JPH08154657A

JPH08154657A - 反応容器、反応容器用基材、反応容器用基材の製造方法、反応装置および液体排出方法

Info

Publication number: JPH08154657A
Application number: JP6300919A
Authority: JP
Inventors: Kouji Yamagaki; 浩司山垣; Kaoru Naito; 薫内藤
Original assignee: Nikon Corp
Current assignee: Nikon Corp
Priority date: 1994-12-05
Filing date: 1994-12-05
Publication date: 1996-06-18

Abstract

(57)【要約】【目的】スライド硝子間の間隔が１００μｍ以下の場合
でも、試薬溶液の残留や標本の損傷を起こすことなく、
容易にスライド硝子間の間隙に保持された溶液を排出す
る。【構成】液体を２枚の板状基材１３，１４間に挾持する
反応容器の基材であって、少なくとも表裏一方の面の、
少なくとも３点にスペーサ１１，１２を備える反応容器
用基材１４。液体を２枚の板状基材（少なくとも一方が
本発明の基材）間に挾持する反応容器。上記反応容器
と、運動により反応容器内に加速度を印加する回転機構
とを備える反応装置。反応容器の開口部を、液体の液面
に浸すための液体供給機構をさらに有する反応装置。上
記反応容器を運動させて容器内に保持された液体に加速
度を印加し、液体を反応容器の外部に排出する液体排出
方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ハイブリダイゼーショ
ン反応のように微少な溶液を用いる反応に適し、特に、
溶液の排出に優れた反応容器、反応容器用基材、反応容
器用基材の製造方法、反応装置、および溶液排出方法に
関する。

【０００２】

【従来の技術】生体組織には様々な生理活性物質、レセ
プター、酵素等の物質が存在しておりこれらの動態は生
理機能の発現に直接関与している。従って、これらの物
質の生合成が行なわれている細胞を知ることは、生化学
の研究上重要なだけでなく、生成異常等により発生する
病気の診断、治療にも寄与するところが大きい。これら
の物質は、ＤＮＡによりコードされており、ＤＮＡの転
写により、mRNAを介して生合成される。そこで、mRNAを
検出し、その組織中における局在性を調べれば、これら
のタンパク質が、どの細胞で作られているかを知ること
ができる。

【０００３】また、遺伝子または染色体の異常は、遺伝
病、ガン等の病気の原因となることが知られている。そ
こで、遺伝子または染色体の異常を検出することは、遺
伝病、ガン、その他の遺伝子に関係する多くの病気の診
断および治療方針決定上の有効な手段として活用でき
る。

【０００４】そこで、生物学的試料中のmRNAの存在を検
出したり、染色体や遺伝子の異常を検出する方法が、従
来より開発されてきた。核酸ハイブリダイゼーション反
応を用いる方法では、スライド硝子等の標本基材上に作
成した組織、細胞または染色体の標本中の、mRNAの存在
位置や染色体異常を検出することができる。

【０００５】この方法は、mRNAまたは一本鎖DNAを、一
本鎖核酸プローブと反応させることにより検出する。こ
の方法では、まず、スライド硝子上に組織標本や、細胞
または染色体標本を調製する。なお、DNAを検出する場
合は、細胞および染色体標本中の染色体DNAを、あらか
じめ熱処理等で変性させ、一本鎖DNAを得る。このよう
にして、標本を調製したのち、組織標本中のmRNAや、細
胞または染色体標本中の一本鎖DNAを標的とする一本鎖
核酸プローブを含む溶液で処理することによりハイブリ
ッドを形成させ、未反応の核酸プローブを洗浄除去す
る。ここで用いられる一本鎖核酸プローブは、検出対象
のmRNAまたは一本鎖DNAの塩基配列と相補的な塩基配列
を有し、容易に検出が可能な物質で標識されている。こ
のため、標本中のハイブリッドを形成した染色体やmRNA
を同定し、mRNAの局在や染色体異常の存在を検出するこ
とができる。

