JPH07503702A

JPH07503702A - 腫瘍のイメージングおよび治療のための新規な試薬

Info

Publication number: JPH07503702A
Application number: JP5503431A
Authority: JP
Inventors: スタットル，アラン　ウィリアム　ジョン
Original assignee: アンティソマ　リサーチ　リミテッド
Priority date: 1991-08-06
Filing date: 1992-08-06
Publication date: 1995-04-20
Also published as: EP0527056B1; ATE143813T1; EP0527056A1; GB9116925D0; GR3022264T3; DE69214383D1; US5628979A; WO1993002708A1; ES2096040T3; DK0527056T3; DE69214383T2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】腫瘍のイメージングおよび治療のための新規な試薬〔発明の分野Ｊ本発明は、生体での腫瘍のイメージング（画像形成ンおよび治療に関し、より特にそのために使用する新規な薬剤、この薬剤を含む診断および治療用組成物、およびこの薬剤を利用する腫瘍のイメージングおよび治療法に間する。

［背景の情報と従来の技術Ｊがんの診断および治療を改善するために、造影剤、例えば放射性同位体および抗腫瘍性モノクローナル抗体（Ｍａｂ）を用いる生体での腫瘍の治療を目標にして多くの試みがなされてきた（国際知的所有権機関（ＷＯ）第８９１０９１９７号および第９０１０９１９７号明細書参照）、平均したＭａｂの大きさのために、拡散速度、例えば腫瘍部位への、放射性同位体のそれは非常に低く、細胞毒性薬剤および抗腫瘍性抗体から形成される抱合体にも同じことが当てはまる。

従って、Ｍａｂを用いる腫瘍のイメージングおよび治療は、本来、往々にして数時間を要する遅い方法であるが、理想的には、特に腫瘍のイメージングおよび診断の場合、数時間よりはむしろ数分で完了する方法が好ましい。

Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１４５．　（１）　５９−６７（１９９０）に、シミズ（Ｓｈｉｍｉｚｕ）らは、ヒトの静止Ｔ−リンパ球で表せる、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）、フィブロネクチン蛋白（ＦＮ）およびラミニン（ＬＮ）と、ＶＬＡインテグリン：　（フィブロネクチンの場合）ＶＬＡ−４とＶＬＡ−５またはくラミニンの場合）ＶＬＡ−６との相互作用によって、静止ＣＤ４Ｕ’　Ｔ細胞の増殖作用の共刺激について報告し、就中、１２−アミノ酸ペプチド：Ｌ）ＩＧＰｇＩＬＤＶＰＳ丁（ｌ　ｅｕ−ｈ　ｉ　５−ｇｌｙ−ｐｒｏ−ｇ　ｌ　ｕ−ｉ　ｌｅ−１ｅｕ−ａｓ　ｐ−ｖａ　１−ｐｒｏ−ｓｅｒ−Ｌｈｒ）が、有効なＴ−細胞癒着阻害剤および０ＫＴ３／ＦＮＴ−細胞増殖の有効な阻止剤であることを示したが、Ｔ−Ｍｌｌｌｉｉの認識および活性化における細胞癒着分子（ＣＡＭ）の役割についての単なる研究の範囲を越えていない、かくして、シミズらは、彼らの研究かも得た実際に役に立つ結果または工業的な利用法を示唆していない。

Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｔ、　２６６、　（６）　３５７９−３５８５（１９９１）に、モールド（Ｍｏｕｌｄ）らは、黒色腫細胞癒着において重要な役割を演じることが信じられているフィブロネクチンのＩ　Ｉ　ＩＣ３部位における、インテグリンへテロダイマーα４β沈、Ｃ３ＩおよびＣ３５部位との相互作用の阻害に関する研究を報告し、トリペプチド：Ｘ−ａｓｐ−Ｙ（式中、Ｘはグリシン、ロイシンまたはグルタミン酸、Ｙはセリンまたはバリンである。）は、インテグリンα、β、のためのフィブロネクチンのｃｓ１部位部位置小認識配列であることを示した。就中、これらの研究には、合成Ｃ３１およびＫＫＴ−Ｃ３ｌ− ＶＱＫ、すなわち：９旦上Ｄ　Ｅ　Ｌ　Ｐ　Ｑ　Ｌ　Ｖ　Ｔ　Ｌ　Ｐ　ＩＩ　Ｐ　Ｎ　Ｌ　ＨＧ　Ｐａｓｐ −ｇ　Ｉ　ｕ−１ｅｕ−ｐｒｏ−ｇ　ｌｎ−１ｅｕ−ｖａｌ　−ｔｈｒ−１ｅｕ −ｐｒｏ−ｔ＋　ｉｓ　−ｐｒｏ−ａｓｎ−１ｅｕ−■@ｉ　ｓ−ｇｌｙ−ｐｒｏ− ＥｒＬＤＶＰＳＴｇｌｕ−ｉｌｅ−ｌｅｕ−ａｓｐ−ｖａｌ−ｐｒｏ−ｓｅｒ−ｔｈｒＫＫＴ−Ｃ３１−ＶＱＫＫ　Ｋ　丁　Ｄ　Ｅ　１．　Ｐ　Ｑ　Ｌ　Ｖ　Ｔ　Ｌ　Ｐ　ＨＰ　Ｎ　Ｌｌｙｓ −１ｙｓ−ｔｈｒ−ａｓｐ−ｇ　ｌｕ−１ｅｕ−ｐｒｏ−ｇ　Ｉ　ｎ−１ｅｕ− ｖａ　ｌ　−ｔｈｒ−１ｅｕ−ｐｒｏ−ｈ　ｉｓ−ｐ窒潤|ａｓｎ−１ｅｕ− ＨＧ　Ｐ　Ｅ　Ｉ　Ｌ　Ｄ　Ｖ　Ｐ　Ｓ　Ｔ　Ｖ　Ｑ　Ｋｈ　ｉ　５−ｇｌ　ｙ −ｐｒｏ−ｇ　Ｉｕ−ｉ　ｌｅ−１ｅｕ−ａｓｐ−ｖａ　Ｉ−ｐｒｏ−ｓｅｒ− Ｌｈｒ−ｖａ　Ｉ　−ｇ　ｌｎ−１２■ を使用したが、このようなＬＤＶ　（ｌａｕ−ａｓｐ−ｖａｌ）を含むペプチドに対する特定の商業上の有用性を示唆していない。

α６β１インテグリンの最小認識部位を構成するＲＧＤＳ配列と対照的に、α４ β１インテグリンの最小認識部位としてＬＤＶトリブレットの意義を確かめる同様な一連の研究は、これら二つの最小認識部位が、フィブロネクチン（ＦＮ）分子の異なる領域、すなわち、それぞれ分節（Ｉ　Ｉ　ＩＣ３）を選択的に接合したＩＩＩ型および中心細胞を結合した領域に存在することが、コモリヤ（Ｋｏ＊ａｒｉｙａ）らによって、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅ−、、２２６，（２３）　１５０７５−１５０７９（１９９１）ニ報告すレテいル、しかしながら、この報告は本発明の優先日の後に発表されたものである。

フィブロネクチンの細胞結合活性についての初期の研究は、ビエルシュバッヘルおよびルオスラチ（Ｐｉｅｒｓｃｈｂａｃｈｅｒ　ａｎｄ　Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ；　Ｎａｔｕｒｅ、　３０９．３Ｏ−３３（１９８４））そしてクロツェヴイアク（！［ｌｏｃｚｅｗｉａｋ）ら（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　２８．２９１５−２９１９（１９８９））によって報告されており、ビエルシュバッヘルらは、フィブロネクチンの細胞接着活性における認識部位としてＲＧＤＳ配列の重要性を認めているが、可溶性のフィブロネクチンまたはＲＧＤＳ配列を含まないペプチドの何れを用いても、細胞接着活性のいかなる阻害も得られなかったことを報告している。同様に、クロツェヴイアクらは、ヒトのフィブリノゲンと活性化された血小板との相互作用におけるフィブリノゲンγ−頗の末端領域の本質的な役割を研究し、合成ドデカペプチド：Ｈ）ＩＬＱＬＬＫＱＬＬＤＶｈ　１ｓ−ｈ　ｉｓ−１ｅｕ−ｇ　Ｉｎ−１ｅｕ−１ｏｕ−１ｙｓ−ｇｌｎ−１ｅｕ−１ｅｕ−ａｓｐ−ｖａ　ｌが、了４００−４１１ＦＮ基の類似体であり、ＬＤＶ　ｌ−リブレットを含むことを示し、５００μＭ以上の濃度においてのみ活性化された血小板へのフィブリノゲン結合の５０％阻害を達成した。

