JP4948742B2 - ペプチド系化合物 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規のペプチド系化合物およびそれらの画像診断技術のための使用に加えて、有効な治療法におけるそれらの使用に関する。さらに明確には、本発明は、血管形成と関係するレセプター、特に、αｖβ３インテグリンレセプターに結合する標的ベクターとして使われるペプチド系化合物の使用に関する。そのような造影剤は、例えば悪性の病気、心臓病、炎症関連の病気、リウマチ様関節炎、及びカポジ肉腫の診断に使用されることができる。さらに、そのような化合物は、これらの病気の治療に使用されることも可能である。
【０００２】
【従来の技術】
新しい血管は、脈管形成（vasculogenesis）及び血管形成（angiogenesis）という、二つの異なる機構で形成されることができる。血管形成は、既存の血管から枝分かれして新しい血管が形成するものである。栄養と酸素（低酸素）が組織細胞へ適当に供給されないことが、このプロセスの最初の刺激と成り得る。細胞は、これに応じて数多くある血管形成誘導因子を分泌する。しばしば言及される血管形成誘導因子の一例は、血管内皮の増殖因子（ＶＥＧＦ）である。これらの因子は、基底膜の蛋白質を分解するタンパク分解酵素の分泌を開始し、同時に、潜在的に有害なこれらの酵素の活動を制限する阻害剤の分泌を開始する。血管形成誘導因子のその他の顕著な効果は、内皮細胞の移動と分裂を引き起こすことである。管腔と逆側（contralumenal side）で血管の周囲に連続したシートを形成している、基底膜と結合した内皮細胞は、有糸分裂を起こさない。結合が失われた効果と血管形成誘導因子のレセプターからの信号が結びつくことで、内皮細胞の移動、増殖、及びそれらの再編が起こり、そして最後に、新しい血管の周囲に基底膜が合成される。
【０００３】
血管形成は、創傷の治癒および炎症の過程を含む、組織の成長及び再構築において顕著である。腫瘍がミリメーターサイズに達したとき、それらの成長速度を維持するために血管を形成し始める必要がある。血管形成は、内皮細胞とそれらの環境の特性変化を伴う。これらの細胞表面は移動の準備のために再構築され、隠れた構造が、基底膜が分解されたところに露出し、タンパク分解を行う、または制御するものを含めた様々なタンパク質に曝される。腫瘍の場合にできた血管ネットワークは、通常、組織化されておらず、その鋭い形状はねじれており、動静脈を短絡する。血管形成の阻害は、抗腫瘍治療の方法としても有望であると考えられている。血管形成を伴う変態は、悪性の病気であることが明らかな例の診断にも大いに有望である。その発想は、炎症、および、アテローム性動脈硬化症、血管形成因子の潜在的な源である初期のアテローム性動脈硬化症傷害のマクロファージを含む種々の炎症関連の病気に多大な有望性を示す。これらの因子は、心筋の梗塞部の再血管形成に含まれ、狭窄症が起こったあと、短時間のうちに発生する。
【０００４】
新血管新生あるいは血管形成に関する望ましくない条件の例、新しい血管の発達または増殖を、さらに後述の表１にリストする。ＷＯ９８／４７５４１を参考にする。
【０００５】
血管形成に伴う病気と徴候は、例えば乳癌、皮膚癌、結腸直腸癌、脾臓癌、前立腺癌、肺癌、あるいは卵巣癌のような、種々の癌の形状および転移である。
【０００６】
他の病気と徴候は、炎症（例えば慢性的な）、アテローム性動脈硬化症、リウマチ様の関節炎、および歯肉炎である。
【０００７】
血管形成に伴うさらなる病気と徴候は、動静脈の奇形（alformation）、星細胞腫、絨毛癌、神経膠芽細胞癌、神経膠腫、血管腫（幼児期、毛細管）、肝癌、子宮内膜増殖、心筋層乏血、カポジ肉腫、黄斑変性、黒色腫、神経吻合術、咬合末梢動脈病、変形性関節症、乾癬、網膜症（糖尿病性、増殖性）、強皮症、セミノーマ、固体腫瘍構成体、および潰瘍性大腸炎である。
【０００８】
血管形成は、内皮細胞特有のレセプターを必要とする。インテグリンαｖβ３は、血管新生に関係することが知られているレセプターの一つである。αｖβ３インテグリンレセプターとリガンドの相互作用の拮抗物質がアポトーシスおよび血管の成長の阻害を誘導するので、刺激された内皮細胞は、血管形成過程の重要な期間の際、残存するためにこのレセプターに依存すると考えられる。
【０００９】
インテグリンαｖβ３は、細胞を貫通し、細胞外マトリクスに接着できるレセプターとして作用する膜貫通蛋白質ファミリーのメンバーである。インテグリンは、細胞膜脂質二分子層を貫通するα−及びβ−サブユニットのヘテロ二量体分子である。αサブユニットは、その細胞外鎖上にＣａ²⁺が結合する４つのドメインを有し、βサブユニットは、細胞外にシステインに富んだ多数のドメインを有する。
【００１０】
細胞接着に関与する多くのリガンド（例えばフィブロネクチン）は、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）のトリペプチド配列を含む。そのＲＧＤ配列は、この配列に存在しているリガンドと細胞表面のレセプターの間の、最初の認識サイトとして作用すると考えられる。そのリガンドとレセプターの二次的な相互作用は、その相互作用の特異性を高めると一般に信じられている。これらの二次的な相互作用は、ＲＧＤ配列に直接隣接しているリガンド部とレセプターの間で、あるいはＲＧＤから遠く離れたサイトで行われるかもしれない。
【００１１】
ＲＧＤペプチドは、ある範囲のインテグリンレセプターに結合し、臨床的な設定において多数の細胞事象の重要な処理を調節する可能性を有することが知られている（Ruoslahti,J.Clin.Invest.,87:1-5(1991)）。恐らく、最も広く研究されたＲＧＤペプチドおよびそれらの擬似体の効果は、血小板インテグリンＧｐＩＩｂＩＩＩａを標的とする抗血栓物質としてのそれらの使用に関連した効果である。
【００１２】
αｖβ３またはαｖβ５の拮抗物質のいずれかを投与した組織中における血管形成阻害は、例えば抗体またはＲＧＤ含有ペプチドの何れかを用いたＷＯ９７／０６７９１及びＷＯ９５／２５５４３に詳述されている。ＥＰ５７８０８３はペプチドを含むモノサイクルＲＧＤのシリーズについて詳述しており、ＷＯ９０／１４１０３はＲＧＤ抗体について詳述している。Haubner他は、the J.Nucl.Med(1999)；40：1061−1071において、モノサイクルＲＧＤ含有ペプチドに基づいた、腫瘍を標的とする新規の分類のトレーサーについて詳述している。しかしながら、全身オートラジオグラフィー画像を用いた体内分布の研究で、¹²⁵Ｉで標識されたペプチドが非常に速い血中クリアランス速度と、結果的に高いバックグラウンドノイズを生じた主要な肝胆道の排出経路を有することを明らかにした。
【００１３】
