JPH07501687A - ボレリア・ブルグドルフェリのサブグループのｏｓｐ ａ 蛋白、それをコードしている遺伝子およびワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ボレリア・ブルグドルフェリのサブグループのＯ８Ｐ　Ａ　蛋白、それをコード している遺伝子およびワクチン 本発明は、新規抗原、その製造法、それを含有する組成物、およびヒトおよび他 の動物のライム病の予防、治療ならびに診断方法に関する。詳細には、ライム病 原スピロヘータであるボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ　ｂｕｒ ｇｄｏｒｆｅｒｉ）由来の新規血清型／遺伝子型外表面蛋白（ｏｕｔｅｒ　５ｕ ｒｆａｃｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ、　Ｏｓ　ｐ　Ａ）、および１種以上のサブグルー プのボレリア・プルグドルフエリに基づくワクチンならびに診断試薬を開示する 。

ヒトのライム病は、主としてイクソデス・チフス（Ｉｘｏｄｅｓ　ｔｉｃｋｓ） によりヒトにうつされるボレリア・プルグドルフエリによって引き起こされる慢 性の進行性疾病である。該疾病は、多くの器管、骨格筋系のみならず皮膚、心臓 、肝臓、中枢および末梢神経系を明確に攻撃する。

ライム病自体は、米国において、ベクターにより運搬される最もありふれた感染 症であり、南極を除く各大陸において報告されている。

ボレリア・ブルグドルフエリの多くの群が単離され、その主要な外表面蛋白（Ｏ ｓｐ　Ａ）が、ライム病に対して用いる有効なワクチンの候補として提案されて いる。例えば、シンビコム（ＳＩＭＢＩＣＯＮ）社の国際特許出願ＷＯ９０１０ ４４１１には、ボレリア・ブルグドルフェリＢ３１由来のＯｓｐ　Ａ蛋白のクロ ーニングおよび発現、ならびにそのワクチンとしての利用が開示されている。エ ム・エム・サイモン（Ｍ、　Ｍ、　Ｓｉｍｏｎ）およびその共同研究者は、ボレ リア・プルグドルフエリＺＳ７由来のＯｓｐ　Ａをクローニングし、発現させ（ 欧州特許出願第９０１１７９４３．２号、公開第０４１８　８２７号）、受動免 疫された５ＣＩＤマウスにおいて抗体を誘導する防御的能力を示した（プロノー ディンングス・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス、ニーニスエ イ（ＰＮＡＳ）　第８７巻（１９９０年）３７６８〜３７７２頁）。フラベル（ Ｆｌａｖｅｌｌ）および共同研究者（サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　（１９９ １年）第２５０巻５５３〜５５６頁）は、ボレリア・ブルグドルフエリＮ４０由 来のＯｓｐ　Ａに関する遺伝子をクローニングし、発現させ、Ｃ３Ｈ／Ｈｅマウ スにおけるその防御的効力を示した上記同定されたすべてのボレリア・プルグド ルフエリ単離菌は、密接に関連しているようである。しかしながら、本発明者ら はついに、異なる場所および起源から単離された５５種のスピロヘータを、一連 の免疫学的、生化学的ならびに分子生物学的手法を用いて分析することにより、 ６つのサブグループのボレリア・ブルグドルフエリを同定した。異なるサブグル ープのボレリア・プルグドルフエリ単離閑に関する知見は、ライム病に対する有 効なワクチン接種および診断両方に関して重要な意味を持つ。種がＮ４０である 菌株に向けられたＥＬＩＳＡ診断法は、その多くが他のサブグループと交差反応 しないかまたはごく一部としか交差反応しなかった。同様に、例えばＮ４０由来 のＯｓｐ　Ａのみに基づくワクチンは、異なるサブグループのボレリア・ブルグ ドルフエリに対しては最適な防御反応を提供しなかった。

本発明者らは、Ｏｓｐ　Ａ配列のサザン・プロッティングおよびＰＣＲ増幅、な らびにそれら自身のアミノ酸およびヌクレオチド配列の相違、そして０ｓｐＡに 対するモノクローナル抗体についての反応性にも基づき、さらに５種のボレリア ・ブルグドルフエリのサブグループを同定した。

ボレリア・ブルグドルフエリがかかる異質性を有するという驚Ｘべき発見は、あ る群のボレリア・プルグドルフエリ由来のある種のＯｓｐ　Ａに基づくワクチン または診断は、別の群のボレリア・プルグドルフェリの感染に対しては検出でき ないかあるいは防御できないであろうという理由で、ライム病に対するワクチン およびライム病検出に関する診断試薬について重要な意味を持つ。実際に、本発 明者らは、組換えＯｓｐ　Ａまたは密接に関連している群の範囲内にある生存あ るいは死滅した生物により得られた抗Ｏｓｐ　Ａ抗体によって防御が行われ得る としても、異なる群の生物により攻撃された場合には防御が全く見られないかま たはほんの一部しか見られない。

代表的なＺＳ７、Ｂ３１、Ｎ４０を含む１番目のサブタイプを、本明細書では１ 群と呼ぶ（別の命名法では１群をΔ群と呼ぶ）。

２番目のサブグループ（以下ＩＩ群という）（Ｂ群としても知られる）を本明細 書にて開示し、橿ＺＱＩがその代表である。この種を、ブラウンシュバイク（Ｂ ｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ）のマシエルオーデルヴ工−り（Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅ ｒｗｅｇ）　９１Ｂ　Ｄ−３３００のＤＳＭ　（ドイツチェ・ザンムルンク・フ ォノ・ミクロオルガニスメン・ウントーツエルクルトウーレン（Ｄｅｕｔｓｃｌ ＋ｅ　Ｓａ＋ｅｍｌｕｎｇ　ｖｏｎ　ｉｌｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ　ｕｎ ｄＺｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ）　）に、１９９１年７月１１日付けで寄託し、受 託番号ＤＦＳＭ６６０６を与えられた。この群は、１群と多くの点で異なる。

まず、１群の代表的な菌株と比較した場合の２０１株の分析により、ＺＱＩは少 なくとも２種の独特のプラスミド（１８および１４Ｋｄ）を有することが示され る。ついで、ポリアクリルアミドゲル電気泳動により試験した場合、ＺＱＩ由来 のＯｓｐ　Ａは見掛は上３２Ｋｄの分子量を有する。

また、ＬＡ２、Ｌ２６、ＬＡ２８、ＬΔ３３と命名された抗体のごとき１群のＯ ｓｐ　Ａに特異的な種々のモノクローナル抗体は、ＩＩ群由来のＯｓｐ　Ａと反 応しない。ＬＡ２およびＬＡ２６抗体は既知であり、欧州特許出願ＥＰＯ４１８ ８２７に記載されている。ＬＡ２を生産するハイブリドーマを、ウィルドジャー （Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ）　・ポートンダウン（Ｐｏｒｔｏｎ　Ｄｏｗｎ）　Ｓ　 Ｐ　４０　Ｊ　９のヨーロピアン・コレクション・オブ・アニマル・セル・カル チャーズ、パブリック・ヘルス・ラボラトリ−１サービシズ（Ｅｕｒｏｐｅａｎ 　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｍｎｉｍａｌ　ｃｅｌＬ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ 。

Ｐｕｂｌｉｃ　ｈｅａｌｔｈ　１ａｂｏｒａｔｏｏｒｙ　５ｅｒｖｉｃｅｓ）に 、１９８９年９月１３日に、受託番号ＥＣＡＣＣ８９０９１３０２の下で寄託し た。１．、　Ａ、　２６を生産するハイブリドーマを、受託番号９００５４０６ の下、同じ機関に１９９０年６月２８日に寄託した。

しかしながら、他のモノクローナル抗体ＬＡ３１．１は、サブグループＩおよび ＩＩのＯｓｐ　Ａ種と反応し、異なるサブグループのＯｓｐ　Ａ種の間に共通の エピトープが存在することが示唆された。

本発明者らは、ＰＣＲ増幅によりＩＩ群の菌株由来のＯｓｐ　ＡのＤＮＡの特徴 付けも行った。２組のＯｓｐ　Ａブライ７−（ｐｒｏｓｐ　Ａｌ−ｐｒｏｓｐＡ ４およびｐｒｏｓｐ　Ａｌ−ｐｒｏｓｐ　Ａ２と命名）を用いた。

該プライマーは以下の配列を有し、 それぞれ、ＺＳ７のＯｓｐ　Ａの１３８〜１６０番目のヌクレオチド（ｐｒｏｓ ｐ　Ａｌ）　、６１１〜６３８番目（ｐ　ｒｏｓ　ｐ　Ａ４）および７５９〜７ ７８番目（ｐｒｏｓｐ　Ａ２）の位置のヌクレオチドに対応している。ｐｒｏｓ ｐ　Ａ１およびｐｒｏｓｐ　Ａ２をプライマーとして用いた場合に、ＩＩ群はＰ ＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）増幅がうまく行かないが、１群のボレリア・ブル グドルフェリの総ＤＮＡは反応がうまく行くという点で、ＩＩ群のボレリア・プ ルグドルフェリの総ＤＮＡは１群の総ＤＮＡと区別される。対照的に、ｐｒｏｓ ｐ　Ａｌおよびｐｒｏｓｐ　Ａ４をプライマーとして用いた場合、１群およびＩ Ｉ群のＤＮＡは両方とも、ポリメラーゼ連鎖反応を受ける。

これらの結果は、ＩＩ群のボレリア・ブルグドルフエリは、１群とは異なる０ｓ ｐＡ配列を有することを示す。

同様に、ＩＩ群のＯｓｐ　ＡのＤＮＡは、ＺＳ７のＯｓｐ　Ａ配列をプローブと して用いるサザン・プロッティングにより、１群のＯｓｐ　ＡのＤＮＡと区別で きる。ＩＩ群のボレリア・ブルグドルフェリのゲノムＤＮＡを制限酵素Ｈ４ｎｄ ＩＩＩで消化すると、１群のものとは異なるバンドのパターンが見られる。

例えば、１群のある株は、１．２Ｋｂおよび０．３Ｋｂの２つのハイブリダイゼ ーション断片を示すが、ＩＩ群のある株は０．９Ｋｂおよび０．４Ｋｂの２つの 断片を示す。

また、ＩＩ群由来のＯｓｐ　Ａに対する抗血清で５ＣＩＤマウスを受動免疫した 場合、１群のボレリア・ブルグドルフエリの攻撃に対して防御を示さないであろ う。

結局、２３７株のＯｓｐ　Ａの配列と比較した場合、２０１株（すなわちＩＩ群 の株）のＯｓｐ　ＡのＤＮＡおよびアミノ酸配列（配列番号：１およおび２）は 、ＤＮＡおよびアミノ酸両方のレベルにおいて１群およびＩＩ群の株の間の実質 的な相違を示す。

異種の攻撃に対して驚くほど防御不能であることは、１群の生物由来の単一〇ｓ ｐ　Ａに基づくワクチンは、ＩＩ群のボレリア・ブルグドルフエリによる感染に 対して効果がないであろうし、またその逆も言える。したがって、ＩＩ群の感染 に対して防御を行うワクチンが必要である。

したがって本発明は、ｐｒｏｓｐ　Ａｌ−Ａ４プライマーを用いるとポリメラー ゼ連鎖反応が起こり、ｐｒＯｓｐＡｌ−Ａ２を用いると起こらないということで 特徴付けられる、ボレリア・プルグドルフエリ由来のＯｓｐ　Ａをコードしてい るＤＮＡ配列を提供する。また本発明はさらに、そのＤＮＡによりコードされて いる精製または単離されたＯｓｐ　Ａを提供する。

好ましくは、本発明Ｏｓｐ　Ａは、モノクローナル抗体ＬＡ２またはＬＡ２６と 反応しないものとする。最も好ましくは、本発明Ｏｓｐ　Ａは、標準として分子 量マーカーを用いるＳＤＳ電気泳動により３２ｋＤａの相対分子量を有するもの とする。

好ましくは、Ｏｓｐ　ＡはＺＱＩまたはＮＥＩＩＨあるいは他のＩＩ群の抹由来 である。

好ましくは、該蛋白は、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動により測定した 場合、少なくとも７０％の純度であり、詳しくは、少なくとも８０％の純度であ り、最も好ましくは、少なくとも９５％の純度とする。好ましくは、０ｓｐＡ抗 原は、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動により測定した場合、相対分子量 ３２ｋＤａを有する。好ましくは、該Ｏｓｐ　Ａ抗原は、モノクローナル抗体Ｌ Ａ２と反応しないものとする。

本発明のもう１つの態様において、ＺＱ１由来のＯｓｐ　ＡをコードしているＤ ＮＡ配列と実質的に同一のＤＮＡ配列が提供される。実質的に同一とは、配列番 号・１に示すＺＱＩのＯｓｐ　Δ配列と少なくとも８５％の相同性があり、好ま しくは９０％の相同性があることを意味する。成熟蛋白は１７７番目位置から始 まり、好ましくは、本発明が、配列番号・２に示す成熟蛋白をコードしている配 列と少なくとも９５％の相同性を有するものとする。

別の具体例において、配列番号＝２に示す配列と実質的に同一なアミノ酸配列を 含むＯｓｐ　Ａが提供される。アミノ酸配列に関して実質的に同一なる語は、示 された蛋白の配列に対し少なくとも８５％、好ましくは９０％の相同性を有し、 成熟蛋白に対して少なくとも８５％の相同性を有するものとする。

また本発明者らは、同じ生化学的および免疫学的手法を用いて、１群およびＩＩ 群に無関係な他の群のボレリア・ブルグドルフエリを見いだした。ＩＩＩ群の特 徴を有する２種の単離菌を、１９８５７および２１０３８と命名する。かがる菌 株は、ＩＩ群の菌株と同様に、ｐｒＯｓｐ　Ａｌ−Ａ２でのＰＣＲ条件下で反応 するがｐｒｏｓｐＡｌ−Ａ４では反応しない。しかしながら、ＺＳ７プローブお よび制限酵素Ｈ４ｎｄＩＩＩを用いたサザン・プロッティングにより分析した場 合、そ　。

