KR100205278B1 - 고정화 베타-만나나제에 의한 커피 추출물의 가수분해 방법 - Google Patents

Abstract

액체 커피 추출물을 20∼80℃의 온도에서 고정화 β-만나 나제로 가수 분해시키는 것으로 구성되는, 액체 커피 추출물의 갈락토 만난의 가수분해 방법.

Description

고정화 β-만나나제에 의한 커피 추출물의 가수분해 방법

제1a도 및 1b도는 듀올라이트(Duolite)Sβ-761 상에 고정화된 β- 만나나제를 함유하는 고정층(bed) 반응기내에서의 갈락토만난의 가수분해 및 체류시간 (1a)의 함수에따른 가수 분해의 비율 및 시간(1b)의 함수에따른 효소의 상대적 활성도의 표시이다.

제2a도 및 2b도는 실리카 구체상에 고정화된 β-만나나제를 함유하는 고정층 반응기내에서의 갈락토만난의 가수 분해 및 체류시간(2a)의 함수에따른 가수 분해의 비율 및 시간(2b)의 함수에따른 효소의 상대적 활성도의 표시이다.

제3a도 및 3b도는 유페르기트(Eupergit)-C상에 고정화된 β-만나나제를 함유하는 고정층 반응기내에서의 갈락토만난의 가수 분해 및 체류시간(3a)의 함수에따른 가수분해의 비율 및 시간(3b)의 함수에따른 효소의 상대적 활성도의 표시이다.

제4도는 유동층내에서의 유페르기트-C상에 고정화된 β- 만나나제에의한 커피 추출물의 가수분해 및 표준화된 체류시간의 함수에 따른 가수 분해 비율의 표시이다.

제5도는 교반 탱크내에서의 유페르기트-C상에 고정화된 β-만나나제에의한 커피 추출물의 가수분해 및 가수분해 주기수의 함수에따른 생성된 만노사카라이드 비율의 표시이다.

본 발명은 액체 커피 추출물내에 함유되어있는 갈락토만난의 가수 분해 방법에 관한 것이다.

미 합중국 제2 802 920호에는 커피 추출물내에 함유되어있는 갈락토만난을 β-만나나제의 제제로 가수 분해시켜 상기의 추출물을 동결시키는 동안 겔이 형성되는 것을 방지하는 방법이 개시되어 있다.

문헌(Food Review 8/ 9, 37-39(1984))에는 β-만나나제로 액체 커피 추출물의 점성을 감소시켜 고함량의 건조물로 농축시킬 수 있는 산업적 용도가 기재되어 있다.

그러나, 상기의 β-만나나제의 산업적 이용에는 결함이 있다. 예로써, 효소는 1회 사용된후 버려진다. 또한 최종생산물내의 효소의 존재는 바람직하지 못하다.

본 발명은 선행기술의 결점을 개선하기 위한 것이다.

상기의 목적을 위해서, 본 발명의 액체 커피 추출물의 갈락토 만난을 가수 분해시키는 방법에서는 상기의 추출물을 20∼80℃의 온도에서 고정화 β-만나나제로 가수분해 시킨다.

바람직하게는 β-만나나제를 기질위에 공유결합시키거나 또는 기질상에 흡착된 β-만나나제를 중합하여 고정화 시킨다.

그러므로 본 발명은 효소를 절약할 수 있다는 점에서 유익하다.

추가적인 장점은 기질로부터 β-만나나제를 염석시키지 않아도 된다는 점이다.

또하나의 추가적인 장점은 세균 감염이 관찰되지않는 온도에서 작업이 가능하다는 점이다.

본 발명의 놀라운 장점은 β-만나나제가 기질에 공유결합된 후 또는 기질에 흡착된 분자를 중합시킨 후에도 그 효소 활성을 잃지 않는다는 점이다. 마찬가지로 고정화 β-만나나제의 효소 활성은 상대적으로 시간에 대해 일정하다.

