JPH0829424A - 免疫学的分析方法及び装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 免疫学的分析方法及び装置において、被測定
溶液内への目的とする測定対象物以外の物質の混入を低
減し、信頼性の高い測定を行うことができるようにす
る。また、検出部周辺への遊離状の標識物の非特異的吸
着を低減し、高精度の測定を行うことができるようにす
る。 【構成】 抗原抗体反応により生成された試料中の測定
対象物に固相及び標識物質が結合した複合体を含む反応
混合液を吸引ノズル５に導き、この吸引ノズル５におい
て反応混合液中の固相５１を磁気的に捕捉し、次に、吸
引ノズル５内に分離用緩衝液を吸引ノズル５から見てフ
ローセル２４とは逆方向に流し、遊離状の物質５２をフ
ローセル２４を経由させずに排出し、次に、固相５１を
フローセル２４に導入する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は免疫学的に生体液内の微
少成分を検出する免疫学的分析方法及び装置に係り、特
に、固相を捕捉してＢ／Ｆ分離を行うのに好適な免疫学
的分析方法及び装置に関する。

【０００２】

【従来の技術】抗体はある特定の抗原に対して極めて特
異的に結合することが知られており、一般に抗原抗体反
応と呼ばれている。この抗原抗体反応を利用することに
より、生体中、特にヒト血液中の極微量の物質の存在、
あるいは、その物質の濃度を測定することが可能となる
ため、これを利用した免疫学的分析法は、近年、医療の
分野で広く利用され、特に各種疾患の早期診断等に役立
っている。

【０００３】免疫学的分析法としては競合法と非競合法
が公知の方法であるが、抗原抗体反応を行った後の複合
体を捕捉しやすくする手段として、近年、特に固相を利
用する測定系が広く用いられている。例えば、非競合法
では、分析対象とする体液中の抗原に対して、不溶性の
固相に結合した抗体、及び何らかの物質で標識した抗体
を作用させ複合体を形成させるが、その抗体を結合する
ための固相としては、数μｍから数ｍｍまでの種々の粒
径の不溶性の粒子、あるいは、反応容器内壁を直接用い
た物が知られている。この反応において、体液中の抗体
の量と抗原抗体により生成する標識物質付きの複合体の
量は比例するため、固相に結合した標識物質を測定する
ことにより、体液中の抗原の存在及び量を知ることがで
きる。

【０００４】しかし、上記免疫学的分析法においては、
通常、抗体量と添加される試薬の量は１：１の関係には
なく、抗原抗体反応により生成した結合型の標識物（ｂ
ｏｕｎｄ ｆｏｒｍ：Ｂ）と遊離状の標識物（ｆｒｅｅ
ｆｏｒｍ：Ｆ）の分離（Ｂ／Ｆ分離）が必要となる。
この操作は固相を何らかの方法で一時的に捕捉し、液相
部分を流しさることにより達成されるが、反応容器や専
用のカップをＢ／Ｆ分離に使用した場合、容器内の溶液
の置換に時間がかかるため分析装置の稼動効率は低下す
る、特別なＢ／Ｆ分離機構を必要とするためコストアッ
プを招く等の問題が生じる。

【０００５】従来の免疫学的分析方法及び装置におい
て、上記の問題を解決するものとしては、特開昭６０
−１２２３７４号公報及び特開昭６１−１３２８６９
号公報に開示のものがある。従来技術は固相として磁
性粒子を使用し、この磁性粒子含む反応混合物を導管に
沿って次々にそして個別に流し、この導管内を流れる間
に各反応混合物中の磁性粒子を磁気的に捕捉し、その捕
捉した磁性粒子に対し洗浄液体を通すことによりＢ／Ｆ
分離を行うものである。一方、従来技術は反応混合物
を多孔質セラミック筒のフィルタに通すことによりＢ／
Ｆ分離を行うものである。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記従
来技術においては、以下の問題点が存在する。従来技術
においては、複数の試料につき遊離状の標識物を含む
反応混合物を同一の導管内に次々に流すことになるた
め、試料中の所定の物質成分が導管内に付着することに
より次試料への汚染を引き起こし、被測定溶液内に目的
とする測定対象物以外の物質が混入し、その結果、他人
の抗体と反応して誤判定される等が発生し、信頼性が低
下すると共に、洗浄後の遊離状の標識物がそのまま検出
部の方向へ排出されるため、検出部周辺への非特異的吸
着を引き起こし、測定精度が劣化するという問題が生じ
る。

【０００７】また、従来技術においても従来技術と
同様の問題がある。さらに、従来技術では多孔質セラ
ミック筒のフィルタの取り替えが困難であるため、長期
間使用していると徐々に試料中の所定の物質成分がフィ
ルタ内に付着することにより次試料への汚染を引き起こ
し、この場合においても、被測定溶液内に目的とする測
定対象物以外の物質が混入し、信頼性が低下するという
問題が生じる。

【０００８】本発明の第１の目的は、被測定溶液内への
目的とする測定対象物以外の物質の混入を低減し、信頼
性の高い測定を行うことのできる免疫学的分析方法及び
装置を提供することにある。

【０００９】本発明の第２の目的は、検出部周辺への遊
離状の標識物の非特異的吸着を低減し、高精度の測定を
行うことのできる免疫学的分析方法及び装置を提供する
ことにある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明の第１の概念によ
る免疫学的分析方法は、上記第１及び第２の目的を達成
するために次の構成を採用する。すなわち、抗原抗体反
応を利用して試料中の測定対象物を免疫学的に測定する
免疫学的分析方法において、試料と、固相としての磁性
粒子と、この磁性粒子を前記試料中の測定対象物に結合
させる抗体と、標識物質をラベルした標識抗体とを反応
容器内で混合して抗原抗体反応を行わせ、試料中の測定
対象物に固相及び標識物質が結合した複合体を含む反応
混合液を生成する第１手順と、前記反応容器内の反応混
合液を検出部に通ずる経路に導き、その経路の所定の部
位において前記反応混合液中の固相を磁気的に捕捉する
第２手順と、前記経路内に洗浄液を前記所定の部位から
見て前記検出部とは逆方向に流し、前記反応混合液中の
磁気的に捕捉されなかった遊離状の物質を前記検出部を
経由させずに経路外へ排出する第３手順と、前記磁気的
に捕捉した固相を前記検出部に導入する第４手順とを含
む。