れらはＩＩ群の株とは異なる。かがる分析により、４、Ｏｋｂおよび０．５ｋｂ のハイブリダイゼーション断片が示される。さらにそれらはモノクローナル抗体 ＬＡ２６と反応するがＬＡ１２とは反応しない。

本発明者らはついに、ＰＣＲ手法を用いて、１９８５７株のＯｓｐ　Ａをコード しているＤＮＡ配列を配列決定し、発現させた。該ＤＮＡおよびアミノ酸配列を 、配列番号＝３および４に示す。他の群由来の配列と比較すると、該。ｓｐＡは 、ＤＮＡおよびアミノ酸のレベルで、他のサブグループ由来のＯｓｐ　Ａと約６ ５％の相同性を有する。

したがって、本発明は、ＤＮＡ配列が配列番号：３のＤＮＡ配列と実質的に同一 であるＯｓｐ　Ａ蛋白をコードしているＤＮＡ配列を提供する。さらなる具体例 において、配列番号：４に示された蛋白と実質的に同一なアミノ酸配列を有する Ｏｓｐ　Ａ蛋白が提供される。

配列番号：３および４に示された配列に関し、本明細書で用いる実質的に同一な る語は、少なくとも７０％、好ましくは８０〜８５に、より好ましくは８５〜９ ５％の相同性を意味する。

スウェーデンの単離菌ＡＣＡ−１で例示されるボレリア・ブルグドルフェリの４ 番目のサブグループ（１１群）（またはＤ群）は、ｌ５ＩＩまたはＩＩＩ群のい ずれとも異なる（エム・ジョンソン（Ｍ、　Ｊｏｎｓｓｏｎ）ら、インド・コン フ・ライム・ボレリオシス（Ｉｎｔ、Ｃｏｎｆ、Ｌｙｍｅ　Ｂｏｒｒｅｌｉｏｓ ｉｓ）　、１９９０年）。この群は、ｐｒｏｓｐ　Ａｌ−Ａ２およびｐｒＯｓｐ 　Ａｌ−Ａ４のいずれともＰＣＲを起こさない。

それらのＯｓｐ　Ａは、モノクローナル抗体ＬＡ２６と反応するが、ＬＡ２とは 反応しない。

ＺＳ７プローブおよび制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩを用いたサザン・プロッティング 分析により、約１．７ｋｂの単一ハイブリダイゼーション断片が示される。

ＩＶ群由来の単離または組換え型のＯｓｐ　Ａは、ワクチンまたは診断組成物と 同様、本発明の一部を構成する。

同じ生化学的手法を用いることにより、本発明者らは、７群およびＶＩ群の代表 的な菌株を同定した。７群のある単離株は２００４７として知られ、ＶＩ群のあ る代表的な株はＳ９０として知られる株である。

７群およびＶＩ工群来の単離Ｏｓｐ　Ａもまた、本発明の一部を構成する。

また本発明は、１１群、ＩＩＩ群、ＩＶ群および７群またはＶＩ群のボレリア・ ブルグドルフェリ由来のＯｓｐ　Ａの抗原誘導体に関する。

本明細書に用いる抗原誘導体なる語は、ＩＩ群、ＩＩＩ群、ＩＶ群、７群または ＶＩ群のボレリア・ブルグドルフェリでの哺乳類宿主の感染により生じる抗体と 免疫学的に反応性を有し、好ましくはＬＡ２と命名されたモノクローナル抗体と 反応しない切形蛋白またはハイブリッド蛋白のごとき分子を包含する。かがる誘 導体を、アミノ酸の置換または転移、あるいはその化学修飾により調製してもよ い。

サブユニットワクチンの製造に有用でありうる該蛋白の抗原断片を、適当な遺伝 子断片の発現により、あるいは例えばメリフィールド合成（ザ・ペブタイズ（Ｔ ｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）第２巻、３頁、ニューヨークのアカデミツク・プレス （＾ｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）　）を用いるペプチド合成により調製しても よい。

本発明の抗原誘導体はハイブリッドであってよく、すなわちＯｓｐ　Ａおよび／ または０ｓｐＢを含む池のボレリア・ブルグドルフェリの抗原の１つまたはそれ 以上のエピトープ、あるいは他の病原体由来の他の抗原であってよい。別法とし て、本発明の抗原誘導体を、Ｂ型肝炎皮膜またはコア抗原のごときキャリアーポ リペプチド、あるいはアジュバントの場合に免疫刺激性を有するかもしくはＯｓ ｐ　Ａ蛋白に対する免疫応答性を高めるかまたは該蛋白あるいはその誘導体を発 現、精製あるいは処方するのに有用な別のキャリアーに融合させることができる 。

また本発明は、グルタルアルデヒドのごとき慣用的な架橋試薬を用いて巨大分枝 に化学的に結合（アールリング（Ｇｅｅｒｌｉｎｇ）ら、１９８８年、ジャーナ ル・イムノロ・メソッズ（Ｊ、　Ｉｌｕａｕｎｏ１．　Ｍｅｔｈｏｄｓ）第１０ ６巻２３９〜２４４頁）された場合、Ｏｓｐ　Ａ蛋白またはその抗原誘導体を包 含する。

詳細には、好ましい誘導体は、インフルエンザの非構造蛋白ＮＳＩおよび０ｓｐ Ａ誘導体のハイブリッド融合蛋白である。これらを組換えＤＮＡ手法により、イ ー・コリ（Ｅ、ｃｏｌｉ）において高収率でうまく生産することができる。

したがって、本発明は、インフルエンザ由来のＮＳＩ蛋白のＮ末端部分に融合し たＯｓｐ　Ａ蛋白を提供する。好ましくは、融合蛋白のＯｓｐ　Ａ部分を切形し て少な（とも疎水的なシグナル配列を除去する。より好ましくは、シグナル配列 を表すＮ末端の１６個のアミノ酸およびＯｓｐ　Ａの成熟形態の最初のアミノ酸 であるシスティン残基を欠くものとする。

好ましくは、融合蛋白のＮＳ１部分が、遺伝子のＮ末端の３ないし８１番目のア ミノ酸からなるものとする。蛋白発現レベルが上昇するという理由で、融合蛋白 のＮＳ１部分が長いほど好ましい。

未修飾の組換えＯｓｐ　Ａとは対照的に、本発明のこれらのハイブリッド蛋白を 非凝集性蛋白として可溶性画分から回収でき、しかも高レベルで発現させること ができる。該蛋白は、未修飾のＯｓｐ　Ａに対して生成したモノクローナル抗体 と反応する能力を有し、例えばマウスやウサギのような実験動物において防御的 な免疫反応を起こす能力を有する。

本発明の具体例において、例えば欧州特許ＥＰＯ４１８−８２７に開示された２ ３７株またはハウ（Ｈｏｖｅ）ら、サイエンス第２２７巻６４５頁（１９８５年 ）に記載された８３１株、あるいはフラベル（Ｆｌａｖｅｌｌ）らにより記載さ れたＮ４０株由来のＯｓｐ　Ａのごとき１群として知られるＯｓｐ　Ａの群に由 来するＮＳＩ　Ｏｓｐ　Ａ融合蛋白が提供される。

本発明のさらなる具体例において、そのＯｓｐ　ＡがＩＩ群として知られる株由 来であるＮ５Ｉ−Ｏｓｐ　Ａが提供される。例えば、本明細書に記載のボレリア ・ブルグドルフエリＺＱＩ株由来のＯｓｐが挙げられる。

本発明のさらに別の具体例において、Ｏｓｐ　ＡがＩＩＩ群として知られる株由 来であるＮ５Ｉ−Ｏｓｐ　Ａが提供される。例えば、１９８５７株由来のものが 挙げられる。本発明はさらに、ＩＶ群のＮ５Ｉ−Ｏｓｐ　（例えばＯｓｐ　Ａが Ａｃ３１株由来である）を提供する。

さらに本発明は、本明細書に記載のＮ５Ｉ−Ｏｓｐ　Ａ融合蛋白をコードしてい るＤＮＡ配列を提供する。詳細には、本発明は、Ｎ５Ｉ−Ｏｓｐ　Ａ蛋白および 本明細書に添付した配列番号５ないし１２に示した蛋白自体をコードしているＤ ＮＡ配列を提供する。

本発明蛋白を、他のＯｓｐ　Ａ蛋白を生産するための当該分野の標準的方法によ り、既知の株から生産してもよい。例えば、組換えＤＮＡ手法を用いて０ｓｐＡ をイー・コリ中で生産させることができる。詳細には、蛋白を、全長にわたる未 成熟蛋白または成熟蛋白として生産してもよい。蛋白を、Ｎ５−１融合蛋白のご とき融合蛋白として発現させてもよい。

本発明蛋白（例えばＯｓｐ　Ａ　ＺＱｌまたはＯｓｐ　Ａ　１９８５７）をコー ドしているＤＮＡ配列を、ディー・エム・ロバーツ（Ｄ、　Ｍ、　Ｒｏｂｅｒｔ ｓ）ら（）くイオケミストリ−（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）第２４巻５０９０ −５０９８頁（１９８５年））により記載された酵素的ライゲーション、インビ トロ酵素的ポリマー化、まｔこ（ま例えば熱安定性のあるポリメラーゼを用いた ＰＣＲ法、あるいはこれらの処方の組み合わせのごとき標準的ＤＮＡ合成手法を 用いて合成することができる。

ＤＮＡポリメラーゼ■（フレノウフラグメント）のごときＤＮＡポリメラーゼを 用い、必要なヌクレイツク３りん酸（ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ ）を含有する適当な緩衝液中で、１０〜３７℃、通常は５０μｌまたはそれ以下 の体積としてＤＮＡの酵素的ポリマー化を行ってもよい。Ｔ４ＤＮＡリガーゼの ごときＤＮＡリガーゼを用い、０．０５Ｍ　Ｔｒ　ｉ　ｓ　（ｐＨ７，４）　、 ０．０１Ｍ　ＭｇＣ＋、、０．０１Ｍ　ジチオスレイトール、１ｍＭ　スペルミ ジン、１ｍＭ　ＡＴＰおよび０．１ｍｇ／ｍｌウシ・血清アルブミンのごとき適 当な緩衝液中、４℃ないし室温において、通常は５０μｌまたはそれ以下の体積 としてＤＮＡ断片の酵素的ライゲーションを行ってもよい。慣用的なリン酸トリ エステル、亜りん酸または固相法を用いたホスホラミダイト化学により、ＤＮＡ ポリマーまたは断片の化学合成を行ってもよい。固相法は、「ケミカル・アンド ・エンザイマティック・シンセシス・オブ・ジーン・フラグメンッーア・ラボラ トリ−・マーーユアル（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　５ｙ ｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　Ｇｅｎｅ　Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ−＾１ａｂｏｒａｔｏｒ ｙ　Ｍａｎｕａｌ）　Ｊ　（エイチ・ジー・ガラセン（Ｈ，Ｇ、　Ｇａ５５ｅｎ ）およびエイ・ラング（＾ルａｎｇ編）、ワインハイム（Ｗｅｉｎｈｅｉｍ）の ヘミ−（Ｃｈｅｍｉｅ）出版（１９８２年）、または池の科学出厨物（例えばエ ム・ジエイ・ガイド（Ｉｌ、　Ｊ、　Ｇａ１ｔ）、エイチ・ダブリユウ・ディー ・マテス（■、　１．　Ｄ、　Ｍａｔｔｈｅｓ）　、エム・サイン（Ｍ。

Ｓｉｎｇｈ）　、ビー・ニス・スポラト（Ｂ、　Ｓ、　５ｐｏｒａｔ）およびア ール・シー・ナトマス（Ｒ，Ｃ，Ｔｉｔｍａｓ）、ヌクレイツク・アシッズ・リ サーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｒａｅｃｈ）　。

１９８２年、第１０巻６２４３頁；ビー・ニス・スポラト（Ｂ、　Ｓ、　５ｐｏ ｒａｔ）およびダブリユウ・パンワース（Ｗ、Ｂａｎｎｗａｒｔｈ）　、テトラ ヒドロン・レターズ、１９８３年、第２４巻５７７１頁；エム・ディー・マテウ チ（Ｍ、　Ｄ、　Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ）およびエム・エイチ・カルサーズ（Ｍ、 　Ｈ，Ｃａｒｏｔｈｅｒｓ）　、テトラヒドロン・レターズ（Ｔｅｔｒｏｈｅｄ ｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ）　、１９８９年、第２１巻７１９１頁；エム・ディー ・マテウチおよびエム・エイチ・カルサーズ、ジャーナル・オブ・ザ・アメリカ ン・ケミカル・ソサエティー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａ ｎ　５ｏｃｉｅｔｙ）　、１９８１年。

第１０３巻３１８５頁；ニス・ビー・アダムス（Ｓ、　Ｐ、　Ａｄａｍｓ）ら、 ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサエティー、１９８３年、第 １０５巻６６１頁、エヌ・ディー・シンハ（Ｎ、Ｄ、５ｉｎｈａ）　、ジエイ・ ビニルナト（Ｊ、　Ｂｉｅｒｎａｔ）、ジェイ・マクマヌス（Ｊ、　ＭｃＭａｎ ｎｕｓ）およびエイチ・コスタ−（ｌ（、Ｋｏｓｔｅｒ）ヌクレイツク・アシッ ズ・リサーチ、１９８４年、第１２巻４５３９頁：およびエイチ・ダブリユウ・ ディー・マテスら、エムポー・ジャーネル（ＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ）　、１９ ８４年、第３巻８０１頁）に記載されている。

別法として、既知手法（例えばｍＲＮＡを逆転写して相補的ｃＤＮＡ鎖を生成さ せる）および市販ｃＤＮＡキットを用いて、暗号配列をボレリア・ブルグドルフ ェリのｍＲＮＡから誘導することができる。

