabuchi; 真也永渕; Takeshi Takahashi; 高橋　　毅; Shigeko Suidou; 成子水堂; Tamotsu Kuwata; 有桑田
Original assignee: Meiji Milk Products Co Ltd
Current assignee: Meiji Dairies Corp
Priority date: 1995-05-02
Filing date: 1995-05-02
Publication date: 1996-11-19

Abstract

(57)【要約】【構成】乳中のホエー画分を限外濾過して得られるパ
ーミエート画分及び／又はその処理物、または、イオン
交換樹脂処理等して得られる非蛋白態窒素含有画分及び
／又はその処理物を用いてなる小腸上皮細胞の分化促進
剤。【効果】消化器管の消化不良や食物アレルギーの予
防、治療に有用である。また、有効成分は乳由来の非蛋
白態窒素画分であるため、安全性の面でも問題がなく、
医薬品、飲食品として実際の使用に供することができ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、乳中の非蛋白態窒素
（Non Protein Nitrogen、以下ＮＰＮということもあ
る）画分を有効成分とする上皮細胞の分化促進剤に関す
るものであるが、更に詳細には、本発明は、消化器官の
消化不良や食物アレルギーの治療と予防に有効な上皮細
胞の分化促進剤に関するものである。これは、医薬品、
飲食品、調製粉乳、飼料、経腸栄養剤、健康食品、細胞
または微生物の培地の添加物、化粧品の原料として用い
ることができる。

【０００２】

【従来の技術】人乳は全窒素の約２０％が非蛋白態窒素
である。一方、牛乳は全窒素の約５％が非蛋白態窒素で
ある。この乳中の非蛋白態窒素には尿素、核酸（ヌクレ
オチド）、カルニチン、Ｎ−アセチルグルコサミン、コ
リン、ポリアミン、クレアチニン、アミノ酸、ペプチ
ド、アミノ糖などの有効成分が含まれている。これらの
成分のうち、核酸（ヌクレオチド）には、小腸上皮細胞
の分化を促進する効果があることが知られている。

【０００３】しかし、核酸（ヌクレオチド）の非蛋白態
窒素画分中の含量は微量（非蛋白態窒素画分中の数％）
であるため、乳中から精製して純品を得るには、非常に
コストがかかる。一方、非蛋白態窒素画分それ自体の生
理作用については、上述したように成分が多岐に亘るた
め、ほとんど知られていない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
非蛋白態窒素について、新しい有用な生理作用を新規に
発見し、ＮＰＮを含有する画分であるところのホエー又
はホエーの限外濾過処理の際の透過液画分に有効利用の
途を新たに拓く目的でなされたものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは、
乳中の非蛋白態窒素の生理作用について鋭意検討した結
果、非蛋白態窒素が上皮細胞の分化を促進することを見
出した。ここで用いた細胞は、ヒト大腸ガン細胞系（Ca
co-2）である。Caco-2はコンフルエントに達すると、通
常の培養条件で小腸上皮細胞様の性質を持つように分化
する。すなわち、domeや刷子縁膜を形成し、アルカリホ
スファターゼやスクラーゼなどの刷子縁膜酵素を発現
し、細胞間にタイトジャンクションを形成する。今ま
で、Caco-2の性質を利用して、小腸上皮細胞の輸送系な
どが調べられてきた。

【０００６】調製粉乳に乳中の非蛋白態窒素画分を添加
することにより、乳児の小腸上皮細胞の分化が促進さ
れ、消化管の消化吸収機能の向上が図られる。本発明に
よる上皮細胞分化促進剤は、経口投与、静脈内投与、患
部への直接投与のどの方法を用いてもよい。

【０００７】本発明は、特開平４−３５６１５９、５−
２０７８４８、５−２９２８７９あるいは７−１０５等
で開示された方法を用いて、乳中の非蛋白態窒素画分を
分離、精製し、その小腸上皮細胞への分化の影響を調べ
た結果、この非蛋白態窒素画分に小腸上皮細胞の分化を
促進する作用があることをはじめて見出し、本発明に至
ったものである。

【０００８】本発明の非蛋白態窒素画分は、卓越した上
皮細胞分化促進作用を有するので、該画分（ＮＰＮ）を
調製粉乳や飲食品に添加することにより、腸管内で小腸
上皮細胞の分化を促進することができ、上皮細胞あるい
は腸管の消化酵素の活性が高められ、それにより腸管内
の消化作用を促進し、経口的に摂取した難消化物の消化
に有用な食品や医薬品を提供できる。また、上皮細胞の
タイトジャンクションを密にすることにより、腸管腔内
の食物蛋白質のアレルゲンの上皮細胞からの侵入を抑制
し、食物アレルギーの予防や治療に有用な食品や医薬品
を提供できる。この非蛋白態窒素画分は、家畜用の飼
料、細胞又は微生物の培地、化粧品にも添加することが
できる。

