KR920004095B1

KR920004095B1 - 골관절염 치료제

Info

Publication number: KR920004095B1
Application number: KR1019900006105A
Authority: KR
Inventors: 후미히꼬 기무라; 유따까 무까이다; 고주 와따나베
Original assignee: 구레하 가가꾸 고교 가부시끼가이샤; 고다마 스니찌로
Priority date: 1989-04-28
Filing date: 1990-04-26
Publication date: 1992-05-25
Also published as: AU5375690A; EP0395441B1; US4997850A; CA2015475A1; JPH085780B2; DK0395441T3; EP0395441A2; KR900015718A; JPH0372418A; CA2015475C; DE69016821D1; EP0395441A3; ZA902975B; AU614227B2; DE69016821T2

Abstract

내용 없음.

Description

골관절염 치료제

제 1a, b 도는 인간의 활막 세포내에서의 IL-1 생산에 미치는 ACP, PAL 및 PAC의 억제 활성에 관한 실험결과 그래프(값은 막대 그래프상에 평균값±표준오차(n+3)의 형태로 나타냄).

제 2a, b 도는 인간의 단핵세포내에서의 IL-1 생산에 미치는 ACP, 3,4-디-n-프로피오닐옥시벤질리덴 디-n-프로피오네이트, 3,4-디-n-도데카노일옥시벤질리덴 디-n-도데카노에이트, 3,4-디-n-옥타데카노일옥시벤질리덴 디-n-옥타데카노에이트, 3,4-디벤조일옥시벤질리덴 디벤조에이트, PAL 및 PAC의 억제효과에 관한 실험결과 그래프(값은 막대 그래프상에 평균값±표준오차(n=3)의 형태로 나타냄).

제 3 도는 인간의 연골세포 배양물로부터의 IL-1 분비에 미치는 ACP, PAL 및 PAC의 억제효과에 관한 실험결과 그래프(값은 막대 그래프상에 평균값±표준오차(n=3)의 형태로 나타냄)

제 4a, b, c 도는 연골 매트릭스내 또는 연골 매트릭스로부터의 프로테오글리칸 합성, 분비 및 잔존율에 미치는 PAL 및 PAC의 억제효과에 관한 실험결과 그래프.

제 5 도는 IL-11α 존재하에서 프로테오글리칸 분비에 미치는 PAL, ACP, 3,4-디-n-프로피오닐옥시벤질리덴 디-n-프로피오네이트, 3, 4-디-n-도데카노일옥시벤질리덴 디-n-도데카노에이트, 3, 4-디-n-옥타데카노일옥시벤질리덴 디-n-옥타데카노에이트 및 3, 4-디벤조일옥시벤질리덴 디벤조에이트의 억제효과에 관한 실험결과 그래프(값은 막대 그래프상에 평균값±표준오차(n=3)의 형태로 나타냄).

* 도면의 주요부분에 대한 부호의 설명

* : 5%이하의 위험률 ** : 1%이하의 위험률

*** : 0.1%이하의 위험률

본 발명은 하기 일반식(I)의 화합물을 활성성분으로 포함하는 골관절염 치료제에 관한 것이다 :

상기식에서, R은 수소원자 또는 아실기이고, X는 CHO기, COOH기 또는 생리학적으로 허용되는 그의 염, 또는 CH(OR')₂기이며, 여기서 R'는 아실기를 나타낸다.

관절증으로서 지금까지 류마티스성 관절염, 류마티스열 및 골관절염이 널리 유행되었었고 특히 류마티스 관절염 또는 류마티스열을 앓고 있는 환자들이 많았으며 이 두가지 질환이 관절증중에서 주요한 대상이기 때문에 많이 연구되어왔다. 그러나 최근 총 인구중 노년층의 증가비율에 있어 관절노쇠, 특히 마모에 의한 연골변형에서 비롯되는 제 1차성 골관절염을 앓고 있는 환자들이 늘어나고 있으며, 이에 따라 이 질병이 많은 의사들의 주시대상이 되었다.

