JPH08295625A - リウマチおよび炎症予防または治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 ブルセインＢを有効成分とするリウマチ
および炎症から選ばれる疾病の予防または治療剤。 【効果】 該化合物は、白血球の接着、浸潤を抑制する
作用を有し、リウマチや種々の炎症等、特に慢性関節リ
ウマチの病態改善ならびに病変の進行の抑制などの治療
ならびに予防に有用であり、また胃腸障害、発熱、体重
減少等の副作用がない。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ブルセインＢを有
効成分とするリウマチおよび炎症から選ばれる疾病の予
防または治療剤に関し、特に慢性関節リウマチに有用な
予防または治療剤に関する。

【０００２】

【従来技術・発明が解決しようとする課題】ブルセイン
Ｂは式：

【０００３】

【化１】

【０００４】で表され、抗マラリア作用、抗腫瘍作用を
有するものとして知られている。

【０００５】リウマチの薬物療法としては、ステロイ
ド、非ステロイド系抗炎症剤、免疫抑制剤および金製剤
が挙げられる。ステロイド、非ステロイド系抗炎症剤
は、効果が早くでるが、対症療法であり、症状の進行を
くい止められない。免疫抑制剤および金製剤は、効果が
出るのが遅いが、症状の進行をある程度止められる。こ
れらの２種を組み合わせた療法もあるが、根本的な治療
となっていない。また、非ステロイド系抗炎症剤の作用
機序は主に炎症メディエーターの抑制である。即ち、対
症的な作用であり、効果もあまり強くない。ステロイド
系抗炎症剤は作用は非常に強いが、同時に重篤な副作用
を引き起こすことが報告されており、使用には充分な注
意が必要である。金製剤は、免疫調節作用を持ち、その
作用は遅効性で持効性であるが、粘膜皮膚症状、骨髄抑
制、腎障害、呼吸器障害などの副作用が報告されてお
り、金製剤もステロイド系抗炎症剤同様、使用には充分
な注意が必要である。

【０００６】関節リウマチの病変部には、白血球の浸潤
が認められ、これらの白血球が関節部位などを攻撃する
ことが知られている。また、炎症部位においても白血球
の血管内皮細胞への接着、浸潤が亢進していることが知
られている。よって白血球の病変部への接着、浸潤を抑
制することで、リウマチ、炎症等の疾患の発症を抑制で
きると考えられる。実際に、白血球の接着に関与する接
着分子に対する抗体を投与することで、リウマチのモデ
ル動物において、抑制作用が認められたことが報告され
ている。そこで、これまでの薬物の作用機序である炎症
メディエーターの産生抑制とは異なる作用機序を持つ薬
物、即ち白血球の接着、浸潤を抑制する薬物を提供でき
れば、病変部において症状を緩和し、なおかつ病変の進
行をくい止めることができると考えられる。また、副作
用としての胃腸障害、発熱、体重減少等の従来の問題点
を回避でき、これら疾患の予防あるいは治療に有用であ
る。

【０００７】本発明の目的は、ブルセインＢの新規医薬
用途を提供することである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意研究
を行った結果、当該ブルセインＢが白血球の接着、浸潤
の抑制作用を有し、リウマチおよび炎症から選ばれる疾
病の予防または治療剤として有用であることを見出し、
本発明を完成するに到った。

【０００９】すなわち本発明は、ブルセインＢを有効成
分とするリウマチおよび炎症から選ばれる疾病の予防ま
たは治療剤に関する。

【００１０】ブルセインＢは、S. M. Kupchan らの方法
(J. Org. Chem., 40(5), 648-654,1975) によりブルセ
ア・アンティディセンテリカ(Brucea antidysenterica)
より単離、精製することができる。

【００１１】

【作用・効果】本発明の有効成分であるブルセインＢ
は、白血球の接着、浸潤を抑制する作用を有し、リウマ
チや種々の炎症等、特に慢性関節リウマチの病態改善な
らびに病変の進行の抑制などの治療ならびに予防に有用
であり、また胃腸障害、発熱、体重減少等の副作用がな
い。

