JPH07330614A - 遺伝子の細胞内導入用脂肪乳剤 - Google Patents
遺伝子の細胞内導入用脂肪乳剤Info
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- JPH07330614A JPH07330614A JP14221794A JP14221794A JPH07330614A JP H07330614 A JPH07330614 A JP H07330614A JP 14221794 A JP14221794 A JP 14221794A JP 14221794 A JP14221794 A JP 14221794A JP H07330614 A JPH07330614 A JP H07330614A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 個体に遺伝子ＤＮＡを導入する、遺伝子の細
胞内導入用脂肪乳剤に係り、脂肪乳剤中のリピッドマイ
クロスフェアーが、導入遺伝子ＤＮＡに対しキャリヤと
して作用し、遺伝子導入ができる脂肪乳剤の提供。 【構成】 少なくとも以下の組成、（ａ）導入遺伝子Ｄ
ＮＡ、（ｂ）植物油、炭素原子数８〜１２個の中鎖脂肪
酸のトリグリセリドならびに炭素原子数６〜１８の脂肪
酸のジ−およびモノグリセリドから選択される少なくと
も１種の脂肪乳剤基剤、（ｃ）リン脂質および非イオン
系界面活性剤から選択される少なくとも１種の乳化剤、
（ｄ）必要に応じ、コレステロール誘導体、および、
（ｅ）水、からなる、個体に遺伝子ＤＮＡを導入する脂
肪乳剤。
胞内導入用脂肪乳剤に係り、脂肪乳剤中のリピッドマイ
クロスフェアーが、導入遺伝子ＤＮＡに対しキャリヤと
して作用し、遺伝子導入ができる脂肪乳剤の提供。 【構成】 少なくとも以下の組成、（ａ）導入遺伝子Ｄ
ＮＡ、（ｂ）植物油、炭素原子数８〜１２個の中鎖脂肪
酸のトリグリセリドならびに炭素原子数６〜１８の脂肪
酸のジ−およびモノグリセリドから選択される少なくと
も１種の脂肪乳剤基剤、（ｃ）リン脂質および非イオン
系界面活性剤から選択される少なくとも１種の乳化剤、
（ｄ）必要に応じ、コレステロール誘導体、および、
（ｅ）水、からなる、個体に遺伝子ＤＮＡを導入する脂
肪乳剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、個体に遺伝子ＤＮＡを
導入する、遺伝子の細胞内導入用脂肪乳剤に係り、詳細
には、遺伝子治療において患者の細胞に外来遺伝子を導
入することによって疾患の治療を行なうため、個体に遺
伝子ＤＮＡを導入する脂肪乳剤に関する。
導入する、遺伝子の細胞内導入用脂肪乳剤に係り、詳細
には、遺伝子治療において患者の細胞に外来遺伝子を導
入することによって疾患の治療を行なうため、個体に遺
伝子ＤＮＡを導入する脂肪乳剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】遺伝子工学の進歩により、疾患の分子レ
ベルでの病態学的側面や、その原因遺伝子が解明され、
体細胞を遺伝子レベルで改変し、難治性疾患の治療に役
立たせようとする、いわゆる遺伝子治療の試みが最近注
目を浴びてきている。例えば、一部の癌は遺伝子異常に
より引き起こされ、様々な遺伝子異常を蓄積した遺伝子
病と考えられるが、仮にこれらの遺伝子異常を修復する
ことができるものであれば、癌を治癒することができ
る。しかしながら、遺伝子工学が進歩したといっても、
現在の遺伝子操作は未熟なものであり、正確かつ高率
に、遺伝子を特定の細胞あるいはＤＮＡ上の特定の部位
に挿入することはできない。したがって、このような背
景のもとに、欧米、特にアメリカにおいては遺伝子治療
の試みがしだいに多く行なわれてきているものの、あく
まで実験的医療としての遺伝子治療であり、その対象に
は、致命的な進行癌、ＡＩＤＳ、先天性代謝異常などの
致命的疾患患者が選ばれ、その遺伝子治療効果の有効性
が期待されている現状である。
ベルでの病態学的側面や、その原因遺伝子が解明され、
体細胞を遺伝子レベルで改変し、難治性疾患の治療に役
立たせようとする、いわゆる遺伝子治療の試みが最近注
目を浴びてきている。例えば、一部の癌は遺伝子異常に
より引き起こされ、様々な遺伝子異常を蓄積した遺伝子
病と考えられるが、仮にこれらの遺伝子異常を修復する
ことができるものであれば、癌を治癒することができ
る。しかしながら、遺伝子工学が進歩したといっても、
現在の遺伝子操作は未熟なものであり、正確かつ高率
に、遺伝子を特定の細胞あるいはＤＮＡ上の特定の部位
に挿入することはできない。したがって、このような背
景のもとに、欧米、特にアメリカにおいては遺伝子治療
の試みがしだいに多く行なわれてきているものの、あく
まで実験的医療としての遺伝子治療であり、その対象に
は、致命的な進行癌、ＡＩＤＳ、先天性代謝異常などの
致命的疾患患者が選ばれ、その遺伝子治療効果の有効性
が期待されている現状である。
【０００３】しかしながら、遺伝子を正確に、また確実
に特定の細胞あるいはＤＮＡ上の特定部位に挿入するこ
とができれば、遺伝子治療の有用性が確立し、難治病疾
患患者に多大の光明を与えるものである。その第一歩
は、遺伝子ＤＮＡを細胞内に効率よく安全に導入するこ
とであるといえる。これまでに確立している遺伝子治療
の方法としては、遺伝子導入細胞を患者に移植する方法
（ｅｘ ｖｉｖｏ法）と、細胞を介さずに直接個体に遺
伝子自体を注入する方法（ｉｎ ｖｉｖｏ法）の２方法
がある。この場合、ｉｎ ｖｉｖｏ法は、標的細胞の採
取、分離、保存、培養、移植などの操作を必要としない
という点で、施行し易い利点を有しているが、ｅｘ ｖ
ｉｖｏ法の方が、目的とする細胞への遺伝子導入がより
確実にできることより、現時点において広く採用されて
いる。特に、ｅｘ ｖｉｖｏ法における遺伝子導入に際
しては、ウイルス・ベクターを用いる方法が主流を占
め、レトロウイルス・ベクター、アデノウイルス・ベク
ター、アデノ関連ウイルス・ベクター等が挙げられる。
これらのなかでも特に、レトロウイルス・ベクターにつ
いては、その安全性と導入遺伝子の長い発現期間がほぼ
確認されてきたことより、これらレトロウイルス・ベク
ターの性状を生かして、ｅｘ ｖｉｖｏ法における導入
法として汎用されてきている。
に特定の細胞あるいはＤＮＡ上の特定部位に挿入するこ
とができれば、遺伝子治療の有用性が確立し、難治病疾
患患者に多大の光明を与えるものである。その第一歩
は、遺伝子ＤＮＡを細胞内に効率よく安全に導入するこ
とであるといえる。これまでに確立している遺伝子治療
の方法としては、遺伝子導入細胞を患者に移植する方法
（ｅｘ ｖｉｖｏ法）と、細胞を介さずに直接個体に遺
伝子自体を注入する方法（ｉｎ ｖｉｖｏ法）の２方法
がある。この場合、ｉｎ ｖｉｖｏ法は、標的細胞の採
取、分離、保存、培養、移植などの操作を必要としない
という点で、施行し易い利点を有しているが、ｅｘ ｖ
ｉｖｏ法の方が、目的とする細胞への遺伝子導入がより
確実にできることより、現時点において広く採用されて
いる。特に、ｅｘ ｖｉｖｏ法における遺伝子導入に際
しては、ウイルス・ベクターを用いる方法が主流を占
め、レトロウイルス・ベクター、アデノウイルス・ベク
ター、アデノ関連ウイルス・ベクター等が挙げられる。
これらのなかでも特に、レトロウイルス・ベクターにつ
いては、その安全性と導入遺伝子の長い発現期間がほぼ
確認されてきたことより、これらレトロウイルス・ベク
ターの性状を生かして、ｅｘ ｖｉｖｏ法における導入
法として汎用されてきている。
【０００４】しかしながら、最近急速に研究が行なわれ
てきた細胞ターゲッティング法が確立すれば、遺伝子治
療の主流は、ｉｎ ｖｉｖｏ法に変わっていくものと考
えられる。かかる考え方を採用した方法として、遺伝子
ＤＮＡそのものに細胞親和性を持つ物質を結合させる
か、または細胞親和性を持つ物質でくるむか、あるいは
結合させた人工の粒子を作り、それを細胞内に導入する
方法がある。たとえば、ｉｎ ｖｉｔｒｏで遺伝子ＤＮ
Ａと適当な脂質、例えばリン脂質とを混合し、超音波処
理すると、ＤＮＡを含んだ小胞体、すなわちリポソーム
ができる。また、すでに作製したリポソームにＤＮＡを
添加し、電荷により結合させることができる。これらの
リポソームを細胞へ与えて接触させると、リポソーム膜
と細胞膜は融合して、リポソーム内のＤＮＡは細胞へ移
行する。さらに一部のＤＮＡは核内へ入って遺伝子の導
入が行なわれるのである。
てきた細胞ターゲッティング法が確立すれば、遺伝子治