【００１１】本発明の第２の概念による免疫学的分析方
法は、上記第１の目的を達成するために次の構成を採用
する。すなわち、抗原抗体反応を利用して試料中の測定
対象物を免疫学的に測定する免疫学的分析方法におい
て、試料と、固相としての磁性粒子と、この磁性粒子を
前記試料中の測定対象物に結合させる抗体とを反応容器
内で混合して抗原抗体反応を行わせ、試料中の測定対象
物に固相が結合した第１複合体を含む第１反応混合液を
生成する第１手順と、前記反応容器内の第１反応混合液
を検出部に通ずる経路に導き、その経路の所定の部位に
おいて前記第１反応混合液中の固相を磁気的に捕捉する
第２手順と、前記経路内に洗浄液を前記所定の部位から
見て前記検出部とは逆方向に流し、前記第１反応混合液
中の磁気的に捕捉されなかった遊離状の物質を前記検出
部を経由させずに経路外へ排出する第３手順と、前記磁
気的に捕捉した固相を前記反応容器に戻し、標識物質を
ラベルした標識抗体と混合して抗原抗体反応を行わせ、
前記第１複合体の測定対象物及び固相に標識物質が結合
した第２複合体を含む第２反応混合液を生成する第４手
順と、前記反応容器内の第２反応混合液を前記経路に再
び導いて、前記経路の所定の部位において前記第２反応
混合液中の固相を磁気的に捕捉する第５手順と、前記経
路内に洗浄液を流し、前記第２反応混合液中の磁気的に
捕捉されなかった遊離状の物質を前記検出部を経由させ
ずに経路外へ排出する第６手順と、前記磁気的に捕捉し
た固相を前記検出部に導入する第７手順とを含む。

【００１２】また、上記第２の概念による免疫学的分析
方法において、上記第２の目的を達成するため、前記第
６手順は、前記経路内に洗浄液を前記所定の部位から見
て前記検出部とは逆方向に流し、前記第２反応混合液中
の磁気的に捕捉されなかった遊離状の物質を前記検出部
を経由させずに経路外へ排出する。

【００１３】上記第１及び第２の概念による免疫学的分
析方法において、好ましくは、前記経路は先端に位置す
る吸引ノズルとこの吸引ノズルを前記検出部に接続する
導管とからなり、前記所定の部位を前記吸引ノズルとす
る。

【００１４】この場合、好ましくは、前記吸引ノズルと
して着脱可能なプラスチック製のディスポーザブルチッ
プを使用する。

【００１５】また、上記第１及び第２の概念による免疫
学的分析方法において、好ましくは、前記標識物質とし
て電気化学的に発光する物質を使用し、前記検出部は電
極を有するものとし、前記検出部において電気化学発光
を利用することにより前記免疫複合体の前記標識物質の
量を測定する。

【００１６】さらに、上記第１及び第２の概念による免
疫学的分析方法において、好ましくは、前記磁性粒子と
して比重が１．１〜１．４、粒径が２．５〜５μｍのも
のを使用する。

【００１７】また、本発明の免疫学的分析装置は、上記
第１及び第２の目的を達成するために次の構成を採用す
る。すなわち、抗原抗体反応を利用して試料中の特定成
分を免疫学的に測定する免疫学的分析装置において、試
料と、固相としての磁性粒子と、この磁性粒子を前記試
料中の測定対象物に結合させる抗体と、標識物質をラベ
ルした標識抗体とを混合して抗原抗体反応を行わせ、試
料中の測定対象物に固相及び標識物質が結合した複合体
を含む反応混合液を生成する反応容器と、前記反応容器
内の反応混合液を吸引するノズル及びその吸引ノズルを
検出部に接続する導管と、前記吸引ノズル及び導管を含
む経路の所定の部位に設置され、この所定の部位に導か
れた前記反応混合液中の固相を磁気的に捕捉する磁石
と、前記経路内に洗浄液を前記所定の部位からみて前記
検出部とは逆方向に流し、前記反応混合液中の磁気的に
捕捉されなかった遊離状の物質を前記検出部を経由させ
ずに排出する手段と、前記経路内に緩衝液を前記所定の
部位からみて前記検出部に向かう方向に流し、前記反応
混合液中の磁気的に捕捉された固相を前記検出部に導入
する手段とを備える。

【００１８】上記免疫学的分析装置において、好ましく
は、前記磁石は前記吸引ノズルに隣接して設置される。

【００１９】

【作用】以上のように構成した本発明の第１の概念によ
る免疫学的分析方法は、本発明を１ステップの分析法に
適用した場合のものであり、試料、固相としての磁性粒
子、この磁性粒子を試料中の測定対象物に結合させる抗
体及び標識物質をラベルした標識抗体を混合して抗原抗
体反応を行わせ、試料中の測定対象物に固相及び標識物
質が結合した複合体を含む反応混合液を生成し、検出部
に通ずる経路の所定の部位において反応混合液中の固相
を磁気的に捕捉し、経路内に洗浄液を所定の部位から見
て検出部とは逆方向に流して反応混合液中の遊離状の物
質を検出部を経由させずに経路外へ排出する。これによ
り、遊離状の物質に含まれる未反応の試料中の測定対象
物単体及びその複合体（標識抗体に試料中の測定対象物
が結合したもの、これにさらに磁性粒子用の抗体が結合
したもの）や遊離状の標識物（未反応の余剰標識抗体、
標識抗体に試料中の測定対象物が結合したもの、これに
さらに磁性粒子用の抗体が結合したもの）は経路の所定
の部位から検出部までの間を流れることはない。以上に
より、経路の所定の部位から検出部までの間に遊離状の
測定対象物単体及びその複合体が付着することによる次
試料への汚染が生じることはなく、被測定溶液内への目
的とする測定対象物以外の物質の混入が低減され、信頼
性の高い測定を行うことが可能となる。また、遊離状の
標識物による経路の特に検出部周辺への非特異的吸着が
低減され、高精度な測定を行うことが可能となる。

【００２０】また、本発明の第２の概念による免疫学的
分析方法は、本発明を２ステップの分析法に適用した場
合のものであり、試料、固相としての磁性粒子及びこの
磁性粒子を試料中の測定対象物に結合させる抗体を混合
して抗原抗体反応を行わせ第１反応混合液を生成し、検
出部に通ずる経路の所定の部位において第１反応混合液
中の固相を磁気的に捕捉し、経路内に洗浄液を所定の部
位から見て検出部とは逆方向に流して第１反応混合液中
の遊離状の物質を経路外へ排出する。次に、磁気的に捕
捉した固相と標識物質をラベルした標識抗体を混合して
抗原抗体反応を行わせ、試料中の測定対象物に固相及び
標識物質が結合した第２複合体を含む第２反応混合液を
生成し、検出部に通ずる経路の所定の部位において第２
反応混合液中の固相を磁気的に捕捉し、経路内に洗浄液
を流して第２反応混合液中の遊離状の物質を検出部を経
由させずに経路外へ排出する。これにより、未反応の試
料中の測定対象物単体及びその複合体は経路の所定の部
位から検出部までの間を流れることはないため、その部
分に遊離状の測定対象物単体及びその複合体が付着する
ことによる次試料への汚染が生じることはなく、被測定
溶液内への目的とする測定対象物以外の物質の混入が低
減され、信頼性の高い測定を行うことが可能となる。

