JPH08295634A - 動脈疾患治療剤 - Google Patents
動脈疾患治療剤Info
- Publication number
- JPH08295634A JPH08295634A JP7297700A JP29770095A JPH08295634A JP H08295634 A JPH08295634 A JP H08295634A JP 7297700 A JP7297700 A JP 7297700A JP 29770095 A JP29770095 A JP 29770095A JP H08295634 A JPH08295634 A JP H08295634A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hgf
- smooth muscle
- cells
- muscle cells
- endothelial cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 動脈疾患の治療・予防に有用な薬剤を提供す
ることを目的とする。 【解決手段】 本発明の動脈疾患治療剤は、ＨＧＦ(Hep
atocyte Growth Factor,肝細胞増殖因子)を有効成分と
して含有することからなる。本発明の動脈疾患治療剤の
有効成分であるＨＧＦは、血管内皮細胞の増殖を促進す
る作用を有すると共に、血管平滑筋細胞の増殖を促進せ
ず、更には修復された血管内皮細胞を介して血管平滑筋
細胞の異常な増殖を抑える作用をも有している。従っ
て、本発明の治療剤は、動脈障害、特に血管平滑筋細胞
の増殖を主体とする障害に起因する各種疾患の治療・予
防に有用である。
ることを目的とする。 【解決手段】 本発明の動脈疾患治療剤は、ＨＧＦ(Hep
atocyte Growth Factor,肝細胞増殖因子)を有効成分と
して含有することからなる。本発明の動脈疾患治療剤の
有効成分であるＨＧＦは、血管内皮細胞の増殖を促進す
る作用を有すると共に、血管平滑筋細胞の増殖を促進せ
ず、更には修復された血管内皮細胞を介して血管平滑筋
細胞の異常な増殖を抑える作用をも有している。従っ
て、本発明の治療剤は、動脈障害、特に血管平滑筋細胞
の増殖を主体とする障害に起因する各種疾患の治療・予
防に有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は動脈疾患の治療及び予防
に有用な薬剤に関する。より詳細には、ＨＧＦ(Hepatoc
yte Growth Factor)を有効成分として含有する動脈疾患
治療剤に関する。
に有用な薬剤に関する。より詳細には、ＨＧＦ(Hepatoc
yte Growth Factor)を有効成分として含有する動脈疾患
治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】動脈は、組織学的には内膜、中膜及び外
膜の３層から構成されており、内膜は単層の内皮細胞と
内皮下層からなり、中膜は主として平滑筋線維と弾性線
維から構成されている。また、外膜は境界を有すること
なく周囲の結合組織に移行している。動脈疾患は一般に
よくみられる疾患であり、また生命維持に欠くことので
きない脳、心臓、腎臓などの臓器に重大な影響を及ぼす
ので重要であり、最も一般的な疾患は動脈硬化症であ
る。動脈硬化は、動脈壁の肥厚、改築、弾性低下をきた
し動脈壁が硬化する限局性の動脈病変の総称であり、病
理形態学的には粥状硬化、石灰化硬化及び細動脈硬化に
分類され、臨床的には粥状硬化と細動脈硬化が重要であ
る。現在、臨床病理学的に最も注目を集めているのは、
比較的大きな動脈に発生し、動脈の狭窄閉塞をきたす粥
状硬化であり、硬化が進行すると、動脈の狭窄閉塞によ
る脳虚血発作、狭心症、心筋梗塞、間欠性跛行などの重
篤な疾患が出現する。粥状硬化の発生機序については、
必ずしも明確になっていないが、動脈内皮細胞が化学的
因子や機械的因子により傷害を受け、そこを介して単球
が内膜に侵入してマクロファージとなり、マクロファー
ジが変性（酸化）ＬＤＬ（低比重リポプロテイン）を取
り込むことにより泡沫細胞化し、動脈硬化が発症すると
いう説が有力である。一方、近年、粥状硬化の発生進展
における中膜平滑筋細胞の役割が注目されている。内膜
の傷害その他により、血小板の粘着、凝集が起こり、そ
こから放出された種々の血管作用物質が内膜透過性を亢
進させたり、中膜平滑筋細胞の増殖を刺激し、粥状硬化
病変の進展をきたす可能性があることが指摘されてい
る。糖尿病性合併症の血管障害において内皮細胞の関与
が認識されつつある（分子糖尿病学の進歩-基礎から臨
床まで-１９９４，２３４-２４３頁，金原出版刊）。糖
尿病に伴う動脈硬化においても、内皮細胞の障害、平滑
筋細胞の増殖が想定される。その成因の基本は、高血糖
状態の持続であることが想定できるが、そのメカニズム
は不明な点が多く、ポリオール代謝異常、後期グリケー
ション終末生成物の関与、低酸素説などの仮説が挙げら
れている。一方、ＨＧＦは膵臓ランゲルハンス島の培養
系においてその増殖促進することが知られている(Otonk
oski et al., Diabetes 43, 947-953, 1994)。しかし、
血糖値が低下することは報告されていない。
膜の３層から構成されており、内膜は単層の内皮細胞と
内皮下層からなり、中膜は主として平滑筋線維と弾性線
維から構成されている。また、外膜は境界を有すること
なく周囲の結合組織に移行している。動脈疾患は一般に
よくみられる疾患であり、また生命維持に欠くことので
きない脳、心臓、腎臓などの臓器に重大な影響を及ぼす
ので重要であり、最も一般的な疾患は動脈硬化症であ
る。動脈硬化は、動脈壁の肥厚、改築、弾性低下をきた
し動脈壁が硬化する限局性の動脈病変の総称であり、病
理形態学的には粥状硬化、石灰化硬化及び細動脈硬化に
分類され、臨床的には粥状硬化と細動脈硬化が重要であ
る。現在、臨床病理学的に最も注目を集めているのは、
比較的大きな動脈に発生し、動脈の狭窄閉塞をきたす粥
状硬化であり、硬化が進行すると、動脈の狭窄閉塞によ
る脳虚血発作、狭心症、心筋梗塞、間欠性跛行などの重
篤な疾患が出現する。粥状硬化の発生機序については、
必ずしも明確になっていないが、動脈内皮細胞が化学的
因子や機械的因子により傷害を受け、そこを介して単球
が内膜に侵入してマクロファージとなり、マクロファー
ジが変性（酸化）ＬＤＬ（低比重リポプロテイン）を取
り込むことにより泡沫細胞化し、動脈硬化が発症すると
いう説が有力である。一方、近年、粥状硬化の発生進展
における中膜平滑筋細胞の役割が注目されている。内膜
の傷害その他により、血小板の粘着、凝集が起こり、そ
こから放出された種々の血管作用物質が内膜透過性を亢
進させたり、中膜平滑筋細胞の増殖を刺激し、粥状硬化
病変の進展をきたす可能性があることが指摘されてい
る。糖尿病性合併症の血管障害において内皮細胞の関与
が認識されつつある（分子糖尿病学の進歩-基礎から臨
床まで-１９９４，２３４-２４３頁，金原出版刊）。糖
尿病に伴う動脈硬化においても、内皮細胞の障害、平滑
筋細胞の増殖が想定される。その成因の基本は、高血糖
状態の持続であることが想定できるが、そのメカニズム
は不明な点が多く、ポリオール代謝異常、後期グリケー
ション終末生成物の関与、低酸素説などの仮説が挙げら
れている。一方、ＨＧＦは膵臓ランゲルハンス島の培養
系においてその増殖促進することが知られている(Otonk
oski et al., Diabetes 43, 947-953, 1994)。しかし、
血糖値が低下することは報告されていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来から動脈硬化症な
どの動脈疾患を治療するために種々の治療法が試みられ
てきているが、従来の動脈硬化の予防・治療は、血中の
ＬＤＬコレステロールを下げることを主眼としており、
コレステロール吸収阻害剤やコレステロール合成阻害剤
などが用いられてきたが、その効果が不十分であった
り、またその副作用（例えば、食欲不振、胃腸障害、過
敏症状等）などの問題から新たな予防・治療剤の開発が
望まれている。ところで、血管内皮細胞はＮＯやＣＮＰ
などの血管拡張因子・平滑筋細胞増殖抑制因子を産生・
分泌しており、内皮細胞が損傷を受けると血管平滑筋細
胞の増殖が誘発されることが知られており、本発明者等
は前記の発生機序に基づき、傷害を受けた血管内皮細胞
を迅速に修復することができれば、平滑筋細胞の増殖を
主体とする病変を予防・治療することが可能であること
に想到したが、現在まで血管平滑筋細胞に作用すること
なく、血管内皮細胞のみを増殖させる因子についてはほ
とんど報告されていない。本発明者等は、かかる観点か
ら、血管平滑筋細胞に作用することなく、血管内皮細胞
のみを増殖させる因子について鋭意研究した結果、ＨＧ
Ｆがかかる作用を有すること見出し、ＨＧＦが動脈疾
患、特に血管平滑筋細胞増殖を主体とする病変の予防・
治療に有用であることが判明した。
どの動脈疾患を治療するために種々の治療法が試みられ
てきているが、従来の動脈硬化の予防・治療は、血中の
ＬＤＬコレステロールを下げることを主眼としており、
コレステロール吸収阻害剤やコレステロール合成阻害剤
などが用いられてきたが、その効果が不十分であった
り、またその副作用（例えば、食欲不振、胃腸障害、過
敏症状等）などの問題から新たな予防・治療剤の開発が
望まれている。ところで、血管内皮細胞はＮＯやＣＮＰ
などの血管拡張因子・平滑筋細胞増殖抑制因子を産生・
分泌しており、内皮細胞が損傷を受けると血管平滑筋細
胞の増殖が誘発されることが知られており、本発明者等
は前記の発生機序に基づき、傷害を受けた血管内皮細胞
を迅速に修復することができれば、平滑筋細胞の増殖を
主体とする病変を予防・治療することが可能であること
に想到したが、現在まで血管平滑筋細胞に作用すること
なく、血管内皮細胞のみを増殖させる因子についてはほ
とんど報告されていない。本発明者等は、かかる観点か
ら、血管平滑筋細胞に作用することなく、血管内皮細胞
のみを増殖させる因子について鋭意研究した結果、ＨＧ
Ｆがかかる作用を有すること見出し、ＨＧＦが動脈疾
患、特に血管平滑筋細胞増殖を主体とする病変の予防・
治療に有用であることが判明した。
【０００４】上記のＨＧＦは肝実質細胞を in vitro で
増殖させる因子として見出されたタンパク質である（Bi
ochem Biophys Res Commun, 122, 1450, 1984、Proc. N
atl.Acad. Sci. USA, 83, 6489, 1986、 FEBS Letter,
22, 311, 1987、Nature, 342, 440, 1989、Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 87, 3200, 1990）。肝実質細胞を特
異的に増殖させる因子として発見されたＨＧＦは、本発
明者らをはじめとする多くの研究者による最近の研究成
果によって、生体内で組織傷害治癒などの種々の活性を
示している事が明らかとなり、研究対象としてのみなら
ずヒトや動物の治療薬などへの応用に期待が集まってい
る。ＨＧＦは主に間葉系の細胞により産生されているこ
とが解明されており、近隣細胞から必要に応じてＨＧＦ
が供給される、所謂パラクリン機構が成立していること
が明らかにされている。しかしながら、肝臓や腎臓に傷
害を受けたとき、傷害を受けていない臓器、例えば肺な
どにおいてもＨＧＦの産生が高まることから、所謂エン
ドクリン機構によってもＨＧＦが供給されていると考え
られる。このようなＨＧＦの受容体に関して、最近の研
究から、ｃ−Ｍｅｔ原腫瘍遺伝子がＨＧＦ受容体をコー
ドしていることが確定的になった(Bottaro et al., Sci
ence 251, 802-804, 1991; Naldini et al., Oncogene
6, 501-504, 1991)。また、ＨＧＦが静脈内皮細胞の増
殖促進作用を有することが報告されている(J. Cell Bio