療の主流は、ｉｎ ｖｉｖｏ法に変わっていくものと考
えられる。かかる考え方を採用した方法として、遺伝子
ＤＮＡそのものに細胞親和性を持つ物質を結合させる
か、または細胞親和性を持つ物質でくるむか、あるいは
結合させた人工の粒子を作り、それを細胞内に導入する
方法がある。たとえば、ｉｎ ｖｉｔｒｏで遺伝子ＤＮ
Ａと適当な脂質、例えばリン脂質とを混合し、超音波処
理すると、ＤＮＡを含んだ小胞体、すなわちリポソーム
ができる。また、すでに作製したリポソームにＤＮＡを
添加し、電荷により結合させることができる。これらの
リポソームを細胞へ与えて接触させると、リポソーム膜
と細胞膜は融合して、リポソーム内のＤＮＡは細胞へ移
行する。さらに一部のＤＮＡは核内へ入って遺伝子の導
入が行なわれるのである。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上記の
遺伝子治療におけるリポソームに代わる遺伝子導入技法
として、脂肪小粒子（リピッドマイクロスフェアー）を
用いたＤＤＳ（ドラッグデリバリーシステム）に着目し
た。この方法を用いれば、ｅｘ ｖｉｖｏにおいても、
またｉｎ ｖｉｖｏにおいても、安全にまた効率よく遺
伝子ＤＮＡを細胞内に導入し得ることが期待される。す
なわち、導入遺伝子ＤＮＡを、脂肪乳剤中のリピッドマ
イクロスフェアーに結合してやれば、該リピッドマイク
ロスフェアーがキャリアとなって、選択的に癌（腫瘍）
細胞等に移送され、その場でリピッドマイクロスフェア
ーに結合された遺伝子ＤＮＡが核内に入って、遺伝子の
導入が行なわれ、有効な遺伝子治療法の確立ができ得る
ものと考えられる。その点について本発明者らは鋭意検
討を加えた結果、脂肪乳剤中のリピッドマイクロスフェ
アーが、導入遺伝子ＤＮＡに対しキャリヤとしての役目
を果たし、効率よく遺伝子ＤＮＡを癌（腫瘍）細胞等の
細胞へ移送し、遺伝子導入ができ得ることを確認し、そ
の結果本発明を完成させるに至ったのである。
遺伝子治療におけるリポソームに代わる遺伝子導入技法
として、脂肪小粒子（リピッドマイクロスフェアー）を
用いたＤＤＳ（ドラッグデリバリーシステム）に着目し
た。この方法を用いれば、ｅｘ ｖｉｖｏにおいても、
またｉｎ ｖｉｖｏにおいても、安全にまた効率よく遺
伝子ＤＮＡを細胞内に導入し得ることが期待される。す
なわち、導入遺伝子ＤＮＡを、脂肪乳剤中のリピッドマ
イクロスフェアーに結合してやれば、該リピッドマイク
ロスフェアーがキャリアとなって、選択的に癌（腫瘍）
細胞等に移送され、その場でリピッドマイクロスフェア
ーに結合された遺伝子ＤＮＡが核内に入って、遺伝子の
導入が行なわれ、有効な遺伝子治療法の確立ができ得る
ものと考えられる。その点について本発明者らは鋭意検
討を加えた結果、脂肪乳剤中のリピッドマイクロスフェ
アーが、導入遺伝子ＤＮＡに対しキャリヤとしての役目
を果たし、効率よく遺伝子ＤＮＡを癌（腫瘍）細胞等の
細胞へ移送し、遺伝子導入ができ得ることを確認し、そ
の結果本発明を完成させるに至ったのである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】しかして本発明は、遺伝
子ＤＮＡを細胞内に導入する遺伝子ＤＮＡキャリヤ用脂
肪乳剤に係り、具体的には、少なくとも以下の組成、
（ａ）導入遺伝子ＤＮＡ、（ｂ）植物油、炭素原子数８
〜１２個の中鎖脂肪酸のトリグリセリドならびに炭素原
子数６〜１８の脂肪酸のジ−およびモノグリセリドから
選択される少なくとも１種の脂肪乳剤基剤、（ｃ）リン
脂質および非イオン系界面活性剤から選択される少なく
とも１種の乳化剤、（ｄ）必要に応じ、コレステロール
誘導体、および、（ｅ）水、からなる、個体に遺伝子Ｄ
ＮＡを導入する脂肪乳剤；を提供する。
子ＤＮＡを細胞内に導入する遺伝子ＤＮＡキャリヤ用脂
肪乳剤に係り、具体的には、少なくとも以下の組成、
（ａ）導入遺伝子ＤＮＡ、（ｂ）植物油、炭素原子数８
〜１２個の中鎖脂肪酸のトリグリセリドならびに炭素原
子数６〜１８の脂肪酸のジ−およびモノグリセリドから
選択される少なくとも１種の脂肪乳剤基剤、（ｃ）リン
脂質および非イオン系界面活性剤から選択される少なく
とも１種の乳化剤、（ｄ）必要に応じ、コレステロール
誘導体、および、（ｅ）水、からなる、個体に遺伝子Ｄ
ＮＡを導入する脂肪乳剤；を提供する。
【０００７】本発明は、その目的とする脂肪乳剤を調製
する成分の配合量において、より具体的には、（ａ）導
入遺伝子ＤＮＡ、（ｂ）植物油、炭素原子数８〜１２個
の中鎖脂肪酸のトリグリセリドならびに炭素原子数６〜
１８の脂肪酸のジ−およびモノグリセリドから選択され
る少なくとも１種の脂肪乳剤基剤：５〜５０％（Ｗ／
Ｖ）、（ｃ）リン脂質および非イオン系界面活性剤から
選択される少なくとも１種の乳化剤：０．０５〜２５％
（Ｗ／Ｖ）、（ｄ）必要に応じ、コレステロール誘導
体：０．００１〜１％（Ｗ／Ｖ）、および、（ｅ）水、
からなる、個体に遺伝子ＤＮＡを導入する脂肪乳剤；を
提供する。
する成分の配合量において、より具体的には、（ａ）導
入遺伝子ＤＮＡ、（ｂ）植物油、炭素原子数８〜１２個
の中鎖脂肪酸のトリグリセリドならびに炭素原子数６〜
１８の脂肪酸のジ−およびモノグリセリドから選択され
る少なくとも１種の脂肪乳剤基剤：５〜５０％（Ｗ／
Ｖ）、（ｃ）リン脂質および非イオン系界面活性剤から
選択される少なくとも１種の乳化剤：０．０５〜２５％
（Ｗ／Ｖ）、（ｄ）必要に応じ、コレステロール誘導
体：０．００１〜１％（Ｗ／Ｖ）、および、（ｅ）水、
からなる、個体に遺伝子ＤＮＡを導入する脂肪乳剤；を
提供する。
【０００８】本発明は、前記した如く、（ａ）の導入遺
伝子ＤＮＡを脂肪乳剤とした場合に、導入遺伝子ＤＮＡ
が脂肪乳剤を構成するリピッドマイクロスフェアーに結
合し、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて試験内の細胞に遺伝子を
導入することにおいて、さらにそのリピッドマイクロス
フェアーが腫瘍細胞などに移送され、その場で結合され
た遺伝子ＤＮＡが核内に入って、遺伝子の導入が行なわ
れ、遺伝子治療ができ得る点で特異的なものである。
伝子ＤＮＡを脂肪乳剤とした場合に、導入遺伝子ＤＮＡ
が脂肪乳剤を構成するリピッドマイクロスフェアーに結
合し、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて試験内の細胞に遺伝子を
導入することにおいて、さらにそのリピッドマイクロス
フェアーが腫瘍細胞などに移送され、その場で結合され
た遺伝子ＤＮＡが核内に入って、遺伝子の導入が行なわ
れ、遺伝子治療ができ得る点で特異的なものである。
【０００９】
【発明の作用・効果】本発明が提供しようとする、個体
に遺伝子ＤＮＡを導入する遺伝子ＤＮＡキャリヤ用脂肪
乳剤において、リピッドマイクロスフェアーに結合する
遺伝子ＤＮＡとしては、癌に関連する遺伝子ＤＮＡ、先
天性代謝異常に関連する遺伝子ＤＮＡ、ＡＩＤＳなどウ
イルス性疾患に関連する遺伝子ＤＮＡ、各種サイトカイ
ンなど炎症や動脈硬化にかかわる生体内活性物質に関連
する遺伝子ＤＮＡなど、各種遺伝子治療における遺伝子
ＤＮＡであればどのようなものでもよい。具体的には、
癌抑制遺伝子ＤＮＡ、サイトカイン遺伝子ＤＮＡ、同種
抗原遺伝子ＤＮＡ、薬剤感受性遺伝子ＤＮＡ、多剤耐性
遺伝子ＤＮＡ等が挙げられる。より具体的な導入遺伝子
ＤＮＡとしては、インターロイキン−１β（ＩＬ−１
β）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロ
イキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ
−６）、インターロイキン−７（ＩＬ−７）、ＧＭ−Ｃ
ＳＦ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）、インターフェロン
−γ（ＩＦＮ−γ）、ＰＤＧＦ（血小板由来成長因
子）、ジフテリアトキシンＡ、ＨＶＳ−ｔｋ、シトシン
デアミナーゼの遺伝子ＤＮＡなど、従来から遺伝子治療
に使用されている導入遺伝子ＤＮＡがあげられる。これ
らの導入遺伝子ＤＮＡは、いわゆるホスホロチオエート
型などの合成オリゴヌクレオチドであるか、あるいは種
々のベクターに組み込まれた構造遺伝子としてのもので
あり、センス配列あるいはアンチセンス配列のいずれで
あってもよい。
に遺伝子ＤＮＡを導入する遺伝子ＤＮＡキャリヤ用脂肪
乳剤において、リピッドマイクロスフェアーに結合する