【００２１】また、経路内に洗浄液を所定の部位から見
て検出部とは逆方向に流し、第２反応混合液中の磁気的
に捕捉されなかった遊離状の物質を検出部を経由させず
に経路外へ排出することにより、仮に第２複合体を生成
する標識抗体と測定対象物が分離し遊離したとしても、
それが経路の所定の部位から検出部までの間を流れるこ
とはないため、その部分に遊離状の測定対象物単体及び
その複合体が付着することによる次試料への汚染が生じ
ることはなく、被測定溶液内への目的とする測定対象物
以外の物質の混入が低減され、信頼性の高い測定を行う
ことが可能となる。また、未反応の余剰標識抗体も経路
の所定の部位から検出部までの間を流れることはないた
め、遊離状の標識物による経路の特に検出部周辺への非
特異的吸着が低減され、高精度な測定を行うことが可能
となる。

【００２２】また、経路の所定の部位を経路の先端に位
置する吸引ノズルとすることにより、未反応の試料中の
測定対象物単体及びその複合体や遊離状の標識物は経路
の吸引ノズルから検出部までの間を流れることはないた
め、経路の吸引ノズルから検出部までの間に遊離状の測
定対象物単体及びその複合体が付着することによる次試
料への汚染が生じることはなく、被測定溶液内への目的
とする測定対象物以外の物質の混入がより低減され、最
も信頼性の高い測定を行うことが可能となる。また、遊
離状の標識物による経路の特に検出部周辺への非特異的
吸着がより低減され、最も高精度な測定を行うことが可
能となる。さらに、一般に使用される標識物質は非特異
的な吸着を起こしやすいため経路の洗浄操作が重要とな
るが、吸引ノズルのみを洗浄すればよいこととなるた
め、洗浄液が少なくてすみかつ洗浄時間が短縮される。

【００２３】また、吸引ノズルとして着脱可能なプラス
チック製のディスポーザブルチップを使用することによ
り、上記洗浄操作が簡便になると共に、上記反応混合液
中の遊離状の測定対象物及びその複合体や遊離状の標識
物の経路への影響をいっそう防止できる。

【００２４】また、標識物質として電気化学的発光物質
を使用する場合は、Ｂ／Ｆ分離し洗浄した後、固相を電
極を有する検出部に導き、電極に電位を与え標識物質を
発光させることになるが、この際、反応混合液中の遊離
状の物質は検出部を通らずに経路外へ送り出されるた
め、遊離状の標識物が電極上に非特異的に吸着すること
が防止され、測定精度の劣化のみならず電位の発生に悪
影響を与えることも防止される。

【００２５】また、磁性粒子として比重が１．１〜１．
４、粒径が２．５〜５μｍのものを使用することにより
高精度な測定が可能になると共に、磁性粒子である固相
が磁気的に捕捉された際、液の流れによる磁性粒子の落
下が防止され、かつ経路内での磁性粒子の詰まりが防止
される。

【００２６】また、以上のように構成した本発明の免疫
学的分析装置においては、反応容器内の反応混合液を吸
引するノズル及びその吸引ノズルを検出部に接続する導
管を含む経路の所定の部位に磁石を設置し、その磁石に
より反応混合液中の固相を磁気的に捕捉した後、経路内
に洗浄液を所定の部位からみて検出部とは逆方向に流
し、反応混合液中の磁気的に捕捉されなかった遊離状の
物質を検出部を経由させずに排出することにより、上記
本発明の免疫学的分析方法を実施することができる。

【００２７】

【実施例】以下、本発明の実施例を図面を参照して説明
する。まず、本発明の第１の実施例を図１〜図３により
説明する。図１において、本実施例の免疫学的分析装置
はターンテーブル１を有し、ターンテーブル１上には複
数の反応容器２がサークル状に配置され、この反応容器
２内で試料、磁性粒子からなる固相、この磁性粒子を試
料中の測定対象物に結合させる抗体及び標識物質をラベ
ルした標識抗体を混合して抗原抗体反応を行わせる。ま
た、ターンテーブル１に隣接して撹拌機３及び可動アー
ム９が取り付けられ、撹拌機３は撹拌機駆動装置４によ
り上下動または回転可能であり、可動アーム９は可動ア
ーム駆動装置８により上下動または回転可能である。可
動アーム９に固定された吸引ノズル５は着脱可能なプラ
スチック製のディスポーザブルチップであり、導管１１
ａに接続されている。この吸引ノズル５は反応容器２内
の抗原抗体反応により生成された反応混合液及び測定用
緩衝液ボトル１２中の測定用緩衝液を吸引するのに使用
され、吸引ノズル５の可動範囲にノズル洗浄槽１０が配
置されている。また、吸引ノズル５に隣接して永久磁石
６が設置されている。この永久磁石６は可動アーム９に
固定された磁石駆動装置７により移動可能であり、吸引
ノズル５に対する距離を変えることにより吸引ノズル５
に作用する磁場の強さを変化させる。

【００２８】導管１１ａはフローセル２４の入口に接続
されており、フローセル２４の出口は導管１１ｂを介し
てシリンジ３１に接続されている。フローセル２４は被
測定液に接する電極を有し、かつフローセル２４に隣接
して永久磁石２６が設置されている。この永久磁石２６
は磁石駆動装置２７により移動可能であり、フローセル
２４に対する距離を変えることによりフローセル２４に
かかる磁場の強さを変化させる。また、フローセル２４
内の電極には発光用電源３７より電位が印加され、電気
化学発光により生じる光がフォトマルチプライヤ２５に
おいて検出される。増幅装置３３はフォトマルチプライ
ヤ２５に高電圧を印加し、かつフォトマルチプライヤ２
５により検出された信号を増幅しコントローラ３４へ送
る。

【００２９】コントローラ３４はターンテーブル１、撹
拌機駆動装置４、磁石駆動装置７，２７、増幅装置３３
及び発光用電源３７を制御するものであり、その他通信
用のインターフェイス、フロッピードライブ、演算処理
能力、及び表示装置を備えている。

【００３０】導管１１ａは可動アーム９とフローセル２
４の間に電磁弁１３，１４を有し、電磁弁１３と電磁弁
１４の間で分岐した導管１１ｃは電磁弁１５を介してシ
リンジ２１と接続され、電磁弁１４とフローセル２４の
間で分岐した導管１１ｄは電磁弁２２を介して廃液溜２
３と接続されている。導管１１ｃの電磁弁１５とシリン
ジ２１の間からは導管１１ｅ，１１ｆ，１１ｇが分岐
し、導管１１ｅは電磁弁１６を介して廃液溜２３と接続
され、導管１１ｆは電磁弁１７を介して洗浄液ボトル１
９と接続され、導管１１ｇは電磁弁１８を介して分離用
緩衝液ボトル２０と接続されている。また、導管１１ｂ
には電磁弁２８が接続され、導管１１ｂの電磁弁２８と
シリンジ３１の間からは導管１１ｈ，１１ｉ，１１ｊが
分岐し、導管１１ｆは電磁弁２９を介して廃液溜２３と
接続され、導管１１ｉは電磁弁３０を介して洗浄液ボト
ル３２と接続され、導管１１ｊは電磁弁３５を介してコ
ンディショニング液ボトル３６と接続されている。