シミズらおよびモールドらの両者とは対照的に、欧州特許第＾−０４２１１２６６号明細書は、強力な抗がん剤として、フィブロネクチンの機能性領域、より特にＡＩ胞接合領域及びヘパリン結合領域に基づいたペプチドを、それぞれアミノ酸残基１２３９−１５１３および１８９０−１９６０と同定した（欧州特許第Ａ −０４２８２６６号配列番号２およ結合）、欧州特許第＾−０４２８２６６号明細書によれば、これらのフィブロネクチンフラグメントは、転移を阻害することによってマウスにおいて抗がん活性を示し、単一またはリンカ−１例えばメチオニン残基（欧州特許第Ａ−０４２８２６６号配列番号４）で結合された両配列を含むキメラペプチドの形で用いられる、何れの場合にも、ペプチドフラグメントは相当な大きさ：細胞結合性領域ＦＮフラグメントの場合２７７のアミノ酸、ヘパリン結合性ＦＮフラグメントの場合２７１のアミノ酸残基であ番ハキメラペプチドにおいては総計５４９のアミノ酸残基となる。従って、このようなフラグメントは、本発明のオリゴペプチドに比較すると、依然として相当な大きさであり、Ｍａｂに基づく抗がん剤の多くの不利益、すなわち遅い拡散およびクリアランス速度を示すと思われる。そればかりでなく、欧州特許第＾−０４２８２６６号明細書に抗がん剤として開示されたＦＮフラグメントの何れも、本発明に用いられるオリゴペプチドを特徴づけるアミノ酸トリブレット、すなわちＩｅｕ−ａｓｐ−ｖａｌ　（ＬＤＶ）　トリブレットを含んでいない。

比較的最近、開示された世界知的所有権機関第９０／１５８５８号明細書において、本発明者は、生体内での血栓イメージングに重要であるばかりでなく、生体内での腫瘍イメージングおよび治療に潜在的に有用なＲＧＤ配列（すなわち、配列：ａｒｇ−ｇｌｙ−ａｓｐ）を有し、腫瘍表面におけるＲＯＤ結合部位により生体内で腫瘍に結合できる新規なペプチドを開示した。血栓イメージングの場合、このペプチドは、活性化された血小板の膜表面に存在するＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ（グリコプロテインーフィブリノゲン受容体）抱合体にお各ブるＲＧＤ認識および結合部位に結合し、フィブリノゲン結合領域を含み、活性化された血小板の凝集に含まれて血栓を形成する。

［発明の目的］本発明は、腫瘍に関連した結合部位に特異な結合性を有する新規なオリゴペプチドに基づく薬剤を提供することによって、モノクローナル抗体（Ｍａｂ）起源の細胞毒並びに診断薬の上記の不利益を克服することを企図したものであり、この薬剤は、注射によって腫瘍部位に速やかに輸送され、投与後に結合していない薬剤は体内から同様に速やかなりリアランスがあり、そのため診断または治療の何れの目的に投与された場合にも、治療期間を相当に短縮し、潜在的に毒性の高い薬剤の有効用鰍を減少することになる。

さらに、本発明の別な目的は、このような薬剤を含む腫瘍の診断および治療組成物、並びにこのような薬剤を用いた腫瘍の診断用の１１１ｍ法または治療法を提供するものである。

［発明の要約］本発明により、上記の目的は、４ないし約５０のペプチド単位を有し、ＬＤＶ配列と名付ける配列。

ＬＤＶｌｅｕ−ａｓｐ−ｖａｌを含む合成オリゴペプチドを用いて達成され、ＬＤＶ配列は、このオリゴペプチドを生体内で腫瘍のＬ　Ｄ　Ｖ結合部位に結合する。

それらの比較的小さいサイズのために、このようなオリゴペプチドは、体内に速やかに拡散し、同様に重要なことであるが、通常の代謝および／または排泄により体内から速やかに排泄され、ＬＤＶ結合部位を含む腫瘍または別の組織構造に結合したオリゴペプチドのみを残す０通常の放射線技術によって、診断薬、すなわち放射性同位体で標識したオリゴペプチドの静脈注射後の比較的短時間内に、放射性同位体で標識したオリゴペプチドの結合した局所濃度を透視できるので、体内から非結合オリゴペプチドの速やかなりリアランスは、放射性同位体で標識したオリゴペプチドを用いた腫瘍のイメージングの場合に特に重要である。