ジー・ウィンター（Ｇ、　１ｌｉｎｔｅｒ）ら、ネイチ＋　−（Ｎａｔｕｒｅ） 　、１９８２年、第２２９巻７５６〜７５８頁、またはシラー（Ｚｏｌｌｅｒ） およびスミス（Ｓ１１ｉｔｈ）　（１９８２年）、ヌクレイツク・アシッズ・リ サーチ、第１０巻６４８７〜６５００頁記載のように蛋白をコードしているＤＮ Ａの部位特異的変異法により、あるいはチャン（Ｃｈａｎ）およびスミス（Ｓｍ ｉｔｈ）　、　ヌクレイツク・アシッズ・リサーチ。

１９８４年、第１２巻２４０７〜２４１９頁、またはジー・ウィンターら、バイ オケミカル・ソサエティー・トランスフクションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、 Ｔｒａｎｓ、）　、１９８４年、第１２巻２２４〜２２５頁記載のように欠失変 異法により、０ｓｐＡの変異種をコードしているＤＮＡポリマーを調製してもよ い。

本発明の方法を、マニアナイス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら、モレキュラー・クロー ニングーアΦラボラトリーーマニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ −＾Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ）：コールド・スプリング・ハーバ− （Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　ｌ１ａｒｂｏｒ）　、１９８２〜１９８９頁記載の ごとき慣用的な組換え手法により行ってもよい。

詳細には、該方法は、 ｉ）蛋白あるいはその抗原誘導体をコードしているヌクレオチド配列からなるＤ ＮＡポリマーを宿主細胞中で発現できる、自己複製可能であるかまたは染色体に 組み込まれる発現ベクターを調製し、ｉｉ）該ベクターで宿主細胞を形質転換し 、１ｉｉ）該ＤＮＡポリマーを発現できる条件で該形質転換された宿主細胞を培 養して該蛋白を生成させ、 ｉｖ）該蛋白を回収する 段階からなっていてもよい。

本明細書に用いる「形質転換」なる語は、外来ＤＮＡを宿主細胞中に導入するこ とを意味する。このことは、例えばニス・エム・キンゲスマン（Ｓ、　Ｍ。

Ｋｉｎｇｓｍａｎ）およびエイ・ジエイ・キンゲスマン（＾、　Ｊ、　Ｋｉｎｇ ｓｍａｎ）編、［ジエネティック・エンジニアリング（Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｅｎｇ ｉｎｅｅｒｉｎｇ）　Ｊ　（英国オックスフォードのブラックウェル・サイエン ティフィック（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）出版、１９８８年 ）に記載された慣用的手法を用いた適当なプラスミドあるいはウィルスのベクタ ーでの形質転換、トランスフェクションまたは感染により達成される。「形質転 換された」または「形質転換体」なる語を、以後、対象とする外来遺伝子を有す るかまたは発現する得られた宿主細胞に用いる。

本発明発現ベクターは新規であり、本発明の一部を構成する。

宿主細胞に適合できるベクターを開裂させて未修飾のレプリコンを有する直鎮状 ＤＮＡセグメントを得、ライゲーションを行う条件下で該直鎖状セグメントを１ つまたはそれ以上のＤＮＡ分子（Ｏｓｐ　Ａ蛋白またはＮＳＩ　Ｏｓｐ　Ａ融合 蛋白のごときその誘導体をコードしているＤＮＡポリマーのような所望生成物を コードしている）に連結することにより、本発明に従って複製可能な発現ベクタ ーを調製してもよい。

よって、記載したように、ＤＮＡポリマーを前以て形成またはベクター構築の間 に形成してもよい。

一部には、宿主細胞が原核細胞であるか真核細胞であるかにより、ベクターの選 択を決定する。適当なベクターは、プラスミド、バクテリオファージ、ニスミド および組換えウィルスを包含する。

複製可能な発現ベクターの調製を、例えば上で引用したマニアナイスら記載の方 法により、ＤＮＡの制限的切断、ポリマー化およびライゲーションに適した酵素 でもって、慣用的に行ってもよい。

形質転換条件で本発明の複製可能な発現ベクターでもって宿主細胞を形質転換す ることにより、本発明の組換え宿主細胞を調製する。適当な形質転換条件は慣用 的なものであって、例えば上で引用したマニアナイスらの文献、あるいはディー ・エム・グローバー（Ｄ、　Ｍ、　Ｇｌｏｖｅｒ）　ＩＩＡ　ｒ　Ｄ　Ｎ　Ａク ローニング（開＾Ｃ１ｏｎｉｎｇ）　Ｊ第２巻（アイアールエル・プレス・リミ テッド（ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ　Ｌｉｍ１ｔｅｄ）　、１９８５年）に記載されて いる。

形質転換条件の選択を、宿主細胞により決定する。したがって、イー・コリのご とき細菌宿主をＣａＣＩｚ（コーエン（Ｃｏｈｅｎ）ら、プロシーディンゲス・ オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス、（１９７３年）、第６９巻 ２１１０頁）溶液またはＲｂＣｌ、ＭｎＣＩｚ、酢酸カリウムおよびグリセロー ルからなる溶液で処理し、ついで３−［Ｎ−モルホリノ］−プロパンースルホン 酸、Ｒｂｃｌおよびグリセロールで処理してもよい。ベクターＤＮＡを細胞上に カルシウム共沈させることにより、培養哺乳動物細胞を形質転換してもよい。ま た本発明は、本発明の複製可能な発現ベクターで形質転換された宿主細胞を包含 する。

ＤＮＡポリマーを発現できる条件下での形質転換宿主細胞の培養を、例えばマニ アナイスらおよび上で引用したｒＤＮＡクローニング」記載のごとく慣用的に行 う。よって、好ましくは、細胞に栄養が与えられ、５０℃以下で培養される。

宿主細胞に応じて慣用的な方法により生成物を回収する。よって、宿主細胞がイ ー・コリのごとき細菌細胞である場合、これを物理的、化学的あるいは酵素的に 溶解させ、得られた溶解物から蛋白生成物を単離する。宿主細胞が哺乳動物細胞 である場合、一般的に生成物を栄養培地または無細胞抽出液から単離してもよい 。慣用的な蛋白単離手法は、選択的沈澱、吸着クロマトグラフィーおよびモノク ローナル抗体アフィニティーカラムをはじめとするアフィニティークロマトグラ フィーを包含する。

本発明蛋白をイー・コリで発現した場合、抗原性のリポ蛋白ミセルが生成する。

かかる全長にわたるリポ蛋白は本発明を構成する。

すべての本発明蛋白が、ワクチンおよび診断用途において有用であることが理解 されよう。

そのうえ、他のＯｓｐ　Ａ抗原またはボレリア・ブルグドルフエリ単離菌由来の Ｏｓｐ　Ｂあるいは他の病原体由来の抗原のごとき他の抗原性化合物も、本発明 ワクチン組成物に包含される。さらに他の生物由来の他の抗原が該ワクチンに存 在していてもよい。

本発明組成物に用いるＯｓｐ　Ａ抗原は、Ｏｓｐ　Ａの抗原性断片（すなわち抗 原性ＢまたはＴ−細胞のエピトープを含むＯｓｐ　Ａの断片）あるいはかかるエ ピトープを含む融合蛋白（異なる群のＯｓｐ　Ａの融合を含む）を含んでいる。

本発明の１の態様において、ＩＩ群の株由来のＯｓｐ　Ａまたはその誘導体から なるワクチンまたは診断用組成物が提供される。詳細には、ｐｒｏｓｐＡｌ−Ａ ４プライマーを用いるとポリメラーゼ連鎖反応がうまく行き、ｐｒＯｓｐＡｌ− Ａ２を用いるとうまく行かないＤＮＡ配列によりコードされることで特徴付けら れる蛋白が、適当な賦形剤または担体との混合物になっている。より詳細には、 配列番号：２に示す蛋白配列と実質的に同一なアミノ酸配列を有するｉＩ群の株 由来のＯｓｐ　Ａまたはその誘導体が提供される。

またかかる組成物は、有利にも、サブグループＩの株由来のＯｓｐ　Ａ誘導体を 含んでいてもよい。

したがって、好ましい具体例において本発明は、組成物、好ましくはサブグルー プＩのボレリア・ブルグドルフェリ由来のＯｓｐ　Ａ抗原およびサブグループＩ Ｉのボレリア・プルグドルフエリ由来のＯｓｐ　Ａ抗原からなるワクチン組成物 を提供する。

好ましくは、１群のＯｓｐ　Ａ抗原をＢ３１、ＺＳ７およびＮ４０からなる群よ り選択する。

好ましくは、ＩＩ群由来のＯｓｐ　Ａ抗原をＺＱＩ、ＮＥＩＩＨからなる群より 選択する。

また本発明は、サブグループＩＩＩの株由来のＯｓｐ　Ａまたはその誘導体から なるワクチンあるいは診断用組成物を提供する。該蛋白は、適当な賦形剤または 担体との混合物である。より詳細には、該ワクチンまたは診断用組成物は、配列 番号：４に示す蛋白配列と実質的に同一なアミノ酸配列を有するＯｓｐ　Ａまた はその誘導体である。

好ましくは、該Ｏｓｐ　Ａが１９８５７株由来のものとする。

また本発明は、サブグループＩＶＳｖまたはｖ■由来のＯｓｐ　Ａまたはその誘 導体からなるワクチンおよび診断用組成物を提供する。

好ましい具体例において、異なるボレリア・ブルグドルフエリのサブグループに 由来する少な（とも２種のＯｓｐ　Ａまたはその誘導体からなる混合ワクチンが 提供される。かかるワクチン組成物は、従来のものより広範囲のボレリア感染に 対する防御を提供する。好ましくは該ワクチン化合物が工ないしＩＶ各群由来の Ｏｓｐ　Ａからなり、最も好ましくはＩないしＶＩ各群由来のＯｓｐ　Ａからな るものとする。

蛋白の水溶液を本発明ワクチンに直接用いることができる。別法として、前以て 凍結乾燥してもしな（てもよい蛋白を、種々のいかなる既知アジュバントと混合 してもよい。かかるアジュバントは、水酸化アルミニウム、ムラミルジペプチド およびキルＡ　（Ｑｕｉｌ＾）のごときサポニン類を包含するが、これらに限定 されない。詳細には、好ましいアジュバントはＭＰＬ　（モノホスホリルリピッ ドＡ）および３Ｄ−ＭＰＬ　（３脱アセチル化モノホスホリルリピツドＡ）であ る。さらに好ましいアジュバントは、ＱＳ２１として知られている。英国特許第 ２２２０２１１号に開示された方法により３ＤＭＰＬを得ることができ、またＱ Ｓ２１を米国特許第５．０５７，５４０号に開示された方法により得ることもで きる。さらに別の具体例として、蛋白をリポソームのごとき微粒子中にカプセル 化することもでき、水中油エマルジョンに会合させることもできる。本発明は、 さらに別の具体例において、死滅したボレリアまたは破傷風毒素のごとき免疫刺 激性巨大分子に蛋白を抱合させることもできる。

本発明蛋白をＢＣＧ、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）菌およびサルモネラ（Ｓ ａｌｍｏｎｅｌｌａ）菌のごとき生きたベクターにより発現させてもよく、かか るベクターを用いた生ワクチンを処方してもよい。

ワクチン調製物は一般的に、「ニュー・トレンズ・アンド・ディベロップメンツ 参イン・ワクチンズ（Ｎｅｗ　Ｔｒｅｎｄｓ　ａｎ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ 　ｉｎ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ）　Ｊ　（ヴオラ（Ｖｏｌｌｅｒ）ら編、メリーラン ド州ボルチモアのユニバージティー・パーク出版（１９７８年））に記載されて いる。リポソーム中へのカプセル化は、フラートン（Ｆｕｌｌｃｒｔｏｎ）の米 国特許第４．２３５．８７７号に記載されている。巨大分子への蛋白の抱合は、 例えばリクハイト（Ｌｉｋｈｉｔｅ）米国特許第４．３７２．９４５号およびア ーマ−（＾ｒｍｏｒ）らの米国特許第４゜４７４．７５７号に開示されている。

キルＡの使用は、ダルスカールド（Ｄａｌｓｇａａｒｄ）ら、アクタ・ベト・ス カンジ（＾ｅｔａ　Ｙｅｔ　５ｃａｎｄ、　）第１８巻＝３４９頁（１９７７年 ）に開示されている。３Ｄ−ＭＰＬの使用は、リビ（Ｒｉｂｉ）ら、マイクロバ イオロジー（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）（１９８６年）、レバイン（Ｌｅｖｉ ｎｅ）ら編、アメリカン・ソサエティー・フォ町マイクロバイオロジー（Ａｍｅ ｒｉｃａｎ　Ｓｏｃ、　ｆｏｒ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　）　、ワシントンＤＣ ，９〜１３頁に記載されている。

各ワクチンに存する本発明蛋白の量は、有意かつ悪化した典型的なワクチンの副 作用なしに免疫防御反応を誘導する量である。かがる量は、いかなる特異的抗原 を用いるのか、そしてワクチンがアジュバントと混合されているかどぅかにより 変更されるであろう。一般的には、各投与量が１〜１１０００ｕの蛋白、好まし くは１〜２００μｇの蛋白からなるであろう。抗体力価および被験者の他の反応 の観察をはじめとする標準的な研究により、特別なワクチン用の最適量を確認す ることができる。最初のワクチン接種の後、さらに被験者に接種してその免疫応 答を高めてもよい。

１．１　単離：　１９８８年５月３１日にフライブルクー力ベル（Ｆｒｅｉｂｕ ｒｇ−Ｋａｐｐｅｌ）においてイヌから捕獲したメスのイクソデス・リシヌスの 牛腸試料を用いた。カナマイシンおよびフルオロウランルを補足したＢＳＫ中で 増殖させた。培養は１９８８年６月８日に陽性となった。培養の一部を液体窒素 中、−７０℃で凍結した。

通常実験に用いるインビトロ継代培養において、２次培養および３次培養のボレ リア・プルグドルフエリを実験に用いる。

１２　培養・ボレリア・ブルグドルフエリＺＱＩ株を、２５７株について記載さ れているように（ンヤイルブレ（Ｓｃｈａｉｌｂｌｅ）ら、ジャーナル・オブ・ エクスペリメンタル・メディンン（Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　）第１７０巻、 １９８９年）、バーバー−ステナーーケリー（Ｂａｒｂｏｕｒ−Ｓｔｏｅｎｎｅ ｒ−Ｋｅｌｌｙ）の培地で増殖させる。世代時間は約３０ないし４０時間である （２３７株（約２０〜２４時間）より遅い）。