일반식(I)로 표시되는 화합물들중에서, 3,4-디아세톡시벤질리덴 디아세테이트(이하, "ACP"라 부르기로 함)를 비롯한 3,4-디알카노일옥시벤질리덴 디알카노에이트, 3,4-디히드록시벤즈알데히드(이하, "PAL"이라 부르기도함)를 비롯한 3,4-디알카노일옥시벤즈알데히드 및 3,4-디히드록시벤조산(이하, "PAC"라 부르기로 함)을 비롯한 3,4-디알카노일옥시벤조산이 소염제, 신장염 치료제, 항암제 및 섬유형성 억제제로서 효과적인 것으로 이제껏 알려져 왔다. 예컨대 미합중국 특허 제 4,758,591호에는 ACP가 소염제로서 기술되어 있고 일본국 특허출원(이하, "JP-A"라 부르기로함), 공개 제 55-51,018호(1980)에는 PAL이 항암제로서, JP-A, 공개 제 58-83,619호(1983)에는 PAL이 소염제로서, JP-A, 공개 제 59-196,818호(1984)에는 PAL이 항신장염제로서, 그리고 미합중국 특허 제 4,248,892호에는 PAC가 항섬유형성제로서 기술되어 있다.

더 나아가, 미합중국 특허 제 4,758,591호에는 ACP를 비롯한 3,4-디알카노일옥시벤질리덴 디알카노에이트와 PAL이 백혈구 이동, 육아종 증식 및 보조 관절염 억제활성을 나타내고 더우기 인간을 비롯한 포유류에 대하여 매우 낮은 독성을 갖고 있기 때문에, 염증 ; 류마티스성 관절염등의 류마티스성질환 ; 및 사구체 신장염 또는 전신 낭창 홍반등의 자가면역질환을 치료하는 적합한 약제라고 기재되어 있다. 그러나 전술한 어느 특허에서도 골관절염에 관한 언급은 전혀 없었다.

골관절염은 관절에서 발생하는 퇴행변성(retroplasia)이며 선천적 형성부전, 외상 또는 기타 질환에서 기인된 제 2 차성 질병 및 관절연골의 퇴행변성에서 기인된 제 1 차성 질병이 있다. 일반적으로 골관절염은 다소간 체중을 지탱하는 관절에서 대부분 발생한다. 제 2 차성 및 선천적 질병은 히프 관절에서 빈번히 발견되며 뇌쇠로 인한 제 1 차성 질병은 종종 척추 또는 무릎 관절에서 발견된다.

때때로 골관절염은 광범위한 의미에서 류마티스성 질환으로 분류되지만, 이것은 류마티스성 관절염 및 류마티스열과 같은 소위 류마티즘과는 다른 질병이다. 예컨대 류마티스열은 심장장애를 수반하며 류마티스성 관절염은 관절내 유착증을 유발한다. 그러나 골관절염은 관절 연골의 변형은 일으키지만 관절내 유착증이나 심장장애를 일으키지는 않는다. 더우기 류마티스성 관절염은 무릎 관절이나 히프 관절등의 하중을 갖는 관절에 제한되지 않으며 종종 손이나 손가락 관절에서 발병하는 경우도 관찰된다. 따라서 골관절염은 류마티즘과는 다른 것이며 류마티즘과 별도로 분류해야만 한다.

더우기 류마티스성 관절염은 전신 질환이고 결합조직에 염증을 유발하며, 통상의 소염제를 투여하는 것이 주된 치료법중 하나이다. 골관절염에 있어서도 활막에 염증이 야기되지만 이것은 주된 병해가 아닌 까닭에 단순히 통상적인 소염제를 투여해서는 치료에 충분한 결과를 낳지 못한다.

본 발명자들은 골관절염을 치료하는 약제를 개발하기 위해 광범위한 연구를 해왔다. 이 골관절염은, 최근 노화가 선진국들 전반에 걸쳐서 두드러진 현상이 된 까닭에 많은 의사들의 주목을 끌고 있으며, 인터로이킨 1(이하, "IL-1"이라고 칭함)이 관절 연결 파괴인자로 주목된다는 최근의 발견을 참작하여, 이들은 대식세포에 의한 IL-1의 생산 또는 분비를 억제할 수 있는 약을 개발할 수 있을 경우 본 발명에 도달할 수 있게 된다는 개념을 만들어내었다.

이러한 개념을 기초로 하여 본 발명자들은 전격적으로 연구를 해왔고, 그 결과 3,4-디알카노일옥시벤질리덴 디알카노에이트를 비롯한 ACP, PAL 및 생리학적으로 허용가능한 그의 염이 IL-1의 생산 및/또는 분비를 억제하는 강력한 활성을 가졌다는 사실을 발견하게 되었다. 더 나아가 본 발명자들은, 본 발명의 상기 화합물들이 연골 매트릭스의 분해 및 연골의 주성분인 프로테오글리칸의 분비(그의 단편 형태로)를 억제할 수 있다는 사실도 발견하였다. 이러한 보충 발견을 기초로하여 본 발명이 완성되기에 이르렀다.