【０００９】本発明の分化促進剤の有効成分は非蛋白態
窒素画分であるが、本発明においてはその含有物も同様
に有効成分として使用することができ、例えば、乳中の
ホエー画分を限外濾過して得られるパーミエート画分及
び／又はその処理物を使用することができる。あるい
は、乳中のホエー画分をイオン交換樹脂処理等して得ら
れる非蛋白態窒素含有画分及び／又はその処理物を使用
することができる。ホエーは、酸性ホエー、甘性ホエー
等が適宜使用できる。

【００１０】限外濾過（ＵＦ）は、分画分子量１００〜
１０万、好ましくは１，０００〜５０，０００程度の限
外濾過膜を用いて行なうが、ＵＦ膜の分画分子量は必要
とするＮＰＮの最大分子量に応じて相違するので、場合
によっては上記範囲を逸脱することもあり得る。ＵＦ装
置に使用される膜としては、格別の限定はなく、中空糸
タイプ、ディスクタイプその他が適宜使用可能である。

【００１１】乳中のホエー画分を、ＵＦ処理すると、通
過液（Permeate）と保留物（Retentate）に分けられる
が、保留物中には乳脂肪や蛋白質が主に含まれ、ＮＰＮ
は通過液中に主に含まれるので、本発明においては、Ｎ
ＰＮをほぼ純粋な状態に単離できるので、精製すること
なく、このパーミエート画分を有効成分として使用する
ことができる。

【００１２】該パーミエート画分は、それ自体をそのま
ま使用できるほか、それを濃縮して得た濃縮液、濃縮に
際して析出した乳糖を除去した液、こ（れら）のペース
ト化物、乾燥物等も、本発明の有効成分として使用に供
することができる。

【００１３】また、該パーミエート画分は、先に例示し
た公報に記載した各種の処理を行って、精製したり、濃
度を高めたりして、処理物として本発明に使用すること
も可能である。

【００１４】分離・処理の具体例は次のとおりである。（１）分離・処理Ａ該パーミエート画分を、所望により濃縮した後、濃縮・
乳糖結晶化・分離工程及び脱塩工程を適宜組み合わせて
処理する。（例えば特開昭６０−５４６３７参照）

【００１５】具体的には、ホエーを限外濾過処理して、
この透過液から非蛋白態窒素成分を分離するに際し、２
回の濃縮・乳糖結晶化・分離工程及び１回の脱塩工程を
適宜組み合わせて処理することにより非蛋白態窒素成分
含有組成物を製造する。

【００１６】更に具体的には、まず脱塩を行ない、次い
で濃縮、乳糖結晶化、分離を行ない、更に濃縮、乳糖結
晶化、分離を行なう方法があり、また、最初に濃縮、乳
糖結晶化、分離を行ない、次いで分離濾液について濃縮
されたものの脱塩を行ない、最後に再度、濃縮、乳糖結
晶化、分離を行なう方法などがあげられる。

【００１７】脱塩工程としては、電気透析やイオン交換
樹脂による成分の除去が一般的である。この脱塩工程は
非蛋白態窒素成分の純度をあげるために早い時期に行な
うことが好ましい。しかし最も好ましいのは、第１工程
としての濃縮・乳糖結晶化・分離工程が終了した後の濃
縮液を脱塩工程にかけることで、この場合は液量が少な
く、脱塩処理をすみやかに行なうことができる。

【００１８】濃縮・乳糖結晶化・分離工程においては、
ホエーの限外濾過膜透過液、もしくはこれを脱塩したも
のを固形分濃度５０〜７５％（乳糖濃度で４０〜６０
％）まで濃縮する。この濃縮液を７０〜８０％の乳糖が
結晶化するように冷却、攪拌する。結晶沈殿した乳糖
は、これを分離することができる。

【００１９】７０〜８５％の乳糖が分離された処理液
は、そのままもしくは脱塩工程を経て、再び濃縮・乳糖
結晶化・分離工程にかけられる。

【００２０】第２回目の濃縮・乳糖結晶化・分離工程
は、第１回目と同様に、減圧濃縮して、固形分濃度で５
０〜７５％、即ち乳糖濃度で４０〜６０％として、７０
〜８５％の乳糖が結晶化するように冷却、攪拌し、結晶
沈殿した乳糖を分離する。

