JPH0731330A

JPH0731330A - 線虫類の培養方法

Info

Publication number: JPH0731330A
Application number: JP5182307A
Authority: JP
Inventors: Mineo Tachibana; 峰生橘; Toshihito Uechi; 俊仁植地; Nobukazu Suzuki; 伸和鈴木; Tadaaki Kawasugi; 忠昭河杉
Original assignee: Kubota Corp
Current assignee: Kubota Corp
Priority date: 1993-07-23
Filing date: 1993-07-23
Publication date: 1995-02-03
Anticipated expiration: 2014-01-06
Also published as: US5694883A; NZ268970A; GB9505065D0; AU677408B2; GB2285811B; JP2842580B2; AU7237494A; CA2145273A1; WO1995002958A1; GB2285811A

Abstract

(57)【要約】【目的】高い殺虫性を有するクシダイを大量に培養す
る。【構成】スタイナーネマクシダイをコレステロールを
含む培地で培養する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、線虫類の培養方法に関
し、詳しくは、スタイナーネマ・クシダイ(Steinernema
kushidai)( 以下、クシダイと略称する）を培地で培養
する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】昆虫寄生性線虫は、宿主となる昆虫と夾
雑する状態では、昆虫の口器、肛門、足関節等から昆虫
の血体腔中に侵入し、体内に保持している共生細菌を放
出することで、宿主昆虫の免疫機構を破壊して、その宿
主昆虫を死に至らせる。この性質を利用して、農作物等
の植物に被害を与える害虫を殺虫して、前記植物の被害
を防ぐ方法が知られている。また、従来このような性質
をもつ線虫を大量に培養することも行われていた。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】ところで、本発明に関
与するクシダイは１９８４年静岡県浜北市で林業試験場
の串田らによって単離同定された比較的新しい種の線虫
であり、前記クシダイは例えばコガネムシ等の鞘翅目昆
虫の幼虫に強い殺虫力をもつなど、従来知られているス
タイナーネマ・カルポカプサエ(Steinernema carpocaps
ae) 、スタイナーネマ・フェルティアエ(Steinernema f
eltiae) 、ヘテロラブディティス・バクテリフォーラ
（Heterorhabditis bacteriphora) 等の昆虫寄生性線虫
が主に鱗翅目昆虫に強い殺虫性をもつのに対し、異なる
特有の性質をもつことから、他の線虫とは異なる殺虫メ
カニズムを持っていることが示唆され、従来知られてい
る他の昆虫寄生性線虫の培養技術とは培養に適した条件
が異なるものと思われる。本発明は、クシダイを培地で
培養する場合に、ステロイドを含む培地を用いて培養す
れば、前記クシダイは高い殺虫性を発揮するという事実
を発見したことに基づき、なされたものであって、その
目的は、高い殺虫性を有するクシダイを大量に培養する
方法を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】この目的を達成するため
の第一発明の特徴手段は、クシダイを、ステロイドを含
む培地で培養することにあり、第二発明の特徴手段は、
ステロイドを含む培地を支持体に吸着保持させた後、そ
の支持体の複数を互いに空隙を設けた状態に積層して積
層物を作り、クシダイを、前記積層物で培養することに
あり、第３発明の特徴手段は、ステロイドを含む培地を
液体培地とし、その液体培地を、前記液体培地内への酸
素供給、及び、攪拌操作自在な状態で培養容器に収容
し、クシダイを前記培養容器内で培養することにあり、
尚、ステロイドを加温した油に溶解させた溶液を作製
し、その溶液を培地に添加して、前記ステロイドを含む
培地を形成してあってもよく、また、ステロイドを有機
溶媒に溶解させた溶液を作製し、その溶液に油を添加し
た後、乳化、懸濁した懸濁液を調整し、その懸濁液を培
地に添加して前記ステロイドを含む培地を形成してあっ
てもよく、前記ステロイドがコレステロールもしくは４
−コレステン−３−オンの少なくとも一種であれば尚良
く、その作用効果は以下のとおりである。