遺伝子ＤＮＡとしては、癌に関連する遺伝子ＤＮＡ、先
天性代謝異常に関連する遺伝子ＤＮＡ、ＡＩＤＳなどウ
イルス性疾患に関連する遺伝子ＤＮＡ、各種サイトカイ
ンなど炎症や動脈硬化にかかわる生体内活性物質に関連
する遺伝子ＤＮＡなど、各種遺伝子治療における遺伝子
ＤＮＡであればどのようなものでもよい。具体的には、
癌抑制遺伝子ＤＮＡ、サイトカイン遺伝子ＤＮＡ、同種
抗原遺伝子ＤＮＡ、薬剤感受性遺伝子ＤＮＡ、多剤耐性
遺伝子ＤＮＡ等が挙げられる。より具体的な導入遺伝子
ＤＮＡとしては、インターロイキン−１β（ＩＬ−１
β）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロ
イキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ
−６）、インターロイキン−７（ＩＬ−７）、ＧＭ−Ｃ
ＳＦ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）、インターフェロン
−γ（ＩＦＮ−γ）、ＰＤＧＦ（血小板由来成長因
子）、ジフテリアトキシンＡ、ＨＶＳ−ｔｋ、シトシン
デアミナーゼの遺伝子ＤＮＡなど、従来から遺伝子治療
に使用されている導入遺伝子ＤＮＡがあげられる。これ
らの導入遺伝子ＤＮＡは、いわゆるホスホロチオエート
型などの合成オリゴヌクレオチドであるか、あるいは種
々のベクターに組み込まれた構造遺伝子としてのもので
あり、センス配列あるいはアンチセンス配列のいずれで
あってもよい。
【００１０】本発明における、個体に遺伝子ＤＮＡを導
入する遺伝子ＤＮＡキャリヤ用脂肪乳剤は、通常の脂肪
乳剤であり、そのなかでもカチオン性の脂肪乳剤が好ま
しく、その脂肪乳剤と、遺伝子導入を行なおうとする遺
伝子ＤＮＡとを混合することにより調製される。この場
合、カチオン性の脂肪乳剤とするためには、上記（ｄ）
成分のコレスレロール誘導体を配合してやれば良い。こ
の混合により、導入遺伝子ＤＮＡは、脂肪乳剤を構成す
るリピッドマイクロスフェアーの表面に結合し、リピッ
ドマイクロスフェアーがＤＮＡのキャリヤとして癌（腫
瘍）細胞等に、ｅｘ ｖｉｖｏでもｉｎ ｖｉｖｏでも
安全にかつ効率よく細胞内への導入が行われるのであ
る。特にｉｎ ｖｉｖｏでは、腫瘍細胞などに特異的に
移送されて、さらに効率よく遺伝子ＤＮＡを導入できる
のである。
入する遺伝子ＤＮＡキャリヤ用脂肪乳剤は、通常の脂肪
乳剤であり、そのなかでもカチオン性の脂肪乳剤が好ま
しく、その脂肪乳剤と、遺伝子導入を行なおうとする遺
伝子ＤＮＡとを混合することにより調製される。この場
合、カチオン性の脂肪乳剤とするためには、上記（ｄ）
成分のコレスレロール誘導体を配合してやれば良い。こ
の混合により、導入遺伝子ＤＮＡは、脂肪乳剤を構成す
るリピッドマイクロスフェアーの表面に結合し、リピッ
ドマイクロスフェアーがＤＮＡのキャリヤとして癌（腫
瘍）細胞等に、ｅｘ ｖｉｖｏでもｉｎ ｖｉｖｏでも
安全にかつ効率よく細胞内への導入が行われるのであ
る。特にｉｎ ｖｉｖｏでは、腫瘍細胞などに特異的に
移送されて、さらに効率よく遺伝子ＤＮＡを導入できる
のである。
【００１１】したがって本発明は、その具体的態様にお
いて、（ａ）インターロイキン−１（ＩＬ−１）、イン
ターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−４
（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、イ
ンターロイキン−７（ＩＬ−７）、ＧＭ−ＣＳＦ、腫瘍
壊死因子（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦ
Ｎ−γ）、ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）、ジフテリ
アトキシンＡ、ＨＶＳ−ｔｋ、シトシンデアミナーゼの
遺伝子ＤＮＡから選択される１種の遺伝子ＤＮＡ、
（ｂ）植物油、炭素原子数８〜１２個の中鎖脂肪酸のト
リグリセリドならびに炭素原子数６〜１８の脂肪酸のジ
−およびモノグリセリドから選択される少なくとも１種
の脂肪乳剤基剤、（ｃ）リン脂質および非イオン系界面
活性剤から選択される少なくとも１種の乳化剤、（ｄ）
コレステロール誘導体、および、（ｅ）水、からなる、
個体に遺伝子ＤＮＡを導入する脂肪乳剤；を提供する。
いて、（ａ）インターロイキン−１（ＩＬ−１）、イン
ターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−４
（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、イ
ンターロイキン−７（ＩＬ−７）、ＧＭ−ＣＳＦ、腫瘍
壊死因子（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦ
Ｎ−γ）、ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）、ジフテリ
アトキシンＡ、ＨＶＳ−ｔｋ、シトシンデアミナーゼの
遺伝子ＤＮＡから選択される１種の遺伝子ＤＮＡ、
（ｂ）植物油、炭素原子数８〜１２個の中鎖脂肪酸のト
リグリセリドならびに炭素原子数６〜１８の脂肪酸のジ
−およびモノグリセリドから選択される少なくとも１種
の脂肪乳剤基剤、（ｃ）リン脂質および非イオン系界面
活性剤から選択される少なくとも１種の乳化剤、（ｄ）
コレステロール誘導体、および、（ｅ）水、からなる、
個体に遺伝子ＤＮＡを導入する脂肪乳剤；を提供する。
【００１２】また本発明は、その別な具体的態様におい
て、（ａ）インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インタ
ーロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−４
（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、イ
ンターロイキン−７（ＩＬ−７）、ＧＭ−ＣＳＦ、腫瘍
壊死因子（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦ
Ｎ−γ）、ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）、ジフテリ
アトキシンＡ、ＨＶＳ−ｔｋ、シトシンデアミナーゼの
遺伝子ＤＮＡから選択される１種の遺伝子ＤＮＡ、
（ｂ）植物油、炭素原子数８〜１２個の中鎖脂肪酸のト
リグリセリドならびに炭素原子数６〜１８の脂肪酸のジ
−およびモノグリセリドから選択される少なくとも１種
の脂肪乳剤基剤、（ｃ）リン脂質および非イオン系界面
活性剤から選択される少なくとも１種の乳化剤、およ
び、（ｅ）水、からなる、個体に遺伝子ＤＮＡを導入す
る脂肪乳剤；を提供する。
て、（ａ）インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インタ
ーロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−４
（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、イ
ンターロイキン−７（ＩＬ−７）、ＧＭ−ＣＳＦ、腫瘍
壊死因子（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦ
Ｎ−γ）、ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）、ジフテリ
アトキシンＡ、ＨＶＳ−ｔｋ、シトシンデアミナーゼの
遺伝子ＤＮＡから選択される１種の遺伝子ＤＮＡ、
（ｂ）植物油、炭素原子数８〜１２個の中鎖脂肪酸のト
リグリセリドならびに炭素原子数６〜１８の脂肪酸のジ
−およびモノグリセリドから選択される少なくとも１種
の脂肪乳剤基剤、（ｃ）リン脂質および非イオン系界面
活性剤から選択される少なくとも１種の乳化剤、およ
び、（ｅ）水、からなる、個体に遺伝子ＤＮＡを導入す
る脂肪乳剤；を提供する。
【００１３】しかして、本発明の脂肪乳剤の調製に際し
て使用される脂肪乳剤基剤としては、従来からいわゆる
脂肪乳剤の調製に際して通常用いられている製剤学的に
許容される任意の油脂類が包含される。具体的には、大
豆油、綿実油、菜種油、サフラワー油などの植物油：通
常ＭＣＴと略称されている炭素原子数８〜１２個の中鎖
