KR20160024527A

KR20160024527A - 돌소리쟁이 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물

Info

Publication number: KR20160024527A
Application number: KR1020140111404A
Authority: KR
Inventors: 권순우; 배준태; 송민현; 김진화; 이근수; 표형배
Original assignee: 한불화장품주식회사
Priority date: 2014-08-26
Filing date: 2014-08-26
Publication date: 2016-03-07

Abstract

본 발명은 돌소리쟁이 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 및 초석잠 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부용 약제 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 항산화 효과, 항노화 효과(MMP-1 단백질 발현 저해), 타입 1 프로콜라겐 생합성 촉진 효과, 광노화 방지 효과, 여드름 방지 효과, 피부 탄력 개선효과, 피부 주름 개선효과, 미백효과, 모발 손상 방지효과, 탈모방지 및 육모효과, 피부세포노화 개선, Caveolin-1 발현 저해 효과 등으로 피부보습력과 미백 기능을 향상시키고, 표피의 각질 탈락을 원활하게 하여 피부 표면을 매끄럽게 해주는 효과가 있다.

Description

돌소리쟁이 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물{Skin agent composition containing Rumex obtusifolius extract}

본 발명은 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 마디풀과에 속하는 돌소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 활성산소 개선효과, 피부 탄력 개선 효과, 피부 주름 개선 효과, 광노화방지 효과, 미백효과, 여드름방지효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 효과가 우수하고 보습력, 표피의 각질탈락을 원활하게 하여, 피부 표면을 매끄럽게 할 수 있는 항노화 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 다양한 외부 요인들로부터 물리적, 화학적 상해를 직접 받는 부위인 동시에 또한 이들의 기능적, 구조적 손상을 치유할 수 있는 능력을 가진 우리가 살아 가는데 없어서는 안 될 조직이다. 그러나 우리의 피부는, 예를 들어, 각종 오염물질과 스트레스 등으로 인해 손상을 입게 되는데, 이와 같은 손상으로 피부의 세포 증식이 제대로 이루어지지 않게 되면 피부는 더욱더 큰 손상을 입게 되고 피부 탄력이 저하되며, 주름이 생성된다. 피부가 노화되면, 피부 탄력에 중요한 역할을 하고 있는 매트릭스(Matrix) 안의 콜라겐(collagen), 뮤코다당류(mucopolysaccharide) 및 히알루론산(hyaluronic acid)의 양이 줄어들고, 불용성 콜레겐의 양이 증가한다. 이에 따라, 진피는 피부의 수분을 유지하기 어렵게 되고, 피부는 거칠게 된다. 나아가 피지샘과 땀샘의 기능도 감소하여 피지와 땀의 양이 점차로 줄어들게 된다. 이로 인해 피지막은 적당히 생성되지 못하고, 피부 수화에 대한 보호막을 잃게 되어, 결국 피부는 건조하게 되고, 투명성을 잃게 되어 피부 단백질의 탄력이 감소 되고 주름이 생성된다.

한편, 피부의 보습 작용도 기능을 다하지 못하면 피부 탄력 저하의 원인이 된다. 즉 피부의 보습력 상실은 피부 화의 중요한 원인이 되고 있다. 피부의 수분균형은 표피에 의해 조절된다. 표피의 각질층은 죽은 세포들이 쌓여 있는 것이지만, 피부의 수분유지를 위해서 매우 중요한 역할을 한다. 사람의 생체는 대부분이 생명의 유지에 중요한 역할을 하는 물로 구성되어 있다. 정상 피부에서의 수분은 체내에 70%, 각질층에 20%가 함유되어 있어 피부의 탄력성 및 유연성을 지탱해 준다. 각질층의 수분이 10% 이하일 경우, 피부는 건성화되고 피부 트러블의 원인이 된다고 알려져 있다. 규칙적인 각질화(keratinization)로 생성된 각질층 안의 수분의 양은 항상 10 내지 20%를 유지한다. 현재 피부 내 수분 유지 방법은 폐색제(occlusive agent)를 사용하고 있다. 상기 폐색제는 수분 손실을 막는 장벽을 피부 위에 형성함으로써, 수분 부유를 촉진하는 소수성 물질이다. 가장 일반적으로 사용되는 폐색제로는 바세린, 라놀린, 코코아 버터, 미네랄 오일 및 실리콘이 있으며, 화장품으로 제조하기 위하여 소듐 라우릴 설페이트(sodium lauryl sulfate), 디메틸 술폭사이드(dimetyl sulfoxide), 크로톤 오일(croton oil) 및 수산화나트륨 등과 같은 원료를 20 종에서 50여 종 첨가시킨다. 상기 원료들이 제품에 적용되면, 피부에 염증, 가려움증, 알러지 등의 자극을 일으킬 수 있다. 피부가 자극을 일으키는 물질에 노출되면 각질층이 손상을 받게 되고, 따라서 각질층 손상의 지표가 되는 경표피 수분 손실(transepidermal water loss)이 증가하게 되며, 이는 1차적인 염증반응의 원인이 되기도 한다.

이러한 이유로 종래의 화장품은 피부에 유해한 부작용이 발생되는 문제점이 있고 때문에 피부 보습 효과 및 보호 효과 등을 얻는데 한계가 있다.

한편, 피부 그을림 또는 색소침착 등은 자외선 노출에 의해 피부에서의 멜라닌 생성에 의한 것이다. 이를 예방하는 하나의 방법은 피부에 닿는 자외선을 차단하거나 미리 흡수하는 자외선 차단제 등을 바르는 것이다. 그러나, 자외선에 노출 되기전에 매번 발라야하고 물로 쉽게 씻겨나가므로 자주 발라야 하는 등 사용할 때 번거로우며 특히 이러한 제제들의 장기사용에 대한 안정성이 확립되어 있지 않다는 단점이 있다.