l., 119, 629, 1992)。上述のようにＨＧＦに関しては
多くの知見が得られているが、ＨＧＦが血管平滑筋細胞
に作用することなく、血管内皮細胞のみを増殖させる作
用を有することは従来知られていない新規な知見であ
る。さらに、ＨＧＦが高血糖による血管平滑筋細胞の増
殖には影響を与えず、高血糖による血管内皮細胞の減少
を抑制することは従来知られていない新規な知見であ
る。本発明はかかる知見に基づいてなされたもので、本
発明は新規な動脈疾患治療剤を提供することを目的とす
る。
増殖させる因子として見出されたタンパク質である（Bi
ochem Biophys Res Commun, 122, 1450, 1984、Proc. N
atl.Acad. Sci. USA, 83, 6489, 1986、 FEBS Letter,
22, 311, 1987、Nature, 342, 440, 1989、Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 87, 3200, 1990）。肝実質細胞を特
異的に増殖させる因子として発見されたＨＧＦは、本発
明者らをはじめとする多くの研究者による最近の研究成
果によって、生体内で組織傷害治癒などの種々の活性を
示している事が明らかとなり、研究対象としてのみなら
ずヒトや動物の治療薬などへの応用に期待が集まってい
る。ＨＧＦは主に間葉系の細胞により産生されているこ
とが解明されており、近隣細胞から必要に応じてＨＧＦ
が供給される、所謂パラクリン機構が成立していること
が明らかにされている。しかしながら、肝臓や腎臓に傷
害を受けたとき、傷害を受けていない臓器、例えば肺な
どにおいてもＨＧＦの産生が高まることから、所謂エン
ドクリン機構によってもＨＧＦが供給されていると考え
られる。このようなＨＧＦの受容体に関して、最近の研
究から、ｃ−Ｍｅｔ原腫瘍遺伝子がＨＧＦ受容体をコー
ドしていることが確定的になった(Bottaro et al., Sci
ence 251, 802-804, 1991; Naldini et al., Oncogene
6, 501-504, 1991)。また、ＨＧＦが静脈内皮細胞の増
殖促進作用を有することが報告されている(J. Cell Bio
l., 119, 629, 1992)。上述のようにＨＧＦに関しては
多くの知見が得られているが、ＨＧＦが血管平滑筋細胞
に作用することなく、血管内皮細胞のみを増殖させる作
用を有することは従来知られていない新規な知見であ
る。さらに、ＨＧＦが高血糖による血管平滑筋細胞の増
殖には影響を与えず、高血糖による血管内皮細胞の減少
を抑制することは従来知られていない新規な知見であ
る。本発明はかかる知見に基づいてなされたもので、本
発明は新規な動脈疾患治療剤を提供することを目的とす
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
めになされた本発明は、 ＨＧＦを有効成分として含有することを特徴とする動
脈疾患治療剤； 動脈疾患が、血管平滑筋増殖を主体とする動脈疾患で
ある上記記載の動脈疾患治療剤； 動脈疾患が、ＰＴＣＡ後の再狭窄である上記記載の
動脈疾患治療剤；及び 動脈疾患が、高血糖に伴う動脈疾患である上記記載
の動脈疾患治療剤に関する。
めになされた本発明は、 ＨＧＦを有効成分として含有することを特徴とする動
脈疾患治療剤； 動脈疾患が、血管平滑筋増殖を主体とする動脈疾患で
ある上記記載の動脈疾患治療剤； 動脈疾患が、ＰＴＣＡ後の再狭窄である上記記載の
動脈疾患治療剤；及び 動脈疾患が、高血糖に伴う動脈疾患である上記記載
の動脈疾患治療剤に関する。
【０００６】本発明で使用されるＨＧＦとしては、医薬
として使用できる程度に精製されたものであれば、種々
の方法で調製されたものを用いることができる。ＨＧＦ
の調製方法としては、各種の方法が知られている。例え
ば、ラット、ウシ、ウマ、ヒツジなどの哺乳動物の肝
臓、脾臓、肺臓、骨髄、脳、腎臓、胎盤等の臓器、血小
板、白血球等の血液細胞や血漿、血清などから抽出、精
製して得ることができる(FEBS Letters, 224, 312, 198
7、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 5844, 1989など
参照)。また、ＨＧＦを産生する初代培養細胞や株化細
胞を培養し、培養物（培養上清、培養細胞等）から分離
精製してＨＧＦを得ることもできる。あるいは遺伝子工
学的手法によりＨＧＦをコードする遺伝子を適切なベク
ターに組込み、これを適当な宿主に挿入して形質転換
し、この形質転換体の培養上清から目的とする組換えＨ
ＧＦを得ることができる(例えば、Nature, 342, 440, 1
989、特開平５−１１１３８３号公報、Biochem. Biophy
s. Res. Commun., 163, 967, 1989など参照)。上記の宿
主細胞は特に限定されず、従来から遺伝子工学的手法で
用いられている各種の宿主細胞、例えば大腸菌、枯草
菌、酵母、糸状菌、植物又は動物細胞などを用いること
ができる。
として使用できる程度に精製されたものであれば、種々
の方法で調製されたものを用いることができる。ＨＧＦ
の調製方法としては、各種の方法が知られている。例え
ば、ラット、ウシ、ウマ、ヒツジなどの哺乳動物の肝
臓、脾臓、肺臓、骨髄、脳、腎臓、胎盤等の臓器、血小
板、白血球等の血液細胞や血漿、血清などから抽出、精
製して得ることができる(FEBS Letters, 224, 312, 198
7、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 5844, 1989など
参照)。また、ＨＧＦを産生する初代培養細胞や株化細
胞を培養し、培養物（培養上清、培養細胞等）から分離
精製してＨＧＦを得ることもできる。あるいは遺伝子工
学的手法によりＨＧＦをコードする遺伝子を適切なベク
ターに組込み、これを適当な宿主に挿入して形質転換
し、この形質転換体の培養上清から目的とする組換えＨ
ＧＦを得ることができる(例えば、Nature, 342, 440, 1
989、特開平５−１１１３８３号公報、Biochem. Biophy
s. Res. Commun., 163, 967, 1989など参照)。上記の宿
主細胞は特に限定されず、従来から遺伝子工学的手法で
用いられている各種の宿主細胞、例えば大腸菌、枯草
菌、酵母、糸状菌、植物又は動物細胞などを用いること
ができる。
【０００７】より具体的には、ＨＧＦを生体組織から抽
出精製する方法としては、例えば、ラットに四塩化炭素
を腹腔内投与し、肝炎状態にしたラットの肝臓を摘出し
て粉砕し、Ｓ−セファロース、ヘパリンセファロースな
どのゲルカラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ等の通常
の蛋白質精製法にて精製することができる。また、遺伝
子組換え法を用い、ヒトＨＧＦのアミノ酸配列をコード
する遺伝子を、ウシパピローマウィルスＤＮＡなどのベ
クターに組み込んだ発現ベクターによって動物細胞、例
えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、マ
ウスＣ１２７細胞、サルＣＯＳ細胞などを形質転換し、
その培養上清より得ることができる。
出精製する方法としては、例えば、ラットに四塩化炭素
を腹腔内投与し、肝炎状態にしたラットの肝臓を摘出し
て粉砕し、Ｓ−セファロース、ヘパリンセファロースな
どのゲルカラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ等の通常
の蛋白質精製法にて精製することができる。また、遺伝
子組換え法を用い、ヒトＨＧＦのアミノ酸配列をコード
する遺伝子を、ウシパピローマウィルスＤＮＡなどのベ
クターに組み込んだ発現ベクターによって動物細胞、例
えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、マ
ウスＣ１２７細胞、サルＣＯＳ細胞などを形質転換し、
その培養上清より得ることができる。
【０００８】かくして得られたＨＧＦは、ＨＧＦと実質
的に同効である限り、そのアミノ酸配列の一部が欠失又
は他のアミノ酸により置換されていたり、他のアミノ酸
配列が一部挿入されていたり、Ｎ末端及び／又はＣ末端
に１又は２以上のアミノ酸が結合していたり、あるいは
糖鎖が同様に欠失又は置換されていてもよい。
的に同効である限り、そのアミノ酸配列の一部が欠失又
は他のアミノ酸により置換されていたり、他のアミノ酸
配列が一部挿入されていたり、Ｎ末端及び／又はＣ末端
に１又は２以上のアミノ酸が結合していたり、あるいは
糖鎖が同様に欠失又は置換されていてもよい。
【０００９】本発明の治療剤は上記のＨＧＦを有効成分
とし、ＨＧＦは後記試験例に示されるように、血管平滑
筋細胞を増殖させることなく、血管内皮細胞の増殖を促
進する作用を有する。更に、ＨＧＦは、障害を受けてい
ない組織には作用を示さず、障害を受けている組織にの
み作用するので、副作用を惹起するおそれが少ないとい
う特長を有する。従って、本発明の治療剤は、動脈疾
患、特に血管平滑筋細胞の増殖を主体とする病変の治療
・予防に有効であり、これらには例えば下記の疾患〜
が包含される。
とし、ＨＧＦは後記試験例に示されるように、血管平滑
筋細胞を増殖させることなく、血管内皮細胞の増殖を促
進する作用を有する。更に、ＨＧＦは、障害を受けてい
ない組織には作用を示さず、障害を受けている組織にの
み作用するので、副作用を惹起するおそれが少ないとい
う特長を有する。従って、本発明の治療剤は、動脈疾
患、特に血管平滑筋細胞の増殖を主体とする病変の治療
・予防に有効であり、これらには例えば下記の疾患〜
が包含される。
【００１０】ＰＴＣＡ(percutaneous transluminal c
oronary angioplasty)後の再狭窄 末梢循環不全（閉塞性動脈硬化症等を含む） 動脈硬化症 また、本発明の治療剤は、血管内皮細胞の増殖を促進す
る作用を有することから、心筋梗塞後の側副血行路形成
にも有効である。さらに、本発明の治療剤は、糖尿病な
どにおける高血糖による内皮細胞の障害、糖尿病性合併
症などに有効である。ここで、高血糖とは、例えば、空
腹時の血液中のグルコース濃度が１１０ｍｇ／ｄｌ以上
である状態をいう。また、糖尿病では、このグルコース
濃度が１４０ｍｇ／ｄｌ以上となっている。
oronary angioplasty)後の再狭窄 末梢循環不全（閉塞性動脈硬化症等を含む） 動脈硬化症 また、本発明の治療剤は、血管内皮細胞の増殖を促進す
る作用を有することから、心筋梗塞後の側副血行路形成
にも有効である。さらに、本発明の治療剤は、糖尿病な
どにおける高血糖による内皮細胞の障害、糖尿病性合併
症などに有効である。ここで、高血糖とは、例えば、空
腹時の血液中のグルコース濃度が１１０ｍｇ／ｄｌ以上
である状態をいう。また、糖尿病では、このグルコース
濃度が１４０ｍｇ／ｄｌ以上となっている。
【００１１】本発明の治療剤は、ヒトの他、哺乳動物
（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコ等）
における動脈障害に起因する種々の疾患の治療・予防に
適用される。
（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコ等）
における動脈障害に起因する種々の疾患の治療・予防に
適用される。
【００１２】本発明の治療剤は種々の製剤形態（例え
ば、液剤、固形剤、カプセル剤等）をとりうるが、一般
的には有効成分であるＨＧＦのみ又はそれと慣用の担体
と共に注射剤、吸入剤、坐剤又は経口剤とされる。当該
注射剤は常法により調製することができ、例えば、ＨＧ
Ｆを適切な溶剤（例えば、滅菌された水、緩衝液、生理
食塩水等）に溶解した後、フィルター等で濾過して滅菌
し、次いで無菌的な容器に充填することにより調製する
ことができる。注射剤中のＨＧＦ含量としては、通常0.