【００２１】本発明においては、２回の濃縮・乳糖結晶
化・分離工程を行なうので、最初に含有していた乳糖の
９１〜９８％は除去されることになり、純度の高いＮＰ
Ｎが得られる。

【００２２】（２）分離・処理Ｂ乳中のホエー画分を、所望により濃縮及び／又は脱塩し
た後、イオン交換樹脂に吸着せしめ、次いで、非蛋白態
窒素とミネラルの樹脂に対する選択吸着性の差を利用し
て、吸着した非蛋白態窒素を該ホエー又は濃縮ホエーで
押し出して脱塩ホエー中に非蛋白態窒素を回収するか、
あるいは、吸着した非蛋白態窒素を溶出剤を用いて回収
することにより、特にナトリウム含量を低下せしめ、純
度の高いＮＰＮを回収する。（例えば特開平４−３５６
１５９参照）

【００２３】具体的には、全固形分（ＴＳ）１０〜４０
％、好ましくは２０〜３０％に濃縮したホエー、及び／
又は、電気透析（ＥＤ）における脱塩率３０〜８０％、
好ましくは５０〜７０％にまで脱塩したホエーを用い、
カチオンまたはアニオン交換樹脂で処理する。カラムと
しては、直径２４ｍｍの場合、カラム層高は５０ｃｍ以
上とし、線速度は１０ｍ／ｈ以下とするのがよい。

【００２４】ＮＰＮの選択吸着性は、ミネラルの中で最
も選択吸着性が低いナトリウムのそれよりも低い点に着
目し、この性質を利用して、カラムの溶出ないし押し出
しを行い、最初にＮＰＮが漏出し、次いでナトリウムと
その他のミネラルが漏出してくる前までのカラム出口液
を回収することにより、ＮＰＮのみを選択的に回収する
ものである。

【００２５】この方法においては、溶出剤としてはアル
カリ物質が好適であって、例えばアルカリ金属（Ｋ，Ｌ
ｉその他）やアルカリ土金属（Ｃａ，Ｍｇ，Ｂａその
他）の水酸化物が好適である。溶出剤として例えば水酸
化カリウムを使用した場合、その濃度は０．４Ｎ以上、
好ましくは０．８Ｎ以上がよく、濃度が高い方が急激に
漏出してくる。その通液量も多いほどＮＰＮの回収率が
高くなり、一応の目安としてBed Volume（ＢＤ）×０．
２以上程度が好適である。

【００２６】（３）分離・処理Ｃ該パーミエート画分を脱塩した後、強酸性陽イオン交換
樹脂（ＳＣＩ）処理及び強塩基性陰イオン交換樹脂（Ｓ
ＡＩ）処理を組み合わせたイオン交換樹脂処理を行って
ＮＰＮを樹脂に吸着せしめ、水洗した後、酸及び／又は
アルカリで脱着せしめて高純度ＮＰＮを回収する。（例
えば特開平５−２０７８４８参照）。

【００２７】具体的には、例えば７５％電気透析脱塩ホ
エーをＵＦ処理して透過液を得、これを固形分１１％に
濃縮して脱塩濃縮パーミエート画分を得、これをＮＰＮ
母液とする。これをＳＣＩ（三菱化学社、商品名：Ｄｉ
ａｉｏｎＳＫ１Ｂ）充填カラムにＳＶ＝３で通液した
後、イオン交換体体積の２０倍相当量（２０ＢＶ）を通
液した後、２ＢＶの水で水洗する。

【００２８】水洗後、２ＢＶの２ＮのＮａＯＨを循環
し、延６ＢＶ通液してＮＰＮを溶出する。その後、２Ｂ
Ｖの水でカラム及びＳＣＩを洗い、残液を回収する。次
に２ＮのＨ₂ＳＯ₄を使って、２ＮのＮａＯＨのときと同
様の操作を行いＮＰＮを溶出し、水洗により残液を回収
する。（本工程の）アルカリ溶出（水洗水を含む）で通
液した全ＮＰＮの３５％を、酸溶出（水洗水を含む）で
は２２％を回収する。