１．３　プラスミド：ＺＱｌ、ＺＳ７、Ｚ３７、ＧｅＨｏおよびＢ３１株にライ て、バーバー（Ｂａｒｂｏｕｒ）およびガロン（Ｇａｒｏｎ）のプロトコールに 従りてプラスミド分析を２系平行して行った。２０１株において、分子量４９． ２９．２５．２０．１８Ｋｂおよび１４Ｋｂの微弱なバンドのプラスミドが見ら れる。４９および２５Ｋｂ（７）プラスミドは、Ｂ３１、Ｚ３７、ＧｅＨｏおよ び２３７株にも見られるが、２９および２０Ｋｂのプラスミドは２３７株のみで 見られる。１８および１４ＫｂのプラスミドはＺＱＩ独特であるように思われる 。試験した他の株に見られる１６Ｋｂプラスミドは、２０１株にはない。

１．４　ポリアクリルアミドゲル電気泳動・２０１株を他の株と比較してポリア クリルアミドゲル電気泳動および銀染色を行った場合、ＺＱＩには異なったパタ ーンが存在する。すなわち３４ｋＤａ　（ＯｓｐＢ）の範囲にはバンドがない。

該バンドは、Ｏｓｐ　Ａが分子量約３２ｋＤａを有することをおそらく示すもの であろう。他の株（ＺＳ７、Ｚ３７、ＧｅＨｏ、Ｂ５１）における対応するバン ドは約３１ｋＤａの移動度である。

１５　ウェスタンプロット分析：ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂ３１、ＧｅＨ ｏ）に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を用いた。ＺＱＩは、ＺＳ７および Ｂ３１株とは異なる染色パターンを示す。分子量約３２ｋＤａの範囲のバンドと 反応するＯｓｐ　Ａ特異的ｍＡｂである３１．１以外のいかなるＯｓｐ　Ａ特異 的ｍＡｂとも染色バンドが見られない。Ｂ３１、ＺＳ７の０ｓｐＢに特異的なｍ ＡｂにはＺＱＩの蛋白と反応するものがない。２０ｋＤａの抗原に対するｍＡｂ であるＬＡ、７によづても染色バンドが見られない。６５ｋＤａおよび７０ｋＤ ａの抗原に特異的なｍＡｂにより、他の株の構造に対応したＺＱｌの構造が染色 された。

抗血清・ ＺＱＩ由来の３２ｋＤａの蛋白（Ｏｓｐ　Ａ）を、ボレリア・ブルグドルフエリ ８３１株に対するウサギ・抗血清（Ｉｓ）、ボレリア・プルグドルフェリＢ３１ に対するマウス・Ｉｓおよびボレリア・プルグドルフェリＺＳ７に対するマウス ・Ｉｓにより確認する。３４ｋＤａの範囲には染色が見られなかった。ボレリア ・ブルグドルフェリＺＱＩに対するｌＳは、Ｏｓｐ　Ａ、フラゲリンおよび２０ （微弱バンド）、５０および６５ｋＤａ　（微弱バンド）のバンドと反応するが ２３７株の０ｓｐＢとは反応しない。

ボレリア・ブルグドルフエリ細胞を、界面活性剤ＳＤＳを用いて溶解させ、セリ ンプロテアーゼであるブロティナーゼに消化により蛋白を除去し、細胞壁残渣、 多糖および残存蛋白をＣＴＡＢ　（臭化セチルトリメチルアンモニウム）で選択 的に沈澱させて除去し、ＤＮＡを得られた上清からイソプロパツール沈澱により 回収する。簡単に説明すると、スピロヘータ（１０”個の細胞）をＰＢＳで洗浄 し、９ｍｌのＴＥに懸濁した。ＳＤＳ　（２０％）１ｍｌおよびプロテアーゼＫ （２Ｑｍｇ／ｍ１）５０μｍを添加した後、溶液を３７℃で１時間インキュベー ションした。最後に、５Ｍ　ＮａＣ１１，５ｍｌおよびＣＴＡＢ　（０，７Ｍ　 ＮａＣ１中２０％）１．２５ｍ１を添加し、混合物を６５℃に１０分間保った。

ＤＮＡを、フェノールおよびクロロホルム／イソアミルアルコール抽出により精 製し、ついで０．６倍体積のイソプロパツールで１０分間室温で沈澱させた。得 られたペレットを７０％エタノールを用いて洗浄し、乾燥し、ＴＥ　（１０ｍＭ 　Ｔｒ　ｉｓ、Ｑ、１モルＥＤＴＡ、ｐＨ７，４）ｌ：溶解した。

ポリメラーゼ連鎖反応用のオリゴヌクレオチドブライマーを、アプライド・バイ オシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）社のＡＢＩ　ＤＮＡ合 成装置およびｂ−ンアノエチル化学を用いて化学合成した。以下のオリゴヌクレ オチド配列を実験全体において用いた。

ＴａｑＤＮＡポリメラーゼおよびＰＣＲ試薬（パーキン−エルマー−セタス（Ｐ ｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ−Ｃｅｔｕｓ）社製）を、各５０μｍ反応液に用いた。

各ポリメラーゼ・チェイン反応液は、８００ｍＭのデオキシヌクレオノド３りん 酸、２ＵのＴａｑＤＮＡポリメラーゼ、１．５ｍＭ　ＭｇＣＩｔおよび０．５ｍ Ｍの各プライマーを含む。Ｌｏｎｇのボレリア・プルグドルフエリ全ゲノムＤＮ Ａを、以下の条件下で３５サイクル増幅を繰り返し行った。９４℃１．２分；４ ２℃２分；７２℃２分。全部で１０μｍの反応液を、１．５％アガロースゲル上 で、標準的な電気泳動条件下で分析した。

２．２　サザン分析 ボレリア・ブルグドルフェリの全ゲノムＤＮＡ　（２０μｇ）を、指示された制 限酵素で消化し、０．８％アガロースゲル上で分離し、ナイロン膜（アマ−ジャ ム（＾ｍｅｒｓｈａｍ）社のハイボンド−Ｎ　（Ｈｙｂｏｎｄ−Ｎ）　）に移行 させた。ランダムプライマー伸長により３２ｐラベルしたＯｓｐ　Δ（２８７株 ）をプローブとして、チャーチ（Ｃｈｕｒｃｈ）緩衝液（０，５Ｍ　ＮａＨＰＯ ４，１７％ＮａＤｏｄＳＯ，，ｐＨ７，２）中、６０℃でプロットを一晩ハイブ リダイズさせた。

結果 表１：ＰＣＲおよびサザンブロッティングにより分析したボレリア・プルグドル フエリ株の遺伝子型および表現型の分析結果を表Ｉに示す。

Ｏｓｐ　Ａ遺伝子をコードしているプラスミドの制限酵素による断片の長さの多 望性 試験したボレリア・ブルグドルフェリ単離菌において、ＨｉｎｄｌＩＩを用いた Ｏｓｐ　ＡのＲＦＰＬにより、少なくとも６種の異なるハイブリダイゼーシヨン のパターンが示された。仮１：Ａ、　Ａ、　Ａ群（ｆ　Ｉ　ａ、Ｈ３Ｐ６０、Ｈ ３Ｐ７０について）と命名したすべてのボレリア・プルグドルフェリ株を、１． ２ｋｂおよび０．３ｋｂ２種のハイブリダイゼーション断片により特徴づけ、Ｂ 、　Ｂ、Ｂ群（ｆ　］　ａ、Ｈ３Ｐ６０、ＨＳ　Ｐ　７０について）の株の大部 分（２５株中１７株）は、０．９ｋｂおよび０．４　ｋ　ｂ　２種の断片を示し た（２０１株、Ｈ型０ｓｐＡ）。

ボレリア・ブルグドルフエリ１９８５７および２１０３８株（ＩＩ群、ｆｌａ、 Ｈ３Ｐ６０．Ｈ３Ｐ７０についてΔ／Ｂ、　Ａ）は、４ｋｂおよび領５ｋｂ２種 のハイブリダイズする断片を示しくＯｓｐ　Ａ、遺伝子型ＩＩＩ）　、すべての ＡＣＡ−］様株（ＩＩ群、Ｂ、　Ａ）は、約１．７ｋｂの断片１個のみを示した （ＩＶ型Ｏｓｐ　Ａ）。２００４７およびＳ９０株（ＩＩ群、　Ｂ、　Ｂ）は、 そおれぞれ１個の３ｋｂ（Ｖ型Ｏｓｐ　Ａ）および１．１ｋｂ（ＶＩ型Ｏｓｐ　 Ａ）の断片を示した（表１）。他の種のボレリアから単離されたＤＮＡは、Ｏｓ ｐ　Ａ特異的プローブにハイブリダイズしなかった。試験したボレリア・プルグ ドルフエリ単離菌における個々のＯｓｐ　Ａ遺伝子型の頻度は：Ｉ型Ｏｓｐ　Ａ ５５％（５５株中３０株）、ＩＩ型３１％（５５株中１７株）　、ＩＩＩ型４％ （５５株中２株）ＩＶ型７％（５５株中４株）、ｖ型２％（５５株中１株）およ びＶＩ型２％（５５株中１株）。この目的のために分析した米国のボレリア・ブ ルグドルフエリ単離菌は、２株の例外（１９８５７および２１０３８株、遺伝子 型ＩＩＩのＯｓｐ　Ａ）を除いて、唯一のＯｓｐ　Ａ遺伝子型（すなわち■型） に属していた。対照的に、ヨーロッパの単離菌においては、５種のＯｓｐ　Ａ遺 伝子型（すナワち工、ｌｌ５ＩＶ、　Ｖ、　オヨヒＶＩ）が見られた。結果を表 ＩＶにまとめた。

８目に臨床上の関節炎が見られた。５７日目における関節の組織病理学的変化は 、疾病の初期段階で２８７株にて感染させられたスキッド・マウスにおいて見ら れる変化と同等であった。それゆえＺＱＩはＺＳ７より病原性が弱い。ＺＱｌに 感染した５ｃｉｄマウスから、感染５７日目にスピロヘータを単離できた。

５匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの尾に１０’個のボレリア・ブルグドルフェリＺＱ １株を皮下注射した場合、１６０日間の全観察期間において、１匹のマウスだけ に感染後７１日目において、片足に臨床上の関節炎が見られた。

実施例４ 交差防御：ＺＱｌに対するＩｓ（ｍ１当たり３２μｇの免疫グロブリン二０日目 および４日目に１００μｍ、７日目および１１日目に２００μｍ１１５日目およ び１９日目の３００μｍ）で５ｃｉｄマウス（これらのマウス（ま０日目にＺＳ ７に攻撃を受けている）の回復をはかったが、これらのマウスは防御されなかっ た。

実施例５ ０群のＮＥＩＩＨ株および１群の２３７株を用いて、さらに交差防御の研究を行 った。表ＩＩに示すように、スキッド・マウスへの抗血清の移入により、同種の 菌の攻撃（同じ群の攻撃）に対してのみ防御が起こった。

実施例６ 単離菌または種々のボレリア・ブルグドルフエリ単離菌あるいは２８７株の組換 え型Ｏｓｐ　Ａのいずれかに対する抗血清材料および方法 朋 ＺＳ７　（抗−ＺＳ７抗血消）、ＺＱｌ（抗−ＺＱＩ抗血清）、ＮＥＩＩＨ（抗 −ＮＥＩＩＨ抗血清）、Ｂ５１（抗−Ｂ３１抗血清）株のボレリア・プルグドル フェリスヒロヘータ（生菌、ｌＸｌ０＠個）まタハｒｌｌｔｆ７）　２００４７ 、ＺＳ７、ＮＥ１１Ｈ１２１３０５，２１０３８，２１３４３，２６８１６，２ ８６９１および１９５３５株の生菌混合物（抗−カクテル抗血清）を、マウス（ Ｃ５７ＢＬ／６またはＤＢＡ／２）の尾の付は根に皮下注射した。

ＺＳＴ株由来の組換え型○ｓｐ　Ａを、イー・コリ中のｐＵＥＸ１発現ベクター から発現させた。蛋白を抽出し、Ｏｓｐ　Ａ特異的ｍＡｂ　（ＬＡ−２）を用い てアフィニティー精製した。アジュバント（ドイツ国アイデンバツノ＼（＾１ｄ ｅｎｂａｃｈ）のゼバク（Ｓｅｂａｃ）社製ＡＢＭ２）中の組換え型Ｏｓｐ　Ａ を皮下注射することによりマウスを感作し、１０および２０日目に追加免疫しこ 。

接種後３〜１０週間の間、これらのマウスから数回採血することにより抗血清（ 抗血清）を得た。接種１時間前に１度に（ボレリア・ブルグドルフエリ特異的免 疫グロブリン６０１１１；抗−ＺＳ７抗血清、抗−ＮＥ１］、）］抗血清、抗− カクテル抗血清、抗−組換え型Ｏｓｐ　Ａ抗血清）または抗体量を増加させなが ら（接種１＆１日目および４日目に１００μＬ７日目および１１日目に２００μ ｍ、１４日目および１７日目に３００μｍ）３週間に６回（６０μｇ／ｍｌの特 異的免疫グロブリンを含む抗−８３１Ａ抗血清；３２μｇ／ｍｌの免疫グロブリ ンを含む抗−ＺＱＩ抗血清）スキッド・マウスに腹腔内注射した。スキッド・マ ウスの尾の付は根にｌＸｌ０’個のボレリア・プルグドルフエリスピロヘータ生 菌（ＺＳ７．５Ｈ−２−８２−Ｐ５．２１０３８、ＮＥＩＩＨまたは２００４７ 株）を、最初の血清導入１時間後に皮下注射により接種した。

