JPH08261999A - 有機被検体の痕跡量の改良された固相ミクロ抽出 - Google Patents
有機被検体の痕跡量の改良された固相ミクロ抽出Info
- Publication number
- JPH08261999A JPH08261999A JP8065409A JP6540996A JPH08261999A JP H08261999 A JPH08261999 A JP H08261999A JP 8065409 A JP8065409 A JP 8065409A JP 6540996 A JP6540996 A JP 6540996A JP H08261999 A JPH08261999 A JP H08261999A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- organic
- carrier matrix
- analyte
- organic solvent
- trace amount
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/40—Concentrating samples
- G01N1/405—Concentrating samples by adsorption or absorption
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/40—Concentrating samples
- G01N1/4055—Concentrating samples by solubility techniques
- G01N2001/4061—Solvent extraction
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N2030/009—Extraction
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/16—Phosphorus containing
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/19—Halogen containing
- Y10T436/196666—Carbon containing compound [e.g., vinylchloride, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/21—Hydrocarbon
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/21—Hydrocarbon
- Y10T436/212—Aromatic
Landscapes
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明の目的は、有機被検体の痕跡量を固相
ミクロ抽出する方法の提供である。 【構成】 必要なら、有機溶媒担体マトリックス中の痕
跡量の有機被検体を濃縮し、痕跡量の有機被検体を固相
ミクロ抽出装置の繊維上に吸収し、痕跡量の有機被検体
をその繊維から分析装置中に脱着させる方法に於いて、
繊維上に痕跡量の有機被検体を吸収するに先立ち、痕跡
量の有機被検体を含有する有機溶媒担体マトリックスに
水を加え混合物を生じ、混合物から有機溶媒担体マトリ
ックスを除去して、水性担体マトリックス中の痕跡量の
有機被検体の検出試料を生じることを特徴とする。
ミクロ抽出する方法の提供である。 【構成】 必要なら、有機溶媒担体マトリックス中の痕
跡量の有機被検体を濃縮し、痕跡量の有機被検体を固相
ミクロ抽出装置の繊維上に吸収し、痕跡量の有機被検体
をその繊維から分析装置中に脱着させる方法に於いて、
繊維上に痕跡量の有機被検体を吸収するに先立ち、痕跡
量の有機被検体を含有する有機溶媒担体マトリックスに
水を加え混合物を生じ、混合物から有機溶媒担体マトリ
ックスを除去して、水性担体マトリックス中の痕跡量の
有機被検体の検出試料を生じることを特徴とする。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、有機被検体、特に半揮
発性有機被検体の痕跡量を検出する改良方法、そしてそ
れに関してより良い検出感度を達成する為の改良方法に
関する。本発明はより詳しくは、例えば環境試料中の殺
虫剤残留物などの半揮発性有機被検体の痕跡量を検出す
るための、そしてそれに関してより良い検出感度を達成
するための繊維（ファイバ−）を使用する、改良された
固相ミクロ抽出法に関する。
発性有機被検体の痕跡量を検出する改良方法、そしてそ
れに関してより良い検出感度を達成する為の改良方法に
関する。本発明はより詳しくは、例えば環境試料中の殺
虫剤残留物などの半揮発性有機被検体の痕跡量を検出す
るための、そしてそれに関してより良い検出感度を達成
するための繊維（ファイバ−）を使用する、改良された
固相ミクロ抽出法に関する。
【０００２】
【従来の技術】土壌、水、フライアッシュ、組織又は他
の物質などの環境試料の分析等の試料の分析に於いて
は、マトリックスからの問題の被検体の痕跡残留物に対
しては、一般に、抽出を行い、次に、より良い検出感度
を達成するために被検体の含量を濃縮するのが一般的で
ある。一般的に使用される濃縮法の中でも、例えば溶媒
の減少した含有量によって、有機被検体を含有している
希釈溶液の単純な濃縮、その後で抽出物の濃縮を行うの
が一般的である液-液又は液-固（固相）抽出、その後で
固体又はトラップから被検体を脱着させるのが一般的で
ある、ガス-固抽出又はパ−ジとトラップ法、ソックス
レ−装置を用いるもの等の技術を使用する有機溶媒での
固体試料からの被検体の浸出／抽出、及び超臨界流体抽
出が挙げられる。
の物質などの環境試料の分析等の試料の分析に於いて
は、マトリックスからの問題の被検体の痕跡残留物に対
しては、一般に、抽出を行い、次に、より良い検出感度
を達成するために被検体の含量を濃縮するのが一般的で
ある。一般的に使用される濃縮法の中でも、例えば溶媒
の減少した含有量によって、有機被検体を含有している
希釈溶液の単純な濃縮、その後で抽出物の濃縮を行うの
が一般的である液-液又は液-固（固相）抽出、その後で
固体又はトラップから被検体を脱着させるのが一般的で
ある、ガス-固抽出又はパ−ジとトラップ法、ソックス
レ−装置を用いるもの等の技術を使用する有機溶媒での
固体試料からの被検体の浸出／抽出、及び超臨界流体抽
出が挙げられる。
【０００３】しかしながら、有機溶媒の使用は処分がで
きるかどうかや、毒性等の問題を提起する。従って、最
近、溶媒の使用を除去するために、カナダ国オンタリオ
州ユニバ−シティ・オブ・ウォ−タ−ロ−のジャヌ−ズ
・ポ−リズィン(Janusz Pawliszyn)によって、固相ミク
ロ抽出（ＳＰＭＥ）方法が開発された。ＳＰＭＥ方法及
びその為の装置は、例えば1991年10月17日に公開された
ジェイ．ポ−リズィンの国際特許出願（ＰＣＴ）公開WO
91/15745中に開示されており、それは参照により本明
細書に含める。
きるかどうかや、毒性等の問題を提起する。従って、最
近、溶媒の使用を除去するために、カナダ国オンタリオ
州ユニバ−シティ・オブ・ウォ−タ−ロ−のジャヌ−ズ
・ポ−リズィン(Janusz Pawliszyn)によって、固相ミク
ロ抽出（ＳＰＭＥ）方法が開発された。ＳＰＭＥ方法及
びその為の装置は、例えば1991年10月17日に公開された
ジェイ．ポ−リズィンの国際特許出願（ＰＣＴ）公開WO
91/15745中に開示されており、それは参照により本明
細書に含める。
【０００４】上記のＳＰＭＥ方法に於いては、注射器の
針内に収容された被覆された又は被覆されていない繊維
が、被検体の繊維又は被覆繊維上への抽出が起きるのに
十分な期間、流体担体又は担体上のヘッドスペ−ス中の
成分／被検体と接触させられる。その後、繊維は担体か
ら又は担体上のヘッドスペ−スから除去され、そして被
検体は、被検体の検出及び計量の為にガスクロマトグラ
フィ−（ＧＣ）などの分析装置中への熱的脱着により、
一般的に繊維から脱着される。
針内に収容された被覆された又は被覆されていない繊維
が、被検体の繊維又は被覆繊維上への抽出が起きるのに
十分な期間、流体担体又は担体上のヘッドスペ−ス中の
成分／被検体と接触させられる。その後、繊維は担体か
ら又は担体上のヘッドスペ−スから除去され、そして被
検体は、被検体の検出及び計量の為にガスクロマトグラ
フィ−（ＧＣ）などの分析装置中への熱的脱着により、
一般的に繊維から脱着される。
【０００５】ＳＰＭＥは、種々の被検体に対し非常に有
用な試料調製技術であることが示されてきた。しかしな
がら、ＳＰＭＥ抽出及び検出は、ある種の非常に厳しい
制限を有している。１つの特定の厳しい制限は、ＳＰＭ
Ｅを有機溶媒担体マトリックス中の痕跡有機被検体の抽
出の為に用いようとすることに関連している。基本的
に、ＳＰＭＥは一般的に、ヘキサン等の有機溶媒担体マ
トリックスから痕跡量の有機被検体を抽出する為に応用
できない。ＳＰＭＥを有機溶媒担体マトリックスから有
機被検体の痕跡量を抽出しようとする試みは、溶媒マト
リックスがＳＰＭＥ装置の被覆繊維により抽出されるた
めに、受入れられる結果を提供しない。有機被検体の抽
出の為のＳＰＭＥ繊維は、一般的に非極性ポリ（ジメチ
ルシロキサン）（ＰＤＭＳ）などの有機相で被覆されて