【００１２】ブルセインＢを上記の医薬品として用いる
場合、薬理的に許容される添加剤（例えば、担体、賦形
剤、希釈剤など）などを、製薬上必要な成分と適宜混合
し、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、注射
剤などの態様で医薬組成物とし、経口的または非経口的
に投与することができる。

【００１３】上記製剤中には、ブルセインＢの有効量が
配合される。投与量は、投与ルート、症状、患者の体重
あるいは年令などによっても異なるが、例えば成人患者
にリウマチまたは炎症、特に慢性関節リウマチの治療、
予防に経口投与する場合は、0.1〜200 mg／ヒト／日、
特に 0.5〜100 mg／ヒト／日を１日１〜数回に分けて投
与するのが望ましい。また、静脈内投与の場合は、 0.1
〜100 mg／ヒト／日、特に 0.5〜50mg／ヒト／日を１日
１〜数回に分けて投与するのが望ましい。

【００１４】

【実施例】本発明をより詳細に説明するために、実験例
および製剤例を挙げるが、本発明はこれらにより何ら限
定されるものではない。

【００１５】〔使用薬物〕ブルセインＢ（本発明化合
物）および対照薬物としてマノアライド−２５−アセタ
ールズを用いた。この対照薬物は、フォスフォリパーゼ
Ａ２（phospholipase A2）阻害剤であり、白血球側の接
着分子発現を抑制することが報告されている。

【００１６】実験例１：白血球−血管内皮細胞接着抑制
効果 ヒト臍帯静脈由来血管内皮細胞（以下、ＨＵＶＥＣと略
す）を９６穴プレートに１穴あたり１００μｌの培養液
（ＥＧＭ−ＵＶ）で３７℃、５％ＣＯ₂ 条件下でコンフ
ルエント（約25,000細胞数／ｃｍ² ）に達するまで培養
した。その後、一度培養液（ＥＧＭ−ＵＶ）を除いた
後、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）５ＪＲＵ（Japanese Reffe
rence Unit）／ｍｌと薬物(0.002〜2.0 μｇ／ｍｌの濃
度）を培養液（ＥＧＭ−ＵＶ）１００μｌに加え、４時
間、３７℃、５％ＣＯ₂ 条件下で作用させた。一方で、
ＢＣＥＣＦ−ＡＭ〔２，７−ビス−（２−カルボキシエ
チル）−５，６−カルボキシフルオレセイン アセトキ
シメチルエステル〕でラベルしたヒト好中球（100,000
細胞数／ｍｌＨＢＳＳ（ハンクス−バランス−ソルト−
ソリューション）に調製）に、薬物(0.002〜2.0 μｇ／
ｍｌの濃度）を３０分間作用させた。このヒト好中球懸
濁液（100,000 細胞数／ｍｌ）１００μｌをＴＮＦと薬
物を作用させたＨＵＶＥＣに加え、３０分間接着させ、
非接着細胞を５０×ｇで遠心して除いた。細胞をトライ
トンＸで処理し、励起波長５０８ｎｍ、蛍光波長５３１
ｎｍで測定し、好中球の接着数を測定した。接着阻害率
は次式より算出した。 接着阻害率（％）＝１００×（Ｔ−Ｓ）／（Ｔ−Ｃ） （式中、Ｃは無処置時の接着好中球数、ＴはＴＮＦ作用
時の接着好中球数、Ｓは薬物とＴＮＦを作用させたとき
の接着好中球数を示す） また、細胞増殖阻害濃度を以下のようにして測定した。
約3,000 細胞数／ｃｍ ² になるように９６穴プレートに
ＨＵＶＥＣを植え（培養液（ＥＧＭ−ＵＶ）１００μ
ｌ）、翌日に薬物（濃度０−２００μｇ／ｍｌ）を培養
液１００μｌに溶解させたものを添加し、３７℃、５％
ＣＯ₂ 条件下で５日間培養した。２５％グルタルアルデ
ヒドを４０μｌ加えて１５分間固定した。リン酸緩衝液
で洗った後、０．２％メチレンブルー水溶液を１００μ
ｌ加えて１５分間染色した。水で３回洗った後、風乾さ
せ、０．３３Ｎ塩酸を２００μｌ加え、６５５ｎｍの吸
光度を測定した。この結果を表１および図１に示す。

【００１７】

【表１】

【００１８】ブルセインＢは０．２μｇ／ｍｌ濃度で顕
著な接着抑制効果が認められた。また、０．０２μｇ／
ｍｌ濃度（５日間培養）でＨＵＶＥＣの５０％増殖抑制
を示した。つまり、この濃度以下では細胞に対する傷害
性はないものと考えられる。。なお、２、０．２μｇ／
ｍｌ濃度では、接着実験の条件の４時間作用では細胞の
形状に変化は見られなかったので、ブルセインＢの接着
抑制作用は細胞傷害性による影響ではないと考えられ
る。

【００１９】実験例２：カラゲニン胸膜炎に対する効果 ＳＤ（スプラーグ−ドーリー）系雄性ラット（８週令）
をエーテル麻酔し、右胸腔内にカラゲニン５００μｇ／
２００μｌを注入し、同時に薬物も静注した。１時間
後、再び同量の薬物を静注した。さらに３時間後、エー
テル麻酔下で脱血致死させ、胸腔内の浸潤液を回収、浸
潤液量を測定した。また、浸潤液中の白血球数は、回収
した浸潤液を希釈した後、血球計測板を用い、顕微鏡下
で細胞数を計測した。図２に使用薬物と浸潤液量および
該液中の白血球数の関係を示す。この結果より、ブルセ
インＢは無処置および対照薬物に比べて、浸潤液量およ
び浸潤液中の白血球数が少なく、炎症を強く抑制した。

【００２０】実験例３：マウスコラーゲン関節炎（ヒト
慢性関節リウマチモデル動物）に対する効果 ３ｍｇ／ｍｌの牛由来タイプIIコラーゲンをフロイント
完全アジュバントと等量混合し、エマルジョンを作成し
た。このエマルジョン６６−１３３μｌ（コラーゲン量
に換算すると１００−２００μｇ）をＤＢＡ／１ lacＪ
雄性マウス（８週令）の尾部の皮内に注入した（初回免
疫）。２１日後、再び３ｍｇ／ｍｌの牛由来タイプIIコ
ラーゲンをフロイント不完全アジュバントと等量混合
し、エマルジョンを作成し、初回免疫と同じ量を免疫し
た。 ブルセインＢ： 3.4μｇ／マウス(100μｌ)(ｎ＝６) マノアライド−25−アセタールズ： 18.87μｇ／マウス
(100μｌ)(ｎ＝６) 無処置：生理食塩水 100μｌ (ｎ＝５) を、免疫開始と同時にそれぞれ腹腔に毎日投与し、初回
免疫の２４日後より測定を開始した。症状の評価は次の
５段階に分けて行った。 ０：変化なし １：指の関節が１本腫れているとき ２：指の関節が２本以上、また足首に軽く腫れが認めら
れるとき ３：全体的に腫脹が認められたとき ４：足の腫れが最大限に達したと判断したとき これらの評価を四肢に対して行い、合計をスコアとして
表した。この結果を図３に示す。ブルセインＢは無処置
に比べ、４０日、５０日目において関節炎を有意に抑制
していた。

【００２１】実験例４：タイプIIコラーゲン抗体価の測
定 ９６穴プレートに２５μｇ／ｍｌに希釈した牛由来タイ
プIIコラーゲン５０μｌを加え、４℃で一晩固相化し
た。１％牛血清アルブミンを２００μｌ加えて１時間、
室温でブロッキング反応を行った。１次抗体は、実験例
３で用いたマウスより採血し、凝固させたのち遠心して
得られた血清を20,000倍希釈して５０μｌ加え、２時
間、室温で反応させた。２次抗体は、西洋わさび由来ペ
ルオキシダーゼでラベルしたウサギ由来抗マウスＩｇＧ
抗体を 5,000倍希釈して５０μｌ加え、２時間、室温で
反応させた。発色は０．０５％Ｈ₂ Ｏ₂ （過酸化水素
水）を基質として１００μｌ加え、２Ｎの硫酸を５０μ
ｌ加えて発色反応を止めた。マイクロプレートリーダー
を用いて、４５０ｎｍの吸光度を測定し、得られた吸光
度の値をタイプIIコラーゲン抗体価として表した。この
結果を図４に示す。ブルセインＢは無処置に比べ、抗体
価を有意に低下させた。