마지막으로, 본 발명은 커피 추출물의 점성에도 불구하고 교반 탱크 유형의 반응기 및, 고정화 β-만나나제의 고정층 또는 유동층을 함유하는 반응기에서 커피 추출물을 가수 분해시킬 수 있는 추가적인 장점을 갖는다.

하기의 설명에서, "교반 탱크 유형의 반응기"의 용어는 현탁액 형태의 고정화 β-만나나제를 함유하고 기계적으로 교반되는 시스템을 의미한다.

마찬가지로, "고정화 β-만나나제의 고정층"의 용어는 액체커피 추출물의 연속 공정을 위해 채택한 반응기내에 조밀하게 채워진 기질상에 또는 그 안에 고정화된 β-만나나제를 의미한다.

"고정화 β-만나나제의 유동층"의 용어는 액체커피 추출물의 연속 공정 처리를 위해 채택된 반응기내에 조밀하게 채워진 것은 아니지만 배열된 기질상에 고정화된 β-만나나제를 의미한다. 그런후, 하층부부터 상층부까지 순환하는 커피 추출물의 흐름은 기질 입자들을 현탁상태로 위치시킨다. "유동층 반응기"라고 알려진 이런 유형의 반응기는 현탁액중 고형물을 함유하는 매체의 공정에 특히 유익하다.

"만노비오스" 및 "만노트리오스"의 용어는 각각 만노오스의 다이머 또는 트리머를 의미하며, "만노사카라이드"는 둘이상의 만노오스의 중합체를 의미한다.

β-만나나제의 유니트는 pH 5 및 30℃의 온도에서, 카로브고무로부터 분당 1μ몰의 만노오스에 상당하는 양의 환원당을 방출하는 β-만나나제의 양을 의미한다.

본 발명을 실행하기 위하여, 예컨대 β-만나나제를 공유결합으로 종래 기질의 표면에 고정화 시키거나, 또는 종래 기질의 표면에 미리 흡착된 β-만나나제를 중합하여 고정화시킬 수 있다.

그런후, 예컨대 액체커피 추출물을 40∼70℃의 온도에서 상기의 고정화 효소로 가수분해 시킬 수 있다.

상기의 목적을 위해서, 바람직하게는 세균 또는 균류의 β-만나나제, 특히 아스퍼질러스 니거(Aspergillus niger)에서 추출한 β-만나나제, 특히 가만나제(덴마크 왕국 노보-노르디스크사) 상표로 시판되는 아스퍼질러스 니거의 정제 β-만나나제를 사용하는 것이 바람직하다.

더우기, 액체커피 추출물은 볶은 커피 가루로 충전된 셀(cell)을 통해 추출액을 퍼콜레이터로 끓여냄으로써 수득할 수 있다. 상기 추출은 150 내지 180℃ 사이의 온도의 압력하, 셀의 기저에서 N추출을 수행하는데 최대로 소비되어진 볶은 커피가루 충전물을 함유하는 셀로 역류, 예컨대 물을 도입 시킴으로서 행해질 수 있다. 그런후 상기 추출 셀로부터 수득한 액체 추출물은(N-1)번 사용된 커피 충전물을 함유하는 추출 셀을 통과하도록 한 뒤, 새로운 볶은 커피가루로 막 충전되어진 셀을 통해 상기 액체 추출물을 통과시킨다. 사용된 마지막 추출물은 약 100℃온도의 최종 셀로부터 나온다. 그러므로 가장 많이 소비된 커피를 함유하는 셀에 의해서 형성된 가압단계 및 가장 적게 소비된 커피를 함유하는 셀에 의해서 형성된 대기압 단계로 구분하는 것이 가능하다.