비타민C는 효소의 조인자(enzymatic co-factor)로 작용하고 비타민E의 사용량을 줄여주며 항산화제로서 작용하는 등 다양한 생리기능을 가진 것으로 알려져 있다. 특히, 비타민 C는 다량으로 사용하면 미백효과가 있는 것으로 알려져 있는데 고용량으로 사용되는 경우 수퍼옥시드 및 하이드록실 라디칼과 반응한다.

수퍼옥시드와 하이드록실 라디칼은, 산소를 함유하는 활성기 산소로서 정상 상태 또는 질병 상태에서 생성될 수 있는데, 피부가 햇빛에 타는 경우나 피부 노화의 경우에 있어서 원인물질로서 작용한다.

비타민C는 이러한 물질과 반응함으로써, 자외선에 의한 피부 그을림 또는 피부노화를 방지할 수 있다.

그러나, 비타민C는 2번 탄소와 3번 탄소 사이에 이중결합이 있고, 물 존재하에서 산-이온화 반응이 일어날 수 있는 수소(pK=4.2)를 갖는다. 또한 자신이 쉽게 산화되는 강한 환원제이므로 pH가 높은 조건하에서는 불안정한 음이온형태의 화합물로 된다. 비타민C의 이러한 불안정성은 비타민C를 용액으로 제제화하려는 경우 문제점으로 작용하는데, 극성반발력에 의한 입체화학적 응력, 아스코르빈산 음이온에 의한 산화적 분해 및 물의 공격으로 인한 분해 등이 그 원인으로 생각된다.

비타민C를 안정화시키려는 종래의 방법으로는 극히 낮은 농도의 비타민C를 사용하는 방법, 비수용성 용매를 사용하는 방법, 또는 비타민C의 여러 유도체를 사용하는 방법 등이 있다.

한편 다음으로, 남성형 탈모증은 남성호르몬 의존적이어서 남성호르몬의 양에 직접적인 관계가 있으며, 이에 따라 최근 남성호르몬 활성억제를 통한 탈모의 예방 및 치료를 위한 많은 연구가 보고되고 있다. 한편, 남성호르몬의 분비상승에 의해 피지선의 기능이 활발해지면 생성된 과잉 피지가 모낭벽의 과각화로 인하여 모낭 내에 정체되면서 생기는 면포가 여드름의 초기단계이다. 남성호르몬에 의한 탈모 및 여드름의 기전을 설명하면, 5-알파-리덕타아제(5-α-Reductase)는 피지선,모낭, 전립선, 부고환 등의 남성 호르몬 반응성 조직에 존재하는 남성 호르몬들 중 하나로서, 테스토스테론(testosterone)을 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone)으로 대사시키는데 관여하는 효소이며, 그 전환에는 NADPH를 필요로 한다. 또한, 테스토스테론(testosterone)은 남성 성충동, 골격근 증가, 남성외부생식기, 음낭성장, 정자형성 등에 관여하고, 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone)은 여드름, 피지 증가, 탈모 및 전립선 비대증 등의 해당조직에 관여한다. 특히, 사춘기 이후에 남성 호르몬의 과량 분비는 여드름과 탈모를 유발하는데, 5-알파-리덕타아제에 의하여 생성되는 남성 호르몬의 활성형태인 디하이드로테스토스테론의 과량 생성을 막기 위해 5-알파-리덕타아제 억제제를 사용하여 탈모방지 및 여드름 방지제를 개발하려는 연구들이 활발히 진행되고 있다.

이에 본 발명자들은 오랜 연구 끝에 마디풀과 돌소리쟁이 천연물을 선정하고 이로부터 추출물을 제조하여, 활성산소 소거효과, 피부 탄력 개선효과, 광노화 방지효과, 미백효과, 여드름 방지효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 효과가 우수하고 보습력, 표피의 각질탈락을 원활하게 하여, 피부 표면을 매끄럽게 하는 효과가 우수하여 피부 외용제 및 화장료로서의 기능성이 탁월함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

위와 같은 종래기술의 문제점을 해소하고자, 본 발명의 목적은 돌소리쟁이 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공 하는데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 돌소리쟁이 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 돌소리쟁이 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부용 약제 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 돌소리쟁이 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도우로 이루어진 군으로부터 선택된 화장품에 사용되는 것이 바람직하고, 상기 조성물은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되며 일반적으로 사용되는 함량을 포함하는 보조제를 추가로 포함하는 것이 바람직하며, 이때 상기 보조제는 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제 및 지질 소낭으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함하는 것이 보다 바람직하다.

본 발명의 피부용 약제 조성물에 있어서, 상기 돌소리쟁이 추출물 이외에 글리콜산 또는 비타민 C를 추가로 함유하는 것이 바람직하다.

본 발명의 유효성분인 글리콜산은, 사탕수수(sugarcane)로부터 유래하는 천연 생성물로서 상업적으로 구입가능하다. 글리콜산은 생체에 대해 레틴-A보다 더 안전하며, 콜라겐을 생합성 함으로써 피부를 재생시키고 노화를 방지하는 작용을 한다.

돌소리쟁이 추출물에 노화방지제(antiaging agent)인 글리콜산과 항산화제(antioxidant)인 비타민 C를 배합함으로써, 글리콜산의 피부자극 및 통증이 경감되고 글리콜산의 피부 흡수가 원활하게 되어 피부재생 및 노화방지 효과가 극대화될 뿐 아니라, 비타민C가 안정화된다.

돌소리쟁이 추출물에 글리콜산과 비타민C를 함께 사용함으로써 생기는 효과에 있어서의 상승 작용은, 낮은 pH를 갖는 유기산의 단점이 극복되고 흡수가 증가하여 효과가 증대될 뿐 아니라, 비타민C는 글리콜산에 의해 안정화되는 등, 일방의 약리작용에 있어 극복되지 않은 부분을 보완하는 상보적 작용 등에 의한 것으로 생각된다.