【００３１】次に、上記免疫学的分析装置を用いた本実
施例の免疫学的分析方法を説明する。本実施例の免疫学
的分析方法において、抗原抗体反応により形成される複
合体を担持する固相として磁性粒子を使用するが、この
磁性粒子は比重が１．１〜１．４であり、粒径が２．５
〜５μｍのものを使用する。また、固相に抗体を結合さ
せる方法としては、固相に物理的に吸着または直接化学
的に結合する方法、ビオチン−アビジン等の特異的な結
合を利用して間接的に結合する方法等が知られている
が、本実施例においては結合強度の点から、直接化学的
に結合する方法、及び特異的な結合の利用による方法に
より行う。また、抗体の標識物質としては放射性物質、
蛍光発光物質、酵素、化学発光物質、及び電気化学発光
物質等が知られており、これら全ての標識物質を使用す
ることが可能であるが、本実施例においては電気化学発
光物質であるＲｕ（ルテニュウム）化合物を使用する。
Ｒｕを利用した電気化学的な発光法としては、例えば特
開昭６４−５００１４６号公報に開示のものがある。

【００３２】本実施例の免疫学的分析方法による分析項
目としては、ＴＳＨ（thyroid-stimulating hormone：
甲状腺刺激ホルモン）、Ｔ３（triiodothyronine：３，
３’，５−Ｌ−トリヨードチロニン）、ＨＣＧ（human
chorionic gonadotropin：絨毛性性腺刺激ホルモン）、
ＣＥＡ（carcinoembryonic antigen：がん胎児性抗
原）、ＡＦＰ（α fetoprotein：αフェトプロテイン）
等があげられるが、これらは使用する抗体を変えること
により、装置の構成を変えずに行うことができる。

【００３３】以下、第１の実施例による分析操作過程を
ＴＳＨ分析を例にとり説明する。第１の実施例は１ステ
ップの抗原抗体反応による分析法である。

【００３４】まず、ストレプトアビジンを直接結合した
直径約２．８μｍの磁性粒子、ビオチンが直接結合した
抗ＴＳＨ抗体、ＴＳＨを有する測定試料、標識物質とし
てＲｕが直接結合した抗ＴＳＨ抗体をターンテーブル１
上に乗った反応容器２に分注し、ターンテーブル１及び
撹拌機３を駆動させて反応容器２内の溶液を一定時間撹
拌する。撹拌後、２８℃で１５分間加温することにより
抗原抗体反応を起こさせる。この抗原抗体反応により反
応容器２内において、測定試料中のＴＳＨの濃度に比例
した量のＲｕが結合した固相複合体が形成される。

【００３５】次に、可動アーム９を反応容器２の上方に
移動させた後、吸引ノズル５が反応容器２の液面に接す
る位置まで可動アーム９を下降させる。次いで、電磁弁
１３，１５を開き、電磁弁１４，１６，１７，１８は閉
じたままにし、この状態でシリンジ２１の動作により反
応容器２内の測定試料中のＴＳＨの濃度に比例した量の
Ｒｕが結合した固相複合体を含む反応混合液を一定量吸
引する。このとき、吸引ノズル５内には、図２の（ａ）
に示すように、固相５１と遊離状の物質５２を含む反応
混合液が満たされる。ここで、固相５１には測定試料中
のＴＳＨの濃度に比例した量のＲｕが結合した固相複合
体に加えて、Ｒｕが結合していない未反応の余剰磁性粒
子単体及びＲｕが結合していない磁性粒子の複合体が含
まれる。遊離状の物質５２には主として未反応の余剰標
識抗体（Ｒｕが直接結合した抗ＴＳＨ抗体単体）が含ま
れ、その他、標識抗体に測定試料中のＴＳＨが結合した
もの、これにさらに磁性粒子用の抗ＴＳＨ抗体が結合し
たもの、未反応の余剰抗ＴＳＨ抗体単体、未反応の測定
試料中のＴＳＨ単体が少量含まれる。遊離状の物質５２
のうち測定試料中のＴＳＨ単体及びその複合体（標識抗
体に測定試料中のＴＳＨが結合したもの、これにさらに
磁性粒子用の抗ＴＳＨ抗体が結合したもの）は汚染の原
因となる物質である。また、遊離状の物質５２のうち標
識物質が結合したもの（未反応の余剰標識抗体、標識抗
体に測定試料中のＴＳＨが結合したもの、これにさらに
磁性粒子用の抗ＴＳＨ抗体が結合したもの）を本明細書
ではまとめて遊離状の標識物という。

【００３６】次に、電磁弁１３，１５を閉じ、電磁弁１
８を開き、シリンジ２１の動作により分離用緩衝液ボト
ル２０の分離用緩衝液をシリンジ２１内に導きつつ、可
動アーム９を所定の位置まで上昇させ、磁石駆動装置７
により永久磁石６を吸引ノズル５の外壁に近づける。次
いで、ノズル洗浄槽１０の上方に吸引ノズル５がくるよ
うに可動アーム９を回転させ、吸引ノズル５が所定位置
にきたら可動アーム９を下降させる。このとき、吸引ノ
ズル５内では、図２の（ｂ）に示すように、永久磁石６
による磁場により固相５１が吸引ノズル５の内壁に捕捉
された状態となる。

【００３７】次に、電磁弁１８を閉じ、電磁弁１３，１
５を開き、シリンジ２１の動作により吸引ノズル５内に
分離用緩衝液を流す。これにより、吸引ノズル５内の遊
離状の物質５２は、図２の（ｃ）に示すように、吸引ノ
ズル５の外に洗い流される。次いで、電磁弁１３，１５
を閉じ、電磁弁１７を開き、シリンジ２１の動作により
洗浄液ボトル１９の洗浄液をシリンジ２１内に導いた
後、電磁弁１７を閉じ、電磁弁１３，１５を開き、シリ
ンジ２１の動作によりシリンジ２１内の洗浄液を吸引ノ
ズル５内に流し、吸引ノズル５内の洗浄を行う。さら
に、吸引ノズル５の外壁をノズル洗浄槽１０において流
水により洗浄する。

