JPH0768157A - リポソーム - Google Patents
リポソームInfo
- Publication number
- JPH0768157A JPH0768157A JP24027793A JP24027793A JPH0768157A JP H0768157 A JPH0768157 A JP H0768157A JP 24027793 A JP24027793 A JP 24027793A JP 24027793 A JP24027793 A JP 24027793A JP H0768157 A JPH0768157 A JP H0768157A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- liposome
- dha
- chloroform
- squid
- acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 生体内で安定性が高く、かつ、種々の生理活
性が期待されるＤＨＡを多く含有するホスファチジルコ
リンをリポソーム形成脂質として含むリポソームを提供
すること。 【構成】 イカの皮から単離したホスファチジルコリン
をリポソーム形成脂質として含むリポソーム。 【効果】 ＤＨＡを高濃度で含み、生体内で高い安定性
を有するリポソームを提供する。本発明のリポソームを
用いることにより、薬物を生体内で一定量づつ放出する
ことが可能となる。また、ＤＨＡの有する種々の生理活
性も合わせて期待できる。
性が期待されるＤＨＡを多く含有するホスファチジルコ
リンをリポソーム形成脂質として含むリポソームを提供
すること。 【構成】 イカの皮から単離したホスファチジルコリン
をリポソーム形成脂質として含むリポソーム。 【効果】 ＤＨＡを高濃度で含み、生体内で高い安定性
を有するリポソームを提供する。本発明のリポソームを
用いることにより、薬物を生体内で一定量づつ放出する
ことが可能となる。また、ＤＨＡの有する種々の生理活
性も合わせて期待できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はイカの皮から単離したホ
スファチジルコリンをリポソーム形成脂質として含むリ
ポソームに関するものである。該リポソームは薬物の放
出制御等に有用である。
スファチジルコリンをリポソーム形成脂質として含むリ
ポソームに関するものである。該リポソームは薬物の放
出制御等に有用である。
【０００２】
【従来の技術】リポソームは脂質人工膜より形成される
小胞である。リポソームは生物的に分解可能な素材から
なり、種々の物質を保持させることが可能であることか
ら、種々のマイクロカプセルとして薬物等をその中に封
入して、薬物の放出制御に利用することが検討されてい
る。この目的のためには、リポソームは、少なくとも薬
物を放出し終わるまでは生体内で安定に存在し、一定速
度で封入薬物を放出することが要求される。生体内にお
いて、リポソームが破壊される要因の一つとして、ホス
フォリパーゼＡ2（ＰＬＡ2）の作用が知られている。
小胞である。リポソームは生物的に分解可能な素材から
なり、種々の物質を保持させることが可能であることか
ら、種々のマイクロカプセルとして薬物等をその中に封
入して、薬物の放出制御に利用することが検討されてい
る。この目的のためには、リポソームは、少なくとも薬
物を放出し終わるまでは生体内で安定に存在し、一定速
度で封入薬物を放出することが要求される。生体内にお
いて、リポソームが破壊される要因の一つとして、ホス
フォリパーゼＡ2（ＰＬＡ2）の作用が知られている。
【０００３】一方、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）はω
−３系列の高度不飽和脂肪酸（以下ＰＵＦＡという）と
して、他のｎ−３系列のＰＵＦＡであるエイコサペンタ
エン酸（以下ＥＰＡという）やα−リノレン酸（以下Ａ
ＬＡという）と同様に、ｎ−６系列のＰＵＦＡと拮抗す
る生理作用を有すると共に、ＥＰＡやＡＬＡには見られ
ない学習能向上作用、明度識別能向上作用、抗アレルギ
ー作用などが知られている。このため、老人性痴呆症
や、成人病が深刻になりつつある現代社会において、医
薬品や健康食品或いは化粧品への応用が期待されてい
る。
−３系列の高度不飽和脂肪酸（以下ＰＵＦＡという）と
して、他のｎ−３系列のＰＵＦＡであるエイコサペンタ
エン酸（以下ＥＰＡという）やα−リノレン酸（以下Ａ
ＬＡという）と同様に、ｎ−６系列のＰＵＦＡと拮抗す
る生理作用を有すると共に、ＥＰＡやＡＬＡには見られ
ない学習能向上作用、明度識別能向上作用、抗アレルギ
ー作用などが知られている。このため、老人性痴呆症
や、成人病が深刻になりつつある現代社会において、医
薬品や健康食品或いは化粧品への応用が期待されてい
る。
【０００４】これらの用途に対するＤＨＡの化学形とし
ては細胞毒性などの副作用がないことから、生体成分で
あるトリグリセリドやリン脂質が好ましいとされてい
る。中でもリン脂質は神経伝達物質であるアセチルコリ
ンの原料になり得るホスファチジルコリン（以下ＰＣと
も略称する）、細胞膜を形成するホスファチジルエタノ