本発明の概念と一致して、非結合オリゴペプチドの体内からの速やかなりリアランスは、細胞毒性薬剤および４ないし約５０のペプチド単位と配列：ＬＤＶ　・１ｅｕ−ａｓｐ−ｖａｌを含むオリゴペプチドから形成される抱合体として、腫瘍の治療法に用いられ、投与された細胞毒性薬剤の可能な毒性の副作用を減らすのに非常に重要である。

［図面の簡単な説明］添付の図面によ番ハ生体外および生体内の両者における、本発明の放射性同位体で標識したペプチドの腫瘍細胞への結合能を説明する：図１は、生体外における放射性同位体で標識したペプチド、”’Ｉ−ＹＬＤＶＹの、細胞系Ｔ４７Ｄ、ＬｏＶｏ、ＨＴ２９、ＨＴ１０８０、ＨＥｐ−２、ＥＪ２８およびＡ４３１の腫瘍細胞への結合能を説明する棒グラフである。

図２＋！、　放射性同位体で標識シタペプチド、”ｓ■−ＹＧＧＬＤＶＣＬＤＶＧＧＹに関する同様なデータである。

図３は、放射性同位体で標識したペプチド、”’Ｉ−ＬＤＶＧＧＧＧＳＹに関する同様なデータである。

図４は、ＨＥｐ−２およびＨＴ２９を移植したヌードマウスによる、放射性同位体で標識したペプチド、”’Ｉ−ＹＧＧＬＤＶＧＬＤＶＧＧＹの生体内保持を説明する棒グラフである。

〔詳細な説明］従って、本発明において、主として生体内の１−イメージングおよび治療のための診断および治療薬が提供されるが、ＬＤＶ−結合部位を含むその他の病理組織を目標にしても有用であり、このような薬剤は４ないし約５０のペプチド単位のオリゴペプチドよりなり、オリゴペプチドのトリブレットとして配列：ＬＤＶｔａｕ−ａｓｐ−ｖａｌを含み、そしてこれらのオリゴペプチドに、放射性標識または細胞毒の何れかが結合する。

本発明に用いられるオリゴペプチドの現実的な大きさに関しては、経済的な考慮によって大部分が決定される二通常、ペプチド合！ｌｌ装置によるオリゴペプチドの構築において、費用は長さに直接比例する。従って、合成オリゴペプチドには、実際上、非常に短い鎖長、例えば４ないし３０かも、４ないし２０または４ないし１５に少なくし、または４ないし１０程度に少ないのがより好ましいけれども、５０のペプチド単位は経済的に実行できそうな最大の鎖長である。特に好適な配列は、フィブロネクチンのＣＳＩ配列、すなわち配列番号１を有する２５単位のオリゴペプチドであり、そのサブユニットはＬＤＶ　トリブレットを含むものである。その他の適切なオリゴペプチドは、５単位ペプチド：Ｙ　Ｌ　Ｄ　Ｖ　Ｙｔｙｒ−１ｅｕ−ａｓｐ−ｖａｌ−ｔｙｒ９単位ペプチド：ＬＤＶＧＧＧＧＳＹｌｅｕ−ａｓｐ−ｖａｌ−ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｓ６ｒ−Ｌｙｒ、およびＬ３ｊｌｉ位ペプチド：配列番号２、を有するものである。

フィブロネクチンのＣ３Ｉ配列（配列番号１）は、生体外で多くの腫瘍細胞および静止ＣＤ４°Ｔ−細胞によって表現された細胞接着分子（ＣＡＭ）ＶＬＡ　− ４に結合することが知られている（シミズらの上記文献参照）、フィブロネクチンのＣ３Ｉ配列およびその他のＬＤＶを含むペプチドは、生体内で腫瘍細胞に強く結合することが確立されており、かくしてこれらの細胞にイメージングまたは治療剤を目標とする方法が提供される。