【００３８】次に、吸引ノズル５が測定用緩衝液ボトル
１２の測定用緩衝液を吸引することが可能な位置まで可
動アーム９を移動させつつ、磁石駆動装置２７により永
久磁石２６をフローセル２４に近づけ、固相５１を捕捉
するに十分な磁場を作り出す。次いで、電磁弁１３，１
４，２８を開き、電磁弁１５，２２，２９，３０，３５
を閉じ、測定用緩衝液ボトル１２の測定用緩衝液をシリ
ンジ３１の動作により吸引しフローセル２４の方向へ引
きつつ、磁石駆動装置７により吸引ノズル５から永久磁
石６を遠ざける。これにより、図２の（ｄ）に示すよう
に、固相５１は測定用緩衝液の流れによりフローセル２
４へ導かれ、フローセル２４内で固相５１は永久磁石２
６の磁場により電極上に捕捉される。次いで、ノズル洗
浄槽１０の上方に吸引ノズル５がくるように可動アーム
９を回転させ、吸引ノズル５が所定位置にきたら可動ア
ーム９を下降させる。次いで、電磁弁１３，１５を閉
じ、電磁弁１７を開き、シリンジ２１の動作により洗浄
液ボトル１９の洗浄液をシリンジ２１内に導いた後、電
磁弁１７を閉じ、電磁弁１３，１５を開き、シリンジ２
１の動作によりシリンジ２１内の洗浄液を吸引ノズル５
内に流し、吸引ノズル５内及び導管１１内の洗浄を行
う。次いで、電磁弁１３，１５を閉じ、電磁弁１８を開
き、シリンジ２１の動作により分離用緩衝液ボトル２０
の分離用緩衝液をシリンジ２１内に導いた後、電磁弁１
８を閉じ、電磁弁１３，１５を開き、シリンジ２１の動
作によりシリンジ２１内の分離用緩衝液を吸引ノズル５
内及び導管１１内に流し、次検体に備える。

【００３９】一方、上記のようにフローセル２４内の電
極上に固相５１を捕捉した後、シリンジ３１を停止さ
せ、電磁弁１４，２８を閉じ、その後、発光用電源３７
によりフローセル２４内の電極に電圧を印加する。この
電圧印加によりＲｕ標識物質付き免疫複合体から被対象
ＴＳＨ抗体の量に比例した光が放出され、この光はフォ
トマルチプライヤ２５で検出され、その検出信号は増幅
装置３３で増幅され、コントローラ３４に送られる。コ
ントローラ３４はこのＲｕの発光により得られた信号を
処理し、コントローラ３４内に必要な情報を保存すると
共に、コントローラ３４上の表示装置に表示する。

【００４０】次に、磁石駆動装置２７により永久磁石２
６をフローセル２４から離し、フローセル２４内の電極
上の磁場を解除する。次いで、電磁弁３０を開き、シリ
ンジ３１の動作により洗浄液ボトル３２の洗浄液をシリ
ンジ３１内に導いた後、電磁弁３０を閉じ、電磁弁２
２，２８を開き、シリンジ３１の動作によりシリンジ３
１内の洗浄液をフローセル２４に流し、発光終了後の複
合体を廃液溜２３へ導く。次いで、電磁弁２８を閉じ、
電磁弁３５を開き、シリンジ３１の動作によりコンディ
ショニング液ボトル３６のコンディショニング液をシリ
ンジ３１内に導いた後、電磁弁３５を閉じ、電磁弁２８
を開き、シリンジ３１の動作によりシリンジ３１内のコ
ンディショニング液を導管１１及びフローセル２４に流
し、次検体に備える。

【００４１】既知の濃度のＴＳＨを試料にして測定を行
った際の結果を図３に示す。図３において、実線ａ１は
本実施例の方法により行ったものであり、点線ｂ１は従
来の方法により同一の試薬を用いて行った比較例であ
る。図３から分かるように、第１の実施例の方法により
行ったものは比較例に比べて、低濃度の検出感度が高く
かつ直線性が良くなるという結果が得られた。

【００４２】以上のように第１の実施例においては、吸
引ノズル５において反応混合液中の固相５１を磁気的に
捕捉し、導管１１ａ内に分離用緩衝液ボトル２０の分離
用緩衝液を吸引ノズル５から見てフローセル２４とは逆
方向に流して反応混合液中の遊離状の物質５２をフロー
セル２４を経由させずに導管１１ａ外へ排出しており、
反応混合液中の遊離状の物質５２に含まれる測定試料中
のＴＳＨ単体及びその複合体（標識抗体に測定試料中の
ＴＳＨが結合したもの、これにさらに磁性粒子用の抗Ｔ
ＳＨ抗体が結合したもの）や遊離状の標識物（未反応の
余剰標識抗体、標識抗体に測定試料中のＴＳＨが結合し
たもの、これにさらに磁性粒子用の抗ＴＳＨ抗体が結合
したもの）が導管１１ａ内の吸引ノズル５からフローセ
ル２４までの間を流れることはない。このため、導管１
１ａ内に測定試料中のＴＳＨ単体及びその複合体が付着
することによる次試料への汚染が生じることはなく、被
測定溶液内への目的とする測定対象物以外の物質の混入
が低減され、信頼性の高い測定を行うことが可能とな
る。また、遊離状の標識物による導管１１ａ内の特にフ
ローセル２４周辺への非特異的吸着が低減され、高精度
な測定を行うことが可能となる。さらに、導管１１ａ内
の洗浄操作の際、吸引ノズル５のみを洗浄すればよいこ
ととなるため、洗浄液ボトル１９の洗浄液及び分離用緩
衝液ボトル２０の分離用緩衝液が少なくてすみかつ洗浄
時間が短縮される。また、Ｂ／Ｆ分離に特別の位置及び
構成を必要とせず、かつＢ／Ｆ分離をフロー系で効率よ
く行うことができる。

【００４３】また、吸引ノズル５として着脱可能なプラ
スチック製のディスポーザブルチップを使用したので、
導管１１ａ内の洗浄操作が簡便になると共に、上記反応
混合液中の測定試料中のＴＳＨ単体及びその複合体や遊
離状の標識物の導管１１ａ内への影響をいっそう防止で
きる。

【００４４】また、本実施例では標識物質として電気化
学的発光物質であるＲｕ化合物を使用し、Ｂ／Ｆ分離し
洗浄した後、固相５１を電極を有するフローセル２４に
導き、電極に電位を与え標識物質を発光させるが、この
ように標識物質として電気化学的発光物質を使用する際
には、遊離状の物質５２はフローセル２４を通らずに導
管１１ａ外へ送り出されるため、遊離状の標識物が電極
上に非特異的に吸着することが防止され、測定精度の劣
化のみならず電位の発生に悪影響を与えることも防止さ
れる。

【００４５】また、磁性粒子を比重が１．１〜１．４、
粒径が２．５〜５μｍとしたので高精度な測定が可能と
なると共に、固相５１が吸引ノズル５内に磁気的に捕捉
された際、液の流れによる磁性粒子の落下が防止され、
かつ導管１１内での磁性粒子５１の詰まりが防止され
る。