또한 상기 양 유효성분의 함유량은 사용형태, 사용목적, 사용방법, 제제형 등에 따라 다르나, 예컨대 화장제로서는 0.01 내지 8중량%, 바람직하기로는 0.5 내지 5중량% 함유되며, 연고제 또는 크림제로서는 0.01 내지 12중량%, 바람직하기로는 5내지 12중량%이고, 나머지는 각 제제에 필요한 첨가제 및 용매 등으로 채워진다.

본 발명의 조성물은 돌소리쟁이 추출물, 글리콜산과 비타민C 외에도, 연고기제 및 보습제, 연화제, 습윤제, 활택제, 보존제 등의 각종 첨가제를 포함할 수 있다.

상기 첨가제로는 경랍, 스테아릴알콜, 폴리에틸렌글리콜 4000, 글리세린, 세탄올, 라우릴황산나트륨, 파라옥시안식향산에틸, 파라옥시안식향산부틸 및 프로필렌글리콜 등이 포함되며, 이러한 첨가제는 각각 첨가하거나 또는 상업적으로 구입가능한 기제에 포함되어 있는 성분의 형태로 첨가될 수 있다.

경랍(sperm wax)은 고래의 두부에 있는 납질의 고형성분을 정제하여 얻은 것으로 다른 기제에 첨가되어 연고에 적당한 조도를 부여하며 적정량 첨가될 수 있다.

스테아릴알콜(stearyl alcohol)은 활택제로서 작용하며 적정량 첨가될 수 있다. 폴리에틸렌글리콜 4000은 대표적인 수용성 기제로서 산화에틸렌과 물과의 중합체이며 물에 잘 녹고 대부분의 의약품과의 혼합성이 좋고 주약의 흡수가 우수한 것으로 적정량 사용될 수 있다.

글리세린은 연화제 및 흡습제로서 적정량 사용될 수 있다.

세탄올은 유화제 및 증점제로서 적정량 사용될 수 있다.

라우릴황산나트륨(sodium lauryl sulfate)은 조성물의 혼합을 돕기위한 습윤연화제로서 적정량 사용될 수 있다.

파라옥시안식향산에틸 및 파라옥시안식향산부틸은 제제의 유효성을 지속시키는 보존제로서 유효량 포함될 수 있다. 상기 보존제들은 넓은 pH 영역에서 활성을 보이며 2종류의 병용에 의해 유효성이 증대된다.

프로필렌글리콜은 계면활성제로서 5 내지 10중량% 사용될 수 있으며,글리콜산과 비타민 C의 피부 흡수를 도와준다.

상기 성분들은 본 발명의 유효성분인 글리콜산과 비타민C를 피부에 적용하기 편리하게 할 뿐 아니라 그 자체로서도 피부표면의 수분과 지질의 조절, 피부의 보호, 정화작용 등의 피부에 유리한 효과를 갖는다.

본 발명에 따른 돌소리쟁이 추출물은 활성산소 소거효과와 MMP 저해 효과와 자외선 조사에 의한 MMP 발현 조절효과, 피부 탄력 개선 효과 등 우수한 항노화 효과와 자외선 조사 후 야기되는 피부 자극을 완화시켜 주는 효과를 나타내었다.

또한, 돌소리쟁이 추출물은 기미, 주근깨 및 피부 색소 침착의 원인이 되는 물질인 멜라닌 생성억제 효과 등의 미백작용을 나타내었다.

또한, 돌소리쟁이 추출물은 우수한 모발손상 및 탈모방지 효과와 여드름 방지 효과를 갖는 여드름균 항균활성과 5-알파-리덕타아제 억제 효과를 나타내었다.

또한, 돌소리쟁이 추출물은 세포활성 효과, 피부 세포 노화 개선, Caveolin-1 발현 저해 효과, CCN-1 발현 저해 효과, 피부 탄력 개선 및 주름 개선 등의 효과로 피부 보습력과 미백 기능을 향상시키고, 표피의 각질 탈락을 원활하게 하여 피부 표면을 매끄럽게 해준다

따라서, 이러한 돌소리쟁이 추출물을 함유하는 화장수, 크림, 유액, 팩, 파우더 등의 화장료 조성물은 활성산소 소거효과와 콜라겐 분해효소 활성 조절효과, 피부 잔주름 개선 효과, 광노화 방지효과, 미백, 여드름 방지, 모발손상 방지, 탈모 방지 및 육모효과 등 우수한 피부 외용제 효과를 가짐을 알 수 있다.

본 발명은 돌소리쟁이 천연물을 추출용매로서 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는 식물 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명은 상기 추출물이 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 추가로 용매를 감압농축 또는 동결건조하여 얻은 것임을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 돌소리쟁이 천연물의 함량이 피부 외용제 조성물 전체에 대해서 동결건조중량 기준 0.001-30.0중량%인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물을 제공한다. 상기 추출물의 함량이 0.001중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 거의 없으며, 30.0중량% 이상인 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하여 경제적이지 못하다.

또한, 본 발명은 상기 피부 외용제 조성물이 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 연고, 에센스, 샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어무스, 립스틱, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 돌소리쟁이 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

뿐만 아니라, 본 발명은 상기 피부 외용제 조성물이 화장료 조성물 또는 약학 조성물인 것을 특징으로 한다.