脂肪酸（例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸
など）のトリグリセリド；炭素原子数６〜１８個の脂肪
酸（例えば、カプロン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、
パルミチン酸、リノール酸、ステアリン酸など）のモノ
−またはジ−グリセリド等が挙げられ、これらはそれぞ
れ単独または２種もしくはそれ以上の組み合わせで使用
することができる。これらのなかでも、特に大豆油、パ
ナセート８１０（日本油脂株式会社製、ＭＣＴの混合
物）が好適に使用される。
て使用される脂肪乳剤基剤としては、従来からいわゆる
脂肪乳剤の調製に際して通常用いられている製剤学的に
許容される任意の油脂類が包含される。具体的には、大
豆油、綿実油、菜種油、サフラワー油などの植物油：通
常ＭＣＴと略称されている炭素原子数８〜１２個の中鎖
脂肪酸（例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸
など）のトリグリセリド；炭素原子数６〜１８個の脂肪
酸（例えば、カプロン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、
パルミチン酸、リノール酸、ステアリン酸など）のモノ
−またはジ−グリセリド等が挙げられ、これらはそれぞ
れ単独または２種もしくはそれ以上の組み合わせで使用
することができる。これらのなかでも、特に大豆油、パ
ナセート８１０（日本油脂株式会社製、ＭＣＴの混合
物）が好適に使用される。
【００１４】これら脂肪乳剤基剤の使用量は厳密に制限
されるものではなく、広範に変えることができるが、一
般に、１〜５０％（Ｗ／Ｖ）、好ましくは３〜３０％
（Ｗ／Ｖ）、より好ましくは５〜２０％（Ｗ／Ｖ）の範
囲とするのが好都合である。なお、本明細書において、
脂肪乳剤の配合成分の含量または使用量について使用す
る百分率「％（Ｗ／Ｖ）」は、特にことわらない限り、
最終の脂肪乳剤１００容量部あたりの重量部を意味す
る。
されるものではなく、広範に変えることができるが、一
般に、１〜５０％（Ｗ／Ｖ）、好ましくは３〜３０％
（Ｗ／Ｖ）、より好ましくは５〜２０％（Ｗ／Ｖ）の範
囲とするのが好都合である。なお、本明細書において、
脂肪乳剤の配合成分の含量または使用量について使用す
る百分率「％（Ｗ／Ｖ）」は、特にことわらない限り、
最終の脂肪乳剤１００容量部あたりの重量部を意味す
る。
【００１５】また、上記脂肪乳剤を水中に安定に分散さ
せるための乳化剤としては、生理学的に許容されるリン
脂質および非イオン系界面活性剤から選択される少なく
とも１種の乳化剤が使用される。生理学的に許容される
リン脂質としては、例えば、卵黄リン脂質、大豆リン脂
質、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノール
アミン等が挙げられる。また、非イオン系界面活性剤と
しては、例えば、ポリオキシアルキレン共重合体、（例
えば、平均分子量が１，０００〜２０，０００の範囲の
ポリオキシエチレン−ポリオキシアルキレン誘導体；例
えば、硬化ヒマシ油ポリオキシエチレン−（４０）−エ
ーテル、硬化ヒマシ油ポリオキシエチレン−（２０）−
エーテル）等が包含される。これらの乳化剤は、それぞ
れ単独で使用できるほか、２種あるいはそれ以上を併用
し、使用してもよい。本発明で使用する乳化剤は、一般
に、６〜１５、好ましくは１０〜１４の範囲にあるＨＬ
Ｂを持つことが好ましい。またその使用量としては、脂
肪乳剤基剤を水中に安定に分散保持するのに必要な量で
使用され、乳化剤の種類に応じるものの、一般的には
０．０５〜２５ ％（Ｗ／Ｖ）、好ましくは０．２〜６
％（Ｗ／Ｖ）、さらに好ましくは０．６〜２．４％（Ｗ
／Ｖ）の範囲であり、また、前記脂肪乳剤基剤を基準に
すれば、該基剤１００重量部当たり６〜２４重量部、特
に、６〜１５重量部の範囲が好適である。
せるための乳化剤としては、生理学的に許容されるリン
脂質および非イオン系界面活性剤から選択される少なく
とも１種の乳化剤が使用される。生理学的に許容される
リン脂質としては、例えば、卵黄リン脂質、大豆リン脂
質、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノール
アミン等が挙げられる。また、非イオン系界面活性剤と
しては、例えば、ポリオキシアルキレン共重合体、（例
えば、平均分子量が１，０００〜２０，０００の範囲の
ポリオキシエチレン−ポリオキシアルキレン誘導体；例
えば、硬化ヒマシ油ポリオキシエチレン−（４０）−エ
ーテル、硬化ヒマシ油ポリオキシエチレン−（２０）−
エーテル）等が包含される。これらの乳化剤は、それぞ
れ単独で使用できるほか、２種あるいはそれ以上を併用
し、使用してもよい。本発明で使用する乳化剤は、一般
に、６〜１５、好ましくは１０〜１４の範囲にあるＨＬ
Ｂを持つことが好ましい。またその使用量としては、脂
肪乳剤基剤を水中に安定に分散保持するのに必要な量で
使用され、乳化剤の種類に応じるものの、一般的には
０．０５〜２５ ％（Ｗ／Ｖ）、好ましくは０．２〜６
％（Ｗ／Ｖ）、さらに好ましくは０．６〜２．４％（Ｗ
／Ｖ）の範囲であり、また、前記脂肪乳剤基剤を基準に
すれば、該基剤１００重量部当たり６〜２４重量部、特
に、６〜１５重量部の範囲が好適である。
【００１６】さらに本発明の脂肪乳剤において分散溶媒
となる水としては蒸留水またはイオン交換水を適量使用
することができ、場合によってはエタノールのような水
混和性の有機溶媒を少量混合してもよい。
となる水としては蒸留水またはイオン交換水を適量使用
することができ、場合によってはエタノールのような水
混和性の有機溶媒を少量混合してもよい。
【００１７】本発明の脂肪乳剤には、通常行なわれてい
るように、必要に応じて、等張化剤乳化助剤、安定化
剤、ｐＨ調製剤等の添加剤をさらに含有させることがで
きる。配合し得る等張化剤としては、例えば、グリセリ
ン；ソルビトール、キシリトールなどの糖アルコール；
ブドウ糖、果糖などの単糖類；マルトースのような二糖
類；Ｌ−アラニン、Ｌ−バリン、グリシンなどのアミノ
酸等が挙げられ、これらのなかから適宜１種またはそれ
以上を選んで使用される。これらの等張化剤は、脂肪乳
剤が体液の浸透圧とほぼ同等になるように調製するため
に添加されるものであり、その量は脂肪乳剤中の最終濃
度が一般に０．１〜０．５モル／ｌ、好ましくは０．２
５〜０．３５モル／ｌの範囲になるようなものである。
るように、必要に応じて、等張化剤乳化助剤、安定化
剤、ｐＨ調製剤等の添加剤をさらに含有させることがで
きる。配合し得る等張化剤としては、例えば、グリセリ
ン；ソルビトール、キシリトールなどの糖アルコール；
ブドウ糖、果糖などの単糖類；マルトースのような二糖
類；Ｌ−アラニン、Ｌ−バリン、グリシンなどのアミノ
酸等が挙げられ、これらのなかから適宜１種またはそれ
以上を選んで使用される。これらの等張化剤は、脂肪乳
剤が体液の浸透圧とほぼ同等になるように調製するため
に添加されるものであり、その量は脂肪乳剤中の最終濃
度が一般に０．１〜０．５モル／ｌ、好ましくは０．２
５〜０．３５モル／ｌの範囲になるようなものである。
【００１８】また、適宜配合し得る乳化補助剤として
は、例えば、炭素原子数１０〜２０個の脂肪酸（例え
ば、ステアリン酸、パルミチン酸、リノール酸、リノレ
ン酸など）およびその塩（例えばナトリウム塩、カリウ
ム塩など）、ホスファチジルエタノールアミン、ホスフ
ァチジルセリン、ステアリルアミン等が挙げられ、これ
らは一般に、０．０４％（Ｗ／Ｖ）までの範囲、好まし
くは０．０１〜０．２％（Ｗ／Ｖ）の範囲で使用するこ
とができ、特に上記脂肪酸またはその塩は、０．０１〜
０．１％（Ｗ／Ｖ）の範囲で、ホスファチジルエタノー
ルアミン、ホスファチジルセリン、ステアリルアミンは
０．０５〜０．３％（Ｗ／Ｖ），特に０．１〜０．２％
％（Ｗ／Ｖ）の範囲で有利に使用することができる。
は、例えば、炭素原子数１０〜２０個の脂肪酸（例え
ば、ステアリン酸、パルミチン酸、リノール酸、リノレ
ン酸など）およびその塩（例えばナトリウム塩、カリウ
ム塩など）、ホスファチジルエタノールアミン、ホスフ
ァチジルセリン、ステアリルアミン等が挙げられ、これ
らは一般に、０．０４％（Ｗ／Ｖ）までの範囲、好まし
くは０．０１〜０．２％（Ｗ／Ｖ）の範囲で使用するこ
とができ、特に上記脂肪酸またはその塩は、０．０１〜
０．１％（Ｗ／Ｖ）の範囲で、ホスファチジルエタノー
