JPH07504685A - アゲレノプシス・アペルタ由来のカルシウムチャンネル阻害ポリペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 アゲレノブシス・アベルタ由来のカルシウムチャンネル阻害ポリペプチド発明の 背景 本発明は、クモ（アゲレノブシス・アベルタ：Ａｇｅｌｅｎｏｐｓｉｓ　ａｐｅ 　ｒ　ｔ　ａ）毒中に見出されたポリペプチド並びにこのポリペプチドと実質的 に同じアミノ酸配列及び実質的に同じ活性を有するポリペプチドに関する。この ポリペプチド及び薬剤学的に許容されるその塩は、無を椎動物及びを椎動物をは じめとするさまざまな生物の神経及び筋肉の細胞をはじめとする細胞内のカルシ ウムチャンネルを阻害する。本発明は、生物それ自体の細胞、例えば、神経及び 筋肉系の細胞内のカルシウムチャンネルを阻害すること、並びにカルシウムチャ ンネルが媒介する哺乳動物の疾病及び症状の治療することに、前記ポリペプチド 及びその塩を使用することにも関する。更に、本発明は、前記ポリペプチド及び その塩を含む組成物に関する。

カルシウムアンタゴニストである化合物は、さまざまな実用性を有する。カルシ ウムアンタゴニストは、アンギナ、高血圧症、心筋症、上室性不整脈、食道弛緩 不能症、早産、及びレイノー病も含め、このような症状の治療において臨床上の 適用を見いだすことができる。Ｗ、Ｇ、Ｎａｙｌｅｒ、Ｃａｌｃｉｕｍ　Ａｎｔ ａ　ｏｎｉｓｔｓ　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｈａｒｃｏｕｒｔ　Ｂｒａ ｃｅ　Ｊｏｖａｎｏｖｉｃｈ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、ＮＹ 　１９８８を参照されたい。この文献の教示は、参考として本明細書に含まれる 。更に、前記の化合物は、神経及び筋肉細胞のような細胞の生理学の研究に有用 である。

アゲレノブシス・アベルタから単離された他のポリペプチドは、米国特許第５゜ １２２．５９６号明細書に開示されている。

発明の概要 本発明は、クモ（アゲレノブシス・アペルタ）の毒中に見出されたポリペプチド に関する。本発明のポリペプチド及びそれが存在する本発明による分画を以下に 示す。

アゲレノプシスのペプチドＪ２は、配列番号１で示される次のアミノ酸配列を有 する。

Ｈ２Ｎ−Ｇ　Ｉ　ｕ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｃｙ　ｓ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｇ　］　ｙ−Ａ　Ｉ 　ａ−Ｔ　ｙ　ｒ−Ｌ　ｙ　ｓ−３ｅ　ｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｖａ　Ｉ −Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｈｉ　ｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａ　ｒ　ｇ−Ｃｙ　５ −Ａｒ　ｇ−Ｃｙ　５−Ａｓ　ｎ−１１ｅ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｍｅ　ｔ−Ａｓ　ｐ− Ａｓ　ｎ−Ｃｙｓ−ＶａＩ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ −Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌ　ｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｌｅ ｕ−Ｌｙｓ−Ｐｒ。

本発明のポリペプチドは、細胞内のカルシウムチャンネルを阻害する。従って、 このポリペプチドは、細胞それ自体の内のカルシウムチャンネルを阻害するのに 有用である。また、このポリペプチドは、有害な無を椎動物の抑制並びに細胞内 のカルシウムチャンネルの機能によって媒介される哺乳動物の疾病及び症状の治 療にも有用である。