【００４６】なお、本実施例においては、反応混合液中
の固相５１を磁気的に捕捉する位置を吸引ノズル５内と
したが、固相５１捕捉位置はそれに限らず、フローセル
２４に通ずる導管１１ａの導管１１ｃとの分岐点より上
流側の任意の位置であってもよい。この場合は、反応混
合液中の測定試料中のＴＳＨ単体及びその複合体は導管
１１ａの固相５１捕捉位置からフローセル２４までの間
を流れることはないため、その部分で測定試料中のＴＳ
Ｈ単体及びその複合体が付着することによる次試料への
汚染が生じることはない。このため、導管１１ａ内の汚
染は若干生じるが、導管１１ａ内の全長が汚染される従
来技術に比して汚染の程度は少なく、被測定溶液内への
目的とする測定対象物以外の物質の混入が低減され、信
頼性の高い測定を行うことが可能となる。また、反応混
合液中の遊離状の標識物も導管１１ａの固相５１捕捉位
置からフローセル２４までの間を流れることはないた
め、その部分で遊離状の標識物による導管１１ａ内への
非特異的吸着が生じることはない。このため、導管１１
ａ内の非特異的吸着は若干生じるが、導管１１ａ内の全
長に非特異的吸着が生じ、遊離状の標識物を検出部方向
に排出する従来技術に比して導管１１ａ内の特にフロー
セル２４周辺への非特異的吸着が低減され、高精度な測
定を行うことが可能となる。

【００４７】本発明の第２の実施例を図１及び図４によ
り説明する。本実施例は本発明を２ステップの分析法に
適用したものである。この第２の実施例の免疫学的分析
方法も図１に示す前述した免疫学的分析装置により実施
し、また、使用する磁性粒子の特性、固相に抗体を結合
させる方法、抗体の標識物及び分析項目はすべて第１の
実施例と同じである。以下、第２の実施例による分析操
作過程をＨＣＧ分析を例にとり説明する。

【００４８】まず、ストレプトアビジンを直接結合した
直径約２．８μｍの磁性粒子、ビオチンが直接結合した
抗ＨＣＧ抗体、ＨＣＧを有する測定試料をターンテーブ
ル１上に乗った反応容器２に添加し、ターンテーブル１
及び撹拌機３を駆動させて反応容器２内の溶液を一定時
間撹拌する。撹拌後、３７℃で１５分間加温することに
より、反応容器２内において、抗原抗体反応及びビオチ
ンとストレプトアビジンの結合を起こさせることによ
り、測定試料中のＨＣＧと磁性粒子が結合した複合体が
形成される。

【００４９】次に、可動アーム９を反応容器２の上方に
移動させた後、吸引ノズル５が反応容器２の液面に接す
る位置まで可動アーム９を下降させる。次いで、電磁弁
１３，１５を開き、電磁弁１４，１６，１７，１８は閉
じたままにし、この状態でシリンジ２１の動作により反
応容器２内の測定試料中のＨＣＧと磁性粒子が結合した
複合体を含む反応混合液を一定量吸引する。このとき、
吸引ノズル５内は、図４の（ａ）に示すように、固相５
１ａと遊離状の物質５２ａを含む反応混合液が満たされ
る。ここで、固相５１ａにはＲｕが結合していない未反
応の余剰磁性粒子単体及びＲｕが結合していない磁性粒
子の複合体が含まれる。遊離状の物質５２ａには未反応
の余剰抗ＨＣＧ抗体単体、未反応の測定試料中のＨＣＧ
単体が少量含まれる。

【００５０】次に、電磁弁１３，１５を閉じ、電磁弁１
８を開き、シリンジ２１の動作により分離用緩衝液ボト
ル２０の分離用緩衝液をシリンジ２１内に導きつつ、可
動アーム９を所定の位置まで上昇させ、磁石駆動装置７
により永久磁石６を吸引ノズル５の外壁に近づける。次
いで、ノズル洗浄槽１０の上方に吸引ノズル５がくるよ
うに可動アーム９を回転させ、吸引ノズル５が所定位置
にきたら可動アーム９を下降させる。このとき、吸引ノ
ズル５内では、図４の（ｂ）に示すように、永久磁石６
による磁場により固相５１ａが吸引ノズル５の内壁に捕
捉された状態となる。

【００５１】次に、電磁弁１８を閉じ、電磁弁１３，１
５を開き、シリンジ２１の動作によりシリンジ２１内の
分離用緩衝液を吸引ノズル５内に流す。これにより、吸
引ノズル５内の遊離状の物質５２ａは、図４の（ｃ）に
示すように、吸引ノズル５の外に洗い流される。次い
で、電磁弁１３，１５を閉じ、電磁弁１７を開き、シリ
ンジ２１の動作により洗浄液ボトル１９の洗浄液をシリ
ンジ２１内に導いた後、電磁弁１７を閉じ、電磁弁１
３，１５を開き、シリンジ２１の動作によりシリンジ２
１内の洗浄液を吸引ノズル５内に流し、吸引ノズル５内
の洗浄を行う。さらに、吸引ノズル５の外壁をノズル洗
浄槽１０において流水により洗浄する。

【００５２】次に、吸引ノズル５が反応容器２の上方に
くるよう可動アーム９を移動させた後、磁石駆動装置７
により永久磁石６を吸引ノズル５の外壁から遠ざける。
次いで、電磁弁１３，１５を閉じ、電磁弁１８を開き、
シリンジ２１の動作により分離用緩衝液ボトル２０の分
離用緩衝液をシリンジ２１内に導いた後、電磁弁１８を
閉じ、電磁弁１３，１５を開き、シリンジ２１の動作に
よりシリンジ２１内の分離用緩衝液を吸引ノズル５内に
流し、固相５１ａは、図４の（ｄ）に示すように、吸引
ノズル５から反応容器２に戻される。

【００５３】次に、反応容器２に標識物質としてＲｕが
直接結合した抗ＨＣＧ抗体を分注し、撹拌機３を駆動さ
せて反応容器２内の溶液を一定時間撹拌する。撹拌後、
３７℃で１０分間加温することにより抗原抗体反応を起
こさせる。この抗原抗体反応により反応容器２内におい
て、測定試料中のＨＣＧ濃度に比例した量のＲｕが結合
した固相複合体が形成される。