또한 액체커피 추출물은 가압 단계의 볶은 커피가루로 충전된 셀을 통해 추출액을 퍼콜레이터로 끓여 냄으로써 수득할 수 있다. 다음 설명에서 사용되어질, "분할 추출"이라 알려진 본 공정에서, 2가지의 추출액이 사용되고, 추출 셀은 가압 단계 및 대기압 단계로 나눠지며, 각단계는 그 자체의 추출액으로 추출된다. 대기압 단계내에 함유되어 있는 커피는 적당한 온도 및 압력 조건에서 1차 추출액으로 추출하는 반면, 가압 단계내에 함유되어있는 커피는 더 높은 압력 및 온도에서 2차 추출액으로 추출한다. 따라서 상기의 공정은 2개의 상이한 액체 추출물을 생산하는데, 이는 예컨대 가압 단계로부터 수득한 추출물을 부분 증발시킨후, 상호 배합하고 나서 종래의 방법에 의해 분말로 전환시킬 수 있다.

따라서 본 발명에서는, 가압 단계의 추출물이 부분 증발되기 전에, 특히 볶은 커피가루의 분할 추출에서, 가압단게로부터 생성된 그 추출물을 사용할 수 있다.

예로써, 가압 단계로부터 수득한 추출물을 사용하는 것이 바람직하다고 유럽 특허 제0 538 512 호에 기재되어 있다.

또한, 본 발명에 따르는 기질은 다공성 기질, 특히 20∼200㎚의 크기의 세공을 갖는 기질일 수 있다.

특히, 다공성 기질은 예를 들어 실리카, 유리, 아크릴계 중합체, 특히 아크릴계 중합체 유페르기트-C(독일 공화국 롬사) 및 페놀계 중합체, 특히 페놀-포름알데히드 수지 듀올라이트(미합중국 수펠코사), 특히 수지 듀올라이트S-761의 입자로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.

바람직하게는, β-만나나제를 공유 결합으로 아크릴계 중합체 유페르기트-C의 표면에 고정화 시킨다. 아크릴계 중합체 유페르기트-C은 β-만나나제를 고정화 시킬수 있는 에폭시환을 갖는 옥시란 기를 갖는다. 그러므로 예를 들면, 유페르기트-C의 g당 1900유니트 이상의 β-만나나제를 고정화 시키는 것이 가능하다.

바람직하게는, 페놀계 수지 듀올라이트입자의 표면에 흡착된 β-만나나제를 중합시켜 β-만나나제를 고정화 시킬 수 있다. 예로써, 중합체로서 글루타르알데히드를 사용할 수 있다.

본 발명의 바람직한 첫번째 실행 방법으로는, 기질에 공유 결합시키거나 또는 기질에 흡착된 만나나제의 중합에 의해 고정화된 β-만나나제를 사용하여, 교반 탱크 유형의 반응기내에서 커피 추출물을 가수분해 시키는 것이다. 이 시스템은 자동화되어 하기의 3단계로 반-연속방법으로 작동될 수 있다. 우선 첫째로, 공정 처리할 커피추출물로 탱크를 채운후 기계적 교반으로 가수 분해시킨 다음, 소정의 시간이 경과한후 탱크를 비운다. 반응기내의 효소 보유는 탱크의 하층부에 여과기를 배치함으로서 가능하다. 예컨대, 이 여과기는 40㎛이상 직경의 모든 입자를 보유할 수 있다.

상기의 가수 분해방법에서, 기질에 공유 결합으로 고정화된 β-만나나제는 커피 추출물의 500주기 이상의 연속 가수 분해후에도 그 효소 활성을 60% 이상 보존하기때문에 양호한 안정성을 갖는 것을 알수 있다.

본 발명의 바람직한 두번째 실행 방법으로는, 기질상에 공유 결합시키거나 또는 기질상에 흡착된 β-만나나제를 중합하여 고정된 β-만나나제의 고정층을 함유하는 반응기내에서 액체 커피 추출물을 연속적으로 가수분해시킨다. 상기의 방법을 사용하는 경우, 고정화 β-만나나제는 20시간 이상의 연속 가수분해 후에도 80% 이상의 그 효소 활성을 보존하기 때문에 양호한 안정성을 갖는다.