【００２９】ＳＣＩを通過したＮＰＮ母液並びに母液の
水洗水はＳＣＩの１．１倍のＳＡＩを充填したカラムに
ＳＶ＝３で通液し、２０ＢＶ通液した後２ＢＶの水でカ
ラム内のＳＡＩ（三菱化学社、商品名：Ｄｉａｉｏｎ
ＳＡ１０Ａ）を水洗する。ＳＡＩに未吸着のＮＰＮは全
ＮＰＮの２４％である。

【００３０】水洗したＳＡＩに２ＢＶの２ＮのＨ₂ＳＯ₄
を循環し、延６ＢＶ通液してＮＰＮを溶出する。その
後、２ＢＶの水でカラム並びにＳＣＩを水洗し、残液を
回収する。次いで２ＮのＮａＯＨを使って２ＮのＨ₂Ｓ
Ｏ₄のときと同様の操作を行い、ＮＰＮを溶出し水洗に
より残液を回収する。本工程の酸溶出（水洗水含む）で
ＮＰＮの９％を、アルカリ溶出（水洗水含む）では７％
を回収する。

【００３１】すなわち全イオン交換体から回収されたＮ
ＰＮは、ＮＰＮ母液の７３％である。これ等ＮＰＮ溶出
液を混合し、中和後、電気透析脱塩したところ、固形分
当り、７４％のＮＰＮ（Ｎ×６．３８）を含むＮＰＮ溶
液が得られる。

【００３２】（４）分離・処理Ｄ乳中のホエー画分又は該パーミエート画分を、粉末の場
合には有機溶媒を含む溶媒に懸濁・溶解し、溶液の場合
には有機溶媒を含む溶媒を添加して、不溶物及び／又は
生じた沈殿を除去した後に有機溶媒を含む溶媒中でゲル
濾過を行うことによりＮＰＮ成分を精製する。（例えば
特開平５−２９２８７９参照）

【００３３】有機溶媒としては、アルコール類、ケトン
類、ニトリル類を用い、５〜９５％、好ましくは４０〜
７５％の濃度で用いる。

【００３４】ゲル濾過に用いるゲル濾過用充填剤として
は、球状蛋白質の分画範囲である分画分子量が１０⁴ダ
ルトン以下であり、有機溶媒の使用に耐え得るものであ
れば特に規定しない。このようなゲル濾過用充填剤とし
ては、セファデックスゲル（Pharmacia LKB biotechnol
ogy社）、バイオゲル（Bio-Rad Laboratories社)、バイ
オグラス(Bio-Rad Laboratories社)、スチラゲル(Water
s Associates, Inc.社)、トヨパール(東ソー社)等があ
り、これらの中から適宜選択することが可能である。

【００３５】具体的には、例えば、１０％ホエー水溶液
１０ｍｌに１０ｍｌの９９．５％エタノールを加えてよ
く混合し、３０分静置する。次に３０００×ｇ、１０分
間の遠心分離を行い、上澄液を得る。この上澄液１０ｍ
ｌを予め５０％エタノールで平衝化させたToyopearl HW
-40（東ソー社、球状蛋白質の分画分子量範囲：１０⁴ダ
ルトン以下）のカラム（径２５ｍｍ×長さ８００ｍｍ）
に負荷する。

【００３６】このカラムに５０％エタノールを線速度
９．２ｃｍ／ｈで供給し、溶出液を１５ｍｌずつ分取
し、フラクションＮo.２２〜３１に、乳糖含量の少ない
高純度に精製されたＮＰＮ画分を得る。

【００３７】（５）分離・処理ＥＮＰＮ含有原料である該パーミエート画分を、ＮＰＮ阻
止率の低い電気透析膜を装着した電気透析装置を用いて
脱塩し、脱塩されたＮＰＮ母液は、これをイオン交換樹
脂処理してＮＰＮ画分を吸着回収し、上記脱塩処理によ
って回収された塩回収画分（ＮＰＮの一部を含有する濃
縮液）と合し、得られた混合物を中和した後、ＮＰＮ阻
止率の高い電気透析膜を装着した電気透析装置を用いて
脱塩処理し、ＮＰＮを精製する。（例えば特開平７−１
０５参照）