【００５４】次に、可動アーム９を反応容器２の上方に
移動させた後、吸引ノズル５が反応容器２の液面に接す
る位置まで可動アーム９を下降させる。次いで、電磁弁
１３，１５を開き、電磁弁１４，１６，１７，１８を閉
じた状態で、シリンジ２１の動作により反応容器２内の
測定試料中のＨＣＧの濃度に比例した量のＲｕが結合し
た固相複合体を含む反応混合液を一定量吸引する。この
とき、吸引ノズル５内は、図４の（ｅ）に示すように、
固相５１ｂと遊離状の物質５２ｂを含む反応混合液が満
たされる。ここで、固相５１ｂには測定試料中のＨＣＧ
の濃度に比例した量のＲｕが結合した固相複合体に加え
て、Ｒｕが結合していない未反応の余剰磁性粒子単体及
びＲｕが結合していない磁性粒子の複合体が含まれる。
遊離状の物質５２ｂには未反応の余剰標識抗体（Ｒｕが
直接結合した抗ＨＣＧ抗体単体）が含まれる。

【００５５】次に、電磁弁１３，１５を閉じ、電磁弁１
８を開き、シリンジ２１の動作により分離用緩衝液ボト
ル２０の分離用緩衝液をシリンジ２１内に導きつつ、可
動アーム９を所定の位置まで上昇させ、磁石駆動装置７
により永久磁石６を吸引ノズル５の外壁に近づける。次
いで、ノズル洗浄槽１０の上方に吸引ノズル５がくるよ
うに可動アーム９を回転させ、吸引ノズル５が所定位置
にきたら可動アーム９を下降させる。このとき、吸引ノ
ズル５内では、図４の（ｆ）に示すように、永久磁石６
による磁場により固相５１ｂが吸引ノズル５の内壁に捕
捉された状態となる。

【００５６】次に、電磁弁１８を閉じ、電磁弁１３，１
５を開き、シリンジ２１の動作により吸引ノズル５内に
分離用緩衝液を流す。これにより、吸引ノズル５内の遊
離状の物質５２ｂは、図４の（ｇ）に示すように、吸引
ノズル５の外に洗い流される。次いで、電磁弁１３，１
５を閉じ、電磁弁１７を開き、シリンジ２１の動作によ
り洗浄液ボトル１９の洗浄液をシリンジ２１内に導いた
後、電磁弁１７を閉じ、電磁弁１３，１５を開き、シリ
ンジ２１の動作によりシリンジ２１内の洗浄液を吸引ノ
ズル５内に流し、吸引ノズル５内の洗浄を行う。さら
に、吸引ノズル５の外壁をノズル洗浄槽１０において流
水により洗浄する。

【００５７】以下、第１の実施例の場合と同様に、図４
の（ｈ）に示すように、固相５１ｂをフローセル２４に
導入してフローセル２４内の電極上に捕捉し、所定のシ
ーケンスによる電圧印加により放出される光をフォトマ
ルチプライヤ２５で検出し、その後、フローセル２４の
洗浄及びコンディショニングを行う。

【００５８】既知の濃度のＨＣＧを試料にして測定を行
った結果、濃度と得られる光の量との間に良好な比例関
係が得られた。

【００５９】以上のように第２の実施例においては、吸
引ノズル５において反応混合液中の固相５１ａ，５１ｂ
を磁気的に捕捉し、導管１１ａ内に分離用緩衝液ボトル
２０の分離用緩衝液を吸引ノズル５から見てフローセル
２４とは逆方向に流して反応混合液中の遊離状の物質５
２ａ，５２ｂをフローセル２４を経由させずに導管１１
ａ外へ排出しており、反応混合液中の測定試料中のＨＣ
Ｇ単体及びその複合体（標識抗体に測定試料中のＨＣＧ
が結合したもの、これにさらに磁性粒子用の抗Ｔ３抗体
が結合したもの）や遊離状の標識物（未反応の余剰標識
抗体、標識抗体に測定試料中のＨＣＧが結合したもの、
これにさらに磁性粒子用の抗ＨＣＧ抗体が結合したも
の）は導管１１ａ内の吸引ノズル５からフローセル２４
までの間を流れることはない。このため、第１の実施例
と同様に、導管１１ａ内に測定試料中のＨＣＧ単体及び
その複合体が付着することによる次試料への汚染が生じ
ることはなく、被測定溶液内への目的とする測定対象物
以外の物質の混入が低減され、信頼性の高い測定を行う
ことが可能となる。また、遊離状の標識物による導管１
１ａ内の特にフローセル２４周辺への非特異的吸着が低
減され、高精度な測定を行うことが可能となる。さら
に、本実施例においては、固相５１ａと遊離状の物質５
２ａを分離した後、固相５１ａと標識抗体を抗原抗体反
応させるようにしたので、測定試料中のＨＣＧ単体及び
その複合体が生成されることは極めて少なく、仮に固相
複合体を生成する標識抗体と測定試料中のＨＣＧが分離
し遊離したとしても、上記の如く測定試料中のＨＣＧ単
体及びその複合体は導管１１ａ内の吸引ノズル５からフ
ローセル２４までの間を流れることはないため、導管１
１ａ内への影響をいっそう防止できる。

【００６０】以上の第２の実施例においては、固相５１
ｂを磁気的に捕捉した後、導管１１ａ内に分離用緩衝液
ボトル２０の分離用緩衝液を吸引ノズル５から見てフロ
ーセル２４とは逆方向に流すことにより固相５１ｂと遊
離状の物質５２ｂとを分離するものとしたが、それに限
らず、吸引ノズル５から見てフローセル２４と同方向に
流して反応混合液中の遊離状の物質５２ａ，５２ｂをフ
ローセル２４を経由させずに導管１１ａ外へ排出しても
よい。この場合は、未反応の余剰標識抗体がフローセル
２４と同方向に導入されるため、固相５１ｂと遊離状の
物質５２ｂを分離する場合に比して導管１１ａ内に非特
異的吸着が生じるが、導管１１ａ内に測定試料中のＨＣ
Ｇ単体及びその複合体が付着することによる次試料への
汚染が生じることはなく、被測定溶液内への目的とする
測定対象物以外の物質の混入が低減され、信頼性の高い
測定を行うことが可能となるという効果が得られる。

【００６１】なお、第１及び第２の実施例において、固
相５１，５１ａ，５１ｂを捕捉するための磁場の発生源
として永久磁石６，２６を使用したが、電磁石を使用し
てもよく、この場合には、コイルに流れる電流を制御す
るための装置が必要になる。

【００６２】また、本発明の免疫学的分析方法及び装置
は抗原抗体反応に限らず、特異的な結合性を示す反応で
あれば使用することが可能であり、例えばＤＮＡ（デオ
キシリボ核酸）とＤＮＡ、あるいはＤＮＡとＲＮＡ（リ
ボ核酸）がその塩基配列により特異的に塩基対を形成す
る性質を利用し、遺伝子診断に使用することも可能であ
る。