トリペプチド配列の末端同士が架橋されていることによりＲＧＤ部が拘束されているサイクリックＲＧＤペプチドもまた、ＷＯ９８／５４３４７及びＷＯ９５／１４７１４において詳述されている。インビボバイオパニング（biopanning）（ＷＯ９７／１０５０７）から誘導されるペプチドは、種々のターゲッティング用途に使用される。配列ＣＤＣＲＧＤＣＦＣ（ＲＧＤ−４Ｃ）は、架橋の位置は確認されていないが、ドキソルビシンのような薬剤（ＷＯ９８／１０７９５）、核酸およびアデノウイルス（ＷＯ９９／４０２１４、ＷＯ９９／３９７３４、ＷＯ９８／５４３４７、ＷＯ９８／５４３４６、ＵＳ５８４６７８２参照）を、細胞にターゲッティングするために使用されている。
【００１４】
インビボで、血管形成に関するインテグリンレセプターを効率的にターゲッティングおよび撮像することは、化学的に頑強で安定し、選択的で高い親和性を持ったＲＧＤに基づくベクターを必要とする。さらにその上、バックグラウンドによる問題を減じるため、造影剤をデザインするときに排出経路は重要な要因である。これらの厳密な条件は、本発明で詳述される、別々の架橋を含んだ構成によって満たされる。
【００１５】
【発明の実施の形態】
本発明はその一つの側面から、式Ｉによって定義される新規のペプチド系化合物を提供する。これらの化合物は、インテグリンαｖβ３に対する親和性を持つベクターとして有用であり、二つの別個の架橋の一方または両方がジスルフィド結合である場合に、その二つの架橋によって隣接される直線的なＲＧＤ配列を含む。そのようなベクターは、改良された結合／有効性によって、周知の直線性ＲＧＤペプチドと比較して予想外の活性を示している。これらの新規のペプチド系化合物は、撮像目的のためと同時に、有効な治療方法に用いられることが出来る。
【００１６】
従って式Ｉは、インテグリンαｖβ３に親和性を有する、ベクター（Ｖ）として用いられるペプチド系化合物を定義している。しかしながら、Ｒ₁及びＸ_1-8の定義によれば、式Ｉは、式「Ｖ−Ｌ−Ｒ」の化合物をも含む。ここで、Ｖはベクターであり、Ｌは直線部分または一つの結合であり、そしてＲは検出可能部（レポーター）である。この検出可能部は、例えば、ヒトの身体または血管新生化したヒト以外の動物の身体（例えば哺乳類、鳥類、または爬虫類）のインビボ撮像のような撮像手順において検出可能である。その化合物は一般式（Ｉ）によって特徴付けられる。
【００１７】
【化５】
ここで、
ｒ＝０または１、ｐ＝０または１、及びｒ＋ｐ＝１である。
【００１８】
ｒ＝０のとき、Ｒ₁は−（ＣＨ₂）_n−ＣＯ−、または−（ＣＨ₂）_n−Ｃ₆Ｈ₄−ＣＯ−であり、ここでｎ＝１，２，３，４または５である。
【００１９】
ｒ＝１のとき、Ｒ₁は一以上の架橋形成アミノ酸、好ましくはシステインであり、Ｒ₁とＸ₂の架橋は好ましくはチオエーテルまたはジスルフィド結合を含む。
【００２０】
ｒ＝１のとき（従ってｐ＝０のとき）、Ｒ₁は特に好ましくはシステインであり、Ｘ₂とジスルフィド架橋を形成する。
【００２１】
Ｘ₁は一つの結合または１，２，３，４または５つのアミノ酸、または糖鎖部分で誘導体化されたアミノ酸、または、インビボ撮像に適したレポーターに結合した、または結合できるスペーサーもしくはリンカーおよび／またはキレートで機能化されたアミノ酸であり、好ましくは金属放射性核種であり、Ｘ₁は好ましくはアスパラギン酸、チロシン、チロシン−アスパラギン酸、またはリジンである。
【００２２】
Ｘ₂およびＸ₄は、それぞれ独立して、システイン、ホモシステイン、またはアスパラギン酸およびリジンのような閉環結合を形成できる他のアミノ酸である。
【００２３】
Ｘ₃はアルギニン、Ｎ−メチルアルギニンまたは擬似アルギニンである。
【００２４】
Ｘ₅は疎水性アミノ酸であり、好ましくはフェニルアラニン、チロシン、ヨードチロシン（最も好ましくは３−ヨード−チロシン）、ジヨードチロシン、またはナフチルアラニンである。
【００２５】
Ｘ₆は閉環結合を形成できるアミノ酸であり、好ましくはシステインまたはホモシステインである。
【００２６】
Ｘ₇は一つの結合または１，２，３，４，５，６，７，８，９,または１０のアミノ酸、好ましくはグリシンであり、またはスペーサーまたはリンカーである。Ｘ₇は、Ｘ₈によって規定される複数のキレートで任意に標識化されることができ、一以上のエチレングリコールユニットまたは他の何れかのスペーサー成分を任意に備える。
【００２７】
Ｘ₈は、金属放射性核種またはインビボ撮像に適する他の何れかのレポーターに結合した、もしくは結合できる、キレートまたは−ＮＨ₂であるか、または存在しない。
【００２８】
ｑは０，１，２，３，４，５，６，７、または８である。
【００２９】
架橋の一つ（Ｒ₁とＸ₂、またはＸ₄とＸ₆の間の）はジスルフィド結合を含む。
【００３０】
ここで記述されたベクター−キレート複合体のベクターの構成成分は、本発明の幾つかの側面おいて、遊離型のアミノまたはカルボキシ末端を有さない。そのような末端は、酵素的な分解に対するこれらの化合物の耐性を有意に上昇させる。その結果として、これらの化合物は既知の多くの遊離ペプチドと比較して高いインビボの安定性を有する。
【００３１】
本発明は、好ましくはさらに式（ＩＩ）によって定義される式（Ｉ）の化合物に関連する。
【００３２】
【化６】
ここで、Ｃｙｓはシステインである。
【００３３】
Ｘ₁´は１，２または３つのアミノ酸であり、最も好ましくはアスパラギン酸、チロシン、チロシンアスパラギン酸、リジン、またはアセチルリジンである。
【００３４】
Ｘ₃は式Ｉの定義と同様である。
【００３５】
Ｘ₅´はフェニルアラニン、チロシン、３−ヨード−チロシンまたはナフチルアラニンである。
【００３６】
Ｘ_７´は一つの結合、グリシン、またはＯ−ビス（アミノエチル）エチレングリコールスペーサーである。
【００３７】
Ｘ₇は、好ましくはグリシンである。
【００３８】
Ｘ₈´は金属放射性核種と結合したキレートである。このキレートの構造は
【化７】
または
【化８】
または他の何れかのＮ₃Ｓまたはこれらのキレートのビスオキシム型である。
【００３９】
式ＩＩに示したように、一つの架橋はチオ結合を含み、もう一つの架橋はジスルフィド結合を含む。
【００４０】
一般式（ＩＩ）の化合物の特に好ましい実施例では、Ｘ₃はＮ−メチル−アルギニンであり、および／またはＸ₅´はナフチルアラニンである。
【００４１】
レポーターであるＲは、Ｘ₁および／またはＸ₇内の何れかの適当なポイントで、Ｖに（Ｌ経由で）結合できる。好ましくは、この結合ポイントは、生物学的なＶの活性または標的に対するＶの結合親和性が、実質的にも有意にも、減少しないように選択される（Ｖの生物学的活性またはＲなしでのＶの結合親和性との比較において）。
【００４２】
ここで使用する「アミノ酸」という用語は、その広い意味において、蛋白質を産生する天然のＬ−アミノ酸を指す。
【００４３】
「閉環結合」という用語は、架橋の導入を可能にする官能基を有するアミノ酸の何れかの組み合わせ（またはアミノ酸と−（ＣＨ₂）_n−ＣＯ−、または−（ＣＨ₂）_n−Ｃ₆Ｈ₄−ＣＯ−）を指す。ある好ましい例は、ジスルフィド、−（ＣＨ₂）_４−カルバ架橋のような擬似ジスルフィド、チオアセタール、チオエーテル架橋（シスタチオンまたはランチオニン）、およびエステルおよびエーテルを含む架橋である。
【００４４】
式（Ｉ）の化合物のいくつかの好ましい実施例を、化合物１−５として下記に図示する。
【００４５】
化合物１
【化９】
化合物２：ベクター
【化１０】