【００３８】具体的には、ホエーよりイオン交換体で部
分脱蛋白質した液を濃縮した後、乳糖を結晶分離してな
る部分脱蛋白質−部分脱乳糖ホエー（ＰＤＰＬ）を原料
とし、このＰＤＰＬ１０％溶液を分画分子量２０，０
００のＵＦ処理をし、得られるパーミエート画分をＮＰ
Ｎ母液とする。これを旭硝子社製ＥＤ膜（ＣＭＶ／ＡＭ
Ｖ）で電気伝導度を指標として９７％電気透析脱塩し、
脱塩ＮＰＮ母液及び塩回収液とする。この脱塩ＮＰＮ母
液を、ＳＣＩを充填したカラムにＳＶ＝３で通液し、イ
オン交換体体積の４５倍相当量（４５ＢＶ）を通液した
後、５ＢＶの水でカラム内のＳＣＩを水洗する。ＳＣＩ
は三菱化学社製ＤｉａｉｏｎＳＫ１Ｂを使用する。Ｓ
ＣＩに未吸着のＮＰＮは全ＮＰＮの４９％である。水洗
後、２ＢＶの２ＮのＮａＯＨを循環し、延６ＢＶ通液し
てＮＰＮを溶出する。その後、５ＢＶの水でカラム並び
にＳＣＩを水洗し、残液を回収する。アルカリ溶出（水
洗水含む）で通液した全ＮＰＮの１８％を回収する。

【００３９】ＳＣＩを通過した脱塩ＮＰＮ母液並びに母
液の水洗水はＳＣＩの１．１倍のＳＡＩを充填したカラ
ムにＳＶ＝３で通液し、４４ＢＶ通液した後５ＢＶの水
でカラム内のＳＡＩを水洗する。ＳＡＩは三菱化学社製
ＤｉａｉｏｎＳＡ１０Ａを使用する。ＳＡＩに未吸着
のＮＰＮは全ＮＰＮの１１％である。

【００４０】水洗したＳＡＩに２ＢＶの２ＮのＨ₂ＳＯ₄
を循環し、延８ＢＶ通液してＮＰＮを溶出する。その
後、５ＢＶの水でカラム並びにＳＣＩを水洗し、残液を
回収する。本工程の酸溶出（水洗水を含む）でＮＰＮの
１７％を回収する。

【００４１】上記の方法により、全イオン交換体から回
収されたＮＰＮは、脱塩ＮＰＮ母液の６８％である。こ
れ等ＳＫ１Ｂ吸着画分溶離液、ＳＡ１０Ａ吸着画分溶離
液及びＥＤ濃縮液（塩回収液）からなるＮＰＮ溶出液を
混合し、中和後、旭硝子社製ＥＤ膜（ＣＳＶ／ＡＭＴ）
で電気透析脱塩し、固形分当り、７４％のＮＰＮ（Ｎ×
６．３８）を含むＮＰＮ溶液を得る。

【００４２】このようにして得た処理物は、そのまま本
発明に係る分化促進剤の有効成分として使用できるが、
必要あれば、更に濃縮、ペースト化、希釈、及び／又は
乾燥してもよい。

【００４３】本発明において使用する該パーミエート画
分及び／又はその処理物、あるいは、該非蛋白態窒素含
有画分及び／又はその処理物は、後記する実施例からも
明らかなように、すぐれた上皮細胞の分化促進作用を有
するので、本発明に係る分化促進剤は、この作用を利用
した調製粉乳、各種飲食品、特定保健用飲食品、健康飲
料、健康食品、栄養食品、経腸栄養剤その他各種タイプ
の飲食品として用いることができるほか、飼料、細胞又
は微生物の培地の添加物、及び、消化器官の消化不良や
食品アレルギーの治療及び／又は予防に有効な上皮細胞
の分化促進に係る医薬品としても用いることができる。

【００４４】飲食品タイプとして使用する場合には、本
有効成分であるパーミエート画分（その処理物）又は非
蛋白態窒素含有画分（その処理物）をそのまま、使用し
たり、他の食品ないし食品成分と併用したりして適宜常
法にしたがって使用できる。本有効成分を用いる本発明
に係る分化促進剤は、固体状（粉末、顆粒状その他）、
ペースト状、液状ないし懸濁状のいずれでもよいが、甘
味料、酸味料、ビタミン剤その他ドリンク剤製造に常用
される各種成分を用いて、健康ドリンクや調製粉乳に製
剤化すると好適である。

【００４５】医薬品タイプとして使用する場合には、パ
ーミエート画分（その処理物）又は非蛋白態窒素含有画
分（その処理物）を有効成分としてこれに常用される無
機又は有機の担体を加えて、固体、半固体又は液体の形
で、経口投与剤のほか、注射剤、外用剤等の非経口投与
剤に製剤化する。