【００２２】 製剤例１（錠剤） １錠中 (1)ブルセインＢ ３０ ｍｇ (2)乳糖 ３９ ｍｇ (3)微結晶セルロース ２４ ｍｇ (4)カルメロースカルシウム ４ ｍｇ (5)ヒドロキシプロピルセルロース ２ ｍｇ (6)ステアリン酸マグネシウム １ ｍｇ 全 量 １００ ｍｇ (1)から(4) までを均一に混合し、これに (5)の水溶液
を加え、練合した後、乾燥、整粒し、 (6)を加えて混合
した後、圧縮成形して１錠１００ｍｇの錠剤を製した。

【００２３】 製剤例２（顆粒剤または細粒剤） １ｇ中 (1)ブルセインＢ ３０ ｍｇ (2)乳糖 ８５０ ｍｇ (3)低置換度ヒドロキシプロピルセルロース １０５ ｍｇ (4)ヒドロキシプロピルセルロース １０ ｍｇ (5)軽質無水ケイ酸 ５ ｍｇ (1)から(3) までを均一に混合し、これに (4)の水溶液
を加え、練合した後、押し出し造粒機にて顆粒を製し、
乾燥、整粒後 (5)を加えて混合し顆粒剤を製した。ま
た、本処方にて押し出し造粒工程を省くことで細粒剤と
することもできる。

【００２４】 製剤例３（硬カプセル剤） １カプセル中 (1)ブルセインＢ ３０ ｍｇ (2)乳糖 ２７ ｍｇ (3)微結晶セルロース １０ ｍｇ (4)トウモロコシデンプン １０ ｍｇ (5)ヒドロキシプロピルセルロース ２ ｍｇ (6)ステアリン酸マグネシウム １ ｍｇ 全 量 ８０ ｍｇ (1)から(4) までを均一に混合し、これに (5)の水溶液
を加え、練合した後、乾燥、整粒し、 (6)を加えて混合
した後、硬カプセルに本品を８０ｍｇ充填し、硬カプセ
ル剤を製した。

【００２５】 製剤例４（シロップ剤） １００ｍｌ中 (1)ブルセインＢ ０．２ｇ (2)Ｄ−ソルビトール液（７０％） ７０ ｇ (3)クエン酸 ０．３ｇ (4)パラオキシ安息香酸メチル ０．０２８ｇ (5)パラオキシ安息香酸プロピル ０．０１２ｇ (6)プロピレングリコール １０ ｇ (7)精製水 適量 (1) 、(4) 、(5) を(6) に溶解し、更に (2)と(3) を加
え、均一になるまで攪拌した後、 (7)を加えて全量を１
００ｍｌとし、シロップ剤とした。

【００２６】 製剤例５（注射剤） ２ｍｌ中 (1)ブルセインＢ １０ ｍｇ (2)塩酸 ０．１ ｍｌ (3)水酸化ナトリウム 適量 (4)注射用蒸留水 適量 上記成分を混合溶液としたのち、常法により注射剤とし
た。

【図面の簡単な説明】

【図１】ブルセインＢ濃度と好中球の接着阻害率および
ＨＵＶＥＣの細胞数の関係を示す図である。

【図２】ラットカラゲニン胸膜炎モデルに対するブルセ
インＢの効果を示す図である。

【図３】マウスコラーゲン関節炎モデルに対するブルセ
インＢの効果を示す図である。

【図４】抗タイプIIコラーゲン抗体価に対するブルセイ
ンＢの効果を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 戸谷 治雅 兵庫県神戸市東灘区向洋町中６丁目６番地 611号棟404号室 (72)発明者 中田 哲史 大阪府箕面市小野原西２−10−27 楽山荘 ２−Ｅ (72)発明者 古川 ますみ 大阪府泉佐野市東佐野台９−29 (72)発明者 正垣 武志 大阪府吹田市山田南45−Ｂ−903

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ブルセインＢを有効成分とするリウマチ
   および炎症から選ばれる疾病の予防または治療剤。