본 발명의 바람직한 세번째 실행 방법으로는, 기질상에 공유결합으로 고정화된 β-만나나제의 유동층을 함유하는 반응기내에서 액체 커피 추출물을 연속 가수분해 시킨다.

하기의 실시예는 본 발명의 방법을 예시한다. 이런 실시예에서는 가만나제의 상표로 시판되는 단백질 g당 65000 유니트의 특정활성을 갖는 β-만나나제를 사용하며, 이런 실시예의 몇몇에서는 모델 기질로서, 증류수중 용해성 커피의 2% 혼합물 또는 카로브 고무로 부터 제조된 갈락토만난 용액을 사용할 수 있는데, 이는 임의의 커피 추출물로 수득할 수 있는 결과의 매우 양호한 예시를 제공한다.

실시예에 앞서 추출물의 크로마토그래피 분석이 선행한다.

HPTLC 크로마토그래피

액체 커피 추출물내에 들어있는 올리고사카라이드는 이 추출물의 예비 정화를 수행할 필요없이, 크로마토그래피로 정성 및 정량한다. 따라서, 이 방법은 다른 시험에서, 예컨대 갈락토만난의 가수 분해의 효소 반응 속도 및 가수 분해된 커피 추출물의 잔류 효소 활성도의 측정등에서 사용할 수 있다.

상기의 목적을 위해서, HPTLC 크로마토그래피용 실리카 플레이트 "실리카 겔 60"(메르크 5631/5641)을 사용한다. 건조커피 추출물 80㎍의 상당량을 침전시키고 클로로포름, 아세트산 및 물을 30/35/11의 비율로 함유하는 용매로 3번에 걸친 연속 전개를 행한다. 플레이트는 4㎖의 아닐린, 4g의 디페닐아민, 200㎖의 아세톤 및 85%의 인산 30ml을 함유하는 반응제와 함계 110℃에서 30분간 노출시킨다.

따라서, 추출물내에 들어있는 올리고사카라이드, 예컨대 유리 만노오스, 만노비오스, 및 8보다 낮은 중합도를 갖는 기타 다른 만노사카라이드를 정성하는 것이 가능하다.

또한, 추출물내의 다양한 올리고사카라이드의 함량은, 추출물의 올리고사카라이드에 해당하는 플레이트상의 염색 밀도와 알려진 농도에서 플레이트상에 침전된 올리고사카라이드에 해다하는 염색 농도를 관련시켜 측정하는 것이 가능하다. 또한 효소로 더이상 분해할 수 없는 반응 최종 생성물인 만노비오스 및 만노트리오스만 남는경우 갈락토만난의 100%의 가수 분해가 달성 되었다고 생각할 수 있다.

[실시예 1]

하기와 같이, 페놀계 중합체내에서 β-만나나제를 흡착 및 중합으로 고정화시킨다.

대략 60㎚크기의 세공을 갖는 수지 듀올라이트-761(미합중국 수펠코사)을 사용한다. 이 수지를 선별하여 0.2-0.4mm의 입자를 수득하고, 0.5N NaOH로 1시간동안 공정 처리한후 물로 세척하고, 그런다음 0.25N HCl로 30분간 공정 처리한후 최종적으로 증류수로 세척하여 pH 4로 만든다. 5㎖의 가만나제및 pH 6의 0.1M 소듐 포스페이트 버퍼 20㎖을 함유하는 용액 25㎖를 공정 처리된 수지 5g에 첨가하고, 가만나제를 22℃에서 12시간 동안 부드러운 교반으로 수지상에 흡착되도록 방치한다. 그런후 제제를 증류수로 세척하고, 흡착된 효소를 22℃에서 3시간 동안 2.5% 글루타르알데히드의 용액으로 중합한후 최종적으로 증류수로 세척한다.

또한 갈락토만난의 용액을 pH 5의 0.1M 아세테이트 버퍼 1ℓ 내에서 카로브 고무 3g을 80℃ 까지 가열하여 제조하고 수용성 분획을 다음의 시험에 사용한다.