【００４６】経口投与のための製剤としては、錠剤、丸
剤、顆粒剤、軟・硬カプセル剤、散剤、細粒剤、粉剤、
乳濁剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等が挙げら
れる。非経口投与のための製剤としては、注射剤、軟
膏、ローション、トニック、スプレー、懸濁剤、油剤、
乳剤、坐剤等が挙げられる。本発明の有効成分を製剤化
するには、常法にしたがえばよく、界面活性剤、賦形
剤、着色剤、着香剤、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁
剤、等張剤その他常用される既知の補助剤を適宜使用す
る。

【００４７】本発明に係る分化促進剤の投与量は、その
種類、治療ないし予防対象疾病の種類、投与方法、患者
の年令、患者の症状、処理時間等によって相違するが、
静脈投与の場合は成人ひとり当り１日に有効成分（該パ
ーミエート画分（その処理物）又は該非蛋白態窒素含有
画分（その処理物））を０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ投与
し、筋肉投与の場合は同じく０．１〜１０００ｍｇ／ｋ
ｇ投与し、経口投与の場合も同じく０．１〜１００ｍｇ
／ｋｇの範囲で投与する。なお、外用剤の場合は、患部
に必要量を適宜適用すればよい。

【００４８】本発明に係る有効成分は、乳の含有成分で
あるため、毒性は全く認められず、卓越した安全性を示
し、現にラットに対して１日当り１００ｍｇ経口投与し
たが急性毒性は全く認められなかった。したがって飲食
品タイプの組成物として使用する場合は、予防用、保健
用、通常の飲食品として使用する場合のいずれにおいて
も、有効成分の使用量に格別の限定はないし、医薬とし
て使用する場合も、患者に応じて上記範囲内で適宜使用
すればよい。また、本有効成分は、多量に服用しても格
別の急性毒性を示さないので、必要あれば上記範囲より
も多量に使用しても差し支えない。

【００４９】以下に本発明の実施例について述べる。な
お実施例は牛乳由来のホエー画分を利用しているが、牛
乳のほか、人乳、その他哺乳類の乳であればすべての乳
が使用できる。また、乳は、初乳、常乳のいずれもが使
用可能である。

【００５０】

【実施例１】特開平４−３５６１５９号に開示した方法
を用いて、濃縮ホエーをイオン交換樹脂に吸着せしめた
後、濃縮ホエー及び／又は溶出剤を用いてＮＰＮを選択
的に押し出して精製した。

【００５１】（１）常法にしたがって全固形分（Total
Solid，TS）が２４％となるように濃縮したホエーを電
気透析により６０％脱塩した後、８４ｃｍの陽イオン交
換樹脂カラム（アンバーライトＩＲ１２０Ａ、直径２４
ｍｍ）に線速度５．３ｍ／ｈで通液した。そして、樹脂
の容量の１０．８倍の濃縮ホエーを処理することによ
り、ＮＰＮを回収率８０％で回収した。なお、この場
合、ミネラルの回収率は１０％以下であり、ホエー溶出
法によりきわめて高い精製ＮＰＮが得られた。

【００５２】（２）６０％電気透析脱塩ホエーを、カラ
ム層高８５ｃｍの陽イオン交換樹脂カラム（アンバーラ
イトＩＲ１２０Ａ、直径２４ｍｍ）に、線速度５．３ｍ
／ｈで、樹脂量の６倍通液した。その後、１．６Ｎの水
酸化カリウムを樹脂の０．３７５倍通液することによ
り、ＮＰＮを溶出液中に５０％回収した。

【００５３】（３）上記により精製したＮＰＮ画分を更
に凍結乾燥して、固体のＮＰＮ画分を得た。前第（１）項で得た精製ＮＰＮの固体画分の主な成分
を、下記表１に示す。

【００５４】

【表１】

【００５５】

【実施例２】実施例１で得たＮＰＮ画分粉末を１０％の
ウシ胎児血清を含むＤａｌｂｅｃｃｏ変法ＭＥＭ培地
（ＤＭＥＭ培地）に、最終濃度が０．０５％になるよう
に加え、ヒト大腸ガン細胞系（Caco-2）を２４穴プレー
トに２４日間培養した。２４日後、培養細胞の培養液を
除去し、ＰＢＳを０．５ｍｌ加え、細胞をセルスクレー
パーでかき取った。この細胞溶液を氷水で冷やしなが
ら、３０秒間超音波破砕し、酵素活性測定用の試料とし
た。酵素活性は蛋白質１ｍｇ当たりの酵素活性（ｍＵ／
ｍｇ）で表した。蛋白質濃度はローリー法で測定した。
アルカリホスファターゼ活性はｐ−ニトロフェニルリン
酸を基質として、Ｇａｒｅｎらの方法（Garen，A., et
al., Biochim. Biophys. Acta(1960)38：470-483）で、
スクラーゼ活性はスクロースを基質として、Ｄａｈｌｑ
ｖｉｓｔらの方法（Dahlqvist, A., et al., Anal. Bio
chem.(1968)22：99-107）で測定した。

