JPH07274833A - ガラクトマンナンの加水分解方法 - Google Patents

ガラクトマンナンの加水分解方法

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JPH07274833A
JPH07274833A JP7081119A JP8111995A JPH07274833A JP H07274833 A JPH07274833 A JP H07274833A JP 7081119 A JP7081119 A JP 7081119A JP 8111995 A JP8111995 A JP 8111995A JP H07274833 A JPH07274833 A JP H07274833A
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JP
Japan
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mannase
immobilized
extract
substrate
coffee extract
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JP7081119A
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English (en)
Inventor
Pierre Nicolas
ニコラス ピエール
Eric Raetz
ラエツ エリック
Sylviane Reymond
レイモンド シルビアン
Jean-Luc Sauvageat
− ルク ソバージュ ジャン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Societe des Produits Nestle SA
Nestle SA
Original Assignee
Societe des Produits Nestle SA
Nestle SA
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Publication date
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
    • A23F5/00—Coffee; Coffee substitutes; Preparations thereof
    • A23F5/16—Removing unwanted substances
    • A23F5/163—Removing unwanted substances using enzymes or microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01025—Beta-mannosidase (3.2.1.25), i.e. mannanase

Abstract

(57)【要約】 【目的】 液体コーヒー抽出物のガラクトマンナンの加
水分解方法。 【構成】 液体コーヒー抽出物は固定化β−マンナーゼ
により２０〜８０℃の温度で加水分解する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は液体コーヒー抽出物に含
まれるガラクトマンナンの加水分解方法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】米国
特許第２８０２９２０号明細書はコーヒー抽出物の凍結
中ゲルの形成を防止するためにβ−マンナーゼ調製品に
よるコーヒー抽出物に含まれるガラクトマンナンの加水
分解を開示する。
【０００３】Ｆｏｏｄ Ｒｅｖｉｅｗ，８／９，３７〜
３９（１９８４）は液体コーヒー抽出物の粘度を下げ、
高含量の乾物に濃縮することができるβ−マンナーゼの
工業的使用を開示する。