그런후 고정화 효소를 종래의 고정층 반응기에서 시험한다. 이 반응기는 하나의 관형 유리체 및 유리체의 각 말단에서 수평면을 유지하는 두개의 나일론 여과기(70㎛)를 포함한다. 반응기를 30℃의 수조에 침지시키고 갈락토만난의 용액을 종래의 연동 펌프로 펌핑한후 반응기를 통과시키기전에 30℃까지 가열한다.

우선 첫째로, 갈락토만난의 용액을 각기 다른 속도로 반응기로 펌핑한다. 그런후 종래의 방법을 사용하여 반응기내의 추출물의 체류 시간(RT)의 함수에 따른 용출액내에 발생하는 환원당의 양을 측정한다. 그런다음 반응기내의 추출물의 체류시간에 따른 갈락토 만난의 가수분해 비율을 측정한다. 생성된 환원당의 양이, 따로 분리된 시험에서 비-고정화된 가만나제로 기질을 완전히 가수분해시켜 수득한 환원당의 양과 동일한 경우 100% 율의 가수분해가 달성되었다고 생각할 수 있다. 결과를 제1도의 1a에 나타내었다.

두번째로, 갈락토만난의 용액을 연속적으로 반응기로 보낸다. 실험의 초기에서 100% 미만의 가수 분해율을 보이는 체류 시간(RT)을 상기의 목적을 위해 선택한다. 그런후 용출액내에 발생하는 환원당의 양을 규칙적으로 측정한다. 환원당의 양이 효소 활성의 상실로 인해 시간의 함수따라 감소함을 알수있다. 수득한 환원당의 양과 시험 초기에 존재하는 환원당의 양을 관련시켜, 시간의 함수에 따라 효소의 상대적 활성도(%)를 측정하는 것은 상기의 이유 때문이다. 결과를 제1b에 나타내었다.

하기의 표는 기질의 몇몇 특성들을 나타낸다.

[실시예 2]

하기와같이, β-만나나제를 0.1-0.3㎜의 직경 및 약 60㎚크기의 세공을 갖는 실리카 구체 X-030 LS(프랑스 공화국 세프라코사) 상에 공유결합으로 고정화 시킨다.

H.H. Weetall 문헌 Methods in Enz., 44, 135-148, 1976에서와 같이 수성 담체중 실란화 방법에 개시되어 있는 방법에따라 γ-아미노프로필트리에톡시실란과 실리카 구체를 예비 결합 시킨다. pH 7의 0.1M 소듐 포스페이트 버퍼중의 2.5% 글루타르알데히드 용액 50㎖로 처리한 실리카 구체 5g을 1시간동안 진공에서 처리한후 2시간동안 대기압에서 처리한다. 그런후 입자를 증류수, 0.5M NaCl의 용액 및 pH 6의 0.1M 소듐 포스페이트 버퍼로 연속적으로 세척한다. 그런후 5㎖의 가만나제및 pH 6의 소듐 포스페이트 버퍼 20㎖를 함유하는 용액 25㎖를 활성화된 기질에 첨가한후 4℃의 헬륨 대기하에서 12시간동안 반응하도록 방치하여 둔다. 구체를 최종적으로 증류수로 충분히 세척하후 pH 6의 0.1M 소듐 포스페이트 버퍼로 세척한다.

그런후, 이 제제를 고정층 반응기내에서 실시예 1에서와 같은 방법으로 시험한다. 그다음 시간의 함수에 따른 효소의 상대적 활성도(제2도. 2b) 뿐만아니라 반응기내의 기질의 체류시간의 함수에 따른 갈락토만난의 가수 분해 비율을 측정한다(제2도. 2a).

하기의 표는 사용된 기질의 몇몇의 특성을 예시한다.

[실시예 3]

하기와 같이 β-만나나제를 약 35㎚ 크기의 세공 및 반응성 옥시란기를 갖는 유페르기트-C아크릴계 중합체 구체(독일연방 공화국 롬사)상에 공유 결합으로 고정화 시킨다.