【０００５】

【作用】本発明者らは、従来から知られているスタイナ
ーネマ・カルポカプサエ・ストレイン・ＡＬＬ（以下、
ＡＬＬと略称する）等の昆虫寄生性線虫を培養する場合
には、ステロイドを含む培地で培養したとしてもその殺
虫性は増大しないものの、クシダイをステロイドを含む
培地で培養した場合には、ステロイドを含まない通常の
培地で培養した場合に比べて著しく殺虫性が増大する場
合があるという事実を実験的に証明した。これにより、
クシダイを培養する培地にステロイドを含ませておくこ
とで、ステロイドはクシダイに特異的に作用して、他の
線虫類では見られない殺虫性の増大効果を生じ、その培
地で培養したクシダイは高い殺虫性を発揮するというこ
とがわかった。つまり、ステロイドを含む培地でクシダ
イを培養することで、殺虫性の高いクシダイを得ること
ができるようになった。

【０００６】また、ステロイドを含む培地を支持体に吸
着保持させた後、その支持体の複数を互いに空隙を設け
た状態に積層して積層物を作り、その積層物でクシダイ
を培養すると、前記空隙により酸素供給が充分行われる
ようになるので、クシダイを高効率で培養することがで
きる。また、ステロイドを含む培地が液体培地であり、
攪拌して、酸素供給しつつ、培養を行えば、クシダイを
高効率で培養することができる。

【０００７】さらに、ステロイドを加温した油に溶解さ
せた溶液を作製し、その溶液を培地に添加して前記ステ
ロイドを含む培地を形成してあれば、もしくはステロイ
ドを有機溶媒に溶解させた溶液を作製し、その溶液に油
を添加した後、乳化、懸濁した懸濁液を調整し、その懸
濁液を培地に添加して、ステロイドを含む培地を調整し
てあれば、容易にステロイドを培地中に均一に分散させ
ることができ、クシダイを増殖効率高く培養することが
できるとともに、培地中に均一に分散させやすくなった
ことで、液体培地であってもステロイドを容易に分散さ
せることができるようになり、一般に固体培地よりも液
体培地のほうが栄養分の利用効率が良いので、クシダイ
をさらに増殖効率高く培養することができるようになっ
た。さらには、前記ステロイドがコレステロール、４−
コレステン−３−オンの少なくとも一種であれば、クシ
ダイの増殖性を高く維持しつつ高い前記殺虫性の増大効
果が得られる。

【０００８】

【発明の効果】従って、高い殺虫性をもつクシダイを増
殖効率高く培養して増殖することが出来、しかも、前記
クシダイは、さつまいも等の農作物に被害を与える害虫
を殺虫するための生物農薬として用いることができるの
で、前記クシダイを生物農薬として用いれば、前記農作
物の害虫による被害を大幅に減少することができ、前記
農作物の収穫の増加に役立てることができる等、線虫を
利用する技術に対して、大量のクシダイを提供すること
が可能になった。

【０００９】

【実施例】ＳＧＰＹ培地（後述）にコーン油を３％及び
コレステロールを０．１％添加した寒天培地２０ｍｌに
クシダイ２０００頭を接種し、２５℃、相対湿度７０％
で２０日間培養増殖を行ったところ、２３５倍に増殖す
ることがわかり、ドウガネブイブイ３齢幼虫を供試昆虫
として生物検定を行ったところ、このクシダイはコレス
テロールを含まない培地、（ＳＧＰＹ培地にコーン油を
３％添加した寒天培地）において増殖したクシダイに比
べ大きく殺虫性が増大していることがわかった。尚、Ｓ
ＧＰＹ培地とは、可溶性デンプン０．６％Ｄ−グルコース１．０％バクトペプトン１．５％酵母抽出物１．５％の水溶液を水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整し、寒
天０．３％を添加したものであり、この培地は、常法に
従って滅菌処理を施した後用いられるものである。

【００１０】また、生物検定は以下のようにして行う。
濾紙接触法においては、まず増殖した線虫をベルマン法
により回収、カウントしておき、その線虫の培養物から
所定量の線虫を含む線虫懸濁液を調整するとともに、５
０ｍｍ径シャーレに濾紙を置いた容器を複数用意してお
く。次にそのそれぞれの容器に前記線虫懸濁液及び供試
昆虫を一頭づつ入れて飼育し、その生死を観察して、そ
の殺虫性を調べる。土壌混和法においては、まず濾紙接
触法の場合と同様に、線虫懸濁液を調整するとともに、
滅菌した腐葉土２ｇと、蒸留水２ｇとを混和して入れた
プラスチックカップを複数用意しておく。次に、そのプ
ラスチックカップに供試昆虫１頭と、線虫懸濁液を入れ
て飼育し、その生死を観察する。