【０００４】しかし、β−マンナーゼのこの工業的使用
にはある欠点がある。例えば、酵素は１回だけの使用で
あるので浪費である。最終生成物の酵素の存在も望まし
くない。本発明は先行技術の欠点を改良するためのもの
である。
【０００５】
【課題を解決するための手段】この目的に対し、本発明
による液体コーヒー抽出物のガラクトマンナンの加水分
解方法では、抽出物は固定化β−マンナーゼにより２０
〜８０℃の温度で加水分解する。
【０００６】β−マンナーゼは基質に共有結合し、また
は基質に吸着されたβ−マンナーゼの重合化により固定
化するのがよい。
【０００７】従って本発明の酵素の節約を果すことに利
益がある。それ以上の利点は基質からβ−マンナーゼは
塩析されないことにある。それ以上の利点は細菌汚染が
認められないような温度で作業できることにある。
【０００８】本発明の驚くべき利点は、β−マンナーゼ
が基質に共有結合後、または基質に吸着された分子の重
合化後、その活性を失わないことにある。同様に、固定
化β−マンナーゼの酵素活性は経時的に比較的変わらな
い。
【０００９】最後に、本発明はコーヒー抽出物が撹拌タ
ンク型の反応器で、および固定化β−マンナーゼの固定
層または流動層を含む反応器で、コーヒー抽出物の粘度
に関係なく加水分解できる、それ以上の利点を有する。
【００１０】以下の記載では、「撹拌タンク型の反応
器」とはサスペンジョンの固定化β−マンナーゼを含む
機械撹拌する装置を意味する。
【００１１】同様に、「固定化β−マンナーゼの固定
層」とは液体コーヒー抽出物の連続処理に適応した反応
器にぎっしり詰めた基質上または内に固定化されたβ−
マンナーゼを意味する。
【００１２】「固定化β−マンナーゼの流動層」とは液
体コーヒー抽出物の連続処理に適応した反応器に配置さ
れるが、ぎっしり詰めない基質に固定化されたβ−マン
ナーゼを意味する。コーヒー抽出物流は底部から上部に
循環し、基質粒子をサスペンジョンにする。「流動層反
応器」として既知のこの型の反応器は、サスペンジョン
の固体物質を含む媒体の処理に特に有利である。
【００１３】「マンノビオース」および「マンノトリオ
ース」とはそれぞれマンノースのダイマーまたはトリマ
ーを意味し、「マンノサッカライド」とは少なくとも２
個のマンノースのポリマーを意味する。
【００１４】β−マンナーゼ単位とは、イナゴ豆ガムか
ら、 pＨ５および３０℃で１分間に１μモルのマンノー
スに等しい還元糖量を遊離する、β−マンナーゼ量とし
て規定される。
【００１５】本発明を実施するために、従ってβ−マン
ナーゼは伝統的基質の表面に共有結合することにより固
定化し、または例えば伝統的基質の表面に予め吸着され
たβ−マンナーゼを重合化することにより固定化するこ
ともできる。
【００１６】次に液体コーヒー抽出物は、例えばこれら
の固定化酵素により４０〜７０℃の温度で加水分解する
ことができる。
【００１７】この目的のため、細菌またはかびから製造
したβ−マンナーゼ、特にＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎ
ｉｇｅｒから抽出したβ−マンナーゼ、特に例えば商標
Ｇａｍａｎａｓｅ（ＮＯＶＯ−ＮＯＲＤＩＳＫ，デンマ
ーク）として市販されるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉ
ｇｅｒの精製β−マンナーゼを使用することが好まし
い。
【００１８】さらに、液体コーヒー抽出物は粉砕ロース
トコーヒーを満たしたセルを通して抽出流体を浸出する
ことにより得ることができる。この抽出は向流で、すな
わち１５０〜１８０℃の温度で加圧下に水を、Ｎ回抽出
されたもっとも消費された粉砕ローストコーヒーを入れ
たセルの底部に導入して行なうことができる。次にこの
抽出セルからの液体抽出物は、新しい粉砕ローストコー
ヒーを丁度満たしたセルを液体抽出物が通過するまで