【００５６】分化の指標となる酵素（アルカリホスファ
ターゼ、スクラーゼ）活性を測定した結果、培地のみの
コントロールと比べて、これらの酵素活性は有意に高く
なっていた（図１、２）。また、比較対照として用いた
核酸（人乳とほぼ同一組成のヌクレオチド一リン酸（下
記表２））を添加したものと比べて、アルカリホスファ
ターゼについてはほぼ同等の値であった（図１）。スク
ラーゼについては、核酸より非蛋白態窒素の方が活性は
高かった（図２）。このことより、非蛋白態窒素は、核
酸と同等以上の上皮細胞分化能を持つことが認められ
た。

【００５７】

【表２】

【００５８】

【実施例３】非蛋白態窒素が、Caco-2のタイトジャンク
ションに与える影響を調べた。実施例２と同様に非蛋白
態窒素と核酸をそれぞれＤＭＥＭ培地に添加して、Caco
-2をミリセル−ＨＡ（ミリポア社）上に２４日間培養し
た。その後、ミリセル電気抵抗測定系（ミリポア社）を
用いて、Caco-2の電気抵抗（TEER）を測定した。その結
果、コントロールや核酸を添加した場合に比べて、非蛋
白態窒素を添加すると有意に電気抵抗が上昇した（図
３）。このことより、非蛋白態窒素を添加すると、Caco
-2の細胞間のタイトジャンクションが密になることが認
められた。

【００５９】

【実施例４】育児用調製粉乳１００ｋｇを調製するに当
り、先ず、下記の表３に示す原材料及び成分を用意し
た。そしてこれらの原材料を常法にしたがって溶解、混
合、清浄化した後、殺菌、濃縮、均質化し、噴霧乾燥し
て製品を得た。

【００６０】

【表３】

【００６１】

【実施例５】実施例１で製造したＮＰＮ画分粉末１００
ｇ、糖類１５０ｇ、蜂蜜１５ｇ、アスコルビン酸１ｇ、
クエン酸０．５ｇ、香料適量に水を加えて１ｋｇとし、
これを９５℃で２０分間殺菌し、１００ｍｌずつ無菌的
にビンに充填して、飲食品タイプの健康ドリンクを製造
した。

【００６２】

【実施例６】実施例１で得たＮＰＮ画分粉末の２０％水
溶液２００ｇ、酢酸トコフェロール５ｇ、硝酸チアミン
１０ｇ、ニコチン酸アミド２０ｇ、無水カフェイン５０
ｇ、安息香酸塩及び香料適量に脱イオン水を加えて３０
Ｌとし、殺菌した後３０ｍｌずつ無菌的にビンに充填し
て、医薬品としての健康ドリンクを製造した。

【００６３】

【実施例７】（１）実施例１で製造したＮＰＮ画分粉末５０ｇ（２）ラクトース９０ｇ（３）コーンスターチ２９ｇ（４）ステアリン酸マグネシウム１ｇ（１）、（２）及び（３）（但し１７ｇ）を混合し、
（３）（但し７ｇ）から調製したペーストとともに顆粒
化した。得られた顆粒に（３）（但し５ｇ）と（４）を
加えてよく混合し、この混合物を圧縮錠剤機により圧縮
して、１錠あたり有効成分（１）を５０ｍｇ含有する錠
剤１０００個を製造した。

【００６４】

【発明の効果】乳児期、特に出生直後の新生児は、消化
管上皮細胞が未成熟なため、消化不良や食物アレルギー
を起こしやすい。乳中の非蛋白態窒素画分は小腸上皮細
胞分化促進能を有するので、乳児用の調製粉乳に添加す
ることができる。また、成人や乳児の消化管の消化不良
や腸管腔内の食物蛋白質のアレルゲンの侵入の予防と治
療を目的として、医薬品、飲食品、飼料や餌料の素材、
細胞または微生物の培地の添加物、化粧品の原料として
用いることができる。

【００６５】また、乳中のホエー画分を限外濾過（分画
分子量１００〜１０万）して得られるパーミエート画分
はほとんど利用されていない画分であるため、資源の有
効活用という点でも貢献でき、また安価である。しか
も、非蛋白態窒素画分は、我々が日常的に飲む牛乳など
の乳から精製して得られる画分のため、安全性の点でも
問題がない。

【図面の簡単な説明】

【図１】２４日間培養したCaco-2のアルカリフォスファ
ターゼ活性を示す。

【図２】２４日間培養したCaco-2のスクラーゼ活性を示
す。

【図３】２４日間培養したCaco-2の電気抵抗（TEER）測
定値を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ２３Ｃ 21/00 Ａ２３Ｃ 21/00 Ａ２３Ｌ 1/30 Ａ２３Ｌ 1/30 Ａ (72)発明者桑田有東京都東村山市栄町１−21−３明治乳業株式会社栄養科学研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】乳中のホエー画分を限外濾過して得られ
るパーミエート画分及び／又はその処理物を用いてなる
小腸上皮細胞の分化促進剤。
【請求項２】分画分子量１００〜１００，０００、好
ましくは１，０００〜５０，０００の限外濾過膜を用い
て限外濾過してなることを特徴とする請求項１に記載の
分化促進剤。
【請求項３】該パーミエート画分及び／又はその処理
物に乳中の非蛋白態窒素画分が含有されていることを特
徴とする請求項１又は請求項２に記載の分化促進剤。
【請求項４】該パーミエート画分を、所望により濃縮
した後、濃縮・乳糖結晶化・分離工程及び脱塩工程を適
宜組み合わせて処理し、得られた処理物を該パーミエー
ト画分処理物として使用することを特徴とする請求項１
〜請求項３のいずれか１項に記載の分化促進剤。
【請求項５】該パーミエート画分を、脱塩した後、陽
イオン交換樹脂処理及び陰イオン交換樹脂処理を組み合
わせたイオン交換樹脂処理を行って非蛋白態窒素画分を
樹脂に吸着せしめた後、水洗し、次いで非蛋白態窒素画
分を脱着せしめ、この処理によって得られた処理物を該
パーミエート画分処理物として使用することを特徴とす
る請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の分化促進
剤。
【請求項６】該パーミエート画分を有機溶媒処理し、
生成した沈殿を除去した後の有機溶媒液をゲル濾過処理
し、得られた処理物を該パーミエート画分処理物として
使用することを特徴とする請求項１〜請求項３のいずれ
かに１項に記載の分化促進剤。
【請求項７】該パーミエート画分を非蛋白態窒素画分
阻止率の低いイオン交換膜を用いて電気透析脱塩処理
し、脱塩−非蛋白態窒素画分母液と塩回収濃縮液とを
得、該母液については、イオン交換樹脂処理して非蛋白態窒
素画分を樹脂に吸着せしめた後、これを溶離して該画分
を得、該画分と先に得た塩回収濃縮液とを合し、中和した後、
非蛋白態窒素画分阻止率の高いイオン交換膜を用いて電
気透析脱塩処理し、得られた処理物を該パーミエート画分処理物として使用
することを特徴とする請求項１〜請求項３のいずれか１
項に記載の分化促進剤。
【請求項８】該パーミエート画分及び／又はその処理
物が、更に、そ（れら）の濃縮物、ペースト状物、希釈
物、及び／又は乾燥物であることを特徴とする請求項１
〜請求項７のいずれか１項に記載の分化促進剤。
【請求項９】乳中のホエー画分を、所望により濃縮及
び／又は脱塩した後、イオン交換樹脂に吸着せしめ、次
いで濃縮してもよいホエー又は溶出剤を用いて非蛋白態
窒素画分を選択的に押し出して得られる非蛋白態窒素含
有画分及び／又はその処理物を用いてなる小腸上皮細胞
の分化促進剤。
【請求項１０】該非蛋白態窒素含有画分及び／又はそ
の処理物が、更に、そ（れら）の濃縮物、ペースト状
物、希釈物、及び／又は乾燥物であることを特徴とする
請求項９に記載の分化促進剤。
【請求項１１】該分化促進剤が、医薬品タイプ及び／
又は飲食品タイプであることを特徴とする請求項１〜請
求項１０のいずれかに１項に記載の分化促進剤。
【請求項１２】乳中のホエー画分が、人乳、牛乳及び
／又はその他の哺乳動物の乳由来であり、しかも初乳及
び／又は常乳由来であることを特徴とする請求項１〜請
求項１１のいずれか１項に記載の分化促進剤。