結果： １群の株（ＺＳ７およびＢ３１株）に対する抗血清は、同種の株の攻撃に対して 防御を行った。サブグループＶの２００４７株の異種の攻撃に対してはごく部分 的に防御を行った。しかしサブグループｊＩのＮＥＩＩＩ−１株での異種の攻撃 に対しては全く防御を行わなかった。サブグループＩＩ（７）Ｎ　Ｅ　１１　Ｈ 株に対する抗血清は、２００４７株（サブグループＶ）での異種の攻撃に対して ごく部分的に防御を行ったが、２８７株（サブグループＩ）での異種の攻撃に対 しては全く防御を行わなかった。

スキッド・マウスを単−特異的抗−０ｓｐ　Ａ（ＺＳ７）抗血清で前処理すると 、ＺＳ７（６匹中２匹）または５Ｈ−２−８２−Ｐ５　（３匹中２匹；ｆｌａＡ 。

０ｓｐＡ１０ｓｐＢ　Ｉ）のいずれかでの攻撃された場合には、疾病の進行に対 してかなりの防御を示し、２００４７　（３匹中１匹；　ｆ　Ｉ　ａＢ、Ｏｓ　 ｐＡｌｏｓｐＢＶ）または２１０３８　（３匹中２匹：　ｆ　ＩａＢ、０ｓｐＡ １０ｓｐＢ　ＩＩＩ：表２）で攻撃された場合には部分的な防御を示した。これ らの条件下で大部分のマウスにおいて観察された臨床上の関節炎はきわめて弱い ものであった。対照的に、組換え型Ｏｓｐ　Ａに対する同じ抗血清で処理したが 、ついでＮＥＩＩＨ（ｆ　］ａＢ、０ｓｐＡ１０ｓ、ｐＢ　ＩＩ）で攻撃した場 合、全く防御は見られなかった。他の感染もしくは無処理スキッド・マウスと比 較すると、これらのマウスすべてにおいて、臨床上の関節炎が進行した（表ＩＩ Ｉ）。

実施例７ ＮＳ−１−Ｏｓｐ　Ａ（ＺＳ７）融合蛋白をコードしている発現プラスミドの構 図１は、３種のプラスミドｐＯＡ−１０、ｐＯＡ１２およびｐＯＡ−１８の構築 の概略を示す。

簡単に説明すると、ｐＯＡ−１０を３段階で作成した。まず、切形した０ｓｐＡ 遺伝子を含むｐＺＳ７−２　（ワリヒ（ｆａｌｌｉｃｈ）博士から得た）のＮｓ 　ｐＨ■断片ｃｉ、ｉ　ｋｂ）を、突出末端を処理してから、ＳｍａＩで直鎖状 にしたｐＵＣ１９とライゲーションさせた。ｐＯＡ−５と命名した得られたプラ スミドにおいては、Ｏｓｐ　Ａ遺伝子は種々の独特な制限部位と隣りあっていて （５°末端側にはＨｉｎｄＩＩＩ、５ｐｈｒ、Ｐｓ　ｔＩ、Ｓａ　ＩＩ、Ｘｂａ ＩおよびＢａｍＨＩそして３゛末端側には５ａｃＩおよびＥｃｏＲＩ）、サブク ローニングが容易になっている。次に、ｐＯＡ−５をＸｂａｌにより直鎖状にし 、ＢａｍＨＩにより直鎮状にしたｐＭＧ４２とライゲーションさせて、これら両 方の断片の末端をフィル−イン（ｆｉｌｌ−ｉｎ）　した後、ｐＯＡ−９を作成 した。ついでｐＵｃ１９由来のこのプラスミドの一部を、ＮｃｏＩ消化により除 去し、ｐＯＡ−１０を得た。このプラスミドにおいては、切形されたＯｓｐ　Ａ 遺伝子はＮＳＩの最初のコドンを伴うフレーム中にある。挿入断片の５°末端に おける結合を、配列決定により証明した。ｐＯＡ−１２およびｐＯＡ−１８を作 成するために、切形された０ｓｐＡ遺伝子をコードしているＤＮＡ断片の５゛お よび３°末端に、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、ＮｃｏＩおよびＸ ｂａＩ制隈部位をそれぞれ作成した。

ＮｃｏＩおよびＸｂａＩで消化した後、この断片を同じ酵素で消化したｐＭＧ４ ２またはＴＣＭ６７とライゲーションさせて、それぞれｐＯＡ−１２およびｐＯ Ａ−１８を得た。前者（ｐＯＡ−１２）は、ＮＳ１の最初の４２個のアミノ酸に 融合した切形されたＯｓｐ　Ａ遺伝子を発現し、後者（ｐＯＡ−１８）は、ＮＳ Ｉの最初の８１個のアミノ酸に融合した切形されたＯｓｐ　Ａを発現する。両方 のプラスミドの挿入断片を配列決定して、ＰＣＲ中にＯｓｐ　Ａ遺伝子にアミノ 酸置換が起こらなかったことを確認した。

これらすべてのプラスミドを、ナリジキシン酸の添加によりλｐＬプロモーター の誘導が起こるイー・コリＡＲ１２０株中に導入して形質転換した。さらにこれ らすべてのプラスミドを、温度を上げるとλｐＬプロモーターの誘導が起こるイ ー・コリＡＲ５８株中に導入して形質転換した。

実施例８ 疋ン賢１広」皇戊ヨ副互μ独没戊」Ｊ垂酊凋應μいユ旦月μｐ炙男 ＡＲ１２０（ｐＯＡ−１０）　、ＡＲ１２０（ｐＯＡ−１２）およびＡＲ１２０ （ｐＯＡ−１８）３株の培地５０ｍ１　（適当な抗生物質を添加したＬＢ培地） に、−晩種培養した菌（０，２５ｍ１）を接種し、３７で増殖させた。Ａ、、、 が０．３になった時、５ｍｌの培養物に含まれる細胞を収穫し、ＳＤＳ試料緩衝 液に再懸濁した。ナリジキシン酸を残りの培養物に添加し、最終濃度６０ｍｇ／ ｍｌになるまで培養を続けた。３時間後、培養物５ｍｌから細胞を収穫し、ＳＤ Ｓ試料緩衝液に再懸濁した。

３系（７）ＡＲ１２０株に平行して、ＪＭ１０９およびＪＭ１０９　（ｐＺＳ７ −２）株を５０ｍ１のＬＢ培地で光学密度（６２０ｎｍ）が０．６になるまで増 殖させ、上記のごとく処理した。ＪＭ１０９　（ｐＺＳ７−２）において、それ 自身のプロモーターにより未修飾の形のＯｓｐ　Ａが構成的に発現された。すべ ての試料を５ＤＳ−ＰＡＧＥおよびｍＡｂＬＡ−２、ＬＡ−２６およびＬＡ−３ １を用いるウェスタンプロット分析に付してＯｓｐ　Ａ誘導体を検出した。

誘導されていない細胞および誘導された細胞（ｐＺｓ７−２の場合には、プラス ミドを含まない宿主および含む宿主）の対応する試料の分析を行った。各ウェル に負荷する物質の量を、培養物の光学密度（０，０５Ａｓｚ。／ウェル）により 標準化した。染色ゲル上の誘導されたＪＭ１０９　（ｐＺＳ７−２）および誘導 されたＡＲ１２０（ｐＯＡ−１８）のレーンにおいて、発現した生成物の予想サ イズ（それぞれ未修飾のＯｓｐ　ＡおよびＮＳＩの８１個のアミノ酸に融合した ｔｒＯｓｐ　Ａ）と一致した移動度の新しいバンドが見られる。未修飾のＯｓｐ 　Ａは、２本のバンドとして現れ、細菌の蛋白の数％であることを示す。ｐＯＡ −１８の産物は、未修飾蛋白より高レベルで発現された。ウェスタンプロット分 析は、これらの新しいバンドがＯｓｐ　Ａ誘導体に対応することを確認する。該 プロットはさらに、ＡＲ１２０（ｐＯＡ−１２）はＮＳＩの４２個のアミノ酸に 融合したｔｒｏｓｐＡを発現するが低レベルであることを示す。ｐＯＡ−１０に よるｔｒｏａｐＡの発現は、ｔ　ｒｏｓｐＡの予想サイズに対応したかすかなバ ンドとして現れ、ウェスタンプロット上で観察された。

同じプラスミドをイー・コリＡＲ５８中に導入した場合にも同様の結果が観察さ れた。Ｏｓｐ　Ａ誘導体遺伝子の発現は温度の上昇により誘導された。また本発 明者らは、カナマイシン耐性プラスミドを用いて、同様のＮＳ＋−ａ＋ｏｓｐＡ ＺＳ７融合蛋白を得た。

イー・コリＡＲ１２０株（ｐＯＡ１８）を増殖させ、上記のごと＜Ｏｓｐ　Ａ遺 伝子の発現を誘導した。

それ自身のプロモーターにより未修飾のＯｓｐ　Ａを構成的に発現するイー・コ リＪＭ１０９株（ｐＺＳ７−２）を、光学密度（６２０ｎｍ）が０．６になるま で５０ｍ１のＬＢ培地（１００Ｉ１ｇ／ｍ＋のアンピノリンを補足）で増殖させ た。

ついで、雨林の細胞を以下のごとく処理した。５ｍｌの培養物中に含まれる細胞 を、遠心分離により収穫し、５ＤＳ−ＰＡＧＥ試料緩衝液に再懸濁した（試料Ｔ ３）、残りの４０ｍ１中の細胞を収穫し、緩衝液Ａ（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ　５０ｍ Ｍ、ｐＨ７，５）にて２回洗浄し、同じ緩衝液中においてフレンチプレスで１ｏ 、ｏｏｏポンド／平方インチの圧力を２回かけて細胞を破壊した。細胞ホモジネ ートを遠心分離により分画した。上清を一２０℃で保存した（試料Ｄ３）。ペレ ットを緩衝液Ａで２回洗浄し、５ＤＳ−ＰＡＧＥ試料緩衝液中で室温にて一晩可 溶化させた（試料Ｃ３）。該２種の発現株の細胞分画の結果を、５ＤＳ−ＰＡＧ Ｅにより分析し、０．０２５Ａｅ２ｏｒ細胞当量」を各ウェルに負荷する以外は 上記のごとくウェスタンプロットを行った。ＪＭ１０９　（ｐＺＳ７−２）で発 現された未修飾のＯｓｐ　Ａは、可溶性細胞画分（Ｓ３）および不溶性細胞画分 （Ｃ３）の両方に見られる。下方の２重のバンドは不溶性画分に優先的に見られ るが、上方のバンドはもっばら可溶性画分に見られる。ＪＭ１０９　（ｐＺＳ７ −２）の０３のレーンにのみ現れる高分子蛋白は、抗−０ｓｐ　Ａ抗体によりで は認識されず、よっておそら＜Ｏｓｐ　Ａ誘導体ではない。他方、ｐＯＡ−１８ の産物は、はとんど可溶性画分にのみ見られる。

実施例１０ ｐＯＡ−１８由来のＮ５Ｉ−ＯｓｐＡの４種の抗−〇ｓｐＡｍＡｂとの反応性Ａ Ｒ１２０（ｐＯＡ１８）およびＪＭ１０９　（ｐＺＳ７−２）株の粗細胞抽出物 を上記のごとく調製した。それら（ＡＲ１２０（ｐＯＡ１８）およびＪＭＩＯ９ （ｐＺＳ７−２）　）　ｔ−４ｉ１（７）隣合ったウェルに入れて５Ｄｓ−ＰＡ ＧＥを行い、蛋白をニトロセルロース膜上に移行させた。ついで、それぞれ隣合 ったレーンの１組を含む４つの断片に膜を切断した。各断片を、異なる抗−０ｓ ｐ　ＡｍＡｂとのウェスタンプロット分析に付した。ｐＯＡ−１８および未修飾 のＯｓｐ　ＡによりコードされているＮ５Ｉ−Ｏｓｐ　Ａは、４種すべてのモノ クローナル抗体と同じように反応することが結果により示される。

実施例１１ ｐＯＡ−１８の構築と同様の方法で、プラスミドを構築して他のボレリア・ブル グドルフエリ株由来のＮ５Ｉ−Ｏｓｐ　Ａ融合蛋白を発現させた。詳細には、以 下の株由来の融合蛋白を調製し、上記のごとく試験した・Ｎ５Ｉ−Ｏｓｐ　Ａ（ ＺＱＩ）＋Ｎ５ｌ−Ｏｓｐ　Ａ　（Ａｃａｌ）およびＮ５Ｉ−Ｏｓｐ　Ａ　（１ ９最初の１６個のアミノ酸を欠き、ＮＳＩの最初の８１個のアミノ酸に融合した 組か合え型の切形された形態のＯｓｐ　Ａは、未修飾のＯｓｐ　Ａよりも高レベ ルで発現する。該蛋白は未修飾蛋白よりも可溶性で、未修飾のＯｓｐ　Ａに結合 するモノクローナル抗体との結合性を保持していた。未修飾のＯｓｐ　Ａはアジ ュバントとともに適用した場合、抗原性を有し、ビルレントなボレリア・ブルグ ドルフェリの攻撃から動物を防御する能力を有する。