【０００６】ハイブリダイゼーション反応や、標識（シ
グナル）の検出に使用される試薬溶液は、一般に高価で
ある。従って、できるだけ少ない試薬量で反応を行わせ
る方法の開発が進められている。その方法として、図７
の断面図に示すように標本スライド硝子３１の試料面
と、カバー用スライド硝子３２の一方の面と（２枚の標
本スライド硝子を用いる場合は、試料面どうし）を対向
させて、形成されるスライド硝子間３１，３２の間隙を
反応チャンバとして用いて、該反応チャンバに標本およ
び反応溶液等を挾持して、試験を行なう方法がある。ス
ライド硝子３１、３２の両長辺の縁には、スペーサ３３
が設けられ、該スペーサ３３の高さにより、スライド硝
子３１、３２間の間隙を調節することができる。間隔を
できるだけ狭くすれば、使用する試薬溶液の量を少なく
することができる。

【０００７】この方法では、スライド硝子３１、３２の
間隙への試薬溶液３４の供給に際しては、図４に示すよ
うに毛管作用を利用し、スライド硝子３１、３２の間隙
からの試薬溶液３４の排出に際しては、図５に示すよう
に濾紙４４で吸い出して溶液を排出する。

【０００８】なお、図５に示したように、間隙の短辺の
一方から試薬溶液を供給する場合、試薬溶液の特性によ
っては最上部まで溶液が上昇できず、スライド硝子全面
に試薬溶液を供給できないことがある。そこで、図６に
示すように、スペーサ３３をスライド硝子の長辺ではな
く短辺の縁に設け、溶液の供給、排出を長辺の縁から行
なうようにして、溶液の上昇距離を短くする改良方法が
ある。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】しかし上記の改良方法
では、スライド硝子の間隔を１００μｍ以下にすると濾
紙を用いて溶液の排出を行う場合に排出速度の低下や溶
液の残留が起こり易くなる。また、濾紙で吸引する代わ
りに、遠心力により溶液の排出を行うことが考えられる
が、この場合も、スライド硝子の間隔を１００μｍ以下
にすると標本の損傷が起こり易くなり、好ましくない。

【００１０】本発明は、このような従来の欠点を解消
し、スライド硝子間の間隔が１００μｍ以下の場合で
も、試薬溶液の残留や標本の損傷を起こすことなく、ス
ライド硝子間の間隙に保持された溶液を容易に排出する
ことのできる反応容器、反応装置、および溶液排出方法
と、該反応容器の製造方法を提供すること目的としてい
る。

【００１１】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明では、液体を２枚の板状基材間に挾持する反
応容器の、該基材であって、少なくとも表裏一方の面
の、少なくとも３点にスペーサを備える反応容器用基材
が提供される。なお、スペーサは、前記面の左右の短辺
端部と、前後のうち一方の長辺端部とに備えられること
が望ましい。

【００１２】さらに、上記反応容器用基材の製造方法と
して、板状の基材の少なくとも表裏一方の面の、少なく
とも３点にスペーサを設けるスペーサ設置工程を備える
反応容器用基材の製造方法が提供される。

【００１３】スペーサは、短冊状の樹脂フィルムを前記
基材に接着する工程により設けることができる。このと
き、接着される樹脂フィルムは、ポリテレフタル酸エチ
レン製であることが望ましい。これは、ハイブリダイゼ
ーション反応などの生化学的検査に用いられる種々の試
薬に対して耐薬品性が高く、耐水性にも優れ、さらに、
入手が容易であるという利点も有するからである。

【００１４】また、スペーサを、印刷により、樹脂ワニ
スを前記基材に塗布してワニス膜を形成する工程と、上
記ワニス膜を硬化する工程とにより形成することもでき
る。この方法では、より簡便に本発明の反応容器用基材
を製造することができる。樹脂ワニスとしては、熱硬化
性エポキシ樹脂を用いることが望ましい。硬化収縮率が
小さく寸法安定性が高く、耐水、耐薬品性に優れている
ためである。この場合、ワニス膜を硬化する工程は、前
記ワニス膜を加熱する工程を備える。なお、この場合、
樹脂ワニスをあらかじめ定められたスペーサの位置のみ
に塗布し、硬化すればスペーサを形成することができる
が、スペーサの設置範囲よりも広い範囲に樹脂ワニスを
塗布し、のちにワニス膜の不要部分を除去することによ
りスペーサを形成してもよい。