化合物３：式Ｉの化合物、Ｖ−Ｌ−Ｒの例
【化１１】
化合物４：式ＩＩの化合物の例
【化１２】
化合物５：例えば^99mＴｃで結合できる、化合物の式の例
【化１３】
ほとんどの場合、ベクターＶのアミノ酸はＬ型であることが好ましい。しかしながら、本発明のいくつかの実施例において、ベクターＶの一つ、二つ、三つ、またはそれ以上のアミノ酸は、Ｄ型であることが望ましい。そのようなＤ型のアミノ酸を含むことによって、血清中におけるベクターの安定性に有意な効果が得られる。Ｘ₁の位置にＤ−チロシンを有するベクターに関して、対照が特に作られた。
【００４６】
本発明はまた、一以上の薬剤的に許容される助剤、賦形剤、または希釈剤とともに、一般式（Ｉ）の化合物、またはそれらの酸付加塩の有効な量（例えば、インビボ撮像の画像コントラストを強調するために、および／または治療のために効果的な量）を含む医薬組成物、を提供する。
【００４７】
上述したように、式Ｉの化合物は、ベクター、リンカー、およびレポーター部を含むことができる。リンカー部は、一つのベクターが一つのレポーターに結合するのに役立ち、あるいは、二つ以上のベクターおよび／または二つ以上のレポーターと結合することができる。同様に、レポーターまたはベクターは、二つ以上のリンカーに結合することができる。このように複数のレポーターを使用することで（例えば、一つのベクターに結合したいくつかのリンカー−レポーター部、または、一つのベクターに結合した一つのリンカーに結合したいくつかのレポーター）、造影剤の検出可能性を増大させることができ（例えば、その放射線不透明度、エコー発生度（echogenicity）または緩和度（relaxivity）を上昇させることによって）、あるいは、二つ以上の撮像方法で造影剤を検出可能にすることができる。このように複数のベクターを使用することにより、造影剤の標的効率が上昇し、あるいは、異種のレセプターを有する物質のための異なるレセプターのような二つ以上のサイトを造影剤が標的に出来るようにする。
【００４８】
＜リンカー＞
生分解性のリンカーおよび生体高分子を含む、広範な種類のリンカーを使用することが出来る。
【００４９】
造影剤のリンカー成分は、ベクター部とレポーター部の間の最も簡単な結合にある。より一般的には、リンカーは、一以上のベクターと一以上のレポーターとを、共有結合あるいは非共有結合で結合している、単分子または複数分子の骨格を提供する。その骨格は例えば、共有結合または非共有結合（例えば、配位結合）で、ベクターおよびレポーター部と結合し、またはこのような部分をエンキャプスレートし、トラップしまたはアンカーする構造内（in-built）または側基を備えた、直鎖状、環状、分枝状または網状の分子骨格、または分子集合体である。
【００５０】
このように、レポーターユニットと所望のベクターの結合は、通常、レポーターおよび／またはベクターに位置する一以上の官能基の相互作用を必要とし、共有または非共有的方法によって達成されることが出来る。この目的に使用され得る化学的反応性を持つ官能基の例は、炭化水素基、近接したジオール、チオエーテル、２−アミノアルコール、２−アミノチオール、グアニジニル、イミダゾリル、およびフェニル基に加えて、アミノ基、ヒドロキシル基、スルフヒドリル基、カルボキシル基、およびカルボニル基を含む。
【００５１】
レポーターおよび／またはベクター中の官能基は、必要ならば、例えば反応性または選択性を追加して与えるために、反応に先立って他の官能基に変換することができる。
【００５２】
ベクター−レポーター結合は、酵素を長さゼロの架橋結合物質として使用することで行われる。したがって、例えば、トランスグルタミナーゼ、ペルオキシダーゼ、およびキサンチンオキシダーゼは、架橋結合生成物を生成するために使用される。逆タンパク分解も、アミド結合構造を通じて架橋結合のために使用されることが出来る。
【００５３】
非共有的なベクターとレポーターの結合は、安定した金属錯体の形にあるキレートを通じて、または、高い親和性結合相互作用を通じて、例えば、静電気的な電荷の相互作用によって、行われることが出来る。
【００５４】
ペプチド、リポオリゴ糖、または、膜挿入を媒介できる元素を含むリポペプチドリンカーと結合したベクターも有用である。
【００５５】
結合は、ビオチンのための親和性の高い４つの結合サイトを有する、アビチンまたはストレプトアビジンを使用して行われることもできる。従ってアビチンは、ベクターおよびレポーターが共にビオチン化された場合にレポーターのための結合ベクターとして使用されることができる。
【００５６】
結合物質を追加することなく、反応性のある二つの化学基の共有的な連結を直接に誘導する、長さゼロの結合物質と呼ばれるものは、必要ならば本発明に従って使用されることができる。
【００５７】
しかしながら最も一般的には、結合物質は、例えば上述したようなスペーサー成分によって連結される二以上の反応部分を含む。そのようなスペーサーの存在によって、二機能性のリンカーは、分子内あるいは二つの異なる分子の間の特定の官能基と反応することができる。その結果、これら二つの構成成分間に結合が生じ、レポーター−ベクター接合体にリンカー由来の外因性の物質が導入される。
【００５８】
結合物質によって導入された外因性の物質の性質は、標的化能力、薬物動態および最終産物の一般的な安定性において重要な挙動を有する。それゆえ、例えば、生分解性または化学的にセンシティブな、あるいは酵素的な切断サイトを取り込んだスペーサーアームを含む、不安定な結合を導入することが望まれるかもしれない。あるいは、スペーサーは、例えば、界面活性剤として作用するために、およびその物質の安定性を増大させるために、高分子構成成分を含むことができる。そのスペーサーは、表面の架橋結合を増強するために、例えば上述されたように反応部を含むこともできる。
【００５９】
スペーサー成分は、デキストランおよび通常ＰＥＧｓと称されるポリ（エチレングリコール）のような、高分子構造を含むこともできる。スペーサー成分に加えて、ＰＥＧｓはベクターのインビボの特性を修飾するために使用されることも出来る。
【００６０】
細網内皮性の系（ＲＥＳ）の細胞によって粒子が取り除かれる主な機構は、血中の血清タンパクによるオプソニン作用である。これらは外来粒子をマークし、ＲＥＳによって取り除く。本発明に従って使用されるＰＥＧスペーサー成分の生物学的特性は、ＰＥＧ化されたリポソームを得るための方法と同様の方法で物質の循環時間を長くさせるのに役に立つ。ＰＥＧスペーサーの末端と結合した抗体を使用することで、関心ある領域の結合効率を増加することもできる。
【００６１】
他の代表的なスペーサー成分は、酵素的切断サイトを含む、あるいは含まない、構造タイプの多糖体、貯蔵タイプの多糖体、ポリアミノ酸およびそれらのメチルおよびエチルエステル、ポリペプチド、オリゴ多糖およびオリゴヌクレオチドを含む。
【００６２】
好ましい結合基は、ベクターの反応基から誘導される。このベクターの反応基は、
カルボキシ基、アルデヒド基、アミノ（ＮＨＲ）基、アルコール基、スルフヒドリル基、ベクター上において活性化されたメチレンおよび同様なもの、例えば活性ハロゲン含有基、と直接反応する基、