オリゴペプチドに放射性標識を行なうには、多様な技術が用し１もれ、この目的に多様な標識がなされる。これらのうちで、特に記載すべき標識はテキネチウムー９９ｍ、ヨウ素−１２３またはヨウ素−１２５、およびインジウム−１１１である。標１ｍ（または、その点で細胞毒薬剤）を結合するためには、オリゴペプチドは、通常、末端にチロシン、ヒスチジン、リシンまたはシスティンのような反応性末端アミノ酸残基を有している。標識として０”−Ｔｃが用１１られる場合、これはシスティン基を介し、１３″′工はチロシン基を介し、”’Ｉｎはりシン基を介して結合する。チロシン基を介するオリゴペプチドへのｌ！ｆｉｉの結合は、ＷＯ第９０／１５Ｂ１８号明細書に記載されており、ここでは同じ方法を用いることができる。その他の適当な技術は、ここに文献として記載する５ｃｉｅｎｃｅ、　２２０．６１３−６１５；　ｒｏｔ。

Ｊ、　Ｎｕｃｌ、　Ｆｌｅｄ、　Ｂｉｏｌ、、　１２．３−８；　Ｊ、　Ｎｕｃｌ、　Ｍｅｄ、、　２６．２９３−２９９；およびＪ、　Ｎ浮モ戟B ＰＩｅｄ、、　２７．６８５−６９３に報告されている。

別法として、放射性標識の代わりに、リシンまたはその誘導体もしくＩ！酸成分特にリシン誘導体のような細胞毒性薬剤をオリゴペプチドに結合させること力電できる。リジンＡｌｌのような細胞毒性薬剤をオリゴペプチドに結合させる方法は、用いられる特別な細胞毒性および含まれる官能基、ならびにその手段によって異なり、細胞毒は直接または二つの官能基のカップリング剤によっての何れかで、オリゴペプチドの官能基に化学的にカップリングさせられる。カップリング剤または方法の選択は、この分野における通常の技術者の能力の範囲内であり、例えば、ここに文献として記載するＷＯ第８８１００５８３号明細書を参照すれば、既に記載したりシンおよびリシン誘導体の他に、適当な細胞毒性薬剤を知ることができる。

［実施例］以下の実施例により、本発明の放射性同位体で標識したペプチドの製法を詳細に説明する。

実施例：放射性同位体テｅｌｌｌｌｌシた”’Ｉ−ＹＬＤＶＹ１”’Ｉ−ＬＤＶＧＧＧＧＳＹ、　お！び”’Ｉ−ＹＧＧＬＤＶＧＬＤＶＧＧＹＯ’）製法ォリゴペブｆＦ：ＹＬＤＶＹ、ＬＤＶＧＧＧＧＳＹ　（相当スルアミノ酸配列、上記参照）、およびＹＧＧＬＤＶＧＬＤＶＧＧＹ　（アミノ酸配列、配列番号２参照）を、ペプチド自動合成装置を用い、標準の方法により合成した。

ヨードゲンチは、ヨードゲン（１，３，４，６−テトラクロロ−３α、６α−ジフエニルグリコールウリル）を＋１ｍｇ−ｍｌ−の濃度にクロロホルムに溶解することにより製造した。５０μｌ（ヨードゲン５０μｇ）の部分試料をプロピレン凍結管に分配し、クロロホルムを蒸発乾固した１次いで、これらの管を使用するまで一２０℃でデシケータ−中に保存した。

放射性標識を行なう前に、ペプチドを、５ｅｕｇ−ｍｌ−’の濃度にリン酸緩衝液（ＰＢＳ）中に溶解した。

ペプチド溶液２００μｌおよびｌ！ｆｉＩ（水溶液）の１〜１０μｍを加える前に、ヨードゲンチを室温まで昇温した０反応混合物を、時々振盪しながら室温に１５分間放置した０反応時間の後、反応混合物を取り出し、ＰＢＳで平衡させておいたセファデックスＧＩＯカラムを通過させた。沃素を含まない放射性標識ペプチドを分離するカラムをＰＢＳで溶出し、２ｍｌづつの分画を集めた０分画中の放射能を測定し、最初の放射性ピークを示すカラムから溶出したペプチドを集めて使用時まで４℃で保存した。

この点で、標識したペプチドの表示に関する常法により、例えば１ｍ１ｌニー／［。

ＤＶＹの表示は、ペプチドニＹＬＤＶＹが１ｌｆｉｉで標識されたことを示すものである。ペプチド分子に結合した標識の位置または放射性沃素原子数の何れも指示するものではない。

生体外および生体内で腫瘍細胞に結合した放射性標識ペプチドの容量を、以下の実験例で説明し、その結果を添付した図面で説明する。

Ｘ延社上腫瘍細胞系Ｔ４７Ｄ、ＬｏＶｏ、ＨＴ２９、ＨＴ１０８０．ＨＥｐ−２、ＥＪ２８およびＡ４３１の腫瘍細胞を、別々のミクロタイター平板で集密まで増殖させてグルタルアルデヒドで固定し、次いで１８″′丁で標識したペプチド＝ｌ！Ｊ　ＹＬＤＶＹ、”Ｉ−ＬＤＶＣ；ＧＧＧＳＹお！び”’Ｉ−ＹＧＧＬ、ＤＶＧＬ、ＤＶＧＧＹの三種類の各種濃度で、室温で１時間培養した１次いで、平板を洗浄して非結合試薬を除去し、結合した標識を含む細胞残留物を各容器から取り出し、結合した標識残留物の放射能を測定した。放射性標識ペプチドが有する既知の放射能レベルから、結合したペプチドのモル量を測定した。結果を図１ないし３に示す。

叉り皿又２〜５ｘｌＯ’のＨＥｐ−２およびＨＴ２９腫瘍細胞をヌードマウスの両側腹部に皮下注射して得たＨＥｐ−２およびＨＴ２９腫瘍を移植したヌードマウスにおいて、生体内の実験を実施し、腫瘍を３週間増殖させた。

これらの実験において、腫瘍を移植したヌードマウスを５群に分け、各々に１！！ＩでＩｌｌ識したペプチド： ”’Ｉ−ＹＧＧＬＤＶＧＬＤＶＧＧＹ（配列番号２）を皮下注射し、標識したペプチドの取り込みを時間を追って測定した。このため、注射後、５分、３０分、１時間、３時間および６時間の間隔で、５詳のマウスを殺した。この時点で、血液と腫瘍を別々に採取し、重量を測定し、放射能を計測した、同時に、全ての主要な臓器から試料を採取した０図４は、５分の時点と比較した１グラム当たりの注射した用量（ｉｄ）の割合を端数として表し、３０分、１時間、３時間および６時間の間隔での保持レベルを示したものである。５分の時点でのペプチドの取り込みは、血中に１ｇ当たり１０．３％ｉｄ、ＨＥｐ−２腫瘍に１ｇ当たり４．５％ｉｄ、モしてＨＴ２９腫瘍に１ｇ当たり３．０％ｉｄであった。

示したデータは、生体内で腫瘍関連のＬＤＶ結合部位に結合し、従って潜在的に、生体内での腫瘍のイメージングおよび治療薬を目標にする有用な輸送剤を提供する、本発明のＬＤＶを含むオリゴペプチドの能力を明らかに示している。そればかりでなく、輸送およびクリアランス速度は速く、腫瘍のイメージングの場合には診断時間を短くし、腫瘍の治療の場合には治療期間を短縮することができる。

診断の目的には、本発明の放射性標識オリゴペプチドは、実際の上限として約１００マイクログラム以下、より一般的にはＩＯないし５ｅｕｇの範囲の一目投与量として、適当な液状担体中、静脈内投与用に調製される。治療の目的には、本発明の細胞毒性オリゴペプチド、すなわちリシンＡ−１１のような細胞毒薬剤に抱合または化学的に結合したＬＤＶを含む担体は、通常、腫瘍の大きさおよび／または体重によって異なるが、１ｍｇないし１ｇの範囲の用量で用いられ、通常、数時間ないし数日の範囲の期間または、場合によっては数週間にわたって連続投与される。これらの特徴を考慮して、平均のヒト血漿容量が２．５Ｌであるとすると、体内からのペプチドのクリアランスがないと仮定しても、ペプチドの分子量により異なるが、診断のために１００μｇの一回注射によって、最高ペプチド血漿濃度は約０．０７８μＭないし約０．１５μＭとなる。従って、１ｍｇの治療量は、やはり体内からのペプチドのクリアランスがないと仮定すると、約０．０７８μＭないし約１．５μＭの最高ペプチド血漿濃度となる。実際には体内からのペプチド全身性のクリアランス速度のために達成するものでは決してないけれども、これらの極端に低いペプチド血漿濃度において、ＬＤＶのある程度の有意量が腫瘍に結合して残っており、腫瘍のイメージングまたは治療に有効であり得ることはまさに驚異的である。これらのペプチド血漿濃度は、実際に、クロツェヴイアクらによって上記文献に報告された、ペプチド：ＨＨＬＱＬＬＫＱＬＬＤＶを用いて活性化した血小板に結合するフィブロネクチンの５０％抑制を得るに必要な、〉５００μＭ濃度と極めて著しい対照をなしており、この特徴はＬＤＶを含むペプチドの活性化された血小板への結合が非常に低いレベルであることを示している。それとは対照的に、本発明に用いたＬＤＶを含むペプチドは、生体内の腫瘍細胞に対する親和性の全く例外的で全く予想しない高いレベルを示した。

診断または化学療法の何れの目的にせよ、本発明の標識または細胞毒のオリゴペプチドは、静脈内投与のために適当な液状担体中に調剤される。この目的のための適当な担体は、この技術分野で公知の生理食塩水、滅菌水、各種の他の緩衝および／または糖もしくは塩溶液である。投与の便宜上、注射可能な液状担体中の標識または細胞毒のペプチド濃度は、通常、１ないし３０重量％、より一般的には１ないし１０重量％の範囲である。

配列表ペプチドのアミノ酸配列匡汽豊豆上上配列の型　：アミ入着配列の長さ　：２５鎖の数　、−末鎖トポロジー　二直鎖状配列の種類　：ペプチド起＋１：フィブロネクチンＣ３Ｉ−配列起源生物　、ヒト直接の実験起源二合成配列：ＤＥＬＰＱＬＶＴＬＰ）ＩＰＬＬＨＧＰａｓｐ−ｇｌ　ｕ−１ｅｕ−ｐｒｏ−ｇ　ｌｎ−１ｅｕ−ｖａ　Ｉ−ｔｈｒ−１ｅｕ−ｐｒｏ−ｈ　Ｉ　５−ｐｒｏ−１ｅｕ−１ｅｕ−ｈ　堰@ｓ−ｇ　Ｉｙ−ｐｒｏ− ＥＩＬＤＶＰＳＴｇｌｕ−ｉ　１ｅ−ｎとｙＩΣ社−ｐｒｏ−ｓｅｒ−ｔｈｒ配列番号：２配列の型　二アミノ酸配列の長さ　：１３鎖の数　ニー末鎖トポロジー　二直頗状配列の種類　：ペプチド起源　ニー起源生物　ニー直接の実験起源二合成配列：ＹＧＧＬＤＶＧＬＤＶＧＧＹｔｙｒ−ｇ　Ｉ　ｙ−ｇ　１　ｙ−江匹ｙｌ＝虹−ｇ　Ｉｙ−蝕トｙｌΣ１−ｇ　ｌ　ｙ　−ｇ　ｌ　ｙ−ｔｙｒ薯陶ω１！金９国際調査報告　。ｒＴｌ、、Ｄ。ヮ７゜、□ｃ、。

ＰＣＴ／ＧＢ　９２１０１４５Ｂフロントベージの続き（５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　４７／４８　Ｚ　７４３３−４ＣＣ０７Ｋ　４／１２Ｉ

Claims

【特許請求の範囲】

１．オリゴペプチドのトリプレットとして、アミノ酸配列ｌｅｕ−ａｓｐ−ｖａｌ（ＬＤＶ）を含み、その結果として、該オリゴペプチドがＬＤＶ結合部位を含む病理組織と生体内で結合することができ、オリゴペプチドはそれに付着しまたは放射性同位体もしくは細胞毒と抱合する、４ないし５０のペプチドよりなるオリゴペプチド。
２．４ないし３０のペプチド単位を含む請求項１記載のオリゴペプチド。
３．ペプチド鎖として、配列番号１または少なくとも４単位の長さを有し、ＬＤＶトリプレットを含むサプ配列よりなリ、そのペプチド鎖または単位に該放射性同位体または細胞毒が付着される、請求項１記載のオリゴペプチド。
４．ペプチド鎖として、該放射性同位体標識または細胞毒が付着されるペンタペプチド：【配列があります】よりなる請求項１記載のオリゴペプチド。
５．ペプチド鎖として、該放射性同位体標識または細胞毒が付着されるノナペプチド：【配列があります】よりなる請求項１記載のオリゴペプチド。
６．ペプチド鎖として、配列番号２を有し、該放射性同位体標識または細胞毒が付着されるトリデカペプチドよりなる請求項１記載のオリゴペプチド。
７．該ＬＤＶトリプレットを含み、４ないし５０のペプチド単位の放射性同位体で標識されたオリゴペプチドである請求項１記載のオリゴペプチド。
８．２５単位の配列番号１を含む放射性で標識されたオリゴペプチド、または少なくとも４単位を含み、該ＬＤＶトリプレットを含むオリゴペプチドのサプ配列であり、オリゴペプチド配列またはサプ配列が放射性同位体で標識されている請求項７記載のオリゴペプチド。
９．放射性同位体で標識されたパンタペプチド：【配列があります】よりなる放射性同位体で標識されたオリゴペプチドである請求項１記載のオリゴペプチド。
１０．放射性同位体で標識されたノナペプテド：【配列があります】よりなる放射性同位体で標識されたオリゴペプチドである請求項１記載のオリゴペプチド。
１１．放射性同位体で標識されたトリデカペプチド配列番号２よりなる放射性同位体で標識されたオリゴペプチドである請求項１記載のオリゴペプチド。
１２．放射性で標識されたペプチド：【配列があります】
１３．標識が■■Ｔｃ、１２５Ｉおよび１１１Ｉｎより選ばれる請求項１に記載の放射性で標識されたオリゴペプチドよりなる、生体内の重瘍画像のための診断化合物。
１４．該オリゴペプチドが、細胞毒に化学的に結合されるかまたは抱合される請求項１３に記載の化合物である抗重瘍性治じち療化合物。
１５．細胞毒がリシンまたはリシン誘導体である請求項１４記載の抗重瘍性治療化合物。
１６．細胞毒がリシンＡ−鎖である請求項１５記載の抗重瘍性治療化合物。
１７．細胞毒に結合するオリゴペプチドが、ｉ）配列番号１；ｉｉ）少なくとも４個のペプチド単位を有し、ＬＤＶ配列を含む配列番号１のサプ配列；ｉｉｉ）ペンタペプチド：【配列があります】；ｉｖ）ノナペプチド：【配列があります】；およびｖ）トリデカペプチド：配列番号２、から選ばれる請求項１４記載の抗重瘍性治療化合物。
１８．該細胞毒がリシンまたは細胞毒性のリシン誘導体である、請求項１７記載の抗重瘍性治療化合物。
１９．請求項１に記載の放射性同位体で標識されたオリゴペプチドの有効量を含み、靜脈に投与可能な液状担体よりなる、生体内での重瘍画像用の診断薬。
２０．放射性で標識されたオリゴペプチドが請求項８記載のオリゴペプチドである請求項１９記載の診断薬。
２１．放射性で標識されたオリゴペプチドが請求項９記載のオリゴペプチドである請求項１９記載の診断薬。
２２．放射性で標識されたオリゴペプチドが請求項１０記載のオリゴペプチドである請求項１９記載の診断薬。
２３．放射性で標識されたオリゴペプチドが請求項１１記載のオリゴペプチドである請求項１９記載の診断薬。
２４．放射性で標識されたオリゴペプチドが請求項１２記載のオリゴペプチドである請求項１９記載の診断薬。
２５．請求項１記載の細胞毒性オリゴペプチドの有効量を含む、靜脈に投与可能な液状担体よりなる抗腫瘍性治療剤。
２６．細胞毒性オリゴペプチドが請求項１５に記載されている、請求項２５記載の抗重瘍性治療剤。
２７．細胞毒性オリゴペプチドが請求項１６に記載されている、請求項２５記載の抗重瘍性治療剤。
２８．細胞毒性オリゴペプチドが請求項１７に記載されている、請求項２５記載の抗重瘍性治療剤。
２９．細胞毒性オリゴペプチドが請求項１８に記載されている、請求項２５記載の抗重瘍性治療剤。
３０．請求項１記載の放射性で標識したオリゴペプチドの有効量を患者に靜脈内投与し、結合した標識を放射投線鎖撮影法で検出すること、よりなる生体内での腫瘍画像法。
３１．請求項１記載の細胞毒性オリゴペプチドの有効量を患者に靜脈内投与することよりなる、生体内での重瘍の治療法。