【００１１】以下に、様々な条件でクシダイの培養を行
った試験例を示す。

【００１２】〔試験例１〕：コレステロールの添加によ
るクシダイの殺虫活性への影響クシダイの増殖性、及び殺虫性にコレステロールがどの
ように関与しているかを検討した。

【００１３】（１）クシダイ２０００頭をＳＧＰＹ培
地、コーン油を３％含むＳＧＰＹ培地（以下ＳＧＰＹ−
ＣＯ培地と略称する）、ナタネ油を３％含むＳＧＰＹ培
地（以下ＳＧＰＹ−ＲＯ培地と略称する）、アマニ油を
３％含むＳＧＰＹ培地（以下ＳＧＰＹ−ＬＯ培地と略称
する）、ゴマ油を３％含むＳＧＰＹ培地（以下ＳＧＰＹ
−ＳＯ培地と略称する）、オリーブ油を３％含むＳＧＰ
Ｙ培地（以下ＳＧＰＹ−ＯＯ培地と略称する）で培養し
て、増殖性を調べるとともに、コレステロールを０．１
％添加したＳＧＰＹ培地（以下ＳＧＰＹ−ＣＳ培地と略
称する）及びコレステロールを０．１％添加したＳＧＰ
Ｙ−ＣＯ培地（以下ＳＧＰＹ−ＣＯ−ＣＳ培地と略称す
る）で培養して、増殖性を調べた。その結果を表１に示
す。尚、平均増殖数とは同じ条件の５つの容器で培養を
行った際のクシダイの増殖数の平均値である。

【００１４】

【表１】

【００１５】その結果、ＳＧＰＹ培地及びＳＧＰＹ−Ｓ
Ｏ培地ではクシダイは増殖しないものの、様々な条件下
でクシダイは増殖することがわかった。また、ＳＧＰＹ
培地、ＳＧＰＹ−ＣＯ培地、ＳＧＰＹ−ＣＳ培地、ＳＧ
ＰＹ−ＣＯ−ＣＳ培地での増殖数を比較すれば、植物油
はクシダイの増殖率を向上させるが、コレステロールは
クシダイの増殖には役立つものの植物油を添加した培地
での増殖率をさらに向上させることには関与していない
ことがわかる。

【００１６】また、ＳＧＰＹ−ＣＯ−ＣＳ培地で増殖し
たクシダイを顕微鏡で観察すると、ほとんどが次世代の
完染態幼虫にまで成長しており、成長の度合いにばらつ
きは見られない。一方、ＳＧＰＹ−ＣＯ培地で増殖した
クシダイについても同様に観察すると、やはり成長の度
合いにはばらつきが見られなかった。その結果、クシダ
イはコレステロールの有無に関わらず、ばらつきなく成
長し、コレステロールはクシダイの形態的成長に影響を
及ぼしていないことがわかる。

【００１７】（２）前述のＳＧＰＹ−ＣＯ培地、ＳＧ
ＰＹ−ＲＯ培地、ＳＧＰＹ−ＬＯ培地、ＳＧＰＹ−ＯＯ
培地、ＳＧＰＹ−ＣＳ培地において増殖させたクシダイ
１０００頭づつを用い、ドウガネブイブイの３齢幼虫を
供試昆虫として、土壌混和法により生物検定を行った。
その結果を表２に示す。尚、表２において殺虫率とは２
５℃で前記供試昆虫１０頭をそれぞれ１０日間飼育した
ときの前記供試昆虫の平均死亡数を１０頭に対する百分
率で示したものである。

【００１８】

【表２】

【００１９】表２より、コレステロールを含まない培地
で培養したクシダイは低い殺虫性しか示さないものの、
コレステロールを含む培地で培養したクシダイは高い殺
虫性を示すことがわかった。また、ＳＧＰＹ−ＣＯ培地
で培養したクシダイを、ブイブイの幼虫１頭あたり４０
００頭にまで増加させて同様に検定を行ったところ殺虫
性の向上はみられず、コーン油の有無は殺虫性に影響を
与えないということもわかり、コレステロールに代表さ
れるステロイドが存在すればクシダイの殺虫活性を高め
ることが出来るといえる。

【００２０】（３）ドウガネブイブイ３齢幼虫を殺虫
する殺虫性とクシダイ数依存性を調べるために前記幼虫
に対して、前述のＳＧＰＹ−ＣＯ−ＣＳ培地で増殖させ
たクシダイのを与える量を幼虫１頭あたり２５０頭〜１
０００頭にして行った。その結果、試験例１−（２）と
同様に土壌混和法により生物検定を行ったところ、表３
のようになった。

【００２１】

【表３】

【００２２】その結果、コレステロールを含む培地で増
殖したクシダイは、少ない接種頭数であっても高い殺虫
率を示すことがわかる。

【００２３】〔比較例〕：他の線虫に対するコレステロ
−ルの影響ＡＬＬの増殖性と殺虫性についてコレステロールがどの
ように関与しているかを検討した（１）ＳＧＰＹ培地、ＳＧＰＹ−ＣＯ培地、ＳＧＰＹ
−ＣＳ培地、ＳＧＰＹ−ＣＯ−ＣＳ培地で、それぞれＡ
ＬＬを２０００頭培養して、その増殖性を調べたとこ
ろ、表４のようになった。

【００２４】

【表４】

【００２５】この結果、試験例１とは異なり、コーン油
の添加はＡＬＬの増殖には役立っているもののコーン油
のみでは、その効果は小さく、さらにコレステロールを
添加することにより、その増殖性は大きく向上している
ことがわかる。

【００２６】（２）前述のＳＧＰＹ−ＣＯ培地、ＳＧ
ＰＹ−ＣＯ−ＣＳ培地において、増殖させたＡＬＬの接
触頭数を５００頭、１０００頭、２０００頭と変化させ
つつ、ハスモンヨトウの６齢幼虫に対する殺虫性を、濾
紙接触法により１２時間ごとの殺虫率を調べることで平
均死亡時間を算出して評価した。その結果を表５に示
す。

【００２７】

【表５】

【００２８】表５よりＡＬＬを培養する場合には、コレ
ステロールが培地中に含まれているか否かはハスモンヨ
トウの幼虫に対する殺虫性には影響しないことがわかっ
た。

【００２９】（３）（１),（２）と同様の試験をスタ
イナーネマ・カルポカプサエＤＤ−１３６ (Steinern
ema carpocapsae DD-136) で行ったところＡＬＬの場合
と同様の結果が得られた。試験例１及び比較例により、
昆虫寄生性線虫をコレステロールを含む培地で増殖させ
た場合に、その殺虫性が増大するという効果はクシダイ
に特有のものであることを示唆し、かつ、このようにし
て増殖されたクシダイが、高い殺虫性を有することを明
らかにした。つまり、このようにして増殖されたクシダ
イはドウガネブイブイの幼虫等に対して高い殺虫活性を
有する生物農薬として用いることが出来るということが
わかった。

【００３０】〔試験例２〕：殺虫活性のコレステロール
添加量依存性クシダイの殺虫活性は、どの程度のコレステロールの添
加量で向上出来るのかを調べた。コレステロールをエタ
ノールに溶解して飽和溶液を調整した後、この飽和溶液
に所定量のコーン油を加え乳濁液とし、この乳濁液に前
述のＳＧＰＹ培地を加え、コレステロール含有量が１０
００μｇ／ｍｌ（０．１％）、コーン油含有量が３％と
なるように調整した。尚、このようにして培地を調整す
れば、コレステロールはエタノールに溶解してあること
によって培地中に均一に分散させることが出来、線虫を
増殖させる際に培地中で均一に増殖させることが出来、
効率良く増殖させることが出来るものである。

【００３１】同様にして、コレステロール含有量が２
５，５０，１００，２００，４００μｇ／ｍｌとなるコ
レステロール含有培地を調整し、これらの培地でそれぞ
れ１０００頭のクシダイを２５℃相対湿度７０％で２０
日間培養し、その増殖性を夫々調べるとともに、増殖し
たクシダイを１０００頭づつ用いてドウガネブイブイの
幼虫に対する殺虫性を土壌混和法によって調べた。その
結果を表６に示す。

【００３２】

【表６】

【００３３】表６から、コレステロールはクシダイの増
殖数の向上にはあまり影響を与えないことがわかる。一
方、ドウガネブイブイに対する殺虫性は、コレステロー
ルの添加量の増加に伴い向上していることがわかる。ま
た、この表によればコレステロール含有量が５０μｇ／
ｍｌ以上であれば、１０日後の殺虫率が１００％となっ
ているので、ドウガネブイブイに対して十分高い殺虫性
を発揮出来ることがわかる。