ベクター反応基を含む修飾されたベクター分子、即ち、例えばベクターを酸化してアルデヒドまたはカルボン酸にするように、修飾されて反応基を含むベクター、と容易に反応できる基、
反応基を含むベクター、または前述したように架橋結合剤の使用によって修飾されたベクターに、結合することが出来る基、
から選択されるが、これに限定されない。
【００６３】
好ましい有用な結合基は、Pierce Chemical Company Immunotechnologyカタログ（１９９５および１９９６）のタンパク修飾部門に記載されているもののような、種々のヘテロ二官能性交差結合剤（heterobifunctional cross-linking reagents）から誘導される。
【００６４】
前述の記載に加えて、結合基の全体または一部は、ヌクレオチドの相補的配列およびヌクレオチドの残基、天然のおよび修飾された、好ましくは非自己結合性オリゴヌクレオチド配列で構成され、それらから誘導することができる。
【００６５】
本発明に従って使用される結合物質は、通常、ベクターとレポーター、あるいはレポーターとある程度の特異性を持つレポーターの結合をもたらし、一以上の治療的に活性な物質を結合するために使用されることも出来る。
【００６６】
本願の文脈中に使用されたリンカーのさらなる例は、ＷＯ９８／４７５４１の３２〜５４頁によって与えられ、これらの頁の開示は、その全ての内容を本明細書の一部として援用する。上述の頁に開示されたそれぞれの、および全てのリンカーまたはそれらの一部は、本願発明の記述の一部とみなされるべきであることを主張する。
【００６７】
＜レポーター＞
本発明の造影剤のレポーター部は、インビボ画像診断方法において直接または間接的に検出できるいずれかの部分である。例えば、放射する部分、または、検出可能な放射線の放射を引き起す部分（例えば、放射活性減衰、蛍光励起、スピン共鳴励起、その他）、局所的な電磁気場（常磁性の、超常磁性の、フェリ磁性の、または強磁性の種）に影響を及ぼす部分、放射性エネルギーを吸収または散乱する部分（例えば、発色団およびフルオロフォア）、粒子（液体含有ベシクルを含む）、重原子およびそれらの化合物、および検出可能な物質を生成する部分、その他などである。
【００６８】
画像診断療法によって検出可能な物質の極めて広い領域は、その技術から周知であり、そのレポーターは使用されている撮像方法に従って選択される。それゆえ、例えば、エコー発生物質の超音波撮像、またはエコー発生物質を生成できる物質が、通常選択される。ベクターは、リンカーを経由して適当な脂質レポーター／気体充填の微小気泡に取り込むためのキャリアーに結合される。そのような微小気泡は、超音波撮像の標的のために使われることができる。
【００６９】
Ｘ線撮像のためのレポーターは、通常、重原子であるか、または重原子を含む（例えば、原子番号３８またはそれ以上の）。ＭＲ撮像のためのレポーターは、非ゼロ核スピン同位元素（¹⁹Ｆのような）または不対電子スピンを有する物質のいずれかであり、それゆえ、常磁性の、超常磁性の、フェリ磁性の、または強磁性の性質を有する。光撮像のためのレポーターは、光散乱体（例えば、有色または無色の粒子）、光吸収体または光エミッタである。磁力計撮像のためのレポーターは、検出可能な磁性特性を有する。電気的なインピーダンス撮像のためのレポーターは、電気的なインピーダンスに影響を及ぼす。シンチグラフィー、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、その他のためのレポーターは、放射性核種である。
【００７０】
適当なレポーターの例は、画像診断の文献から広く知られている。例えば、磁性鉄酸化物粒子、ベシクルを含むＸ線造影剤、キレートされた常磁性金属（Ｇｄ，Ｄｙ，Ｍｎ，Ｆｅその他）である。例としてＵＳ−Ａ−４６４７４４７、ＰＣＴ／ＧＢ９７／０００６７、ＵＳ−Ａ−４８６３７１５、ＵＳ−Ａ−４７７０１８３、ＷＯ９６／０９８４０、ＷＯ８５／０２７７２、ＷＯ９２／１７２１２、ＰＣＴ／ＧＢ９７／００４５９、ＥＰ−Ａ−５５４２１３、ＵＳ−Ａ−５２２８４４６、ＷＯ９１／１５２４３、ＷＯ９３／０５８１８、ＷＯ９６／２３５２４、ＷＯ９６／１７６２８、ＵＳ−Ａ−５３８７０８０、ＷＯ９５／２６２０５、ＧＢ９６２４９１８．０、を参照することができる。ＷＯ９８／４７５４１（６３−６６頁および７０−８６頁）もまた、参照できる。
【００７１】
特に好ましいレポーターは、Ｇｄ，Ｄｙ，ＦｅおよびＭｎのようなキレートされた常磁性金属イオンであり、特に大環状のキレート基によってキレートされたものが好ましい。
【００７２】
通常の状態で、レポーターは、下記の（１）〜（５）である。
【００７３】
（１）キレート可能な金属または多元子金属含有イオン（即ち、ＴｃＯその他）。ここで、金属は原子番号の大きい金属（例えば、原子番号３７以上）、常磁性種（例えば、遷移金属またはランタニド）、または放射能活性同位元素。
【００７４】
（２）不対電子サイト（例えば、持続的な（persistant）フリーラジカル中の酸素または炭素）である、共有結合非金属種、原子番号の大きい非金属、または放射性同位体。
【００７５】
（３）多元子集団または原子番号の大きい原子を含む結晶であり、共同的な磁性的ふるまい（例えば、超常磁性、フェリ磁性、または強磁性）を示す、または放射性核種を含む。
【００７６】
（４）発色団（この用語は蛍光の、またりん光の種を含む）、例えば、非有機または有機構造、特に錯体金属イオンまたは広範な非局在化電子系を有する有機基。
【００７７】
（５）例えば、広範な非局在化電子系によって様々な特性の電子的インピーダンスを有する構造または基。
【００７８】
特に好ましいレポーター基の例は、下記に詳細に記載する。
【００７９】
キレートされた金属レポーターは、金属放射性核種、常磁性金属イオン、蛍光金属イオン、重金属イオン、およびクラスターイオンである。
【００８０】
好ましい金属放射性核種は、⁹⁰Ｙ，^99mＴｃ,¹¹¹Ｉｎ，⁴⁷Ｓｃ，⁶⁷Ｇａ，⁵¹Ｃｒ，^177mＳｎ,⁶⁷Ｃｕ，¹⁶⁷Ｔｍ，⁹⁷Ｒｕ，¹⁸⁸Ｒｅ，¹⁷⁷Ｌｕ，¹⁹⁹Ａｕ，²⁰³Ｐｂ，および¹⁴¹Ｃｅを含む。
【００８１】
好ましい常磁性金属イオンは、遷移金属およびランタニド金属（例えば、原子番号６〜９、２１〜２９、４２，４３，４４または５７〜７１）のイオン、特に、Ｃｒ，Ｖ，Ｍｎ，Ｆｅ，Ｃｏ，Ｎｉ，Ｃｕ，Ｌａ，Ｃｅ，Ｐｒ，Ｎｄ，Ｐｍ，Ｓｍ，Ｅｕ，Ｇｄ，Ｔｂ，Ｄｙ，Ｈｏ，Ｅｒ，Ｔｍ，Ｙｂ，およびＬｕ、なかでも、Ｍｎ，Ｃｒ，Ｆｅ，Ｇｄ，およびＤｙが好ましく、さらに特にはＧｄのイオンが好ましい。
【００８２】
金属イオンは、リンカー部で、または粒子中あるいは粒子上（例えば、ベシクルまたは多孔性あるいは非多孔性の非有機物または有機物固体）で、キレート基によって望ましいキレートにされる。特に、直線の、大環状の、ターピリジン（terpyridine）、および、例えばＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ＥＤＴＡ、Ｄ０３ＡおよびＴＭＴのようなＮ₂Ｓ₂キレートにされる。適当なキレート基のさらなる例は、ＵＳ−Ａ−４６４７４４７、ＷＯ８９／００５５７、ＵＳ−Ａ−５３６７０８０、ＵＳ−Ａ−５３６４６１３、その他に開示されている。