ルアミン、ホスファチジルセリン、ステアリルアミンは
０．０５〜０．３％（Ｗ／Ｖ），特に０．１〜０．２％
％（Ｗ／Ｖ）の範囲で有利に使用することができる。
【００１９】さらに、安定化剤としてはコレステロール
またはトコフェロールを用いることができる。コレステ
ロールは一般には１．２％（Ｗ／Ｖ）まで、好ましくは
０．２〜０．４％（Ｗ／Ｖ）の範囲で使用するのが好ま
しい。
またはトコフェロールを用いることができる。コレステ
ロールは一般には１．２％（Ｗ／Ｖ）まで、好ましくは
０．２〜０．４％（Ｗ／Ｖ）の範囲で使用するのが好ま
しい。
【００２０】また、安定化剤としては、アルブミンまた
はその脂肪酸アミド誘導体、多糖類またはその脂肪酸エ
ステル誘導体等も使用することができる。アルブミンと
しては、ヒト用の製剤を調製することより、抗原性の観
点よりヒト由来のものが好ましく、その脂肪酸アミド誘
導体としては、アルブミン中に存在する全アミノ基の５
〜４０％を、炭素原子数１４〜１８個の脂肪酸（例え
ば、パルミチン酸、ステアリン酸など）でアミド化した
ものが挙げられる。他方、多糖類としては、デキストラ
ン、プルラン、ヒドロキシエチルデンプン等が包含さ
れ、これら脂肪酸エステル誘導体としては、当該多糖類
に存在する全水酸基の５〜４０％を、炭素原子数１４〜
１８個の脂肪酸（例えば、パルミチン酸、ステアリン酸
など）によりエステル化したものが挙げられる。これら
の安定化剤は一般には０．０２〜５％（Ｗ／Ｖ）、好ま
しくは０．２〜２．５％（Ｗ／Ｖ）の範囲で添加するこ
とができる。
はその脂肪酸アミド誘導体、多糖類またはその脂肪酸エ
ステル誘導体等も使用することができる。アルブミンと
しては、ヒト用の製剤を調製することより、抗原性の観
点よりヒト由来のものが好ましく、その脂肪酸アミド誘
導体としては、アルブミン中に存在する全アミノ基の５
〜４０％を、炭素原子数１４〜１８個の脂肪酸（例え
ば、パルミチン酸、ステアリン酸など）でアミド化した
ものが挙げられる。他方、多糖類としては、デキストラ
ン、プルラン、ヒドロキシエチルデンプン等が包含さ
れ、これら脂肪酸エステル誘導体としては、当該多糖類
に存在する全水酸基の５〜４０％を、炭素原子数１４〜
１８個の脂肪酸（例えば、パルミチン酸、ステアリン酸
など）によりエステル化したものが挙げられる。これら
の安定化剤は一般には０．０２〜５％（Ｗ／Ｖ）、好ま
しくは０．２〜２．５％（Ｗ／Ｖ）の範囲で添加するこ
とができる。
【００２１】本発明の脂肪乳剤は、通常の脂肪乳剤であ
り、そのなかでもカチオン性の脂肪乳剤が好ましい。カ
チオン性の脂肪乳剤とするには、乳剤処方においてコレ
ステロール誘導体を加えるのが良く、かかるコレステロ
ール誘導体としては、本発明の脂肪乳剤をカチオン性に
するものであれば、一般的に使用されているコレステロ
ール誘導体でよく、３β｛Ｎ−（Ｎ´、Ｎ´−ジメチル
アミノエタン）カルバモイル｝コレステロール、２−
（コレステリルオキシカルボニルアミノ）エチルアミン
等があげられる。その添加量は、０．００１〜１０％
（Ｗ／Ｖ）、好ましくは０．０１〜５％（Ｗ／Ｖ）、よ
り好ましくは０．１〜２％（Ｗ／Ｖ）である。
り、そのなかでもカチオン性の脂肪乳剤が好ましい。カ
チオン性の脂肪乳剤とするには、乳剤処方においてコレ
ステロール誘導体を加えるのが良く、かかるコレステロ
ール誘導体としては、本発明の脂肪乳剤をカチオン性に
するものであれば、一般的に使用されているコレステロ
ール誘導体でよく、３β｛Ｎ−（Ｎ´、Ｎ´−ジメチル
アミノエタン）カルバモイル｝コレステロール、２−
（コレステリルオキシカルボニルアミノ）エチルアミン
等があげられる。その添加量は、０．００１〜１０％
（Ｗ／Ｖ）、好ましくは０．０１〜５％（Ｗ／Ｖ）、よ
り好ましくは０．１〜２％（Ｗ／Ｖ）である。
【００２２】本発明の脂肪乳剤にあっては、脂肪乳剤中
に占めるリピッドマイクロスフェアーの濃度として、
０．０１〜５％、好ましくは０．０１〜３％、さらに好
ましくは０．０１〜１％の濃度で存在するのが、リピッ
ドマイクロスフェアーに対する導入遺伝子ＤＮＡの結合
効率が良いことが判明した。したがって、上記してきた
脂肪乳剤を構成する配合処方成分の配合量を適宜調製
し、目的の濃度のリピッドマイクロスフェアーを含有す
る脂肪乳剤とするのが良い。
に占めるリピッドマイクロスフェアーの濃度として、
０．０１〜５％、好ましくは０．０１〜３％、さらに好
ましくは０．０１〜１％の濃度で存在するのが、リピッ
ドマイクロスフェアーに対する導入遺伝子ＤＮＡの結合
効率が良いことが判明した。したがって、上記してきた
脂肪乳剤を構成する配合処方成分の配合量を適宜調製
し、目的の濃度のリピッドマイクロスフェアーを含有す
る脂肪乳剤とするのが良い。
【００２３】また、脂肪乳剤中における遺伝子ＤＮＡの
リピッドマイクロスフェアーに対する配合量は、種々変
更することができるが、一般的には、リピッドマイクロ
スフェアー２５〜５０μｇに対し、１〜２０μｇの遺伝
子ＤＮＡを使用するのが良い。
リピッドマイクロスフェアーに対する配合量は、種々変
更することができるが、一般的には、リピッドマイクロ
スフェアー２５〜５０μｇに対し、１〜２０μｇの遺伝
子ＤＮＡを使用するのが良い。
【００２４】本発明の脂肪乳剤は、それ自体公知の乳化
方法により製造することができる。その際、乳化機とし
ては通常のホモジナイザーを使用することができるが、
安定で微細な脂肪乳剤を調製するためには、２種類のホ
モジナイザーを併用するのが良い。具体的な製法として
は、通常の脂肪乳剤の調製においては、例えば、所定量
の大豆油に、所定量の乳化剤、例えば精製卵黄リン脂質
（精製卵黄レシチン）を加え、９０℃にて５分間程度、
１５，０００ｒｐｍ条件下でホモジナイズする。次いで
水および必要に応じて他の添加剤、例えば等張化剤とし
てのグリセリンを加え、９０℃にて２０分程度、２０，
０００ｒｐｍ条件下でホモジナイズする。かくして得ら
れた乳化物を更にＦｒｅｎｃｈ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｃ
ｅｌｌ Ｐｒｅｓｓで５回程度処理することにより脂肪
乳剤を作製する。ついで、目的とする導入遺伝子ＤＮＡ
（オリゴヌクレオチド、または種々のベクターに組み込
んだ構造遺伝子）を混合することにより、リピッドマイ
クロスフェアーの表面に導入遺伝子ＤＮＡが結合した本
発明の脂肪乳剤が調製される。
方法により製造することができる。その際、乳化機とし
ては通常のホモジナイザーを使用することができるが、
安定で微細な脂肪乳剤を調製するためには、２種類のホ
モジナイザーを併用するのが良い。具体的な製法として
は、通常の脂肪乳剤の調製においては、例えば、所定量
の大豆油に、所定量の乳化剤、例えば精製卵黄リン脂質
（精製卵黄レシチン）を加え、９０℃にて５分間程度、
１５，０００ｒｐｍ条件下でホモジナイズする。次いで
水および必要に応じて他の添加剤、例えば等張化剤とし
てのグリセリンを加え、９０℃にて２０分程度、２０，
０００ｒｐｍ条件下でホモジナイズする。かくして得ら
れた乳化物を更にＦｒｅｎｃｈ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｃ
ｅｌｌ Ｐｒｅｓｓで５回程度処理することにより脂肪
乳剤を作製する。ついで、目的とする導入遺伝子ＤＮＡ
（オリゴヌクレオチド、または種々のベクターに組み込
んだ構造遺伝子）を混合することにより、リピッドマイ
クロスフェアーの表面に導入遺伝子ＤＮＡが結合した本
発明の脂肪乳剤が調製される。
【００２５】また、カチオン性の脂肪乳剤の調製におい
ては、例えば、所定量の大豆油に、コレステロール誘導
体、例えば３β｛Ｎ−（Ｎ´、Ｎ´−ジメチルアミノエ
タン）カルバモイル｝コレステロールあるいは２−（コ
レステリルオキシカルボニルアミノ）エチルアミン、お
よび所定量の乳化剤、例えば精製卵黄リン脂質（精製卵
黄レシチン）を加え、９０℃にて５分間程度、１５，０
００ｒｐｍ条件下でホモジナイズする。次いで水および
必要に応じて他の添加剤、例えば等張化剤としてのグリ
セリンを加え、９０℃にて２０分程度、２０，０００ｒ
ｐｍ条件下でホモジナイズすることにより乳化物を得
た。次いでこの乳化物を、ＦｒｅｎｃｈＰｒｅｓｓｕｒ
ｅ Ｃｅｌｌ Ｐｒｅｓｓを５回程度処理することによ
り、脂肪乳剤を作製する。目的とする導入遺伝子ＤＮＡ
（オリゴヌクレオチドまたは種々のベクターに組み込ん
だ構造遺伝子）を混合することにより、リピッドマイク
