JPH08154656A

JPH08154656A - 核酸ハイブリダイゼーション試験の方法、核酸ハイブリダイゼーション試験用基材および核酸ハイブリダイゼーション試験用装置

Info

Publication number: JPH08154656A
Application number: JP6300918A
Authority: JP
Inventors: Kouji Yamagaki; 浩司山垣; Kaoru Naito; 薫内藤
Original assignee: Nikon Corp
Current assignee: Nikon Corp
Priority date: 1994-12-05
Filing date: 1994-12-05
Publication date: 1996-06-18

Abstract

(57)【要約】【目的】少量のプローブを有効に利用して核酸ハイブリ
ダイゼーション反応試験を行う。【構成】標本と、プローブ溶液とを２枚の基材間に挾持
し、基材に電圧を印加して、上記プローブを上記標本に
接近させ、プローブと標本とを反応させる核酸ハイブリ
ダイゼーション試験方法。該方法に用いられる、基板と
該基板の表面に備えられた導電体層とを有する基材。該
基材と、該基材に電圧を印加するための電源とを備える
核酸ハイブリダイゼーション試験用装置。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、生物学的試料検査の核
酸ハイブリダイゼーション試験の方法、核酸ハイブリダ
イゼーション試験用基材および核酸ハイブリダイゼーシ
ョン試験用装置に関する。

【０００２】

【従来の技術】生体組織には様々な生理活性物質、レセ
プター、酵素等の物質が存在しておりこれらの動態は生
理機能の発現に直接関与している。従って、これらの物
質の生合成が行なわれている細胞を知ることは、生化学
の研究上重要なだけでなく、生成異常等により発生する
病気の診断、治療にも寄与するところが大きい。これら
の物質は、ＤＮＡによりコードされており、ＤＮＡの転
写により、mRNAを介して生合成される。そこで、mRNAを
検出し、その組織中における局在性を調べれば、これら
のタンパク質が、どの細胞で作られているかを知ること
ができる。

【０００３】また、遺伝子または染色体の異常は、遺伝
病、ガン等の病気の原因となることが知られている。そ
こで、遺伝子または染色体の異常を検出することは、遺
伝病、ガン、その他の遺伝子に関係する多くの病気の診
断および治療方針決定上の有効な手段として活用でき
る。

【０００４】そこで、生物学的試料中のmRNAの存在を検
出したり、染色体や遺伝子の異常を検出する方法が、従
来より開発されてきた。核酸ハイブリダイゼーション反
応を用いる方法では、スライド硝子等の標本基材上に作
成した組織、細胞または染色体の標本中の、mRNAの存在
位置や染色体の異常を検出することができる。

【０００５】この方法は、mRNAまたは一本鎖DNAを、一
本鎖核酸プローブとを反応させることにより検出する。
この方法では、まず、スライド硝子上に組織標本や、細
胞または染色体標本を調製する。なお、DNAを検出する
場合は、細胞および染色体標本中の染色体DNAを、あら
かじめ熱処理等で変性させ、一本鎖DNAを得る。このよ
うにして、標本を調製したのち、組織標本中のmRNAや、
細胞または染色体標本中の一本鎖DNAを標的とする一本
鎖核酸プローブを含む溶液で処理することによりハイブ
リッドを形成させ、未反応の核酸プローブを洗浄除去す
る。ここで用いられる一本鎖核酸プローブは、検出対象
のmRNAまたは一本鎖DNAの塩基配列と相補的な塩基配列
を有し、容易に検出が可能な物質で標識されている。こ
のため、標本中のハイブリッドを形成した染色体やmRNA
を同定し、mRNAの局在や染色体異常の存在を検出するこ
とができる。

【０００６】ハイブリダイゼーションに使用される核酸
プローブは高価であるため、できるだけ少ないプローブ
量で反応を行わせることが望ましい。そのための方法と
して、２つの方法が用いられている。第１の方法として
は、２枚の標本スライド硝子の試料面を狭い間隙（３０
μｍ弱）を挾んで並行に対向させ、この間隙に毛管作用
によってプローブ溶液の供給を行うというものである。
スライド硝子間の間隔をできるだけ狭くすれば、使用す
るプローブ溶液の量を少なくすることができる。第２の
方法としては、プローブ溶液中にデキストラン硫酸等の
膨潤剤を添加するものである。このようにすれば、プロ
ーブ溶液の濃度を局所的に高くすることができるため、
使用するプローブの量を減らすことができる。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】しかし、第１の方法で
は、スライド硝子の間の間隔を狭くすれば狭くする程プ
ローブ溶液の供給の際に空隙が生じやすい。これは、試
料面の濡れ性が均一ではなく、プローブ溶液の浸入速度
に差があるため、濡れ性の悪い箇所に空気が閉じ込めら
れた部分が残ってしまうことによる。ハイブリダイゼー
ション反応は、プローブ溶液の存在しない空隙部分では
進行しないため、試料の一部が反応しないまま残ること
になってしまう。さらに、この第１の方法では、溶液の
排出が困難であり、未反応プローブの洗浄除去を充分に
行うことができない。従って、スライド硝子間の間隙を
狭くするのには限度があり、これだけでは使用するプロ
ーブ量を十分少なくできない。

【０００８】また、第２の方法では、プローブ溶液中へ
の膨潤剤の添加によりプローブ溶液の粘度が増すため、
プローブ溶液の供給および排出が困難である。さらに、
プローブが高濃度となる部域が染色体付近にあるとは限
らないため、ハイブリダイゼーション反応に全プローブ
を有効に利用することができない。

【０００９】そこで、本発明は、この様な従来の欠点を
解消し、少量のプローブを有効に利用して核酸ハイブリ
ダイゼーション反応を行わせるハイブリダイゼーション
試験方法、および、該方法を用いた試験装置の提供を目
的としている。

【００１０】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成するた
め、本発明では、標本と、プローブを含むハイブリダイ
ゼーション溶液とを少なくとも２枚の基材間に挾持し、
標本とプローブの結合反応であるハイブリダイゼーショ
ン反応を起こさせる核酸ハイブリダイゼーション試験の
方法において、上記基材に電圧を印加して、上記プロー
ブを上記標本に接近させるステップと、上記プローブと
上記標本とを反応させるステップとを、この順に備える
ことを特徴とする核酸ハイブリダイゼーション試験方法
が提供される。なお、上記プローブと上記標本とを反応
させるステップは、上記基材への間歇的な電圧の印加を
含むことが望ましい。また、上記２つのステップの代わ
りに、上記基材に電圧を印加して、上記プローブを上記
標本に接近させながら、該プローブと該標本とを反応さ
せるステップを備えるようにしてもよい。

【００１１】さらに、本発明では、標本と、プローブを
含むハイブリダイゼーション溶液とを少なくとも２枚の
基材間に挾持し、標本とプローブの結合反応であるハイ
ブリダイゼーション反応を起こさせる核酸ハイブリダイ
ゼーション試験において、標本とハイブリダイゼーショ
ン溶液とを挾持するために用いられる基材であって、基
板と、上記基板の少なくとも表裏一方の面に備えられた
導電体層とを有することを特徴とする核酸ハイブリダイ
ゼーション試験用基材が提供される。

【００１２】なお、前記基板は、ガラス板のような透明
材料であることが望ましい。また、導電体層としては、
クロム膜を用いることができる。上記基材は、前記導電
体層上に備えられた誘電体酸化物膜をさらに有すること
が望ましい。この誘電体酸化物膜としては、ＳｉＯ₂膜
を用いることができる。

【００１３】さらに、本発明では、少なくとも２枚の板
状基材を備え、標本とハイブリダイゼーション溶液とを
該基材間に挾持し、ハイブリダイゼーション反応を起こ
させる核酸ハイブリダイゼーション試験に用いられる核
酸ハイブリダイゼーション試験用装置において、電源を
備え、上記基材は、基板と、該基板の少なくとも表裏一
方の面に備えられた導電体層とを有し、上記電源は、上
記導電体層に電圧を印加する手段を備えることを特徴と
する核酸ハイブリダイゼーション試験用装置が提供され
る。この装置に用いられる基材は、本発明により提供さ
れる上述の基材を用いることが好ましい。

【００１４】なお、この装置は、上記電源を制御する制
御装置をさらに備えることが好ましく、該制御装置は、
上記電圧の印加を、間歇的に行なう手段を有することが
好ましい。

【００１５】

【作用】まず、従来技術によるハイブリダイゼーション
反応試験の方法を図２を用いて説明する。通常の標本ス
ライド硝子を用いたハイブリダイゼーション反応試験の
方法では、スライド硝子２２上に被検体標本（細胞およ
び／または染色体）１６を伸展し、該スライド硝子２２
とカバー基材２４とを対向させて、その間隙を核酸プロ
ーブ１７を含んだハイブリダイゼーション溶液１８で満
たすことにより、標本中の核酸とプローブ１７とのハイ
ブリッドを形成させる。

【００１６】このような従来技術では、核酸プローブ１
７のうちハイブリダイゼーション反応に有効利用される
ものは、被検体標本１６に含まれる標的の近くにある少
数のプローブだけであり、その他多数のプローブ、例え
ばカバー基材24付近にあるプローブは利用され難い。

【００１７】そこで、できるだけ多くのプローブを有効
利用し、ハイブリダイゼーション反応を促進するため、
本発明では、プローブ溶液に電圧を印加することによ
り、標本付近のプローブ溶液濃度を局所的に上昇させ
る。本発明のハイブリダイゼーション反応試験の方法
を、図１を用いて説明する。本発明のハイブリダイゼー
ション反応試験方法を用いた試験装置の概略図を図１に
示した。

【００１８】本発明のハイブリダイゼーション反応試験
装置は、対向する標本基材１２およびカバー基材１４
と、電源１５とを備える。標本基材１２およびカバー基
材１４は、表面にそれぞれ電極層１１，１３を備える基
板１０からなる。電源１５は、電極層１１，１３に電圧
を印加するためのものである。なお、基板１０の素材は
特に限定されるものではないが、ハイブリダイゼーショ
ン反応後に、ハイブリダイゼーションシグナルを検出す
るため、光学顕微鏡等で観察する際に、そのままスライ
ド硝子として用いることができるため、基板１０および
電極１１，１３は透明であることが好ましい。

【００１９】本発明のハイブリダイゼーション反応試験
方法では、このような装置を用い、図１に示すように、
標本基材１２上に細胞および染色体１６を伸展して、標
本基材１２とカバー基材１４との間隙に核酸プローブ１
７を含むハイブリダイゼーション溶液１８を満たした
後、電源１５を用いて電極層１１を陽極、電極層１３を
陰極として電圧を印加する。これにより、負電荷を有す
る核酸プローブ１７は陽極側である標本基材１２の方へ
移動するので、被検体標本１６付近の核酸プローブ１７
の濃度は、図２の状態よりも高くなる。

【００２０】なお、電圧を印加したままでは、核酸プロ
ーブ１７は陽極である電極層１１に引きつけられたまま
で自由に動けないので、ハイブリダイゼーション反応の
速度が遅くなってしまう。従って、被検体付近の核酸プ
ローブ濃度が所望の濃度に達すれば、印加電圧を低下さ
せたり、電圧の印加を停止するなどして核酸プローブ１
７の動きを自由にしてハイブリダイゼーション反応の速
度を高めることが望ましい。また、印加電圧を低下させ
たり、電圧の印加を停止すると、時間の経過に伴いプロ
ーブは拡散してしまう。このため、定期的に短時間電圧
を印加することにより、被検体１６付近の濃度を常に高
く維持することが望ましい。

【００２１】なお、導電体膜として金属膜を用いた場
合、組織、細胞および染色体が固着しにくかったり、標
本作成の過程で細胞および染色体が適度な大きさに伸展
しないことがある。そこで、導電体膜を誘電体酸化物の
薄膜により覆うことが好ましい。このようにすれば、電
圧印加の効果を損なうことなく、標本の伸展を改善する
ことができる。

【００２２】また、長時間高圧の電圧を印加すると、標
本および核酸プローブのハイブリッド体が損傷すること
があるため、電圧の印加は、短時間で停止することが望
ましい。このため、ハイブリダイゼーション反応を長時
間行う場合、電圧の印加により一旦標本基材側に引き寄
せられた核酸プローブが、電圧印加の停止により、再び
拡散してしまい、標本付近の核酸プローブ濃度が低下す
ることがある。従って、このようなプローブの核酸を抑
制するため、ハイブリダイゼーション反応を長時間行う
場合には、ハイブリダイゼーション反応中、ハイブリッ
ドを形成した核酸プローブに影響を及ぼさない程度の低
電圧を、間歇的に印加して拡散を抑えることが望まし
い。

【００２３】

【実施例】

（実施例１）本実施例１では、標本基材およびカバー基
材として、スライド硝子の表面にスパッタリングにてク
ロムの導電体膜を厚さ１００ｎｍになるように形成した
７．６ｃｍ×２．６ｃｍのスライド硝子を２枚用意し
た。さらに、この導電体膜に電圧を印加するための配線
および電源を用意した。

【００２４】本実施例１では、バソプレッシンmRNAの3'
糖蛋白質コード領域の所在を検出する。まず、ラット
を、生理食塩水および固定液（４％パラホルムアルデヒ
ドを含む０．１ｍｏｌ／ｌナトリウムリン酸緩衝液）を
用いて潅流固定した後、脳を取り出し、固定液に１時間
浸したのち、３０％のショ糖を含む４℃の０．１ｍｏｌ
／ｌナトリウムリン酸緩衝液中に一晩浸した。この一晩
固定した組織を、２０μｍの厚さにスライスし、上記導
電体膜を形成したスライド硝子（標本基材）にのせた。

【００２５】この標本基材上の組織切片を、ピロ炭酸ジ
エチルでリンスし、該組織切片上に前処理用混合溶液を
１００μｌ滴下して３７℃に保持し、１時間インキュベ
ートした。本実施例１では、前処理用混合溶液は、塩化ナトリウム０．３ｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウム０．０３ｍｏｌ／ｌ牛血清アルブミン０．２％ポリビニルピロリドン０．２％フィコール０．２％ホルムアミド５０％イーストｔＲＮＡ８５ｎｇ/ｍｌ一本鎖サーモン精子ＤＮＡ０．１％を含有するように、２０×ＳＳＣ（和光純薬工業（株）
製）と、５０×デンハルト溶液（和光純薬工業（株）
製）と、ホルムアミドと、イーストｔＲＮＡ溶液と、一
本鎖サーモン精子ＤＮＡ溶液とを混合して調製した。な
お、この前処理は、イーストｔＲＮＡおよび一本鎖サー
モン精子ＤＮＡ溶液により、プローブの非特異結合を阻
止するために行なわれるものである。

【００２６】つぎに、標本基材上の前処理用溶液に、１
ｐｍｏｌ／ｍｌとなるようにプローブを添加してハイブ
リダイゼーション溶液とし、該溶液の上にカバー基材を
被せて、標本およびハイブリダイゼーション溶液を２枚
のスライド硝子（標本基材およびカバー基材）で挾持し
た後、スライド硝子上に形成された導電体膜に１０Ｖ／
ｃｍ²の電圧を５分間印加してから、一晩放置した。な
お、２枚のスライド硝子の間隙は、約１００μｍとなっ
た。また、本実施例１では、プローブとして、アルカリ
ホスファターゼで標識した、バソプレッシンmRNAの３’
糖蛋白質コード領域に相補的な27塩基のオリゴヌクレオ
チドを用いた。このプローブは、バソプレッシンmRNAの
３’糖蛋白質コード領域に特異的に結合する。

【００２７】つぎに、標本基材の標本を、２×ＳＳＣ
（２０×ＳＳＣ（和光純薬工業（株）製）の１０倍希釈
液）から、０．５×ＳＳＣ（２×ＳＳＣの４倍希釈液）
になるまで、徐々に薄い溶液を用いながら３７℃で繰り
返し洗浄した。０．５×ＳＳＣによる洗浄後の標本を、
さらに０．１ｍｏｌ／ｌトリス緩衝液で洗浄した後、
０．１ｍｏｌ／ｌの塩化ナトリウムと５０ｍｍｏｌ／ｌ
の塩化マグネシウムとを含む０．１ｍｏｌ／ｌトリス緩
衝液中で、０．３３ｍｇ／ｍｌのニトロブルーテトラゾ
リウムおよび０．１７ｍｇ／ｍｌの５−ブロモ−４−ク
ロロ−３−インドリルリン酸と反応させた。これは、プ
ローブの結合した部位を、比色により検出することがで
きるようにするために行なわれる。５−ブロモ−４−ク
ロロ−３−インドリルリン酸は、プローブの標識である
アルカリホスファターゼにより、青色のインジゴとな
り、沈着する。また、このインジゴ生成反応に伴って発
生する水素イオンにより、ニトロブルーテトラゾリウム
が紫色のジホルマザンに変化し、発色する。これによ
り、シグナルを増幅することができる。

【００２８】最後に、標本基材上の標本を水で洗浄して
反応を停止させた後、乾燥させ、光学顕微鏡で観察した
ところ、アルカリホスファターゼ活性のある部位（すな
わち、プローブが結合した部位）で、青紫色の沈着が生
じており、バックグラウンドには色素沈着がなく、良好
なＳ／Ｎ比でハイブリダイゼーションシグナルを検出す
ることができた。

【００２９】（比較例１）導電体膜を形成したスライド
硝子の代わりに、導電体膜を形成していないスライド硝
子を用い、スライド硝子に電圧を印加しないこと以外は
実施例１と同様に処理して、ハイブリダイゼーションシ
グナルを検出したところ、ハイブリダイゼーションシグ
ナルは非常に弱く、実施例１の結果に比べてＳ／Ｎ比が
きわめて低かった。

【００３０】（比較例２）導電体膜を形成したスライド
硝子の代わりに、導電体膜を形成していないスライド硝
子を用い、スライド硝子に電圧を印加しないことと、ハ
イブリダイゼーション溶液のプローブ濃度を、実施例１
の５倍の濃度である５ｐｍｏｌ／ｍｌとしたこと以外
は、実施例１と同様に処理して、ハイブリダイゼーショ
ンシグナルを検出したところ、シグナルのＳ／Ｎ比は実
施例１と同様であった。

【００３１】（実施例２）本実施例２で用いたハイブリ
ダイゼーション装置を図３に示す。本実施例の装置は、
スライド硝子２０の表裏の一方の面に、クロムの導電体
層１１，１３とＳｉＯ₂の誘電体酸化物膜１９とが積層
された、縦横各１ｃｍの標本基材１２およびカバー基材
１４と、スペーサ２２と、導電体層１１，１３に電圧を
印加するための電源１５と、電圧の印加を制御するため
の制御装置２１とを備える。

【００３２】なお、クロムからなる導電体層１１，１３
の厚さは１００ｎｍであり、スパッタリングにより形成
される。また、ＳｉＯ₂膜の厚さは２００ｎｍであり、
導電体層１１または１３上に、スパッタリングにより形
成される。なお、本実施例２では、ＳｉＯ₂膜により、
標本（細胞および染色体）を適度な大きさに伸展させる
ことができた。

【００３３】また、標本基材１２およびカバー基材１４
は、ＳｉＯ₂膜１９を内側にして、対向しており、その
間隙は、スペーサ２２により１００μｍに保たれてい
る。これは、溶液の供給および排出を毛管作用を利用し
て行なったても、空隙の発生がなく、かつ排出が容易な
間隙を確保するためである。スペーサとしては、使用す
る各溶液に溶解せず、ハイブリダイゼーション反応に影
響を与えないものであれば用いることができるが、本実
施例２では、ポリテレフタル酸エチレン製の高さ１００
μｍの柱状部材を用いた。なお、本実施例２では、スペ
ーサ２２は、カバー基材１４のＳｉＯ₂膜の四隅に接着
されている。

【００３４】本実施例２では、ヒト末梢血単核白血球を
被検体として用いた。ヒトの末梢血から単核白血球を分
離し、この単核白血球をハンクスＢＢＳ液（和光純薬工
業（株）製）で洗った後、５％炭酸ガス雰囲気下、３７
℃に保った培養液中で７２時間培養した。培養液には、
２０％の血清と、２％のＰＨＡ（フィトヘムアグルチニ
ン）を溶解したＲＭＰＩ１６４０（和光純薬工業（株）
製）の溶液を用いた。培養後、培養細胞を３７℃の０．
０７５ｍｏｌ／ｌ塩化カリウム溶液で１０分間低張処理
した後、固定液（メタノール：酢酸＝３：１）で固定し
て、細胞を懸濁させた固定液を得た。

【００３５】この細胞を懸濁させた固定液を、標本基材
１２のＳｉＯ₂膜上に滴下して染色体標本を得、該染色
体標本についてハイブリダイゼーション試験を行なっ
た。ハイブリダイゼーション反応に用いられる各種試薬
には、オンコークロモソームインサイチューハイブ
リダイゼーションシステム（オンコー社製）の試薬を
用いた。

【００３６】まず、標本基材１２上の標本を１×ＲＮａ
ｓｅ（１０００×ＲＮａｓｅ（オンコー社製）の１００
０倍希釈液）で処理し、エタノールで脱水後、７０％の
ホルムアミドを溶解した７０℃の２×ＳＳＣ液（２０×
ＳＳＣ（オンコー社製）の１０倍希釈液）中に入れ、染
色体ＤＮＡを変性させた。なお、標本基材１２とカバー
基材１４との間隙への溶液の供給および排出は、毛管作
用を利用して行なった。

【００３７】つぎに、標本基材１２上の標本をエタノー
ルで脱水し、風乾後、変性したビオチン標識プローブ
（オンコー社製、ヒト第１番染色体αサテライトＤＮ
Ａ）３ｎｇを含むハイブリゾールＶＩ（６５％ホルムア
ミド／２×ＳＳＣ）（オンコー社製、”ハイブリゾー
ル”はオンコー社の登録商標である）を、標本基材１２
とカバー基材１４との間隙へ供給し、電圧（１０Ｖ／ｃ
ｍ²）を１０分間印加してから、３７℃に保って一晩反
応させた。ただし、制御装置２１により１時間おきに５
分間だけ電圧（１Ｖ／ｃｍ²）を印加した。これによ
り、核酸プローブの拡散を抑えることができた。

【００３８】最後に、標本基材１２上の標本を４３℃の
６５％ホルムアミド／２×ＳＳＣに１５分間漬けて洗浄
したのち、フルオレセイン標識アビジンを添加して、プ
ローブの標識であるビオチンとフルオレセイン標識アビ
ジンとを反応させた。これにより、プローブの結合位置
に標識としてフルオレセインが結合した標本が得られた
ので、プロピジウム・アイオダイドで染色体の対比染色
を行った後、標本を落射式蛍光顕微鏡で観察したとこ
ろ、ヒト第１番染色体αサテライトＤＮＡに蛍光が観察
され、バックグラウンドには蛍光の発光がなく、良好な
Ｓ／Ｎ比でハイブリダイゼーションシグナルを検出する
ことができた。

【００３９】（比較例３）標本基材およびカバー基材と
して、導電体層と誘電体酸化物膜とを備える基材１２，
１４の代わりに、導電体層と誘電体酸化物膜とのいずれ
も有しないスライド硝子２２，２４を用い、標本基材お
よびカバー基材に電圧を印加しないこと以外は実施例２
と同様に処理して、ハイブリダイゼーションシグナルを
検出したところ、ハイブリダイゼーションシグナルは非
常に弱く、実施例２の結果に比べてＳ／Ｎ比がきわめて
低かった。

【００４０】（比較例４）標本基材およびカバー基材と
して、導電体層と誘電体酸化物膜とを備える基材１２，
１４の代わりに、導電体層と誘電体酸化物膜とのいずれ
も有しないスライド硝子２２，２４を用い、標本基材お
よびカバー基材に電圧を印加せず、さらに、ハイブリダ
イゼーション溶液として、実施例２の５倍の濃度である
プローブ１５ｎｇを含むハイブリゾールＶＩを用いたこ
と以外は、実施例２と同様に処理して、ハイブリダイゼ
ーションシグナルを検出したところ、シグナルのＳ／Ｎ
比は実施例２と同様であった。

【００４１】（上記各実施例１，２）上記各実施例１，
２によれば、電圧を印加することにより、核酸プローブ
を標本基材側に引き寄せて核酸ハイブリダイゼーション
反応速度および反応効率を高めることができる。さら
に、実施例２によれば、導電体層を誘電体酸化物で覆う
ことにより、標本の固着、伸展を抑制することなく、基
材に電極を備えることができる。

【００４２】

【発明の効果】本発明によれば、少量のプローブを有効
に利用して核酸ハイブリダイゼーション反応を行うこと
ができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のハイブリダイゼーション装置を示す
説明図である。

【図２】従来のハイブリダイゼーション装置を示す説
明図である。

【図３】実施例２で用いたハイブリダイゼーション装
置を示す構成図である。

【符号の説明】

１０…ガラス基板、１１，１３…電極層、１２，２
２…標本基材、１４，２４…カバー基材、１５…電
源、１６…被検体標本、１７…核酸プローブ、１８
…ハイブリダイゼーション溶液、１９…誘電体酸化物
膜、２０…スライド硝子、２１…制御装置、２２
…スペーサ。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】標本と、プローブを含むハイブリダイゼー
ション溶液とを少なくとも２枚の基材間に挾持し、標本
とプローブの結合反応であるハイブリダイゼーション反
応を起こさせる核酸ハイブリダイゼーション試験におい
て、標本とハイブリダイゼーション溶液とを挾持するた
めに用いられる基材であって、基板と、上記基板の少なくとも表裏一方の面に備えられた導電体
層とを有することを特徴とする核酸ハイブリダイゼーシ
ョン試験用基材。
【請求項２】請求項１において、前記基板は、ガラス板であることを特徴とする核酸ハイ
ブリダイゼーション試験用基材。
【請求項３】請求項１において、前記導電体層上に備えられた誘電体酸化物膜をさらに有
することを特徴とする核酸ハイブリダイゼーション試験
用基材。
【請求項４】請求項１または３において、前記導電体層は、クロムからなることを特徴とする核酸
ハイブリダイゼーション試験用基材。
【請求項５】請求項３において、前記誘電体酸化物膜は、ＳｉＯ₂からなることを特徴と
する核酸ハイブリダイゼーション試験用基材。
【請求項６】少なくとも２枚の板状基材を備え、標本と
ハイブリダイゼーション溶液とを該基材間に挾持し、ハ
イブリダイゼーション反応を起こさせる核酸ハイブリダ
イゼーション試験に用いられる核酸ハイブリダイゼーシ
ョン試験用装置において、電源を備え、上記基材は、基板と、該基板の少なくとも表裏一方の面
に備えられた導電体層とを有し、上記電源は、上記導電体層に電圧を印加する手段を備え
ることを特徴とする核酸ハイブリダイゼーション試験用
装置。
【請求項７】請求項６において、前記電源を制御する制御装置をさらに備えることを特徴
とする核酸ハイブリダイゼーション試験用装置。
【請求項８】請求項７において、前記制御装置は、上記電圧の印加を、間歇的に行なう手
段を有することを特徴とする核酸ハイブリダイゼーショ
ン試験用装置。
【請求項９】標本と、プローブを含むハイブリダイゼー
ション溶液とを少なくとも２枚の基材間に挾持し、標本
とプローブの結合反応であるハイブリダイゼーション反
応を起こさせる核酸ハイブリダイゼーション試験の方法
において、上記基材に電圧を印加して、上記プローブを上記標本に
接近させるステップと、上記プローブと上記標本とを反応させるステップとを、
この順に備えることを特徴とする核酸ハイブリダイゼー
ション試験方法。
【請求項１０】請求項９において、上記プローブと上記標本とを反応させるステップは、上
記基材への間歇的な電圧の印加を含むことを特徴とする
核酸ハイブリダイゼーション試験方法。
【請求項１１】標本と、プローブを含むハイブリダイゼ
ーション溶液とを少なくとも２枚の基材間に挾持し、標
本とプローブの結合反応であるハイブリダイゼーション
反応を起こさせる核酸ハイブリダイゼーション試験の方
法において、上記基材に電圧を印加して基材面に電場をつくり、上記
プローブを上記標本に接近させて、該プローブと該標本
とを反応させるステップを備えることを特徴とする核酸
ハイブリダイゼーション試験方法。