いる。痕跡量の有機被検体が繊維上の有機相被膜上に又
は被膜中に吸着される代わりに、溶媒担体マトリックス
成分自体が、試料中での圧倒的に優勢な存在の為に、有
機相上に吸着又は抽出される。これは、痕跡量の有機被
検体の選択的な効率的な抽出を妨げる。この理由の為、
ＳＰＭＥは、有機溶媒担体マトリックスから痕跡量の有
機被検体を抽出する為に、いかなる実用的な応用もされ
ていない。むしろＳＰＭＥ担体マトリックスは、一般的
に主に水性マトリックス、例えば水、水-メタノ−ル（9
5:5）マトリックス、又は水性無機塩溶液マトリックス
から成っている。
用な試料調製技術であることが示されてきた。しかしな
がら、ＳＰＭＥ抽出及び検出は、ある種の非常に厳しい
制限を有している。１つの特定の厳しい制限は、ＳＰＭ
Ｅを有機溶媒担体マトリックス中の痕跡有機被検体の抽
出の為に用いようとすることに関連している。基本的
に、ＳＰＭＥは一般的に、ヘキサン等の有機溶媒担体マ
トリックスから痕跡量の有機被検体を抽出する為に応用
できない。ＳＰＭＥを有機溶媒担体マトリックスから有
機被検体の痕跡量を抽出しようとする試みは、溶媒マト
リックスがＳＰＭＥ装置の被覆繊維により抽出されるた
めに、受入れられる結果を提供しない。有機被検体の抽
出の為のＳＰＭＥ繊維は、一般的に非極性ポリ（ジメチ
ルシロキサン）（ＰＤＭＳ）などの有機相で被覆されて
いる。痕跡量の有機被検体が繊維上の有機相被膜上に又
は被膜中に吸着される代わりに、溶媒担体マトリックス
成分自体が、試料中での圧倒的に優勢な存在の為に、有
機相上に吸着又は抽出される。これは、痕跡量の有機被
検体の選択的な効率的な抽出を妨げる。この理由の為、
ＳＰＭＥは、有機溶媒担体マトリックスから痕跡量の有
機被検体を抽出する為に、いかなる実用的な応用もされ
ていない。むしろＳＰＭＥ担体マトリックスは、一般的
に主に水性マトリックス、例えば水、水-メタノ−ル（9
5:5）マトリックス、又は水性無機塩溶液マトリックス
から成っている。
【０００６】試料中の痕跡量の有機被検体の有機分析及
び検出の為の通常の試料濃縮及び調製技術の多くは、有
機溶媒担体マトリックス中に有機被検体を溶解するのに
有機溶媒担体マトリックスと試料との接触を伴い、又は
痕跡量の有機被検体を何等かの方法で有機溶媒担体マト
リックス中に抽出することを伴うので、このことは、Ｓ
ＰＭＥ抽出手順の使用に対する特に重大な制限である。
例えば、米国環境保護局（ＥＰＡ）方法608及び525.1
は、地方自治体及び産業廃液又は飲料水等の、水性試料
からの殺虫剤及びポリ芳香族有機化合物等の半揮発性有
機化合物を、有機溶媒中に液-液抽出又は液-固抽出する
ことを要求している。有機溶媒は有機被検体に対する高
い溶解度／溶解力を有するから使用される。その後の抽
出物の濃縮及びその分析は、十分良好な検出を与え得
る。しかしながら、検出感度が特に良好ではなく、一般
に１ｐｐｂ未満の痕跡量の検出はマス・スペクトロメ−
タ−で得るためには困難もしくは不可能である。更に、
有機溶媒担体マトリックス中の痕跡量の有機被検体の為
のこの種の分析に対してＳＰＭＥ法を応用する試みは、
前に述べたように、圧倒的に優勢な有機溶媒担体マトリ
ックスの存在の為に、有機溶媒担体マトリックスから痕
跡量の有機被検体を選択的に抽出することに失敗した。
び検出の為の通常の試料濃縮及び調製技術の多くは、有
機溶媒担体マトリックス中に有機被検体を溶解するのに
有機溶媒担体マトリックスと試料との接触を伴い、又は
痕跡量の有機被検体を何等かの方法で有機溶媒担体マト
リックス中に抽出することを伴うので、このことは、Ｓ
ＰＭＥ抽出手順の使用に対する特に重大な制限である。
例えば、米国環境保護局（ＥＰＡ）方法608及び525.1
は、地方自治体及び産業廃液又は飲料水等の、水性試料
からの殺虫剤及びポリ芳香族有機化合物等の半揮発性有
機化合物を、有機溶媒中に液-液抽出又は液-固抽出する
ことを要求している。有機溶媒は有機被検体に対する高
い溶解度／溶解力を有するから使用される。その後の抽
出物の濃縮及びその分析は、十分良好な検出を与え得
る。しかしながら、検出感度が特に良好ではなく、一般
に１ｐｐｂ未満の痕跡量の検出はマス・スペクトロメ−
タ−で得るためには困難もしくは不可能である。更に、
有機溶媒担体マトリックス中の痕跡量の有機被検体の為
のこの種の分析に対してＳＰＭＥ法を応用する試みは、
前に述べたように、圧倒的に優勢な有機溶媒担体マトリ
ックスの存在の為に、有機溶媒担体マトリックスから痕
跡量の有機被検体を選択的に抽出することに失敗した。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、有機溶媒担体マトリックス中に抽出もしくは溶解さ
れた痕跡量の有機被検体に対し、ＳＰＭＥ抽出及び検出
手順が適用できることを可能とする方法を提供すること
である。本発明の更に別の目的は、有機溶媒担体マトリ
ックス中に抽出又は溶解された痕跡量の半揮発性有機被
検体に対し、ＳＰＭＥ抽出又は検出手順が適用できる方
法を提供することである。本発明の更に別の目的は、有
機溶媒担体マトリックス中に抽出又は溶解された痕跡量
の有機被検体、そして特に痕跡量の半揮発性有機被検体
を検出するためのＳＰＭＥ手順であって、有意に強化さ
れた検出感度、即ち100倍又はそれ以上増加した検出感
度を達成したＳＰＭＥ手順を提供することである。本発
明の更に別の追加的な目的は、有機溶媒担体マトリック
ス中に抽出又は溶解された痕跡量の有機被検体、そして
特に半揮発性の有機被検体を検出するためのＳＰＭＥ手
順を提供することである。本発明の更に別の目的は、そ
のような痕跡量の有機被検体の検出の為の検出法であっ
て、既存の技術及び装置で到達することが現在非常に困
難もしくは殆ど不可能である検出感度水準まで、すなわ
ちｐｐｑ（1/1024部,parts per quadrillion）の水準ま
で検出する検出方法を提供することである。
は、有機溶媒担体マトリックス中に抽出もしくは溶解さ
れた痕跡量の有機被検体に対し、ＳＰＭＥ抽出及び検出
手順が適用できることを可能とする方法を提供すること
である。本発明の更に別の目的は、有機溶媒担体マトリ
ックス中に抽出又は溶解された痕跡量の半揮発性有機被
検体に対し、ＳＰＭＥ抽出又は検出手順が適用できる方
法を提供することである。本発明の更に別の目的は、有
機溶媒担体マトリックス中に抽出又は溶解された痕跡量
の有機被検体、そして特に痕跡量の半揮発性有機被検体
を検出するためのＳＰＭＥ手順であって、有意に強化さ
れた検出感度、即ち100倍又はそれ以上増加した検出感
度を達成したＳＰＭＥ手順を提供することである。本発
明の更に別の追加的な目的は、有機溶媒担体マトリック
ス中に抽出又は溶解された痕跡量の有機被検体、そして
特に半揮発性の有機被検体を検出するためのＳＰＭＥ手
順を提供することである。本発明の更に別の目的は、そ
のような痕跡量の有機被検体の検出の為の検出法であっ
て、既存の技術及び装置で到達することが現在非常に困
難もしくは殆ど不可能である検出感度水準まで、すなわ
ちｐｐｑ（1/1024部,parts per quadrillion）の水準ま
で検出する検出方法を提供することである。
【０００８】
【課題を解決する手段】本発明に従って痕跡量の有機被
検体を有機溶媒担体マトリックスから抽出及び検出する
のに有用なＳＰＭＥ手順を利用する方法が開発された。
この発明は、慣用の知恵、知識及び実施法に対し、ある
段階を加えることを含んでおり、それは痕跡量の有機被
検体のＳＰＭＥ繊維抽出に対し非常に不都合な条件を、
高度に好都合な条件に変換するための、担体マトリック
ス交換段階を含んでいるという点である。本発明に従う
と、水性担体マトリックスで有機溶媒担体マトリックス
が置き換えられる。そのような交換は、多くの有機被検
体が水中に不要であると考えられているので、慣用の知
恵に対し逆行するように見える。しかしながら本発明に
於いては、痕跡量の有機被検体の為の有機溶媒担体マト
リックスを水性担体マトリックスで置き換えることが、
水及び痕跡量の有機被検体の均質水性溶液を生じ、痕跡
量の有機分析に於けるＳＰＭＥの使用の為に非常に好都
合な環境又は条件を与えることが発見された。明らかに
水中に不溶であると考えられる有機化合物が、ppm、pp
b、ppt、及びppq等の痕跡又は超痕跡量水準では水性マ
トリックス中に可溶である。
検体を有機溶媒担体マトリックスから抽出及び検出する
のに有用なＳＰＭＥ手順を利用する方法が開発された。
この発明は、慣用の知恵、知識及び実施法に対し、ある
段階を加えることを含んでおり、それは痕跡量の有機被
検体のＳＰＭＥ繊維抽出に対し非常に不都合な条件を、
高度に好都合な条件に変換するための、担体マトリック
ス交換段階を含んでいるという点である。本発明に従う
と、水性担体マトリックスで有機溶媒担体マトリックス
が置き換えられる。そのような交換は、多くの有機被検
体が水中に不要であると考えられているので、慣用の知
恵に対し逆行するように見える。しかしながら本発明に
於いては、痕跡量の有機被検体の為の有機溶媒担体マト
リックスを水性担体マトリックスで置き換えることが、
水及び痕跡量の有機被検体の均質水性溶液を生じ、痕跡
量の有機分析に於けるＳＰＭＥの使用の為に非常に好都
合な環境又は条件を与えることが発見された。明らかに
水中に不溶であると考えられる有機化合物が、ppm、pp
b、ppt、及びppq等の痕跡又は超痕跡量水準では水性マ