また、前記のポリペプチドと実質的に同じアミノ酸配列及び実質的に同じカルシ ウムチャンネル阻害活性を有するポリペプチドも、本発明の範囲内である。

本発明は、前記ポリペプチドを含む医薬組成物及び前記ポリペプチドを投与する 方法にも関する。

発明の詳細な説明 クモ（アゲレノプシス・アペルタ）から当業者に周知の標準的方法に従って、電 気的刺激による乳化工程を経て、毒が得られる。使用する方法は、腹部反舞物又 は血リンパによる全毒の汚染から守るものであることが好ましい。このような方 法は、当業者に周知である。このようにして得られた全毒は、以下に述べる精製 に用いるまで、約−７８℃で冷凍状態で保存する。全毒からの成分の精製は、さ まざまな調製又は部分調製されたカラム、例えば、Ｃ−４及びＣ−１８のｖｙｄ ａｃ　（登録商標）カラム（Ｒａｉｎｉｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｃｏ、Ｉｎ ｃ、、Ｍａｃｋ　Ｒｏａｄ、Ｗｏｂｕｒｎ、Ｍａｓｓａｃｈ、ｕｓｅｔｔｓ　０ １８０１）を用いた逆相高性能液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）により達成さ れる。ピークの検出は、２２０〜２３０ｎｍで単色光的に（ｍｏｎｏｃｈｒｏｍ ａｔｉｃａｌｌｙ）行なう。更に、分画の分析は、例えば、Ｗａｔｅｒｓ　９９ ０ダイオードアレイ検出器（Ｍｉ　Ｉ　Ｉ　１ｐｏｒｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔ　ｉ ｏｎ、Ｗａｔｅｒｓ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、３４ 　Ｍａｐｌｅ　５ｔｒｅｅｔ、ＭｉｌｆｏｒｄｌＭａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ　 ０１７５７）て収集したポリクロームＵＶデータにより達成することができる。

カラム分画は、公知の方法、例えば、ｌ５ＣＯ／”ＦＯＸＹ”フラクションコレ クタ及びｌ５ＣＯ２１５９ピーク検出器（ＩＳＣｏ、４７００　５ｕｐｅｒｉｏ ｒ、Ｌｉｎｃｏｌｎ、Ｎｅｂｒａｓｋａ　６８５０４）を使用する方法により集 める。分画は、適当な大きさの容器、例えば、滅菌したポリエチレン実験容器に 集める。その後、分画の濃縮は、溶出液からの凍結乾燥と、これに続く水からの 凍結乾燥により達成される。得られた成分分画の純度は、その後、分画の最終精 製に用いたシステムよりも、よりイソクラティクな（ｉ　ｓｏｃ　ｒａ　ｔ　ｉ 　ｃ）濃度勾配システムを利用する分析用カラムを用いたクロマトグラフィ分析 により測定することができる。

本発明のポリペプチドは、公知の方法に従って配列を決定することができる。

−次構造を決定するための一般的方針は、例えば、次の工程を含む。１）酵素作 用に対する基質の感受性を高めるための、ジスルフィド結合のシスティン残基の 還元及びＳ−ピリジル化。２）１又は多段階の酵素消化によるペプチドの制御下 切断。３）逆相高性能液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）によるペプチド断片の 単離及び精製。４）Ｎ末端の配列決定及びイオン−スプレー質量分析法によるペ プチド断片の特性決定。

研究対象であるポリペプチドのシスティン残基のＳ−ピリジルエチル化は、例え ば、溶液中で達成することができ、続けてポリペプチドのアミノ酸配列決定が可 能である。このようなＳ−ピリジルエチル化の工程の１つは、以下の記載のよう にして達成することができる。

ポリペプチド約１〜１０μｇを、４ｍＭ−ＥＤＴＡを含むＩＭトリスＨＣＩ（ｐ Ｈ８，５）１部と８ＭグアニジンＨＣＩ　３部とを混合して調製した緩衝液５０ μｍ以下に溶解又は希釈する。１０％２−メルカプトエタノール水溶液２５μｍ を加え、混合液をアルゴン下、暗所にて室温で２時間保温する。保温後、４−ビ ニルピリジン（アルゴン下、−２０’Ｃで保管した新品の試薬）２μｌを加え、 この混合液をアルゴン下、暗所にて室温で更に２時間保温する。その後、この混 合液を、好ましくは短い逆相カラムを用いるクロマトグラフィにより、脱塩する 。

回収したアルキル化ポリペプチドについて、その後、公知の方法に従って配列決 定を行なう。

アゲレノブシス・アペルタ由来の毒の画分Ｊ２に存在するペプチドに関する本明 細書の上記の開示により、全毒がら単離／精製工程を経る方法とは別の方法によ り前記ペプチドを得ることが今や可能である。本発明のポリペプチドは、前記ポ リペプチド又はその一部分をコードする配列のクローニングにより、組換えＤＮ Ａ技術を用いて生成することができる。例えば、前記ポリペプチドについて今や 判明したアミノ酸配列の情報を利用するハイブリダイゼーションプローブを、当 業者に周知の方法に従って、用いて、ポリペプチド全長をコードする配列をクロ ーニングすることができる。組換えＤＮＡ技術とイン・ビトロのタンパク質合成 法とを組合せて用いても、本発明のポリペプチドを生成することができる。この ようなイン・ビトロのタンパク質合成法には、限定するものではないが、当業者 に周知の標準メリフィールド化学又はその他の固相化学を利用したＡＢＩ　４３ ０Ａ固相ペプチド合成機（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ、。

８５０　ＬｉｎｃｏＩｎ　Ｃｅｎｔｅｒ　Ｄｒｉｖｅ、Ｆｏｓｔｅｒ　Ｃ１ｔｙ 。

Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ　９４４０４）の使用が包含される。

前記ポリペプチドの機能に影響を与えないが、又は実質的に影響を与えないで、 前記ポリペプチドに、ある程度のアミノ酸置換を行なうことができることは、当 業界において周知である。実施可能な正確な置換は、ポリペプチドによって異な る。許容される置換は、当業者に周知の操作に従って決定される。従って、実質 的に同じアミノ酸配列及び実質的に同じカルシウムチャンネル阻害活性を有する 全てのポリペプチドが、本発明の範囲内に包含される。

本発明のポリペプチドは、さまざまな細胞、例えば、無を椎動物及びを椎動物の 神経及び筋肉系の細胞に存在するカルシウムチャンネルを阻害する。

カルシウムチャンネルを阻害する本発明のポリペプチドの能力は、以下の操作に よって示される。小脳の顆粒細胞を、生後８日目のラットの小脳から調製する（ Ｗｉｌｋｉｎら、呈ｒａｉｎ　Ｒｅｓ　１１５，１８１−１９９．１９７６）。

正方形状（ｌ　ｃｍ２）のアキュラ（Ａｃｌａｒ：Ｐｒｏｐｌａｓｔｉｃｓ　Ｉ ｎｃ、、５０３３　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ａｖｅ、、Ｗａｌｌ、ＮＪ　０７７ １９）をポリーＬ−リジンでコートし、イーグル基本培地１ｍｌを含む１２穴プ レートに設置する。細胞をばらばらにし、６．２５Ｘ１０’個の細胞を含むアリ コートを、正方形状のアキュラを含むそれぞれの穴に加える。この後、２４時間 後にシトシン−β−Ｄ−アラビノフラノシド（最終濃度１０μＭ）を加える。こ の細胞舎、６日間、７日間及び８日間の培養後のｆｕｒａ２分析のために用いる 。

（正方形状のアキュラに接着した）細胞を、２μＭ−ｆ　ｕ　ｒ　ａ　２／ＡＭ 　（Ｍｏ　１ｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｂｅｓ　Ｉｎｃ、、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ９７ ４０２）を含有するＨＥＰＥＳ緩衝液（０，０１％ウシ血清アルブミン及び０． ０１％デキストロース含有；ｐＨ７，４；マグネシウム不合）１ｍｌを含む１２ 穴プレートに移す。細胞を３７℃で４０分間保温し、ｆ　ｕ　ｒ　ａ　２／ＡＭ を含有する緩衝液を除去し、ｆ　ｕ　ｒ　ａ　２／ＡＭを含有しない同じ緩衝液 １ｍｌで置換する。石英キュベツトに、予め温めておいた（３７℃）緩衝液２． ０ｍｌを加える。アキニラ上の細胞をキュベツトに移し、マグネチックスターラ を備えた温度自動調節（３７℃）のホルダーにキュベツトを挿入し、蛍光分光光 度計（ＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｇｒｏｕｐ、ペンシルベニ ア大学）により蛍光を測定する。蛍光シグナルが安定化するまで放置する（約２ 分間）。その後、適当な濃度でリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７，４）に 溶解した研究対象化合物の貯蔵溶液５〜２０μｌをキュベツトに加える。蛍光シ グナルの検量線作成及びｆｕｒａ２／ＡＭ漏れの補正は、各テストの完了時にＮ ｅｍｅ　ｔｈらの常法［上。

旦ｉｏ　１．Ｃｈｅｍ、　２６２．５１８８　（１９８７）］を用いて行なう。

最大蛍光値（Ｆｍａｘ）は、イオノマイシン（３５μＭ）の添加により測定し、 最小蛍光値（Ｆｍｉｎ）は、これに続いて、ＥＧＴＡ　（１２ｍＭ）を添加して カルシウムをキレートすることにより測定する。前述の操作を用いると、研究対 象のポリペプチドの添加による蛍光の減少によって、研究対象のポリペプチドに よるカルシウムチャンネルの阻害が起こっていることが示される。本発明のポリ ペプチドは、このアッセイを用いたカルシウムチャンネルに関し、２００ｎｍ未 溝の低いＩＣ３゜値を示す。比較用としての２種の公知の市販のカルシウムチャ ンネルアンタゴニストであるニフェジピン（Ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ）及びベラパ ミル（ｖｅｒａｐａｍｉ　ｌ）は、それぞれ、３３ｎｍ及び４８００ｎｍのＩＣ ６゜値をもつ。

本発明のポリペプチドは、細胞自体の内のカルシウムチャンネル阻害剤として有 用である。従って、これらのポリペプチドは、有害な無を椎動物の抑制、並びに 哺乳動物の細胞内のカルシウムチャンネルの機能によって媒介される疾病及び症 状、例えば、アンギナ、高血圧症、心筋症、上室性不整脈、食道弛緩不能症、早 産、及びレイノー病の治療にも有用である。更には、これらのポリペプチドは、 限定するものではないが、神経系及び筋肉系の細胞をはじめとする細胞の生理学 の研究に有用である。

また、本発明のポリペプチドの薬剤学的に許容される塩も、本発明の範囲内であ る。これらの塩は、当業者に周知の方法により形成される。例えば、ポリペプチ ドの塩基性塩は、常法に従って調製することができる。

本発明のポリペプチドを哺乳動物に投与しようとする場合、標準的な薬剤学的方 法に従って、単独で、又は医薬組成物中の薬剤学的に許容される担体若しくは希 釈剤と組合せて投与することができる。前記のポリペプチドは、経口的に又は非 経口的に投与することができるが、非経口的経路による投与がポリペプチドにと って好ましい。非経口的投与には、静脈、筋肉内、腹腔内、皮下及び局所投与が 包含される。

本発明のポリペプチドの経口使用のために、化合物を、例えば、錠剤若しくはカ プセル形状で、又は水性の溶液若しくは懸濁液として、投与することができる。

経口使用のための錠剤の場合、一般的に用いられる担体には、ラクトース及びコ ーンスターチが含まれ、滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムを一般的に加 える。カプセル形状での経し］投与用として、有効な希釈剤は、ラクトース及び 乾燥コーンスターチである。経口使用のために水性懸濁液が必要とされる場合は 、活性成分と乳化剤及び懸濁剤とを組合せる。所望により、成る種の甘味剤及び ／又は香料を加えることができる。

筋肉内、腹腔内、皮下及び静脈使用のためには、通常、活性成分の滅菌溶液を調 製し、溶液のｐＨを適正に調整及び緩衝することが好ましい。静脈使用のために は、溶液の全濃度を制御して、調製試料を等張にするのが好ましい。

本発明のポリペプチド又はその塩をヒト対象に用いる場合には、−日の投与量は 、処方する医者によって一般的に決定される。更に、投与量は、個々の患者の年 令、体重及び応答、更には患者の症状の重篤性及び投与される個々の化合物の効 力に従って変化する。

本発明のポリペプチド又はその塩を有害な無を椎動物の抑制に用いる場合には、 前記のポリペプチドを、前記の無を椎動物に直接投与するか、又は前記の無を椎 動物の環境に与える。例えば、本発明の化合物を、前記の無を椎動物の上に、溶 液としてスプレーすることができる。前記の無を椎動物の抑制に必要な化合物の 量は、無を椎動物及び環境の条件に従って変化し、化合物を適用する人によって 決定される。

本発明のポリペプチド又はその塩を細胞の生理学的研究に用いる場合には、前記 ポリペプチドを、当業者に周知の方法に従って細胞に投与する。例えば、前記ポ リペプチドを、適当な生理学的緩衝液中の細胞に投与することができる。このよ うな研究に用いる本発明のポリペプチドの適当な濃度は、２００μＭである。

しかしながら、このような研究での前記ポリペプチドの濃度は、２００μＭより 大きいか、又はかなり少なくてもよい。投与されるポリペプチドの量は、周知の 方法に従って当業者によって決定される。

大施医上 Ａ、粗製のアゲレノプシス・アペルタ毒（約４０μｌ）を、逆相ＨＰＬＣカラム （ＶＹＤＡＣ（登録商標）　Ｃ−１８，３００人、２２ｘ２５０ｍｍ）に注入し た。このカラムを二相直線勾配プログラム、すなわち、９５％Ａ及び５％Ｂから 、３０分間かけて８０９６Ａ及び２０％Ｂにし、続いて２５分間かけて３０％Ａ 及び７０９６Ｂにするプログラム（Ａ＝０．１９６）−リフルオロ酢酸及びＢ＝ ニアセトニトリルを用いて操作し、２２０ｎｍで検出し、流速は１５ｍ１／分で あった。

所望の分画を、３８．３分から３８７分まで集めた。個々の実験からのプール様 分画を、凍結乾燥により濃縮した。

Ｂ　粗製前１００μｍから得た、上記の工程Ａの分画操作由来の材料を、逆相Ｈ ＰＬＣカラム（ｖＹＤＡＣ（登録商標）　Ｃ−１８，３００人、２２ｘ２５０ｍ ｍ）に注入した。このカラムを直線勾配プログラム、すなわち、７７％Ａ及び２ ３９６Ｂから、２５分間かけて７０％Ａ及び３０％Ｂにするプログラム（Ａ＝０ ゜１９６トリフルオロ酢酸及びＢ＝ニアセトニトリルを用いて操作し、２２０ｎ ｍで検出し、流速は１２ｍ１／分であった。所望の分画を、１７．３分から１７ ．７分まで集めた。個々の実験からのプール様分画を、凍結乾燥により濃縮した 。

ペプチドＪ２の構造を、以下の方法により決定し、そして確認した。ＰＴＣアミ ノ酸分析は、ウォーターズ・ピコ−タグ・システムを使用して、１〜１０ナノモ ルに関して、３回実施した。Ｎ末端の配列決定は、天然型及び還元／ピリジルエ チル化ペプチドの両方を用いて、パルス−液体シークエンサ（ＡＢＩ）により実 施した。ポリペプチドの一次構造は、自動化パルス−液体シークエンサ（Ａｐｐ ｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ｍｏｄｅｌ　４７３Ａ）の使用により得た。

質量分光分析のデータは、フライト質量スペクトルメータのＢＩＯ−１ＯＮプラ ズマ放出時間から得た。

Ｎ末端の配列決定に適するペプチドＪ２のピリジルエチル化誘導体を、以下の方 法で調製した。ペプチドＪ２（５０ｍｇ）を、緩衝液（１：３比率の１Ｍトリス 、ｐＨ８，４，４μＭ−ＥＤＴＡ−二塩基性及び８Ｍグアニジン塩酸）１０μＩ に溶解し、緩衝液中の０．４５４Ｍ（１０％ｖ／ｖ）２−メルカプトエタノール 溶液２μｍで処理し、暗所で３時間室温で保持した。反応混合物を、その後、緩 衝液中の０．４５６Ｍ４−ビニルピリジン溶液２μｍで処理し、暗所で１８時間 室温で保持した。反応混合物を、水９０μＩ及びアセトニトリル４０μｍで希釈 し、ＨＰＬＣカラム（ベーカ−ＷＰＣ−１８，４，６ｘ２５０ｍｍ）に注入した 。このカラムを二相直線勾配プログラム、すなわち、５分間の８０％Ａ及び２０ ９６Ｂの後、３０分間かけて８０から５０９６Ａ及び２９から５０％Ｂにするプ ログラム（Ａ＝０．１％トリフルオロ酢酸及びＢ；アセトニトリル）を用いて操 作し、２２０ｎｍで検出し、流速は１．０ｍｌ／分であった。所望の分画を、２ ０゜８分から２１．３分まで集め、凍結乾燥により濃縮した。

−緒に得られたデータから、以下に示すように、ペプチドＪ２の構造が確認さ特 表千７−５０４６８５　（４） れる。

配列番号１．残基数４８．システィン数１０．ジスルフィド結合数５゜理論質量 ＝５４７４．４゜ 測定質量＝５４７４゜ 推定ｐ■＝７．９８゜ 配列表 （１）一般情報 （ｉ）出願人： （Ａ）名称：ファイザー・インク （Ｂ）通り：２３５　イースト　４２番街（Ｅ）国：米国 （Ｆ）郵便番号（ＺＩＰ）：１００１７（Ｇ）電話：　（２０３）４４１−４９ ０５（Ｈ）ファクシミリ：　（２０３）４４１−５２２１（Ａ）名称：エヌビー エス・ファーマシューテイカルズ、インク（Ｂ）通り：４２０　シベタ・ウェイ （Ｃ）市：ソルトレークシティ （Ｄ）州：ユタ （Ｅ）国二米国 （Ｆ）郵便番号（ＺＩＰ）：８４１０８（Ｇ）を話：　（８０１）５８３−４９ ３９（Ｈ）ファクシミリ：　（８０１）５８３−４９６１（１１、発明の名称： アゲレノプシス・アペルタ由来のカルシウムチャンネル阻害ポリペプチド （ｉｉｉ）配列の数：１ （ｉｖ）コンピュータ読込可能な形式：（Ａ）媒体の種類：フロノビ−ディスク （Ｂ）コンピュータ：ＩＢＭＰＣ互換機（Ｃ）オペレーティングシステム：　Ｐ Ｃ−ＤＯ５／ＭＳ−ＤＯ５（Ｄ）ソフトウェア：パテントイン・リリース＃１． 　Ｏ、バージョン１１．２５（ＥＰＯ） （■ｌ）先の出願データ （Ａ）出願番号：ＵＳ　０７／９１９５３８（Ｂ）出願日：１９９２年７月２７ 日 （２）配列番号１の情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ：４８アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）分子の型：タンパク質 （ｖｉ）起源： （Ａ）生物名：アゲレノプシス・アベルタ（Ｂ）組織の種類：毒 （ｘｉ）配列：配列番号：Ｉ Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　ＳｅｒＣ ｙｓ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ｈｉｓ　Ａｓｐｌｏ 　１５ Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｃｙｓ　Ａｓｎ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　ＭｅｔＡ ｓｐ　Ａｓｎ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　ＴｙｒＣｙ ｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　ＡｒｇＬｅｕ 　Ｌｙｓ　Ｐｒ。

国際肩審報牛 国際調査報告 フロントページの続き （７２）発明者　ケリー、マリ−イー。

アメリカ合衆国コネチカット州０６３４０グロトン市、プラント・ストリート４ ０ （７２）発明者　サッコマノ、ニコラス　ニー。

アメリカ合衆国コネチカット州０６３３９レッドヤード市、プラント・ミル・ド ライブ４（７２）発明者　ヴオルクマン、ロバート　ニー。

アメリカ合衆国コネチカット州０６３５５ミスティック市、ドッグウィツト・レ ーン１３５

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. １．配列番号１のアミノ酸配列を含む実質的に純粋なポリペプチド、このポリペ プチドと実質的に同じアミノ酸配列及び実質的に同じカルシウムチャンネル阻害 活性を有するポリペプチド、又は薬剤学的に許容されるそれらの塩。
2. ２．配列番号１のアミノ酸配列を有する請求項１に記載の実質的に純粋なポリペ プチド、又は薬剤学的に許容されるそれらの塩。
3. ３．カルシウムチャンネルを阻害する量の請求項１に記載のポリペプチドを細胞 に投与することを含む前記細胞内のカルシウムチャンネルを阻害する方法。
4. ４．前記細胞が哺乳動物の神経系の中にある請求項３に記載の方法。