【００１５】さらに、本発明では、液体を２枚の板状基
材間に挾持する反応容器であって、該基材のうち、少な
くとも一方が、上述した本発明の反応容器用基材である
ものが提供される。

【００１６】また、本発明では、上記本発明の反応容器
と、運動により反応容器内部に加速度を印加する回転機
構とを備える反応装置が提供される。なお、上記運動
は、円運動であり、上記加速度は、遠心力であることが
望ましい。これは、運動させるための機構を単純にする
ことができるからである。なお、反応容器には、スペー
サの設けられていない開口部があることが望ましく、こ
の反応装置は、反応容器の開口部を、液体の液面に浸す
ための液体供給機構をさらに有することが望ましい。こ
の上記液体供給機構は、液体を保持するための液体容器
と、液体容器に保持された液体の液面を変位させるため
の移動機構とを有する。

【００１７】さらに、本発明では、上記本発明の反応容
器を運動させることにより、容器内（板状基材の間隙）
に保持された液体に加速度を印加し、該液体を該反応容
器の外部に排出する液体排出方法が提供される。なお、
上記運動は、円運動であり、上記加速度は、遠心力であ
ることが望ましい。

【００１８】

【作用】上述した課題を解決するために、本発明者等
は、まず、排出速度の低下、溶液の残留、標本の損傷の
原因を追求する実験を行った。この実験により、本発明
者等は、溶液の排出に伴いスライド硝子が撓み中央部分
の間隔が狭くなることが原因で上記現象が生じるという
新たな知見を得た。図３に、スライド硝子の両短辺の縁
のみにスペーサを設けた従来法で溶液の排出を行った場
合の模式断面図を示す。図３に示すように、溶液３４が
排出されるにつれ、標本スライド硝子３１およびカバー
用スライド硝子３２が撓み、中央部分の間隔が狭くなる
ため排出が困難となる。

【００１９】そこで、本発明では、標本基材とカバー基
材との間の両短辺の縁および一方の長辺の縁にスペーサ
を設けてスライド硝子のたわみを抑え、更に遠心力を利
用して溶液の排出を行う。本発明の反応容器の平面図を
図２に示す。さらに、図２におけるＩＩ’間の断面図を
図１に示す。本発明の反応容器は、標本スライド硝子１
３とカバー用スライド硝子１４との間に２種類のスペー
サ１１、１２を備えることにより構成される。すなわ
ち、スライド硝子１１、１２の両短辺の縁には、それぞ
れ短辺用スペーサ１２が設けられ、長辺の縁には、長辺
用スペーサ１１が設けられている。これにより、標本ス
ライド硝子１３およびカバー用スライド硝子１４のたわ
みを抑えることができる。さらに、本発明では、反応容
器を高速で回転させることにより、遠心力を利用して溶
液を残すことなく迅速に排出することができる。

【００２０】

【実施例】（実施例１）まず、ハイブリダイゼーション試験のため
の反応容器を用意した。本実施例１の反応容器は、図１
に示すように、標本スライド硝子１３と、カバー用スラ
イド硝子１４と、左右の短辺用スペーサ１２と、長辺用
スペーサ１１とを備える。本実施例１で標本スライド硝
子１３およびカバー用スライド硝子１４の大きさは、縦
２．６ｃｍ、横７．６ｃｍ、厚さ０．９ｍｍである。

【００２１】本実施例１では、各スペーサ１１、１２
は、カバー用スライド硝子１４の表裏一方の面の端部
（左右の短辺端部中央の長方形領域（幅３ｍｍ、長さ２
６ｍｍ）と、長辺の一方の端部中央の長方形領域（幅３
ｍｍ、長さ３ｃｍ））に接着されている。本実施例１で
は、スペーサ１１、１２をスライド硝子に接着する際
に、エポキシ樹脂系接着剤を用いた。