【００８３】
このリンカー部または粒子は、一以上のそのようなキレート基を含み、必要ならば、二以上の金属種で金属化（metallated）される（例えば、異なる撮像方法で検出可能なレポーターを提供するために）。
【００８４】
キレート化物質のその他の適当な残基は、テクネチウムおよびレニウムのような金属をキレートして修飾されたタンパクを含む。これはＵＳ特許番号５０７８９８５に記載され、その内容を本明細書の一部として援用する。
【００８５】
キレート化物質の何れかを金属化する現在の方法は、従来技術のレベルの範囲内である。金属は、三つの通常の方法、直接取り込み、鋳型合成、および／またはトランスメタレーションの内のいずれか一つによって、キレート部に導入されることが出来るが、直接取り込みが好ましい。
【００８６】
従って、金属イオンは容易に、例えば、単に、部分を含むキレート化物質の水溶液を好ましくは約４〜１１の範囲のｐＨを有する水溶液中の金属塩にさらす、または混合することによって、キレート化物質に錯体化されることが望ましい。
【００８７】
この塩はいかなる塩でもよいが、好ましくはハロゲン塩のような水に可溶な金属塩、さらには、金属イオンとキレート化物質の結合を妨げないように選択された塩が好ましい。部分を含むキレート化物質は、ｐＨが約５〜９にある水溶液中にあるのが好ましく、さらには、ｐＨが約６〜８の間にあるのが好ましい。部分を含むキレート化物質は、最適なｐＨを得るために、クエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、およびホウ酸塩のような緩衝塩と混合することができる。この緩衝塩は、続く金属イオンとキレート化物質の結合を妨げないように選択されることが好ましい。
【００８８】
画像診断において、ベクター−リンカー−レポーター（ＶＬＲ）構成は、好ましくは、そのような画像診断処理に効果的な金属放射性核種イオンとキレート化物質の割合を有している。好ましい実施例では、キレート化物質あたりの金属イオンのモル比は約１：１，０００から約１：１である。
【００８９】
放射性治療処置において、ＶＬＲは、そのような治療処理において効果的なキレート化物質に対する金属イオンのモル比を有することが好ましい。好ましい実施例において、キレート化物質あたりの金属イオンのモル比は約１：１００から約１：１である。放射性核種は、例えば、Ｓｃ，Ｆｅ，Ｐｂ，Ｇａ，Ｙ，Ｂｉ，Ｍｎ，Ｃｕ，Ｃｒ，Ｚｎ，Ｇｅ，Ｍｏ，Ｒｕ，Ｓｎ，Ｓｒ，Ｓｍ，Ｌｕ，Ｓｂ，Ｗ，Ｒｅ，Ｐｏ，Ｔａ，およびＴｌの放射性同位体から選択されることができる。^{放射性核種は 44}Ｓｃ，⁶⁴Ｃｕ，⁶⁷Ｃｕ，²¹²Ｐｂ，⁶³Ｇａ，⁹⁰Ｙ，¹⁵³Ｓｍ,²¹²Ｂｉ，¹⁸⁶Ｒｅ，および¹⁸⁸Ｒｅを含むことが好ましい。これらのうち、特に⁹⁰Ｙが好ましい。これらの放射性核種は原子化または好ましくはイオン化されることができる。
【００９０】
次の同位体または同位体対は、放射標識方法またはキレート剤の交換なしで撮像および治療の療法に使用することが出来る。⁴⁷Ｓｃ₂₁，¹⁴¹Ｃｅ₅₈，¹⁸⁸Ｒｅ₇₅，¹⁷⁷Ｌｕ₇₁，¹⁹⁹Ａｕ₇₉，⁴⁷Ｓｃ₂₁，¹³¹Ｉ₅₃，⁶⁷Ｃｕ₂₉，¹³¹Ｉ₅₃と¹²³Ｉ₅₃，¹⁸⁸Ｒｅ₇₅と^99mＴｃ₄₃，⁹⁰Ｙ₃₉と⁸⁷Ｙ₃₉，⁴⁷Ｓｃ₂₁と⁴⁴Ｓｃ₂₁，⁹⁰Ｙ₃₉と¹²³Ｉ₅₃，¹⁴⁶Ｓｍ₆₂と¹⁵³Ｓｍ₆₂，および⁹⁰Ｙ₃₉と¹¹¹Ｉｎ₄₉。
【００９１】
リンカー部は、複数のキレート基と結合することが出来る。そのようなポリキレート基内のキレート部は、キレートの主鎖の機能付与を介して、または、一以上の金属と同等のキレート基を利用することによって、または酸キレートとアミノまたはヒドロキシル保有リンカー主鎖との間のアミノ結合またはエーテル結合形成によって、例えば、ポリリシン−ポリＤＴＰＡ中で、ポリリシン−ポリＤＯＴＡ中で、およびＰＣＴ／ＥＰ９６／００５６５において拡大ポリキレートと称されるものの中で結合されることが出来る。そのようなポリキレートリンカーは、一以上のベクター基に直接（例えば、ポリキレートリンカー中のアミノ、酸またはヒドロキシル基）かまたはモノキレートリンカーのために上述した二機能性リンカー化合物経由で接合されることが出来る。
【００９２】
キレートされた種が粒子（または分子集合体、例えば小胞の）リンカーによって運ばれるところで、キレートは例えば粒子内に封じられた非結合モノまたはポリキレート（Ｇｄ ＤＴＰＡまたはＧｄ ＨＰ−ＤＯ３Ａのような）であり得る。またはそれは共有結合によってまたは小胞の膜とともに（ＰＣＴ／ＧＢ９５／０２３７８参照）モノ／ポリキレート上のアンカー基（例えば、親油性基）の相互作用によって粒子に接合体したモノまたはポリキレートであり得る。
【００９３】
好ましい非金属元素レポーターは、¹⁹Ｆのような非ゼロ核スピン元素と同様に¹²³Ｉおよび¹³¹Ｉのような放射性同位体、および、Ｉのような重い原子を含む。
【００９４】
そのようなレポーター、好ましくは複数、例えば２から２００のそれらは、通常の化学合成技術を使用して直接に、または、例えば、トリヨードフェニル基のような補助基を介して、リンカーの主鎖と共有結合している。
【００９５】
本発明の実施例において、ヨウ素の放射性同位体を使用することは、特に期待される。例えば、もしベクターまたはリンカーが、例えばヒドロキシフェノール官能基を含む置換基のような共有結合形成反応においてヨウ素によって科学的に置換され得るような置換基を含む場合、そのような置換基は当業者に周知の方法によってヨウ素の放射性同位体でラベルすることが出来る。ヨウ素種は、治療および診断画像処理に使用されることができる。一方で、同時に、同じベクター−リンカー上のキレートされた薬剤中の金属は、治療および診断画像処理に使用されることができる。上記で論じた金属キレートと共に、そのような金属元素レポーターはリンカーに結合されることができ、または粒子状のリンカー上にまたは粒子状のリンカー内、例えば、ベシクル内に（ＷＯ９５／２６２０５およびＧＢ９６２４９１８．０参照）運ばれることができる。
【００９６】
金属レポーターに関連して上述したタイプのリンカーは、非金属原子レポーターと共に、あるいは、いくつかまたは全てのキレート基の代わりをするレポーターをもたらす基と共に、非金属原子レポーターのために使われる。
【００９７】
本発明のＶ−Ｌ−Ｒ物質は、例えば共有的に結合された放射性同位体を持つレポーターに、直接または間接的に結合されたレセプター標的ベクターを有することが好ましい。その金属キレートは、直接または有機リンカー基を介して結合される。あるいは金属キレートは、粒子状のレポーターまたはリンカーレポーター、例えば超常磁性結晶（例えば、ＰＣＴ／ＧＢ９７／０００６７において任意にコートされた）に、または例えばミセルまたはリポソームを含むヨウ素化された造影剤のベシクルに、結合される。
【００９８】
ＭＲＩ様式の撮像、Ｘ線、光撮像、核撮像、磁気化学断層撮影法、および電子的インピーダンス撮影法のための、有利なレポーターを下記に簡単に記載する。