ロスフェアーの表面に導入遺伝子ＤＮＡが結合した本発
明の脂肪乳剤が調製される。
ては、例えば、所定量の大豆油に、コレステロール誘導
体、例えば３β｛Ｎ−（Ｎ´、Ｎ´−ジメチルアミノエ
タン）カルバモイル｝コレステロールあるいは２−（コ
レステリルオキシカルボニルアミノ）エチルアミン、お
よび所定量の乳化剤、例えば精製卵黄リン脂質（精製卵
黄レシチン）を加え、９０℃にて５分間程度、１５，０
００ｒｐｍ条件下でホモジナイズする。次いで水および
必要に応じて他の添加剤、例えば等張化剤としてのグリ
セリンを加え、９０℃にて２０分程度、２０，０００ｒ
ｐｍ条件下でホモジナイズすることにより乳化物を得
た。次いでこの乳化物を、ＦｒｅｎｃｈＰｒｅｓｓｕｒ
ｅ Ｃｅｌｌ Ｐｒｅｓｓを５回程度処理することによ
り、脂肪乳剤を作製する。目的とする導入遺伝子ＤＮＡ
（オリゴヌクレオチドまたは種々のベクターに組み込ん
だ構造遺伝子）を混合することにより、リピッドマイク
ロスフェアーの表面に導入遺伝子ＤＮＡが結合した本発
明の脂肪乳剤が調製される。
【００２６】以下に本発明を、実施例に代わる試験例で
詳細に説明する。なお、本発明は以下に記載の試験例に
限定されるものでないことはいうまでもない。導入遺伝
子としてインターロイキン−１β遺伝子の開始コドンを
含む２０量体のホスホロチオエート型アンチセンスＤＮ
Ａを用い、脂肪乳剤中のリピッドマイクロスフェアーの
表面に、アンチセンスＤＮＡを結合させた具体的脂肪乳
剤について検討した。
詳細に説明する。なお、本発明は以下に記載の試験例に
限定されるものでないことはいうまでもない。導入遺伝
子としてインターロイキン−１β遺伝子の開始コドンを
含む２０量体のホスホロチオエート型アンチセンスＤＮ
Ａを用い、脂肪乳剤中のリピッドマイクロスフェアーの
表面に、アンチセンスＤＮＡを結合させた具体的脂肪乳
剤について検討した。
【００２７】アンチセンスとは、標的となる塩基配列と
相補的な配列を意味する。すなわち、二重鎖ＤＮＡ構造
遺伝子で、情報を読み取られる側のＤＮＡをセンス、も
う一方の相補的なＤＮＡをアンチセンスという。したが
って、タンパク質の遺伝情報を担うｍＲＮＡのセンス鎖
のなかで、標的となる部分塩基配列に対して相補的なア
ンチセンス鎖を細胞内に導入して、その遺伝情報の発現
を抑制して病因となるタンパク質産生を疎外して疾患を
治療することができる（アンチセンス法）。インターロ
イキン−１β（ＩＬ−１β）は、炎症などの病態に中心
的に関与するサイトカインであり、このＩＬ−１βの産
生を抑制すれば、慢性関節リウマチなどＩＬ−１がかか
わる病態を著しく改善できるものと期待される。
相補的な配列を意味する。すなわち、二重鎖ＤＮＡ構造
遺伝子で、情報を読み取られる側のＤＮＡをセンス、も
う一方の相補的なＤＮＡをアンチセンスという。したが
って、タンパク質の遺伝情報を担うｍＲＮＡのセンス鎖
のなかで、標的となる部分塩基配列に対して相補的なア
ンチセンス鎖を細胞内に導入して、その遺伝情報の発現
を抑制して病因となるタンパク質産生を疎外して疾患を
治療することができる（アンチセンス法）。インターロ
イキン−１β（ＩＬ−１β）は、炎症などの病態に中心
的に関与するサイトカインであり、このＩＬ−１βの産
生を抑制すれば、慢性関節リウマチなどＩＬ−１がかか
わる病態を著しく改善できるものと期待される。
【００２８】試験例１：リピッドマイクロスフェアーは
次のようにして作製した。大豆油１ｇ、３β｛Ｎ−（Ｎ
´、Ｎ´−ジメチルアミノエタン）カルバモイル｝コレ
ステロール２．４ｍｇおよび卵黄レシチン１１７．６ｍ
ｇを９０℃にて５分間、１５，０００ｒｐｍ回転でホモ
ジナイズした。次いで、このものに注射用蒸留水９ｍｌ
およびグリセリン０．２５ｇを加え、９０℃にて２０分
間、２０，０００ｒｐｍでホモジナイズした。得られた
乳化物を、Ｆｒｅｎｃｈ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｃｅｌｌ
Ｐｒｅｓｓを５回程度処理することにより、粒子径
０．２μｍのリピッドマイクロスフェアーを作製した。
ついで、上記方法で得たリピッドマイクロスフェアーを
用い、その０．０１％、０．１％ならびに１％溶液
（各、ＬＭ０．０１％、ＬＭ０．１％、ＬＭ１％と表示
する。）に、５´端を32Ｐで標識したＩＬ−１βのホス
ホロチオエート型アンチセンスＤＮＡを混合し、リピッ
ドマイクロスフェアー表面に32Ｐ標識アンチセンスＤＮ
Ａが結合した脂肪乳剤を作製した。このものを、ヒト単
球系の細胞株、Ｕ９３７細胞に作用させ、その細胞内へ
の遺伝子ＤＮＡ（ＩＬ−１βアンチセンスＤＮＡ）の取
り込みを観察した。その結果、図１に示すごとく、ＬＭ
０．０１％、ＬＭ０．１％、ＬＭ１％溶液は、コントロ
ールに比較し、有意にＩＬ−１βアンチセンスＤＮＡで
あるオリゴヌクレオチドが取り込まれており、本発明の
脂肪乳剤は、遺伝子の細胞内導入用キャリヤすなわち、
脂肪乳剤中のリピッドマイクロスフェアーが、導入遺伝
子ＤＮＡに対しキャリヤとしての役目を果たしているこ
とが理解される。
次のようにして作製した。大豆油１ｇ、３β｛Ｎ−（Ｎ
´、Ｎ´−ジメチルアミノエタン）カルバモイル｝コレ
ステロール２．４ｍｇおよび卵黄レシチン１１７．６ｍ
ｇを９０℃にて５分間、１５，０００ｒｐｍ回転でホモ
ジナイズした。次いで、このものに注射用蒸留水９ｍｌ
およびグリセリン０．２５ｇを加え、９０℃にて２０分
間、２０，０００ｒｐｍでホモジナイズした。得られた
乳化物を、Ｆｒｅｎｃｈ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｃｅｌｌ
Ｐｒｅｓｓを５回程度処理することにより、粒子径
０．２μｍのリピッドマイクロスフェアーを作製した。
ついで、上記方法で得たリピッドマイクロスフェアーを
用い、その０．０１％、０．１％ならびに１％溶液
（各、ＬＭ０．０１％、ＬＭ０．１％、ＬＭ１％と表示
する。）に、５´端を32Ｐで標識したＩＬ−１βのホス
ホロチオエート型アンチセンスＤＮＡを混合し、リピッ
ドマイクロスフェアー表面に32Ｐ標識アンチセンスＤＮ
Ａが結合した脂肪乳剤を作製した。このものを、ヒト単
球系の細胞株、Ｕ９３７細胞に作用させ、その細胞内へ
の遺伝子ＤＮＡ（ＩＬ−１βアンチセンスＤＮＡ）の取
り込みを観察した。その結果、図１に示すごとく、ＬＭ
０．０１％、ＬＭ０．１％、ＬＭ１％溶液は、コントロ
ールに比較し、有意にＩＬ−１βアンチセンスＤＮＡで
あるオリゴヌクレオチドが取り込まれており、本発明の
脂肪乳剤は、遺伝子の細胞内導入用キャリヤすなわち、
脂肪乳剤中のリピッドマイクロスフェアーが、導入遺伝
子ＤＮＡに対しキャリヤとしての役目を果たしているこ
とが理解される。
【００２９】試験例２：試験例１で得たリピッドマイク
ロスフェアーを用い、その０．０１％（ＬＭ０．０１％
と表示する。）の脂肪乳剤を使用し、ＩＬ−１βアンチ
センスＤＮＡのオリゴヌクレオチドの添加混合量を変化
（２、５、１０、２０μＭ）させ、ＩＬ−１β細胞株に
作用させたのち、その細胞が実際にどの程度ＩＬ−１β
の産生を抑制しているかを観察した。ＩＬ−１β産生細
胞としては、前述のヒト単球系細胞株、Ｕ９３７細胞を
使用した。Ｕ９３７細胞は、１０％ウシ胎児血清を含む
ＲＰＭＩ−１６４０倍地中で２×１０4 ／ｍｌとし、１
２−Ｏ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｃｙｌ−ｐｈｏｒｂｏｌ−
１３−ａｃｅｔａｔｅを１ｎｇ／ｍｌおよびｌｉｐｏｐ
ｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅを１μｇ／ｍｌ加え、さら
にＩＬ−１βアンチセンスＤＮＡの脂肪乳剤を加え、３
７℃にて２４時間培養し、ＩＬ−１βの産生を測定し
た。その結果を図２に示した。図中の結果からも明らか
な如く、本発明の脂肪乳剤（ＬＭ０．０１％溶液）を作
用させた細胞は、遺伝子ＤＮＡの導入が行なわれた結
果、コントロールと比較し、有意にＩＬ−１βの産生を
抑制していることが判明した。
ロスフェアーを用い、その０．０１％（ＬＭ０．０１％
と表示する。）の脂肪乳剤を使用し、ＩＬ−１βアンチ
センスＤＮＡのオリゴヌクレオチドの添加混合量を変化
（２、５、１０、２０μＭ）させ、ＩＬ−１β細胞株に
作用させたのち、その細胞が実際にどの程度ＩＬ−１β
の産生を抑制しているかを観察した。ＩＬ−１β産生細
胞としては、前述のヒト単球系細胞株、Ｕ９３７細胞を
使用した。Ｕ９３７細胞は、１０％ウシ胎児血清を含む