7.5㎖의 가만나제및 pH 7의 0.5M 포타슘 포스페이트 버퍼 30㎖을 함유하는 용액 37.5㎖을 5g의 유페르기트-C에 첨가하고 주위 온도에서 48시간 동안 부드럽게 교반하면서 반응하도록 방치하여둔다. 그런후 제제를 pH 7의 0.5M 포타슘 포스페이트 버퍼로 세척한다.

그런후 이 제제를 실시예 1에 기재된 방법과 동일한 방법으로 고정층 반응기내에서 시험한다. 따라서 시간의 함수에 따른 효소의 상대적 활성도(제3도. 3b) 뿐만아니라 반응기내의 기질의 체류 시간의 함수에 따른 갈락토만난의 가수 분해율(제3도. 3a)를 측정하는 것이 가능하다. 16시간의 계속적인 가수 분해후에도 고정화 β-만나나제는 그 효소 활성을 80% 이상 보유하기때문에 효소의 안정성은 이 기질에 대해 특히 안정한 것을 알 수 있다.

또한 기질로부터의 효소의 염석이 시간에 따른 용출액내에서 관찰되지 않는 것을 볼 수 있다. 용출액을 30℃ 온도에서 수 시간 동안 인큐베이션하고 환원당의 함량 변화를 측정하는 경우, 변화는 없다.

하기의 표는 사용된 기질의 몇몇의 특성을 예시한다.

[실시예 4]

약 70㎚ 크기의 세공을 가지며 또한 아미노프로필기(시그마 G5019)를 함유하고, 실시예 2의 실리카 구체의 경우와 같은 방법으로 고정된 다양한 세공을 갖는 종래의 유리 입자 5g 상에 공유결합으로 고정화를 행한다.

그런후 이 제제를 증류수증의 2%의 종래의 수용성 커피 추출물(네스카페, 네슬레사의)을 사용하여 실시예 1의 고정층 반응기내에서 시험한다.

커피 추출물의 유동률을 조정하고 반응기로부터 생성되는 추출물을 HPTLC로 분석한다. 64 내지 81초의 체류 시간동안 반응 생성물은 주로 만노비오스 및 만노트리오스로 구성되어 있음을 알수있다. 4 및 5개의 만노오스를 함유하는 소량의 올리고머를 볼 수 있다. 체류시간이 105초 까지 증가하는 경우, 추출물내에 존재하는 유일한 올리고사카라이드는 만노비오스 및 만노트리오스이며 이는 갈락토만난의 완전한 가수분해를 의미한다.

하기의 표는 사용된 기질의 몇몇의 특성을 예시한다.

[실시예 5]

유럽 특허 제0 538 512 호에 개시되어 있듯이, 볶은 커피가루의 분할 추출에서 기인한 가압 단계로부터 형성된 액체 커피 추출물을 사용하여 50℃로 유지되는 실시예 1의 고정층 반응기에 연속적으로 공급한다.

반응기는 실시예 3에 기재된 방법으로 유페르기트-C에 고정화된가만나제를 함유한다. 유동률을 조정하여 체류 시간을 8분으로 조절한다. 시료를 48시간 동안 규칙적으로 채취하여, HPTLC 크로마토그래피의해 생성된 올리고사카라이드를 평가한다.

공정 처리된 추출물의 유일한 올리고사카라이드가 만노비오스 및 만노트리오스이기 때문에 추출물의 갈락토만난은 완전히 가수 분해되었다.

[실시예 6]

실시예 5에 기재된 커피 추출물의 여러 가수 분해를 유페르기트-C상에 고정화된 가만나제의 유동화 상을 함유하는 종래의 수직컬럼내에서 행한다.

기질은 기질 g당 단백질 28.6㎎을 함유하며, 실시예 3에 기재된 방법과 동일한 방법으로 고정화 된다. 시험을 65℃에서 행한다.