【００９９】
ＭＲＩ
超常磁性鉄酸化物粒子。通常は約８０ｎｍより小さい、特には２０ｎｍより小さい粒子サイズを有する。特に、例えば高分子電解質、ＰＥＧ、デンプンおよび加水分解されたデンプンのような種々のコーティング物質でコートされた鉄酸化物が望ましい。キレートおよび粒子化物質の両方を含む常磁性金属物質も有用である。
【０１００】
光撮像
光撮像レポーター基の何れか。焦点は、赤外領域近辺で吸収する物質上に合わせられる。
【０１０１】
核撮像
¹²³Ｉ，¹²⁵Ｉ，¹³¹Ｉ，⁷⁵Ｂｒまたは⁷⁷Ｂｒのような放射標識化されたハロゲン化物質を有する直接放射標識化ベクターに加えて、⁹⁹Ｔｃ，または¹¹¹Ｉｎを含む放射活性キレート。
【０１０２】
磁気化学断層撮影法
上記と同様の超常磁性鉄酸化物粒子。
【０１０３】
電子的インピーダンス撮影法
ポリイオン化種、例えば、繰り返し単位にイオン化基を持つポリマー。
【０１０４】
本発明の好ましい実施例は、特に腫瘍撮像に使用するための、一般式（Ｉ）の放射標識化された物質に関する。
【０１０５】
本発明の診断物質は、その粒子撮像技術で望ましいコントラストを得るために十分な量で、撮像する患者に投与される。レポーターが金属である場合、通常は、患者の体重ｋｇあたり０．００１〜５．０ｍｍｏｌのキレート撮像金属イオンを投薬することで、コントラストの増強に十分な効果が得られる。ほとんどのＭＲＩ処理のために好ましい撮像金属イオンの投薬量は、体重ｋｇ当たり０．０２〜１．２ｍｍｏｌの範囲にある。Ｘ線処理のためには０．０５〜２．０ｍｍｏｌ／ｋｇの投薬量がＸ線減衰を達成するために通常効果的である。ほとんどのＸ線処理のために好ましい投薬は、体重ｋｇ当たり０．１〜１．２ｍｍｏｌのランタニドまたは重金属化合物である。レポーターが放射性核種である場合、十分な投薬量は、体重７０ｋｇ当たり０．０１〜１００ｍＣｉ、特に０．１〜５０ｍＣｉである。レポーターが超常磁性粒子である場合、投薬は通常、体重ｋｇ当たり０．５〜３０ｍｇのＦｅである。
【０１０６】
本発明の化合物の治療目的のための投薬量は、処置の際の状況に依存するが、一般に、体重ｋｇ当たり１ｐｍｏｌ〜１ｍｍｏｌのオーダーである。
【０１０７】
本発明の化合物は、当業者には周知の方法で、生理的に許容される担体または賦形剤を使って投与される。例えば、薬剤的に容認される賦形剤を添加した化合物を、水溶性の媒体に懸濁あるいは溶解し、得られた溶液または懸濁液は滅菌する。
【０１０８】
式Ｉの物質は、インビボ撮像で検出可能であることに加えて、病気の治療に効果的である。したがって例えば、ＶＬＲ化合物のベクターは、例えば放射性核種レポーターの放射治療効果、発色団（または蛍光団）レポーターの有効性、またはベクター部の化学的効果によって、治療的な効果を有する。
【０１０９】
従って、治療組成物の製造における、および、ヒトまたはヒト以外の動物の身体の治療処置あるいは予防処置における式Ｉの物質の使用は、本発明のさらなる側面を表すと考えられる。
【０１１０】
本発明のさらなる側面は、造影剤を動物対象に投与し、その対象の少なくとも一部の画像を発生させることを含む診断法において使用される造影剤の製造のための式Ｉの物質の使用を提供する。
【０１１１】
本発明の更なる側面は、生きたヒトまたはヒト以外の（好ましくは哺乳類もしくは鳥類）動物対象の画像を発生する方法であって、造影剤を対象の血管系などに投与することと、少なくともその対象の造影剤が分布している部分の画像を、例えばＸ線、ＭＲ、超音波、シンチグラフィー、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ、電子的インピーダンス、光または磁力撮像様式など、造影剤として式Ｉの物質を使用することを特徴とするものによって発生させることとを含む方法を提供する。
【０１１２】
本発明のさらなる側面は、血管形成に関する症状、例えば細胞障害物質と闘うための薬剤を用いたヒトまたはヒト以外の動物対象の治療効果をモニタリングする方法を提供する。その方法は、対象に式Ｉの化合物を投与することと、内皮細胞レセプター、特に粒子状αｖβ３レセプターによるその化合物の取り込みを検出することとを含み、投与および検出は任意に、しかし好ましくは、例えば、薬剤を用いた治療の前後および最中に繰り返して行われる。
【０１１３】
本発明のさらなる側面は、式Ｉの物質の調製方法を提供する。その方法は、画像診断法において検出可能な化合物、またはキレート化合物に、ベクターＶを接合することと、必要ならば、得られた接合体のキレート基を、画像診断法において検出可能な金属イオンで金属化することとを含む。
【０１１４】
本発明のさらなる側面は、治療処置のための式Ｉの物質の調製方法を提供する。その方法は、病気の治療において治療的に有効な化合物に、ベクターＶを接合することを含む。
【０１１５】
本発明のベクターは、化学合成の周知の方法を使って合成することが出来るが、特に、自動ペプチド合成機を用いたメリフィールドの固相方法論（J.Am.Chem.Soc.,85:2149(1964)）が便利である。複数のジスルフィド架橋を含んだベクターは、異なるシステイン保護基を使って合成されるので、ベクターが最終的に保持される形態に関して多義性は存在しない。ペプチドおよびペプチドキレートは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて精製され、マススペクトルおよび分析ＨＰＬＣによって、インビトロスクリーン試験の前に特徴づけられる。
【０１１６】
以下の例は、非限定的な例である。
例１：化合物１の合成
【化１４】
テクネチウムキレートの合成−Ｐｎ２１６
ａ）クロロ−ニトロソ中間体（３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン）
２−メチルブタ−２−エン（18.5ｍＬ）とイソアミルニトレート（19.5ｍＬ）の混合物を攪拌し、−１０℃まで冷却する。濃塩酸（17.5ｍＬ）を、温度が０℃以下で維持されるように注意しながら加える。攪拌しながらこの温度で３０分反応させる。形成した沈殿物をろ過して集め、５ｍＬのエタノール（−２０℃）で４回洗浄する。真空下で乾燥し、３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンの白色固体を生成する。
【０１１７】
ｂ）Ｐｎ２１６−（３，３，１１，１１−テトラメチル−７−アミノエチル−４，７，１０,トリアザトリデカン−２，１２−ジオンジオキシム）
アセトニトリル（20ｍＬ）中のトリス−（２−アミノエチル）アミン溶液に、炭酸水素ナトリウム（2.2ｇ、26ｍｍｏｌ）を添加する。無水アセトニトリル中の３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン（1.8ｇ、13ｍｍｏｌ）溶液を０℃でゆっくり添加する。混合反応は攪拌したまま室温で４時間おき、その後ろ過する。ろ過物はアセトニトリルで洗浄し、ろ液は蒸留する。粗生成物がアセトニトリル中に溶解し、ＨＰＬＣによって精製することでＰｎ２１６を生成する。収率は0.88ｇ、１９％である。
【０１１８】