ＲＰＭＩ−１６４０倍地中で２×１０4 ／ｍｌとし、１
２−Ｏ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｃｙｌ−ｐｈｏｒｂｏｌ−
１３−ａｃｅｔａｔｅを１ｎｇ／ｍｌおよびｌｉｐｏｐ
ｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅを１μｇ／ｍｌ加え、さら
にＩＬ−１βアンチセンスＤＮＡの脂肪乳剤を加え、３
７℃にて２４時間培養し、ＩＬ−１βの産生を測定し
た。その結果を図２に示した。図中の結果からも明らか
な如く、本発明の脂肪乳剤（ＬＭ０．０１％溶液）を作
用させた細胞は、遺伝子ＤＮＡの導入が行なわれた結
果、コントロールと比較し、有意にＩＬ−１βの産生を
抑制していることが判明した。
【００３０】以上の実験は、遺伝子ＤＮＡをオリゴヌク
レオチドとしてリピッドマイクロスフェアの表面に結合
させ、標的細胞と作用させ、細胞内に遺伝子ＤＮＡを導
入させたものであるが、導入遺伝子ＤＮＡとしては、種
々のベクターに組み込んだ構造遺伝子であってもよい。
そこで、構造遺伝子が組み込まれたベクターの一つとし
てｐＭＡＭｎｅｏを用い、本発明の脂肪乳剤を作製し、
その導入効果を調べた。
レオチドとしてリピッドマイクロスフェアの表面に結合
させ、標的細胞と作用させ、細胞内に遺伝子ＤＮＡを導
入させたものであるが、導入遺伝子ＤＮＡとしては、種
々のベクターに組み込んだ構造遺伝子であってもよい。
そこで、構造遺伝子が組み込まれたベクターの一つとし
てｐＭＡＭｎｅｏを用い、本発明の脂肪乳剤を作製し、
その導入効果を調べた。
【００３１】試験例３：実験には、構造遺伝子が組み込
まれたベクターとしてのｐＭＡＭｎｅｏは、ニックトラ
ンスレーション法による32Ｐラベル化したものを使用し
た。ベクター濃度としてそれぞれ１、５、１０、２０μ
ｇ／５０μｌ蒸留水溶液を用いた。この溶液５０μｌ
を、蒸留水５０μｌ、あるいは２５，または５０μｇリ
ピッドマイクロスフェアー／５０μｌ蒸留水と混合し、
この各１００μｌ混合溶液を室温にて３０分間緩やかに
混合したのち、細胞（ＣＨＯ−Ｋ１）に滴下しながら加
え、できるだけ均質にした。５％二酸化炭素雰囲気湿度
下、３７℃にて４時間細胞を培養した。ついで、１０％
胎児血清含有のＨＡＭ培地に加え、上記条件下にて４８
時間培養した。培養後、細胞を５ｍｌのＰＢＳで２回洗
浄し、細胞のＤＮＡをエタノールで抽出し、ＤＮＡの放
射活性を測定した。なお、リピッドマイクロスフェアー
濃度としては、０．０１％（ＬＭ０．０１％）、０．０
０５％（ＬＭ０．００５％）に該当するものである。ま
た、対照として、ｉｎ ｖｉｖｏ法で汎用されているリ
ポフェクチン（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）の０．０１％溶
液を同様実験した。その結果を、図３に示す。図中の結
果から明らかな如く、リピッドマイクロスフェアー濃度
として０．０１％の本発明の脂肪乳剤（ＬＭ０．０１
％）で、そこにｐＭＡＭｎｅｏのベクター濃度が１、
５、１０、２０μｇ／５０μｌで添加させた場合も、い
ずれも導入遺伝子ベクターが細胞内に効率よく導入され
ていることが理解できる。
まれたベクターとしてのｐＭＡＭｎｅｏは、ニックトラ
ンスレーション法による32Ｐラベル化したものを使用し
た。ベクター濃度としてそれぞれ１、５、１０、２０μ
ｇ／５０μｌ蒸留水溶液を用いた。この溶液５０μｌ
を、蒸留水５０μｌ、あるいは２５，または５０μｇリ
ピッドマイクロスフェアー／５０μｌ蒸留水と混合し、
この各１００μｌ混合溶液を室温にて３０分間緩やかに
混合したのち、細胞（ＣＨＯ−Ｋ１）に滴下しながら加
え、できるだけ均質にした。５％二酸化炭素雰囲気湿度
下、３７℃にて４時間細胞を培養した。ついで、１０％
胎児血清含有のＨＡＭ培地に加え、上記条件下にて４８
時間培養した。培養後、細胞を５ｍｌのＰＢＳで２回洗
浄し、細胞のＤＮＡをエタノールで抽出し、ＤＮＡの放
射活性を測定した。なお、リピッドマイクロスフェアー
濃度としては、０．０１％（ＬＭ０．０１％）、０．０
０５％（ＬＭ０．００５％）に該当するものである。ま
た、対照として、ｉｎ ｖｉｖｏ法で汎用されているリ
ポフェクチン（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）の０．０１％溶
液を同様実験した。その結果を、図３に示す。図中の結
果から明らかな如く、リピッドマイクロスフェアー濃度
として０．０１％の本発明の脂肪乳剤（ＬＭ０．０１
％）で、そこにｐＭＡＭｎｅｏのベクター濃度が１、
５、１０、２０μｇ／５０μｌで添加させた場合も、い
ずれも導入遺伝子ベクターが細胞内に効率よく導入され
ていることが理解できる。
【００３２】試験例４：脂肪乳剤成分の変化による、導
入遺伝子ＤＮＡの導入効果：以下に記載の成分ならびに
配合量により、２種のリピッドマイクロスフェアーを作
製した。 リピッドマイクロスフェアーＮｏ．１（５ｍｌ中） 大豆油（脂肪乳剤基剤） ホスファチジルコリン ６０ｍｇ ジオレイルホスファチジル エタノールアミン １０ｍｇ ３β｛Ｎ−（Ｎ´、Ｎ´−ジメチル アミノエタン）カルバモイル｝コレステロール １０ｍｇ リピッドマイクロスフェアーＮｏ．２（５ｍｌ中） 大豆油（脂肪乳剤基剤） ホスファチジルコリン ６０ｍｇ ジオレイルホスファチジル エタノールアミン １０ｍｇ ２−（コレステリルオキシカルボニル アミノ）エチルアミン １０ｍｇ
入遺伝子ＤＮＡの導入効果：以下に記載の成分ならびに
配合量により、２種のリピッドマイクロスフェアーを作
製した。 リピッドマイクロスフェアーＮｏ．１（５ｍｌ中） 大豆油（脂肪乳剤基剤） ホスファチジルコリン ６０ｍｇ ジオレイルホスファチジル エタノールアミン １０ｍｇ ３β｛Ｎ−（Ｎ´、Ｎ´−ジメチル アミノエタン）カルバモイル｝コレステロール １０ｍｇ リピッドマイクロスフェアーＮｏ．２（５ｍｌ中） 大豆油（脂肪乳剤基剤） ホスファチジルコリン ６０ｍｇ ジオレイルホスファチジル エタノールアミン １０ｍｇ ２−（コレステリルオキシカルボニル アミノ）エチルアミン １０ｍｇ
【００３３】上記で得たリピッドマイクロスフェアーを
１％溶液とした脂肪乳剤とし、そこに前記試験例３で使
用した遺伝子ベクター（32Ｐラベル化ｐＭＡＭｎｅｏ）
と混合し、試験対象の脂肪乳剤を得た。この脂肪乳剤を
試験例３に記載した方法と同様に処理し、細胞内に導入
された遺伝子ベクターの放射活性を測定した。実験は、
リピッドマイクロスフェアー各群で遺伝子ベクターの混
合量を変化させものとして、３回行なった。なお、コン
トロールとしては、脂肪乳剤に混合しないｐＭＡＭｎｅ
ｏの放射活性をおいた。その結果を表１に示す。
１％溶液とした脂肪乳剤とし、そこに前記試験例３で使
用した遺伝子ベクター（32Ｐラベル化ｐＭＡＭｎｅｏ）
と混合し、試験対象の脂肪乳剤を得た。この脂肪乳剤を
試験例３に記載した方法と同様に処理し、細胞内に導入
された遺伝子ベクターの放射活性を測定した。実験は、
リピッドマイクロスフェアー各群で遺伝子ベクターの混
合量を変化させものとして、３回行なった。なお、コン
トロールとしては、脂肪乳剤に混合しないｐＭＡＭｎｅ
ｏの放射活性をおいた。その結果を表１に示す。
【００３４】
【表１】
【００３５】表中の結果より明らかな如く、コントロー
ル群に比較し、本発明の脂肪乳剤は、有意に遺伝子ベク
ターＤＮＡを細胞内に取り込んでいることが判明する。
ル群に比較し、本発明の脂肪乳剤は、有意に遺伝子ベク
ターＤＮＡを細胞内に取り込んでいることが判明する。
【００３６】以上記載のように、本発明の脂肪乳剤は、
導入遺伝子ＤＮＡを、脂肪乳剤中のリピッドマイクロス
フェアーに結合してやることにより、該リピッドマイク
ロスフェアーがキャリアとなって、選択的に癌（腫瘍）
細胞等に移送され、その場でリピッドマイクロスフェア
ーに結合された遺伝子ＤＮＡが核内に入って、遺伝子の
導入が行なわれており、有効な遺伝子治療法の確立がで
き得るものである。したがって、本発明は、難治性疾患
患者に多大の光明を与えるものであり、その利用価値は
優れたものであるといえる。
導入遺伝子ＤＮＡを、脂肪乳剤中のリピッドマイクロス
フェアーに結合してやることにより、該リピッドマイク
ロスフェアーがキャリアとなって、選択的に癌（腫瘍）
細胞等に移送され、その場でリピッドマイクロスフェア
ーに結合された遺伝子ＤＮＡが核内に入って、遺伝子の
導入が行なわれており、有効な遺伝子治療法の確立がで
き得るものである。したがって、本発明は、難治性疾患