0002〜0.2(W/V%)程度、好ましくは0.001〜0.1(W/V%)程
度に調整される。また、経口薬としては、例えば、錠
剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、軟又は硬カプセル剤、液
剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤などの剤形に製剤化さ
れ、これらの製剤は製剤化の常法に準じて調製すること
ができる。坐剤も慣用の基剤（例えば、カカオ脂、ラウ
リン脂、グリセロゼラチン、マクロゴール、ウィテップ
ゾル等）を用いた製剤上の常法によって調製することが
できる。また、吸入剤も製剤上の常套手段に準じて調製
することができる。製剤中のＨＧＦ含量は、剤形、適用
疾患などに応じて適宜調整することができる。
ば、液剤、固形剤、カプセル剤等）をとりうるが、一般
的には有効成分であるＨＧＦのみ又はそれと慣用の担体
と共に注射剤、吸入剤、坐剤又は経口剤とされる。当該
注射剤は常法により調製することができ、例えば、ＨＧ
Ｆを適切な溶剤（例えば、滅菌された水、緩衝液、生理
食塩水等）に溶解した後、フィルター等で濾過して滅菌
し、次いで無菌的な容器に充填することにより調製する
ことができる。注射剤中のＨＧＦ含量としては、通常0.
0002〜0.2(W/V%)程度、好ましくは0.001〜0.1(W/V%)程
度に調整される。また、経口薬としては、例えば、錠
剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、軟又は硬カプセル剤、液
剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤などの剤形に製剤化さ
れ、これらの製剤は製剤化の常法に準じて調製すること
ができる。坐剤も慣用の基剤（例えば、カカオ脂、ラウ
リン脂、グリセロゼラチン、マクロゴール、ウィテップ
ゾル等）を用いた製剤上の常法によって調製することが
できる。また、吸入剤も製剤上の常套手段に準じて調製
することができる。製剤中のＨＧＦ含量は、剤形、適用
疾患などに応じて適宜調整することができる。
【００１３】製剤化に際して、好ましくは安定化剤が添
加され、安定化剤としては、例えば、アルブミン、グロ
ブリン、ゼラチン、グリシン、マンニトール、グルコー
ス、デキストラン、ソルビトール、エチレングリコール
などが挙げられる。さらに、本発明の製剤は製剤化に必
要な添加物、例えば、賦形剤、溶解補助剤、酸化防止
剤、無痛化剤、等張化剤等を含んでいてもよい。液状製
剤とした場合は凍結保存、又は凍結乾燥等により水分を
除去して保存するのが望ましい。凍結乾燥製剤は、用時
に注射用蒸留水などを加え、再溶解して使用される。
加され、安定化剤としては、例えば、アルブミン、グロ
ブリン、ゼラチン、グリシン、マンニトール、グルコー
ス、デキストラン、ソルビトール、エチレングリコール
などが挙げられる。さらに、本発明の製剤は製剤化に必
要な添加物、例えば、賦形剤、溶解補助剤、酸化防止
剤、無痛化剤、等張化剤等を含んでいてもよい。液状製
剤とした場合は凍結保存、又は凍結乾燥等により水分を
除去して保存するのが望ましい。凍結乾燥製剤は、用時
に注射用蒸留水などを加え、再溶解して使用される。
【００１４】本発明の治療剤は、その製剤形態に応じた
適当な投与経路により投与され得る。例えば、注射剤の
形態にして静脈、動脈、皮下、筋肉内などに投与するこ
とができる。その投与量は、患者の症状、年齢、体重な
どにより適宜調整されるが、通常ＨＧＦとして0.05mg〜
500mg、好ましくは１mg〜100mgであり、これを１日１回
ないし数回に分けて投与するのが適当である。
適当な投与経路により投与され得る。例えば、注射剤の
形態にして静脈、動脈、皮下、筋肉内などに投与するこ
とができる。その投与量は、患者の症状、年齢、体重な
どにより適宜調整されるが、通常ＨＧＦとして0.05mg〜
500mg、好ましくは１mg〜100mgであり、これを１日１回
ないし数回に分けて投与するのが適当である。
【００１５】
【発明の効果】本発明において、有効成分であるＨＧＦ
は、血管内皮細胞の増殖を促進する作用を有すると共
に、血管平滑筋細胞の増殖を促進せず、更には修復され
た血管内皮細胞を介して血管平滑筋細胞の異常な増殖を
抑える作用をも有している。従って、本発明の治療剤
は、前述した動脈障害、特に血管平滑筋細胞の増殖を主
体とする障害に起因する各種疾患の治療・予防に有用で
ある。更に、ＨＧＦは、障害を受けている組織にのみ作
用するので、副作用の少ない薬剤を得ることができると
いう効果を奏する。また、本発明において、有効成分で
あるＨＧＦは高血糖による血管平滑筋細胞の増殖に影響
を与えず、高血糖による血管内皮細胞の障害を抑制する
作用を有すると共に、更には修復された血管内皮細胞を
介して血管平滑筋の異常な増殖を抑える作用をも有して
いる。従って、本発明の治療剤は、前述した糖尿病性合
併症、糖尿病や高血糖に伴う血管障害、動脈疾患などの
治療・予防に有用である。
は、血管内皮細胞の増殖を促進する作用を有すると共
に、血管平滑筋細胞の増殖を促進せず、更には修復され
た血管内皮細胞を介して血管平滑筋細胞の異常な増殖を
抑える作用をも有している。従って、本発明の治療剤
は、前述した動脈障害、特に血管平滑筋細胞の増殖を主
体とする障害に起因する各種疾患の治療・予防に有用で
ある。更に、ＨＧＦは、障害を受けている組織にのみ作
用するので、副作用の少ない薬剤を得ることができると
いう効果を奏する。また、本発明において、有効成分で
あるＨＧＦは高血糖による血管平滑筋細胞の増殖に影響
を与えず、高血糖による血管内皮細胞の障害を抑制する
作用を有すると共に、更には修復された血管内皮細胞を
介して血管平滑筋の異常な増殖を抑える作用をも有して
いる。従って、本発明の治療剤は、前述した糖尿病性合
併症、糖尿病や高血糖に伴う血管障害、動脈疾患などの
治療・予防に有用である。
【００１６】
【実施例】以下、実験例及び実施例に基づいて本発明を
より詳細に説明するが、本発明はこれらの例に限定され
るものではない。なお、以下の実験で使用した材料及び
方法は以下のとおりである。
より詳細に説明するが、本発明はこれらの例に限定され
るものではない。なお、以下の実験で使用した材料及び
方法は以下のとおりである。
【００１７】実験材料及び方法細胞培養 ラット冠動脈内皮細胞（３−６代継代）は、１０％ウシ
血清、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイ
シン（１００ｍｇ／ｍｌ）を含むＤＭＥＭ培地にて維持
した。３ケ月令ＳＤラットより得た大動脈平滑筋細胞
（６−１０代継代）は、１０％ウシ血清、ペニシリン
（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００ｍｇ
／ｍｌ）を含むWaymouth's培地(Gibco, Grand island,
NY)にて維持した。新生血管内膜平滑筋細胞は、バルー
ンにて傷害したＳＤラットの大動脈より得、同様に維持
した。細胞は、３７℃にて水蒸気に満たされた９５％空
気−５％二酸化炭素の条件下にて培養し、２日に１度培
地の交換を行った。ヒト血管内皮細胞と大動脈平滑筋細
胞はクラボー（株）より取得し、上記と同様に維持し
た。
血清、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイ
シン（１００ｍｇ／ｍｌ）を含むＤＭＥＭ培地にて維持
した。３ケ月令ＳＤラットより得た大動脈平滑筋細胞
（６−１０代継代）は、１０％ウシ血清、ペニシリン
（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００ｍｇ
／ｍｌ）を含むWaymouth's培地(Gibco, Grand island,
NY)にて維持した。新生血管内膜平滑筋細胞は、バルー
ンにて傷害したＳＤラットの大動脈より得、同様に維持
した。細胞は、３７℃にて水蒸気に満たされた９５％空
気−５％二酸化炭素の条件下にて培養し、２日に１度培
地の交換を行った。ヒト血管内皮細胞と大動脈平滑筋細
胞はクラボー（株）より取得し、上記と同様に維持し
た。
【００１８】ＤＮＡ合成の測定法 血管内皮細胞及び血管平滑筋細胞は、９６穴組織培養用
プレート上にまいた。細胞が隙間なく付着した状態にお
いて、血管内皮細胞は０．５％ウシ血清を含むＤＭＥＭ
培地にて４８時間培養しても増殖しなかった。細胞の相
対的なＤＮＡ合成速度は、２４時間の、トリチウムラベ
ル化チミジン（［3Ｈ］ＴｄＲ）の細胞中トリクロロ酢
酸(ＴＣＡ)沈殿物質中への取り込みを測定することで評
価した。ＨＧＦ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）或いは
ビークル(増殖因子を含まないコントロール培地)は、［
3Ｈ］ＴｄＲを加える１２時間前に添加した。ＴｄＲを
添加して２４時間後に細胞を冷ＰＢＳ(−)にて２回、冷
１０％ＴＣＡにて２回洗浄した後、４℃にて１０％(wt/
vol)ＴＣＡで３０分間処理した。次ぎに細胞をエタノー
ル(９５％)にて軽く洗浄後、０．２５規定水酸化ナトリ
ウム溶液に４℃で、３時間処理して溶かし込み、溶液を
中和した。ＴＣＡ沈殿物質中に取り込まれたラジオアイ
ソトープ活性は、液体シンチレーションカウンターにて
測定した。血管平滑筋細胞についてのＤＮＡ合成速度に
ついても同様に試験した。血管平滑筋細胞は、無血清培
地にて、４８時間で増殖は停止した。この時点でヒトＨ
ＧＦ、ＦＧＦ、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）、
インターロイキン６（ＩＬ−６）、ウシ血清（５％）又
はビークルを加えて１２時間培養し、［3Ｈ］ＴｄＲを
添加して２４時間後に細胞を回収した。
プレート上にまいた。細胞が隙間なく付着した状態にお
いて、血管内皮細胞は０．５％ウシ血清を含むＤＭＥＭ
培地にて４８時間培養しても増殖しなかった。細胞の相
対的なＤＮＡ合成速度は、２４時間の、トリチウムラベ
ル化チミジン（［3Ｈ］ＴｄＲ）の細胞中トリクロロ酢
酸(ＴＣＡ)沈殿物質中への取り込みを測定することで評
価した。ＨＧＦ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）或いは
ビークル(増殖因子を含まないコントロール培地)は、［
3Ｈ］ＴｄＲを加える１２時間前に添加した。ＴｄＲを
添加して２４時間後に細胞を冷ＰＢＳ(−)にて２回、冷
１０％ＴＣＡにて２回洗浄した後、４℃にて１０％(wt/
vol)ＴＣＡで３０分間処理した。次ぎに細胞をエタノー
ル(９５％)にて軽く洗浄後、０．２５規定水酸化ナトリ
ウム溶液に４℃で、３時間処理して溶かし込み、溶液を
中和した。ＴＣＡ沈殿物質中に取り込まれたラジオアイ