配列表 （１）一般的情報 （ｉ）出願人二ノモン、マルクス（Ｓｉａ＋ｏｎ、　Ｍａｒｋｕｓ）クラマー、 ミヒャエル（Ｋｒａｔｍｅｒ、　Ｍｉｃｈａｅｌ）ンヤイブレ、ウルリヒ（Ｓｃ ｈａｉｂｌｅ、　Ｕｒｌｔｃｈ）ヴ７リヒ、ラインハルト（ｆａｌｌｉｃｈ、　 Ｒｅ１ｎｈａｒｄ）ロベト、イヴス（Ｌｏｂｅｔ、　Ｙｖｅｓ）（ｉ　ｉ）発明 の名称：ワクチン （ｉｉｉ）配列の数：１２ （ｉｖ）連絡先 （Ａ）宛名・マルクス・ダルトン・スミスクライン・ビーチャム（Ｍａｒｋｕｓ Ｄａｌｔｏｎ　Ｓｍ１ｔｈｌ（ｌｉｎｅ　ＢｓｅｃｈａＩｌｌ）（Ｂ）通り名ニ ゲレイト・バーブ・ニー・ツリー・ボトム・ロード（ＧｒｅａｔＢｕｒｇｈ　Ｙ ｅｔ　Ｔｒｅｅ　Ｂｏｔｔｏｍ　Ｒｏａｄ）（Ｃ）都市名ｚニブツム（Ｅｐｓｏ ｍ）（Ｄ）国名：イギリス （Ｆ）シップ・コード・ＫＴ１８　５ＸＱ（Ｖ）コンピューター・リーダプル・ フオーム（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ　Ｒｅａｄａｂｌｅ　Ｆｏｒｍ）（Ａ）媒体形帖、 フロッピーディスク （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭＰＣコンパティプル（Ｃ）オペレーティング・シ ステム：　ＰＣ−ＤＯ３／ＭＳ−ＤＯ８（Ｄ）ソフトウェア　パテントイン・リ リース（ＰａｔｅｎｔＩｎ　Ｒｅ１ｅａｓｅ）＃　１．０．バージョン＃１２５ （ｖｉ）現在の出願データ （Ａ）出願番号 （Ｂ）出願日 （Ｃ）分類 （ｖ　ｉ　ｉ　ｉ）代理人等の情報 （Ａ）氏名・タルトン、マーカス・シェイタフリュウ（ＤａｌｔｏｎｌＭａｒｃ ｕｓＪｗ）（Ｂ）登録番号：　２２８８５ （Ｃ）代理人等における処理番号・Ｂ４５００８（ｉｘ）テレコミュニケーショ ン・インフォーメーション（Ａ）ｍ話番号＋０７３７　３６４０００（Ｂ）ファ ックス番号：、０７３７　３６４００（３（Ｃ）テレックス番号：９１１４１５ （２）配列番号・１に関する情報 （１）配列の特徴； （Ａ）配列の長さ、８２５塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数、１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：ＤＮＡ（ゲノム）（ｖｉ）起源・ （Ａ）生物名・ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ　ｂｕｒｇｄｏ ｒｆｅｒｉ）（Ｂ）株名・ＺＱＩ （ｘｌ）配列の記載：配列番号・１・ ＡＴＴＴＴＣＡＡＡＧ　ＡＡＧＡＴＧＧＣＡＡ　ＡＡＣＡＴＴＡＧＴＡ　ＴＣＭ ＡＡＡＡＡＧ　ＴＡＡＣＣＣＴＴＡＡ　ｘａｘｃｊｕｃｔｃ■ ＴＣｋｋＣｋＧｋｋＧ　ＡＡ入ＡｋＴＴＣｋＡ　ＣＧＡＡＡＡＧＧＧＴ　ＧｍＴ ＡＴＣＴＧ　ＡＡＡＡＡＡＣ入ＡＴ　ＡＧＴＭＧＡＧＣＡ（２）配列番号；２に 関する情報。

（１）配列の特徴・ （Ａ）配列の長さ・２７４アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｃ）鎖の数・１本鎖 （Ｄ）トポロジー・直鎖状 （ｉ　ｉ）配列の種類　蛋白 （ｖｉン起源。

（Ａ）生物名、ボレリア・ブルグトルフェリ（Ｂ）株名：ＺＱ１ （Ｘｌ）配列の記載・配列番号　２ Ｍｅｔ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　丁ｙｒ　Ｌｅｕ　ＸＡｕ　Ｇｌｙ　工１ｅ　Ｇｌｙ　 Ｌｅｕ　工ｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　ｔａｕ　Ｉｌｅ　Ａｌａｌ　５　１０　Ｉｓ 膓ｕ　Ｌｙｓ （２）配列番号二３に関する情報、 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ一８１９塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉ　ｉ）配列の種類・ＤＮＡ　（ゲノム）（ｖｉ）起源： （Ａ）生物名・ボレリア・ブルグドルフエリ（Ｂ）株名：１９８５７ （ｘｉ）配列の記載・配列番号　３・ Ｇ丁τＧＡＴＣ丁丁Ａ　ＡＡＧＧＡＡＣＴＴＣＴＧ八へＡＡＡＡＡＣＡＡＴＧＧ 八ＴＣＴへ　Ｇ入ＡＴＡＣＴ丁Ｇ＾　＾ＧＧＣＧＴ八八Ａλへへ ＡＣＡＡＴ丁ＡＣＡＧ　ＴＪＬ（ＪへＡＡＴＴＡ　ＴＧＡＣＴＣＡＧＣＴ　ＧＧ ＣＡＣ？入入ＡＣＴ？ＧＡＡＧＧＡ丁ＣＡＧＣＡＧＣＴＧＡ` （２）配列番号：４に関する情報： （１）配列の特徴６ （Ａ）配列の長さ：２７２アミノ酸 （Ｂ）配列の型、アミノ酸 （Ｃ）鎖の数　１本鎖 （Ｄ）トポロジー・直鎖状 （１１）配列の種類：蛋白 （ｖｌ）起源： （Ａ）生物名・ボレリア・ブルグドルフエリ（Ｂ）株名　１９８５７ （ｘ　ｉ）配列の記載：配列番号　４：Ｍｅｔ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　Ｌｅ ｕ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ工１（ｌ　Ｇｌｙ　Ｌａｕ工１ｅ　Ｌａｕ　Ａｌａ　Ｌｅｕ 　Ｘｌｅ　Ａｌａｌ　Ｓ　１０　１５ ＡＳｐ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　１．ｅｕ　Ｍｅｔ　Ａｌａ　Ｔｈｒ 　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｌｙ■ Ｓｏ　５５　６０ Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　 Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ６５　７０　７５　 ８Ｑ 八ｌａ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　丁ｈｒ　 Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ［１５９０９５ Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　ＧＬｕ　Ｖａｌ　Ｌ、ｅｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ 　Ｇｌｙ　丁ｈｒ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｌｙ■ ユ００　１０５　１１０ ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　丁ｈｒ　丁ｈｒ　 Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ｇｌｕ　ＬｙｓＧｌｕ　テｙｒ　Ｓ ｅｒ　Ｇｉｎ−Ｍｅセ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　＾ｌａ、Ａ ｌａ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｖａｌ　ＧｌｕτｈτＬ＠ｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ 　Ｘｌｅ　Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　にｌｕ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　５ｅｒ Ｇｌｙ　ＬｙｓＴｈｒ　Ａｌａ　ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇ ｌｙ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　’ｒｈｒ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｘ１■ ＬＩＩＱ　１ｌｌｓ　１９０ Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　ＬｙＳ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｓｅｔ　Ｔｒｐ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　 Ｓａｒ　Ｔｈｅ　Ｓｅｃ　Ｔｈｅ　Ｌｅｕ　Ｔｈｔ　ｌ１ｌ■ Ｓｅｒ　Ａｌａ　八ｓｎ　Ｓａｒ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　 ｋｕ　Ｖａｎ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　ＧａｙＴｈｒ　Ｉｌｅ　Ｔｈ ｒ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｔｈ ｒ　ＬｙＳ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　ＧｌｙＳｅｒ　Ａｌａ　Ａｈａ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ 　ＬｙＳ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ａｌａ 　Ｌｅｕ　八ｒ９（２）配列番号：°５に関する情報 （１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ：１０２０塩基対 （Ｂ）配列の型・核酸 （Ｃ）鎖の数　１本鎖 （Ｄ）トポロジー・直鎮状 （１１）配列の種Ｑ：ＤＮＡ（ゲノム）（■１）起源・ （Ａ）生物名、ボレリア・ブルグドルフエリ（Ｂ）株名　ＺＱｌ （ｖｉｉ）直接の起源 （Ｂ）クローン　Ｎ５Ｉ−ＺＱＩ （ｘｉ）配５１１の記載　配列番号　５ＧＣ，八人ＡＧＣへＧへ　ＴへＧＴＧＧ へＧＣＧ　Ｇ＾Ｔ丁Ｃ丁ＧＡＡＪＩ　ＧＡＡＧＡＡτＣＣＧ　ＡＴＧ八ＧへＣＡ Ｃ丁　丁入入ＡＡ丁fへＣＣ ＡＴＧＧＧ入入ＡＧＣＡＡＡＡＴＧＴＴＡＧ　ＣＡＧＣＣＴＴＧＩ　Ｇ入入入Ａ Ａ入ＡＴＡ　ＧＣＧＴ丁丁ＣＡＧ丁　ＡＧＡＴ丁丁ＡＣＣＴ（２）配列番号二６ に関する情報・ （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ　３３９アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｃ）鎮の数　１本鎖 （Ｄ）トポロジー・直鎖状 （ｉ　ｊ）配列の種類：蛋白 （ｖｌ）起源： （Ａ）生物名　ボレリア・ブルグドルフエリ（Ｂ）株名：ＺＱ１ （ｖｉｉ）直接の起源： （Ｂ）クローン・Ｎ５Ｉ−ＺＱＩ （ｘｉ）配列の記載：配列番号・６： ｓｅｔ　八ｓｐ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　 Ｇｌｎ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｐｈ＠　ＩＡｕ　ＴｒｐＩ　Ｓ　１０　ｌ５ ）１ｉｓ　Ｖａｌ　Ａｒｑ　ＬＹＳ　Ａ！：９　Ｖａｔ　八ｌａ　Ａｓｐ　Ｇｉ ｎ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｐ■P Ｌ４！ｕ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　八ｒｇ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ 　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ａｔｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　ＳｅF Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｉｉｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　 Ｔｈｒ　Ａｔｇ　Ａｌａ　ＧＬｙ　Ｌｙｓ　ＧＬｎ　工１ｅＳｏ　５５　６０ Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　ｌｅ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ａ ｓｐ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｌ、ｙｓ　Ｈｅｔ　ＴｈｒＨｅｔ　Ｇｌｙ　Ｌ ｙｓ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｌ ｙｓ　Ａｓｎ　Ｓａｒ　Ｖａｎ、５ｅｒＶａｔ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌ ｙ　Ｇ’ｒｙ　Ｍｅｔ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｇ ｌｕ　Ｌｙｓ　Ａｓ■ ｌｏｏ　１０５　１１０ Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　丁ｙｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　 丁ｈｔ　ＶａＩ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　ＩＡｕ　Ｇｌｕ　ＬｅｕＬｙｓ　Ｇｌｙ　Ｔ ｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｔ ｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　ＧｌｕＬｙｓ　Ｔｈｔ　Ｔｈｅ　Ｐｈｅ　Ｇｌ ｕ　ＸＬｅ　Ｐｈ＠　Ｌｙｓ　Ｇｉｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｉ、ｙｓ　丁ｈｒ　Ｌ ｅｕ　Ｖａｌ　５ｅ■ Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｔｈｚ　 Ｉｌｅ　Ｖａｌ　八ｒｑ　Ａｌａ　入ｓｎ　Ｇｌｙ　ＴｈｒＡｒｇ　Ｌｅｕ　Ｇ ｌｕ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｘ１ｅ　Ｌｙｓ　Ｓｅｔ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｓ ｅｔ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　ＬｙｓＸｌｅ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｓｅｔ　Ｇｌ ｙ　Ｇｌｕ　Ｚｌｅ　Ｔｈｒ　νａｌ　Ａｌａ　ＩＪａｕ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｓ ｅｒ　Ａｓｐ　丁ｈ■ ７０ＴｈｒＧｉｎ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｈｅ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ 　Ｔｒｐ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｓａｒ　Ｔｈ■ Ｌｅｕ　Ｔｈｔ　Ｘ１ｅ　Ｓｅｒ　Ｖａｎ　Ａ５ｎ　Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ　 丁ｈｒ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　ＶａＩ　Ｐｈｅ　τｈｔｔｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇ ｌｙ　Ｌｙｓ　Ａｉａ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　ＴＭ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｌｙ ｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　ＡｓｐＡｌａ　Ｌｅｕ　Ｉ−ｙ５ （２）配列番号、７に関する情報： （ｉ）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ＋１０１４塩基対 （Ｂ）配列の型　咳酸 （Ｃ）鎮の数、１本鎖 （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （１１）配列の種類　ＤＮＡ　（ゲノム）（ｖｉ）起源。

（Ａ）生物名、ボレリア・ブルグドルフエリ（Ｂ）株名　１９８５７ （ｖｉｉ）直接の起源二 （Ｂ）クローン　Ｎ５Ｉ−１９８５７ （Ｘｌ）配列の記載　配列番号　７ Ａ？ＧＧＡＴＣＣＡＡ　ＡＣＡＣ丁ＧＴＧ丁ＣｋＡＧＣＴＴＴＣＡＧ　ＧＴＡＧ Ａ丁ＴＣＧ？　丁丁Ｃ丁丁ＴＧＧＣＡ　丁ＧＴＣＣＧＣへＡ` ＧＧＡＴＣＡＧＣＡＧ　ＣＴＧ八Ａへ丁ＴＡＡ　ＡＡＡＡＣＴＣＧＡＴ　ＧＡＡ Ｃ丁丁ＡＡＡＡ　ＡＣＧＣＴＴＴＡＡＡ　ＡＴＡＡ（２）配列番号：８に関する 情報。