ールアミン（以下ＰＥとも略称する）、プロテインキナ
ーゼＣ活性化に関与するホスファチジルセリンなどのよ
うに、それ自体が有用な生理作用を有することが知られ
ている。
ては細胞毒性などの副作用がないことから、生体成分で
あるトリグリセリドやリン脂質が好ましいとされてい
る。中でもリン脂質は神経伝達物質であるアセチルコリ
ンの原料になり得るホスファチジルコリン（以下ＰＣと
も略称する）、細胞膜を形成するホスファチジルエタノ
ールアミン（以下ＰＥとも略称する）、プロテインキナ
ーゼＣ活性化に関与するホスファチジルセリンなどのよ
うに、それ自体が有用な生理作用を有することが知られ
ている。
【０００５】
【本発明が解決しようとする課題】本発明は、生体内で
安定性が高く、かつ、種々の有益な生理作用が期待され
るＤＨＡを多く含有するリポソームを提供することを目
的とする。
安定性が高く、かつ、種々の有益な生理作用が期待され
るＤＨＡを多く含有するリポソームを提供することを目
的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するために鋭意研究した結果、以下の知見に基
づき本発明を完成するに至った。すなわち、第一に、イ
カは、(1)その皮にリン脂質が湿重量当り約2%含むこ
と、(2)このリン脂質の約50%がＰＣ、20%がＰＥである
こと、(3)ＤＨＡはＰＣの構成脂肪酸のうち約50%、ＰＥ
の構成脂肪酸のうち約20%を占めること、(4)ＤＨＡはＰ
ＣとＰＥのsn-2位に局在していること、(5)その皮から
溶剤分別した後、既存の吸着クロマトグラフィーとイオ
ン交換クロマトグラフィーを組み合わせることによっ
て、ＰＣとＰＥを他のリン脂質から別個に容易に単離で
きることを見いだした。また、第二に、イカの皮から単
離したホスファチジルコリンをリポソーム形成脂質とし
て含むリポソームが優れた安定性を有することを見いだ
した。
題を解決するために鋭意研究した結果、以下の知見に基
づき本発明を完成するに至った。すなわち、第一に、イ
カは、(1)その皮にリン脂質が湿重量当り約2%含むこ
と、(2)このリン脂質の約50%がＰＣ、20%がＰＥである
こと、(3)ＤＨＡはＰＣの構成脂肪酸のうち約50%、ＰＥ
の構成脂肪酸のうち約20%を占めること、(4)ＤＨＡはＰ
ＣとＰＥのsn-2位に局在していること、(5)その皮から
溶剤分別した後、既存の吸着クロマトグラフィーとイオ
ン交換クロマトグラフィーを組み合わせることによっ
て、ＰＣとＰＥを他のリン脂質から別個に容易に単離で
きることを見いだした。また、第二に、イカの皮から単
離したホスファチジルコリンをリポソーム形成脂質とし
て含むリポソームが優れた安定性を有することを見いだ
した。
【０００６】本発明は、イカの皮から単離したホスファ
チジルコリンをリポソーム形成脂質として含むリポソー
ムに関する。ホスファチジルコリンとしては、アシル型
とエーテル型のいずれをも包含するが、アシル型を多く
含む方が好ましい。リポソームの形態は、多重ラメラ小
胞と単ラメラ小胞のいずれであってもよく、また、小さ
な単ラメラ小胞（ＳＵＶ）であっても大きな単ラメラ小
胞（ＬＵＶ）であってもよい。
チジルコリンをリポソーム形成脂質として含むリポソー
ムに関する。ホスファチジルコリンとしては、アシル型
とエーテル型のいずれをも包含するが、アシル型を多く
含む方が好ましい。リポソームの形態は、多重ラメラ小
胞と単ラメラ小胞のいずれであってもよく、また、小さ
な単ラメラ小胞（ＳＵＶ）であっても大きな単ラメラ小
胞（ＬＵＶ）であってもよい。
【０００７】さらに、安定性およびＤＨＡ含量の点で、
本発明のリポソームは、リポソーム形成脂質の５０％以
上がイカの皮から単離したホスファチジルコリンである
ことが好ましい。
本発明のリポソームは、リポソーム形成脂質の５０％以
上がイカの皮から単離したホスファチジルコリンである
ことが好ましい。
【０００８】原料イカとしては、ムラサキイカ、ヤリイ
カ、コウイカ、ホタルイカ等が挙げられる。イカの皮
は、可食部を取った後の廃棄物として大量に存在し、か
つ実質的に無償で入手できる。本発明で用いるホスファ
チジルコリンは、例えば以下の方法によりこれらのイカ
の皮より単離できる。
カ、コウイカ、ホタルイカ等が挙げられる。イカの皮
は、可食部を取った後の廃棄物として大量に存在し、か
つ実質的に無償で入手できる。本発明で用いるホスファ
チジルコリンは、例えば以下の方法によりこれらのイカ
の皮より単離できる。
【０００９】すなわち、脂質成分の抽出の前に、イカの
皮を凍結乾燥した後、細かく砕いて表面積を広げること
が好ましい。脂質成分の抽出は、通常、有機溶剤を用い
ることにより好適に達成される。用いられる有機溶媒と
しては、リン脂質を溶解する通常の溶媒を単独又は混合
して用いることができ、例えばクロロホルム、エーテ
ル、ブチルアルコール、クロロホルム-メタノール系、n
-ヘキサン-エタノール水系、クロロホルム-n-ヘキサン
系、クロロホルム-エーテル系、クロロホルム-エタノー
ル系などが挙げられる。これらの溶媒のうち、クロロホ
ルム-メタノール系が好ましく、特に、クロロホルムの
比率が５０％以上、より好ましくは６５％以上であるこ
とが脂質成分の抽出効率が良い点で望ましい。