본 발명의 목적은 하기 일반식(I)의 화합물 1이상을 함유하는 골관절염 치료제를 제공하는 것이다 :

상기식에서, R은 수소 원자 또는 아실기이고 ; X는 CHO기, COOH기, 생리학적으로 허용되는 그의 염, 또는 CH(OR')₂기이고, 여기서 R'는 아실기를 나타낸다.

본 발명은 하기 일반식(I)의 화합물 1이상을 활성성분으로 함유하는 제약 조성물을 생리학적으로 유효한 양만큼 투여하는 것을 포함하는, 관절염 환자의 치료방법에 관한 것이다 :

상기식에서, R은 수소원자 또는 아실기이고, X는 CHO기, COOH기, 또는 생리학적으로 허용되는 그의 염, 또는 CH(OR')₂기이며, 여기서 R'는 아실기를 나타낸다.

일반식(I)에서 R과 R'의 정의에 포함되는 아실기는 각각 하기 일반식으로 표시된다 :

상기식에서, Y와 Y'는 독립적으로 탄소수 1 내지 18, 바람직하게는 1 내지 7, 보다 더 바람직하게는 1 내지 2의 직쇄 또는 측쇄 알킬기 또는 페닐기나 알킬페닐기등의 방향족잔기이다.

일반식(I)의 화합물의 예로는 다음과 같은 것들이 있다 : 3,4-디아세톡시벤질리덴 디아세테이트, 3,4-디프로피오닐옥시벤질리덴 디프로피오네이트, 3,4-디부티릴옥시벤질리덴 디부티레이트, 3,4-디도데카노일 옥시벤질리덴 디도데카노에이트, 3,4-디테트라데카노일옥시벤질리덴 디테트라데카노에이트, 3,4-디헥사데카노일옥시벤질리덴 디헥사데카노에이트, 3,4-디옥타데카노일옥시벤질리덴 디옥타데카노에이트, 3,4-디아세톡시벤질리덴 디옥타데카노에이트, 3,4-디옥타데카노일옥시벤질리덴 디아세테이트, 3,4-디벤조일옥시벤질리덴 디벤조에이트, 3,4-디히드록시벤즈알데히드, 3,4-디아세톡시벤즈알데히드, 3,4-디옥타데카노일옥시벤즈알데히드, 3,4-디벤조일옥시벤즈알데히드, 3,4-디하이드록시벤조산 및 생리학적으로 허용되는 그의 염, 3,4-디아세톡시벤조산 및 생리학적으로 허용되는 그의 염.

ACP를 비롯한 3,4-디알카노일옥시벤질리덴 디알카노에이트는 하기 일반식(II)로 표시되는 화합물이다 :

이 화합물의 합성법은 미합중국 특허 제 4,758,591호에 기재되어 있으며, 요약하면 다음과 같다 :

(1) Y와 Y'가 동일할 경우(Y=Y')에는, 예컨대 하기 반응식에 나와 있는 바와 같이 PAL을 황산등의 무기산 존재하에 일반식(Ⅳ)의 알칸산 무수물과 반응시킨다 :

(2) Y와 Y'가 동일하지 않을 경우에는, 예컨대, 하기 반응식에 나와 있는 바와 같이 일반식(Ⅴ)의 화합물을 황산등의 무기산 존재하에 일반식(Ⅵ)의 알칸산 무수물과 반응시킨다 :

일반식(Ⅴ)의 화합물은, 예컨대, 하기 반응식에서 예시된 바와 같이 일반식(Ⅲ)으로 표시되는 PAL을 벤젠, 디클로로메탄등의 비활성 유기용매중에서 트리에틸아민, 피리딘등의 존재하에 일반식(Ⅶ)의 알칸산 할로겐화물 Y-COZ(이식에서 Z는 염소원자 또는 브롬원자를 나타냄)과 반응시킴으로써 합성될 수 있다.