【００６３】

【発明の効果】本発明によれば、検出部に通ずる経路の
所定の部位において反応混合液中の固相を磁気的に捕捉
し、経路内に洗浄液を所定の部位から見て検出部とは逆
方向に流して反応混合液中の遊離状の物質を検出部を経
由させずに経路外へ排出するようにしたので、被測定溶
液内への目的とする測定対象物以外の物質の混入が低減
され、信頼性の高い測定を行うことが可能となる。ま
た、遊離状の標識物による経路の特に検出部周辺への非
特異的吸着が低減され、高精度な測定を行うことが可能
となる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の第１及び第２の実施例による免疫学的
分析装置の構成を示す図である。

【図２】本発明の第１の実施例によるＢ／Ｆ分離の様子
を示す図である。

【図３】本発明の第１の実施例による分析結果を示す図
である。

【図４】本発明の第２の実施例によるＢ／Ｆ分離の様子
を示す図である。

【符号の説明】

２ 反応容器 ５ 吸引ノズル ６ 永久磁石 １０ ノズル洗浄槽 １１ａ 導管 １２ 測定用緩衝液ボトル １９ 洗浄液ボトル ２０ 分離用緩衝液ボトル ２１ シリンジ ２４ フローセル ２６ 永久磁石 ３１ シリンジ ３２ 洗浄液ボトル ３６ コンディショニング液ボトル ５１，５１ａ，５１ｂ 固相 ５２，５２ａ，５２ｂ 遊離状の物質

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 抗原抗体反応を利用して試料中の測定対
   象物を免疫学的に測定する免疫学的分析方法において、 試料と、固相としての磁性粒子と、この磁性粒子を前記
   試料中の測定対象物に結合させる抗体と、標識物質をラ
   ベルした標識抗体とを反応容器内で混合して抗原抗体反
   応を行わせ、試料中の測定対象物に固相及び標識物質が
   結合した複合体を含む反応混合液を生成する第１手順
   と、 前記反応容器内の反応混合液を検出部に通ずる経路に導
   き、その経路の所定の部位において前記反応混合液中の
   固相を磁気的に捕捉する第２手順と、 前記経路内に洗浄液を前記所定の部位から見て前記検出
   部とは逆方向に流し、前記反応混合液中の磁気的に捕捉
   されなかった遊離状の物質を前記検出部を経由させずに
   経路外へ排出する第３手順と、 前記磁気的に捕捉した固相を前記検出部に導入する第４
   手順とを含むことを特徴とする免疫学的分析方法。
2. 【請求項２】 抗原抗体反応を利用して試料中の測定対
   象物を免疫学的に測定する免疫学的分析方法において、 試料と、固相としての磁性粒子と、この磁性粒子を前記
   試料中の測定対象物に結合させる抗体とを反応容器内で
   混合して抗原抗体反応を行わせ、試料中の測定対象物に
   固相が結合した第１複合体を含む第１反応混合液を生成
   する第１手順と、 前記反応容器内の第１反応混合液を検出部に通ずる経路
   に導き、その経路の所定の部位において前記第１反応混
   合液中の固相を磁気的に捕捉する第２手順と、 前記経路内に洗浄液を前記所定の部位から見て前記検出
   部とは逆方向に流し、前記第１反応混合液中の磁気的に
   捕捉されなかった遊離状の物質を前記検出部を経由させ
   ずに経路外へ排出する第３手順と、 前記磁気的に捕捉した固相を前記反応容器に戻し、標識
   物質をラベルした標識抗体と混合して抗原抗体反応を行
   わせ、前記第１複合体の測定対象物及び固相に標識物質
   が結合した第２複合体を含む第２反応混合液を生成する
   第４手順と、 前記反応容器内の第２反応混合液を前記経路に再び導い
   て、前記経路の所定の部位において前記第２反応混合液
   中の固相を磁気的に捕捉する第５手順と、 前記経路内に洗浄液を流し、前記第２反応混合液中の磁
   気的に捕捉されなかった遊離状の物質を前記検出部を経
   由させずに経路外へ排出する第６手順と、 前記磁気的に捕捉した固相を前記検出部に導入する第７
   手順とを含むことを特徴とする免疫学的分析方法。
3. 【請求項３】 請求項２記載の免疫学的分析方法におい
   て、前記第６手順は、前記経路内に洗浄液を前記所定の
   部位から見て前記検出部とは逆方向に流し、前記第２反
   応混合液中の磁気的に捕捉されなかった遊離状の物質を
   前記検出部を経由させずに経路外へ排出する手順である
   ことを特徴とする免疫学的分析方法。
4. 【請求項４】 請求項１または２項記載の免疫学的分析
   方法において、前記経路は先端に位置する吸引ノズルと
   この吸引ノズルを前記検出部に接続する導管とからな
   り、前記所定の部位を前記吸引ノズルとすることを特徴
   とする免疫学的分析方法。
5. 【請求項５】 請求項４記載の免疫学的分析方法におい
   て、前記吸引ノズルとして着脱可能なプラスチック製の
   ディスポーザブルチップを使用することを特徴とする免
   疫学的分析方法。
6. 【請求項６】 請求項１または２記載の免疫学的分析方
   法において、前記標識物質として電気化学的に発光する
   物質を使用し、前記検出部は電極を有するものとし、前
   記検出部において電気化学発光を利用することにより前
   記免疫複合体の前記標識物質の量を測定することを特徴
   とする免疫学的分析方法。
7. 【請求項７】 請求項１または２記載の免疫学的分析方
   法において、前記磁性粒子として比重が１．１〜１．
   ４、粒径が２．５〜５μｍのものを使用することを特徴
   とする免疫学的分析方法。
8. 【請求項８】 抗原抗体反応を利用して試料中の特定成
   分を免疫学的に測定する免疫学的分析装置において、 試料と、固相としての磁性粒子と、この磁性粒子を前記
   試料中の測定対象物に結合させる抗体と、標識物質をラ
   ベルした標識抗体とを混合して抗原抗体反応を行わせ、
   試料中の測定対象物に固相及び標識物質が結合した複合
   体を含む反応混合液を生成する反応容器と、 前記反応容器内の反応混合液を吸引するノズル及びその
   吸引ノズルを検出部に接続する導管と、 前記吸引ノズル及び導管を含む経路の所定の部位に設置
   され、この所定の部位に導かれた前記反応混合液中の固
   相を磁気的に捕捉する磁石と、 前記経路内に洗浄液を前記所定の部位からみて前記検出
   部とは逆方向に流し、前記反応混合液中の磁気的に捕捉
   されなかった遊離状の物質を前記検出部を経由させずに
   排出する手段と、 前記経路内に緩衝液を前記所定の部位からみて前記検出
   部に向かう方向に流し、前記反応混合液中の磁気的に捕
   捉された固相を前記検出部に導入する手段とを備えるこ
   とを特徴とする免疫学的分析装置。
9. 【請求項９】 請求項８記載の免疫学的分析装置におい
   て、前記磁石は前記吸引ノズルに隣接して設置されるこ
   とを特徴とする免疫学的分析装置。