ｃ）Ｐｎ２１６−コハク酸中間体の合成
【化１５】
無水コハク酸（１００）
Ｐｎ２１６（３５８）
テトラフルオロチオフェノール（１８２）
ＤＣＣＩ（２０６）
Ｐｎ２１６（0.5ｇ、1.4ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（5ｍＬ）に溶解し、ＤＭＦ（10ｍＬ）中の無水コハク酸（0.015ｇ、1.5ｍｍｏｌ）を攪拌しながら少量ずつ添加する。攪拌したまま１６時間反応させ、所望の生成物の完全な変換物を得る。続いてＨＰＬＣクロマトグラフィーにより、高収率で純粋な酸が得られる。
【０１１９】
ｄ）Ｐｎ２１６−コハク酸のテトラフルオロチオフェノールエステル誘導体の合成
【化１６】
ＨＡＴＵ[Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルロニウムヘキサフルオロフォスフェート]−Ｍｗｔ＝３８０
Ｐｎ２１６−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）₂−ＣＯＯＨ −Ｍｗｔ＝４５８
ＮＭＭ − Ｎ−メチルモルフォリン −Ｍｗｔ＝１０１
ＴＦＴＰ − テトラフルオロチオフェノール −Ｍｗｔ＝１８２
ＤＭＦ（1.0ｍＬ）中のＰｎ２１６酸（10ｍｇ、0.022ｍｍｏｌ）に
ＨＡＴＵ（8.3ｍｇ、0.022ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（0.7ｍＬ、0.066ｍｍｏｌ
）を添加する。その混合物を５分間攪拌し、ＴＦＴＰ（0.022ｍｍｏｌ、4ｍｇ）を添加する。その溶液を３０分間攪拌し、その後、２０％アセトニトリルを含む水（３ｍｌ）で希釈し、その生成物を逆相クロマトグラフィーで精製する。収率は６ｍｇで、所望の生成物は続いて冷凍乾燥する。
【０１２０】
ｅ）Ｃｙｓ２と４、Ｃｙｓ８と１０を繋ぐジスルフィド結合を有するペプチドベクター ＮＨ２−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−ＯＨの合成
【化１７】
このペプチドは、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙワン樹脂（Novabiochem）から開始するＡＢＩ４３３Ａ自動ペプチド合成で、１ｍｍｏｌのアミノ酸カートリッジを使用して0.1ｍｍｏｌ規模で合成する。システイン残基２および４は、トリチル保護を用いてＳ保護し、一方８および１０はアセトアミドメチル（Ａｃｍ）保護で保護する。アミノ酸は、結合する前にＨＢＴＵによって予め活性化する。ＴＩＳ（５％）、Ｈ２Ｏ（５％）、およびフェノール（２．５％）を含むＴＦＡ中に２時間おき、ペプチドと側鎖保護基（Ａｃｍを除く）を樹脂から同時に除去する。
【０１２１】
作業の後、１００ｍｇの部分的に保護された粗製ペプチドが得られた。
【０１２２】
（ＨＰＬＣ分析：Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ、および、Ｂ＝ＣＨ₃ＣＮ／０．１％ＴＦＡで、２０分に渡って勾配０〜３０％Ｂ。カラムはＶＹＤＡＣ Ｃ１８ ２１８ＴＰ５４。検出はＵＶ２１４ｎｍ。生成物保持時間は１６．７分）。粗製生成物の一定量（２５ｍｇ）をプレップで精製する。ＨＰＬＣ Ｖｙｄａｃカラムによって１２．５ｍｇの精製粒子状ペプチド生成物が得られる。精製中間体を２．５％ＤＭＳＯ／ＴＥＡ溶液２０ｍＬに溶解し、Ｃｙｓ２とＣｙｓ４の間の第一のジスルフィド結合を形成する。４０分後、新しいピークが酸化生成物と一致し始める。そのペプチド溶液にアニソール（０．０２ｍＬ）を添加し、６０℃で５０分間温める。過剰のＴＥＡを真空下で除去し、続いてジエチルエーテルを添加して生成物を沈殿させる。さらにプレップを行う。ＨＰＬＣの工程を行い、精製生成物を集めて凍結乾燥する。分子量を確認するためにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析を使用し、可能性のある他の２つのジスルフィド異性体を一緒に投入して、分子量が同一であることを確認する。
【０１２３】
ｆ）化合物１の合成
上記ｅ）で得られたペプチドと、上記ｄ）で得られたＰｎ２１６活性エステルを１：２の重量比でＤＭＦに溶解する。２日間攪拌したまま反応させる。その後混合物を水で飽和し、所望の生成物を逆相ＨＰＩＣで精製する。
【０１２４】
例２：[Ｃｙｓ^2-4，^8-10]類似体
ａ）ＣｌＣＨ₂ＣＯ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨの合成
【化１８】
ＡＢＩ４３３Ａ自動ペプチド合成機で、１ｍｍｏｌアミノ酸カートリッジを用いて、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ワン樹脂から開始しペプチドを０．２５ｍｍｏｌスケールで合成する。そのアミノ酸は、結合の前にＨＢＴＵを使って予め活性化しておく。無水クロル酢酸ＤＭＦ溶液を使用し、３０分間、最後のＮ−末端クロロアセチレーションを行う。
【０１２５】
ＴＩＳ（５％）、Ｈ₂Ｏ（５％）およびフェノール（２．５％）を含むＴＦＡ中で２時間、ペプチドと側鎖保護基（ｔＢｕを除く）を同時に樹脂から取り除く。２６０ｍｇの粗製ペプチドが得られる。（ＨＰＬＣ分析：Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡおよびＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡで、１０分に渡って勾配５〜５０％Ｂ、カラムはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μＣ１８（２）５０ｘ４．６ｍｍ、流量は２ｍＬ／分、検出はＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間は６．５分。さらに、マススペクトルを使って、生成物の特性を調べた。期待値はＭ＋Ｈ １３４８．５、実測値は１３４８．５であった。
【０１２６】
ｂ）環状[ＣＨ₂ＣＯ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ]−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨの合成
【化１９】
１００ｍｇのＣｌＣＨ₂ＣＯ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨを水／アセトニトリル中に溶解する。その混合物をアンモニア溶液でｐＨ８に調製し、２４時間攪拌する。
【０１２７】
粗製ペプチドが得られる。（ＨＰＬＣ分析：Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ、および、Ｂ＝ＣＨ₃ＣＮ／０．１％ＴＦＡで、１０分に渡って勾配５〜５０％Ｂ。カラムはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ３μ Ｃ１８（２）５０ｘ４．６ｍｍ。流量２ｍＬ／分。検出はＵＶ２１４ｎｍ。生成物保持時間は１６．３２分。さらに、マススペクトルを使って、生成物の特性を調べた。期待値はＭ＋Ｈ １３１２．５、実測値は１２１２．６であった）。