PAC는 하기식(Ⅷ)로 표시되는 화합물이며, 생리학적으로 허용되는 그의 염으로서 나트륨염 및 칼륨염과 같은 알칼리금속염, 칼슘염과 같은 알칼리토금속염 및 암모늄염도 포함될 수 있다 :

일반식(Ⅸ)로 표시되는 3,4-디알카노일옥시벤조산은 하기 반응식에 예시된 바와 같이 일반식(Ⅷ)의 PAC를 황산등의 무기산 존재하에 일반식(Ⅳ)의 알칸산 무수물과 반응시킴으로써 제조될 수 있다 :

본 발명에 따른 화합물의 독물학적 특징 및 약리학적 특징을 아래에 설명해 놓았다.

(1) 급성 독성 :

(i) ACP의 급성독성 :

ACP를 생쥐와 쥐(수컷 및 암컷)에게 경구투여 또는 피하투여하고, 그후 7일동안 그들의 임상적 징후를 관찰하고, 리치필드-윌콕슨 도표(Litchfield-Wilcoxon figure)상에서 계산하는 방법에 의하여 각각의 LD₅₀을 측정하였다.

경구투여를 위해서는 메틸셀룰로오스 0.5%와 Tween 80(비이온 계면활성제, 제조원 : 도오꾜가세이, Co., Ltd.) 0.4%의 수용액에 분산되어 있는 ACP의 현탁액을 제조하여 위(胃) 존데를 거쳐 동물에게 투여하였다. 피하투여의 경우에는, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨(이하 "CMC"라고 칭함) 0.5%가 들어있는 생리학적 식염수에 분산되어 있는 ACP의 현탁액을 제조하고, 주사기를 가지고서 동물에게 주사하였다. 결과는 하기 표 1에 나와 있다.

[표 1]

더 나아가, 3,4-디-n-프로피오닐옥시벤질리덴 디-n-프로피오네이트, 3,4-디-n-도데카노일옥시벤질리덴 디-n-도데카노에이트, 3,4-디-n-옥타데카노일옥시벤질리덴 디-n-옥타데카노에이트, 3,4-디벤조일옥시벤질리덴 디벤조에이트, 3,4-디-n-부티릴옥시벤질리덴 디-n-부티레이트, 3,4-디-n-테트라데카노일옥시벤질리덴 디-n-테트라-데카노에이트, 3,4-디-n-헥사데카노일옥시벤질리덴 디-n-헥사데카노에이트, 3,4-디아세톡시벤질리덴 디-n-옥타데카노에이트, 3,4-디-n-옥타데카노일옥시벤질리덴 디아세테이트, 3,4-디아세톡시벤즈알데히드, 3,4-디-n-옥타데카노일옥시벤즈알데히드, 3,4-디벤조일옥시벤즈알데히드 및 3,4-디아세톡시벤조산 및 그의 나트륨염의 급성독성(LD₅₀)도 같은 방식으로 측정하여, 거의 같은 값을 얻었다.

(ⅱ) PAL의 급성독성 :

PAL을 한 그룹당 다섯마리씩의 암컷 Jc1 : ICR 생쥐 각각에게 경구투여 또는 복강내투여하고, 그후 7일 동안 그들의 상태를 관찰하고, 리치필드-윌콕슨 도표 상에서 계산하는 방법에 의하여 각각의 LD₅₀을 측정하였다.

경구투여를 위해서는 0.2% CMC 수용액에 PAL이 분산되어 있는 현탁액을 제조하고(PAL의 일부분은 용액속에 용해됨) 위 존데를 거쳐 동물에게 투여한다. 복강내투여의 경우에는, 생리학적 식염수에 분산된 PAL의 현탁액을 제조하고(PAL의 일부분은 용액속에 용해됨) 주사기를 가지고서 동물에게 주사한다. 결과는 하기 표 2에 나와 있다.

[표 2]

(ⅲ) PAC의 급성독성 :

한그룹당 다섯 마리씩의 수컷 생쥐 각각에게 PAC를 복강내 투여하고, 그후 8일동안 그들의 임상적 징후를 관찰하고, 상기(ⅱ)와 같은 방법을 이용하여 400mg/kg이상의 LD₅₀값을 얻었다. PAC의 나트륨염에 대해서도 동일한 수준의 LD₅₀값이 얻어졌다.

(2) IL-1의 생산 및 분비 억제 :

(i) 인간의 활막세포내에서 IL-1 생산에 미치는 ACP, PAL 및 PAC의 억제활성

수술시에 입수한 인간의 활막을 콜리게나제로 처리하여 활막세포를 얻고, 이것을 몇회 계대배양한 후 12-웰 배양접시에 접종시켰다. 세포가 군집을 이루게 되었을 때 다음에 기술되는 시험에 사용하였다. 활막세포는 IL-1을 생산하지만 단지 소량만 분비하므로 IL-1 세포내 생산의 억제 또는 촉진에 관한 연구를 위해 적합한 세포이다.