【００２２】各スペーサ１１、１２の高さは２５μｍで
あり、標本スライド硝子１３と、カバー用スライド硝子
１４とをスペーサ１１、１２を介して対向させたとき、
その間隔が、２５μｍになるようになっている。なお、
本実施例１では、スペーサ１１、１２として、２５μｍ
の厚さのポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）のフィ
ルムを、短冊状（左右の短辺用は幅３ｍｍ、長さ２６ｍ
ｍ、長辺用は幅３ｍｍ、長さ３ｃｍ）に切ったものを使
用した。スペーサ１１、１２の材質として、本実施例１
では、ポリエチレンテレフタレートを用いたが、反応に
使用する溶媒に溶解せず、反応に影響を与えず、厚さが
容易に変化しないものであれば、用いることができる。
これは、接着剤についても同様である。

【００２３】本実施例１では、反応容器の反応チャン
バ、すなわち、スライド硝子１３、１４間の間隙に溶液
を供給する際には、反応容器の長辺側の端部のうち、ス
ペーサ１１の設けられていない方（以下、開口部とよ
ぶ）を溶液の液面に浸け、毛管作用により溶液を反応チ
ャンバ内に導入した。また、反応チャンバからの溶液の
排出の際には、開口部が外側（回転中心から遠い側）
に、スペーサ１１の設けられている長辺側端部が内側
（回転中心に近い側）に、それぞれなるように遠心分離
機にセットして、反応容器を高速に回転させ、溶液に遠
心力（150G、10秒）をかけることにより、チャンバから
排出させた。

【００２４】本実施例１では、ヒト末梢血単核白血球を
試料として用いた。ヒトの末梢血から単核白血球を分離
し、この単核白血球をハンクスＢＢＳ液（和光純薬工業
（株）製）で洗った後、５％炭酸ガス雰囲気下、３７℃
に保った培養液中で７２時間培養した。培養液には、２
０％の血清と、２％のＰＨＡ（フィトヘムアグルチニ
ン）を溶解したＲＭＰＩ１６４０（和光純薬工業（株）
製）の溶液を用いた。培養後、培養細胞を３７℃の０．
０７５ｍｏｌ／ｌ塩化カリウム溶液で１０分間低張処理
した後、固定液（メタノール：酢酸＝３：１）で固定し
て、細胞を懸濁させた固定液を得た。

【００２５】この細胞を懸濁させた固定液を、２枚のス
ライド硝子上に滴下して染色体標本を得、該染色体標本
についてハイブリダイゼーション試験を行なった。ハイ
ブリダイゼーション反応に用いられる各種試薬には、オ
ンコークロモソームインサイチューハイブリダイゼ
ーションシステム（オンコー社製）の試薬を用いた。

【００２６】まず、スライド硝子上の標本を１×ＲＮａ
ｓｅ（１０００×ＲＮａｓｅ（オンコー社製）の１００
０倍希釈液）で処理し、エタノールで脱水後、７０％の
ホルムアミドを溶解した７０℃の２×ＳＳＣ液（２０×
ＳＳＣ（オンコー社製）の１０倍希釈液）中に入れ、染
色体ＤＮＡを変性させた。

【００２７】つぎに、スライド硝子上の標本をエタノー
ルで脱水し、風乾後、カバー用スライド硝子（スペーサ
接着済み）を被せ、反応容器を組立て、試料入り反応容
器を得た。この反応容器内（すなわち、スライド硝子と
カバー用スライド硝子との間隙）に、プローブ懸濁液を
供給し、３７℃に保って一晩反応させた。なお、本実施
例１では、プローブ懸濁液として、変性したビオチン標
識プローブ（オンコー社製、ヒト第１番染色体αサテラ
イトＤＮＡ）１５ｎｇを含むハイブリゾールＶＩ（６５
％ホルムアミド／２×ＳＳＣ）（オンコー社製、”ハイ
ブリゾール”はオンコー社の登録商標である）を用い
た。

【００２８】最後に、スライド硝子上の標本を４３℃の
洗浄液（６５％ホルムアミド／２×ＳＳＣ）に１５分間
漬けて洗浄したのち、フルオレセイン標識アビジンを添
加して、プローブの標識であるビオチンとフルオレセイ
ン標識アビジンとを反応させた。これにより、プローブ
の結合位置に標識としてフルオレセインが結合した標本
が得られたので、プロピジウム・アイオダイドで染色体
の対比染色を行った後、標本を落射式蛍光顕微鏡で観察
したところ、ヒト第１番染色体αサテライトＤＮＡに蛍
光が観察され、バックグラウンドには蛍光の発光がな
く、良好なＳ／Ｎ比でハイブリダイゼーションシグナル
を検出することができた。

【００２９】なお、本実施例１では、ハイブリダイゼー
ション試験を行なったが、本実施例１の反応容器は、こ
れに限られず、他の反応に用いることもできる。また、
本実施例１では、カバー用スライド硝子にスペーサを接
着したが、標本スライド硝子に接着してもよい。

【００３０】（比較例１）反応容器に、長辺用スペーサ
１１を設けないことを除いては、実施例１と同様にして
反応を行なったところ、反応溶液および洗浄溶液の排出
が十分でなく、さらに、生成したハイブリッドに損傷が
発生したため、良好なＳ／Ｎ比が得られなかった。

【００３１】そこで、溶液の排出を遠心力ではなく、開
口部に濾紙を押しつけて、毛管作用により行なったが、
さらに十分な溶液排出ができず、良好なＳ／Ｎ比が得ら
れなかった。

【００３２】（比較例２）本比較例２では、長辺用スペ
ーサ１１を設けず、さらに、短辺用スペーサ１２の高さ
を１００μｍとしてスライド硝子１３、１４の間隔を１
００μｍとした。この間隙の広い反応容器を用いて、実
施例１と同様にして反応を行なったところ、反応溶液お
よび洗浄溶液の排出が十分でなく、さらに、生成したハ
イブリッドに損傷が発生したため、良好なＳ／Ｎ比が得
られなかった。

【００３３】そこで、溶液の排出を遠心力ではなく、開
口部に濾紙を押しつけて毛管作用により行なったとこ
ろ、実施例１と同様の良好なＳ／Ｎ比でハイブリダイゼ
ーションシグナルを検出することができた。ただし、約
４倍の試薬量が必要であった。

【００３４】（実施例２）本実施例２では、スペーサを
カバー用スライド硝子に取付けるのに、実施例１のよう
に短冊状の樹脂フィルムを接着するのではなく、樹脂ワ
ニスを用いて、カバー用スライド硝子に、スペーサを印
刷して、スペーサ付きカバー用スライド硝子を作製し
た。

【００３５】スペーサ付きカバー用スライド硝子は、つ
ぎのようにして作製した。まず、カバー用スライド硝子
（縦２．６ｃｍ、横７．６ｃｍ）の所定位置（左右の短
辺端部中央の長方形領域（幅３ｍｍ、長さ２６ｍｍ）
と、長辺の一方の端部中央の長方形領域（幅３ｍｍ、長
さ３ｃｍ））に、印刷により樹脂ワニスを塗布する。な
お、本実施例２では、樹脂ワニスとして、熱硬化性エポ
キシ樹脂組成物を用いた。つぎに、ワニスを塗布したカ
バー用スライド硝子を加熱し、樹脂の硬化温度（本実施
例では１２０℃）に４０分間保持して、樹脂を硬化さ
せ、スペーサ付きカバー用スライド硝子を得た。

【００３６】このスペーサ付きカバー用スライド硝子を
用いて、実施例１と同様の方法でハイブリダイゼーショ
ン試験を行なったところ、実施例１と同様の良好な結果
が得られた。

【００３７】なお、樹脂ワニスとしては、反応に使用す
る溶媒に溶解せず、反応に影響を与えず、厚さが容易に
変化しないものであれば、用いることができるが、エポ
キシ樹脂は、硬化収縮率が小さく寸法安定性が高い点
と、耐水、耐薬品性に優れている点で好ましい。

【００３８】本実施例２では、スペーサの設置範囲にワ
ニスを塗布したが、スペーサ設置範囲より広い範囲（例
えば、スライド硝子全面）にワニスを塗布し、不要部分
をエッチングや切除などの方法で除去することでスペー
サを形成してもよい。この場合、硬化前に除去しても、
硬化後に除去してもよい。

【００３９】また、カバー用スライド硝子ではなく、標
本スライド硝子にスペーサを形成してもよい。

【００４０】（実施例３）本実施例３で用いた反応装置
を図８に示す。本実施例３の反応装置は、回転機構７１
（図８（ａ）に図示）と、溶液供給機構７２（図８
（ｂ）に図示）と、４つの反応容器支持機構７３（図８
（ｃ）に図示）と、制御部８７（図８（ａ）に図示）と
を備える。なお、図８（ａ）は反応装置全体の平面図、
図８（ｂ）は図８（ａ）のＣＤ間の部分断面図、図８
（ｃ）は、反応容器支持機構７３の反応容器開口部９１
を下にした正面図である。

【００４１】回転機構７１は、回転軸８２と、該回転軸
を回転させる回転駆動部８６と、回転軸に取付けられて
おり、回転軸８２の回転に伴って回転する４本のアーム
８１とを備える。

【００４２】反応容器支持機構７３は、２枚の対向する
スライド硝子とスペーサとからなる反応容器８５（実施
例１の反応容器と同様のもの）と、該反応容器８５を着
脱可能に支持するスライド保持具８３と、アーム８１に
スライド保持具８３を接続させるためのスウィング軸８
４とを備える。なお、反応容器８５は、開口部９１がス
ウィング軸８４から最も遠くなるようにスライド保持具
８３に取付けられる。

【００４３】アーム８１の先端には、溝９０が設けられ
ており、スウィング軸８４は、この溝９０に、着脱可
能、回動可能に軸架される。なお、図８（ａ）では、一
つのアームのみスウィング軸８４が軸架されている状態
を図示した。回転軸８２およびアーム８１が回転する
と、図８（ａ）および（ｂ）にＢとして点線で示したよ
うに、遠心力により、軸架されているスウィング軸８４
が回転して該スウィング軸８４に接続されたスライド保
持具８３が遠心方向に持ち上がり、支持された反応容器
８５の開口部９１から溶液が排出される。

【００４４】溶液供給機構７２は、反応容器８５の開口
部９１を溶液に浸すための溶液容器８８と、該溶液容器
を昇降させる昇降駆動部８９とを備え、さらに、溶液容
器８８に溶液を供給するための溶液補給手段（図示せ
ず）を有する。なお、本実施例３では、溶液容器８８に
は保温機構が備えられており、内部に保持する溶液を所
望する温度に維持することができる。また、本実施例３
では、溶液容器８８に溶液を入れるときは、それに先立
って、溶液補給手段は、該溶液の溶媒により溶液容器８
８内部をあらかじめ洗浄する。

【００４５】本実施例３では、回転軸の回転を制御して
反応容器８５を溶液容器８８の上で停止させ（図８
（ａ）および（ｂ）にＡとして図示した状態）、昇降駆
動部８９により溶液容器８８を、該容器８８の内部に保
持する溶液の液面が、反応容器８５の開口部よりわずか
に高くなるように上昇させることにより、反応容器８５
の開口部９１を溶液容器８８内の溶液に浸して、毛管作
用により、反応容器８５内に溶液を導入する。

【００４６】駆動部８６は、回転機構７１の回転駆動部
８６と、溶液供給機構７２の昇降駆動部８９との動作を
制御する。

【００４７】本実施例３では、以上に説明した反応装置
を用いて、実施例１と同様のハイブリダイゼーション試
験を行なった。

【００４８】すなわち、まず、実施例１と同様にして染
色体標本試料入り反応容器８５を調製し、これをスライ
ド保持具８３にセットして、該反応容器８５の取付けら
れた反応容器支持機構７３のスウィング軸８４を、アー
ム８１の溝９０に軸架する。本実施例３では、制御装置
８７は、回転軸８２の回転を、アーム８１の先端部が溶
液容器８８の上部に位置するように停止させるので、こ
のとき、反応容器８５は、溶液容器８８の上部にある。