（ｉ）配列の特徴・ （Ａ）配列の長さ・３３７アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー・直鎖状 （１１）配列の種類：蛋白 （ｖｌ）起源― （Ａ）生物名　ボレリア・ブルグドルフエリ（Ｂ）株名＋１９８５７ （ｖｉｉ）直接の起源 （Ｂ）クローン＋Ｎ５ｌ−１９８５７ （ｘｌ）配列の記載　配列番号・８ Ｍｅｔ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｔ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　 Ｇｉｎ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　τ【ｐＩ　Ｓ　１０　ｉｓ ）！１ｓ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ 　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｐｈ■ Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ　 Ｓｅｘ　Ｌｅｕ　八ｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　５ｅｒＴｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇ ｌｙ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　工Ｌｅ　Ｇｌｕ　Ｔｔ＋ｔ　Ａｉａ　Ｔｈｒ　八ｒｑ　 Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｘ１■ ＶａＩＧｌｕ　Ａｒｇ　Ｉｉｅ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｓｅｔ　ｋ ｓｐ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　し！ＬＩ　Ｌｙｓ　Ｍｅｔ　τｈ【６５　７０　７５　 θ０ ｓｅｔ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ａ５ｎ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　 Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　５ｅｒＶａＬ　５ｅｔＶａｌ　八５ｐ　Ｖａ ｌ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｍｅｔ　Ｉ−ｙ３　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｓ ｅｒ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ａｓ■ Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　丁ｙｒ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｍｅｔ　Ａｌａ　 Ｔｈｔ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ａｊｐ　ＬｅｕＬｙｓ　Ｇｌｙ　Ｔ ｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　工 Ｒｅ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｖａ１Ｌｙ５　Ａｌａ　Ａｓｐ　ＬｙＳ　Ｓｅ ｔ　ＬｙＳ　Ｖａｌ　ＬｙＳ　Ｌｅｕ　Ｔｈｆ　Ｖａｎ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｓ ｐ　Ｌｅｕ　５ｅｔＬｙｓ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ 　Ｌｙｓ　ＧＬｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｔｈｔ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ λ６５　１７０　１７５ Ｌｙｓ　Ｖａｌ　テｈｒ　Ｓｅｔ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　ｐｙｓ　Ｓｅｔ　丁ｈｒ　 丁ｈｒ　Ｇｌｕ　Ａｈａ　ＬｙＳ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ｇｌｕｌｌｌｏ　１１１５ 　１９０ しｙ３　丁ｈｒ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｉｕ　Ｉ）、ｅ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ 　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　丁ｈｒ　ｔ４ｕ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　ＧＬ■ １ｉｅＡｓｐＬｙｓＡｓｎＧｌｙＬｙｓＶａｌτｈｒＶａｌＳｅｒＬｅｕ入５ｎ Ａｓｐ丁ｈｒＡｌａＳｅｒＧＬｙ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　丁ｈ【　Ａｈａ　 Ｓｅｒ　Ｔｒｐ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　ｌｚｕ　 Ｔｈｒ２’ｉｌＳ　２８０　２８５ １１ｅ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　ＬｙＳ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　 Ａｓｐ　＋４１１　ＶＪＩＩ　Ｐｈｅ　しｅｕ　丁ｈ【　＾Tｎ ｃ１ｙ　丁ｈｒ　ｌｅ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｎ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｓ ａｒ　八ｌａ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌ４ｕ　Ｇｌｕ３０５３１０　３１５ 　：５２０ （２）配列番号、９に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ　１０１７塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数、１本鎖 （Ｄ）トポロジー、直鎖状 （ｉ　ｉ）配列の種類：ＤＮＡ（ゲノム）（ｖｉ）起源・ （Ａ）生物名：ボレリア・プルグドルフエリ（Ｂ）株名　ＡＣＡＩ （ｖｉｉ）直接の起源 （Ｂ）クローン　Ｎ５Ｉ−ＡＣＡＩ （ｘｉ）配列の記載：配列番号　９・ ＡＴＧＧＡＴＣＣＡＡ　ＡＣＡＣＴＧＴＧＴＣＡＡＧＣＴＴＴＣＡＧ　Ｇ７ＡＧ ＡＴＴＣＣＴ　ＴＴＣＴＴＴＧＧＣＡ　ＴＧＴＣＣＧＣＡＡ` （２）配列＠号　１０に関する情報 （ｉ）配列の特徴コ （Ａ）配列の長さ　３３８アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 ／／”％紬へ鮎、１＋姑 （Ｄ）トポロジー・直鎖状 （ｉ　ｉ）配列の種類：蛋白 （ｖｌ）起源 （Ａ）生物名・ボレリア・ブルグドルフエリ（Ｂ）株名　ＡＣＡＩ （ｖｉｉ）直接の起源： （Ｂ）クローン　Ｎ５Ｉ−ＡＣＡＩ （Ｘｌ）配列の記載　配列番号　１０：Ｍｅｔ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ｔｈ ｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　５ｅｒ　Ｐｈｅ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｐｈ ｅ　Ｌｅｕ　丁ｒｐＩ　Ｓ　１０　１５ ）＋１ｓ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ａｒｇνａｌ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　 Ｇｌｕ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　ＰｈａＬｅｕ　Ａｓｐ　Ａ ｒｑ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　ＬＣｕ　Ａ ｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｑ　Ｇｌｙ　５ｅｒＴｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　ＩＪｅｕ　Ａ ｓｐ　ｒｌｅ　Ｇｌｕ　Ｔｂｒ　Ａｈａ　丁ｈｒ　Ａｒｑ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｌ ｙｓ　Ｇｌｎ　工１■ ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　 Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ａｈａ　Ｌａｕ　Ｌｙｓ　Ｍｅｔ　ＴｈｒＭｅｔ　Ｇｌｙ　Ｌ ｙｓ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｌ ｙｓ　Ａｓｎ　Ｓａｒ　Ａｌａ　５ｅｒＶｌｌｌＡＳｐＬｅｕＰｒｏＧｌｙＧｌ ｕＳｅｅＬｙｓＶａｌＬａｕＶａｌＳｅｒＬｙｓＧ１ｕＬｙｓ、八３ｐ１．００ 　１０５　１１０ ＬｙｓＡ５ｐＧｌｙＬｙｓ７ｙｒＳｅｔＩＡｕＬｙｓＡ１．ａＴｈｒＶａｌＡｓ ＰＬｙＳＩｌｅＧユｕｔ４ｕＬｙｓ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　ＡＳＩ）Ｌｙｓ 　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ 　ＴｈｒＬｙｓ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　 Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　ｆｆ１ｅ　Ａｉａ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　５ｅ■ Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　丁ハｒ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　１．ｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ 　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　ＬｙＳ　丁ｈｒ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｓｉ■ ＋６５　１７０　１７５ Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　５ｅｒ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　 Ｎｅｔ　丁ｈｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　ＴｈｒＬｙｓ　Ｌａｕ　Ｇ ｌｕ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｍｅｔ　Ｌｙｓ　５ｅｒ　Ａｓｐ　Ｇｕｙ　Ｔ ｈｅ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　ＬｙｓＧｌｕ　ＶａｌＬｅｕ　Ｌ７Ｓ　Ａｓｒ ＋　Ｐ面Ｔｈｒ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｇｕｙ　ＬｙＳ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａ４１ｎ 　Ａｓｐ　Ｌｙｓνａ１　丁ｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　ＬｙＳ　Ｇｌｕ　 Ｇｌｙ　Ｔｈｘ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｉｊｌｕ　Ｓａｒ　ＬｙＢ　Ｇｌｕ　ｌ１■ ２４５　２５０　．２５５ Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　丁ｈｒ　Ｖａｌ　Ａｌａ　 Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｔｈｔ　ＴｈｒＧｉｎ　Ａｓｐ　Ｔ ｈｒ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ａ ｌａ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　ＬｅｕＧｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｚ　Ａｌａ　Ｖａ ｌ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｌｙ ｓ　Ａｓｎ　八１ａ（２）配列番号：１１に関する情報・ （ｉ）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ：１０１７塩基対 （Ｂ）配列の型、核酸 （Ｃ）鎖の数　１本鎖 （Ｄ）トポロ／−・直鎖状 （ｉｉ）配列の種類・ＤＮＡ　（ゲノム）（ｖｉ）起源： （Ａ）生物名　ボレリア・ブルグドルフエリ（Ｂ）株名　ＺＳ７ （ｖｉｉ）直接の起源 （Ｂ）クローン　Ｎ５Ｉ−ＺＳ７ （Ｘｌ）配列の記載、配列番号　１１・ＡＴＧＧ＾τＣＣ八＾　ＪＩＩＣへ（Ｊ Ｇ＋ｒＧＴＣ入ＡＧＣ”ｍｃＡＧ　ＧＴＡＧＡ丁丁ＣＣ丁　丁ＴＣＴ丁ＴＧＧＣ ＾　Ｔ＋ＪＣ（：ＧbＡＪｔＡ ＧＣＡＡＣＡＧＴＡＧ　ＡＣＡＡＧＣ丁丁ＧＡ　ＧＩＪＴＡＡＡＧＧＡ　ＡＣ’ ｒＴＣ？Ｇ入ＴＡＡＡ入ＡＣＡＡ丁ｃｃ　八Ｔ（１（ｙＧＡf’ｒＡ ＧＡＧＧＧＧＴＣＡＧ　ＣＡＧＴＴＧ八ＡＡ丁　へＡＣＡＡＡＡＣ丁Ｔ　ＧＡＴ に八人ＡＴＴＡ　ＡＡＡＡＣＧＣＴＴＴ　ＡＡＭＴＡ八０１へ （２）配列番号：１２に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ＝３３８アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー・直鎖状 （ｉ　ｉ）配列の種類：蛋白 （ｖｉ）起源： （Ａ）生物名・ボレリア・ブルグドルフエリ（Ｂ）株名：ＺＳ７ （ｖ　ｉ　ｉ）直接の起源： （Ｂ）クローン：Ｎ５ｌ−ＺＳ７ （ｘ　ｉ）配列の記載：配列番号：１２：Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｉａｕ　八 ｒ９　八に９　Ａｓｐ　Ｃ＋ｌｎ　ＬｙＳ　Ｓｅｒ　１．ｅｕ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ 　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　５■■ 丁ｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｉｌｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　八１ａ　 丁ｈｃ　Ａｆｑ　八ｌａ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　１ｉｅＳｏ　５５　６０ Ｍｅｔ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅ【　Ｌａｕ　 八ｓｐ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　５ｅｒＬｙＳ　Ｇｌｙ　Ｔ ｈｒ　Ｓｅｔ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ａｇｎ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｖ ａｌ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｖａ１１３０　１３Ｓ　１４０ Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｔｈｔ　Ｓｅｃ　Ｌｙｓ　八ｓｐ　Ｌｙｓ　Ｓｅｔ　 Ｓｅｔ　Ｔｈｉ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　しｙｓ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ１８０　Ｌ８Ｓ　１ ９０ Ｇｉｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｉ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　 Ｉｌｅ　ｒｈｒ　Ａｒｇ　Ａｉｓ　Ａｓｐ　（＋ｌｙ　Ｔｈ■ Ａｒｑ　Ｉａｕ　Ｇｌｕ　Ｔｙｔ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　 Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　八ｌａ　ＬｙｓＧｉｕ　Ｖａｌ　Ｌ ａｕ　ＬｙＳ　Ｓｅｒ　Ｔｙｔ　Ｖａｌ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｌ ｅｕ　丁Ｍ　八Ｌａ　ＧＬｕ　ＬｙＳＴｈｔ　’ｒｈｚ　Ｉｌｕ　ＶａＩ　Ｖａ ｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　丁ｈｒ　１．ｅｕ　Ｓｅｒ　ｉ 、ｙｓ　Ａｓｎ　H１ｅ Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｓｅｔ　Ｖａｔ　Ｇｌｕ　 ｔａｕ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｔｈｃ　八ｓｐ　Ｓｅｒ　５ｅｔＡｌａ　Ａｌａ　Ｔ ｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　丁ｈｒ　Ａｌａ　Ａｌａ　丁ｒｐ　Ａｇｎ　Ｓｅｒ　Ｇ ｌｙ　Ｔｈｒ　Ｓｅｔ　Ｔｈｒ　Ｌ４ｕ２１５　’　２８０　２８５ Ｔｈ【工１＠τｈＹ：ＶａＬ　Ａｓｎ　Ｓｅｘ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌｙ ｓ　Ａｓｐ　ｔａｕ　Ｖａｌ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　ＬｙｓＧｌｕ　Ａｓｎ　丁ｈｒ 　ｒｌｅ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　丁ｙｔ　Ａｓｐ　Ｓｅｘ：　Ａｓ ｎ　Ｇｌｙ　Ｔｈ【　Ｌｙｓ　Ｉａ■ Ｇｉｕ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　八ｌａ　Ｖａｎ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　ＬｙＳ　 Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　ＡｌａＬｅｕ　Ｌｙ５ 表Ｉ（続き） Ｘ　別の命名 Ｉ　Ｏｓｐ　Ａ遺伝子型 表ＩＩ 交差防御 導入した抗血清（抗−）　接種した菌株　防御（関節炎が起こらず）ＺＳ７　Ｎ ＥＩＩＨ− ＮＥＩＩＨＮＥＷＩＩＨ＋ ＮＥＩＩＨＺＳ７　− ＮＥＩＩＨ２００４７０± ＮＥＩＩＨ１９８５７°　± ＺＳ７　２００４７’　± ＺＳ７　１９８５７°　± カクテル”　２００４７°　＋ カクテル”　１９８５７’　± ”　２００４７、ＺＳ７およびＮＥＩＩＨを含む。