ソトープ活性は、液体シンチレーションカウンターにて
測定した。血管平滑筋細胞についてのＤＮＡ合成速度に
ついても同様に試験した。血管平滑筋細胞は、無血清培
地にて、４８時間で増殖は停止した。この時点でヒトＨ
ＧＦ、ＦＧＦ、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）、
インターロイキン６（ＩＬ−６）、ウシ血清（５％）又
はビークルを加えて１２時間培養し、［3Ｈ］ＴｄＲを
添加して２４時間後に細胞を回収した。
【００１９】共培養実験 血管内皮細胞を細胞培養用インサート(コースター社、
孔径０．４５μｍ)にまき、１０％ウシ血清を加えたＤ
ＭＥＭ培地にて増殖させた。新たに再生された血管内膜
平滑筋細胞又は血管平滑筋細胞は、６穴プレートにま
き、５％ウシ血清を加えたWaymouth's培地にて維持し
た。細胞が隙間なく増殖した状態で、内皮細胞を含有し
たインサートを、増殖停止状態の平滑筋細胞を入れたウ
ェル中に入れた。内皮細胞と平滑筋細胞は、無血清のWa
ymouth's培地中にて２４時間共培養し、［3Ｈ］ＴｄＲ
を加えてさらに１２時間培養を続けた。相対的なＤＮＡ
合成速度は［3Ｈ］ＴｄＲのＴＣＡ沈殿物質中への取り
込み量の測定によって評価した。
孔径０．４５μｍ)にまき、１０％ウシ血清を加えたＤ
ＭＥＭ培地にて増殖させた。新たに再生された血管内膜
平滑筋細胞又は血管平滑筋細胞は、６穴プレートにま
き、５％ウシ血清を加えたWaymouth's培地にて維持し
た。細胞が隙間なく増殖した状態で、内皮細胞を含有し
たインサートを、増殖停止状態の平滑筋細胞を入れたウ
ェル中に入れた。内皮細胞と平滑筋細胞は、無血清のWa
ymouth's培地中にて２４時間共培養し、［3Ｈ］ＴｄＲ
を加えてさらに１２時間培養を続けた。相対的なＤＮＡ
合成速度は［3Ｈ］ＴｄＲのＴＣＡ沈殿物質中への取り
込み量の測定によって評価した。
【００２０】逆転写（ＲＴ）−ＰＣＲ 血清刺激下隙間なく増殖した状態で、ラット冠動脈血管
内皮細胞、ヒト大動脈血管内皮細胞、ラット平滑筋細
胞、ラット新生内膜平滑筋細胞、そしてヒト大動脈血管
平滑筋細胞よりＲＮＡをＲＮＡゾル(Tel-Test Inc, Tex
as)を用いて抽出した。ＨＧＦ及びｃ−ｍｅｔ（ＨＧＦ
レセプター）メッセンジャー（ｍ）ＲＮＡのレベルは、
ＲＴ−ＰＣＲ法(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90, 847
4-8478, 1993)にて測定した。なお、プライマーとして
は下記の配列のものを使用した。 ＨＧＦ： ５’側プライマー：5'-ＡＴＧＣＴＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴ-3' ３’側プライマー：5'-ＧＣＣＴＧＧＣＡＡＧＣＴＴＣＡＴＴＡ-3' ｃ−ｍｅｔ： ５’側プライマー：5'-ＣＡＧＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＡＡＴＧＧＧＣＡＡＴ-3' ３’側プライマー：5'-ＡＡＴＧＣＣＣＴＣＴＴＣＣＴＡＴＧＡＣＴＴＣ-3' 増幅したＤＮＡは２％アガロース電気泳動にかけ、エチ
ジウムブロマイドにて染色した。
内皮細胞、ヒト大動脈血管内皮細胞、ラット平滑筋細
胞、ラット新生内膜平滑筋細胞、そしてヒト大動脈血管
平滑筋細胞よりＲＮＡをＲＮＡゾル(Tel-Test Inc, Tex
as)を用いて抽出した。ＨＧＦ及びｃ−ｍｅｔ（ＨＧＦ
レセプター）メッセンジャー（ｍ）ＲＮＡのレベルは、
ＲＴ−ＰＣＲ法(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90, 847
4-8478, 1993)にて測定した。なお、プライマーとして
は下記の配列のものを使用した。 ＨＧＦ： ５’側プライマー：5'-ＡＴＧＣＴＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴ-3' ３’側プライマー：5'-ＧＣＣＴＧＧＣＡＡＧＣＴＴＣＡＴＴＡ-3' ｃ−ｍｅｔ： ５’側プライマー：5'-ＣＡＧＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＡＡＴＧＧＧＣＡＡＴ-3' ３’側プライマー：5'-ＡＡＴＧＣＣＣＴＣＴＴＣＣＴＡＴＧＡＣＴＴＣ-3' 増幅したＤＮＡは２％アガロース電気泳動にかけ、エチ
ジウムブロマイドにて染色した。
【００２１】材料 basic ＦＧＦ（ｂＦＧＦ）、ＩＬ−１α（インターロキ
ン−１α）及びＩＬ−６（インターロイキン−６）はＲ
＆Ｄ社より入手し、ＨＧＦは組換ヒトＨＧＦを用いた。
ベラプロストナトリウム（プロスタグランジンＩ2製
剤：ＴＲＫと略す）は、科研製薬から、プロスタグラン
ジンＥ1（ＰＧＥ1）及びプロスタグランジンＥ2（ＰＧ
Ｅ2）は、Paesel and Lorei社から入手した。生存細胞数の測定法 生存細胞数の測定は、ＷＳＴ−細胞数測定キット（ワコ
ー社製）を用いて、４９０ｎｍの吸光度を測定すること
により求めた。ＨＧＦの測定法 培養上清中のＨＧＦ濃度は、抗ＨＧＦモノクローナル抗
体を使用したELISAのキット（特殊免疫研究所製）によ
り測定した。統計解析 すべての値は、平均値±標準誤差にて現した。すべての
実験は最低３回繰り返した。多重比較における有意差検
定には、ダンカンの検定を用いた。危険率５％以下を統
計上有意と考えた。
ン−１α）及びＩＬ−６（インターロイキン−６）はＲ
＆Ｄ社より入手し、ＨＧＦは組換ヒトＨＧＦを用いた。
ベラプロストナトリウム（プロスタグランジンＩ2製
剤：ＴＲＫと略す）は、科研製薬から、プロスタグラン
ジンＥ1（ＰＧＥ1）及びプロスタグランジンＥ2（ＰＧ
Ｅ2）は、Paesel and Lorei社から入手した。生存細胞数の測定法 生存細胞数の測定は、ＷＳＴ−細胞数測定キット（ワコ
ー社製）を用いて、４９０ｎｍの吸光度を測定すること
により求めた。ＨＧＦの測定法 培養上清中のＨＧＦ濃度は、抗ＨＧＦモノクローナル抗
体を使用したELISAのキット（特殊免疫研究所製）によ
り測定した。統計解析 すべての値は、平均値±標準誤差にて現した。すべての
実験は最低３回繰り返した。多重比較における有意差検
定には、ダンカンの検定を用いた。危険率５％以下を統
計上有意と考えた。
【００２２】試験例１血管平滑筋細胞の増殖に対する血管内皮細胞の効果 ラット大動脈血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）の増殖に対す
るラット冠動脈血管内皮細胞（ＥＣ）の効果を、ＥＣを
ＶＳＭＣに添加する共培養法により［3Ｈ］ＴｄＲ取り
込み量で試験した。その結果を図１に示す。図中、ＥＣ
（−）はＥＣなしを、ＥＣ（＋）はＥＣ有りを示す（以
下、同様）。１群８ウェルで実験を行った。図１に示さ
れるように、ＶＳＭＣのＤＮＡ合成が有意に抑制されて
おり、ＥＣはＶＳＭＣの増殖を抑制していることが認め
られた。
るラット冠動脈血管内皮細胞（ＥＣ）の効果を、ＥＣを
ＶＳＭＣに添加する共培養法により［3Ｈ］ＴｄＲ取り
込み量で試験した。その結果を図１に示す。図中、ＥＣ
（−）はＥＣなしを、ＥＣ（＋）はＥＣ有りを示す（以
下、同様）。１群８ウェルで実験を行った。図１に示さ
れるように、ＶＳＭＣのＤＮＡ合成が有意に抑制されて
おり、ＥＣはＶＳＭＣの増殖を抑制していることが認め
られた。
【００２３】試験例２新生内膜平滑筋細胞（ｎｉＶＳＭＣ）の増殖に対するＥ
Ｃの効果 上記のように、ＥＣにＶＳＭＣに対する増殖抑制作用が
認められたことから、この点を確認するため、ｎｉＶＳ
ＭＣの増殖に対するＥＣの効果を検討した。バルーンに
て傷害を受けたラット大動脈より得られたｎｉＶＳＭＣ
はオートクリン−パラクリン機構により種々の成長因子
を産生していることが知られている。実験は、ＥＣをｎ
ｉＶＳＭＣに添加する共培養法により［3Ｈ］ＴｄＲ取
り込み量で試験した。その結果を図２に示す（１群８ウ
ェル）。図２に示されるように、試験例１と同様に、Ｅ
ＣにはｎｉＶＳＭＣに対する増殖抑制作用が認められ
た。
Ｃの効果 上記のように、ＥＣにＶＳＭＣに対する増殖抑制作用が
認められたことから、この点を確認するため、ｎｉＶＳ
ＭＣの増殖に対するＥＣの効果を検討した。バルーンに
て傷害を受けたラット大動脈より得られたｎｉＶＳＭＣ
はオートクリン−パラクリン機構により種々の成長因子
を産生していることが知られている。実験は、ＥＣをｎ
ｉＶＳＭＣに添加する共培養法により［3Ｈ］ＴｄＲ取
り込み量で試験した。その結果を図２に示す（１群８ウ
ェル）。図２に示されるように、試験例１と同様に、Ｅ
ＣにはｎｉＶＳＭＣに対する増殖抑制作用が認められ
た。
【００２４】試験例３ＥＣの増殖に対するＨＧＦの効果 ＥＣの増殖に対するＨＧＦの効果を［3Ｈ］ＴｄＲ取り
込み量で試験した。なお、比較としてｂＦＧＦ及び牛胎
児血清（ＦＢＳ）についても試験した。ＨＧＦについて
はＥＣ培養系に各濃度のＨＧＦを添加（１群８ウェ
ル）、ｂＦＧＦについてはＥＣ培養系にｂＦＧＦ（１０
ｎｇ／ｍｌ）を添加（１群８ウェル）、ＦＢＳについて
はＥＣ培養系に２０％ＦＢＳを添加（１群８ウェル）し
た。その結果を図３に示す。図において、＊＊はＰ＜
０．０１（ビークル群に対する比較結果、特に明示のな
い限り以下同様）を示す。図３に示されるように、ＨＧ
Ｆは１ｎｇ／ｍｌでは効果がなかったが、１０ｎｇ／ｍ
ｌでは［3Ｈ］ＴｄＲ取り込み量が増加しており、ＥＣ
のＤＮＡ合成を促進し、ＥＣの増殖を促進することが明
らかとなった。また、ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）もＤ
ＮＡ合成を促進した。なお、ＨＧＦ及びｂＦＧＦの間に
は有意差はなかった。また、ＥＣのＲＮＡ合成に対する
ＨＧＦの効果を、トリチウム化ウリジン取り込み量で試
験した。その結果を、図４に示す。図において、＊＊は
Ｐ＜０．０１を示す。図４に示されるように、ＨＧＦ及
びｂＦＧＦはＥＣのＲＮＡ合成をも促進することが明ら
かとなった。
込み量で試験した。なお、比較としてｂＦＧＦ及び牛胎
児血清（ＦＢＳ）についても試験した。ＨＧＦについて
はＥＣ培養系に各濃度のＨＧＦを添加（１群８ウェ
ル）、ｂＦＧＦについてはＥＣ培養系にｂＦＧＦ（１０
ｎｇ／ｍｌ）を添加（１群８ウェル）、ＦＢＳについて
はＥＣ培養系に２０％ＦＢＳを添加（１群８ウェル）し
た。その結果を図３に示す。図において、＊＊はＰ＜
０．０１（ビークル群に対する比較結果、特に明示のな
い限り以下同様）を示す。図３に示されるように、ＨＧ
Ｆは１ｎｇ／ｍｌでは効果がなかったが、１０ｎｇ／ｍ
ｌでは［3Ｈ］ＴｄＲ取り込み量が増加しており、ＥＣ
のＤＮＡ合成を促進し、ＥＣの増殖を促進することが明
らかとなった。また、ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）もＤ
ＮＡ合成を促進した。なお、ＨＧＦ及びｂＦＧＦの間に
は有意差はなかった。また、ＥＣのＲＮＡ合成に対する
ＨＧＦの効果を、トリチウム化ウリジン取り込み量で試
験した。その結果を、図４に示す。図において、＊＊は
Ｐ＜０．０１を示す。図４に示されるように、ＨＧＦ及
びｂＦＧＦはＥＣのＲＮＡ合成をも促進することが明ら
かとなった。
【００２５】試験例４ＥＣの増殖に対するＨＧＦとｂＦＧＦとの相加効果 上記のように、ＨＧＦ及びｂＦＧＦは共にＥＣの増殖を
促進することが判明したので、ＥＣのＤＮＡ合成に対す
るＨＧＦとｂＦＧＦとの相加効果を［3Ｈ］ＴｄＲ取り
込み量で試験した（１群８ウェル）。その結果を図５に
示す。図中、＊はＰ＜０．０１を示す。図５に示される
ように、ＨＧＦとｂＦＧＦとの間で相加効果が認めら
れ、この値は２０％ＦＢＳに相当するものであった。ま
た、ＥＣのＲＮＡ合成及び蛋白合成に対するＨＧＦとｂ
ＦＧＦとの相加効果を、それぞれトリチウム化ウリジン
取り込み量及びトリチウム化ロイシン取り込み量で試験
した（１群８ウェル）。試験は、トリチウム化チミジン
と同様にＴＣＡ法により行った。その結果をそれぞれ図
６及び図７に示す。図中、＊はＰ＜０．０１を示す。図
６及び図７に示されるように、ＥＣのＲＮＡ合成及び蛋
白合成に対してもＨＧＦとｂＦＧＦとの間で相加効果が
認められた。
促進することが判明したので、ＥＣのＤＮＡ合成に対す
るＨＧＦとｂＦＧＦとの相加効果を［3Ｈ］ＴｄＲ取り
込み量で試験した（１群８ウェル）。その結果を図５に
示す。図中、＊はＰ＜０．０１を示す。図５に示される
ように、ＨＧＦとｂＦＧＦとの間で相加効果が認めら
れ、この値は２０％ＦＢＳに相当するものであった。ま
た、ＥＣのＲＮＡ合成及び蛋白合成に対するＨＧＦとｂ
ＦＧＦとの相加効果を、それぞれトリチウム化ウリジン
取り込み量及びトリチウム化ロイシン取り込み量で試験
した（１群８ウェル）。試験は、トリチウム化チミジン
と同様にＴＣＡ法により行った。その結果をそれぞれ図
６及び図７に示す。図中、＊はＰ＜０．０１を示す。図
６及び図７に示されるように、ＥＣのＲＮＡ合成及び蛋
白合成に対してもＨＧＦとｂＦＧＦとの間で相加効果が
認められた。
【００２６】試験例５ＥＣの増殖に対するＨＧＦと他のサイトカインの相加効
果 ＥＣの増殖に対するＨＧＦと他のサイトカイン（ＩＬ−
１α及びＩＬ−６）との相加効果を［3Ｈ］ＴｄＲ取り
込み量で試験した（１群８ウェル）。その結果を図８に
示す。図中、＊はＰ＜０．０１（対ＨＧＦ／ビークル）
を示す。図８に示されるように、ＩＬ−１α及びＩＬ−
６はそれぞれＥＣのＤＮＡ合成を促進することが明らか
になったが、これらとＨＧＦとの間では相加効果は認め
られなかった。
果 ＥＣの増殖に対するＨＧＦと他のサイトカイン（ＩＬ−
１α及びＩＬ−６）との相加効果を［3Ｈ］ＴｄＲ取り
込み量で試験した（１群８ウェル）。その結果を図８に
示す。図中、＊はＰ＜０．０１（対ＨＧＦ／ビークル）
を示す。図８に示されるように、ＩＬ−１α及びＩＬ−
６はそれぞれＥＣのＤＮＡ合成を促進することが明らか
になったが、これらとＨＧＦとの間では相加効果は認め
られなかった。
【００２７】試験例６ＶＳＭＣの増殖に対するＨＧＦの効果 ＶＳＭＣの増殖に対するＨＧＦの効果を［3Ｈ］ＴｄＲ
取り込み量で試験した。なお、比較としてｂＦＧＦにつ
いても試験した。ＨＧＦ及びｂＦＧＦはそれぞれＶＳＭ
Ｃ培養系に各濃度（１，１０及び１００ｎｇ／ｍｌ）を
添加（１群８ウェル）した。その結果を図９に示す。図
中、＊＊はＰ＜０．０１を示す。図９に示されるよう
に、ｂＦＧＦは［3Ｈ］ＴｄＲ取り込み量が増加してお
り、ＶＳＭＣのＤＮＡ合成を促進することが示された。
一方、ＨＧＦにおいては、［3Ｈ］ＴｄＲ取り込み量に
変化がなく、ＶＳＭＣの増殖作用は認められなかった。
また、ＶＳＭＣに変えて、ｎｉＶＳＭＣについても同様
な試験を行った。その結果を図１０に示す。図中、＊＊
はＰ＜０．０１を示す。図１０に示されるように、ｂＦ
ＧＦはｎｉＶＳＭＣの増殖を促進し、一方ＨＧＦはｎｉ
ＶＳＭＣの増殖を促進することはなかった。更に、ｎｉ
ＶＳＭＣのＲＮＡ合成に対するＨＧＦの効果をトリチウ
ム化ウリジンの取り込み量で試験した。その結果を図１
１に示す。図中、＊＊はＰ＜０．０１を示す。図１１に
示されるように、ＨＧＦはｎｉＶＳＭＣのＲＮＡ合成を
促進することはなかった。以上の結果及び試験例３の結
果からして、ｂＦＧＦはＥＣ及びＶＳＭＣの増殖を促進
する作用を有する。それに対し、ＨＧＦはＥＣの増殖を
促進するが、ＶＳＭＣ（及びｎｉＶＳＭＣ）の増殖を促
進する作用はないことが明らかになった。
取り込み量で試験した。なお、比較としてｂＦＧＦにつ
いても試験した。ＨＧＦ及びｂＦＧＦはそれぞれＶＳＭ
Ｃ培養系に各濃度（１，１０及び１００ｎｇ／ｍｌ）を
添加（１群８ウェル）した。その結果を図９に示す。図
中、＊＊はＰ＜０．０１を示す。図９に示されるよう
に、ｂＦＧＦは［3Ｈ］ＴｄＲ取り込み量が増加してお
り、ＶＳＭＣのＤＮＡ合成を促進することが示された。
一方、ＨＧＦにおいては、［3Ｈ］ＴｄＲ取り込み量に
変化がなく、ＶＳＭＣの増殖作用は認められなかった。
また、ＶＳＭＣに変えて、ｎｉＶＳＭＣについても同様
な試験を行った。その結果を図１０に示す。図中、＊＊
はＰ＜０．０１を示す。図１０に示されるように、ｂＦ
ＧＦはｎｉＶＳＭＣの増殖を促進し、一方ＨＧＦはｎｉ
ＶＳＭＣの増殖を促進することはなかった。更に、ｎｉ
ＶＳＭＣのＲＮＡ合成に対するＨＧＦの効果をトリチウ
ム化ウリジンの取り込み量で試験した。その結果を図１
１に示す。図中、＊＊はＰ＜０．０１を示す。図１１に
示されるように、ＨＧＦはｎｉＶＳＭＣのＲＮＡ合成を
促進することはなかった。以上の結果及び試験例３の結
果からして、ｂＦＧＦはＥＣ及びＶＳＭＣの増殖を促進
する作用を有する。それに対し、ＨＧＦはＥＣの増殖を
促進するが、ＶＳＭＣ（及びｎｉＶＳＭＣ）の増殖を促
進する作用はないことが明らかになった。
【００２８】試験例７ヒト大動脈血管内皮細胞の増殖に対するＨＧＦの効果 ヒト大動脈血管内皮細胞の増殖に対するＨＧＦの効果を
［3Ｈ］ＴｄＲ取り込み量により試験した。なお、比較
としてｂＦＧＦ及びＦＢＳについても試験した。ＨＧＦ
についてはヒト大動脈血管内皮細胞培養系に各濃度のＨ
ＧＦを添加（１群８ウェル）、ｂＦＧＦについてはヒト
大動脈血管内皮細胞培養系にｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍ
ｌ）を添加（１群８ウェル）、ＦＢＳについてはヒト大
動脈血管内皮細胞培養系に２０％ＦＢＳを添加（１群８
ウェル）した。その結果を図１２に示す。なお、図中、
＊はＰ＜０．０５、＊＊はＰ＜０．０１を示す。図１２
に示されるように、ＨＧＦは投与量依存的にヒト大動脈
血管内皮細胞の増殖を促進した。ｂＦＧＦもヒト大動脈
血管内皮細胞の増殖を促進したが、その程度はＨＧＦよ
りも低いものであった。
［3Ｈ］ＴｄＲ取り込み量により試験した。なお、比較
としてｂＦＧＦ及びＦＢＳについても試験した。ＨＧＦ
についてはヒト大動脈血管内皮細胞培養系に各濃度のＨ
ＧＦを添加（１群８ウェル）、ｂＦＧＦについてはヒト
大動脈血管内皮細胞培養系にｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍ
ｌ）を添加（１群８ウェル）、ＦＢＳについてはヒト大
動脈血管内皮細胞培養系に２０％ＦＢＳを添加（１群８
ウェル）した。その結果を図１２に示す。なお、図中、
＊はＰ＜０．０５、＊＊はＰ＜０．０１を示す。図１２
に示されるように、ＨＧＦは投与量依存的にヒト大動脈
血管内皮細胞の増殖を促進した。ｂＦＧＦもヒト大動脈
血管内皮細胞の増殖を促進したが、その程度はＨＧＦよ
りも低いものであった。
【００２９】試験例８ＲＴ−ＰＣＲ法によるＨＧＦ ｍＲＮＡ及びｃ−ｍｅｔ
ｍＲＮＡレベルの測定 ラット冠動脈血管内皮細胞（ＥＣ）、ヒト大動脈血管内
皮細胞、ラット平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）、ラット新生内
膜平滑筋細胞（ｎｉＶＳＭＣ）及びヒト大動脈血管平滑
筋細胞におけるＨＧＦ ｍＲＮＡ及びｃ−ｍｅｔ ｍＲＮ
Ａの発現をＲＴ−ＰＣＲ法で測定した結果を、図１３
（ＨＧＦ ｍＲＮＡ）及び図１４（ｃ−ｍｅｔ ｍＲＮ
Ａ）に示す。図１３に示されるように、ＨＧＦ ｍＲＮ
Ａは、内皮細胞、平滑筋細胞及び新生内膜平滑筋細胞に
発現が認められた。また、図１４に示されるように、ｃ
−ｍｅｔ ｍＲＮＡについても、内皮細胞、平滑筋細胞
及び新生内膜平滑筋細胞に発現が認められた。
ｍＲＮＡレベルの測定 ラット冠動脈血管内皮細胞（ＥＣ）、ヒト大動脈血管内
皮細胞、ラット平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）、ラット新生内
膜平滑筋細胞（ｎｉＶＳＭＣ）及びヒト大動脈血管平滑
筋細胞におけるＨＧＦ ｍＲＮＡ及びｃ−ｍｅｔ ｍＲＮ
Ａの発現をＲＴ−ＰＣＲ法で測定した結果を、図１３
（ＨＧＦ ｍＲＮＡ）及び図１４（ｃ−ｍｅｔ ｍＲＮ
Ａ）に示す。図１３に示されるように、ＨＧＦ ｍＲＮ
Ａは、内皮細胞、平滑筋細胞及び新生内膜平滑筋細胞に
発現が認められた。また、図１４に示されるように、ｃ
−ｍｅｔ ｍＲＮＡについても、内皮細胞、平滑筋細胞
及び新生内膜平滑筋細胞に発現が認められた。
【００３０】試験例９ヒト大動脈血管内皮細胞に対する高グルコースの影響 高グルコースのヒト大動脈血管内皮細胞に対する傷害を
検討する為に、ヒト大動脈血管内皮細胞を５、５５、１
０５ｍＭのグルコース濃度下に培養した後の生存細胞数
を、ＷＳＴを用いた生存細胞数の測定で試験した。その
結果を図１５に示す。１群８ウェルで実験を行った。図
１５に示されるように、正常な血糖値５ｍＭと比較し
て、５５、１０５ｍＭグルコースにより濃度に依存し
て、生存細胞数が有意に減少した。図において、＊＊は
Ｐ＜０．０１を示す。１０５ｍＭグルコースにおける生
存細胞数は、５５ｍＭグルコースよりもさらに有意に
（図において、＃＃はＰ＜０．０１を示す）減少した。
培養液中の高濃度のグルコースは、濃度依存的にヒト大
動脈血管内皮細胞を傷害し、その生存細胞数を減少させ
た。
検討する為に、ヒト大動脈血管内皮細胞を５、５５、１
０５ｍＭのグルコース濃度下に培養した後の生存細胞数
を、ＷＳＴを用いた生存細胞数の測定で試験した。その
結果を図１５に示す。１群８ウェルで実験を行った。図
１５に示されるように、正常な血糖値５ｍＭと比較し
て、５５、１０５ｍＭグルコースにより濃度に依存し
て、生存細胞数が有意に減少した。図において、＊＊は
Ｐ＜０．０１を示す。１０５ｍＭグルコースにおける生
存細胞数は、５５ｍＭグルコースよりもさらに有意に
（図において、＃＃はＰ＜０．０１を示す）減少した。
培養液中の高濃度のグルコースは、濃度依存的にヒト大
動脈血管内皮細胞を傷害し、その生存細胞数を減少させ
た。
【００３１】試験例１０ヒト大動脈血管内皮細胞の高グルコースによる傷害に対
するＨＧＦの効果 試験例９に記載のようにヒト大動脈血管内皮細胞の高グ
ルコースによる細胞傷害が認められたことから、この傷
害に対するＨＧＦの効果を検討するため、ヒト大動脈血
管内皮細胞の１０５ｍＭグルコース存在下における培養
において、１０、１００ｎｇ／ｍｌのＨＧＦを添加し、
ＷＳＴを用いてヒト大動脈血管内皮細胞の生存細胞数の
測定を行った。その結果を図１６に示す。１群８ウェル
で実験を行った。図１６に示されるように、対照群と比
べ１０５ｍＭグルコースによりヒト大動脈血管内皮細胞
の細胞数の有意な減少が再現された（図において、＊＊
はＰ＜０．０１を示す）。さらに、このヒト大動脈血管
内皮細胞細胞の減少は、１０、１００ｎｇ／ｍｌＨＧＦ
の添加により有意に抑制された（図において、＃はＰ＜
０．０５を示す）。１０５ｍＭグルコースに１０、１０
０ｎｇ／ｍｌＨＧＦを添加した群は、正常グルコース濃
度の対照群と差は無かった。すなわち、１０、１００ｎ
ｇ／ｍｌのＨＧＦにより、高グルコースによるヒト大動
脈血管内皮細胞の傷害が有意に抑制され、ほぼ正常な生
存細胞数まで回復した。以上の結果より、ＨＧＦは高グ
ルコースによるヒト大動脈血管内皮細胞の傷害を抑制さ
せることが明らかになった。
するＨＧＦの効果 試験例９に記載のようにヒト大動脈血管内皮細胞の高グ
ルコースによる細胞傷害が認められたことから、この傷
害に対するＨＧＦの効果を検討するため、ヒト大動脈血
管内皮細胞の１０５ｍＭグルコース存在下における培養
において、１０、１００ｎｇ／ｍｌのＨＧＦを添加し、
ＷＳＴを用いてヒト大動脈血管内皮細胞の生存細胞数の
測定を行った。その結果を図１６に示す。１群８ウェル
で実験を行った。図１６に示されるように、対照群と比
べ１０５ｍＭグルコースによりヒト大動脈血管内皮細胞
の細胞数の有意な減少が再現された（図において、＊＊
はＰ＜０．０１を示す）。さらに、このヒト大動脈血管
内皮細胞細胞の減少は、１０、１００ｎｇ／ｍｌＨＧＦ
の添加により有意に抑制された（図において、＃はＰ＜
０．０５を示す）。１０５ｍＭグルコースに１０、１０
０ｎｇ／ｍｌＨＧＦを添加した群は、正常グルコース濃
度の対照群と差は無かった。すなわち、１０、１００ｎ
ｇ／ｍｌのＨＧＦにより、高グルコースによるヒト大動
脈血管内皮細胞の傷害が有意に抑制され、ほぼ正常な生
存細胞数まで回復した。以上の結果より、ＨＧＦは高グ
ルコースによるヒト大動脈血管内皮細胞の傷害を抑制さ
せることが明らかになった。
【００３２】試験例１１ヒト大動脈血管内皮細胞からのＨＧＦの分泌及びそれに
対する高グルコース、ＴＲＫの影響 試験例１０に記載のように、ＨＧＦは高グルコースによ
るヒト大動脈血管内皮細胞の傷害を抑制したことから、
５、５５、１０５ｍＭのグルコース存在下のヒト大動脈
血管内皮細胞の培養上清中のＨＧＦ量をＥＬＩＳＡ法に
より測定した。その結果を図１７に示す。１群８ウェル
で実験を行った。図１７に示されるように、ヒト大動脈
血管内皮細胞の培養上清中にはＨＧＦが検出された。５
ｍＭグルコース存在下と比較して、５５、１０５ｍＭグ
ルコース存在下に培養したヒト大動脈血管内皮細胞の培
養上清中のＨＧＦ濃度は、濃度依存的に有意に減少し
た。ヒト大動脈血管内皮細胞により確かにＨＧＦが分泌
されており、高グルコースにより細胞数が減少するとと
もに、分泌されるＨＧＦ量も減少することが分かった。
さらに、５ｍＭのグルコース存在下において、１０
-6Ｍ、１０-7ＭのＴＲＫを添加したヒト大動脈血管内皮
細胞の培養上清中のＨＧＦ量をＥＬＩＳＡ法により測定
し、無添加の時と比較した。ＴＲＫは、ヒト大動脈血管
内皮細胞の培養上清中のＨＧＦ濃度を有意に増加させ
た。
対する高グルコース、ＴＲＫの影響 試験例１０に記載のように、ＨＧＦは高グルコースによ
るヒト大動脈血管内皮細胞の傷害を抑制したことから、
５、５５、１０５ｍＭのグルコース存在下のヒト大動脈
血管内皮細胞の培養上清中のＨＧＦ量をＥＬＩＳＡ法に
より測定した。その結果を図１７に示す。１群８ウェル
で実験を行った。図１７に示されるように、ヒト大動脈
血管内皮細胞の培養上清中にはＨＧＦが検出された。５
ｍＭグルコース存在下と比較して、５５、１０５ｍＭグ
ルコース存在下に培養したヒト大動脈血管内皮細胞の培
養上清中のＨＧＦ濃度は、濃度依存的に有意に減少し
た。ヒト大動脈血管内皮細胞により確かにＨＧＦが分泌
されており、高グルコースにより細胞数が減少するとと
もに、分泌されるＨＧＦ量も減少することが分かった。
さらに、５ｍＭのグルコース存在下において、１０
-6Ｍ、１０-7ＭのＴＲＫを添加したヒト大動脈血管内皮
細胞の培養上清中のＨＧＦ量をＥＬＩＳＡ法により測定
し、無添加の時と比較した。ＴＲＫは、ヒト大動脈血管
内皮細胞の培養上清中のＨＧＦ濃度を有意に増加させ
た。
【００３３】試験例１２ヒト大動脈血管平滑筋細胞に対する高グルコースの影響 ヒト大動脈血管平滑筋細胞に対する高グルコースの影響
を検討する為に、ヒト大動脈血管平滑筋細胞を５、５
５、１０５ｍＭのグルコース濃度下に培養した後の生存
細胞数を、ＷＳＴを用いた生存細胞数の測定で試験し
た。その結果を図１８に示す。１群８ウェルで実験を行
った。図１８に示されるように、５ｍＭグルコース存在
下と比較して、５５、１０５ｍＭグルコース存在下にお
いて、濃度に依存してヒト大動脈血管平滑筋細胞の細胞
数が有意に増加した。１０５ｍＭグルコース存在下にお
けるヒト大動脈血管平滑筋細胞数は、５５ｍＭグルコー
ス存在下よりもさらに有意に増加した。培養液中の高濃
度のグルコースは、濃度依存的にヒト大動脈由来培養血
管平滑筋細胞の生存数を増加させることが分かった。
を検討する為に、ヒト大動脈血管平滑筋細胞を５、５
５、１０５ｍＭのグルコース濃度下に培養した後の生存
細胞数を、ＷＳＴを用いた生存細胞数の測定で試験し
た。その結果を図１８に示す。１群８ウェルで実験を行
った。図１８に示されるように、５ｍＭグルコース存在
下と比較して、５５、１０５ｍＭグルコース存在下にお
いて、濃度に依存してヒト大動脈血管平滑筋細胞の細胞
数が有意に増加した。１０５ｍＭグルコース存在下にお
けるヒト大動脈血管平滑筋細胞数は、５５ｍＭグルコー
ス存在下よりもさらに有意に増加した。培養液中の高濃
度のグルコースは、濃度依存的にヒト大動脈由来培養血
管平滑筋細胞の生存数を増加させることが分かった。
【００３４】試験例１３ラット大動脈血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）に対する高グ
ルコースの影響 ＶＳＭＣに対する高グルコースの影響を検討する為に、
試験例１２と同様にして、ＶＳＭＣを５、５５、１０５
ｍＭのグルコース濃度下に培養した後の生存細胞数を、
ＷＳＴを用いた生存細胞数の測定で試験した。その結果
を図１９に示す。１群８ウェルで実験を行った。図１９
に示されるように、５ｍＭグルコース存在下と比較し
て、５５、１０５ｍＭグルコース存在下において、濃度
に依存してＶＳＭＣの細胞数が有意に増加した。培養液
中の高濃度のグルコースは、ＶＳＭＣの生存数を増加さ
せることが分かった。
ルコースの影響 ＶＳＭＣに対する高グルコースの影響を検討する為に、
試験例１２と同様にして、ＶＳＭＣを５、５５、１０５
ｍＭのグルコース濃度下に培養した後の生存細胞数を、
ＷＳＴを用いた生存細胞数の測定で試験した。その結果
を図１９に示す。１群８ウェルで実験を行った。図１９
に示されるように、５ｍＭグルコース存在下と比較し
て、５５、１０５ｍＭグルコース存在下において、濃度
に依存してＶＳＭＣの細胞数が有意に増加した。培養液
中の高濃度のグルコースは、ＶＳＭＣの生存数を増加さ
せることが分かった。
【００３５】試験例１４ヒト大動脈血管平滑筋細胞からのＨＧＦの分泌に対する
ＴＲＫ、ＰＧＥ1、ＰＧＥ2の影響 正常グルコース濃度（５ｍＭ）におけるヒト大動脈血管
平滑筋細胞の培養上清中のＨＧＦ量をＥＬＩＳＡ法分析
し、これに対するＴＲＫ（１０-7、１０-6Ｍ）、ＰＧＥ
1、ＰＧＥ2（１０-6Ｍ）アナログの影響を検討した。そ
の結果を図２０に示す。１群８ウェルで実験を行った。
図２０に示されるように、ＴＲＫ（１０-7、１０
-6Ｍ）、ＰＧＥ1、ＰＧＥ2（１０-6Ｍ）は５ｍＭグルコ
ース濃度において、ヒト大動脈血管平滑筋細胞の培養上
清中のＨＧＦ濃度をそれぞれ有意に増加させた。ＨＧＦ
の産生を促進することが知られているＴＲＫは、ヒト大
動脈血管平滑筋細胞からのＨＧＦ分泌量を増加させた。
ＴＲＫ、ＰＧＥ1、ＰＧＥ2の影響 正常グルコース濃度（５ｍＭ）におけるヒト大動脈血管
平滑筋細胞の培養上清中のＨＧＦ量をＥＬＩＳＡ法分析
し、これに対するＴＲＫ（１０-7、１０-6Ｍ）、ＰＧＥ
1、ＰＧＥ2（１０-6Ｍ）アナログの影響を検討した。そ
の結果を図２０に示す。１群８ウェルで実験を行った。
図２０に示されるように、ＴＲＫ（１０-7、１０
-6Ｍ）、ＰＧＥ1、ＰＧＥ2（１０-6Ｍ）は５ｍＭグルコ
ース濃度において、ヒト大動脈血管平滑筋細胞の培養上
清中のＨＧＦ濃度をそれぞれ有意に増加させた。ＨＧＦ
の産生を促進することが知られているＴＲＫは、ヒト大
動脈血管平滑筋細胞からのＨＧＦ分泌量を増加させた。
【００３６】試験例１５ヒト大動脈血管平滑筋細胞からのＨＧＦの分泌及びそれ
に対する高グルコース、ＴＲＫの影響 ヒト血管平滑筋細胞の培養上清中のＨＧＦ量を分析し、
高グルコースの影響を検討した。５、５５、１０５ｍＭ
のグルコース存在下のヒト大動脈血管平滑筋細胞の培養
上清中のＨＧＦ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。さら
に、ＴＲＫ（１０-6Ｍ）を添加した時のヒト大動脈血管
平滑筋細胞の培養上清中のＨＧＦ量を測定し、無添加の
時と比較した。その結果を図２１に示す。１群８ウェル
で実験を行った。図２１に示されるように、ヒト大動脈
血管平滑筋細胞の培養上清中にはＨＧＦが検出された。
５ｍＭグルコース存在下と比較して、１０５ｍＭグルコ
ース存在下に培養したヒト大動脈血管平滑筋細胞の培養
上清中のＨＧＦ濃度は、有意に減少した。ヒト大動脈血
管平滑筋細胞よりＨＧＦが分泌されており、高グルコー
スにより細胞数が増加するにも関わらず、分泌されるＨ
ＧＦ量は減少することが分かった。５、５５、１０５ｍ
Ｍのグルコース存在下において、さらに１０-6ＭのＴＲ
Ｋを添加したヒト大動脈血管平滑筋細胞の培養上清中の
ＨＧＦ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。ＴＲＫは５、
５５、１０５ｍＭグルコース濃度において、ＨＧＦ濃度
を有意に増加させた。ＨＧＦの産生を促進することが知
られているＴＲＫは、高グルコースにおいても、ヒト大