【００４９】このような状態で、制御装置８７の入力装
置（図示せず）から、作動開始の指示を入力すると、こ
れを受け付けた制御装置８７は、溶液補給手段により、
溶液容器８８に実施例１と同様のプローブ懸濁液を供給
する。つぎに、制御装置８７は、昇降機構８９に溶液容
器８８を上昇させ、液面が開口部９１に接するようにし
て、一定時間（溶液の粘度により異なるが、本実施例で
は３０秒）保持したのち、昇降機構８９に溶液容器８８
を下降させ、初期の位置に戻させる。これにより、反応
容器８５内にプローブ懸濁液が供給されるので、制御装
置８７は、このまま８時間放置し、ハイブリダイゼーシ
ョン反応を起こさせる。

【００５０】放置時間が経過すると、制御装置８７は、
回転駆動部８６を作動させ、回転軸８２を１０秒間回転
させて、反応容器８５内部の溶液を排出する。さらに、
制御装置８７は、溶液容器８８に実施例１と同様の洗浄
液を供給し、４３℃に保ちながら、昇降機構８９に溶液
容器８８を上昇させ、反応容器８５が溶液に浸かるよう
にして、１５分間保持したのち、昇降機構８９に溶液容
器８８を下降させ、初期の位置に戻させる。

【００５１】つぎに、制御装置は、回転駆動部８６を作
動させ、回転軸８２を１０秒間回転させて、反応容器８
５内部の溶液を排出したのち、制御装置８７は、溶液補
給手段により、溶液容器８８にフルオレセイン標識アビ
ジン溶液を添加し、昇降機構８９に溶液容器８８を上昇
させ、反応容器８５の開口部９１が溶液に浸かるように
して、３０秒間保持したのち、昇降機構８９に溶液容器
８８を下降させ、初期の位置に戻させる。これにより、
反応容器８５内にフルオレセイン標識アビジン溶液が導
入され、プローブの結合位置に標識としてフルオレセイ
ンが結合した標本が得られる。反応容器８５を反応装置
から取外し、さらに反応容器８５から標本スライド硝子
を外して、該スライド硝子上の標本をプロピジウム・ア
イオダイドで染色体の対比染色を行った後、標本を落射
式蛍光顕微鏡で観察したところ、ヒト第１番染色体αサ
テライトＤＮＡに蛍光が観察され、バックグラウンドに
は蛍光の発光がなく、良好なＳ／Ｎ比でハイブリダイゼ
ーションシグナルを検出することができた。

【００５２】本実施例３によれば、溶液の供給、排出等
を含む反応工程を、制御装置８７により自動的に行なう
ことができる。

【００５３】なお、本実施例３では、アームおよび反応
容器支持機構７３は、それぞれ４つずつ備えられている
が、回転が円滑に行なえれば、これらの数は４に限られ
ない。

【００５４】また、図８（ｂ）に９２として図示した位
置に撮像装置を設け、制御装置８７または他に用意した
情報処理装置により、該撮像装置により採取された反応
容器内の画像を分析し、試験結果（例えば、あらかじめ
定められた形状の染色体の、あらかじめ定められた位置
の色素沈着の有無）を判断して、判断結果を出力するよ
うにしてもよい。さらに、制御装置８７が、判断結果に
応じて、連続的に繰り返し試験を行なうようにしてもよ
い。例えば、連続的に複数の試料を検査しながら、あら
かじめ定められた形状の染色体の、あらかじめ定められ
た位置に色素の沈着が無いことを検出した回数をカウン
トするなどの処理が考えられる。このようにすれば、人
手を介することなく、多数の染色体試料を検査し、その
結果を蓄積することができる。

【００５５】

【発明の効果】以上に説明したように、本発明によれ
ば、スライド硝子のたわみを抑えて溶液の排出を容易に
することができる。さらに、本発明によれば、遠心力を
利用して溶液を排出することにより、粘度の高い溶液で
も迅速に排出することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の反応容器を示す上面図である。

【図２】本発明の反応容器を示す断面図である。

【図３】従来の反応チャンバからの溶液の排出をを示
す概念断面図である。

【図４】従来法による溶液の供給を示す概念図であ
る。

【図５】従来法による溶液の排出を示す概念図であ
る。

【図６】従来の改良方法による溶液の供給を示す概念
図である。

【図７】従来の反応容器を示す断面図である。

【図８】実施例３の反応装置を示す説明図である。

【符号の説明】

１１…長辺部スペーサ、１２…短辺部スペーサ、１
３…標本基剤、１４…カバー用基剤、３１，３２…
スライド硝子、３３…スペーサ、３４…試薬溶液、
４４…濾紙、７１…回転機構、７２…溶液供給機
構、７３…反応容器支持機構、８１…アーム、８
２…回転軸、８３…スライド保持具、８４…スウィン
グ軸、８５…反応容器、８６…回転駆動部、８７
…制御部、８８…溶液容器、８９…昇降機構、９
０…軸受用溝、９１…反応容器開口部、９２…撮像
装置設置位置。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所 // Ｃ１２Ｎ 15/09

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】液体を２枚の板状基材間に挾持する反応容
器の、該基材であって、少なくとも表裏一方の面の、少なくとも３点にスペーサ
を備えることを特徴とする反応容器用基材。
【請求項２】請求項１において、前記スペーサは、前記面の左右の短辺端部と、前後のう
ち一方の長辺端部とに備えられることを特徴とする反応
容器用基材。
【請求項３】板状の基材の少なくとも表裏一方の面の、
少なくとも３点にスペーサを設けるスペーサ設置工程を
備えることを特徴とする反応容器用基材の製造方法。
【請求項４】請求項３において、前記スペーサ設置工程は、前記面の、左右の短辺端部
と、前後のうち一方の長辺端部とにスペーサを設ける工
程であることを特徴とする反応容器用基材の製造方法。
【請求項５】請求項３において、前記スペーサ設置工程は、短冊状の樹脂フィルムを前記基材に接着する工程である
ことを特徴とする反応容器用基材の製造方法。
【請求項６】請求項３において、前記樹脂フィルムは、ポリテレフタル酸エチレン製であ
ることを特徴とする反応容器用基材の製造方法。
【請求項７】請求項３において、前記スペーサ設置工程は、印刷により、樹脂ワニスを前記基材に塗布してワニス膜
を形成する工程と、上記ワニス膜を硬化する工程とを有することを特徴とす
る反応容器用基材の製造方法。
【請求項８】請求項７において、前記樹脂ワニスは、熱硬化性エポキシ樹脂であり、前記ワニス膜を硬化する工程は、前記ワニス膜を加熱す
る工程を備えることを特徴とする反応容器用基材の製造
方法。
【請求項９】請求項７において、前記スペーサ設置工程は、上記ワニス膜の不要部分を除去する工程を、さらに有す
ることを特徴とする反応容器用基材の製造方法。
【請求項１０】液体を２枚の板状基材間に挾持する反応
容器であって、該基材のうち、少なくとも一方は、少な
くとも表裏一方の面の、少なくとも３点にスペーサを備
える反応容器と、運動により反応容器内部に加速度を印加する回転機構と
を備えることを特徴とする反応装置。
【請求項１１】請求項１０において、前記運動は、円運動であり、前記加速度は、遠心力であることを特徴とする反応装
置。
【請求項１２】請求項１０において、前記スペーサは、前記面の、左右の短辺端部と、前後の
うち一方の長辺端部とに備えられることを特徴とする反
応装置。
【請求項１３】請求項１０において、前記反応容器には、スペーサの備えられていない開口部
が確保されており、前記反応装置は、上記開口部を、液体の液面に浸すため
の液体供給機構をさらに有し、上記液体供給機構は、液体を保持するための液体容器と、液体容器に保持された液体の液面を変位させるための移
動機構とを有することを特徴とする反応装置。
【請求項１４】少なくとも表裏一方の面の、少なくとも
３点にスペーサを備える第１の板状基材の、スペーサを
備える面と、第２の板状基材とを対向させて構成される
反応容器を運動させることにより、第１の板状基材と第
２の板状基材との間隙に保持された液体に加速度を印加
し、該液体を該反応容器の外部に排出することを特徴と
する液体排出方法。
【請求項１５】請求項１４において、前記運動は、円運動であり、前記加速度は、遠心力であることを特徴とする液体排出
方法。
【請求項１６】請求項１４において、前記スペーサは、前記面の、左右の短辺端部と、前後の
うち一方の長辺端部とに備えられることを特徴とする液
体排出方法。