그런후 각 시험의 용출액내에 존재하는 만노비오스의 양을 전술한 크로마토그래피 방법으로 측정한다. 반응기내의 추출물의 표준화 체류시간의 함수에따른 갈락토만난의 가수 분해율(분×단백질의 ㎎/㎖)을 측정한다. 이 시험의 결과를 제4도에 나타내었다.

각종 시험의 실험 조건 및 수득한 결과를 하기의 표에 기재하였다.

[실시예 7]

실시예 5의 추출물의 약 500번 연속 가수 분해를 유페르기트-C상에 고정화된 가만나제의 현탁액을 함유하는 교반 탱크 유형의 탱크내에서 행한다.

7.5㎖의 가만나제및 pH 7의 1.25M 포타슘 포스페이트 버퍼 30㎖을 함유하는 용액 37.5㎖을 5g의 유페르기트-C에 첨가하여 효소를 고정화 시킨다. 이것을 주위 온도에서 72시간 동안 부드럽게 교반하면서 반응하도록 방치하여 둔다.

각각의 가수 분해는, 최초 2분 동안 펌프로 추출물을 탱크로 도입한후 다음 26분 동안 교반으로 반응하도록 하면서 추출물을 방치하고 최종 2분 동안 탱크의 기저로부터 가수 분해된 추출물을 펌프로 흡입하는 30분의 1 주기에 상당한다. 탱크의 기저에 설치한 여과기(40㎛)로 고정화 효소를 보유하고, 탱크를 60℃로 자동 온도 조절하여 각각의 용출물의 분획을 전술한 HPTLC 크로마토그래피 방법으로 분석한다. 그런후 만노비오스 및 만노트리오스에 해당하는 염색의 밀도를 측정한다.

제5도에 가수 분해 주기수의 함수에 따른 생성된 만노비오스 및 만노트리오스의 상대적 양을 나타내었다. 고정화 β-만나나제가 커피 추출물의 500번의 연속 가수 분해주기 후에도 그 효소 활성을 60%이상 보유하기 때문에, 효소는 그의 효소 활성을 특히 서서히 상실하는 것을 알수 있다.

실험 조건을 하기의 표에 나타내었다.

Claims (13)

1. 액체 커피 추출물을 20∼80℃의 온도에서 고정화 β-만나나제로 가수 분해시키는 것으로 구성되는, 액체 커피 추출물의 갈락토만난의 가수 분해 방법.
2. 제1항에 있어서, β-만나나제를 기질에 공유 결합으로 고정화시키는 방법.
3. 제1항에 있어서, β-만나나제를 기질에 흡착된 만나제를 중합하여 고정화시키는 방법.
4. 제1항에 있어서, 상기 액체 커피 추출물을 30∼70℃ 온도에서 가수 분해하는 방법.
5. 제1항에 있어서, β-만나나제가 아스퍼질러스 니거(Aspergillus niger)로부터 추출된 β-만나나제인 방법.
6. 제1항에 있어서, 액체 커피 추출물이 볶은 커피가루(Ground roast coffee)의 분할 추출에서 가압 단계로부터 생성되는 추출물인 방법.
7. 제2항 또는 제3항에 있어서, 기질이 다공성 기질인 방법.
8. 제7항에 있어서, 기질의 세공 크기가 20∼200㎚인 방법.
9. 제7항에 있어서, 다공성 기질이 실리카, 유리, 아크릴계 중합체 및 페놀계 중합체의 입자로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
10. 제3항에 있어서, 기질에 흡착된 β-만나나제를 글루타르알데히드로 중합하는 방법.
11. 제1항에 있어서, 액체 커피 추출물을 고정화 β-만나나제의 고정층을 함유하는 반응기내에서 연속적으로 가수 분해하는 방법.
12. 제1항에 있어서, 액체 커피 추출물을 고정화 β-만나나제의 유동층을 함유하는 반응기내에서 연속적으로 가수 분해하는 방법.
13. 제1항에 있어서, 액체 커피 추출물을 현탁액 상태의 고정화 β-만나나제를 함유하는 탱크내에서 가수분해하는 방법.