動脈血管平滑筋細胞からのＨＧＦ分泌量を増加させた。
に対する高グルコース、ＴＲＫの影響 ヒト血管平滑筋細胞の培養上清中のＨＧＦ量を分析し、
高グルコースの影響を検討した。５、５５、１０５ｍＭ
のグルコース存在下のヒト大動脈血管平滑筋細胞の培養
上清中のＨＧＦ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。さら
に、ＴＲＫ（１０-6Ｍ）を添加した時のヒト大動脈血管
平滑筋細胞の培養上清中のＨＧＦ量を測定し、無添加の
時と比較した。その結果を図２１に示す。１群８ウェル
で実験を行った。図２１に示されるように、ヒト大動脈
血管平滑筋細胞の培養上清中にはＨＧＦが検出された。
５ｍＭグルコース存在下と比較して、１０５ｍＭグルコ
ース存在下に培養したヒト大動脈血管平滑筋細胞の培養
上清中のＨＧＦ濃度は、有意に減少した。ヒト大動脈血
管平滑筋細胞よりＨＧＦが分泌されており、高グルコー
スにより細胞数が増加するにも関わらず、分泌されるＨ
ＧＦ量は減少することが分かった。５、５５、１０５ｍ
Ｍのグルコース存在下において、さらに１０-6ＭのＴＲ
Ｋを添加したヒト大動脈血管平滑筋細胞の培養上清中の
ＨＧＦ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。ＴＲＫは５、
５５、１０５ｍＭグルコース濃度において、ＨＧＦ濃度
を有意に増加させた。ＨＧＦの産生を促進することが知
られているＴＲＫは、高グルコースにおいても、ヒト大
動脈血管平滑筋細胞からのＨＧＦ分泌量を増加させた。
【００３７】試験例１６ヒト大動脈血管平滑筋細胞に対する高グルコースの影響 高グルコースのヒト大動脈血管平滑筋細胞に対する作用
を検討する為に、ヒト大動脈血管平滑筋細胞を５、１０
５ｍＭのグルコース濃度下に培養した後の生存細胞数
を、ＷＳＴを用いた生存細胞数の測定で試験した。その
結果を表１に示す。１群８ウェルで実験を行った。表１
に示されるように、正常な血糖値５ｍＭと比較して、１
０５ｍＭグルコースにより生存細胞数が有意に増加し
た。表１において、＊＊はＰ＜０．０１を示す。培養液
中の高濃度のグルコースは、ヒト大動脈血管平滑筋細胞
の生存細胞数を増加させた。
を検討する為に、ヒト大動脈血管平滑筋細胞を５、１０
５ｍＭのグルコース濃度下に培養した後の生存細胞数
を、ＷＳＴを用いた生存細胞数の測定で試験した。その
結果を表１に示す。１群８ウェルで実験を行った。表１
に示されるように、正常な血糖値５ｍＭと比較して、１
０５ｍＭグルコースにより生存細胞数が有意に増加し
た。表１において、＊＊はＰ＜０．０１を示す。培養液
中の高濃度のグルコースは、ヒト大動脈血管平滑筋細胞
の生存細胞数を増加させた。
【００３８】試験例１７高グルコースによるヒト大動脈血管平滑筋細胞の増殖に
対するＨＧＦの効果 試験例１６に記載のようにヒト大動脈血管平滑筋細胞の
高グルコースによる増殖が認められたことから、これに
対するＨＧＦの効果を検討するため、ヒト大動脈血管平
滑筋細胞の５ｍＭ、１０５ｍＭグルコース存在下におけ
る培養において、１００ｎｇ／ｍｌのＨＧＦを添加し、
ＷＳＴを用いてヒト大動脈血管内皮細胞の生存細胞数の
測定を行った。その結果を表１に示す。１群８ウェルで
実験を行った。表１に示されるように、５ｍＭまたは１
０５ｍＭグルコース存在下において、対照群（ＨＧＦ非
添加群）と比べ１００ｎｇ／ｍｌＨＧＦの添加により、
ヒト大動脈血管内皮細胞数は影響を受けなかった。すな
わち、ＨＧＦは正常グルコース濃度においても、高グル
コース濃度においても、ヒト大動脈血管内皮細胞の増殖
に影響しないことが明らかになった。
対するＨＧＦの効果 試験例１６に記載のようにヒト大動脈血管平滑筋細胞の
高グルコースによる増殖が認められたことから、これに
対するＨＧＦの効果を検討するため、ヒト大動脈血管平
滑筋細胞の５ｍＭ、１０５ｍＭグルコース存在下におけ
る培養において、１００ｎｇ／ｍｌのＨＧＦを添加し、
ＷＳＴを用いてヒト大動脈血管内皮細胞の生存細胞数の
測定を行った。その結果を表１に示す。１群８ウェルで
実験を行った。表１に示されるように、５ｍＭまたは１
０５ｍＭグルコース存在下において、対照群（ＨＧＦ非
添加群）と比べ１００ｎｇ／ｍｌＨＧＦの添加により、
ヒト大動脈血管内皮細胞数は影響を受けなかった。すな
わち、ＨＧＦは正常グルコース濃度においても、高グル
コース濃度においても、ヒト大動脈血管内皮細胞の増殖
に影響しないことが明らかになった。
【００３９】
【表１】
【００４０】実施例１ 生理食塩水１００ｍｌ中にＨＧＦ１ｍｇ、マンニトール
１ｇ及びポリソルベート８０ １０ｍｇを含む溶液を無
菌的に調製し、１ｍｌずつバイアルに分注した後、凍結
乾燥して密封することにより凍結乾燥製剤を得た。
１ｇ及びポリソルベート８０ １０ｍｇを含む溶液を無
菌的に調製し、１ｍｌずつバイアルに分注した後、凍結
乾燥して密封することにより凍結乾燥製剤を得た。
【００４１】実施例２ ０．０２Ｍリン酸緩衝液（０．１５Ｍ ＮａＣｌ及び
０．０１％ポリソルベート８０含有、ｐＨ７．４）１０
０ｍｌ中にＨＧＦ１ｍｇとヒト血清アルブミン１００ｍ
ｇを含む水溶液を無菌的に調製し、１ｍｌずつバイアル
に分注した後、凍結乾燥して密封することにより凍結乾
燥製剤を得た。
０．０１％ポリソルベート８０含有、ｐＨ７．４）１０
０ｍｌ中にＨＧＦ１ｍｇとヒト血清アルブミン１００ｍ
ｇを含む水溶液を無菌的に調製し、１ｍｌずつバイアル
に分注した後、凍結乾燥して密封することにより凍結乾
燥製剤を得た。
【００４２】実施例３ 注射用蒸留水１００ｍｌ中にＨＧＦ１ｍｇ、ソルビトー
ル２ｇ、グリシン２ｇ及びポリソルベート８０ １０ｍ
ｇを含む溶液を無菌的に調製し、１ｍｌずつバイアルに
分注した後、凍結乾燥して密封することにより凍結乾燥
製剤を得た。
ル２ｇ、グリシン２ｇ及びポリソルベート８０ １０ｍ
ｇを含む溶液を無菌的に調製し、１ｍｌずつバイアルに
分注した後、凍結乾燥して密封することにより凍結乾燥
製剤を得た。
【図１】ＶＳＭＣのＤＮＡ合成に対するＥＣの効果を示
す図である。
す図である。
【図２】ｎｉＶＳＣＭのＤＮＡ合成に対するＥＣの効果
を示す図である。
を示す図である。
【図３】ＥＣのＤＮＡ合成に対するＨＧＦの効果を示す
図である。
図である。
【図４】ＥＣのＲＮＡ合成に対するＨＧＦの効果を示す
図である。
図である。
【図５】ＥＣのＤＮＡ合成に対するＨＧＦとｂＦＧＦの
相加効果を示す図である。
相加効果を示す図である。
【図６】ＥＣのＲＮＡ合成に対するＨＧＦとｂＦＧＦの
相加効果を示す図である。
相加効果を示す図である。
【図７】ＥＣの蛋白合成に対するＨＧＦとｂＦＧＦの相
加効果を示す図である。
加効果を示す図である。
【図８】ＥＣのＤＮＡ合成に対するＨＧＦ及び他のサイ
トカイン（ＩＬ−１α及びＩＬ−６）の相加効果を示す
図である。
トカイン（ＩＬ−１α及びＩＬ−６）の相加効果を示す
図である。
【図９】ＶＳＣＭのＤＮＡ合成に対するＨＧＦの効果を
示す図である。
示す図である。
【図１０】ｎｉＶＳＭＣのＤＮＡ合成に対するＨＧＦの
効果を示す図である。
効果を示す図である。
【図１１】ｎｉＶＳＭＣのＲＮＡ合成に対するＨＧＦの
効果を示す図である。
効果を示す図である。
【図１２】ヒト大動脈血管内皮細胞のＤＮＡ合成に対す
るＨＧＦの効果を示す図である。
るＨＧＦの効果を示す図である。
【図１３】ラット冠動脈血管内皮細胞（ＥＣ）、ヒト大
動脈血管内皮細胞、ラット平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）、ラ
ット新生内膜平滑筋細胞（ｎｉＶＳＭＣ）及びヒト大動
脈血管平滑筋細胞におけるＨＧＦ ｍＲＮＡの発現を示
す電気泳動写真である。
動脈血管内皮細胞、ラット平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）、ラ
ット新生内膜平滑筋細胞（ｎｉＶＳＭＣ）及びヒト大動
脈血管平滑筋細胞におけるＨＧＦ ｍＲＮＡの発現を示
す電気泳動写真である。
【図１４】ラット冠動脈血管内皮細胞(ＥＣ)、ヒト大動
脈血管内皮細胞、ラット平滑筋細胞(ＶＳＭＣ)、ラット
新生内膜平滑筋細胞（ｎｉＶＳＭＣ）及びヒト大動脈血
管平滑筋細胞におけるｃ−ｍｅｔ ｍＲＮＡの発現を示
す電気泳動写真である。
脈血管内皮細胞、ラット平滑筋細胞(ＶＳＭＣ)、ラット
新生内膜平滑筋細胞（ｎｉＶＳＭＣ）及びヒト大動脈血
管平滑筋細胞におけるｃ−ｍｅｔ ｍＲＮＡの発現を示
す電気泳動写真である。
【図１５】ヒト大動脈血管内皮細胞に対する高グルコー
スの影響を示す図である。
スの影響を示す図である。
【図１６】ヒト大動脈血管内皮細胞の高グルコースによ
る傷害に対するＨＧＦの効果を示す図である。
る傷害に対するＨＧＦの効果を示す図である。
【図１７】ヒト大動脈血管内皮細胞からのＨＧＦの分泌
及びそれに対する高グルコース、ＴＲＫの影響を示す図
である。
及びそれに対する高グルコース、ＴＲＫの影響を示す図
である。
【図１８】ヒト大動脈血管平滑筋細胞のに対する高グル
コースの影響を示す図である。
コースの影響を示す図である。
【図１９】ＶＳＭＣに対する高グルコースの影響を示す
図である。
図である。
【図２０】ヒト大動脈血管平滑筋細胞からのＨＧＦの分
泌に対するＴＲＫ、ＰＧＥ1、ＰＧＥ2の影響を示す図で
ある。
泌に対するＴＲＫ、ＰＧＥ1、ＰＧＥ2の影響を示す図で
ある。
【図２１】ヒト大動脈血管平滑筋細胞からのＨＧＦの分
泌及びそれに対する高グルコース、ＴＲＫの影響を示す
図である。
泌及びそれに対する高グルコース、ＴＲＫの影響を示す
図である。
Claims (4)
- 【請求項１】 ＨＧＦを有効成分として含有するこ
とを特徴とする動脈疾患治療剤。 - 【請求項２】 動脈疾患が、血管平滑筋細胞増殖を
主体とする動脈疾患である請求項１記載の動脈疾患治療
剤。 - 【請求項３】 動脈疾患が、ＰＴＣＡ後の再狭窄で
ある請求項１記載の動脈疾患治療剤。 - 【請求項４】 動脈疾患が、高血糖に伴う動脈疾患
である請求項１記載の動脈疾患治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29770095A JP3977452B2 (ja) | 1995-02-27 | 1995-10-19 | 動脈疾患治療剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6486495 | 1995-02-27 | ||
| JP7-64864 | 1995-02-27 | ||
| JP29770095A JP3977452B2 (ja) | 1995-02-27 | 1995-10-19 | 動脈疾患治療剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08295634A true JPH08295634A (ja) | 1996-11-12 |