【００３４】〔試験例３〕：コレステロール以外のステ
ロイドの殺虫性に対する影響コレステロール以外のステロイドとして、４−コレステ
ン−３−オンを含む培地を用いてクシダイの増殖性及び
殺虫性を調べた。即ち、４−コレステン−３−オン０．
１％と、コーン油３％とを含む培地（ＳＧＰＹ−ＣＯ−
ＣＳＮ培地）を調整し、クシダイ１０００頭を２５℃相
対湿度７０％で培養し、その増殖性を調べるとともに、
増殖したクシダイを１０００頭づつ用いてドウガネブイ
ブイの幼虫に対する殺虫性を土壌混和法によって１０日
後のドウガネブイブイの幼虫に対する殺虫率によって調
べた。また、比較のためＳＧＰＹ−ＣＯ−ＣＳ培地及び
ＳＧＰＹ−ＣＯ培地でも同様に、増殖性及び殺虫性を調
べた。その結果を表７に示す。

【００３５】

【表７】

【００３６】表７から、４−コレステン−３−オンを用
いたとしても増殖性を高く維持した状態で、クシダイの
殺虫性を向上させることが出来ることがわかった。つま
り、ステロイドはコレステロールに限らず、様々なもの
が用いられることがわかり、本発明に用いるステロイド
は、コレステロール、４−コレステン−３−オンに限ら
れるものではない。

【００３７】〔試験例４〕：支持体を利用してのクシダ
イの培養前述の試験例においては、いずれも通常の寒天培地の形
態で培養を行ったが、支持体に培地を吸着させ、支持体
の積層物において培養を行い、増殖性と殺虫性を調べ
た。以下図面に従って説明を行う。図１に示すように、
上部に通気口１ａを有する３７０ｍｍ（Ｗ）×５１０ｍ
ｍ（Ｌ）×１２０ｍｍ（Ｈ）の容器１内に支持体２とし
て３ｃｍ角の立方体状ポリウレタンフォームを複数入
れ、これら複数の支持体２を互いに空隙を設けた状態に
積層するとともに、この支持体２に前記ＳＰＧＹ−ＣＯ
−ＣＳ培地３を３０００ｍｌ吸着支持させて積層物を形
成した。この積層物を定法に従って滅菌処理した後、ク
シダイ５０万頭を接種し、２５℃、相対温度７５で２０
日間培養を行い、その増殖性を調べるとともに、増殖し
たクシダイを１０００頭づつ用いてドウガネブイブイの
幼虫に対する殺虫性を、土壌混和法によって１０日後の
ドウガネブイブイの幼虫に対する殺虫率によって調べ
た。

【００３８】その結果、増殖したクシダイは１０５００
万頭に達し、増殖率は２００倍以上であることがわかっ
た。また、殺虫率は１００％となり、高い殺虫率が得ら
れた。

【００３９】従って、前記積層物を用いて増殖を行う
と、空間を有効に利用しつつ、高い増殖率で殺虫性の高
いクシダイを得ることが出来ることがわかった。

【００４０】〔試験例５〕：液体培地による増殖性の検
討試験例４においては固体積層培地による培養を行った
が、液体培地においても高い増殖性と殺虫性が得られる
かどうかを調べた。

【００４１】即ち、可溶性デンプン０．６％、Ｄ−グル
コース１．０％、バクトペプトン１．５％、酵母抽出物
１．５％の水溶液に、コレステロールを加温したコーン
油に溶解したものを添加し、コレステロール０．１％、
コーン油３％となるように調製したものをＳＧＰＹ液体
培地とした。このＳＧＰＹ液体培地を用い、培養タンク
内において、クシダイを培養した。以下図面に従って説
明する。

【００４２】図２に示すように、培養タンク４は、内部
に空気供給用のスパージャー５及び酸素溶解用の攪拌羽
根６を供え、スパージャー５からは、一定量の空気を供
給可能にしてあり、また、培養タンク４内から連設して
ある溶存酸素濃度計７によりＳＧＰＹ液体培地８中の溶
存酸素の過不足を検知して攪拌羽根６の回転数を適切に
制御可能にしてある。また、ＳＧＰＹ液体培地８のｐＨ
を培養タンク４内から連設したｐＨ計９により培地８の
ｐＨ値を検知しながら、必要に応じて酸、アルカリ薬液
ポット１０，１１から酸、アルカリを添加して適切な範
囲（ｐＨ６．５〜７．５）になるように制御可能になっ
ている。

【００４３】前記ＳＧＰＹ液体培地に培地１ｍｌ当たり
クシダイ２５０頭を接種し、２５℃で２０日間前記培養
タンク４内で培養を行い、クシダイに充分な酸素を供給
しつつ、その増殖性を調べるとともに、増殖したクシダ
イを１０００頭づつ用いて、ドウガネブイブイの幼虫に
対する殺虫性を土壌混和法によって１０日後のドウガネ
ブイブイの幼虫の殺虫率によって調べた。その結果、増
殖したクシダイは１０万頭に達しており、増殖率は４０
０倍以上であることがわかった。また、殺虫率は１００
％となり、高い殺虫性が得られた。従って、本発明の線
虫類の増殖方法に用いる培地としては、固体培地のみな
らず液体培地を用いることも出来る。また、培養容器４
についてもスパジャー、攪拌羽根６を備えた培養タンク
に限らず、単に、フラスコを培養容器４として振とう、
攪拌可能にして用い、その振とう又は攪拌により、液体
培地を空気に接触させ、酸素供給可能にすることも可能
であり、液体培地８中に酸素を供給する手段は本実施例
の方法以外にも、公知の技術を用いることが可能であ
る。

【００４４】〔別実施例〕本実施例においては、クシダ
イを用いてドウガネブイブイの幼虫を試験的に殺虫する
例を示したが、以下のようにして実施しても良い。

【００４５】前述のＳＧＰＹ−ＣＯ−ＣＳ培地で培養し
たクシダイを１０万頭／ｍｌ含むように調整した生物農
薬を３３万頭／ｍ²となるように土壌に混在させた圃場
にサツマイモを植え付けて、このサツマイモの収穫時に
害虫による被害度を調べた。

【００４６】その結果、通常の化学農薬（日本バイエル
アグロケム社バイジット粒剤）を通常の方法で用いた場
合（植え付け時に９ｋｇ／１０ａの割合で圃場に散布、
生育期に９ｋｇ／１０ａの割合で圃場に３度散布使用）
に比して、被害度が大きく減少することがわかった。

【００４７】尚、各実施例及び試験例において用いたＳ
ＧＰＹ培地等の培地、ドウガネブイブイの３齢幼虫に代
表される害虫、サツマイモに代表される農作物等は、実
施形態を示す一例であって、本発明はこれら実施例、試
験例の実施形態に限られる訳ではない。

【００４８】尚、特許請求の範囲の項に図面との対照を
便利にするために符号を記すが、該記入により本発明は
添付図面の構成に限定されるものではない。

【図面の簡単な説明】

【図１】試験例４における培養方法を示す概略図

【図２】試験例５における培養方法を示す概略図

【符号の説明】

２支持体３培地４培養容器８液体培地

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者河杉忠昭茨城県竜ケ崎市向陽台５丁目６番地株式会社クボタ技術開発研究所つくば研究室内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】スタイナーネマ・クシダイ(Steinernema
kushidai)を、ステロイドを含む培地で培養する線虫類
の培養方法。
【請求項２】ステロイドを含む培地（３）を支持体
（２）に吸着保持させた後、その支持体（２）の複数を
互いに空隙を設けた状態に積層して積層物を作り、スタ
イナーネマ・クシダイ(Steinernema kushidai)を、前記
積層物で培養する線虫類の培養方法。
【請求項３】ステロイドを含む培地を液体培地（８）
とし、その液体培地（８）を前記液体培地（８）内への
酸素供給、及び、攪拌操作自在な状態で培養容器（４）
に収容し、スタイナーネマ・クシダイ(Steinernema kus
hidai)を、前記培養容器（４）内で培養する線虫類の培
養方法。
【請求項４】ステロイドを加温した油に溶解させた溶
液を作製し、その溶液を培地に添加して、前記ステロイ
ドを含む培地を形成してある請求項１〜３いずれか一項
に記載の線虫類の培養方法。
【請求項５】ステロイドを有機溶媒に溶解させた溶液
を作製し、その溶液に油を添加した後、乳化、懸濁した
懸濁液を調製し、その懸濁液を培地に添加して、前記ス
テロイドを含む培地を形成してある請求項１〜３いずれ
か一項に記載の線虫類の培養方法。
【請求項６】前記ステロイドが、コレステロール(cho
lesterol) もしくは４−コレステン−３−オン(4-chole
sten-3-one) の少なくとも一種である請求項１〜５いず
れか一項に記載の線虫類の培養方法。