（Ｎ−１）回等使用したコーヒーを入れた抽出セルを通
す。使用する最終抽出物は約１００℃の温度で最後のセ
ルから出る。従って、もっとも消費されたコーヒーを含
むセルにより形成される加圧工程と、最少消費コーヒー
を含むセルにより形成される大気圧工程間に分けること
ができる。
【００１９】液体コーヒー抽出物は加圧工程の粉砕ロー
ストコーヒーを満たしたセルを通して抽出流体を浸出し
て得ることもできる。以下の本記載で使用される「分割
抽出（ｓｐｌｉｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ）」として既
知のこの方法で、２つの抽出流体を使用し、抽出セルは
加圧工程および大気工程に区分し、各工程はその抽出流
体自体により抽出する。大気工程に含まれるコーヒーは
適度の温度および圧力条件下で第１抽出流体により抽出
し、一方加圧工程に含まれるコーヒーははるかに高い温
度および圧力条件下で第２抽出流体により抽出する。従
って２つの異る液体抽出物を生成し、例えば加圧工程か
らの抽出物を部分蒸発後、これらは相互に併せ、次に通
例方法により粉末に転換できる。
【００２０】本発明では、従って粉砕ローストコーヒー
の分割抽出から生じる加圧工程からの抽出物を、抽出物
の部分蒸発前に使用することができる。従って、例えば
ＥＰ ０５３８５１２号明細書に開示の加圧工程からの
抽出物が使用される。
【００２１】本発明に従って、基質は例えば特に２０〜
２００ｎｍの寸法の細孔を有する多孔性基質である。特
に、多孔性基質はシリカ、ガラス、アクリルポリマー、
特にアクリルポリマー Ｅｕｐｅｒｇｉｔ−Ｃ（商標）
（Ｒｏｈｍ，ドイツ）、およびフェノールポリマー、例
えば特にフェノール−ホルムアルデヒド レジン Ｄｕ
ｏｌｉｔ（商標）（Ｓｕｐｅｌｃｏ，ＵＳＡ）、特にレ
ジン Ｄｕｏｌｉｔｅ（商標）Ｓ−７６１の粒子により
形成される群から選択できる。
【００２２】β−マンナーゼはアクリルポリマー Ｅｕ
ｐｅｒｇｉｔ−Ｃ（商標）の表面に共有結合することに
より固定化することが好ましい。Ｅｕｐｅｒｇｉｔ−Ｃ
はそのエポキシ環がβ−マンナーゼを固定化することが
できるオキシラン基を有する。従って、例えばＥｕｐｅ
ｒｇｉｔ−Ｃ（商標）１ｇにつき少なくとも１９００単
位のβ−マンナーゼを共有結合することができる。
【００２３】β−マンナーゼはフェノール レジン Ｄ
ｕｏｌｉｔｅ（商標）粒子の表面に吸着されたβ−マン
ナーゼの重合化により固定化することが好ましい。例え
ば、重合化剤としてグルタルアルデヒドを使用すること
ができる。
【００２４】本発明の好ましい第１態様では、コーヒー
抽出物は基質に共有結合し、または基質に吸着されたマ
ンナーゼの重合化により固定化したβ−マンナーゼを含
む撹拌タンク型の反応器で加水分解する。装置は自動化
され、次の３工程により半−連続的方法で操作できる。
最初に、タンクには処理するコーヒー抽出物を満たし、
次に機械撹拌しながら加水分解し、その後タンクは所定
時間後空にする。反応器の酵素の保留はタンクの低部に
配置されたフィルターにより行なうことができる。この
フィルターは例えば、４０μｍより大きい直径を有する
すべての粒子を保留できる。
【００２５】この加水分解方法に従って、基質に共有結
合することにより固定化したβ−マンナーゼは、例えば
少なくとも５００連続サイクルのコーヒー抽出物の加水
分解後６０％以上のその酵素活性を保存できるように良
好な安定性を有することが分かる。
【００２６】本発明の好ましい第２態様では、液体コー
ヒー抽出物は基質に共有結合し、または基質に吸着した
β−マンナーゼの重合化により固定化したβ−マンナー
ゼの固定層を含む反応器で連続的に加水分解する。この
方法で使用する場合、固定化β−マンナーゼは、例えば
２０時間以上の連続加水分解後その８０％以上の酵素活
性を保存できるように、良好な安定性を有する。
【００２７】本発明の好ましい第３態様では、液体コー
ヒー抽出物は基質に共有結合することにより固定化した
β−マンナーゼの流動層を含む反応器で連続加水分解す
る。
【００２８】次例は本発明方法を説明する。これらの例
では、タン白１ｇにつき６５０００単位の比活性を有す
る商標Ｇａｍａｎａｓｅとして市販するβ−マンナーゼ
を使用した。これらのある例では、基質モデルとして、
蒸留水中の可溶性コーヒーの２％混合物またはイナゴ豆
ガムから調製したガラクトマンナン溶液を使用した。こ
れらはコーヒー抽出物により得ることができる結果を非
常に良く説明する。これらの例は抽出物のクロマトグラ
フィ分析および図面の記載の後で説明する。
【００２９】ＨＰＴＬＣ クロマトグラフィ 液体コーヒー抽出物に含まれるオリゴサッカライドはこ
の抽出物の予備精製を行わずにクロマトグラフィにより
定性的および定量的に測定した。こうして、例えばガラ
クトマンナンの加水分解の酵素動力学および加水分解コ
ーヒー抽出物の残留酵素活性の測定のような各種試験に
この方法を使用できる。この目的に対し、ＨＰＴＬＣに
対しシリカプレート「シリカゲル６０」（Ｍｅｒｃｋ
５６３１／５６４１）を使用した。乾燥コーヒー抽出物
の８０μｇ当量を使用し、３連続展開を３０／３５／１
１の割合のクロロホルム、酢酸および水から成る溶媒に
より行なった。プレートは４mlのアニリン、４ｇのジフ
ェニルアミン、２００mlのアセトンおよび３０mlの８５
％リン酸を含む試薬により１１０℃で３０分曝露した。
こうして抽出物に含まれるオリゴサッカライド、例えば
遊離マンノース、マンノビオースおよび８より低い重合
度を有する他のマンノサッカライドを定性的に測定する
ことができた。抽出物のオリゴサッカライドに相当する
プレートの染色濃度および既知濃度のプレートに沈着し
たこのオリゴサッカライドに相当する染色濃度の関係に
より、抽出物の各種オリゴサッカライド含量を測定する
こともできた。ガラクトマンナンの１００％加水分解
は、マンノビオースおよびマンノトリオースのみが残留
する場合、これらは酵素がもはや分割できない反応最終
生成物であるので、達成されたと考えられた。
【００３０】図面 図１（ａおよびｂ）：Ｄｕｏｌｉｔｅ（商標）Ｓ−７６
１に固定されたβ−マンナーゼを入れた固定層反応器の
ガラクトマンナンの加水分解。加水分解％は滞留時間の
関数（１ａ）として、および酵素の相対活性は時間の関
数（１ｂ）として表わす。 図２（ａおよびｂ）：シリカ球に固定化したβ−マンナ
ーゼを入れた固定層反応器のガラクトマンナンの加水分
解。加水分解％は滞留時間の関数（２ａ）として、およ
び酵素の相対活性は時間の関数（２ｂ）として表わす。 図３（ａおよびｂ）：Ｅｕｐｅｒｇｉｔ−Ｃ（商標）に
固定したβ−マンナーゼを入れた固定層反応器のガラク
トマンナンの加水分解。加水分解は滞留時間の関数（３
ａ）として、および酵素の相対活性は時間の関数（３
ｂ）として表わす。 図４：Ｅｕｐｅｒｇｉｔ−Ｃ（商標）に固定したβ−マ
ンナーゼによる流動層のコーヒー抽出物の加水分解。加
水分解％は標準化滞留時間の関数として表わす。 図５：Ｅｕｐｅｒｇｉｔ−Ｃ（商標）に固定したβ−マ
ンナーゼによる流動層のコーヒー抽出物の加水分解。加
水分解サイクル数の関数として生成したマンノサッカラ
イドの％を表わす。
【００３１】例１ β−マンナーゼは次のようにフェノールポリマーに吸着
させ、重合化して固定した：約６０ｎｍ寸法の細孔を有
するレジンＤｕｏｌｉｔｅ（商標）Ｓ−７６１（Ｓｕｐ
ｅｌｃｏ，ＵＳＡ）を使用した。このレジンは篩別して
０．２〜０．４mmの粒子を得、０．５Ｎ ＮａＯＨで１
時間処理し、次に水で洗浄し、次に０．２５Ｎ ＨＣｌ
で３０分処理し、最後に pＨ４まで蒸留水で洗浄した。
５mlのＧａｍａｎａｓｅ（商標）および pＨ６の２０ml
の０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液から成る２５ml溶液
を５ｇの処理レジンに添加し、Ｇａｍａｎａｓｅ（商
標）は２２℃で１２時間温和に撹拌しながらレジンに吸
着させた。次に蒸留水で洗浄し、吸着した酵素は２２℃
で３時間２．５％グルタルアルデヒド溶液により重合化
し、その後最後に蒸留水により洗浄して製造した。ガラ
クトマンナン溶液は１リットルの pＨ５のアセテート緩
衝液で３ｇのイナゴ豆ガムを８０℃に加熱して調製し、
可溶性部分は次の試験に使用した。固定化酵素は通例の
固定層反応器で試験した。この反応器は管状ガラスボデ
ィおよびボディの各端部で水平面を維持する２個のナイ
ロンフィルター（７０μｍ）から成る。反応器は３０℃
の水浴に浸漬し、ガラクトマンナン溶液は通例の蠕動ポ
ンプにより輸送し、次に３０℃に加熱後反応器に移し
た。最初に、ガラクトマンナン溶液は反応器に異る速度
でポンプ輸送した。次に通例方法を使用して反応器の抽
出物の滞留時間（ＲＴ）の関数として溶離液の還元糖量
を測定した。次に反応器の抽出物の滞留時間の関数とし
てガラクトマンナンの加水分解％を測定した。１００％
加水分解割合は生成還元糖量が別の試験で非固定化Ｇａ
ｍａｎａｓｅ（商標）による基質の全加水分解により得
たものに等しい場合達成されたと考えられた。結果は図
１ａに示す。次に、ガラクトマンナン溶液は反応器に連
続して通した。試験の初めに１００％未満の加水分解割
合を供した滞留時間（ＲＴ）はこの目的に対し選択し
た。次に溶離液の還元糖量は規則的に測定した。この量
は時間の関数として減少したことが分かる。恐らく酵素
活性の損失によるためであろう。この理由で酵素の相対
活性（％）は、得た還元糖量および試験の初めに含む量
を関連させることにより時間の関数として測定した。結
果は図１ｂに示す。次表は基質のいくつかの特性を示
す。
【表１】
【００３２】例２ β−マンナーゼは０．１〜０．３mmの直径および約６０
ｎｍの寸法の細孔を有するシリカ球Ｘ−０３０ＬＳ（Ｓ
ｅｐｒａｃｏｒ，フランス）に次のように共有結合する
ことにより固定した。シリカ球はＨ．Ｈ．Ｗｅｅｔａｌ
ｌの水性媒体におけるシラン化方法で開示された方法
（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚ．，４４，１３５〜１
４８，１９７６）で得たγ−アミノプロピルトリエトキ
シシランで予じめカップリングした。 pＨ７の０．１Ｍ
リン酸ナトリウム緩衝液中の５０ml２．５％グルタルア
ルデヒド溶液で処理した５ｇのシリカ球を真空下で１時
間、次いで大気圧で２時間処理した。次に粒子は蒸留
水、０．５Ｍ ＮａＣｌ溶液および pＨ６の０．１Ｍリ
ン酸ナトリウム溶液により連続洗浄した。５mlのＧａｍ
ａｎａｓｅ（商標）および２０mlの pＨ６のリン酸ナト
リウム緩衝液を含む２５mlの溶液を活性化基質に添加
し、次にヘリウム雰囲気下に４℃で１２時間作用させ
た。最後に球は大量の蒸留水、次に大量の pＨ６の０．
１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液で洗浄した。次にこの調製
品は例１と同じ方法で固定層反応器で試験した。反応器
の基質の滞留時間の関数としてガラクトマンナンの加水
分解％（図２ａ）および時間の関数として酵素の相対活
性（図２ｂ）をこうして測定した。次表は使用基質のい
くつかの特性を示す。
【表２】
【００３３】例３ β−マンナーゼは約３５ｎｍの寸法の細孔および反応性
オキシラン基を有するＥｕｐｅｒｇｉｔ−Ｃ（商標）ア
クリルポリマー球（Ｒｏｈｍ，ドイツ）に次のように共
有結合することにより固定した。７．５mlのＧａｍａｎ
ａｓｅ（商標）および３０mlの pＨ７の０．５Ｍリン酸
カリウム緩衝液から成る３７．５ml溶液を５ｇのＥｕｐ
ｅｒｇｉｔ−Ｃ（商標）に添加し、環境温度で４８時間
温和に撹拌しながら作用させた。次に調製品は pＨ７の
０．５Ｍリン酸カリウム緩衝液で洗浄した。次にこの調
製品は例１記載と同じ方法で固定層反応器で試験した。
こうして反応器の基質の滞留時間の関数としてガラクト
マンナンの加水分解％（図３ａ）および時間の関数とし
て酵素の相対活性（図３ｂ）を測定することができた。
酵素の安定性は１６時間の連続加水分解後、固定化β−
マンナーゼは８０％以上のその酵素活性を保留するよう
に特にこの基質で良いことが分かる。基質から酵素の塩
析は経時的に溶離液で認められなかったことも分かる。
溶離液は３０℃で数時間し、還元糖含量の変化が測定さ
れた場合、変化は認められなかった。次表は使用基質の
いくつかの特性を示す。
【表３】
【００３４】例４ 固定化は約７０ｎｍの寸法の細孔を有し、アミノプロピ
ル基（Ｓｉｇｍａ Ｇ５０１９）を含む、実証された細
孔を有する通例の５ｇのガラス粒子に共有結合すること
により、例２のシリカ球の場合と同じ方法で固定した。
次にこの調製品は蒸留水中に２％の通例の可溶性コーヒ
ー抽出物（Ｎｅｓｃａｆｅ，商標、Ｎｅｓｔｌｅ）を使
用して例１記載の固定層反応器で処理した。コーヒー抽
出物の流速は修正し、反応器から出る抽出物はＨＰＴＬ
Ｃにより分析した。６４および８１秒の滞留時間では、
反応生成物は大部分がマンノビオースおよびマンノトリ
オースから成っていた。微量の４および５マンノースが
目に見える程度残留した。滞留時間を１０５秒に増加す
ると、抽出物に含まれるオリゴサッカライドはマンノビ
オースおよびマンノトリオースのみで、ガラクトマンナ
ンの完全な加水分解を示した。次表は使用基質の特性を
示す。
【表４】
【００３５】例５ 特許ＥＰ−０５３８５１２号明細書に開示された粉砕ロ
ーストコーヒーの開裂抽出から生じる加圧工程からの液
体コーヒー抽出物を５０℃に保持した例１記載の固定層
反応器に連続供給した。反応器には例３記載と同じ方法
でＥｕｐｅｒｇｉｔ−Ｃ（商標）に固定したＧａｍａｎ
ａｓｅ（商標）を入れた。流速は８分の滞留時間となる
ように調整した。試料は４８時間規則的に採取し、ＨＰ
ＴＬＣクロマトグラフィにより生成するオリゴサッカラ
イドを評価した。処理抽出物のオリゴサッカライドはマ
ンノビオースおよびマンノトリオースのみであったの
で、抽出物のガラクトマンナンは完全に加水分解した。
【００３６】例６ 例５記載のコーヒー抽出物の数回の加水分解をＥｕｐｅ
ｒｇｉｔ−Ｃ（商標）に固定したＧａｍａｎａｓｅ（商
標）の流動層を含む通例の垂直カラムで行なった。基質
は基質１ｇにつき２８．６mgのタン白を含み、例１記載
と同じ方法で固定した。試験は６５℃で行なった。次に
各試験の溶離液に含まれるマンノビオース量は上記クロ
マトグラフ法により測定した。反応器の抽出物の標準化
滞留時間の関数（分×タン白mg／ml）としてガラクトマ
ンナンの加水分解％を測定した。図４はこれらの試験結
果を示す。各種試験の実験条件および得た結果は次表に
示す。
【表５】
【００３７】例７ 例５記載の抽出物の約５００回の連続加水分解をＥｕｐ
ｅｒｇｉｔ−Ｃ（商標）に固定したＧａｍａｎａｓｅ
（商標）サスペンジョンを含む撹拌タンク型のタンクで
行なった。７．５mlのＧａｍａｎａｓｅ（商標）および
３０mlの pＨ７の１．２５Ｍリン酸カリウム緩衝液から
成る３７．５mlの溶液を５ｇのＥｕｐｅｒｇｉｔ−Ｃ
（商標）に添加して酵素を固定した。これは環境温度で
７２時間温和に撹拌しながら作用させた。各加水分解は
３０分のサイクルに相当し、その間最初の２分間抽出物
をタンクにポンプで導入し、抽出物は次の２６分間撹拌
しながら反応させ、最後の２分間タンクの底部から加水
分解抽出物をポンプにより吸引した。固定化酵素はタン
クの底部に置いたフィルター（４０μｍ）により保留さ
れ、タンクは６０℃にサーモスタット調整した。各溶離
液の部分は上記ＨＰＴＬＣクロマトグラフ法により分析
した。マンノビオースおよびマンノトリオールに相当す
る染色濃度を測定した。図５は加水分解サイクル数の関
数として生成マンノビオースおよびマンノトリオースの
相対量を示す。固定化β−マンナーゼはコーヒー抽出物
の５００連続加水分解サイクル後６０％以上のその酵素
活性を保留するので、酵素はその活性を特にゆっくり失
なうことが分かる。実験条件は次表に示す。
【表６】
【図面の簡単な説明】
【図１】固定層反応器におけるＤｕｏｌｉｔｅ（商標）
Ｓ−７６１に固定したβ−マンナーゼによるガラクトマ
ンナンの加水分解を示す。ａは滞留時間による加水分解
％を示し、ｂは経時的酵素の相対活性％を示す。
【図２】固定層反応器におけるシリカ球に固定したβ−
マンナーゼによるガラクトマンナンの加水分解を示す。
ａは滞留時間による加水分解％を示し、ｂは経時的酵素
の相対活性％を示す。
【図３】固定層反応器におけるＥｕｐｅｒｇｉｔ−Ｃ
（商標）に固定したβ−マンナーゼによるガラクトマン
ナンの加水分解を示す。ａは滞留時間による加水分解％
を示し、ｂは経時的酵素の相対活性％を示す。
【図４】流動層におけるＥｕｐｅｒｇｉｔ−Ｃ（商標）
に固定したβ−マンナーゼによるコーヒー抽出物の加水
分解を示す。
【図５】撹拌タンクにおけるＥｕｐｅｒｇｉｔ−Ｃ（商
標）に固定したβ−マンナーゼによるコーヒー抽出物の
加水分解を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 シルビアン レイモンド スイス国エパリンゲ，シュマン デ チュ イルリー，９ (72)発明者 ジャン − ルク ソバージュ スイス国ローザンヌ，シュマン ダントル ボア，57

Claims (13)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 液体コーヒー抽出物を２０〜８０℃の温
    度で固定化β−マンナーゼにより加水分解することを特
    徴とする、液体コーヒー抽出物のガラクトマンナンの加
    水分解方法。
  2. 【請求項２】 β−マンナーゼは基質に共有結合するこ
    とにより固定する、請求項１記載の方法。
  3. 【請求項３】 β−マンナーゼは基質に吸着したマンナ
    ーゼの重合化により固定する、請求項１記載の方法。
  4. 【請求項４】 抽出物は３０〜７０℃の温度で加水分解
    する、請求項１記載の方法。
  5. 【請求項５】 β−マンナーゼはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
    ｓ ｎｉｇｅｒから抽出したβ−マンナーゼである、請
    求項１記載の方法。
  6. 【請求項６】 液体コーヒー抽出物は粉砕ローストコー
    ヒーの分割抽出から生じる加圧工程からの抽出物であ
    る、請求項１記載の方法。
  7. 【請求項７】 基質は多孔性基質である、請求項２また
    は３に記載の方法。
  8. 【請求項８】 基質の細孔は２０〜２００ｎｍの寸法を
    有する、請求項７記載の方法。
  9. 【請求項９】 多孔性基質はシリカ、ガラス、アクリル
    ポリマーおよびフェノールポリマーの粒子により形成さ
    れる群から選択する、請求項７記載の方法。
  10. 【請求項１０】 基質に吸着したβ−マンナーゼはグル
    タルアルデヒドにより重合化させる、請求項３記載の方
    法。
  11. 【請求項１１】 液体コーヒー抽出物は固定化β−マン
    ナーゼの固定層を含む反応器で連続的に加水分解する、
    請求項１記載の方法。
  12. 【請求項１２】 液体コーヒー抽出物は固定化β−マン
    ナーゼの流動層を含む反応器で連続的に加水分解する、
    請求項１記載の方法。
  13. 【請求項１３】 液体コーヒー抽出物は固定化β−マン
    ナーゼをサスペンジョンで含むタンクで加水分解する、
    請求項１記載の方法。
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