Ｏ防御されていない対照において病原性の減少を示した。

表ＩＩＩ 交差防御 導入した抗血Ｉ　採種したＵ　臨床的関節炎　組織病理学的変化＋　スピロヘー タ自症５（ａ−）　１１１２３〜２５Ｂ −ＺＳ７　８／８　＋　５／７ ＺＳ７　’ＺＳ７　０／３　０／３ Ｚｓ　７　ＮＥ　１１Ｈ３／３　＋　３／３ＺＳ７　２００４７　（２／３）’ 　＋　３／３Ｂ３］、　ＺＳ７　０／３　３／３ −　ＮＥＩＩＨ７／７　＋　４１５ ＮＥＩＩＨＮＥＩＩＨ（２／６）’　−八　〇／６ＮＥＩＩＨＺＳ７　３／３　 ＋　３／３ＮＥＩＩＨ２００４７（２／３）’　±　１／３ＺＱＩ　ＺＳ７　３ ／３　＋　３／３ −　２００４７　４／４　＋　２／３ カクテル！　２００４７　０／３　−八　１／３ｒｅｃ、ｏｓｐＡ　ＺＳ７　（ ２／６）　０　−＾　５／６ｒｅｃ、ｏｓｐＡ　ＮＥＩ　ＩＨ３／３　’＋　２ ／３ｒｅｃ、Ｏｓｐ＾　２００４７　（１／３）　’　±　０／２表ＩＩＩ　（ 続き） 交差防御 導入した抗血清　ＩＩＩ、たＩＩ　Ｉ法的ｌｉｔ起炎　組Ｉ学的防御＋　スピロ ヘータ自症５（ｉｔ−）　１１１２３〜２５日 −５）ｌ−２−８２−Ｐ５　２／　２　＋　１　／　２ｒｅｃ、０ｓｐＡ　５Ｈ −２−８２−Ｐ５　（２／　３　）　’　−八　〇／３−　２１０３８　（２／ ２）　±　１　／　２　＋＋ｒｅｃ、ｏｓｐＡ　２１０３８　（２／３）’　− 八　〇／２リジエンド：表ＩＩＩ　：交差防御 Ｘボレリア・プルグドルフェリ２００４７、ＺＳ７およびＮＥＩＩＥ株を含む＋ 関節炎、心臓炎、肝炎、筋肉炎 Ｏご（弱い臨床上の関節炎のみ ＾ごく弱い組織病理学的変化のみ ５再培養 千十非運動性スピロヘータ 表ＩＶ ｌレリア・ブルグＦｋ１ｘすＩＩｍ　１ｍ！学約ｇＩ　１１１１ｆｆ＆Ｉ　ｆｌ ａ／Ｈ３Ｐ６０／Ｈ３Ｐ７０　０ｓｐＡｊｆｃ子ＷＢ３１（＾ＴＣＣ３５２１０ ）　マダニ（イクソデス・ダミニ）　アメリカら庫国　＾／＾／＾　ＩＺＳ７　 マダニ（イクソデス・リシヌス）　ドイツ　＾／Ａ／Ａ　ＩＺ３７　マダニ（イ クソデス・りンヌス）　ドイツ　Ａ／Ａ／Ａ　ｌＧｅ１ｌｏ　ｕ（ＥＣＭ）　ド イツ　＾／Ａ／Ａ　ＩＢｌ　皮膚（ＥＣＭ）　ドイツ　ＡＩＡ／＾　■Ｂ２　皮 膚（ＥＣＭ）　ドイツ　Ａ／＾／＾　ＩＢ３　皮膚（八Ｄ）　ドイツ　＾／Ａ／ ＾　工２０００４　マダニ（イクソデス・りンヌス）　フランス　ＡＩＡ／＾　 Ｉ１９５３５　マウス（ベロミスクス）　アメリカ台ＩＩ　＾／ＡＨＡ　Ｉ２６ ８１６　へタネズミ（ミクロトラス）　アメリカ１国　＾／Ａ／Ａ　Ｉ２１１！ ６９１　マダニ（イクフデス・ダミニ）　了メリｈ自衆ｍ　＾／＾／＾　工２１ ３０５　マウス（ベロミスクス）　アメリカら衆国　Ａ／Ａ／＾　Ｉ２１３４３ 　マウス（ベロミスクス）　アメリｈ合衆国　Ａ／＾／＾　Ｉ２６８１５　ツマ リス　了メリｈ合衆国　Ａ／Ａ／Ａ　Ｉ２９７　５ｉｉｌｉｉ　７７１１７１６ １ｍ　Ａ／Ａ／Ａ　ＩＭａｃ３　皮膚　アメリカ合衆国　ＡｌＡｌ式　Ｉ２００ ０１　マダニ（イクソデス・リノヌス）　フランス　＾／ＡＨＡ　ＩＣＴＩＰ７ 　イヌのマダニ　アメリｈ合衆国　＾／Ａ／Ａ　ｌ５Ｈ−２−８２７ダニ（イク ′ノデス・ダミニ）　アメリカ６１１９　Ａ／Ａ／Ａ　、ＩＣ＾−２−８７７ダ ニ（イクンデス・バンフィクス）アメリカ合衆国　＾／Ａ／Ａ　ｌ５１２／１４ 　マダニ（イクソデス・りンヌス）　ドイツ　Ａ／Ａ／Ａ　ＩＺ２５　マダニ（ イクソデス・リシヌス）　トイ７　Ａ／＾／Ａ　ｌｌ１１８　マダニ（イクソデ ス・リノヌス）　ドイツ　＾／＾／Ａ　１２１３６　マダニ（イクソデス・リン スス）　ドイツ　＾／＾／Ａ　Ｉ２１６０　マダニ（イクノデス・す／スス）　 ドイツ　Ａ／Ａ／＾　■表ＩＶ続き ｊｌｒ１１了−ブルグＦｋ１ｘり単錘−生１学杓起Ｉ　ｍｌｌ’ｌｌｌ　ｆｌａ ／Ｈ３Ｐ６０／Ｈ３Ｐ７０　０ｓｐＡＪｌｒＴＩＩＰＩ　脳１１１１　７ランス 　Ａ／＾／＾　ＩＮＥ２　マダニ（イクソデス・リシヌス）　スイス　＾／＾／ Ａ　ＩＲ７ＮＥ４　マダニ（イタ１デス・りンヌス）　スイス　Ａ／＾／＾　Ｉ ＬＷ２　皮膚　Ｆ（）　＾／Ａ／Ａ　ＩＬｆ２．４　皮膚　ドイツ　＾／Ａ／Ａ 　１１９８５７　ウ１？４１　了メリ＃６１１！ｌ　Ｂ／＾／Ｂ／Ａ　ｌｌＩ２ １０３８　幼虫（イクソデス・テンタトウス）アメリカ台ｍ１ｌｌ　Ｂ／＾／Ｂ ／＾　ＩＩＩＡＣＡ−１皮１（ＡＣＡ）　２ウエーデン　Ｂ／Ｂ／Ａ　ＩＶＢｏ ２３　皮−（ＥＣＭ）　ドイツ　ＢＩＢ／＾　ＩＶＳｏ２　マダニ（イクソデス ・リシヌス）　イギリス　Ｂ／Ｂ／＾　ＩＶＰＫｏ　皮１１（ＥＣＭ）　ドイツ 　Ｂ／Ｂ／Ａ　ＩＹＺＱＩ　マダニ（イクソデス・りン１ス）　ドイツ　Ｂ／Ｂ ／Ｂ　ＩＩＮＥ４　マダニ（イクソデス・リシヌス）　スイス　Ｂ／Ｂ／Ｂ　Ｉ ＩＮＥ５８　マダニ（イクソデス・リンスス）　スイス　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ＩＩＮＥ ＩＩＨマダニ（イクソデス・りンヌス）　スイス　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ＩＩＲ３ＮＥ２ 　、　マダニ（イク゛Ｉデス・リシヌス）　スイス　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ｌｌＮ３４　 マダニ（イクソデス・リンスス）　ドイツ　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ｌｌｌＲ３脳をｉｌ　 フランス　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ｌｌｌＲ３Ｕｓ　ドイツ　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ｌｌＦｒ５ｔｌ 　皮膚　ドイツ　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ｌｌＦｒ５ｔ２　皮膚　ドイツ　Ｂ／Ｂ／Ｂ　１ １Ｓｏｌ　マダニ（イクソデス・リシヌス）　イギリス　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ＩＩ表Ｉ Ｖ続き ボレリア・ブルグＦルフエリ＊ｌｉ　！１１！学的起源　地理的起ｉ　ｆｌａ／ Ｈ３Ｐ６０／ＨＳＰ７０　０ｓｐ＾遺伝子型４２／８７　スウェーデン　Ｂ／Ｂ ／Ｂ　ｌ１１５２／８６　スウェーデン　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ｌ１１１に５　マダニ（ イクンデス・リンスス）　へンガリー　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ＩＩＭＫ６　マダニ（イク ンデス・りンヌス）　へンガリー　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ｌｌ３８７　悩を髄液　ドイツ 　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ｌｌ５０　１１ｆｌｉ　Ｆ（７Ｂ／Ｂ／Ｂ　ｌＩ２００４７　マ ダニ（イクソデス・リンスス）　フランス　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ＶＳ９０　マダニ（イ クソデス・リゾスス）　ドイツ　Ｂ／Ｂ／Ｂ　ＶＩｐＯムー１０ 、、、Ａ、Ｉ＆、ＮｅＰＣＴ／ＥＰ　９２１０１８２７フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，６識別記号　庁内Ｗ　’ｆＭ　番号Ｃｌ２Ｎ　１／ ２０　Ａ　７２３６−４ＢＣ１２Ｐ　２１１０２　Ｃ９２８２−４Ｂ／／（ＣＬ ２Ｎ　１５１０９　ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ１：０１） （Ｃ１２Ｐ　２１１０２ Ｃ１２Ｒ１：１９） （３１）優先権主張番号　９２１１３１８．２（３２）優先日　１９９２年５月 ２８日（３３）優先権主張国　イギリス（ＧＢ）（３１）優先権主張番号　９２ １１３１７．４（３２）優先日　１９９２年５月２８日（３３）優先権主張国　 イギリス（ＧＢ）（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、　ＳＥ）、　 ＡＵ、　ＣＡ、ＪＰ、　ＫＲ，ＵＳ（７１）出願人　トイチェス・クレープスフ ォルシュングスツェントルム・シュティフトウング・デス・オツフエントリッヒ エン・レヒツ ドイツ連邦共和国デー−６９００ハイデルベルク１、イム・ノイエンハイマー・ フェルト２８０番 Ｉ Ｃｌ２Ｒ１：０１） （７２）発明者　ロベト、イヴス ベルギー国ベー−１３３０リクセンザルト、リュ・デュ・ランスティチュー５８ ９番、スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノロム） （７２）発明者　ジモン、マルクス ドイツ連邦共和国デー−７８００フライブルク、マックスーブランクーインステ ィテユート・フユア・イムノビオロギー（番地の表示なし） （７２）発明者　シャイブレ、ウルリヒドイツ連邦共和国デー−７８００７ライ ブルク、マックスーブランクーインスティテユート・フユア・イムノビオロギ− （番地の表示なし） （７２）発明者　ヴアリヒ、ラインハルトドイツ連邦共和国デー−６９００ハイ デルベルク、ウンテレン・ロムバッハ６番、トイチェス・クレーブスフオルシュ ングスツエントルム・シュテイフトウング・デス・オツフェントリッヒエン・レ ヒツ （７２）発明者　クラマー、ミヒヤエルドイツ連邦共和国デー−７８００７ライ ブルク、マックスーブランクーインステイテユート・フユア・イムノビオロギ− （番地の表示なし）

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. １．ＯｓｐＡ部分をコードしている配列が実質的に配列番号：１または３に示す 配列と同一であることを特徴とするＯｓｐＡ蛋白またはその誘導体をコードして いるＤＮＡ配列。
2. ２．配列番号：１または３に示す配列と９０％の相同性がある請求項１記載のＤ ＮＡ配列。
3. ３．誘導体がＮＳ１−融合蛋白である請求項１または２記載のＯｓｐＡ誘導体を コードしているＤＮＡ配列。
4. ４．ｐｒＯｓｐＡ１−Ａ４プライマーを用いた場合にポリメラーゼ連鎖反応が起 こるがｐｒＯｓｐＡ１−Ａ２プライマーを用いた場合にはポリメラーゼ連鎖反応 が起こらないことを特徴とするＯｓｐＡ蛋白をコードしているＤＮＡ配列。
5. ５．配列番号：２または４に示す配列と実質的に同一なアミノ酸配列を含んでい るＯｓｐＡ蛋白またはその誘導体。
6. ６．モノクローナル抗体ＬＡ２と反応しないが、モノクローナル抗体ＬＡ３１と 反応するＯｓｐＡ蛋白またはその誘導体。
7. ７．ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）のサブグルー プＩＩ、ＩＩＩ、１Ｖ、ＶまたはＶＩ由来のＯｓｐＡ蛋白または誘導体。
8. ８．ＮＳ１−融合蛋白であるＯｓｐＡ誘導体。
9. ９．ＯｓｐＡ蛋白がボレリア・ブルグドルフェリ種ＺＳ７、ＺＱ１、１９８５７ およびＡＣＡ１由来のＯｓｐＡから選択されるＮＳ１−ＯｓｐＡ融合蛋白。
10. １０．ＯｓｐＡ蛋白の一部が切形されている請求項８または９記載のＮＳ１−Ｏ ｓｐＡ融合蛋白。
11. １１．少なくとも２種のＯｓｐＡまたはその誘導体からなり、ＯｓｐＡ蛋白また はその誘導体が異なる群由来であることを特徴とするワクチンまたは診断用組成 物。
12. １２．１つめのＯｓｐＡまたはその誘導体がＩ群、ＩＩ群、ＩＩＩ群およびＩＶ 群から選択され、２つめのＯｓｐＡまたはその誘導体がＩ群、ＩＩ群、ＩＩＩ群 およびＩＶ群から選択され、１つめと２つめのＯｓｐＡが異なる群から選択され るＯｓｐＡまたはその誘導体からなるワクチン組成物。
13. １３．ＺＳ７のＯｓｐＡまたはその誘導体およびＺＱ１のＯｓｐＡまたはその誘 導体からなり、適当な担体との混合物になっている請求項１１または１２記載の ワクチン。
14. １４．請求項５または６記載のＯｓｐＡ蛋白またはその誘導体からなり、適当な 担体との混合物になっているワクチン組成物。
15. １５．ＮＳ１−ＯｓｐＡ融合蛋白からなり、適当な担体との混合物になっている ワクチン組成物。
16. １６．請求項１ないし４記載のＤＮＡ配列からなるベクター。
17. １７．ａ）請求項１６記載のベクターで宿主を形質転換し、ｂ）適当な宿主中で 蛋白または誘導体を発現させ、ｃ）生成した蛋白または誘導体を単離することか らなる請求項５または６記載のＯｓｐＡまたはその誘導体を製造する方法。
18. １８．有効量の本請求の範囲記載の蛋白または誘導体を動物に投与することから なるボレリアによる感染に感受性の哺乳動物を治療する方法。
19. １９．有効量の本請求の範囲記載のワクチンを投与することからなるボレリアに よる感染に感受性の哺乳動物を治療する方法。
20. ２０．医薬に用いる請求項５〜１０いずれかに記載の蛋白。
21. ２１．ボレリア・ブルグドルフェリＺＱ１株。