| JP3977452B2 JP3977452B2 (ja) | 2007-09-19 |
Family
ID=26405968
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29770095A Expired - Fee Related JP3977452B2 (ja) | 1995-02-27 | 1995-10-19 | 動脈疾患治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3977452B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000007615A1 (fr) * | 1998-08-05 | 2000-02-17 | Sumitomo Pharmacueticals Co., Ltd. | Preparations destinees a l'administration d'un facteur de croissance des hepatocytes |
| US6133231A (en) * | 1995-10-05 | 2000-10-17 | Genentech, Inc. | Angiogenesis using hepatocyte growth factor |
| WO2003007982A1 (fr) * | 2001-07-18 | 2003-01-30 | Yasuhiko Tabata | Preparations d'hydrogel hgf a liberation prolongee |
| JP2016138046A (ja) * | 2015-01-26 | 2016-08-04 | 株式会社ファンケル | 米糠抽出物含有皮膚外用剤 |
| JP2017081841A (ja) * | 2015-10-27 | 2017-05-18 | 株式会社ファンケル | 血管内皮機能改善組成物 |
-
1995
- 1995-10-19 JP JP29770095A patent/JP3977452B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6133231A (en) * | 1995-10-05 | 2000-10-17 | Genentech, Inc. | Angiogenesis using hepatocyte growth factor |
| WO2000007615A1 (fr) * | 1998-08-05 | 2000-02-17 | Sumitomo Pharmacueticals Co., Ltd. | Preparations destinees a l'administration d'un facteur de croissance des hepatocytes |
| US6887477B1 (en) | 1998-08-05 | 2005-05-03 | Tomokazu Nagano | Method of treating ischemic disease by intramuscular administration of Hepatocyte growth factor |
| KR100761675B1 (ko) * | 1998-08-05 | 2007-10-04 | 나카무라 도시카즈 | 간 실질세포 증식인자 투여용 제제 |
| WO2003007982A1 (fr) * | 2001-07-18 | 2003-01-30 | Yasuhiko Tabata | Preparations d'hydrogel hgf a liberation prolongee |
| JP2016138046A (ja) * | 2015-01-26 | 2016-08-04 | 株式会社ファンケル | 米糠抽出物含有皮膚外用剤 |
| JP2017081841A (ja) * | 2015-10-27 | 2017-05-18 | 株式会社ファンケル | 血管内皮機能改善組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3977452B2 (ja) | 2007-09-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0722737B1 (en) | Use of HGF for the preparation of a medicament against CNS disorders | |
| EP0367735B1 (en) | Use of gamma interferon in pharmaceutical preparations for the treatment of vascular stenosis | |
| JP3818322B2 (ja) | コラーゲン分解促進剤 | |
| EP2628484B1 (en) | Platelet-rich plasma compositions | |
| US20020032153A1 (en) | Methods and compositions for the treatment and prevention of erectile dysfunction | |
| JP3622015B2 (ja) | 肺傷害治療剤 | |
| JP2009538295A (ja) | Ｄｋｋ２およびそれを含む組成物を使用する血管新生刺激法 | |
| JP3977452B2 (ja) | 動脈疾患治療剤 | |
| WO1993008821A1 (en) | Side effect inhibitor for cancer therapy | |
| US20220096600A1 (en) | Periosteal skeletal stem cells in bone repair | |
| JP3697460B2 (ja) | Ｈｇｆ含有製剤 | |
| WO1997035609A1 (fr) | Inhibiteur de la neoformation de vaisseaux sanguins renfermant un inhibiteur du mecanisme d'action du facteur tissulaire | |
| WO1997018831A1 (fr) | Protection des cellules endotheliales | |
| AU2005222085B2 (en) | Treating or preventing extracellular matrix build-up | |
| EP1103269B1 (en) | Use of HGF for the treatment of ischemic diseases of the extremities | |
| JPH101439A (ja) | 神経変性疾患治療剤 | |
| WO1999027951A1 (fr) | Preparation pour l'admission intraveineuse continue | |
| JPH09151137A (ja) | 平滑筋細胞増殖抑制剤 | |
| JP3737532B2 (ja) | 軟骨障害治療剤 | |
| JP3904268B2 (ja) | Ｈｇｆ医薬製剤 | |
| JPH06312941A (ja) | Ｈｇｆ産生促進剤 | |
| JP4668197B2 (ja) | 肺胞分化又は再生誘導剤 | |
| JP2707407B2 (ja) | 骨マトリックス合成促進剤 | |
| US20100105613A1 (en) | Therapeutic agent for occlusive peripheral vascular disease, and use thereof | |
| JP2007528365A (ja) | 肝細胞増殖因子を含有する血管分化誘導促進剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20050413 |
|
| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20050413 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20050418 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060314 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060510 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20060512 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20061010 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20061206 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20061208 |
|
| A911 | Transfer of reconsideration by examiner before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20070117 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20070619 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20070621 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100629 Year of fee payment: 3 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100629 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110629 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110629 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120629 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130629 Year of fee payment: 6 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |