JPH08151320A

JPH08151320A - 赤糠由来の皮膚及び浴用化粧料

Info

Publication number: JPH08151320A
Application number: JP7273701A
Authority: JP
Inventors: Yasuko Sawai; 保子沢井; Katsumi Ajisaka; 勝美鯵坂; Hiroyuki Ito; 裕之伊藤
Original assignee: Meiji Milk Products Co Ltd
Current assignee: Meiji Dairies Corp
Priority date: 1994-09-28
Filing date: 1995-09-28
Publication date: 1996-06-11

Abstract

(57)【要約】【解決手段】赤糠の熱水抽出物にエタノールを加え、
生成した沈澱物を除去して得た上清を有効成分とする化
粧料。【効果】該上清は、すぐれたメラニン生成抑制作用、
抗炎症作用、抗酸化作用、保湿作用を有し、該上清を有
効成分とする本化粧料は、安全性の高い化粧料、特に皮
膚化粧料及び浴用化粧料として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、赤糠の熱水抽出物
由来の成分を有効成分とする化粧料に関するものであ
る。更に、詳細には、本発明は、すぐれたメラニン生成
抑制作用のみならず、皮膚を健やかに保つための抗炎症
作用、抗酸化作用、適度な吸湿作用、保湿作用等を併せ
持つ、安定性においてもすぐれた天然物由来の皮膚化粧
料及び／又は浴用化粧料に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】紫外線照射によって引き起こされる皮膚
の炎症に見られる組織の傷害は、シミ、シワ等に深く関
わっていることが報告されている。この炎症には紫外線
照射によって皮膚で誘起される活性酸素による皮脂の酸
化の関与が示唆されている。炎症の結果、好中球から遊
離されるロイコトリエン（ＬＴＢ₄、ＬＴＣ₄）、プロス
タグランジンＥ₂、肥満細胞から遊離されるヒスタミ
ン、セロトニン等の炎症メディエーターが色素細胞の刺
激に関与していると考えられている。また、細胞および
組織の傷害がシワに深く関与していると考えられてい
る。さらには、ＬＴＢ₄の産生酵素である５−リポキシ
ゲナーゼ阻害物質がアトピー性皮膚炎の患者に適用され
ているなど、すなわち皮膚の炎症を抑制することは、皮
膚を健やかに保つために重要な要因と考えられる。

【０００３】色素細胞内で生成されるメラニンは、通常
皮膚に存在し、紫外線による影響から身体を保護すると
いう重要な役割を担う医学上重要な因子である。しか
し、メラニンが過剰に合成され、更に、メラニンが皮膚
上で不均一に分布した場合シミ、ソバカス等を形成する
ため、いずれも美容上の大きな問題となっている。この
シミ、ソバカス等の色素沈着は、紫外線照射によって増
悪するものである。この紫外線照射によって誘導される
色素細胞内でのメラニン生成の促進には、メラニン細胞
刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）とその受容体をはじめ、広
く皮膚の炎症に関わっている。

【０００４】従来、色白の美肌を得る目的で、色素細胞
の変性、致死等の作用により皮膚の漂白を行うものが使
用されていたが、皮膚本来の生理機能を損ない、非可逆
的白斑、色素異常、カブレ等の副作用を引き起こすとい
う欠点を有している。近年、チロシナーゼを阻害する物
質の探索が主としておこなわれ、多数の植物抽出液など
が開示されている。しかし、チロシナーゼ阻害活性が高
いにも関わらず、メラニン生成細胞でのメラニン生成抑
制効果が十分でないものがあるなど、これら従来のメラ
ニン生成抑制剤にはメラニン生成抑制効果を発揮すると
は言い難いものがあり、必ずしも満足出来るものではな
かった。そこで、優れたメラニン生成抑制作用を安定し
て示し、紫外線照射による皮膚の炎症を予防する作用を
併せ持つ、結果的には、シミ、シワの防止が期待される
天然物由来の安全性の高い化粧料の開発が望まれてい
た。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】そこで本発明者らは、
上記した当業界において開発が望まれているすぐれた生
理作用を各種併有するだけでなく安全性も高い化粧料を
開発することを、その目的として設定した。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記目的を達
成するためになされたものであって、赤糠に着目して鋭
意検討した結果、その熱水抽出物にエタノールを加え、
生成した析出物を除去した上清が、すぐれたメラニン生
成抑制作用を示し、しかも、抗炎症作用、抗酸化作用の
ほか、適度な吸湿作用、保湿作用を有することを発見
し、安全性にもすぐれていることも確認して、本発明が
完成されたのである。以下、本発明を詳述する。

【０００７】本発明においては、原料として赤糠を使用
する。赤糠としては玄米の精米時に副生する赤糠であれ
ばすべてのものが使用できる。赤糠は、格別の前処理を
行うことなく、直ちに熱水抽出処理してもよいし、それ
に先立ち脱脂処理を行ってもよい。

【０００８】脱脂処理は、有機溶媒と赤糠を接触させれ
ばよく、有機溶媒中に赤糠を浸漬したり、両者を攪拌し
たりして、両者を充分に接触させて行う。有機溶媒とし
ては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノ
ール等のアルコール類、エチルエーテル等のエーテル
類、アセトン等のケトン類、その他常用されるヘキサ
ン、石油エーテル等の脱脂溶媒が広く使用される。

【０００９】脱脂処理は常法によって行えばよい。例え
ば、脱脂溶媒を赤糠に対して０．５〜２５倍量、好まし
くは５〜１５倍量程度用い、５時間〜５日間、好ましく
は０．５日〜３日間、０〜４０℃の冷所、好ましくは２
０〜２５℃で処理すればよい。脱脂溶媒としては、上記
した溶媒を単用又は併用するほか、５０〜９８％の水性
溶媒、例えば８５〜９５％水性エタノール等も使用可能
である。このようにして溶媒抽出を行った後、濾過、遠
心分離、デカンテーション等固液分離を行って、固体残
渣（脱脂赤糠）を分離採取する。

【００１０】固体残渣は、必要あれば乾燥した後、熱水
抽出する。熱水抽出としては、熱水（７５〜１００℃、
好ましくは９０〜１００℃）を用いて抽出する方法がす
べて使用可能であって、熱水を加えて所定温度を維持し
ながら必要あれば攪拌を行って抽出する方法、加熱還流
する方法等が適宜使用される。抽出に使用する水として
は、水道水や井戸水等も使用可能であるが、蒸留水や脱
イオン水を使用するのが好適である。抽出時間は、有効
成分が抽出されるに必要な時間であれば良く、格別の限
定はないが、通常は３０分以上とし、１００℃に加熱還
流する場合は、２〜５時間程度で充分である。過度に長
時間かけて抽出しても抽出効果は一定のレベルで停滞し
てしまうので経済的ではない。抽出水の使用量は、６〜
１０倍量又はそれ以上とするのが好ましい。

【００１１】熱水抽出後、１時間〜１夜程度冷所に放置
する等、３０〜４０℃程度に冷却した後、これにアルコ
ール（メタノール、エタノール及び／又はプロパノー
ル）を終濃度３０〜８０％、好ましくは５０〜６０％加
える。その後、２０〜４０℃で０．５時間〜１夜程度、
好ましくは１時間放置する。

【００１２】次いでこれを、遠心分離、濾過（通常の濾
過、加圧濾過、吸引濾過等）、デカンテーション等固液
分離処理し、上清ないし濾液を得る。この上清（濾
液）、つまり液状部が本発明の化粧料の有効成分であ
る。上清（この液状部を以下において上清ということも
ある）は、上清それ自体を有効成分として使用できるこ
とはもちろんのこと、上清の処理物（上清の濃縮物、ペ
ースト状物、スプレードライ、凍結乾燥、熱風乾燥、風
乾その他の乾燥物、場合によっては希釈物等）も使用可
能である。このようにして、例えば凍結乾燥して得た乾
燥物を最終品（ＭＦＷということもある）として得るこ
とができる。

【００１３】以上赤糠を脱脂した場合（脱脂法）につい
て述べたが、本発明は脱脂を行うことなく実施すること
（非脱脂法）も可能である。その場合は、赤糠を脱脂す
ることなく、先ず熱水抽出する。脱脂処理、濾過残渣回
収処理及び乾燥処理は、いずれも行う必要がなく、赤糠
を直接熱水で抽出すればよい。

【００１４】熱水抽出は、先に述べた方法（脱脂法）に
したがって行えばよい。

【００１５】次に冷却処理を行う。冷却処理も先に述べ
た脱脂法の場合と同様に行えばよいが、冷却は２０〜４
０℃までで速やかに行うのが好適である。次いで脱脂法
の場合と同様にアルコール沈澱処理を行うが、アルコー
ル終濃度は、４０〜５０％とするのが好適である。アル
コールを添加して、２０〜４０℃、１０分〜１０時間、
好ましくは３０分〜３時間程度静置する。例えば２０℃
で１時間静置すると、高い活性回収率が得られる。

【００１６】しかる後に、脱脂法の場合と同様に固液分
離、上清（濾液）の乾燥処理を行って有効成分を得る。
このようにして、例えばスプレードライ処理した乾燥物
を最終製品（ＭＦＷ）として得ることができる。なお、
非脱脂法で上清（濾液）をスプレードライにかける場
合、粉末化を確実にするために、予じめヘキサン等の脱
脂溶媒で分配し、脱脂を行うことが好ましい。

【００１７】本発明においては、このようにして製造し
た上清、及びその処理物、乾燥物（例えばＭＦＷ）が有
効成分として使用できるほか、それらのアルコール分画
物も有効成分として使用できる。

【００１８】すなわち、脱脂法又は非脱脂法で得たアル
コール上清を減圧濃縮して２〜２０倍濃縮液（懸濁液）
を調製し、これを１，０００〜２０，０００ｒｐｍ、５
〜６０分間、好ましくは１，０００〜５，０００ｒｐ
ｍ、１０〜３０分間遠心分離して濃縮液上清と沈澱に分
離する。この沈澱を有効成分として使用できる。

【００１９】次いで沈澱に１〜９０％水性アルコール、
好ましくは４０〜６０％水性アルコール（メタノール、
エタノール及び／又はプロパノール）を加えて溶解した
後、１，０００〜２０，０００ｒｐｍ、５〜６０分間、
好ましくは５，０００〜１５，０００ｒｐｍ、１０〜３
０分間遠心分離し、沈澱（水性アルコール沈澱−２）と
上清（水性アルコール上清−２）とに分離する。このよ
うにして得た沈澱及び上清は、いずれも本発明の有効成
分として使用することができる。また、この上清は高活
性画分であって、ＭＦＷ−Ｈと命名した。

【００２０】また、脱脂法又は非脱脂法で得た乾燥粉末
（ＭＦＷ）について、これに蒸留水を加えて上述したア
ルコール上清濃縮液（懸濁液）と同じ濃度とした後、
１，０００〜２０，０００ｒｐｍ、５〜６０分間、好ま
しくは３，０００〜１０，０００ｒｐｍ、１０〜３０分
間遠心分離し、上清と沈澱に分離する。この沈澱も有効
成分として使用できる。

【００２１】次いで沈澱を上記と同様に１〜９０％水性
アルコール、好ましくは４０〜６０％水性アルコールを
加えて溶解した後、遠心分離し（但し３，０００〜１
０，０００ｒｐｍとするのが好ましい）、沈澱（水性ア
ルコール沈澱−２）と高活性画分を含む上清（水性アル
コール上清−２：ＭＦＷ−Ｈ）とに分離する。これらの
画分は、いずれも本発明に係る化粧料の有効成分として
使用することができる。

【００２２】本発明に係る化粧料は、上記した各成分な
いし画分を有効成分として０．１〜１重量％、好ましく
は０．５〜１重量％（乾燥重量として）配合し、これに
常用される化粧用基剤を加えて常法にしたがい、固体、
半固体又は液体の形態に製剤化して、一般化粧料、皮膚
化粧料、浴用化粧料とすればよい。

【００２３】本発明に係る化粧料には、通常の化粧料、
皮膚外用剤、入浴剤、医薬部外品、医薬品等に用いられ
る各種任意成分、例えば、油剤、保湿剤、増粘剤、防腐
剤、乳化剤、顔料、ｐＨ調整剤、薬効成分、紫外線吸収
剤、香料等を適宜配合することができ、常法にしたがっ
て、本発明に係る化粧料を製造することができる。

【００２４】また本発明に係る化粧料は、一般化粧料、
皮膚化粧料、皮膚外用剤、浴用化粧料に限定されるもの
ではなく、医薬部外品、外用医薬品等を包含するもので
あり、その剤型もクリーム、乳液、ファンデーション、
パック、ローション状、ゲル状、溶液状、スティック状
等、その目的に応じて任意に選択することができ、美
白、抗炎症、抗酸化、適度の吸湿、保湿を目的とする化
粧料として、必要量を適宜回数、適用すればよい。

【００２５】以下に本発明を実施例により具体的に説明
するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【００２６】

【実施例１：有効成分の製造（１）】１００ｇの赤糠
に、エタノールを１．１Ｌ加えた。これを攪拌して２日
間抽出した後、ＷｈａｔｍａｎＮｏ．２ｆｉｌｔｅ
ｒで濾過した。濾過残渣を室温にて乾燥させて溶媒は飛
ばして乾固物を得た。これに８００ｍｌの蒸留水を加え
て１００℃で４時間加熱抽出し、１昼夜冷所に放置し
た。これにエタノールを終濃度５０〜６０％になるよう
に加え、１晩冷所に保存した。このものをＷｈａｔｍａ
ｎＮｏ．２ｆｉｌｔｅｒで濾過した。得られた濾液
を減圧濃縮した後凍結乾燥して、本発明有効成分組成物
（ＭＦＷ）を得た。本組成物は、淡黄色粉末であって、
水に難溶であり、５０％エタノールには可溶な物質であ
る。

【００２７】

【実施例２：有効成分の製造（２）】１００ｇの赤糠
に、エタノールを５００ｍｌ加えた。これを攪拌して２
０時間抽出した後、ＷｈａｔｍａｎＮｏ．２ｆｉｌ
ｔｅｒで濾過した。濾過残渣を室温で乾燥させて乾固物
を得た。これに８００ｍｌの蒸留水を加えて１００℃で
２時間加熱抽出し、１時間の冷所放置で２０〜３０℃程
度にまで冷却した。これにエタノールを終濃度５０〜６
０％になるように攪拌しつつ加え、その後１時間放置し
た。このものをＷｈａｔｍａｎＮｏ．２ｆｉｌｔｅ
ｒで濾過した。その後実施例１と同様の処理を行い、乾
燥粉末（ＭＦＷ）を得た。

【００２８】

【実施例３：有効成分の製造（３）】１００ｇの赤糠に
８００ｍｌの蒸留水を加えて１００℃で２時間熱水抽出
し、３０℃に急速冷却した。これにエタノールを原料に
対して８倍量加え、攪拌した後２０℃に１時間静置し
た。このものをＷｈａｔｍａｎＮｏ．２ｆｉｌｔｅ
ｒで濾過し、濾液（上清）を回収した。そして、この濾
液（上清）を減圧濃縮後、凍結乾燥して乾燥粉末（ＭＦ
Ｗ）を得た。

【００２９】

【実施例４：有効成分の製造（４）】１００ｇの赤糠に
８００ｍｌの蒸留水を加えて１００℃で２時間加熱抽出
し、３０℃に急速冷却した。これにエタノールを原料に
対して８倍量加え、攪拌後、２０℃に１時間静置した。
このものをＷｈａｔｍａｎＮｏ．２ｆｉｌｔｅｒで
濾過し、濾液（上清）を回収した。そして、この濾液
（上清）を減圧濃縮して乾固物を得た。この乾固物５ｇ
当たり２５ｍｌの５０％エタノールに溶解した。これを
等量のｎ−ヘキサンで２回分配し、ｎ−ヘキサン層を除
去し、５０％エタノール層を回収した。この５０％エタ
ノール層を減圧濃縮しスプレードライして乾燥粉末（Ｍ
ＦＷ）を得た。

【００３０】

【実施例５：有効成分の製造（５）】実施例２で得た乾
燥粉末（ＭＦＷ）を蒸留水で溶解／懸濁（６７ｍｇ／ｍ
ｌ）した後、５，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離して
上清と沈澱に分離した。沈澱に５０％エタノールを加え
て溶解し、５，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離して沈
澱（５０％ＥｔＯＨ沈澱−２）と上清（５０％ＥｔＯＨ
上清−２：ＭＦＷ−Ｈ）を得た。また、実施例２に記し
た小規模処理を１００倍にスケールアップして処理し
（これをＳＤという）、同様に５０％ＥｔＯＨ沈澱−２
及び高比活性画分ＭＦＷ−Ｈをそれぞれ得た。

【００３１】

【実施例６：有効成分の製造（６）】実施例２で得た濾
液（上清）を減圧濃縮して、エタノール上清の１０倍濃
縮液（懸濁液）を調製し、これを３，０００ｒｐｍで２
０分間遠心分離して上清（×１０濃縮液上清）と沈澱に
分離した。沈澱を回収し、これに５０％エタノールを加
えて溶解し、１０，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し
て沈澱（５０％ＥｔＯＨ沈澱−２）と上清（５０％Ｅｔ
ＯＨ上清−２：ＭＦＷ−Ｈ）を得た。

【００３２】

【実施例７：メラニン生成抑制試験及び可逆性試験】

【００３３】（１）メラニン生成抑制試験（１）実施例１で得た組成物を試料として、該試料のメラニン
生成抑制活性をＢ１６マウスメラノーマ細胞を用いて測
定した。

【００３４】Ｂ１６マウスメラノーマ細胞を、１０％Ｆ
ＣＳを含むＤＭＥＭ培地を入れた９６穴プレートに、１
ウエルあたり８００個播種し、３７℃で４時間培養し、
細胞をウエルに付着させた。その後、培地を除去し、上
記培地にα−ＭＳＨを終濃度０．２μＭになるように添
加した培地（以下α−ＭＳＨ含有培地という）に各濃度
の試料を加え調製した培地に交換し３７℃４−５日間培
養した。尚細胞培養は３７℃のＣＯ₂インキュベーター
中で、５％ＣＯ₂−９５％空気の条件で行った。生細胞
数はＭＴＴ法（CHEMICON INTERNATIONAL INC．資料Colo
rimetric(MTT)Assay for cell Survival and Prolifera
tion）に従って、オートリーダーで６３０ｎｍをバック
に５７０ｎｍでの吸光度を測定し、生細胞数を表す相対
値とした。メラニン生成量は細胞を０．２ＮＮａＯＨ
に溶解し４９０ｎｍでの吸光度をオートリーダーで測定
し、その値をメラニン生成量を表す相対値とした。

【００３５】生細胞数の１個当りのメラニン生成量は、
下記式に示される。生細胞当りのメラニン生成量＝〔（４９０ｎｍにおける
吸光度）／（５７０ｎｍにおける吸光度−６３０ｎｍに
おける吸光度）〕×１００

【００３６】図１に、試料（本発明組成物）の濃度に対
する生細胞当たりのメラニン生成量を示した。この結果
から明らかなように、試料濃度の増加にしたがいメラニ
ン生成量が著しく減少していること、しかも生細胞の生
育には何らの悪影響も及ぼさないことがわかる。すなわ
ち、赤糠のエタノール上清画分は、美白作用を有してい
ることが判明した。

【００３７】（２）メラニン生成抑制試験（２）Ｂ１６マウスメラノーマ細胞を６ウエルプレートの各ウ
エルに２．０×１０⁴個（約２．２×１０³個／ｃｍ²）
播種し、培地（１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ培地）中
で、３７℃、５％ＣＯ₂−９５％空気中で４時間培養
し、細胞をウエルに付着させた。

【００３８】その後、培地を除去し、各濃度の試料を含
むα−ＭＳＨ含有培地及び試料を含まないα−ＭＳＨ培
地中で、５日間培養（細胞密度が８０〜９０％飽和程
度）を行った。培養は、１試料１濃度につき３ウエルを
使用して行った。培養５日目に細胞をＰＢＳで洗浄し、
０．１２５％トリプシン液で細胞を剥離し、その一部に
ついてトリパンブルー染色後の生細胞数を測定し、試料
不含培地及び試料含有培地（最も試料濃度の高い系）中
での培養細胞の一部をウエル毎に細胞継代用に確保し
た。残りの細胞を遠心分離によりガラス管に回収し凍結
保存した。

【００３９】（３）メラニン生成抑制作用の可逆性試験（２）で細胞継代用に確保した細胞をウエル毎に培地中
に前記細胞密度で播種し、４時間後に各α−ＭＳＨ含有
培地に交換した。すなわち、（２）の試料不含α−ＭＳ
Ｈ含有培地での培養細胞（３ウエル）をさらに同様の培
地で、また（２）での試料含量α−ＭＳＨ含有培地で培
養した細胞（６ウエル）を試料不含α−ＭＳＨ含有培地
（３ウエル）及び（２）と同濃度の試料含有α−ＭＳＨ
含有培地（３ウエル）に交換し、５日間の培養の後前記
方法に従い細胞数を測定し、残りの細胞をガラス管に回
収し、必要に応じて凍結保存した。

【００４０】（４）試料のメラニン生成抑制活性の評価凍結保存した細胞を解凍し、細胞の色調を肉眼的に観察
し、細胞の白色化度を次の５段階で評価した。＋は白色
度を示す。４＋：白色、３＋：白色〜灰色、２＋：灰
色、１＋：灰色〜黒色、−：黒色。その後、細胞を０．
２ＮＮａＯＨ（細胞数によって０．５〜１．０ｍｌ使
用）に溶解し、４７５ｎｍでの吸光度を測定した。別に
メラニン溶液で作成した検量線に基づき細胞に含まれる
総メラニン量を求め、さらに細胞当りのメラニン量を算
出した。結果を表１に示す。

【００４１】

【表１】

【００４２】上記したメラニン生成抑制活性の６穴プレ
ートでの評価結果より明らかなように、細胞増殖を抑制
しない試料添加濃度において細胞当りのメラニン量の低
下及び細胞の白色化が認められた。また、試料添加によ
っていったん白色化した細胞を試料を添加することなく
継代した場合には細胞当りのメラニン量の増加と細胞の
黒色化がみられた。以上の結果は、該画分がα−ＭＳＨ
によって促進したメラニン生成をも抑制することを示し
ており、さらに、この作用は、メラニン生成細胞のメラ
ニン生成装置を破壊するものではなく、その作用が可逆
的であることを示している。

【００４３】

【実施例８：メラニン生成抑制試験（２）】実施例３
（非脱脂法）によって製造した乾燥粉末（ＭＦＷ）につ
いて、実施例７に記載した方法を用いてメラニン生成抑
制試験を行った。

【００４４】図２に、試料（ＭＦＷ）の濃度に対する生
細胞当たりのメラニン生成量を示した。この結果から明
らかなように、試料濃度の増加にしたがいメラニン生成
量が著しく減少していること、しかも生細胞の生育には
何らの悪影響も及ぼさないことがわかる。すなわち、赤
糠の本画分は、美白作用を有していることが判明した。

【００４５】

【実施例９：メラニン生成抑制試験（３）】実施例５に
おいて製造した各画分（懸濁液、５０％ＥｔＯＨ沈澱−
２、５０％ＥｔＯＨ上清−２（ＭＦＷ−Ｈ））につい
て、実施例７に記載した方法を用いてメラニン生成抑制
活性を測定し、得られた結果を下記表２及び図３、図４
に示す。なお検討１−１は、実施例２において小規模で
の製造を表わし、ＳＤ−１は大規模にスケールアップし
た場合を示し、ｓｕｐ．は上清を意味する。

【００４６】

【表２】

【００４７】

【実施例１０：メラニン生成抑制試験（４）】実施例６
において製造した各画分（１０倍濃縮液（懸濁液）、１
０倍濃縮液上清、５０％ＥｔＯＨ沈澱−２、５０％Ｅｔ
ＯＨ上清−２（ＭＦＷ−Ｈ））について、メラニン生成
抑制活性を測定した。得られた結果を下記表３に示す。

【００４８】

【表３】

【００４９】実施例９、１０の結果から明らかなよう
に、５０％ＥｔＯＨ沈澱−２及び５０％ＥｔＯＨ上清−
２の両画分は、その比活性が２００〜５００ｕ／ｍｇと
いずれも高く、１０倍濃縮液（懸濁液）に比して約４〜
１０倍高い比活性を示した。溶解性の難易を考慮した場
合、５０％ＥｔＯＨ上清−２画分を高比活性ＭＦＷ（Ｍ
ＦＷ−Ｈ）とすることができるが、両画分を特に分離す
ることなく５０％エタノール溶液自体又はその処理物を
本発明の有効成分として利用することも充分可能であ
る。

【００５０】

【実施例１１：吸湿性及び保湿性試験】実施例１及び実
施例３で製造した赤糠由来の組成物、保湿成分として化
粧品において多用されているヒアルロン酸、及び吸湿性
の高い化合物として既知のグリセリンを試料とし、これ
らの各試料について、吸湿性及び保湿性試験を行った。

【００５１】（１）吸湿性試験試料（本組成物、ヒアルロン酸、グリセリン）、約２０
０ｍｇを秤量瓶にはかり取り、五酸化リンのはいった乾
燥器中で減圧下（室温）で１８時間放置し、乾燥させた
ものを試料として試験に供した。これらの乾燥試料を相
対湿度３４％および７４％（温度２０℃）の恒温恒湿槽
に放置した。吸湿能の指標として、次式で求めた重量増
加率（％）を用いた。重量増加率（％）＝〔（Ｗｔ−Ｗｏ）／Ｗｏ〕×１００Ｗｏ：放置前の乾燥試料重量Ｗｔ：ｔ時間放置後の試料重量

【００５２】（２）保湿性試験高湿度下（相対湿度７４％、温度２０℃）で吸湿した試
料（本組成物、ヒアルロン酸、グリセリン）を、相対湿
度４０％、温度２０℃の恒温恒湿槽、次いでデシケータ
ー（室温）内に放置した。保湿性の指標として、次式で
求めた水分残存率（％）を用いた。水分残存率（％）＝〔（Ｗｔ−Ｗｏ）／（Ｗｏ′−Ｗ
ｏ）〕×１００Ｗｏ′：放置前の含水試料重量

【００５３】（３）結果及び考察試料（本組成物、ヒアルロン酸、グリセリン）につい
て、その各々の、相対湿度３４％および７４％（温度２
０℃）における吸湿性を、吸湿重量増加率の時間変動で
表した（図５、６、７）。また、各試料の保湿性を、高
湿度下で吸湿させた各試料を用いて、その低湿度下にお
ける水分残存率の時間変動で表した。（図８、９）。

【００５４】図５〜図９の結果から明らかなように、各
試料中、本組成物は、ヒアルロン酸に比してその吸湿性
はやや低いものの、保湿性に関しては、デシケーター内
での放置後でも、試料重量の８％程度の水分を保持して
いた。吸湿性、保湿性とともに高い物質では、高湿度時
に皮膚にべとつきを与える可能性があるので、吸湿性が
あまり高くなく、保湿性の優れたものが、理想的な保湿
剤と考えられる。また、ヒトの角質層において望ましい
水分量は、１０％以上とされている。したがって、低湿
度下（デシケーター内）においても８％程度の水分を保
持することが確認されたこれらの各画分は、冬季などの
低湿度の環境下においても、角質層中の水分保持力を向
上させ、さらに水分の放出も抑制するという望ましい保
湿作用を有していることが分かった。この作用は、現在
優れた保湿性物質として知られているヒアルロン酸に匹
敵するといえる。

【００５５】

【実施例１２：５−リポキシゲナーゼ阻害作用】５−リ
ポキシゲナーゼの粗酵素液としては、ラットの好塩基性
白血病細胞（ＲＢＬ−１細胞）から抽出したものを使用
して、実施例１で製造した本組成物を試料として、その
５−リポキシゲナーゼ阻害活性を次により測定した。

【００５６】０．０８４５Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
７．５）、１ｍＭアデノシントリホスフェイト、１ｍ
Ｍ塩化カルシウム、０．１ｍＭアラキドン酸、試
料、粗酵素液で全量２．０ｍｌとする。３７℃で１０分
反応させた後、１ＮＨＣｌ５０μｌを加え反応を停
止する。反応液中で生成されたＬＴＢ₄を酢酸エチルで
抽出し、高速液体クロマトグラフィーにより定量した。
試料無添加におけるＬＴＢ ₄の生成量をもとに、試料の
５−リポキシゲナーゼ阻害活性をＬＴＢ₄の生成阻害率
で表した。

【００５７】その結果、試料（本組成物）は、０．２〜
０．５ｍｇ／ｍｌの低濃度で阻害率約５０％というきわ
めて高い阻害率を示した。したがって、赤糠のエタノー
ル上清画分に由来する本組成物は、５−リポキシゲナー
ゼに対して高い阻害活性を示すことから、すぐれた抗炎
症作用を有することが確認された。なお、実施例２及び
実施例３で得られたＭＦＷについても、同様の活性が確
認された。

【００５８】

【実施例１３：抗酸化作用】試料（実施例１で製造した
組成物）に４５ｍＭＮａ−リン酸緩衝液（ｐＨ６．
９）、エタノール、リノール酸メチルを加えて全量２．
２ｍｌとし、室温で、窓際にて振とうしつつ放置した。
経時的にリノール酸メチルの過酸化物を塩化アルミニウ
ムを用いる微量比色法（過酸化脂質実験法、金田尚志、
植田伸夫編集ｐ６０、塩化アルミニウムを用いる微量比
色法）にて測定した。すなわち、上記反応液０．２ｍｌ
に２％ヨウ化カリウム（エタノール溶液）、塩化アルミ
ニウム溶液（２ｇの無水塩化アルミニウムと０．０２ｇ
のオルトフェナンスロリンを１００ｍｌのエタノールに
溶解）のそれぞれ０．５ｍｌとヘキサン１．０ｍｌを加
え３７℃で５分間反応する。その後０．０１Ｎ塩酸溶液
１５．０ｍｌとデンプン溶液（１ｇの可溶性デンプンと
２０ｇの塩化ナトリウムを１００ｍｌの蒸留水に溶解）
０．５ｍｌを加え、激しく振とうした後、３０００ｒｐ
ｍで３分間遠心した。下層を分画し、その５６０ｎｍで
の吸光度を測定した。予めヨウ素酸カリウム標準溶液で
求めた検量線から反応液中の活性酸素量を求め得るが、
本実験では、５６０ｎｍでの吸光度値の差にて活性を表
した。

【００５９】その結果、赤糠由来の本組成物は、０．２
２３〜０．４４５％濃度で約９０％の阻害率を示し、リ
ノール酸メチルの酸化を抑制する活性にすぐれているこ
とが確認された。紫外線による皮膚の炎症の原因のひと
つとして皮脂の酸化が考えられており、本発明に係る化
粧料は、本組成物の適用によって、皮膚の炎症の防止効
果を有するものである。なお、実施例２及び実施例３で
得られたＭＦＷについても、同様の活性が確認された。

【００６０】

【実施例１４：皮膚一次刺激性試験】実施例１で得た赤
糠由来の組成物を用い、Ｄｒａｉｚｅ法に準じてウサギ
日本白色種（雄、２〜２．５ｋｇ）での皮膚一次刺激性
試験を下記の試験条件下に行った。

【００６１】（条件）投与量：１．５×２．０ｃｍのリント布に０．２５ｍｌ
の被験物質（乾燥重量で１０重量％濃度に調製したも
の）を使用。暴露時間：閉鎖塗布、２４時間。暴露中の動物固定：首かせで２４時間固定する。塗布後洗浄：蒸留水で軽く拭き取る。使用動物数：１試料につき３羽使用。擦過及び正常皮膚：それぞれの動物の背部の片面を正
常、他方を擦過皮膚とした。剃毛：電気バリカンを使用。評価：塗布除去直後、２４、４８及び７２時間後の皮膚
変化を観察・記録・評価する。判定：Ｄｒａｉｚｅ法により行う。すなわち、２４時間と７２時間目の紅斑評点と浮腫評点
を加えて平均値を算出し、一次刺激指数（P. I. I., Pr
imary Irritation Index）として下記基準により分類し
た。（分類基準）Ｐ．Ｉ．Ｉ＜２：弱い刺激性あり。２≦Ｐ．Ｉ．Ｉ＜６：中程度の刺激性あり。６≦Ｐ．Ｉ．Ｉ＜８：強度の刺激あり。

【００６２】得られた結果を下記表４に示す。この結果
から明らかなように、本組成物は、皮膚刺激性が極めて
低いことがわかる。したがって、本組成物は、正常及び
損傷皮膚のいずれに対しても、安全性が極めて高いもの
と評価できた。

【００６３】

【表４】

【００６４】

【実施例１５：チロシナーゼ活性阻害作用】実施例１で
得た赤糠由来の組成物（もとの培養上清相当の約２５倍
濃縮液）を試料として、そのチロシナーゼ阻害活性を下
記（２）、（３）の方法で測定した。

【００６５】（１）Ｂ１６マウスメラノーマ細胞からチ
ロシナーゼ粗酵素液の調製培地中で培養増殖したＢ１６マウスメラノーマ細胞、約
４×１０⁷個をラバーポリスマンを用いてシャーレーか
ら直接こそぎとり、１０ｍｌの１０ｍＭＮａ−燐酸緩
衝液（ｐＨ７．４）中でホモジナイザーで磨砕した。１
×１０⁴Ｇで２０分間遠心分離し、その上清部を上記緩
衝液に対して十分に透析したものをチロシナーゼ粗酵素
液とした。測定には該酵素液を適宜上記緩衝液で希釈し
たものを用いた。

【００６６】（２）メラニン生成阻害活性測定本活性の測定は、Ｈｅａｒｉｎｇの方法（V. J. Hearin
g and T. M. Ekel ; Biochem. J., 157, 549 (1976)）
に基づいて行った。チロシナーゼ粗酵素液、０．１Ｍ
Ｎａ−燐酸緩衝液（ｐＨ７．４）、０．１ｍｇ牛アルブ
ミン、５０μＭ〔Ｕ−¹⁴Ｃ〕チロシン（ｓｐ．ａｃｔ．
２５ｍＣｉ／ｍｍｏｌ、０．１２５μＣｉ／ｍｌ）、５
μＭＤＯＰＡ及び実施例１の試料により全量５０μｌ
とし、混合後３７℃で６０分間反応させた。反応後全量
を２．４ｃｍのワットマン３ＭＭ濾紙に吸着させ、０．
１ＮＨＣｌ−０．１％チロシン液で数回洗浄し、その
後エタノール、アセトンで洗浄乾燥し、酸不溶性画分に
取り込まれたアイソトープ量を液体シンチレーションス
ペクトロメータを用いて測定した。試料のメラニン生成
阻害活性は、試料不含反応系での取り込み量との差とし
て求めることができる。

【００６７】図１０に、本組成物を用いた細胞試験での
有効濃度とチロシナーゼ（メラニン生成）阻害活性との
関係を示す。これより、該組成物の存在によるチロシナ
ーゼ阻害活性は比較的小さいことがわかる。

【００６８】

【実施例１６：抗炎症作用】実施例２で製造したＭＦＷ
を用い、そのアラキドン酸誘発に対する抗炎症作用を検
討した。

【００６９】（１）試験材料ＭＦＷは、５０％エタノール（和光純薬工業）で溶解し
た。群構成は、無処置群、対照群（ａ）（溶媒群）（５
０％エタノール群）、ＭＦＷ０．２ｍｇ／ｅａｒ×３
回塗布群（１％群）、ＭＦＷ１ｍｇ／ｅａｒ×３回塗
布群（５％群）、陽性対照群としてＡＡ−８６１（和光
純薬工業）１ｍｇ／ｅａｒ×３回塗布群の計５群とし、
マウスの右耳の裏表面に塗布した。起炎剤のアラキドン
酸（ナカライテスク）はアセトン（和光純薬工業）に溶
解した。

【００７０】使用動物としては、５週齢の雄性ｄｄＹ系
マウス（日本エスエルシー）を用いた。入荷時に各動物
の健康状態を肉眼的に観察し、異常のない動物を各動物
室に収容した。動物は温度２１〜２５℃、湿度４５〜６
５％、照明時間１２時間／日（７時〜１９時）の条件下
の室内で飼育し、固型飼料Ｆ−２（船橋農場）と水道水
質基準に適合した水道水を自由摂取させた。入荷時より
３日間以上予備飼育した後、一般状態の健康な動物を実
験に使用した。なお、非絶食下の動物を実験に用いた。

【００７１】投与前値に対する浮腫率について、Ｄｕｎ
ｎｅｔｔの多重比較検定を用いて統計学的処理を行っ
た。

【００７２】（２）試験方法雄性マウスを１群６匹（体重、２８．５〜３３．５ｇ）
として使用した。５０％エタノールで溶解した被験薬Ｍ
ＦＷをマウスの右耳の裏表面に１０μｌづつ、計２０μ
ｌ塗布した。被験薬を約２５分間隔で３回処置し、その
３０分後に起炎剤としてアセトン（和光純薬工業）で溶
解したアラキドン酸１００ｍｇ／ｍｌを、右耳の裏表面
に計２０μｌ（２ｍｇ／ｅａｒ）塗布した。アラキドン
酸塗布３０、６０、１２０及び１８０分後に、dial thi
ckness gauge（尾崎製作所）を用い耳の厚さを０．０１
ｍｍの単位まで測定し、耳浮腫に対する抗炎症効果を検
討した。

【００７３】（３）結果被験薬ＭＦＷにおける、アラキドン酸誘発による耳浮腫
率の経時変化を下記表５に示した。

【００７４】

【表５】

【００７５】上記結果から明らかなように、対照群
（ａ）（５０％エタノール、２０μｌ／ｅａｒ）では、
アラキドン酸塗布１時間後に投与前値に対し約６４％、
２時間後に４７％の耳浮腫が認められ、３時間後には軽
減した。この経時変化はＩｎｏｕｅら（Prostaglandin
s, 36 : 731-739(1988)）の結果とよく一致した。

【００７６】被験薬ＭＦＷにおいても、アラキドン酸塗
布１時間後に最大浮腫率が得られ、０．２ｍｇ／ｅａｒ
×３回で４２％、１ｍｇ／ｅａｒ×３回で３４％であっ
た。対照群（ａ）の耳浮腫率に比較して、このＭＦＷ
１ｍｇ／ｅａｒ×３回の１時間後のみに有意な抗炎症作
用（Ｐ＜０．０５）が認められた。

【００７７】対照薬のＡＡ−８６１１ｍｇ／ｅａｒ×
３回では顕著な抗炎症作用が確認され、アラキドン酸塗
布０．５時間後から３時間後まで対照群（ａ）に比較し
て、有意な作用（Ｐ＜０．０１）が確認された。

【００７８】以上のように、被験薬ＭＦＷでは、１ｍｇ
／ｅａｒ×３回の塗布によりアラキドン酸塗布１時間後
に有意な抗炎症作用が認められた。

【００７９】

【実施例１７：バニシングクリームの調製（１）】実施
例１で得た組成物を有効成分として用い、以下に組成を
示すバニシングクリーム（Ｏ／Ｗ型）を下記製造方法に
より調製した。

【００８０】（組成）（重量％）Ａ液ステアリン酸１０．０ステアリンアルコール４．０ステアリン酸ブチル８．０モノステアリン酸グリセリン２．０メチルパラベン０．０４８ジブチルハイドロキシトルエン０．０１Ｂ液プロピレングリコール１０．０グリセリン４．０水酸化カリウム０．４精製水残量赤糠由来の組成物（実施例１）１．０メチルパラベン０．１５２

【００８１】（製造方法）１）Ａ液を７０℃の水浴中にて加熱溶解する。２）７０℃の水浴中で加温・攪拌しながら先ず精製水に
水酸化カリウム、メチルパラベンの順に加えて十分に溶
解し、そこにプロピレングリコール及びグリセリン、最
後に実施例１で得られた組成物を加える。３）Ｂ液を７０℃の水浴中で攪拌しつつ、そこに加熱溶
解したＡ液を徐々に加える。４）Ａ及びＢ液が乳化した後、攪拌した状態で水温を３
０℃程度までゆっくりと下げる。５）冷却により安定したクリーム状バニシングクリーム
を得る。

【００８２】

【実施例１８：バニシングクリームの調製（２）】赤糠
由来の組成物（実施例１）の配合量を１０重量％とする
以外は実施例１７と同様にしてバニシングクリームを得
た。

【００８３】

【実施例１９：入浴剤の調製（２）】実施例３で製造し
た赤糠由来の乾燥粉末（ＭＦＷ）を有効成分として５ｇ
用い、これに硫酸ナトリウム４３ｇ、炭酸水素ナトリウ
ム５０ｇ、ホウ砂２ｇ、法定色素（ウラニン：黄色２０
２号）及び香料を適量加えて混合し、パウダータイプの
入浴剤を調製した。

【００８４】

【発明の効果】本発明に係る化粧料の有効成分である赤
糠由来の組成物は、すぐれたメラニン生成抑制作用、抗
炎症作用、抗酸化作用、保湿作用を有するだけでなく、
皮膚刺激性もほとんどなくきわめて安全性の高いもので
ある。

【００８５】しかも本組成物のメラニン生成抑制作用は
生成組織を損傷させることのない可逆的なものであるこ
とから、本組成物を有効成分とする本発明に係る化粧料
は、皮膚化粧料、特に美白、老化防止、保湿性化粧料と
してきわめて有用であり、そして天然物由来であるため
に安全性もきわめて高いという著効も奏される。また、
入浴剤、石けん、シャンプーその他浴用化粧料の有効成
分としても赤糠由来の各画分は有利に使用できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１の試料濃度に対する生細胞当りのメラ
ニン量を示す。

【図２】実施例３の試料濃度に対する生細胞当りのメラ
ニン量を示す。

【図３】実施例５（小規模製造の場合）の試料濃度に対
する生細胞当りのメラニン量を示す。

【図４】実施例５（大規模製造の場合）の試料濃度に対
する生細胞当りのメラニン量を示す。

【図５】実施例１の試料、ヒアルロン酸、グリセリンに
ついての相対湿度３４％（温度２０℃）における吸湿性
を示す。

【図６】同相対湿度７４％（温度２０℃）における吸湿
性を示す。

【図７】実施例３の試料の相対湿度７４％（温度２０
℃）における吸湿性を示す。

【図８】実施例１の試料、ヒアルロン酸、グリセリンの
保湿性を示す。

【図９】実施例３の試料の保湿性を示す。

【図１０】実施例１の試料のチロシナーゼ阻害活性を示
す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所 // Ａ６１Ｋ 35/78 ＡＤＳＵ 8217−4Ｃ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】赤糠を脱脂しもしくは脱脂することな
く、熱水で抽出し、次いでアルコールを加え、生成した
沈澱物を除去して得られる上清を有効成分とすることを
特徴とする化粧料。
【請求項２】アルコールとして、メタノール、エタノ
ール及び／又はプロパノールを使用することを特徴とす
る請求項１に記載の化粧料。
【請求項３】アルコールを終濃度４０〜７０％になる
ように添加することを特徴とする請求項１又は２に記載
の化粧料。
【請求項４】該上清として、上清自体、その濃縮物、
ペースト状物、希釈物、及び／又は乾燥物を使用するこ
とを特徴とする請求項１〜請求項３のいずれか１項に記
載の化粧料。
【請求項５】上清自体の場合はこれを濃縮し、その処
理物の場合は濃縮上清と同様に水分調節を行った後、固
液分離を行い、上清部を除去した後、沈澱部にエタノー
ルを加えて得られた溶液を有効成分とすることを特徴と
する請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の化粧
料。
【請求項６】該溶液を上清部と沈澱部とに分離し、こ
れら各部をそれぞれ有効成分とすることを特徴とする請
求項５に記載の化粧料。
【請求項７】化粧料が皮膚化粧料又は浴用化粧料であ
ることを特徴とする請求項１〜請求項６のいずれか１項
に記載の化粧料。
【請求項８】化粧料が、メラニン生成抑制作用、抗炎
症作用、抗酸化作用、吸湿作用、及び／又は保湿作用を
有する皮膚化粧料及び／又は浴用化粧料であることを特
徴とする請求項７に記載の化粧料。
【請求項９】化粧料が、美白化粧料、老化防止化粧
料、及び／又は保湿化粧料であることを特徴とする請求
項７又は請求項８に記載の化粧料。
【請求項１０】浴用化粧料が入浴剤であることを特徴
とする請求項７又は請求項８に記載の化粧料。