ACP, PAL 및 PAC중 하나를 각기 최종시험 농도의 400배에 해당되는 농도로 함유하는 각각 DMSO(디메틸술폭사이드)용액과 전술한 화합물중 그 어느 것도 함유하지 않는 대조용 DMSO 용액을 태아소혈청(이하, "FBS"라 칭하기로 함)이 들어 있는 배지[Ham 배지]를 사용하여 그 부피의 40배의 이르기까지 희석하였다. 희석용액 100μ을 각 웰속에 첨가하고 [Ham]배지 800μ을 첨가하였다. 이와 동시에, 테트라데카노일포르볼 디아세테이트(이하, "TPA"라 칭하기로 함)와 Ca²⁺이오노포아 A 23187을 함유하는 [Ham]배지 100μ을 각 웰속에 첨가하였다. 배지내 TPA와 이오노포아의 농도는, 그들의 최종농도가 웰속에서 각기 0.1㎍/ml 및 0.2㎍/ml로 되고 IL-1의 생산이 자극되도록 조절하였다. 웰 하나당 액체(배지)의 최종부피는 1ml/웰이었다. 배양후 40시간이 지난다음, 액체 부분을 각 웰로부터 제거하고 각 웰속에 남아 있는 세포에다 Ham 배지 1ml을 첨가하였다. 배지내의 모든 세포를 파괴하기 위하여 세포가 들어 있는 배지에다 수회에 걸쳐 동결-해동 작업을 반복해주고 원심분리에 의하여 세포내 물질을 함유하는상청액을 얻었다. 성청액 내의 IL-11α와 IL-11β를, 세포내 IL-1로서 규정된 효소-항체-복합체(제조원 : 오쯔까 세이야꾸, Co., Ltd.)를 사용하여 ELISA 방법에 의해 측정하였다[ENSHO, vol.8(5) 409(1988)]. 그 결과를 제 1a, b 도에 나타내었다. 도면에서 볼수 있듯이, 10μM의 ACP와 33μM의 PAL은 IL-1α와 IL-1β의 생산에 대한 강력한 억제 작용을 나타내고, 33μM의 PAC는 IL-1α에 대한 억제작용만을 나타낸다.

(ⅱ) 인간의 단핵세포로부터 IL-1 분비에 미치는 본 발명에 따른 화합물의 억제 활성.

Ficoll-paque 용액을 사용하여 밀도 구배 원심분리에 의해서 인간의 정맥혈로부터 단핵세포를 분리해내고, 단핵세포 분리용 플레이트를 사용하여 정제함으로써 순도가 95%이상인 세포를 얻었다. 세포를 10%의 FBS가 들어 있는 배지 RPMI 1640에 분산시키고 10⁶세포/3ml/웰의 비율로 단핵세포를 배양 접시에 접종시킨 후 5%의 CO₂를 함유하는 분위기하에 30분간 37℃에서 배양하였다. 그후 ACP, PAL 및 PAC중 어느 하나의 DMSO 용액 15μl씩을 각 웰속에 첨가하고(최종 DMSO 농도 : 0.5%), 30분이 지난후, IL-1의 생산을 자극하는 물질인 리포폴리사카라이드(이하, "LPS"라 칭하기로 함)를 10㎍/ml의 최종 LPS 농도로 첨가하고, 42시간 동안 배양하였다. 그런다음, 반응시킨 배양 배지를 회수하고, 배지에 붙어 있는 세포를 원심분리에 의해 분리하고 세포가 들어 있지 않는 상청액을 얻었다. 세포에서 분비된 IL-1α와 IL-11β를 상기 (i)에서와 같은 방식으로 ELISA 방법에 의해 측정하였다. 제 2a,b 도에서 볼 수 있듯이, ACP, PAL 및 PAC는 각기 0.67, 0.33 및 10μM의 농도에서 IL-1의 분비를 상당히 억제한다.

제 2a 도의 오른쪽 끝에 나와 있는 바와 같이, 3,4-디-n-프로피오닐 옥시벤질리덴 디-n-프로피오네이트[①로서 표시됨], 3,4-디-n-도데카노일옥시벤질리덴 디-n-도데카노에이트[②로서 표시됨], 3,4-디-n-옥타데카노일옥시벤질리덴 디-n-옥타데카노에이트[③으로 표시됨] 및 3,4-디벤조일옥시벤질리덴 디-벤조에이트[④로 표시됨]도 3.3μM의 농도에서 IL-1의 분비를 상당히 억제한다.