【０１２８】
ｃ）[Ｃｙｓ^7-9]環状[ＣＨ₂ＣＯ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ]−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨの合成
【化２０】
４０ｍｇの環状[ＣＨ₂ＣＯ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ]−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨをアニソール（２００μＬ）、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）およびＴＦＡ（５０ｍＬ）中で３０分間処理し、真空中でＴＦＡを取り除く。ジエチルエーテルを加えてペプチドを沈殿させる。
【０１２９】
分取用ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ５μ Ｃ１８（２）２５０ｘ２１．２０ｍｍカラム）による粗製物質（４０ｍｇ）の精製を、０−３０％のＢを使って行った。ここで、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ、および、Ｂ＝ＣＨ₃ＣＮ／０．１％ＴＦＡで、流量１０ｍＬ／分で４０分に渡って行った。
【０１３０】
凍結乾燥の後、１４．３ｍｇの精製物質が得られる。（ＨＰＬＣ分析：Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ、および、Ｂ＝ＣＨ₃ＣＮ／０．１％ＴＦＡで、１０分に渡って勾配０〜３０％Ｂ。カラムはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ３μ Ｃ１８（２）５０ｘ４．６ｍｍ。流量は２ｍＬ／分、検出はＵＶ２１４ｎｍ。生成物保持時間は６．１０分。さらに、マススペクトルを使って、生成物の特性を調べた。期待値はＭ＋Ｈ １１９８．４、結果は１１９８．５であった）。
【０１３１】
ｄ）[Ｃｙｓ^7-9]環状[ＣＨ₂ＣＯ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ]−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨとＰｎ２１６コハク酸の接合
【化２１】
[Ｃｙｓ^7-9]環状[ＣＨ₂ＣＯ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ]−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨのＰｎ２１６キレート活性エステルとＮ−メチルモルフォリンをＤＭＦに溶解する。ＲＰ−ＨＰＬＣでモニタリングして、その混合物が完全に接合するまで攪拌する。その反応物を調製ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製し、得られた精製物質を凍結乾燥する。
【０１３２】
生成物はＲＰ−ＨＰＬＣとマススペクトルで特性を試験する。

Claims (9)

1. 次の一般式（Ｉ）の化合物。
   式中、
   ｒ＝０又は１、ｐ＝０又は１であって、ｒ＋ｐ＝１であり、
   ｒ＝０のとき、Ｒ₁は−（ＣＨ₂）_n−ＣＯ−又は−（ＣＨ₂）_n−Ｃ₆Ｈ₄−ＣＯ−であり（ｎ＝１〜５の整数である。）、
   ｒ＝１のとき、Ｒ₁はシステインであり、
   Ｘ₁は一つの結合、又は１〜５個のアミノ酸、又はインビボ撮像に適したレポーターに結合したもしくは結合できるキレートで官能化されたアミノ酸であり、
   Ｘ₂ 、Ｘ₄ 及びＸ ₆ は、それぞれ独立して、システイン、ホモシステイン、アスパラギン酸及びリジンから選択される閉環結合を形成できるアミノ酸であり、
   Ｘ₃はアルギニン又はＮ−メチルアルギニンであり、
   Ｘ₅は疎水性アミノ酸であり、
   Ｘ ₇は一つの結合、又は１〜１０個のアミノ酸、又は１以上のエチレングリコール単位を含む１〜１０個のアミノ酸であり、
   Ｘ₈は、金属放射性核種又はインビボ撮像に適するレポーターに結合したもしくは結合できるキレート、又は−ＮＨ₂であるか、又は存在せず、
   Ｒ ₁ とＸ ₂ の間又はＸ ₄ とＸ ₆ の間の架橋の一つはジスルフィド結合であり、
   前記アミノ酸が天然Ｌ−アミノ酸を意味し、
   式（Ｉ）の化合物はＸ ₁ 又はＸ ₈ のいずれかに１個のキレートを含んでいる。
2. Ｒ ₁ がシステインである、請求項１記載の化合物。
3. Ｘ ₆ がシステイン又はホモシステインである、請求項１又は請求項２記載の化合物。
4. Ｘ ₅ がフェニルアラニン、チロシン、ヨードチロシン、ジヨードチロシン又はナフチルアラニンである、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の化合物。
5. 次の式（ＩＩ）によって定義される請求項１記載の化合物。
   式中、
   Ｃｙｓはシステインであり、
   Ｘ₁´は、アスパラギン酸、チロシン、チロシン−アスパラギン酸、リジン又はアセチルリジンから独立に選択される１〜３個のアミノ酸であり、
   Ｘ₃は式Ｉで定義した通りであり、
   Ｘ₅´はフェニルアラニン、チロシン、３−ヨード−チロシン又はナフチルアラニンであり、
   Ｘ₇´はグリシンであり、
   Ｘ₈´は金属放射性核種と結合したキレートであって、該キレートの構造が、以下のいずれか
   又はこれらのキレートのＮ₃Ｓ又はビスオキシム型であり、
   式ＩＩに示す通り、一つの架橋はチオ結合を含み、もう一つの架橋はジスルフィド結合を含む。
6. 薬剤的に許容される１種以上の助剤、賦形剤又は希釈材と共に、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の化合物又はそれらの酸付加塩の有効な量を含む医薬組成物。
7. ヒト又はヒト以外の動物の身体に投与して、その身体の少なくとも一部の画像を発生させることを含む身体のコントラスト強調画像を発生させるための造影剤として用いられる、請求項６記載の医薬組成物。
8. 血管形成に関する症状と闘うための薬剤を用いたヒト又はヒト以外の動物対象の治療効果をモニタリングする方法に使用される造影剤の製造のための請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の化合物の使用であって、前記方法が前記対象に式Ｉの化合物を投与することと、前記化合物の取り込みを検出することとを含み、前記投与及び検出が前記薬剤を用いた治療の前後及び最中に繰り返して行われる、使用。
9. 請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の化合物の使用であって、動物対象に造影剤を投与して前記対象の少なくとも一部の画像を発生させることを含む診断方法に使用される造影剤の製造のための使用。