皮を凍結乾燥した後、細かく砕いて表面積を広げること
が好ましい。脂質成分の抽出は、通常、有機溶剤を用い
ることにより好適に達成される。用いられる有機溶媒と
しては、リン脂質を溶解する通常の溶媒を単独又は混合
して用いることができ、例えばクロロホルム、エーテ
ル、ブチルアルコール、クロロホルム-メタノール系、n
-ヘキサン-エタノール水系、クロロホルム-n-ヘキサン
系、クロロホルム-エーテル系、クロロホルム-エタノー
ル系などが挙げられる。これらの溶媒のうち、クロロホ
ルム-メタノール系が好ましく、特に、クロロホルムの
比率が５０％以上、より好ましくは６５％以上であるこ
とが脂質成分の抽出効率が良い点で望ましい。
【００１０】次いで、得られた脂質成分を分画すること
により、ＤＨＡを含むリン脂質を取得できる。分画は、
一般に有機溶剤を除去した後、脂質成分からリン脂質を
分画するのに通常用いられる方法のいずれかにより行な
うことができるが、大量に処理できる点で、分別用溶剤
を加えて不溶性物質を分離する方法、すなわち溶剤分別
法により行なうことが好ましい。分別用溶剤としては、
通常、脂質の分別に用いられる有機溶剤を用いることが
でき、例えば、アセトン、酢酸、クロロホルム、エーテ
ルなどが挙げられる。これらの溶剤のうち、分画効率が
よい点で、特に、アセトンが好ましい。また、溶剤に塩
化マグネシウム、塩化カルシウムなどを添加し、その共
存下、分別を行ってもよく、必要に応じて加熱、冷却な
どを行ってもよい。更に、得られた画分をカラムクロマ
トグラフィーで再分画し、目的とするリン脂質の画分を
集めることにより、高純度のリン脂質組成物を高収率で
得ることができる。カラムクロマトグラフィーとして
は、シリカ系クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラ
フィー、イオン交換クロマトグラフィーなどを用いるこ
とができる。さらに、ＰＣをＰＥから分画するために
は、溶剤分別により得られたリン脂質組成物をまずシリ
カ系クロマトグラフィーに付してＰＥを分離したのち、
イオン交換クロマトグラフィーに付することによりＰＣ
を分離することができる。
により、ＤＨＡを含むリン脂質を取得できる。分画は、
一般に有機溶剤を除去した後、脂質成分からリン脂質を
分画するのに通常用いられる方法のいずれかにより行な
うことができるが、大量に処理できる点で、分別用溶剤
を加えて不溶性物質を分離する方法、すなわち溶剤分別
法により行なうことが好ましい。分別用溶剤としては、
通常、脂質の分別に用いられる有機溶剤を用いることが
でき、例えば、アセトン、酢酸、クロロホルム、エーテ
ルなどが挙げられる。これらの溶剤のうち、分画効率が
よい点で、特に、アセトンが好ましい。また、溶剤に塩
化マグネシウム、塩化カルシウムなどを添加し、その共
存下、分別を行ってもよく、必要に応じて加熱、冷却な
どを行ってもよい。更に、得られた画分をカラムクロマ
トグラフィーで再分画し、目的とするリン脂質の画分を
集めることにより、高純度のリン脂質組成物を高収率で
得ることができる。カラムクロマトグラフィーとして
は、シリカ系クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラ
フィー、イオン交換クロマトグラフィーなどを用いるこ
とができる。さらに、ＰＣをＰＥから分画するために
は、溶剤分別により得られたリン脂質組成物をまずシリ
カ系クロマトグラフィーに付してＰＥを分離したのち、
イオン交換クロマトグラフィーに付することによりＰＣ
を分離することができる。
【００１１】このようにして得られる各々のリン脂質
は、薄層クロマトグラフィーとＮＭＲで分析してその種
類を同定することができ、更に常法によって、ケン化分
解、メチルエステル化、または、メタノリシスによっ
て、脂肪酸メチルエステルとした後、ガスクロマトグラ
フィーで分析して構成脂肪酸組成を求めることができ
る。更に、これらのリン脂質をホスフォリパーゼA2で処
理し、生成した遊離脂肪酸とリゾリン脂質を薄層クロマ
トグラフィーで分画した後、上述のように脂肪酸分析を
行うことによって、脂肪酸のリン脂質分子内分布を決定
することができる。
は、薄層クロマトグラフィーとＮＭＲで分析してその種
類を同定することができ、更に常法によって、ケン化分
解、メチルエステル化、または、メタノリシスによっ
て、脂肪酸メチルエステルとした後、ガスクロマトグラ
フィーで分析して構成脂肪酸組成を求めることができ
る。更に、これらのリン脂質をホスフォリパーゼA2で処
理し、生成した遊離脂肪酸とリゾリン脂質を薄層クロマ
トグラフィーで分画した後、上述のように脂肪酸分析を
行うことによって、脂肪酸のリン脂質分子内分布を決定
することができる。
【００１２】上述の方法により得られるイカの皮から単
離したＰＣの構成脂肪酸は、ＤＨＡ、ＥＰＡ、ステアリ
ン酸、パルミチン酸などであり、ＤＨＡ含量は一般に５
０％程度と高含量であった。
離したＰＣの構成脂肪酸は、ＤＨＡ、ＥＰＡ、ステアリ
ン酸、パルミチン酸などであり、ＤＨＡ含量は一般に５
０％程度と高含量であった。
【００１３】本発明のリポソームは、上記のようにして
単離したＰＣを用いて、常法により調製することができ
る。その一例を示すと次の通りである。すなわち、ま
ず、上記のＰＣを、適当量のコレステロールおよびホス
ファチジン酸と共に、溶媒に溶解させ、フラスコ等の容
器中で溶媒を除去して容器の内壁に均一に付着させる。
ついで、蒸留水を加えて懸濁させ、凍結乾燥する。凍結
乾燥物をリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）に懸濁することによ
り、ＬＵＶ型のリポソームが得られる。このものを超音
波破砕することにより、ＳＵＶ型のリポソームが得られ
る。
単離したＰＣを用いて、常法により調製することができ
る。その一例を示すと次の通りである。すなわち、ま
ず、上記のＰＣを、適当量のコレステロールおよびホス
ファチジン酸と共に、溶媒に溶解させ、フラスコ等の容
器中で溶媒を除去して容器の内壁に均一に付着させる。
ついで、蒸留水を加えて懸濁させ、凍結乾燥する。凍結
乾燥物をリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）に懸濁することによ
り、ＬＵＶ型のリポソームが得られる。このものを超音
波破砕することにより、ＳＵＶ型のリポソームが得られ
る。
【００１４】なお、本発明のリポソームには、常法に従
って、ヒトおよび動物用の医薬や検査薬をはじめとする
種々の薬物を含有させることができ、これら薬物を含む
リポソームも本発明の範囲である。
って、ヒトおよび動物用の医薬や検査薬をはじめとする
種々の薬物を含有させることができ、これら薬物を含む
リポソームも本発明の範囲である。
【００１５】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。ただし、本発明はこれらの実施例に限定されるも
のではない。
する。ただし、本発明はこれらの実施例に限定されるも
のではない。
【００１６】参考例１ 湿重量10gのムラサキイカの皮を凍結乾燥し、1.6gの乾
物を得た。これを細かく砕いた後、クロロホルム：メタ
ノール＝2:1の混合溶剤で抽出し、0.26gの脂質成分を得
た。この脂質成分にアセトン40mlを加え、冷却しながら
撹拌を行い、中性脂質を分別濾過し、アセトン不溶分0.
22gを得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにかけ、クロロホルム：メタノール＝85:15、80:20、
75:25の順で各々500ml、400ml、2000ml展開した。これ
によって、ＰＥ及びその他のリン脂質混合物に分画でき
た。次に、その他のリン脂質混合物をセファロースカラ
ムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム：メタノー
ル＝1:4、酢酸、クロロホルム：メタノール＝1:4+酢酸
アンモニウム(0.2%)を100mlづつで順次展開した。これ
によって、その他のリン脂質混合物からＰＣを単離でき
た。単離されたＰＣとＰＥは各々0.11gと0.04gであっ
た。これらのリン脂質はＮＭＲで各々の構造を確認した
後、脂肪酸組成を分析したところ、ＤＨＡ、ＥＰＡ、ス
テアリン酸、パルミチン酸はＰＣでは各々51%、5%、2
%、33%、ＰＥでは19%、33%、12%、6%であった。又、こ
れらの脂肪酸の分子内分布を分析したところ、ＰＣのsn
-2位はすべてＤＨＡであった。ＰＥのsn-2位はＤＨＡ又
はＥＰＡであった。
物を得た。これを細かく砕いた後、クロロホルム：メタ
ノール＝2:1の混合溶剤で抽出し、0.26gの脂質成分を得
た。この脂質成分にアセトン40mlを加え、冷却しながら
撹拌を行い、中性脂質を分別濾過し、アセトン不溶分0.
22gを得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにかけ、クロロホルム：メタノール＝85:15、80:20、
75:25の順で各々500ml、400ml、2000ml展開した。これ
によって、ＰＥ及びその他のリン脂質混合物に分画でき
た。次に、その他のリン脂質混合物をセファロースカラ
ムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム：メタノー
ル＝1:4、酢酸、クロロホルム：メタノール＝1:4+酢酸
アンモニウム(0.2%)を100mlづつで順次展開した。これ
によって、その他のリン脂質混合物からＰＣを単離でき
た。単離されたＰＣとＰＥは各々0.11gと0.04gであっ
た。これらのリン脂質はＮＭＲで各々の構造を確認した
後、脂肪酸組成を分析したところ、ＤＨＡ、ＥＰＡ、ス
テアリン酸、パルミチン酸はＰＣでは各々51%、5%、2
%、33%、ＰＥでは19%、33%、12%、6%であった。又、こ
れらの脂肪酸の分子内分布を分析したところ、ＰＣのsn
-2位はすべてＤＨＡであった。ＰＥのsn-2位はＤＨＡ又
はＥＰＡであった。
【００１７】参考例２ 湿重量30gのムラサキイカの皮を凍結乾燥し、4.8gの乾
物を得た。これを細かく砕いた後、クロロホルム：メタ
ノール＝2:1の混合溶剤で抽出し、0.61gの脂質成分を得
た。この脂質成分にアセトン40mlを加え、冷却しながら
撹拌を行い、中性脂質を分別濾過し、アセトン不溶分0.
54gを得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにかけ、クロロホルム：メタノール＝85:15、80:20、
75:25の順で各々500ml、400ml、2000ml展開した。これ
によって、ＰＥ及びその他のリン脂質混合物に分画でき
た。次に、その他のリン脂質混合物をセファロースカラ
ムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム：メタノー
ル＝1:4、酢酸、クロロホルム：メタノール＝1:4+酢酸
アンモニウム(0.2%)を100mlづつで順次展開した。これ
によって、その他のリン脂質混合物からＰＣを単離でき
た。単離されたＰＣとＰＥは各々0.29gと0.15gであっ
た。これらのリン脂質はＮＭＲで各々の構造を確認した
後、脂肪酸組成を分析したところ、ＤＨＡ、ＥＰＡ、ス
テアリン酸、パルミチン酸はＰＣでは各々49%、6%、2
%、33%、ＰＥでは18%、33%、11%、6%であった。又、こ
れらの脂肪酸の分子内分布を分析したところ、ＰＣのsn
-2位はすべてＤＨＡであった。ＰＥのsn-2位はＤＨＡ又
はＥＰＡであった。
物を得た。これを細かく砕いた後、クロロホルム：メタ
ノール＝2:1の混合溶剤で抽出し、0.61gの脂質成分を得
た。この脂質成分にアセトン40mlを加え、冷却しながら
撹拌を行い、中性脂質を分別濾過し、アセトン不溶分0.
54gを得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにかけ、クロロホルム：メタノール＝85:15、80:20、
75:25の順で各々500ml、400ml、2000ml展開した。これ
によって、ＰＥ及びその他のリン脂質混合物に分画でき
た。次に、その他のリン脂質混合物をセファロースカラ
ムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム：メタノー
ル＝1:4、酢酸、クロロホルム：メタノール＝1:4+酢酸
アンモニウム(0.2%)を100mlづつで順次展開した。これ
によって、その他のリン脂質混合物からＰＣを単離でき
た。単離されたＰＣとＰＥは各々0.29gと0.15gであっ
た。これらのリン脂質はＮＭＲで各々の構造を確認した
後、脂肪酸組成を分析したところ、ＤＨＡ、ＥＰＡ、ス
テアリン酸、パルミチン酸はＰＣでは各々49%、6%、2
%、33%、ＰＥでは18%、33%、11%、6%であった。又、こ
れらの脂肪酸の分子内分布を分析したところ、ＰＣのsn
-2位はすべてＤＨＡであった。ＰＥのsn-2位はＤＨＡ又
はＥＰＡであった。
【００１８】実施例１ 参考例１で単離されたＰＣとコレステロール（ｃｈｏ
ｌ）とジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）と
を８：５：１のモル比でクロロホルム／メタノール＝２
／１の混合溶媒に溶解した。この溶液をナシ型フラスコ
に入れ、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去
した。脂質膜がフラスコ内壁に均一に形成されるよう
に、必要に応じてクロロホルムを０．２ｍｌ加えて、再
度エバポレーターで溶媒を留去した。真空ポンプで０．
５〜１時間減圧に保ったのち、蒸留水約０．６ｍｌに懸
濁し、ネジ口試験管に移して凍結乾燥した。ＰＢＳ
（０．８％ＮａＣｌ，０．０２％ＫＣｌ，０．１１５％
Ｎａ2ＨＰＯ4，０．０２％ＫＨ2ＰＯ4）２ｍｌに懸濁
し、０．１Ｍ ＣａＣｌ2０．５ｍｌを添加して二つに分
け、一方は超音波破砕を行った。４００倍の光学顕微鏡
を用いての観察の結果、超音波破砕を行った試料は、粒
子径１μｍ以下のＳＵＶ型のリポソーム（以下、ＰＣ／
ＳＵＶと略称する）であり、破砕を行わなかった試料は
粒子径が〜１００μｍのＬＵＶ型のリポソーム（以下、
ＰＣ／ＬＵＶと略称する）であることが確認された。比
較例として、ＰＣを大豆ホスファチジルコリン（大豆Ｐ
Ｃ）に代え、モル比を大豆ＰＣ／ｃｈｏｌ／ＤＰＰＡ＝
４：５：１として、上記と同様の操作を行って、大豆Ｐ
Ｃ由来のリポソーム（以下、Ｓｏｙ／ＬＵＶおよびＳｏ
ｙ／ＳＵＶと略称する）を調製した。
ｌ）とジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）と
を８：５：１のモル比でクロロホルム／メタノール＝２
／１の混合溶媒に溶解した。この溶液をナシ型フラスコ
に入れ、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去
した。脂質膜がフラスコ内壁に均一に形成されるよう
に、必要に応じてクロロホルムを０．２ｍｌ加えて、再
度エバポレーターで溶媒を留去した。真空ポンプで０．
５〜１時間減圧に保ったのち、蒸留水約０．６ｍｌに懸
濁し、ネジ口試験管に移して凍結乾燥した。ＰＢＳ
（０．８％ＮａＣｌ，０．０２％ＫＣｌ，０．１１５％
Ｎａ2ＨＰＯ4，０．０２％ＫＨ2ＰＯ4）２ｍｌに懸濁
し、０．１Ｍ ＣａＣｌ2０．５ｍｌを添加して二つに分
け、一方は超音波破砕を行った。４００倍の光学顕微鏡
を用いての観察の結果、超音波破砕を行った試料は、粒
子径１μｍ以下のＳＵＶ型のリポソーム（以下、ＰＣ／
ＳＵＶと略称する）であり、破砕を行わなかった試料は
粒子径が〜１００μｍのＬＵＶ型のリポソーム（以下、
ＰＣ／ＬＵＶと略称する）であることが確認された。比
較例として、ＰＣを大豆ホスファチジルコリン（大豆Ｐ
Ｃ）に代え、モル比を大豆ＰＣ／ｃｈｏｌ／ＤＰＰＡ＝
４：５：１として、上記と同様の操作を行って、大豆Ｐ
Ｃ由来のリポソーム（以下、Ｓｏｙ／ＬＵＶおよびＳｏ
ｙ／ＳＵＶと略称する）を調製した。
【００１９】試験例１ ＰＣ／ＬＵＶ、ＰＣ／ＳＵＶ、Ｓｏｙ／ＬＵＶおよびＳ
ｏｙ／ＳＵＶの各リポソーム溶液を０．２ｍｌづつ４本
のネジ口試験管に分注し、１本は反応０時間の試料とし
て氷中保存した。残り３本にブタ膵臓由来ＰＬＡ2を１
０μｌ（１１単位）添加し、３７℃で１０，２０，６０
分間インキュベーションしたのち、１０ｍＭ ＥＧＴＡ
３０μｌを添加して反応を停止した。各試料からＦｏｌ
ｃｈの方法に準じて脂質を抽出し、シリカゲル薄層クロ
マトグラフィー（クロロホルム／メタノール／水＝６５
／２５／２）を行った。遊離酸画分をかきとり、塩酸−
メタノール法で脂肪酸メチルエステルに変換し、ガスク
ロマトグラフィーで定量した。ＰＣ／ＬＵＶとＰＣ／Ｓ
ＵＶについてはドコサヘキサエン酸（22:6(n-3)）、Ｓ
ｏｙ／ＬＵＶとＳｏｙ／ＳＵＶについてはリノール酸
（18:2(n-6)）に関して、それぞれ遊離酸のモル数（ｎ
ｍｏｌ）の、ホスファチジルコリン中の対応する酸のモ
ル数に対する割合（加水分解率、％）を算出して比較し
た。結果を図１と図２に示す。これらの結果から、本発
明のイカの皮から単離したＰＣを含むリポソームは、一
般的な大豆ＰＣを含むリポソームに比べて、遊離した酸
の量は少なく、酵素による分解に対して優れた安定性を
有することが明らかである。
ｏｙ／ＳＵＶの各リポソーム溶液を０．２ｍｌづつ４本
のネジ口試験管に分注し、１本は反応０時間の試料とし
て氷中保存した。残り３本にブタ膵臓由来ＰＬＡ2を１
０μｌ（１１単位）添加し、３７℃で１０，２０，６０
分間インキュベーションしたのち、１０ｍＭ ＥＧＴＡ
３０μｌを添加して反応を停止した。各試料からＦｏｌ
ｃｈの方法に準じて脂質を抽出し、シリカゲル薄層クロ
マトグラフィー（クロロホルム／メタノール／水＝６５
／２５／２）を行った。遊離酸画分をかきとり、塩酸−
メタノール法で脂肪酸メチルエステルに変換し、ガスク
ロマトグラフィーで定量した。ＰＣ／ＬＵＶとＰＣ／Ｓ
ＵＶについてはドコサヘキサエン酸（22:6(n-3)）、Ｓ
ｏｙ／ＬＵＶとＳｏｙ／ＳＵＶについてはリノール酸
（18:2(n-6)）に関して、それぞれ遊離酸のモル数（ｎ
ｍｏｌ）の、ホスファチジルコリン中の対応する酸のモ
ル数に対する割合（加水分解率、％）を算出して比較し
た。結果を図１と図２に示す。これらの結果から、本発
明のイカの皮から単離したＰＣを含むリポソームは、一
般的な大豆ＰＣを含むリポソームに比べて、遊離した酸
の量は少なく、酵素による分解に対して優れた安定性を
有することが明らかである。
【００２０】
【発明の効果】本発明は、ＤＨＡを高濃度で含み、生体
内で高い安定性を有するリポソームを提供する。本発明
のリポソームを用いることにより、薬物を生体内で一定
量づつ放出することが可能となる。また、ＤＨＡの有す
る種々の生理作用も合わせて期待できる。
内で高い安定性を有するリポソームを提供する。本発明
のリポソームを用いることにより、薬物を生体内で一定
量づつ放出することが可能となる。また、ＤＨＡの有す
る種々の生理作用も合わせて期待できる。
【図１】実施例１で得られたＰＣおよび比較例で得られ
た大豆ＰＣ（Ｓｏｙ）から調製した各々のＬＵＶについ
てのＰＬＡ2に対する安定性試験結果を示すグラフであ
る。
た大豆ＰＣ（Ｓｏｙ）から調製した各々のＬＵＶについ
てのＰＬＡ2に対する安定性試験結果を示すグラフであ
る。
【図２】実施例１で得られたＰＣおよび比較例で得られ
た大豆ＰＣ（Ｓｏｙ）から調製した各々のＳＵＶについ
てのＰＬＡ2に対する安定性試験結果を示すグラフであ
る。
た大豆ＰＣ（Ｓｏｙ）から調製した各々のＳＵＶについ
てのＰＬＡ2に対する安定性試験結果を示すグラフであ
る。
【手続補正書】
【提出日】平成６年８月１６日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００３】一方、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）はｎ
−３系列の高度不飽和脂肪酸（以下ＰＵＦＡという）と
して、他のｎ−３系列のＰＵＦＡであるエイコサペンタ
エン酸（以下ＥＰＡという）やα−リノレン酸（以下Ａ
ＬＡという）と同様に、ｎ−６系列のＰＵＦＡと拮抗す
る生理作用を有すると共に、ＥＰＡやＡＬＡには見られ
ない学習能向上作用、明度識別能向上作用、抗アレルギ
ー作用などが知られている。このため、老人性痴呆症
や、成人病が深刻になりつつある現代社会において、医
薬品や健康食品或いは化粧品への応用が期待されてい
る。
−３系列の高度不飽和脂肪酸（以下ＰＵＦＡという）と
して、他のｎ−３系列のＰＵＦＡであるエイコサペンタ
エン酸（以下ＥＰＡという）やα−リノレン酸（以下Ａ
ＬＡという）と同様に、ｎ−６系列のＰＵＦＡと拮抗す
る生理作用を有すると共に、ＥＰＡやＡＬＡには見られ
ない学習能向上作用、明度識別能向上作用、抗アレルギ
ー作用などが知られている。このため、老人性痴呆症
や、成人病が深刻になりつつある現代社会において、医
薬品や健康食品或いは化粧品への応用が期待されてい
る。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００８】原料イカとしては、ムラサキイカ、ヤリイ
カ、コウイカ、ホタルイカ、アメリカオオアカイカ等が
挙げられる。イカの皮は、可食部を取った後の廃棄物と
して大量に存在し、かつ実質的に無償で入手できる。本
発明で用いるホスファチジルコリンは、例えば以下の方
法によりこれらのイカの皮より単離できる。 ─────────────────────────────────────────────────────
カ、コウイカ、ホタルイカ、アメリカオオアカイカ等が
挙げられる。イカの皮は、可食部を取った後の廃棄物と
して大量に存在し、かつ実質的に無償で入手できる。本
発明で用いるホスファチジルコリンは、例えば以下の方
法によりこれらのイカの皮より単離できる。 ─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成６年１１月２９日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１８】実施例１ 参考例１で単離されたＰＣとコレステロール（ｃｈｏ
ｌ）とジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）と
を８：５：１のモル比でクロロホルム／メタノール＝２
／１の混合溶媒に溶解した。この溶液をナシ型フラスコ
に入れ、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去
した。脂質膜がフラスコ内壁に均一に形成されるよう
に、必要に応じてクロロホルムを０．２ｍｌ加えて、再
度エバポレーターで溶媒を留去した。真空ポンプで０．
５〜１時間減圧に保ったのち、蒸留水約０．６ｍｌに懸
濁し、ネジ口試験管に移して凍結乾燥した。ＰＢＳ-(0.
8% NaCl, 0 .02% KCl, 0.115% Na2HPO4, 0.02% KH2PO4)
２ｍｌに懸濁し、０．１Ｍ ＣａＣｌ2 ０．５ｍｌを添
加して二つに分け、一方は超音波破砕を行った。４００
倍の光学顕微鏡を用いての観察の結果、超音波破砕を行
った試料は、粒子径１μｍ以下のＳＵＶ型のリポソーム
（以下、ＰＣ／ＳＵＶと略称する）であり、破砕を行わ
なかった試料は粒子径が〜１μｍ程度のリポソーム（以
下、ＰＣ／ＬＵＶと略称する）であることが確認され
た。比較例として、ＰＣを大豆ホスファチジルコリン
（大豆ＰＣ）に代え、モル比を大豆ＰＣ／ｃｈｏｌ／Ｄ
ＰＰＡ＝４：５：１として、上記と同様の操作を行っ
て、大豆ＰＣ由来のリポソーム（以下、Ｓｏｙ／ＬＵＶ
およびＳｏｙ／ＳＵＶと略称する）を調製した。
ｌ）とジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）と
を８：５：１のモル比でクロロホルム／メタノール＝２
／１の混合溶媒に溶解した。この溶液をナシ型フラスコ
に入れ、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去
した。脂質膜がフラスコ内壁に均一に形成されるよう
に、必要に応じてクロロホルムを０．２ｍｌ加えて、再
度エバポレーターで溶媒を留去した。真空ポンプで０．
５〜１時間減圧に保ったのち、蒸留水約０．６ｍｌに懸
濁し、ネジ口試験管に移して凍結乾燥した。ＰＢＳ-(0.
8% NaCl, 0 .02% KCl, 0.115% Na2HPO4, 0.02% KH2PO4)
２ｍｌに懸濁し、０．１Ｍ ＣａＣｌ2 ０．５ｍｌを添
加して二つに分け、一方は超音波破砕を行った。４００
倍の光学顕微鏡を用いての観察の結果、超音波破砕を行
った試料は、粒子径１μｍ以下のＳＵＶ型のリポソーム
（以下、ＰＣ／ＳＵＶと略称する）であり、破砕を行わ
なかった試料は粒子径が〜１μｍ程度のリポソーム（以
下、ＰＣ／ＬＵＶと略称する）であることが確認され
た。比較例として、ＰＣを大豆ホスファチジルコリン
（大豆ＰＣ）に代え、モル比を大豆ＰＣ／ｃｈｏｌ／Ｄ
ＰＰＡ＝４：５：１として、上記と同様の操作を行っ
て、大豆ＰＣ由来のリポソーム（以下、Ｓｏｙ／ＬＵＶ
およびＳｏｙ／ＳＵＶと略称する）を調製した。
Claims (2)
- 【請求項１】 イカの皮から単離したホスファチジルコ
リンをリポソーム形成脂質として含むリポソーム。 - 【請求項２】 イカの皮から単離したホスファチジルコ
リンがリポソーム形成脂質の５０モル％以上を占めるこ
とを特徴とする、請求項１に記載のリポソーム。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24027793A JPH0768157A (ja) | 1993-09-02 | 1993-09-02 | リポソーム |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24027793A JPH0768157A (ja) | 1993-09-02 | 1993-09-02 | リポソーム |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0768157A true JPH0768157A (ja) | 1995-03-14 |
Family
ID=17057103
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24027793A Pending JPH0768157A (ja) | 1993-09-02 | 1993-09-02 | リポソーム |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0768157A (ja) |
-
1993
- 1993-09-02 JP JP24027793A patent/JPH0768157A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Van Hoogevest et al. | The use of natural and synthetic phospholipids as pharmaceutical excipients | |
| Borggreven et al. | Biochemical aspects of the visual process: VI. The lipid composition of native and hexane-extracted cattle rod outer segments | |
| DE69011739T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Phosphatidsäure. | |
| US11020438B2 (en) | Phospholipid compositions and their preparation | |
| US20110160471A1 (en) | Method for production of highly pure phospholipid, and highly pure sphingomyelin and plasmalogen-type glycerophospholipid produced by the method | |
| US5453523A (en) | Process for obtaining highly purified phosphatidylcholine | |
| CA2676484A1 (en) | Process for producing sphingomyelin and plasmalogen-form glycerophospholipid | |
| AU675116B2 (en) | Method for extracting sphingomyelin from phospholipid con taining fat concentrate | |
| JPH08151334A (ja) | リポソームおよびその製剤 | |
| US5153125A (en) | Process for producing lysophospholipids-containing phospholipids with reduced neutral lipid content | |
| Nacka et al. | In vitro behavior of marine lipid‐based liposomes. Influence of pH, temperature, bile salts, and phospholipase A2 | |
| JP3531876B2 (ja) | ドコサヘキサエン酸を含むリン脂質組成物の取得方法 | |
| De Koning | Phospholipids of marine origin. VI. The octopus (Octopus vulgaris) | |
| JPH0768157A (ja) | リポソーム | |
| JP2001186898A (ja) | 多価不飽和脂肪酸残基をもつホスファチジルセリンの製造法 | |
| Yurkowski et al. | The molecular species of mucosal phosphatidyl cholines from the small intestine of normal and essential fatty acid-deficient rats | |
| Konishi et al. | Lipid Composition of Liposomal Membrane Largely Affects Its Transport and Uptake through Small Intestinal Epithelial Cell Models | |
| JP5041790B2 (ja) | 多価不飽和脂肪酸を構成要素とするホスファチジルセリンの製造方法 | |
| JP6763521B2 (ja) | ２−ｄｈａ−リゾホスファチジルコリン含有脂質組成物及びその製造方法 | |
| JPS62120340A (ja) | 高度不飽和脂肪酸の分取方法 | |
| JPH01160989A (ja) | ドコサヘキサエノイルホスファチジルコリンの製造法 | |
| JPH0586796B2 (ja) | ||
| JPH01160988A (ja) | ドコサヘキサエノイルジアシルグリセロールの製造法 | |
| JP2717510B2 (ja) | 苦味低減化剤の製造法 | |
| US3197371A (en) | Process for treating hypercholesteralemia |