더 나아가 3,4-디-n-부티릴옥시벤질리덴 디-n-부티레이트, 3,4-디-n-테트라데카노일옥시벤질리덴 디-n-테트라데카노에이트, 3,4-디-n-헥사데카노일옥시벤질리덴 디-n-헥사데카노에이트, 3,4-디아세톡시벤질리덴 디-n-옥타데카노에이트, 3,4-디-n-옥타데카노일옥시벤질리덴 디아세테이트, 3,4-디아세톡시벤즈알데히드, 3,4-디-n-옥타데카노일옥시벤즈알데히드, 3,4-디벤조일옥시벤즈알데히드, 3,4-디아세톡시벤조산 및 그의 나트륨염과 PAC의 나트륨염도 유사한 활성을 갖는 것으로 관찰되었다.

(ⅲ) 배양된 연골 세포로부터의 IL-1 분비에 미치는 억제 활성 :

어린 토끼의 무릎 및 어깨 관절로부터 연골을 무균적으로 채취하여 콜라게나제 0.2%가 들어 있는 Ham 배지로 처리한 후 서로를 단 세포로 분리하였다. FBS 10%가 들어 있는 Ham 배지로 2회 세척한 후, 세포를 FBS 10%가 들어 있는 Ham 배지속에 10⁵세포/ml의 농도로 분산시켰다. PAL, PAC 및 ACP중 하나가 들어 있는 DMSO 용액을 각 화합물의 농도가 3.3μM(0.25%의 DMSO 농도에 해당됨)이 되도록 각기 웰속에 첨가한 후 0.1μg/ml의 TPA와 0.2μg/ml의 Ca²⁺이오노포아 A 23187을 첨가하여 연골 세포로부터의 IL-1 분비를 자극시켰다. 배양한지 24시간 후, 각 상청액속에 분비된 IL-1을,³H-티미딘(³H-TdR)의 혼입량을 지표로 삼으면서 생물검사에 의하여 측정한다. 제 3 도에 나와 있는 바와 같이 모든 PAL, PAC 및 ACP는 연골 세포로부터의 IL-1 분비를 억제한다. 도면에서 "Intact"는 TPA와 이오노포아가 첨가되지 않아서 IL-1의 분비가 자극되지 않은 경우를 의미한다.

(3) 배양된 연골 세포로부터의 프로테오글리칸(이하, "PG"라고 칭함) 분비에 미치는 억제활성 :

4주일된 수컷 SD 쥐로부터 늑연골을 무균적으로 채취해내고, 효소 처리를 하여 단세포로 분리한 후 12-웰 배양접시에 접종시키고, 5%의 CO₂가 함유된 분위기하에 37℃에서 배양하였다. 연골세포가 군집을 이루기까지 생장한 후, 1 내지 10μM의 PAL 또는 10 내지 100μM의 PAC를 첨가하고, 3시간 후에는 각 웰속에 21μ Ci의 Na³⁵ ₂SO₄를 첨가하였다. 24시간이 지난 후, 매트릭스내의 PG 합성량, 매트릭스로부터의 PG분비량 및 매트릭스내의 PG 잔종량을³⁵S의 양을 지표로 이용하면서 측정하였다. 제 4a,b 도에서 볼 수 있듯이, 각 화합물이 PG 합성에 미치는 영향은 관찰되지 않았고, PAL과 PAC는 모두 PG의 분비에 대한 억제 활성을 나타내었다. 도면에서 대조시험에서의 PG 분비율은 100%로 정의되었다. 매트릭스내 PG 잔존량은 각각 1 내지 3.3μM 및 10 내지 100μM의 농도 사이에서 PAL과 PAC의 첨가량에 비례하여 층가되었다.[제 4c 도]. ACP는 전술한 바와 유사한 경향의 효과를 보였다. 제 4a, b, c 도에 있어서 PG의 분비량은 연골 매트릭스에서 분해되고 그로부터 분비된 PG를 나타내는 양을 의미하며, 이것은 배양 배지내의³⁵S를 기준으로 측정하였다. PG의 잔존량은 매트릭스내에서 분해되지 않은 PG를 의미하는 것으로서, 역시 전술한 바와 같이 계산하였다. PG의 분비량 및 잔존량의 합계량이, 합성된 PG라고 생각된다. 따라서 PG의 잔존량이 더 많고 분비량이 더 적다는 것은 본 화합물이 골관절염에 대하여 보다 큰 연골 보호 효과를 갖는다는 것을 의미한다.

더 나아가, PG가 미리 1μ Ci의 Na₂ ³⁵SO₄로 표지된 배양연골 매트릭스에다 20단위의 IL-1α를 첨가한 각 시험군과 더불어 대조군을 준비하고, 10μM의 PAL, 100μM의 PAL 또는 10μM의 ACP를 각 시험군에 첨가한후 각 화합물이 세포로부터의 PG 분비에 미치는 영향을 연구한다. 제 5 도에 나와 있는 바와 같이 IL-1α를 첨가하면,³⁵S의 사전 표지량을 100%라고 보았을때, 대조군(IL-1이 첨가되지 않은 것)과 비교하여 PG 분비를 약 20% 증가시킨다. 또한 PAL은 그 첨가량에 비례하여 PG 분비량을 억제하며, ACP 또한 PG 분비량을 억제한다.

또한 제 5 도에서 볼 수 있듯이, 10μM의 3,4-디-n-프로피오닐옥시벤질리덴 디-n-프로피오네이트[①로서 표시됨], 3,4-디-n-도데카노일옥시벤질리덴 디-n-도데카노에이트[②로서 표시됨], 3,4-디-n-옥타데카노일옥시벤질리덴 디-n-옥타데카노에이트[③으로 표시됨], 3,4-디벤조일옥시벤질리덴 디벤조에이트[④로 표시됨]도 PG의 분비량을 억제한다.

또한, 3,4-디-n-부티릴옥시벤질리덴 디-n-부티레이트, 3,4-디-n-테트라데카노일옥시벤질리덴 디-n-테트라데카노에이트, 3,4-디-n-헥사데카노일옥시벤질리덴 디-n-헥사데카노에이트, 3,4-디아세톡시벤질리덴 디-n-옥타데카노에이트, 3,4-디-n-옥타데카노일옥시벤질리덴 디아세테이트, 3,4-디아세톡시벤즈알데히드, 3,4-디-n-옥타데카노일옥시벤즈알데히드, 3,4-디벤조일옥시벤즈알데히드, 3,4-디아세톡시벤조산 및 그의 나트륨염과 PAC 및 그의 나트륨염의 억제 활성도 각기 연구하여 동일한 효과를 보았다.

전술한 바와 같이 본 발명의 화합물은 IL-1 생산 및 분비에 대한 탁월한 억제 활성과 더불어 연골세포로부터의 PG 분비에 대한 억제 활성을 보이므로,이 유도체들은 낮은 독성(부작용)으로 관절 연골을 보호하는 작용을 할 수 있다. 따라서 본 발명의 화합물은 골슬관절염, 골주관절염, 변형성 고관절염, 변형성 척추증을 비롯한 골관절염에 대한 치료제로 극히 유용하다.

활성 성분으로서 본 발명의 화합물을 함유하는 골관절염치료용 제약 조성물의 제법을 하기 실시예에서 설명하기로 한다.

본 발명에 따른 화합물들은 각종 형태로 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물들은 단독으로 사용될 수도 있고, 제약학상 허용되는 희석제 또는 다른 약제와 더불어 사용될 수도 있다.

본 발명의 화합물들중에서 알데히드 유도체는 종종 생체에 자극을 일으키며 쉽게 산화된다. 이러한 결점을 개선하기 위해서는 이 유도체를 시클로덱스트린등과 반응시켜 포접 화합물을 만들거나, 이 유도체를 각종 아민, 아미노산 또는 사카라이드와의 혼합물로서 사용하는 것이 유용하다.

본 발명의 화합물은 경구투여 또는 비경구투여를 할 수 있으므로, 그러한 투여를 위해 적합한 어떤 형태라도 취할 수 있다. 본 화합물은, 이 화합물을 생리학적으로 유효한 양만큼 함유하는 한, 분말, 과립, 정제, 당의정, 캡슐, 좌약, 현탁액, 액체, 유제, 주사제, 연고등 광범위한 종류의 제형으로 투여될 수도 있다.

그러므로 본 발명의 화합물을 활성성분으로서 함유하는 제약 조성물은 공지된 어떤 방법으로도 제조될 수 있다. 제약 조성물내에서 활성 성분으로의 본 발명의 함량은 0.01 내지 100중량%, 바람직하게는 0.1 내지 70중량%에 이르기까지 광범위하게 조절할 수 있다.

본 발명의 화합물은 인간 및 동물에게 경구 투여하거나 비경구 투여할 수 있다. 경구투여에는 설하 투여가 포함되며, 비경구투여에는 피하, 근육내, 관절강내, 정맥내 주사 및 관류와 더불어 경피투여가 포함된다.

본 발명에 따른 화합물의 용량은 치료하고자 하는 대상(즉, 동물 또는 사람), 나이, 개인적인 차이, 질병의 단계에 따라 좌우되며, 따라서 하기의 용량을 초과하는 용량이 때로 필요할 수 있다. 그러나 일반적으로 본 발명의 화합물을 0.1 내지 500mg/kg,체중/일, 바람직하게는 0.5 내지 200mg/kg,체중/일의 용량으로 인간에게 경구투여할 수 있으며, 비경구 투여시에는 0.01 내지 200mg/kg,체중/일, 바람직하게는 0.1 내지 100mg/kg,체중/일의 용량으로 투여할 수 있다. 더 나아가 본 화합물을 1일 1회 내지 4회 투여하는 것이 바람직하다.

본 발명의 화합물을 활성성분으로 함유하는 제약 조성물의 제법이 하기 실시예에 기재되어 있다. 실시예에 나와 있는 부는 언급이 없는 한 중량부를 표시한다.

[실시예 1] : 과립제

ACP 71부

락토오스 17부

낮은 치환가를 갖는 히드록시프로필셀룰로오스 10부

히드록시프로필셀룰로스 2부

상기 성분들을 잘 혼합하고 에탄올 32부를 완화제로 사용하면서 반죽한 후 습윤상태에서 과립화시키고 건조시켜 과립제를 얻었다.

[실시예 2] : 정제

실시예 1에서 제조된 과립제에다 1중량%의 스테아르산 마그네슘을 첨가하고 잘 혼합한 후, 혼합물을 정제로 압축성형시켰다.

[실시예 3] : 캡슐제

PAL 40부

락토오스 50부

낮은 치환가를 갖는 히드록시프로필셀룰로오스 10부

상기 성분들을 잘 혼합하여 균질 분말로 만들고 캡슐안에 채워 넣어 캡슐제를 얻었다.

[실시예 4] : 캡슐제

PAL 대신 PAC를 사용하면서 실시예 3과 동일한 방식으로 캡슐제를 제조하였다.

[실시예 5] : 주사제

PAL 1부

염화나트륨 등장액 99부

상기 성분들을 가열하면서 혼합하고 멸균시켜 주사제를 제조하였다.

[실시예 6] : 주사제

PAL 대신 PAC를 사용하면서 실시예 5와 동일한 방식으로 주사제를 제조하였다.

[실시예 7] : 연고제

3,4-디-n-프로피오닐옥시벤질리덴 5부

디-n-프로피오네이트

정제 라놀린 4부

백색 밀랍 4부

백색 와셀린 87부

상기 성분들을 잘 반죽하여 연고제를 제조하였다.

Claims

하기 일반식(I)의 화합물 1이상을 함유하는 골관절염 치료제 :

상기식에서, R은 수소 원자 또는 아실기이고 ; X는 CHO기, COOH기, 생리학적으로 허용되는 그의 염, 또는 CH(OR')₂기이고, 여기서 R'는 아실기를 나타낸다.
제 1 항에 있어서, 상기 R과 R'가 동일한 아실기를 나타내는 치료제.
제 1 항에 있어서, 상기 R과 R'가 독립적으로 각기 다른 아실기를 나타내는 치료제.
제 1 항에 있어서, 상기 R과 R'가 각각
를 나타내고, 여기서 Y와 Y'는 독립적으로 탄소수 1 내지 18의 직쇄 알킬기 또는 방향족 잔기를 나타내는 치료제.
제 1 항에 있어서, 상기 생리학적으로 허용되는 염이 나트륨염인 치료제.
제 1 항에 있어서, 상기 화합물이 3,4-디알카노일옥시벤질리덴 디알카노에이트인 치료제.
제 1 항에 있어서, 상기 화합물이 3,4-디히드록시벤즈알데히드인 치료제.
제 1 항에 있어서, 상기 화합물이 3,4-디히드록시벤조산 및 생리학적으로 허용되는 그의 염인 치료제.