돌소리쟁이 추출물은 캡슐제, 액상제, 연고제, 첩부제 또는 약학적으로 허용되는 담체를 이용한 서방화 제제 등의 약학 조성물로 제제화할 수 있으며, 약리학적으로 허용되는 기제, 운반제, 부형제, 결합제(예: 전분, 트래거캔스 고무, 젤라틴, 당밀, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐에테르, 폴리비닐 피롤리돈, 히드록시프로필 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 카르복시메틸 셀룰로오스), 분쇄제(예: 한천, 전분, 벨라틴 가루, 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨, 카르복시메틸 셀룰로오스 칼슘, 결정 셀룰로오스, 탄산칼슘, 탄산수소나트륨 및 알긴산 나트륨), 윤활제(예: 스테아린산 마그네슘, 활석, 수첨 식물유) 및 착색제 등을 포함한다. 상기 운반제 및 부형제로는 젖당, 글루코오스, 수크로오스, 만니톨, 감자녹말, 옥수수녹말, 탄산칼슘, 인산칼슘 및 셀룰로오스 등을 사용한다.

상기 외에도 안정화제, 용해보조제, 경피흡수 촉진제 등의 보조제 방향제, 방부제 등의 첨가제가 더 첨가될 수 있다.

이와 같이 제조되는 약학 조성물은 증상에 따라 일일 1회 내지 수회 피부에 적용할 수 있으며 증상의 호전 정도에 따라 적용을 조절할 수 있다.

이하, 실시예를 통해 본 발명을 좀더 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.

돌소리쟁이 추출물의 제조

세절하여 음건한 돌소리쟁이를 정제수에 70%(v/v) 에탄올 수용액으로 6시간 환류추출하고 냉각한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물은 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결건조시켜 분말상의 추출물을 제조하였다.

시료의 세포독성

수득한 돌소리쟁이 추출물의 피부세포에 대한 세포독성을 평가하였다.

96-웰 시험 플레이트에 세포배양 배지(DMEM에10% FBS가 첨가된 것)에 희석된 섬유아세포(fibroblast)를 1x10⁵cells/mL개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰에 적절한 농도로 희석한 실시예 1에서 수득한 시료를 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 24시간이 지나면 배지를 제거하고, 각 웰 당 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) 용액(2.5㎎/㎖)이 함유된 세포배양 배지 200㎕를 넣은 후 2시간 동안 37℃ CO₂ 배양기에서 배양하였다. 배지를 제거하고 DMSO(Dimethyl sulfoxide)를 100㎕씩 넣어주었다. 5분간 진탕하여 세포를 용해시킨 후 , 마이크로플레이트 판독기에서 565㎚ 흡광도를 측정하였다. 수학식 1에 의해 세포생존율(%)을 정하였으며, 세포의 생존에 영향을 미치지 않는 시료의 농도를 결정하였다.

Bo : 세포배양배지만을 발색 반응한 웰의 565 ㎚ 흡광값

Bt : 시료를 처리하지 않고 발색 반응한 웰의 565 ㎚ 흡광값

St : 시료를 처리하고 발색 반응한 웰의 565 ㎚ 흡광값

표 1에서 확인할 수 있듯이 각 시료의 피부 섬유아세포의 100% 생존 처리농도는 실시예 1의 돌소리쟁이 추출물이 2%이하로, 세포 독성을 나타내지 않는 안전한 시료인 것을 확인하였다.

시료명	100% 세포 생존 농도
실시예 1	2%

NBT 법을 이용한 항산화 효과 측정 실험

실시예 1에서 수득한 돌소리쟁이 추출물 시료의 항산화 효과를 확인하기 위해 실험실 조건에서 항산화제로 잘 알려진 녹차추출물을 비교샘플로 하고 NBT(Nitro Blue Tetrazolium)법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다.

항산화 효과를 측정하기 위해서 잔틴과 잔틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가한다. 잔틴과 잔틴옥시다제에 의해 활성산소를 생성시킨다. 이 활성산소가 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응하여 이것에 의해 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정한다.

측정방법으로서 0.05M Na2CO3(2.4ml), 3mM 잔틴 용액(0.1ml), 3mM EDTA 용액(0.1ml), BSA 용액(0.1ml), 0.72mM NBT 용액(0.1ml)를 가하고 여기에 시료용액 0.1ml을 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다. 잔틴 옥시다제 용액(0.1ml)을 가하여빨리 교반하고 25℃에서 20분간의 배양을 개시한다. 그 후 6mM CuCl2 용액(0.1ml)을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다. 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다. 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 효소 대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

억제율은 수학식 2에 의하여 산출하였으며, 그 결과는 표 2에 나타내었다.

St : 시료용액의 효소 반응 후 560nm 흡광도

Bt : 공시험용액의 효소 반응 후 560nm 흡광도

So : 시료용액의 효소 무첨가시 반응전 560nm 흡광도

Bo : 공시험용액의 효소 무첨가시 반응전 560nm 흡광도

표 2에서 확인할 수 있듯이 돌소리쟁이 추출물 시료는 우수한 항산화 활성을 나타내었으며, 항산화활성이 우수한 녹차추출물과 유사하게 우수한 항산화 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

시료명	함량	항산화효과 (%)
실시예 1	0.2중량%	96.35
실시예 1	0.1중량%	94.26
실시예 1	0.05중량%	89.67
실시예 1	0.005중량%	45.89
녹차 추출물	0.2중량%	97.85

자유라디칼 소거활성 측정 실험

실시예 1에서 수득한 돌소리쟁이 추출물의 자유라디칼 소거활성을 측정하기 위해 실험실 조건에서 녹차추출물 같은 우수한 항산화활성을 갖는 추출물을 비교샘플로 하고 DPPH법을 이용하여 자유라디칼 소거활성을 측정하였다.

DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical)라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 자유라디칼 소거활성을 측정한다. 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다.

DPPH 자유라디칼 소거활성 측정을 위하여 0.2%, 0.1%, 0.05%, 0.005% 농도의 돌소리쟁이 추출물을 준비하였다. 상기 농도의 추출물을 96웰 플레이트에 각각 넣고, 여기에 100uM 메탄올용액으로 제조된 DPPH를 첨가하여 용액의 총 부피가 200㎕가 되도록 하였다. 이것을 37℃에서 30분간 방치한 후 560nm에서 흡광도를 측정하였다. 자유라디칼 소거활성(%)은 다음의 수학식 3으로 산출하였다.

A: 본 발명의 돌소리쟁이 추출물을 처리하지 않은 대조군 웰의 흡광도

B: 본 발명의 돌소리쟁이 추출물을 처리한 실험군 웰의 흡광도

표3에서 확인할 수 있듯이 실시예 1의 돌소리쟁이 추출물은 우수한 자유라디칼 소거활성을 나타내며, 항산화활성이 우수한 녹차추출물과 같이 우수한 항산화 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

시료명	함량	항산화효과 (%)
실시예 1	0.2중량%	94.21
실시예 1	0.1중량%	90.45
실시예 1	0.05중량%	88.97
실시예 1	0.005중량%	45.89
녹차 추출물	0.2중량%	98.51

자외선 조사 후 돌소리쟁이 추출물에 의한 MMP -1 발현억제 평가

본 실험예는 실시예 1에서 수득한 돌소리쟁이 추출물의 UV 조사 및 시료첨가 후 MMP-1 농도를 측정하기 위해서 효소면역 시험법(ELISA)을 실시하였다.

UV 챔버를 이용하여 인간 진피 섬유아세포에 UVA를 6.3J/㎠의 에너지로 조사하였다. 자외선 조사량과 배양시간은 예비실험을 통하여 섬유아세포에서 MMP 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다. 음성 대조군은 은박지로 싸서 UVA의 환경에 같은 시간을 유지시켰다. UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였다. UVA가 조사되는 동안의 세포는 이전에 분주 된 배지 그대로이고 UVA를 조사한 후 샘플이 들어간 배지로 교환하여 24시간 배양 후 배지를 회수하여 96웰에 코팅하였다. 일차항체(MMP-1 (Ab-5) 단일클론항체)를 처리하고 37℃에서 60분간 반응시켰다. 이차항체인 알칼라인 포스파타제 결합된 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분 정도 반응시킨 후, 알카린 포스파타제 기질용액(다이에탄올아민 완충용액 내에 1㎎/㎖ ρ-나이트로페닐인산 함유)을 상온에서 30분간 반응시키고 마이크로플레이트 판독기로 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 것을 사용하였다.

자외선 조사시에 발현이 유도되는 MMP-1에 대하여 시료를 처리하지 않은 대조군에 비하여 돌소리쟁이 추출물은 0.02중량%에서 46% 이상의 억제율을 보였으며 이는 대조군으로 사용한 레티놀의 억제율에 비해 상당히 우수한 결과를 나타내었다.

시험군	MMP-1 발현억제율(%)
대조군	-
실시예 1 0.02중량%	46
실시예 1 0.01중량%	38
실시예 1 0.005중량%	27
레티놀	44

타입 1 프로콜라겐 생합성 촉진 효과

실시예 1에서 수득한 돌소리쟁이 추출물 시료를 피부세포 배양액에 각각 첨가한 후 피부 기질 성분인 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진시키는 효과를 알아보기 위하여 프로콜라겐 분석(procollagen assay)을 아래와 같은 방법으로 실시하였다.

신생아의 포피조직에서 분리한 사람진피섬유아세포(human dermal fibroblast)는 Modern Tissue Technology(MTT, Korea)로부터 분양받아 DMEM/F-12(3:1)배지에 10% 우태아혈청(FBS)을 첨가하여 1×10⁴ cell/mL 농도로 배양하였다. 70~80% 정도 자라면 1:3의 비율로 분주하여 계대 배양하였고, 3~4차 계대배양된 세포를 실험에 이용하였다. 프로콜라겐의 양을 측정하는 실험을 위해서 섬유아세포를48 웰 플레이트(well plate)에 90% 이상 배양한 후 각각의 시료를 적절한 농도로 가하고, 24시간 후에 배지 중에 유리된 프로콜라겐의 양을 프로콜라겐타입-1C-펩타이드 EIA 키트(procollagen type-1 C-peptide EIA kit)(MK101,Takara, Japan)를 사용하여 측정하였다.

표 5와 같이, 실시예 1의 돌소리쟁이 추출물은 0.001중량%의 농도에서 30% 정도의 프로콜라겐의 생합성 촉진 효과를 나타내어 양성대조군으로 사용한 세포신호전달 물질인 TGF-β에 비해 낮지만, 매우 우수한 활성을 나타내었다.

시료명	함량	MMP-1 발현 억제율
실시예 1	0.001중량%	29.8%
TGF-β	0.001중량%	33.7%

자외선 조사에 의한 피부세포 광손상 방어효과 확인 실험

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 돌소리쟁이 추출물의 자외선 조사에 의한 세포독성의 완화 효과를 평가하기 위하여 실시되었다. 섬유아세포 (fibroblast)를 96-웰 시험 플레이트에 1x10⁵cells/mL 개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 24시간 후 평가하고자 하는 돌소리쟁이 추출물 시료를 처리하여 동일한 배양조건에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후 배지를 제거하고 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 100㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선 B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사,Japan)를 이용하여 자외선 10mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 10% FBS가 첨가된것) 200㎕을 첨가하였다. 여기에 돌소리쟁이 추출물을 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 24시간이 지나면 배지를 제거하고, 각 웰 당 세포배양 배지를 함유하는 MTT 용액(2.5㎎/㎖) 200㎕를 넣은 후 2시간 동안 37℃ CO₂배양기에서 배양하였다. 배지를 제거하고 DMSO(Dimethyl sulfoxide)을 100㎕씩 넣어주었다. 2분간 진탕하여 세포를 용해시키고 마이크로플레이트 판독기에서 565㎚ 흡광도를 측정하였다. 수학식 4에 의해 세포생존율(%)을 측정하고 자외선에 의한 세포독성 완화율은 수학식 5에 의하여 계산하였다.

Bo : 세포 배양배지만을 발색 반응한 웰의 565㎚ 흡광도

Bt : 시료를 처리하지 않은 웰을 발색 반응한 웰의 565㎚ 흡광도

St : 시료를 처리한 웰을 발색 반응한 웰의 565㎚ 흡광도

Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 세포 생존율

Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 세포 생존율

St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 세포 생존율

실험 결과, 실시예1의 돌소리쟁이 추출물은 0.125% 농도에서 자외선에 의한 세포독성을 22.9% 완화하여 자외선에 의한 세포손상을 방어함을 할 수 있다 (표6).

시료명	처리농도 (%)	세포독성 완화율(%)
실시예 1	0.125	22.9

티로시나제 억제효과 측정 실험

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 시료의 미백효과를 확인하기 위해 티로시나제(tyrosinase)라는 효소의 기능이 억제되는 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다.

티로시나제는 생체내에서 티로신(tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되게 도와주는 효소이다. 본 실시예는 이 효소의 기능을 억제하여 티로신이 산화되어 멜라닌이라는 흑색의 고분자를 형성하는 것을 억제하는 정도를 측정하는 방법(Pomerantz S. H.: J. Biochem., 24: 161 - 168, 1996)을 응용하여 미백효과를 판정하였다.

각 시료들의 티로시나제에 대한 저해활성은 시료 15㎕를 96 웰 플레이트에 넣고, 50mM 인산 완충액(pH 6.5) 150㎕, 1.5mM L-티로신 용액 25㎕를 넣은 후, 머쉬룸 티로시나제(1,500units/㎖, Sigma사) 10㎕를 첨가하여 37℃에서 20분간 반응 시킨 후, 마이크로플레이트 판독기(microplate reader, ELx800, 미국)를 사용하여 490nm에서 흡광도를 측정하여 티로시나제에 대한 저해율을 측정하였다. 티로시나제에 대한 저해율(%)은 수학식 6에 따라 계산하였으며, IC₅₀값은 티로시나제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.

A : 시료를 넣은 웰의 반응 전 흡광도

B : 시료를 넣은 웰의 반응 후 흡광도

C : 시료를 넣지 않은 웰의 반응 전 흡광도

D : 시료를 넣지 않은 웰의 반응 후 흡광도

티로시나제 활성 억제효과를 시험한 결과, 표 7에서 확인할 수 있듯이 실시예 1 시료의 IC₅₀값은 0.44%로 나타나 기존에 알려진 미백제인 알부틴과 유사한 티로시나제 활성 억제 효과를 나타내었다.(표7)

시료명	티로시나제 저해 효과 (IC₅₀)
실시예 1	0.44%
알부틴	0.43%

B16F1 멜라노싸이트를 이용한 멜라닌 합성억제 실험

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 돌소리쟁이 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라노싸이트에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백 효과를 판단한 것이다.

본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양 중에 시료를 처리하여 멜라닌색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호: 6323)로부터 분양받아 사용하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다. B16F1 멜라노싸이트를 6웰 플레이트에 각 웰당 2 x 10⁶cells/mL 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신(trypsin)-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포 내 멜라닌의 정량은 로탄[Lotan : Cancer Res., 40, 3345-3350(1980)]의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS(phosphate buffered saline)로 1회 세척한 후 균질화 완충액(50mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2mM PMSF(phenylmethanesulphonylfluoride)) 1㎖를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포여액에 1N NaOH{10% DMSO(Dimethyl sulfoxide) 포함}를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405㎚에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율(%)은 수학식 7에 의하여 계산하였다.

A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양

B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 억제효과를 시험한 결과, 돌소리쟁이 추출물의 IC₅₀은 0.24%로 기존의 미백제인 알부틴에 비해 유사한 효과를 나타내었다.(표 8).

시료명	처리농도(%)	멜라닌 합성 저해효과(IC₅₀)
실시예 1	0.1	0.24%
알부틴	0.1	0.26%

여드름균에 대한 항균력 측정

본 실시예 10에서는 실시예 1에서 수득한 돌소리쟁이 추출물의 여드름균에 대한 항균력을 확인하기 위한 페이퍼 디스크 테스트(Paper Disc Test)를 실시하였다. 먼저, 여드름 발생 원인인 피부 상재균 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)를 활성화시키기 위하여 BHI 액체배지(Brain-Heart Infusion Broth;3.7%)에서 48시간 전배양하였다. 이렇게 준비한 균 배양액을 BHI 고체배지(Brain-Heart Infusion Broth;3.7%;agar1.5%)에 0.1㎖씩도말한 후, 건조시켰다. 실시예 1에서 수득한 시료를 각각 95% 에탄올 수용액에 12%(w/v)로 희석하여 직경 8㎜의 페이퍼 디스크에 50㎕씩 점적한 후 앞서 준비한 고체배지 위에 올려놓은 후 이것을 35㎕ 혐기 배양조에서 3일간 배양하였다. 페이퍼 디스크 주변에 생긴 균 성장 저지 영역을 관찰하고 저지환의 크기를 측정함으로써 항균력을 평가하였다.

여드름균에 대한 항균력을 측정한 결과, 돌소리쟁이 추출물의 균 성장 저지환의 크기는 13㎜인 것으로 나타났다.

돌소리쟁이 추출물의 5 알파- 리덕타아제 활성 억제력 평가실험

5 알파-리덕타아제 활성억제 실험에 사용된 5 알파-리덕타아제는 포피 유래의 섬유아세포가 생성하는 효소를 사용하였다.

섬유아세포를 마이크로플레이트 홀(microplate hole)마다 10,000개의 세포가 들어가도록 접종한 후 배양하였다. 각 홀마다 3H(트리튬)으로 방사선표지(radiolabelling)된 테스토스테론을 0.1.mμ.Ci 첨가한 후에 배양하여 섬유아세포가 이를 이용하는지 측정하였다. 돌소리쟁이 추출물이 들어가지 않은 것을 대조군으로 삼았다. 24시간 배양 후 상등액을 얻고 에틸아세테이트(ethyl acetate)-사이클로헥산(cyclohexane) 1:1 추출용매 1㎖로 스테로이드(steroids)를 얻는다. 얻어진 스테로이드를 박막크로마토그래피 판에 올려놓고 클로로포름/메탄올 혼합액98/2(v/v)로 전개시킨다. 테스토스테론과 디하이드로테스토스테론에 해당하는 점의 방사활성을 덴시토미터를 이용하여 측정하여 전환율을 계산하고, 그 결과를 대조군(추출물을 첨가하지 않았을 때의 전환율)과 비교하여 하기 수학식 8에 의해 5 알파-리덕타아제 저해능을 평가하였다.

A=테스토스테론에서 다이하이드로테스토스테론으로의 전환율(추출물 미첨가시)

B=테스토스테론에서 다이하이드로테스토스테론으로의 전환율(추출물 첨가시)

실험결과 돌소리쟁이 추출물은 5알파-리덕타아제 저해효과가 있음을 알 수있다(표 9).

실시예 1 중량(%)	1	0.1	0.05	0.025	0.01	0.005	0.0025
저해율(%)	89.4	82.8	75.4	71.4	54.8	43.2	12.8

돌소리쟁이 추출물의 Caveolin -1 발현 저해 효과

세포의 caveolin-1 발현 양 측정을 위해 FITC로 표지된 caveolin-1 항체로 염색하는 방법을 사용하였고, FITC-conjugated caveolin-1 antibody (santa cruz, USA)를 사용하였다. 실험 조건에 맞추어 배양된 세포를 수확한 후 차갑게 만든 0.5% BSA를 첨가한 PBS로 2회 헹구어 주었다. 세포를 수집한 수 1:100 비율로 희석한 FITC-conjugated caveolin-1 antibody를 50 ㎕를 넣어 가볍게 섞어주고 빛이 차단된 4℃ 상태에서 30분 동안 반응한 후 차갑게 만든 0.5% BSA를 첨가한 PBS 500 ㎕로 2회 헹구어 주어 잔여 항체를 제거해 주었다. 그 후에 0.5% BSA를 첨가한 PBS 500 ㎕를 첨가한 후 FACS 분석을 하였다. 기기는 FACSCalibur (BD, USA)를 사용하였고, 분석은 WinMDI를 사용하였다 (표 10). 이러한 실험 결과, 돌소리쟁이 추출물 처리 후 세포의 caveolin-1 발현양 변화를 확인한 결과 대조군에 비해 caveolin-1 발현양이 감소함을 확인하였다.

돌소리쟁이 추출물 처리에 따른 caveolin-1 발현양 변화 FACS 분석 결과

시료 (추출물)	농도 (%)	Caveolin-1 발현 저해효과 (%)
실시예 1	0.05	42.58
	0.025	28.73
	0.0125	19.97
	0.00625	9.52
	0.00313	8.83

피부 탄력 개선 및 주름 개선 효과 시험

실시예 1에서 수득한 돌소리쟁이 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 탄력 개선 효과 및 주름 개선 효과를 비교예 1과 비교실험을 행하여 평가하였다.

비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 11에 나타낸 바와 같다. 우선 표 11에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존하였다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 13, 비교예 1)을 제조한다. 실험자(20세-35세의 여성) 15명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 13에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 실험 완료 후 피부 탄력 개선 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 피부탄력측정기(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 측정하였다. 실험결과는 하기 표 11에 Cutometer SEM 575의 △R7값으로 기재하였는데 R7값은 피부의 점탄성(viscoelasticity) 성질을 나타낸다.

표 12와 같이 실시예 1의 돌소리쟁이 추출물을 함유한 크림은 피부 탄력개선 효과가 우수함을 알 수 있다.

구 분		실시예 13	비교예 1
가	스테아릴 알콜	8	8
	스테아린산	2	2
	스테아린산 콜레스테롤	2	2
	스쿠알란	4	4
	2-옥틸도레실알콜	6	6
	폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르	3	3
	글리세릴모노스테아린산아스테르	2	2
나	돌소리쟁이 추출물	1	-
	프로필렌글리콜	5	5
	정제수	잔량	잔량

주)단위 : 중량%

실험제품	피부탄력효과 (△R7)
실시예 13	0.42
비교예1	0.13

n=20, p<0.05

실험자(20세~35세의 여성) 15명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 13에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다.

실험 완료 후 피부 주름 개선 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 피부의 주름개선효과를 알아보기 위하여 실리콘 재질의 모사판(replica)을 제작하여 지정 부위의 주름의 상태를 화상분석기인 비지오미터(visiometer: SV60, C+K Electronic Co., Germany)로 측정하였다. 그 결과를 하기 표13에 나타내었으며, 이 결과는 2개월 후의 각각의 파라미터 값에서 2개월 전 파라미터 값을 뺀 것의 평균을 나타낸 것이다. 즉, 이 값이 음수로 나올수록 주름 개선효과가 높다는 것을 의미한다. 따라서 표13에서 나타나듯 돌소리쟁이 추출물을 함유한 실시예13의 피부 주름 개선 효과가 크게 증진되었음을 확인할 수 있었다.

실험제품	R1	R2	R3	R4	R5
실시예 13	-0.22	-0.18	-0.12	-0.09	-0.07
비교예 1	-0.12	-0.08	-0.07	-0.05	-0.03
R1: 주름 등고선의 최고치와 최저치의 차이값 R2: 주름 등고선을 임의로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1값들의 평균 R3: 5개씩 나눈 R1값 중 최고치 R4: 주름 등고선의 기선(baseline)에서 각각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값 R5: 주름 등고선의 기선에서 각각의 주름 윤곽을 뺀 값의 평균값

미백효능 임상 평가

본 실시예는 실시예 13에서 수득한 돌소리쟁이 추출물을 함유한 크림 제형의 화장료를 사용하여 사람을 대상으로 피부 미백효과를 비교예 1과 비교실험을 행하여 평가하였다. 실험자 (20세~35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 13에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 시험 완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 피부색의 변화를 크로마메타(Minolta CR300)를 이용하여 색의 밝기변화(L)를 측정하고, 복수의 숙련자에 의한 객관적 육안 관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 실시하여 하기 등급 부뉼에 따라 효과를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 14에 나타내었다. 이때 미백효능 정도를 다음의 7등급으로 분류하여 평가하였다.

미백 효능 육안 평가 기준 :

-3: 매우 악화

-2: 악화

-1: 약간 악화

0: 변화 없음

1: 약간 개선

2: 개선

3: 매우 개선

표 14에 나타낸 바와 같이 돌소리쟁이 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 미백효과가 우수함을 알 수 있다.

	피부색의 밝기 변화(L)		숙련자의 객관적 평가		피검자의 주관적 평가
	실시예 13	비교예 1	실시예 13	비교예 1	실시예 13	비교예 1
평균값	4.62	2.85	2.8	1.3	3.9	1.1

이하에 그 외의 실시예를 나타내었다. 즉, 실시예 1에서 수득한 돌소리쟁이 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액을 실시예 15 내지 17에서 제조하였다. 이들 돌소리쟁이 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액은 활성산소 소거효과, 피부 잔주름 개선효과, 피부 탄력 개선효과, 광노화 방지 효과, 미백효과, 여드름 방지효과, 모발손상 방지 효과, 탈모방지 및 육모 효과등 피부개선에 우수한 효과를 나타내었다.

돌소리쟁이 추출물을 함유한 화장수 제조

95% 에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합용해 한다. 실시예 1에서 수득한 돌소리쟁이 추출물 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 피부개선효과가 있는 화장수를 얻었다.

돌소리쟁이 추출물을 함유한 유액 제조

세틸알콜 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰 부가)모노올레이트 1g및 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고, 실시예 1에서 수득한 돌소리쟁이 추출물 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해시킨다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 피부개선효과가 있는 유액을 얻었다.

돌소리쟁이 추출물을 함유한 미용액 제조

95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히아루론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 1에서 수득한 돌소리쟁이 추출물 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 피부개선효과가 있는 미용액을 얻었다.

돌소리쟁이 추출물에 글리콜산 및 비타민 C가 첨가된 조성물의 제조

상기 돌소리쟁이 추출물 450g에 글리콜산(글리콜산 99%, Aldrich사제품) 45g 및 비타민C(L-Ascorbic acid, Sigma) 30g을 잘 혼합하였다.

색소 침착, 잔주름 제거, 여드름 자국 및 비타민 C의 산화성 시험

눈가 및 뺨 등에 색소 침착이 심한 건강한 남녀 자원자 50명씩 세그룹을 피험자로 하여, 상기 실시예 18의 조성물을 1일 2회 아침 저녁으로 4개월 동안 색소 침착 부위에 적용하게 하였다. 일주일마다 색소 침착이 제거되는 정도와 피부에 대한 자극이 일어나는 정도를 관찰하여 기록하였다.

이마, 빰 및 등에 농포성 여드름이 있는 남녀 환자 50명씩 세그룹을 피험자로 하여 상기 실시예 18의 조성물을 1일 2회 환부에 바르도록 하고, 피부에 적용시 자극이 있는 지와 그 개선된 정도를 육안으로 관찰하여 하기 표에 나타내었다.

비타민C의 공기중 산소에 의한 산화 정도를 상온에서 육안으로 관찰하였다. 비타민C가 산화되는지의 기준은 흰색이 황색으로 변색되는 정도로써 평가하여 하기 표 15에 나타내었다.

시험물질	침착된 색소 제거(명)			여드름 치료 및 모공 축소(명)			비타민 C 산화 정도
시험물질	현저	유효	무효	현저	유효	무효	황색되는 시간
실시예 18	33	14	3	39	11	0	90일 이상

본 발명의 실시예 18의 조성물을 환자에게 적용한 결과 얼굴의 모공 축소, 여드름 치료, 햇볕에 그을린 피부에 대한 미백 효과 등을 나타내었다.

이상, 본 발명의 바람직한 실시예를 들어 상세하게 설명하였으나, 본 발명은 상기 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 기술적 사상의 범위내에서 당 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의하여 여러 가지 변형이 가능하다.

Claims

돌소리쟁이 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 활성산소 개선효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 MMP-1 단백질 발현 저해효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 타입 1 프로콜라겐 생합성 촉진 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 광노화 방지 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 여드름 방지 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 탄력 개선 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 미백 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 모발 손상 방지효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 탈모방지 및 육모효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부세포 노화 개선 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 caveolin-1 발현 저해 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도우로 이루어진 군으로부터 선택된 화장품에 사용되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되며 일반적으로 사용되는 함량을 포함하는 보조제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 15항에 있어서, 상기 보조제는 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제 및 지질 소낭으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
돌소리쟁이 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부용 약제 조성물.
제 17항에 있어서, 상기 돌소리쟁이 추출물 이외에 글리콜산 또는 비타민 C를 추가로 함유하는 것을 특징을 하는 피부용 약제 조성물.