トリックス中に可溶である。
【０００９】従って本発明は、有機溶媒担体マトリック
ス中に溶解された、又は有機溶媒担体マトリックスによ
って試料から抽出可能な有機被検体、そして特に半揮発
性の有機被検体の存在する疑いのある痕跡量の検出感度
を増強する方法、そしてその後でその痕跡量の有機被検
体をＳＰＭＥにより抽出及び分析する方法からなってお
り、ここで改良点は、ＳＰＭＥ繊維抽出を行って痕跡量
の有機被検体を検出することの前に、痕跡量の有機被検
体を含有している有機溶媒担体マトリックスを、水性担
体マトリックスで交換することを含んでいる。
ス中に溶解された、又は有機溶媒担体マトリックスによ
って試料から抽出可能な有機被検体、そして特に半揮発
性の有機被検体の存在する疑いのある痕跡量の検出感度
を増強する方法、そしてその後でその痕跡量の有機被検
体をＳＰＭＥにより抽出及び分析する方法からなってお
り、ここで改良点は、ＳＰＭＥ繊維抽出を行って痕跡量
の有機被検体を検出することの前に、痕跡量の有機被検
体を含有している有機溶媒担体マトリックスを、水性担
体マトリックスで交換することを含んでいる。
【００１０】環境試料からの有機被検体の痕跡量を検出
するための本発明の改良方法は、（１）有機被検体の痕
跡量を含有していることが疑われる環境試料を準備し、
（２）もしその環境試料が有機溶媒担体マトリックスを
既に有していない時は、その環境試料から痕跡量の有機
被検体の全てを有機溶媒抽出して、その痕跡量の有機被
検体がその中で可溶である有機溶媒担体マトリックス中
に移し、（３）必要ならば、該有機溶媒担体マトリック
ス中の痕跡量の有機被検体を、その有機溶媒の一部を除
去することによって濃縮し、（４）その後これに水を加
え混合物を形成し、そして有機溶媒担体マトリックスを
そこから除去することによって、その有機溶媒担体マト
リックスを交換してして、その痕跡量の有機被検体を含
有している水性担体マトリックスからなる検出試料を生
じ、その後で、（５）痕跡量の有機被検体が水性担体マ
トリックスから繊維へ抽出されることが起きるのに十分
な期間、ＳＰＭＥ抽出装置の繊維をその水性担体マトリ
ックス、又はその水性担体マトリックス上の囲まれたヘ
ッドスペ−スと接触させ、（６）その後でその繊維を水
性担体マトリックス又は囲まれたヘッドスペ−スから取
り除いて、繊維から有機被検体を分析装置中に脱着させ
て、その痕跡量の有機被検体の１又はそれ以上を検出
し、そして（７）その有機被検体の１又はそれ以上をそ
の分析装置中で検出することによって、その検出試料に
対しＳＰＭＥを実施することからなる。
するための本発明の改良方法は、（１）有機被検体の痕
跡量を含有していることが疑われる環境試料を準備し、
（２）もしその環境試料が有機溶媒担体マトリックスを
既に有していない時は、その環境試料から痕跡量の有機
被検体の全てを有機溶媒抽出して、その痕跡量の有機被
検体がその中で可溶である有機溶媒担体マトリックス中
に移し、（３）必要ならば、該有機溶媒担体マトリック
ス中の痕跡量の有機被検体を、その有機溶媒の一部を除
去することによって濃縮し、（４）その後これに水を加
え混合物を形成し、そして有機溶媒担体マトリックスを
そこから除去することによって、その有機溶媒担体マト
リックスを交換してして、その痕跡量の有機被検体を含
有している水性担体マトリックスからなる検出試料を生
じ、その後で、（５）痕跡量の有機被検体が水性担体マ
トリックスから繊維へ抽出されることが起きるのに十分
な期間、ＳＰＭＥ抽出装置の繊維をその水性担体マトリ
ックス、又はその水性担体マトリックス上の囲まれたヘ
ッドスペ−スと接触させ、（６）その後でその繊維を水
性担体マトリックス又は囲まれたヘッドスペ−スから取
り除いて、繊維から有機被検体を分析装置中に脱着させ
て、その痕跡量の有機被検体の１又はそれ以上を検出
し、そして（７）その有機被検体の１又はそれ以上をそ
の分析装置中で検出することによって、その検出試料に
対しＳＰＭＥを実施することからなる。
【００１１】本発明を、図面と関係させて説明する。図
１は、有機溶媒（ヘキサン）担体マトリックス中の痕跡
量の有機殺虫剤被検体をＳＰＭＥ法で検出することを試
みたクロマトグラムであり、図２は、ヘキサン溶媒のみ
のＳＰＭＥ抽出の為の対照クロマトグラムであり、図３
は、本発明の改良方法に従って得られた、水性担体マト
リックス中の痕跡量の有機殺虫剤被検体のＳＰＭＥ抽出
のクロマトグラムであり、図４は、14の有機殺虫剤被検
体の塩化メチレン溶媒に基づく濃縮物のクロマトグラム
であり、図５は、本発明の改良方法に従って得られた水
性担体マトリックス中の痕跡量の有機殺虫剤被検体のＳ
ＰＭＥ抽出のクロマトグラムであり、図６は、殺虫剤ピ
−クを同定している図５のクロマトグラムの詳細な部分
であり、図７は、本発明の改良方法なしに水性担体マト
リックス中の痕跡量の有機殺虫剤被検体のＳＰＭＥ抽出
のクロマトグラムであり、図８は、本発明の方法改良段
階を有する水性担体マトリックス中の痕跡量（ppt及びp
pt未満）の有機殺虫剤被検体のＳＰＭＥ抽出のクロマト
グラムであり、図９は、図８のクロマトグラムを生じた
ＳＰＭＥ抽出に於いて用いられたバックグラウンド・マ
トリックス試薬溶媒及びＳＰＭＥ装置の参照クロマトグ
ラムである。
１は、有機溶媒（ヘキサン）担体マトリックス中の痕跡
量の有機殺虫剤被検体をＳＰＭＥ法で検出することを試
みたクロマトグラムであり、図２は、ヘキサン溶媒のみ
のＳＰＭＥ抽出の為の対照クロマトグラムであり、図３
は、本発明の改良方法に従って得られた、水性担体マト
リックス中の痕跡量の有機殺虫剤被検体のＳＰＭＥ抽出
のクロマトグラムであり、図４は、14の有機殺虫剤被検
体の塩化メチレン溶媒に基づく濃縮物のクロマトグラム
であり、図５は、本発明の改良方法に従って得られた水
性担体マトリックス中の痕跡量の有機殺虫剤被検体のＳ
ＰＭＥ抽出のクロマトグラムであり、図６は、殺虫剤ピ
−クを同定している図５のクロマトグラムの詳細な部分
であり、図７は、本発明の改良方法なしに水性担体マト
リックス中の痕跡量の有機殺虫剤被検体のＳＰＭＥ抽出
のクロマトグラムであり、図８は、本発明の方法改良段
階を有する水性担体マトリックス中の痕跡量（ppt及びp
pt未満）の有機殺虫剤被検体のＳＰＭＥ抽出のクロマト
グラムであり、図９は、図８のクロマトグラムを生じた
ＳＰＭＥ抽出に於いて用いられたバックグラウンド・マ
トリックス試薬溶媒及びＳＰＭＥ装置の参照クロマトグ
ラムである。
【００１２】本発明の改良された検出手順は、非選択性
の繊維被膜を用いる、または選択的な繊維被膜を用いる
有機被検体の選択的試料の痕跡量の有機被検体の広い範
囲を検出する為に用いることが出来る。改良手順は、自
然の中のアウトドアの又は産業工程の水流等の任意の環
境からの、任意の有機溶媒担体に溶解された試料につい
て用いることが出来る。従って、環境試料という用語は
任意の環境からの痕跡量の有機化合物含有試料を含んで
いることを意味している。
の繊維被膜を用いる、または選択的な繊維被膜を用いる
有機被検体の選択的試料の痕跡量の有機被検体の広い範
囲を検出する為に用いることが出来る。改良手順は、自
然の中のアウトドアの又は産業工程の水流等の任意の環
境からの、任意の有機溶媒担体に溶解された試料につい
て用いることが出来る。従って、環境試料という用語は
任意の環境からの痕跡量の有機化合物含有試料を含んで
いることを意味している。
【００１３】本発明の改良方法を実施するためのＳＰＭ
Ｅ装置は、前記のＰＣＴ公開WO 91/15745中に記載され
ており、その開示は参照により本明細書に取り込む。そ
のようなＳＰＭＥ装置は、ペンシルバニア州ベルフォン
テのスペルコ（Supelco）インコ−ポレ−テッドから入
手出来、更に記載する必要はない。
Ｅ装置は、前記のＰＣＴ公開WO 91/15745中に記載され
ており、その開示は参照により本明細書に取り込む。そ
のようなＳＰＭＥ装置は、ペンシルバニア州ベルフォン
テのスペルコ（Supelco）インコ−ポレ−テッドから入
手出来、更に記載する必要はない。
【００１４】本発明の改良手順は、殺虫剤、除草剤、ポ
リ塩素化ビフェニル化合物類、及び多核芳香族炭化水素
化合物類等の半揮発性の有機被検体の痕跡又は超痕跡
量、特にppb(10億分の１部)、ppt(１兆分の１部)、ppq
(1/1024分)水準の検出に特に有用である。
リ塩素化ビフェニル化合物類、及び多核芳香族炭化水素
化合物類等の半揮発性の有機被検体の痕跡又は超痕跡
量、特にppb(10億分の１部)、ppt(１兆分の１部)、ppq
(1/1024分)水準の検出に特に有用である。
【００１５】マトリックスの交換、即ち（１）痕跡量の
有機被検体を含有している試験試料の有機溶媒担体マト
リックスに適当な量の水が加えられること、及び（２）
有機溶媒担体マトリックスが除去されて、水性担体マト
リックスに基づく検出試料が与えられることは、溶媒を
除去する任意の適当な手段により、一般的にはロ−タリ
−・エバポレ−タ−（回転蒸発器）又はクデルマ-ダニ
ッシュ・エバポレ−タ−などを用いる有機溶媒担体の蒸
発により、又はメンブレン分離（膜分離）等により達成
することが出来る。
有機被検体を含有している試験試料の有機溶媒担体マト
リックスに適当な量の水が加えられること、及び（２）
有機溶媒担体マトリックスが除去されて、水性担体マト
リックスに基づく検出試料が与えられることは、溶媒を
除去する任意の適当な手段により、一般的にはロ−タリ
−・エバポレ−タ−（回転蒸発器）又はクデルマ-ダニ
ッシュ・エバポレ−タ−などを用いる有機溶媒担体の蒸
発により、又はメンブレン分離（膜分離）等により達成
することが出来る。
【００１６】一旦有機溶媒担体マトリックスが水性担体
マトリックスと置き換えられると、典型的なＳＰＭＥ抽
出及び検出手順が、痕跡量の有機被検体を含有している
水性担体マトリックスに基づく検出試料に対し実施でき
る。痕跡量の有機被検体のＳＰＭＥ装置繊維上での抽出
の後、痕跡量の有機被検体はマス・スペクトロフォトメ
−タ−（ＭＳ）を有するガス・クロマトグラフィ−（Ｇ
Ｃ）、電子捕獲検出器（エレクトロン・キャッチャ−・
デテクタ−、ＥＣＤ）、又は炎イオン化デテクタ−（Ｆ
ＩＤ）等の適当な高解像装置中で繊維から脱着される。
脱着は、任意の適当な方法により達成出来、通常は直接
加熱、レ−ザ−脱着、又は誘導加熱、例えばマイクロ波
脱着、またはク−リエ点磁気ヒステレシス法によって達
成できる。
マトリックスと置き換えられると、典型的なＳＰＭＥ抽
出及び検出手順が、痕跡量の有機被検体を含有している
水性担体マトリックスに基づく検出試料に対し実施でき
る。痕跡量の有機被検体のＳＰＭＥ装置繊維上での抽出
の後、痕跡量の有機被検体はマス・スペクトロフォトメ
−タ−（ＭＳ）を有するガス・クロマトグラフィ−（Ｇ
Ｃ）、電子捕獲検出器（エレクトロン・キャッチャ−・
デテクタ−、ＥＣＤ）、又は炎イオン化デテクタ−（Ｆ
ＩＤ）等の適当な高解像装置中で繊維から脱着される。
脱着は、任意の適当な方法により達成出来、通常は直接
加熱、レ−ザ−脱着、又は誘導加熱、例えばマイクロ波
脱着、またはク−リエ点磁気ヒステレシス法によって達
成できる。
【００１７】本発明は半揮発性有機被検体、即ち環境試
料からそれらが抽出された有機溶媒担体マトリックスよ
りも少なくとも約25℃高い沸点、好ましくは約50℃以上
高い沸点を有する有機被検体の痕跡及び超痕跡量の検出
に特に有用である。
料からそれらが抽出された有機溶媒担体マトリックスよ
りも少なくとも約25℃高い沸点、好ましくは約50℃以上
高い沸点を有する有機被検体の痕跡及び超痕跡量の検出
に特に有用である。
【００１８】水性マトリックス又は水性マトリックス上
の囲まれたヘッドスペ−スと繊維が接触される時間は、
変化するであろうが、一般的に検出される被検体、用い
られるシステム及び装置に依存して、約１分乃至30分、
又はそれ以上の範囲で変化する。
の囲まれたヘッドスペ−スと繊維が接触される時間は、
変化するであろうが、一般的に検出される被検体、用い
られるシステム及び装置に依存して、約１分乃至30分、
又はそれ以上の範囲で変化する。
【００１９】有機溶媒の存在が優勢な、または完全に有
機溶媒であるところの溶液担体マトリックス中に被検体
が溶解されている抽出溶液からの痕跡量の有機被検体の
直接のＳＰＭＥは、次の実施例によって、痕跡量の有機
被検体の抽出を妨げる有機溶媒担体の圧倒的な存在の為
に、貧弱な満足の行かない結果を生じることが実証され
る。
機溶媒であるところの溶液担体マトリックス中に被検体
が溶解されている抽出溶液からの痕跡量の有機被検体の
直接のＳＰＭＥは、次の実施例によって、痕跡量の有機
被検体の抽出を妨げる有機溶媒担体の圧倒的な存在の為
に、貧弱な満足の行かない結果を生じることが実証され
る。
【００２０】
例１（比較例） ７μmのポリ（ジメチルシロキサン）で被覆されている
スペルコ(Supelco)ＳＰＭＥ装置のＳＰＭＥシリカ繊維
を７分間、１mlヘキサン担体マトリックス中の次の１８
の殺虫剤のそれぞれ１ppbを含有している試料溶液中に
挿入した。 アルドリン エンドサルファンＩ α-ＢＨＣ エンドサルファン〓 β-ＢＨＣ エンドサルファン・サルフェ−ト γ-ＢＨＣ エンドリン δ-ＢＨＣ エンドリン・アルデヒド 4,4'-ＤＤＤ エンドリン・ケトン 4,4'-ＤＤＥ ヘプタクロ−ル 4,4'-ＤＤＴ ヘプタクロ−ル・エポキシド ディ−ルドリン メトキシクロ−ル ヘキサン担体マトリックスからＳＰＭＥ繊維を除去した
後、繊維を電子捕獲検出器を備えているガス・クロマト
グラフィ−のインジェクション・ポ−ト中に挿入し、熱
脱着を痕跡量の殺虫剤の為に実施し、そして、図１に示
される生じるクロマトグラムを得た。このクロマトグラ
ムは、ヘキサン溶媒単独の同様なＳＰＭＥ抽出について
の図２に示される対照クロマトグラムと全く類似してい
る。従って、痕跡量の殺虫剤の代わりに、ヘキサンの不
純物ピ−クが図１のクロマトグラムに於いて主要ピ−ク
として示されている。
スペルコ(Supelco)ＳＰＭＥ装置のＳＰＭＥシリカ繊維
を７分間、１mlヘキサン担体マトリックス中の次の１８
の殺虫剤のそれぞれ１ppbを含有している試料溶液中に
挿入した。 アルドリン エンドサルファンＩ α-ＢＨＣ エンドサルファン〓 β-ＢＨＣ エンドサルファン・サルフェ−ト γ-ＢＨＣ エンドリン δ-ＢＨＣ エンドリン・アルデヒド 4,4'-ＤＤＤ エンドリン・ケトン 4,4'-ＤＤＥ ヘプタクロ−ル 4,4'-ＤＤＴ ヘプタクロ−ル・エポキシド ディ−ルドリン メトキシクロ−ル ヘキサン担体マトリックスからＳＰＭＥ繊維を除去した
後、繊維を電子捕獲検出器を備えているガス・クロマト
グラフィ−のインジェクション・ポ−ト中に挿入し、熱
脱着を痕跡量の殺虫剤の為に実施し、そして、図１に示
される生じるクロマトグラムを得た。このクロマトグラ
ムは、ヘキサン溶媒単独の同様なＳＰＭＥ抽出について
の図２に示される対照クロマトグラムと全く類似してい
る。従って、痕跡量の殺虫剤の代わりに、ヘキサンの不
純物ピ−クが図１のクロマトグラムに於いて主要ピ−ク
として示されている。
【００２１】本発明の改良の利点が、比較例１の試験試
料溶液のマトリックス交換に続いて、ＳＰＭＥ抽出と検
出を行う次の実施例中で実証される。
料溶液のマトリックス交換に続いて、ＳＰＭＥ抽出と検
出を行う次の実施例中で実証される。
【００２２】例２（実施例） １mlのヘキサン溶媒担体マトリックス中に１ｐｐｂの１
８個の殺虫剤を含有している、比較例１と同一の試験試
料溶液を準備し、そしてこれに１mlの精製脱イオン水を
加えて、二相混合物を生じた。次にヘキサン溶媒を真空
下で回転蒸発器を用いて除去した。環境温度の水浴を使
用した。この濃縮工程を検出試料としての均質な水性担
体に基づくマトリックス溶液が得られた後に、まもなく
停止した。ＳＰＭＥを次に水性担体に基づく検出試料中
に１０分間、７μmのポリ（ジメチルシロキサン）で被
覆されたＳＰＭＥシリカ繊維を挿入することによって実
施した。水性担体マトリックス検出試料からＳＰＭＥ繊
維を除去した後、ガス・クロマトグラフィ−のインジェ
クション・ポ−ト中に繊維を挿入し、痕跡量の殺虫剤に
ついて熱脱着を行い、生じる、図３で示されるクロマト
グラムが得られた。マトリックス交換段階は、殺虫剤ピ
−クが容易に検出される、大いに強化された優れた検出
感度を生じた。
８個の殺虫剤を含有している、比較例１と同一の試験試
料溶液を準備し、そしてこれに１mlの精製脱イオン水を
加えて、二相混合物を生じた。次にヘキサン溶媒を真空
下で回転蒸発器を用いて除去した。環境温度の水浴を使
用した。この濃縮工程を検出試料としての均質な水性担
体に基づくマトリックス溶液が得られた後に、まもなく
停止した。ＳＰＭＥを次に水性担体に基づく検出試料中
に１０分間、７μmのポリ（ジメチルシロキサン）で被
覆されたＳＰＭＥシリカ繊維を挿入することによって実
施した。水性担体マトリックス検出試料からＳＰＭＥ繊
維を除去した後、ガス・クロマトグラフィ−のインジェ
クション・ポ−ト中に繊維を挿入し、痕跡量の殺虫剤に
ついて熱脱着を行い、生じる、図３で示されるクロマト
グラムが得られた。マトリックス交換段階は、殺虫剤ピ
−クが容易に検出される、大いに強化された優れた検出
感度を生じた。
【００２３】本発明の独特のマトリックス交換を用い
て、有機溶媒担体マトリックスを水の又は水が優勢の担
体マトリックスに交換し、その交換を、それらの生じる
溶液中の痕跡量の有機被検体のＳＰＭＥ抽出と検出が、
優れた感度強化を与えるように行った。従って、液-液
抽出等の一般的な技術の被検体濃縮力は、うまくＳＰＭ
Ｅと組合わせることが出来ている。次の実施例は、それ
らの組合わせ手順の一つを記載している。
て、有機溶媒担体マトリックスを水の又は水が優勢の担
体マトリックスに交換し、その交換を、それらの生じる
溶液中の痕跡量の有機被検体のＳＰＭＥ抽出と検出が、
優れた感度強化を与えるように行った。従って、液-液
抽出等の一般的な技術の被検体濃縮力は、うまくＳＰＭ
Ｅと組合わせることが出来ている。次の実施例は、それ
らの組合わせ手順の一つを記載している。
【００２４】例３（実施例） 液-液抽出による被検体濃縮の第一段階は、変更したＥ
ＰＡ608手順に従って行った。塩化ナトリウム（100グラ
ム）を、50〜300pptの水準に於いて、次に挙げた１４の
半揮発性殺虫剤を含有している、１lの水試料中に溶解
し、分析の為の濃縮試料を与えた。 殺虫剤名 クロマトグラム・ピ−ク・ナンバ− アルドリン, 50ppt ６ α-ＢＨＣ, 50ppt １ β-ＢＨＣ, 50ppt ２ γ-ＢＨＣ, 50ppt ３ δ-ＢＨＣ, 50ppt ４ 4,4'-ＤＤＤ, 300ppt １２ 4,4'-ＤＤＥ, 100ppt ９ ディ−ルドリン, 100ppt １０ エンドサルファンＩ, 100ppt ８ 4,4'-ＤＤＴ, 300ppt １４ エンドサルファン・サルフェ−ト, 300ppt １３ エンドリン, 100ppt １１ ヘプタクロ−ル, 50ppt ５ ヘプタクロ−ル・エポキシド, 50ppt ７ この均質溶液を分液漏斗中に入れ、60mlの塩化メチレン
で抽出した。この塩化メチレン抽出は、更に２回繰り返
された。塩化メチレン抽出物を一緒にし、真空下で回転
蒸発機上でおよそ１mlに濃縮した。この濃縮溶液をマト
リックス交換の為に10mlのフラスコに移した。この濃縮
物のガス・クロマトグラフィ−／マス・スペクトロメト
リ−分析は、どんな殺虫剤も検出することに失敗した。
そして、図４で示される生じるクロマトグラムからは、
ただの溶媒及び二つのフタレ−ト汚染物が同定された。
ＰＡ608手順に従って行った。塩化ナトリウム（100グラ
ム）を、50〜300pptの水準に於いて、次に挙げた１４の
半揮発性殺虫剤を含有している、１lの水試料中に溶解
し、分析の為の濃縮試料を与えた。 殺虫剤名 クロマトグラム・ピ−ク・ナンバ− アルドリン, 50ppt ６ α-ＢＨＣ, 50ppt １ β-ＢＨＣ, 50ppt ２ γ-ＢＨＣ, 50ppt ３ δ-ＢＨＣ, 50ppt ４ 4,4'-ＤＤＤ, 300ppt １２ 4,4'-ＤＤＥ, 100ppt ９ ディ−ルドリン, 100ppt １０ エンドサルファンＩ, 100ppt ８ 4,4'-ＤＤＴ, 300ppt １４ エンドサルファン・サルフェ−ト, 300ppt １３ エンドリン, 100ppt １１ ヘプタクロ−ル, 50ppt ５ ヘプタクロ−ル・エポキシド, 50ppt ７ この均質溶液を分液漏斗中に入れ、60mlの塩化メチレン
で抽出した。この塩化メチレン抽出は、更に２回繰り返
された。塩化メチレン抽出物を一緒にし、真空下で回転
蒸発機上でおよそ１mlに濃縮した。この濃縮溶液をマト
リックス交換の為に10mlのフラスコに移した。この濃縮
物のガス・クロマトグラフィ−／マス・スペクトロメト
リ−分析は、どんな殺虫剤も検出することに失敗した。
そして、図４で示される生じるクロマトグラムからは、
ただの溶媒及び二つのフタレ−ト汚染物が同定された。
【００２５】次に、本発明のマトリックス交換段階を実
施した。塩化メチレン抽出物に２mlの水中５％塩化ナト
リウムを加え、二相混合物を生じた。この二相混合物
を、真空下で回転蒸発器を用いて、均質水性溶液に濃縮
した。生じる溶液の半分を、1.5mlのバイアル（瓶）に
移した。７μmのポリ（ジメチルシロキサン）で被覆さ
れているＳＰＭＥシリカファイバ−を15分間、均質水性
溶液中に挿入した。均質水性溶液からＳＰＭＥ繊維を除
去した後、繊維をマス・スペクトロメ−タ−を備えてい
るガス・クロマトグラフィ−のインジェクション・ポ−
ト中に挿入し、熱脱着を14の痕跡量の半揮発性有機殺虫
剤について行い、生じる図５で示されるクロマトグラム
は良好な信号-対-ノイズ比を有する、14の殺虫剤を全て
はっきりと同定した。図５に於けるクロマトグラムの詳
細な部分が図６に示され、14の殺虫剤ピ−クを同定して
いる。エンドサルファン・サルフェ−ト（No.13）及び
4,4'-ＤＤＴ（No.14）は、不純物ピ−クと共に共溶出さ
れた。
施した。塩化メチレン抽出物に２mlの水中５％塩化ナト
リウムを加え、二相混合物を生じた。この二相混合物
を、真空下で回転蒸発器を用いて、均質水性溶液に濃縮
した。生じる溶液の半分を、1.5mlのバイアル（瓶）に
移した。７μmのポリ（ジメチルシロキサン）で被覆さ
れているＳＰＭＥシリカファイバ−を15分間、均質水性
溶液中に挿入した。均質水性溶液からＳＰＭＥ繊維を除
去した後、繊維をマス・スペクトロメ−タ−を備えてい
るガス・クロマトグラフィ−のインジェクション・ポ−
ト中に挿入し、熱脱着を14の痕跡量の半揮発性有機殺虫
剤について行い、生じる図５で示されるクロマトグラム
は良好な信号-対-ノイズ比を有する、14の殺虫剤を全て
はっきりと同定した。図５に於けるクロマトグラムの詳
細な部分が図６に示され、14の殺虫剤ピ−クを同定して
いる。エンドサルファン・サルフェ−ト（No.13）及び
4,4'-ＤＤＴ（No.14）は、不純物ピ−クと共に共溶出さ
れた。
【００２６】比較の為、強化された検出感度を示す為
に、10〜60ppbの水準に於いて前記の14個の半揮発性殺
虫剤を含有している５％塩化ナトリウム水溶液の直接Ｓ
ＰＭＥ抽出及びその後のガス・クロマトグラフィ−／マ
ス・スペクトロメトリ分析を実施した。分析は、生じる
クロマトグラムの図７によって示されるように、14の殺
虫剤の検出感度を示した。しかしながら、このＳＰＭＥ
抽出手順を、図３で示す液-液抽出等の他の知られた試
料濃縮手順と結びつけることは、200倍（図５）を越え
る改良された検出感度が、類似の水性マトリックス中の
殺虫剤の直接ＳＰＭＥ抽出と比較して、得られることを
実証している。
に、10〜60ppbの水準に於いて前記の14個の半揮発性殺
虫剤を含有している５％塩化ナトリウム水溶液の直接Ｓ
ＰＭＥ抽出及びその後のガス・クロマトグラフィ−／マ
ス・スペクトロメトリ分析を実施した。分析は、生じる
クロマトグラムの図７によって示されるように、14の殺
虫剤の検出感度を示した。しかしながら、このＳＰＭＥ
抽出手順を、図３で示す液-液抽出等の他の知られた試
料濃縮手順と結びつけることは、200倍（図５）を越え
る改良された検出感度が、類似の水性マトリックス中の
殺虫剤の直接ＳＰＭＥ抽出と比較して、得られることを
実証している。
【００２７】この強力なＳＰＭＥの組合わせは、電子捕
獲デテクタ−を有するガス・クロマトグラフィ−を使用
してppt未満の水準に於ける塩素化殺虫剤を可能として
いる。図７に示されるクロマトグラムは、0.5〜３ｐｐ
ｔに於いて、14の殺虫剤が良好に検出されることを明ら
かに実証している。比較の為に、マトリックス、試薬、
溶媒、及びＳＰＭＥ装置に対するバックグラウンド・ク
ロマトグラムが図９に示される。
獲デテクタ−を有するガス・クロマトグラフィ−を使用
してppt未満の水準に於ける塩素化殺虫剤を可能として
いる。図７に示されるクロマトグラムは、0.5〜３ｐｐ
ｔに於いて、14の殺虫剤が良好に検出されることを明ら
かに実証している。比較の為に、マトリックス、試薬、
溶媒、及びＳＰＭＥ装置に対するバックグラウンド・ク
ロマトグラムが図９に示される。
【００２８】液-液抽出技術等の一般的な有機溶媒試料
濃縮技術をＳＰＭＥと組み合わせることは、大いに強化
された検出感度を与え、減少した試料、試薬及び溶媒の
使用を可能とし、それでもなお分析中で十分な感度を与
え、このことは有意義な物質と時間の節約を生じる。前
記の本発明の記載により、当業者は本発明の精神からそ
れることなしに本発明に対し変更が成し得ることを認め
るであろう。従って、本発明の範囲は特定の記載された
具体例に限定される意図ではない。
濃縮技術をＳＰＭＥと組み合わせることは、大いに強化
された検出感度を与え、減少した試料、試薬及び溶媒の
使用を可能とし、それでもなお分析中で十分な感度を与
え、このことは有意義な物質と時間の節約を生じる。前
記の本発明の記載により、当業者は本発明の精神からそ
れることなしに本発明に対し変更が成し得ることを認め
るであろう。従って、本発明の範囲は特定の記載された
具体例に限定される意図ではない。
【図１】 図１は、有機溶媒（ヘキサン）担体マトリッ
クス中の痕跡量の有機殺虫剤被検体をＳＰＭＥ法で検出
することを試みたクロマトグラムであるグラフ。
クス中の痕跡量の有機殺虫剤被検体をＳＰＭＥ法で検出
することを試みたクロマトグラムであるグラフ。
【図２】 図２は、ヘキサン溶媒のみのＳＰＭＥ抽出の
為の参照クロマトグラムであるグラフ。
為の参照クロマトグラムであるグラフ。
【図３】 図３は、本発明の改良方法に従って得られ
た、水性担体マトリックス中の痕跡量の有機殺虫剤被検
体のＳＰＭＥ抽出のクロマトグラムであるグラフ。
た、水性担体マトリックス中の痕跡量の有機殺虫剤被検
体のＳＰＭＥ抽出のクロマトグラムであるグラフ。
【図４】 図４は、14の有機殺虫剤被検体の塩化メチレ
ン溶媒に基づく濃縮物のクロマトグラムであるグラフ。
ン溶媒に基づく濃縮物のクロマトグラムであるグラフ。
【図５】 図５は、本発明の改良方法に従って得られた
水性担体マトリックス中の痕跡量の有機殺虫剤被検体の
ＳＰＭＥ抽出のクロマトグラムであるグラフ。
水性担体マトリックス中の痕跡量の有機殺虫剤被検体の
ＳＰＭＥ抽出のクロマトグラムであるグラフ。
【図６】 図６は、殺虫剤ピ−クを同定している図５の
クロマトグラムの詳細な部分であるグラフ。
クロマトグラムの詳細な部分であるグラフ。
【図７】 図７は、本発明の改良方法なしに水性担体マ
トリックス中の痕跡量の有機殺虫剤被検体のＳＰＭＥ抽
出のクロマトグラムであるグラフ。
トリックス中の痕跡量の有機殺虫剤被検体のＳＰＭＥ抽
出のクロマトグラムであるグラフ。
【図８】 図８は、本発明の方法改良段階を有する水性
担体マトリックス中の痕跡量（ppt及びppt未満）の有機
殺虫剤被検体のＳＰＭＥ抽出のクロマトグラムであるグ
ラフ。
担体マトリックス中の痕跡量（ppt及びppt未満）の有機
殺虫剤被検体のＳＰＭＥ抽出のクロマトグラムであるグ
ラフ。
【図９】 図９は、図８のクロマトグラムを生じたＳＰ
ＭＥ抽出に於いて用いられた、バックグラウンドのマト
リックス、試薬、溶媒、及びＳＰＭＥ装置の対照クロマ
トグラムであるグラフ。
ＭＥ抽出に於いて用いられた、バックグラウンドのマト
リックス、試薬、溶媒、及びＳＰＭＥ装置の対照クロマ
トグラムであるグラフ。
Claims (9)
- 【請求項１】 有機溶媒担体マトリックス中に抽出され
るか又は溶解されていることが疑われている痕跡量の有
機被検体を検出する方法であって、必要ならば、上記有
機溶媒担体マトリックス中のその痕跡量の有機被検体を
濃縮し、その後該痕跡量の有機被検体を固相ミクロ抽出
装置の繊維上に吸収し、その後該痕跡量の有機被検体を
その繊維から該痕跡量の有機被検体の１又はそれ以上の
検出の為の分析装置中に脱着させることから成ることを
含む方法に於いて、 該繊維上に該痕跡量の有機被検体を吸収するに先立っ
て、該痕跡量の有機被検体を含有している該有機溶媒担
体マトリックスに水を加えて混合物を生じ、その後該混
合物から該有機溶媒担体マトリックスを除去して、水性
担体マトリックス中の痕跡量の有機被検体の検出試料を
該繊維に吸着させるために生じることを特徴とする方
法。 - 【請求項２】 該方法が、 （１）痕跡量の有機被検体を含有すると疑われる環境試
料を準備し、 （２）もし該環境試料が既に有機溶媒担体マトリックス
を有していない時は、該環境試料から該痕跡量の有機被
検体が可溶である有機溶媒担体マトリックス中へ、全て
のそのような痕跡量の有機被検体を有機溶媒抽出し、 （３）必要ならば該有機溶媒の一部を除去することによ
って、該有機溶媒担体マトリックス中の該痕跡量の有機
被検体を濃縮し、 （４）その後、該試験試料の該有機溶媒担体マトリック
スに水を加えて混合物を作り、そして該有機溶媒担体マ
トリックスをそこから除去することによって該試験試料
の該有機溶媒担体マトリックスを交換し、該痕跡量の有
機被検体を含有している水性担体マトリックスを含んで
いる検出試料を生じ、 そしてその後、 （５）痕跡量の有機被検体が水性担体マトリックスから
繊維上に抽出される事が生じるのに十分な時間、固相ミ
クロ抽出装置の繊維を、該水性担体マトリックスと、又
は該水性担体マトリックス上の囲まれたヘッドスペ−ス
中と接触させ、 （６）その後、該繊維を、該水性担体マトリックス又は
囲まれたヘッドスペ−スから除去して、そして該痕跡量
の有機被検体の１又はそれ以上の検出の為に、該有機被
検体を、該繊維から分析装置中に脱着させ、そして、 （７）該分析装置中で該有機被検体の１又はそれ以上を
検出することを含んでいる、請求項１に記載の環境試料
中の有機被検体の痕跡量を検出する方法。 - 【請求項３】 痕跡量の有機被検体が、有機溶媒の沸点
より少なくとも25℃高い沸点を有している半揮発性有機
被検体である、請求項１または２に記載の方法。 - 【請求項４】 該痕跡量の有機被検体が、有機溶媒の沸
点より少なくとも50℃高い沸点を有している半揮発性有
機被検体である請求項１又は２に記載の方法。 - 【請求項５】 該痕跡量の有機被検体が、殺虫剤、除草
剤、ポリ塩素化ビフェニル化合物類、及び多核芳香族炭
化水素化合物類からなる群から選択される、請求項４に
記載の方法。 - 【請求項６】 環境試料からの痕跡量の有機被検体の抽
出が、有機溶媒を用いて液-液、又は液-固抽出で達成さ
れる、請求項１又は２に記載の方法。 - 【請求項７】 方法がｐｐｔ（１兆分の１部）の検出水
準で痕跡量の有機被検体の検出を可能とする、請求項１
〜５の何れか一に記載の方法。 - 【請求項８】 方法がｐｐｔ未満の検出水準で、痕跡量
の有機被検体の検出を可能とする、請求項１〜５の何れ
か一に記載の方法。 - 【請求項９】 該有機溶媒の蒸発によって該混合物から
該有機溶媒が除去される、請求項１〜８の何れか一に記
載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/396,124 US5576217A (en) | 1995-02-28 | 1995-02-28 | Solid phase microextraction of trace amounts of organic analytes |
| US08/396,124 | 1995-02-28 | ||
| US8/396,124 | 1995-02-28 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08261999A true JPH08261999A (ja) | 1996-10-11 |
| JP2867237B2 JP2867237B2 (ja) | 1999-03-08 |
Family
ID=23565952
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8065409A Expired - Fee Related JP2867237B2 (ja) | 1995-02-28 | 1996-02-27 | 有機被検体の痕跡量の改良された固相ミクロ抽出 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5576217A (ja) |
| EP (1) | EP0730143B1 (ja) |
| JP (1) | JP2867237B2 (ja) |
| KR (1) | KR100202966B1 (ja) |
| AT (1) | ATE285071T1 (ja) |
| AU (1) | AU696672B2 (ja) |
| CA (1) | CA2169104C (ja) |
| DE (1) | DE69634022T2 (ja) |
| IL (1) | IL117207A (ja) |
| NZ (1) | NZ286077A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100418622C (zh) * | 2006-03-28 | 2008-09-17 | 南京大学 | 一种聚噻吩固相微萃取头及其制备方法 |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6117682A (en) * | 1993-04-27 | 2000-09-12 | Dexsil Corporation | Method for detecting hydrocarbons in water |
| NO302056B1 (no) * | 1996-01-11 | 1998-01-12 | Knut E Rasmussen | Fremgangsmåte ved væske-væske mikroekstraksjon |
| AU1018199A (en) * | 1997-11-15 | 1999-06-07 | Brechbuhler Ag | Method and equipment for measuring global volatile substances |
| DE19753701A1 (de) * | 1997-12-04 | 1999-06-17 | Fraunhofer Ges Forschung | Verfahren und Vorrichtung zur quasi-kontinuierlichen Bestimmung von anorganischen oder organischen Inhaltsstoffen in Fluiden |
| CN1094071C (zh) * | 1998-03-27 | 2002-11-13 | 云南大学 | 以碳素为基体的固相微萃取吸附质 |
| US6815216B2 (en) * | 1999-03-26 | 2004-11-09 | Gerstel Systemtechnik Gmbh & Co. Kg | Method for solid-phase microextraction and analysis, and a collector for this method |
| CA2280418A1 (en) * | 1999-08-12 | 2001-02-12 | Donald S. Forsyth | Micro extraction technique |
| US6905031B1 (en) | 1999-09-13 | 2005-06-14 | The Regents Of The University Of California | Solid phase microextraction device using aerogel |
| US20020034827A1 (en) * | 2000-08-01 | 2002-03-21 | Rajendra Singh | Methods for solid phase nanoextraction and desorption |
| KR100491163B1 (ko) * | 2003-02-20 | 2005-05-24 | 대한민국 | 식품내 잔류농약 추출방법 |
| CN1303421C (zh) * | 2004-03-24 | 2007-03-07 | 南京大学 | 一种用于有机氯、有机磷农药分析的同步净化提取方法 |
| DE102006021333B4 (de) * | 2006-05-05 | 2009-02-19 | Johann Wolfgang Goethe-Universität | Verbessertes Verfahren zur qualitativen und/oder quantitativen Bestimmung geringer Konzentrationen an organischen Spurenstoffen in wäßrigen Systemen und eine Analysevorrichtung zur Durchführung dieses Verfahrens |
| US9283544B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-03-15 | The Florida International University Board Of Trustees | Fabric phase sorptive extractors |
| US9146228B2 (en) | 2013-10-09 | 2015-09-29 | King Fahd University Of Petroleum And Minerals | Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in water using nanoporous material prepared from waste avian egg shell |
| ITUB20152857A1 (it) * | 2015-08-04 | 2017-02-04 | Ettore Guerriero | Sistema analitico basato su fibre di carbonio |
| CN106267897A (zh) * | 2016-09-26 | 2017-01-04 | 延边大学 | 快速分离人参中人参皂苷和残留农药的方法 |
| CN109030657A (zh) * | 2018-08-27 | 2018-12-18 | 广州风行乳业股份有限公司 | 一种动物奶中硫丹农药残留的检测方法 |
| US11125681B2 (en) | 2019-01-24 | 2021-09-21 | Raven Industries, Inc. | Agricultural spectrographic composition sensor and methods for same |
| CN110068626A (zh) * | 2019-05-08 | 2019-07-30 | 东莞市信准检测技术服务有限公司 | 儿童玩具中邻苯二甲酸酯的测定方法 |
| CN111665300A (zh) * | 2020-05-21 | 2020-09-15 | 国网河北省电力有限公司电力科学研究院 | 同时测定土壤中多环芳烃和多氯联苯的方法 |
| CN112305131B (zh) * | 2020-11-24 | 2021-09-21 | 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 | 一种动物源性食品中农药残留的GC-Orbitrap-MS筛查分析方法 |
| CN113252824B (zh) * | 2021-06-17 | 2022-04-19 | 湖南农业大学 | 测定水体中三氟苯嘧啶含量的气相色谱-电子捕获检测器法 |
| CN116660425B (zh) * | 2023-07-18 | 2023-12-05 | 山东杰诺检测服务有限公司 | 一种快速测定果蔬中多种农药残留的方法及应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9007356D0 (en) * | 1990-04-02 | 1990-05-30 | Pawliszyn Janusz B | Micro solid phase extraction with fused silica optical fibres |
| US5131266A (en) * | 1990-09-17 | 1992-07-21 | The Research Foundation Of The State University Of New York | Method and apparatus for continuously measuring the concentration of organic compounds in an aqueous solution |
| RU1800360C (ru) * | 1991-01-08 | 1993-03-07 | Азовский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства | Способ определени пестицидов |
-
1995
- 1995-02-28 US US08/396,124 patent/US5576217A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-02-08 CA CA002169104A patent/CA2169104C/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-02-15 AU AU45544/96A patent/AU696672B2/en not_active Ceased
- 1996-02-21 IL IL117207A patent/IL117207A/en not_active IP Right Cessation
- 1996-02-23 KR KR1019960004289A patent/KR100202966B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-02-27 JP JP8065409A patent/JP2867237B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-02-27 NZ NZ286077A patent/NZ286077A/en not_active IP Right Cessation
- 1996-02-28 EP EP96102971A patent/EP0730143B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-02-28 AT AT96102971T patent/ATE285071T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-02-28 DE DE69634022T patent/DE69634022T2/de not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100418622C (zh) * | 2006-03-28 | 2008-09-17 | 南京大学 | 一种聚噻吩固相微萃取头及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR960031984A (ko) | 1996-09-17 |
| CA2169104A1 (en) | 1996-08-29 |
| AU696672B2 (en) | 1998-09-17 |
| EP0730143A2 (en) | 1996-09-04 |
| AU4554496A (en) | 1996-09-05 |
| KR100202966B1 (ko) | 1999-06-15 |
| EP0730143A3 (ja) | 1996-09-18 |
| IL117207A0 (en) | 1996-06-18 |
| DE69634022T2 (de) | 2005-12-08 |
| IL117207A (en) | 1998-02-22 |
| DE69634022D1 (de) | 2005-01-20 |
| NZ286077A (en) | 1996-11-26 |
| US5576217A (en) | 1996-11-19 |
| JP2867237B2 (ja) | 1999-03-08 |
| CA2169104C (en) | 1999-09-21 |
| ATE285071T1 (de) | 2005-01-15 |
| EP0730143B1 (en) | 2004-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2867237B2 (ja) | 有機被検体の痕跡量の改良された固相ミクロ抽出 | |
| Magdic et al. | Analysis of organochlorine pesticides using solid-phase microextraction | |
| Magdic et al. | Analysis of organophosphorus insecticides from environmental samples using solid-phase microextraction | |
| Basheer et al. | Development and application of polymer-coated hollow fiber membrane microextraction to the determination of organochlorine pesticides in water | |
| Barrek et al. | Multi-residue analysis and ultra-trace quantification of 36 priority substances from the European Water Framework Directive by GC–MS and LC-FLD-MS/MS in surface waters | |
| Zhang et al. | Analysis of organic compounds in environmental samples by headspace solid phase microextraction | |
| Blasco et al. | Comparison of microextraction procedures to determine pesticides in oranges by liquid chromatography–mass spectrometry | |
| Pino et al. | Micellar microwave-assisted extraction combined with solid-phase microextraction for the determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in a certified marine sediment | |
| Basheer et al. | Hollow fiber membrane-protected solid-phase microextraction of triazine herbicides in bovine milk and sewage sludge samples | |
| Sánchez-Rojas et al. | A review of stir bar sorptive extraction | |
| Li et al. | Solid-phase extraction of polycyclic aromatic hydrocarbons in surface water: negative effect of humic acid | |
| Aguilar et al. | Determination of pesticides in environmental waters by solid-phase extraction and gas chromatography with electron-capture and mass spectrometry detection | |
| Natangelo et al. | Analysis of some pesticides in water samples using solid-phase microextraction–gas chromatography with different mass spectrometric techniques | |
| Pozo et al. | Determination of the herbicide 4-chloro-2-methylphenoxyacetic acid and its main metabolite, 4-chloro-2-methylphenol in water and soil by liquid chromatography–electrospray tandem mass spectrometry | |
| Li et al. | Determination of 23 organophosphorous pesticides in surface water using SPME followed by GC-MS | |
| Fu et al. | Dispersive micro-solid phase extraction combined with gas chromatography–chemical ionization mass spectrometry for the determination of N-nitrosamines in swimming pool water samples | |
| Ratola et al. | Hollow-fibre liquid-phase microextraction: A simple and fast cleanup step used for PAHs determination in pine needles | |
| James et al. | Rapid determination of volatile organic compounds in environmentally hazardous wastewaters using solid phase microextraction | |
| Wang et al. | Simultaneous determination of pesticides, polycyclic aromatic hydrocarbons, polychlorinated biphenyls and phthalate esters in human adipose tissue by gas chromatography–tandem mass spectrometry | |
| Bonwick et al. | Determination of permethrin and cyfluthrin in water and sediment by gas chromatography-mass spectrometry operated in the negative chemical ionization mode | |
| Thomsen et al. | Determination of phenolic flame-retardants in human plasma using solid-phase extraction and gas chromatography–electron-capture mass spectrometry | |
| Crespo et al. | Determination of various pesticides using membrane extraction discs and gas chromatography-mass spectrometry | |
| Herbert et al. | Development and validation of a novel method for the analysis of chlorinated pesticides in soils using microwave-assisted extraction–headspace solid phase microextraction and gas chromatography–tandem mass spectrometry | |
| Barco-Bonilla et al. | Simultaneous and highly sensitive determination of PCBs and PBDEs in environmental water and sediments by gas chromatography coupled to high resolution magnetic sector mass spectrometry | |
| Cam et al. | Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in sediment using solid-phase microextraction with gas chromatography—mass spectrometry |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081225 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091225 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091225 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101225 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111225 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111225 Year of fee payment: 13 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111225 Year of fee payment: 13 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121225 Year of fee payment: 14 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121225 Year of fee payment: 14 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131225 Year of fee payment: 15 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |