JPH0761946B2 - エイズ・ウイルス増殖抑制剤 - Google Patents
エイズ・ウイルス増殖抑制剤Info
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- JPH0761946B2 JPH0761946B2 JP61174724A JP17472486A JPH0761946B2 JP H0761946 B2 JPH0761946 B2 JP H0761946B2 JP 61174724 A JP61174724 A JP 61174724A JP 17472486 A JP17472486 A JP 17472486A JP H0761946 B2 JPH0761946 B2 JP H0761946B2
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- Japan
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- htlv
- iii
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- virus
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- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
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- A61P31/12—Antivirals
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- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、甘草有効成分であるグリチルリチンを有効成
分として含有するエイズ・ウィルス増殖抑制剤に関する
ものである。
分として含有するエイズ・ウィルス増殖抑制剤に関する
ものである。
（従来技術及び問題点） 後天性免疫不全症候群（AIDS,エイズ）は1982年米国で
発見された疾患で、その原因はウィルスによるので、発
見者等により夫々Lymphoadenapthy associated virus
（LAV）又はHuman Tlymphotropic retrovirus type III
（HTLV−III）と命名され一般的に両者合わせてHTLV−I
II/LAVと表現される。これはヒトレトロウィルスに属
し、このウィルスによりリンパ球のヘルパーＴ細胞が破
壊され、その結果、細胞性免疫不全となり、原虫、真
菌、ウィルス、細菌などによる日和見感染、カポシ肉腫
などが発生する死亡率の高い重篤な疾患である。米国で
は、数年後には死者五万人余に達すると予測されている
現状である。
発見された疾患で、その原因はウィルスによるので、発
見者等により夫々Lymphoadenapthy associated virus
（LAV）又はHuman Tlymphotropic retrovirus type III
（HTLV−III）と命名され一般的に両者合わせてHTLV−I
II/LAVと表現される。これはヒトレトロウィルスに属
し、このウィルスによりリンパ球のヘルパーＴ細胞が破
壊され、その結果、細胞性免疫不全となり、原虫、真
菌、ウィルス、細菌などによる日和見感染、カポシ肉腫
などが発生する死亡率の高い重篤な疾患である。米国で
は、数年後には死者五万人余に達すると予測されている
現状である。
このHTLV−III/LAVはAIDS患者の血液及び精液や唾液中
に存在し、輸血その他の原因によって感染する。この疾
患に対する治療剤は従来からいくつか報告されている。
それらの多くはHTLV−III/LAV中に含まれているレトロ
ウィルスの複製に重要な役割をもつ逆転写酵素活性を抑
制する作用をもつものであって、例えば３′−アジド−
デオキシチミジン、或いはHPA−23などがある。これら
に加えてインターロイキンII、インターフェロン及びイ
ソプリノシン等が患者の免疫欠損に対しての免疫促進剤
として使用されている。
に存在し、輸血その他の原因によって感染する。この疾
患に対する治療剤は従来からいくつか報告されている。
それらの多くはHTLV−III/LAV中に含まれているレトロ
ウィルスの複製に重要な役割をもつ逆転写酵素活性を抑
制する作用をもつものであって、例えば３′−アジド−
デオキシチミジン、或いはHPA−23などがある。これら
に加えてインターロイキンII、インターフェロン及びイ
ソプリノシン等が患者の免疫欠損に対しての免疫促進剤
として使用されている。
しかし現状では、エイズ患者に対するさらに多くの有用
な治療薬の緊急的開発が急務となっている。
な治療薬の緊急的開発が急務となっている。
本発明者等は、近年、甘草の有効成分と一つであるグリ
チルリチンが、in vitroにおいて数種のDNA、RNAウィル
スに対して抗ウィルス活性を表わすことが報告されてい
ることに注目し（Pompei R.et al:Nature 281,p.689−6
90,1979）、本化合物がAIDSの原因ウィルスであるHTLV
−III/LAVの増殖抑制効果を現わすか否かをHTLV−III/L
AV−MT−４細胞を用いて種々検討した。その結果、グリ
チルリチンがHTLV−III/LAVの増殖を有効に抑制する作
用があることを発見し、本発明を完成するに至ったもの
である。
チルリチンが、in vitroにおいて数種のDNA、RNAウィル
スに対して抗ウィルス活性を表わすことが報告されてい
ることに注目し（Pompei R.et al:Nature 281,p.689−6
90,1979）、本化合物がAIDSの原因ウィルスであるHTLV
−III/LAVの増殖抑制効果を現わすか否かをHTLV−III/L
AV−MT−４細胞を用いて種々検討した。その結果、グリ
チルリチンがHTLV−III/LAVの増殖を有効に抑制する作
用があることを発見し、本発明を完成するに至ったもの
である。
（発明の構成） 本発明に係るエイズ・ウィルス増殖抑制剤は、次式で表
わされるグリチルリチンを有効成分とする。
わされるグリチルリチンを有効成分とする。
本グリチルリチンは顕著なエイズ・ウィルス増殖抑制作
用を示すものであり、そのままエイズ・ウィルス増殖抑
制剤とするか、またはその製剤上許容される塩、即ちグ
リチルリチンと無機、有機の塩基とをモル比で作用させ
て得られるグリチルリチンアンモニウム塩、グリチルリ
チンアルカリ金属塩、或いはグルチルリチンコリン塩等
のグリチルリチン塩を有効成分とする形でエイズ患者に
投与することが可能である。投与する方法としては、経
口或いは非経口のいずれをも選択でき、また投与量は患
者の年齢、症状等により異なるが、一般には経口投与で
は成人一日当り200〜400mgの範囲で用いることにより所
期の効果が期待できる。
用を示すものであり、そのままエイズ・ウィルス増殖抑
制剤とするか、またはその製剤上許容される塩、即ちグ
リチルリチンと無機、有機の塩基とをモル比で作用させ
て得られるグリチルリチンアンモニウム塩、グリチルリ
チンアルカリ金属塩、或いはグルチルリチンコリン塩等
のグリチルリチン塩を有効成分とする形でエイズ患者に
投与することが可能である。投与する方法としては、経
口或いは非経口のいずれをも選択でき、また投与量は患
者の年齢、症状等により異なるが、一般には経口投与で
は成人一日当り200〜400mgの範囲で用いることにより所
期の効果が期待できる。
剤形は、製剤上許容される無害の一種、或いは数種の賦
形剤、例えば乳糖、バレイショデンプン、アルギン酸ナ
トリウム、アミノ酢酸、メチオニン、炭酸カルシウム等
を配剤した散剤、顆粒剤、糖衣錠、及びカプセル剤等と
することができる。
形剤、例えば乳糖、バレイショデンプン、アルギン酸ナ
トリウム、アミノ酢酸、メチオニン、炭酸カルシウム等
を配剤した散剤、顆粒剤、糖衣錠、及びカプセル剤等と
することができる。
非経口の場合の投与量は、成人一日当り120〜200mgの範
囲で用いられ注射剤の場合、溶媒は単に注射用蒸留水ま
たは生理食塩液のみか、或いは解毒アミノ酢酸等のアミ
ノ酸等を添加してもよい。
囲で用いられ注射剤の場合、溶媒は単に注射用蒸留水ま
たは生理食塩液のみか、或いは解毒アミノ酢酸等のアミ
ノ酸等を添加してもよい。
なお、最近グリチルリチン製剤は慢性ウィルス肝炎の予
防、治療剤としても優れた効果をあげているが、その大
量投与によっても何等副作用がみられない（鈴木等：医
学のあゆみ,102p.526〜578,1977）。
防、治療剤としても優れた効果をあげているが、その大
量投与によっても何等副作用がみられない（鈴木等：医
学のあゆみ,102p.526〜578,1977）。
次に本願のエイズ・ウィルス増殖抑制剤について製剤例
を掲げる。
を掲げる。
［製剤例１］ 錠剤の製造 グリチルリチン 25mg バレイショデンプン 220mgステアリン酸マグネシウム 5mg 合 計 250mg 上記組成の混合物を常法により錠剤とする。
［製剤例２］ 糖衣錠の製造 グリチルリチン 25mg グリシン 25mg メチオニン 25mg 炭酸カルシウム、 適量 乳糖、 適量カルボキシメチルセルローズ 適量 合 計 300mg 上記組成の混合物を常法により糖衣錠とする。
［製剤例３］ 注射剤の製造 グリチルリチン200mgを生理食塩水液に溶解し、100mlと
する。
する。
［製剤例４］ 注射剤の製造 グリチルリチン200mg、グリシン2000mgシステイン100mg
を生理食塩水液に溶解し、100mlとする。
を生理食塩水液に溶解し、100mlとする。
以下にグリチルリチンのエイズ・ウィルス増殖抑制作用
についての実験例を掲げるが、これらの実験により甘草
有効成分であるグリチルリチンがエイズ・ウィルスHTLV
−III/LAVの増殖を強く抑制し、かつ感染細胞の変性抑
制効果のあることが明らかになった。しかし、従来のエ
イズ治療薬にみられるような逆転酵素阻害作用はみられ
なかった。グリチルリチンの場合には、ある特殊な作用
機序が参与しているためと考えられる。
についての実験例を掲げるが、これらの実験により甘草
有効成分であるグリチルリチンがエイズ・ウィルスHTLV
−III/LAVの増殖を強く抑制し、かつ感染細胞の変性抑
制効果のあることが明らかになった。しかし、従来のエ
イズ治療薬にみられるような逆転酵素阻害作用はみられ
なかった。グリチルリチンの場合には、ある特殊な作用
機序が参与しているためと考えられる。
また、従来はHTLV−III/LAVウィルスに関しては適当な
定量法がなかったが、最近HTLV−Ｉキャリアー細胞系に
属するMT−４細胞を用いてHTLV−III/LAVウィルスプラ
ーク形成定量法（Harada et al:Science,229,p.563〜56
6 1985）が確立されたのでそれに準拠して実験を行なっ
た。
定量法がなかったが、最近HTLV−Ｉキャリアー細胞系に
属するMT−４細胞を用いてHTLV−III/LAVウィルスプラ
ーク形成定量法（Harada et al:Science,229,p.563〜56
6 1985）が確立されたのでそれに準拠して実験を行なっ
た。
次いで感染細胞の変性抑制、及びその薬効のメカニズム
を検討すべく、逆転酵素活性の測定、ウィルス中和作用
等の諸実験も行なった。
を検討すべく、逆転酵素活性の測定、ウィルス中和作用
等の諸実験も行なった。
［実験例］ （材料） （１）細胞とウィルス 感染細胞はHTLV−Ｉ陽性細胞であるMT−４細胞を用い
た。ウィルスはMOLT−4/HTLV−III産生株より得たもの
を使用した。
た。ウィルスはMOLT−4/HTLV−III産生株より得たもの
を使用した。
（２）グリチルリチン水溶液の調整 ａ）純グリチルリチン（合資会社ミノファーゲン製薬本
舗製）2gを水90mlに撹拌しつつ懸濁させ、微温にてアン
モニア試薬、または水酸化ナトリウム試薬、または水酸
化カリウム試薬を少量添加して溶解し、pH6.5〜7.0とし
た後、室温にて水を加え100mlとする。
舗製）2gを水90mlに撹拌しつつ懸濁させ、微温にてアン
モニア試薬、または水酸化ナトリウム試薬、または水酸
化カリウム試薬を少量添加して溶解し、pH6.5〜7.0とし
た後、室温にて水を加え100mlとする。
ｂ）グリチルリチンアンモニウム塩の場合 グリチルリチンモノアンモニウム塩2.04gをとり水90ml
を加え微温にて溶解し、アンモニア試薬を加えpH6.5〜
7.0とし、室温にて水を加え100mlとする。
を加え微温にて溶解し、アンモニア試薬を加えpH6.5〜
7.0とし、室温にて水を加え100mlとする。
ｃ）グリチルリチンモノナトリウム塩の場合 グリチルリチンモノナトリウム塩2.05gをとり水90mlを
加え微温にて溶解し、水酸化ナトリウム試薬にてpH6.5
〜7.0とし、室温にて水を加え100mlとする。
加え微温にて溶解し、水酸化ナトリウム試薬にてpH6.5
〜7.0とし、室温にて水を加え100mlとする。
ｄ）グリチルリチンモノカリウム塩の場合 グリチルリチンモノカリウム塩2.09gをとり水酸化カリ
ウム試薬にて上記と同様に調整する。
ウム試薬にて上記と同様に調整する。
上記の調整法によって２％グリチルリチン水溶液（1ml
中にグリチルリチン20mg含有）が得られる。使用時に0.
01Mのリン酸緩衝液にて必要な濃度に希釈し、pH7.2に調
整する。
中にグリチルリチン20mg含有）が得られる。使用時に0.
01Mのリン酸緩衝液にて必要な濃度に希釈し、pH7.2に調
整する。
［実験法］ （１）Plaque reduction法 （HTLV−III/LAVのプラーク形成抑制実験） MT−４細胞150×104個/mlをPolylysine（シグマ社製）
を用い、35×10mmのシャレーに付着させ、２回培養液で
洗い、100PFU/100μのHTLV−III/LAVを100μ加え、
４℃で１時間培養する。その後種々の濃度のグリチルリ
チン水溶液を加え、抗生物質、10％胎児ウシ血清及び0.
6アガロースを含むRPMI1640を1ml添加し37℃、５％CO2
で３日間培養する。その後neutral redを含む上記培養
地を1ml加え、さらに３日間培養して、出現したプラー
ク数を数えた。結果を第１図に示す。グリチルリチンに
は明らかにウィルス増殖抑制の効果が見られる。即ち、
グリチルリチンは0.5〜1mgの用量にて完全に増殖を抑制
した。その50％抑制濃度は平均0.125mg/mlであった。こ
のID50の値0.125mg/mlはヒト胚の線維芽細胞の水痘ヘル
ペスウィルスの0.58mg/ml、或いは単純ヘルペスウィル
スの0.60mg/mlに比較して低い値であった。
を用い、35×10mmのシャレーに付着させ、２回培養液で
洗い、100PFU/100μのHTLV−III/LAVを100μ加え、
４℃で１時間培養する。その後種々の濃度のグリチルリ
チン水溶液を加え、抗生物質、10％胎児ウシ血清及び0.
6アガロースを含むRPMI1640を1ml添加し37℃、５％CO2
で３日間培養する。その後neutral redを含む上記培養
地を1ml加え、さらに３日間培養して、出現したプラー
ク数を数えた。結果を第１図に示す。グリチルリチンに
は明らかにウィルス増殖抑制の効果が見られる。即ち、
グリチルリチンは0.5〜1mgの用量にて完全に増殖を抑制
した。その50％抑制濃度は平均0.125mg/mlであった。こ
のID50の値0.125mg/mlはヒト胚の線維芽細胞の水痘ヘル
ペスウィルスの0.58mg/ml、或いは単純ヘルペスウィル
スの0.60mg/mlに比較して低い値であった。
（２）感染細胞の変性抑制法 （HTLV−IIIのMT−４細胞に対する変性抑制効果の実
験） ３×104個のMT−４細胞に６×102PFUのHTLV−IIIを感染
させ、種々の濃度のグリチルリチン水溶液を加え、３日
間抗生物質、10％胎児ウシ血清を含むRPMI1640培養液で
培養し、その後トリパンブルー排除法で生細胞数を計測
した。対照として非感染細胞にも同様の実験を行なっ
た。
験） ３×104個のMT−４細胞に６×102PFUのHTLV−IIIを感染
させ、種々の濃度のグリチルリチン水溶液を加え、３日
間抗生物質、10％胎児ウシ血清を含むRPMI1640培養液で
培養し、その後トリパンブルー排除法で生細胞数を計測
した。対照として非感染細胞にも同様の実験を行なっ
た。
本実験はアガロースなしの培養条件で、グリチルリチン
のMT−４細胞に対してのHTLV−IIIの感染細胞変性の抑
制効果についてのものであるが、その結果を第２図に示
す。
のMT−４細胞に対してのHTLV−IIIの感染細胞変性の抑
制効果についてのものであるが、その結果を第２図に示
す。
トリパンブルー排除法により３日間の培養においてグリ
チルリチン0.25,0.5,1mg/mlの用量で抑制がみられた。
一方、非感染MT−４細胞に対するグリチルリチンの細胞
変性効果は、そのID50が2mg/mlであったが、この濃度に
おいては細胞の死滅がみられなかった。
チルリチン0.25,0.5,1mg/mlの用量で抑制がみられた。
一方、非感染MT−４細胞に対するグリチルリチンの細胞
変性効果は、そのID50が2mg/mlであったが、この濃度に
おいては細胞の死滅がみられなかった。
（３）ウィルス抗原の検出 感染細胞に抗HTLV−III抗体陽性血清を使用した間接螢
光抗体法を行なった。グリチルリチン0.5〜1mg/mlでHTL
V−III抗原陽性細胞の出現を２％以下に抑制したが、こ
れより低い濃度では次第に陽性細胞の割合が増加した。
光抗体法を行なった。グリチルリチン0.5〜1mg/mlでHTL
V−III抗原陽性細胞の出現を２％以下に抑制したが、こ
れより低い濃度では次第に陽性細胞の割合が増加した。
（４）逆転写酵素活性の測定 超遠心にてウィルスを濃縮し、種々の濃度のグリチルリ
チン水溶液を加え、酵素活性を測定した（Harada et a
l;−Virology 146,p.272〜281 1985による）。グリチル
リチンはHTLV−IIIの逆転写酵素活性を抑制しなかっ
た。
チン水溶液を加え、酵素活性を測定した（Harada et a
l;−Virology 146,p.272〜281 1985による）。グリチル
リチンはHTLV−IIIの逆転写酵素活性を抑制しなかっ
た。
（５）ウィルス中和作用の検討 ウィルスと種々の濃度のグリチルリチン水溶液を混合
し、37℃で１時間インキュベートした後、これを200,40
0倍に希釈しMT−４細胞に接種しウィルス力価の変化を
みた。グリチルリチンはHTLV−IIIに対して2mg/mlの濃
度でも中和作用はみられなかった。
し、37℃で１時間インキュベートした後、これを200,40
0倍に希釈しMT−４細胞に接種しウィルス力価の変化を
みた。グリチルリチンはHTLV−IIIに対して2mg/mlの濃
度でも中和作用はみられなかった。
（グリチルリチンの急性毒性試験） グリチルリチンについてのLD50は以下の通りであり低毒
性である。
性である。
（１）経口投与 ３ g/kg＜ （ラット） （２）皮下注射５％水溶液 1873.3mg/kg （マウス） （３）静脈注射２％水溶液 682.5mg/kg （マウス） （４）腹腔注射0.2％水溶液 225〜244ml/kg （マウス）
第１図は、グリチルリチンについてのHTLV−III/LAVの
プラーク形成抑制実験の結果を示す図、第２図は、その
HTLV−IIIのMT−４細胞に対する変性抑制効果の実験の
結果を示す図である。
プラーク形成抑制実験の結果を示す図、第２図は、その
HTLV−IIIのMT−４細胞に対する変性抑制効果の実験の
結果を示す図である。
Claims (1)
- 【請求項１】 で示されるグリチルリチン、及びその製剤上許容される
塩を有効成分として含有するエイズ・ウィルス増殖抑制
剤。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61174724A JPH0761946B2 (ja) | 1986-07-26 | 1986-07-26 | エイズ・ウイルス増殖抑制剤 |
| EP87401589A EP0255420B1 (en) | 1986-07-26 | 1987-07-07 | Antiviral agent for inhibiting growth of virus of acquired immune deficiency syndrome (aids) |
| DE8787401589T DE3767069D1 (de) | 1986-07-26 | 1987-07-07 | Antivirales mittel zur hemmung des wachstums vom aids-syndrom-virus. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61174724A JPH0761946B2 (ja) | 1986-07-26 | 1986-07-26 | エイズ・ウイルス増殖抑制剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6333332A JPS6333332A (ja) | 1988-02-13 |
| JPH0761946B2 true JPH0761946B2 (ja) | 1995-07-05 |
Family
ID=15983544
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61174724A Expired - Fee Related JPH0761946B2 (ja) | 1986-07-26 | 1986-07-26 | エイズ・ウイルス増殖抑制剤 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0255420B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0761946B2 (ja) |
| DE (1) | DE3767069D1 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4891221A (en) * | 1988-11-23 | 1990-01-02 | Edward Shanborm | Whole blood antiviral process and composition |
| EP0687465A1 (de) * | 1994-05-16 | 1995-12-20 | Uwe Dipl.-Dok. Albrecht | Verwendung von Glycyrrhizinsäure und ihrer Metabolite (Glycyrrhetinsäure) als Wirkstoff zur Herstellung eines Arzneimittels zur Therapie von viralen und allergischen Erkrankungen des Menschen |
| JP4781624B2 (ja) * | 2002-10-29 | 2011-09-28 | 株式会社ミノファーゲン製薬 | Ｒａｎｔｅｓ誘導剤 |
| JP4601936B2 (ja) | 2002-10-29 | 2010-12-22 | 株式会社ミノファーゲン製薬 | Ｍｃｐ−１産生抑制のための薬学的組成物 |
| CN101773509A (zh) * | 2003-08-12 | 2010-07-14 | 日本脏器制药株式会社 | 高浓度甘草甜素制剂 |
| US20110009352A1 (en) * | 2009-07-09 | 2011-01-13 | Minophagen Pharmaceutical Co., Ltd. | Restorative agent for antibacterial peptide production ability |
-
1986
- 1986-07-26 JP JP61174724A patent/JPH0761946B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1987
- 1987-07-07 DE DE8787401589T patent/DE3767069D1/de not_active Expired - Fee Related
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