患者に多大の光明を与えるものであり、その利用価値は
優れたものであるといえる。
【図１】本発明の試験例１における細胞内への遺伝子Ｄ
ＮＡ（ＩＬ−１βアンチセンスＤＮＡ）の取り込み効果
の結果を示す図である。
ＮＡ（ＩＬ−１βアンチセンスＤＮＡ）の取り込み効果
の結果を示す図である。
【図２】本発明の試験例２におけるＩＬ−１βの産生抑
制効果の結果を示す図である。
制効果の結果を示す図である。
【図３】本発明の試験例３におけるｐＭＡＭｎｅｏの遺
伝子ベクターの細胞内取り込み効果の結果を示す図であ
る。
伝子ベクターの細胞内取り込み効果の結果を示す図であ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 武永 美津子 神奈川県川崎市宮前区菅生２丁目16番１号 聖マリアンナ医科大学 難病治療研究セ ンター内 (72)発明者 水島 裕 神奈川県川崎市宮前区菅生２丁目16番１号 聖マリアンナ医科大学 難病治療研究セ ンター内
Claims (12)
- 【請求項１】 少なくとも以下の組成、（ａ）導入遺伝
子ＤＮＡ、（ｂ）植物油、炭素原子数８〜１２個の中鎖
脂肪酸のトリグリセリドならびに炭素原子数６〜１８の
脂肪酸のジ−およびモノグリセリドから選択される少な
くとも１種の脂肪乳剤基剤、（ｃ）リン脂質および非イ
オン系界面活性剤から選択される少なくとも１種の乳化
剤、（ｄ）必要に応じ、コレステロール誘導体、およ
び、（ｅ）水、からなる、個体に遺伝子ＤＮＡを導入す
る脂肪乳剤。 - 【請求項２】 請求項１記載の脂肪乳剤であって、少な
くとも、（ａ）導入遺伝子ＤＮＡ、（ｂ）植物油、炭素
原子数８〜１２個の中鎖脂肪酸のトリグリセリドならび
に炭素原子数６〜１８の脂肪酸のジ−およびモノグリセ
リドから選択される少なくとも１種の脂肪乳剤基剤：５
〜５０％（Ｗ／Ｖ）、（ｃ）リン脂質および非イオン系
界面活性剤から選択される少なくとも１種の乳化剤：
０．０５〜２５％（Ｗ／Ｖ）、（ｄ）コレステロール誘
導体：０．００１〜１％（Ｗ／Ｖ）、および、（ｅ）
水、からなる、請求項１記載の脂肪乳剤。 - 【請求項３】 請求項１記載の脂肪乳剤であって、少な
くとも、（ａ）導入遺伝子ＤＮＡ、（ｂ）植物油、炭素
原子数８〜１２個の中鎖脂肪酸のトリグリセリドならび
に炭素原子数６〜１８の脂肪酸のジ−およびモノグリセ
リドから選択される少なくとも１種の脂肪乳剤基剤：５
〜５０％（Ｗ／Ｖ）、（ｃ）リン脂質および非イオン系
界面活性剤から選択される少なくとも１種の乳化剤：
０．０５〜２５％（Ｗ／Ｖ）、および、（ｅ）水、から
なる、請求項１記載の脂肪乳剤。 - 【請求項４】 導入遺伝子ＤＮＡが、インターロイキン
−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−２（ＩＬ−
２）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロ
イキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−７（ＩＬ
−７）、ＧＭ−ＣＳＦ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）、
インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、ＰＤＧＦ（血小
板由来成長因子）、ジフテリアトキシンＡ、ＨＶＳ−ｔ
ｋ、シトシンデアミナーゼの遺伝子ＤＮＡから選択され
る１種の遺伝子ＤＮＡである、請求項１記載の脂肪乳
剤。 - 【請求項５】 少なくとも以下の組成、（ａ）インター
ロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−２（Ｉ
Ｌ−２）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インタ
ーロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−７
（ＩＬ−７）、ＧＭ−ＣＳＦ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−
α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、ＰＤＧＦ
（血小板由来成長因子）、ジフテリアトキシンＡ、ＨＶ
Ｓ−ｔｋ、シトシンデアミナーゼの遺伝子ＤＮＡから選
択される１種の遺伝子ＤＮＡ、（ｂ）植物油、炭素原子
数８〜１２個の中鎖脂肪酸のトリグリセリドならびに炭
素原子数６〜１８の脂肪酸のジ−およびモノグリセリド
から選択される少なくとも１種の脂肪乳剤基剤、（ｃ）
リン脂質および非イオン系界面活性剤から選択される少
なくとも１種の乳化剤、（ｄ）必要に応じ、コレステロ
ール誘導体、および、（ｅ）水、からなる、請求項２ま
たは３記載の脂肪乳剤。 - 【請求項６】 植物油が大豆油である、請求項５記載の
脂肪乳剤。 - 【請求項７】 リン脂質が大豆リン脂質または卵黄リン
脂質である請求項５記載の脂肪乳剤。 - 【請求項８】 コレステロール誘導体が、３β｛Ｎ−
（Ｎ´、Ｎ´−ジメチルアミノエタン）カルバモイル｝
コレステロールまたは２−（コレステリルオキシカルボ
ニルアミノ）エチルアミンである、請求項５記載の脂肪
乳剤。 - 【請求項９】 グリセリン、糖アルコール、単糖類、二
糖類およびアミノ酸から選択される少なくとも１種の等
張化剤をさらに含有する、請求項５記載の脂肪乳剤。 - 【請求項１０】 炭素原子数１０〜２０の脂肪酸および
その塩、フォスファチジルエタノールアミン、フォスフ
ァチジルセリンおよびステアリルアミンから選択される
少なくとも１種の乳化補助剤をさらに含有する、請求項
５記載の脂肪乳剤。 - 【請求項１１】 コレステロールおよびトコフェロール
から選択される安定化剤をさらに含有する、請求項５記
載の脂肪乳剤。 - 【請求項１２】 アルブミンおよびその脂肪酸アミド誘
導体ならびに多糖類およびその脂肪酸エステル誘導体か
ら選択される少なくとも１種の安定化剤をさらに含有す
る、請求項５記載の脂肪乳剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14221794A JPH07330614A (ja) | 1994-06-02 | 1994-06-02 | 遺伝子の細胞内導入用脂肪乳剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14221794A JPH07330614A (ja) | 1994-06-02 | 1994-06-02 | 遺伝子の細胞内導入用脂肪乳剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07330614A true JPH07330614A (ja) | 1995-12-19 |
Family
ID=15310135
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14221794A Pending JPH07330614A (ja) | 1994-06-02 | 1994-06-02 | 遺伝子の細胞内導入用脂肪乳剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07330614A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8691785B2 (en) | 1997-07-01 | 2014-04-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for non-parenteral delivery of oligonucleotides |
-
1994
- 1994-06-02 JP JP14221794A patent/JPH07330614A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8691785B2 (en) | 1997-07-01 | 2014-04-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for non-parenteral delivery of oligonucleotides |
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