JPH07265059A - ボツリオコッカス属純化株の製造法と純化株 - Google Patents
ボツリオコッカス属純化株の製造法と純化株Info
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- JPH07265059A JPH07265059A JP6063481A JP6348194A JPH07265059A JP H07265059 A JPH07265059 A JP H07265059A JP 6063481 A JP6063481 A JP 6063481A JP 6348194 A JP6348194 A JP 6348194A JP H07265059 A JPH07265059 A JP H07265059A
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- algae
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/20—Air quality improvement or preservation, e.g. vehicle emission control or emission reduction by using catalytic converters
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Treating Waste Gases (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 ボツリオコッカス属藻類の純化株を簡便な操
作で短期間に製造することができる方法を提供する 【構成】 ボツリオコッカス属に属する藻類とこの藻類
以外の微生物とを含む混合物を次亜塩素酸又はその塩の
水溶液に懸濁させ、この混合物を平板培地に塗布して培
養することにより前記藻類のコロニーを形成させ、この
コロニーを実体顕微鏡観察下で前記平板培地からボツリ
オコッカス属に属する藻類純化株を採取する。
作で短期間に製造することができる方法を提供する 【構成】 ボツリオコッカス属に属する藻類とこの藻類
以外の微生物とを含む混合物を次亜塩素酸又はその塩の
水溶液に懸濁させ、この混合物を平板培地に塗布して培
養することにより前記藻類のコロニーを形成させ、この
コロニーを実体顕微鏡観察下で前記平板培地からボツリ
オコッカス属に属する藻類純化株を採取する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ボツリオコッカス属に
属する藻類の純化株とその製造法に関し、詳しくは、光
エネルギーを利用して二酸化炭素を固定し炭化水素を生
産するボツリオコッカス属に属する藻類純化株の製造法
に関する。
属する藻類の純化株とその製造法に関し、詳しくは、光
エネルギーを利用して二酸化炭素を固定し炭化水素を生
産するボツリオコッカス属に属する藻類純化株の製造法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】ボツリオコッカス（Botryococcus）属に
属する藻類（以下、「ボツリオコッカス属藻類」とい
う）は、光エネルギーを利用して二酸化炭素を固定し、
炭化水素を生産する微細藻類である。近年、化石エネル
ギーの枯渇が懸念されており、光エネルギーの活用が重
要となっている状況においては、ボツリオコッカス属藻
類による二酸化炭素固定は有効なエネルギー獲得法であ
ると考えられている。
属する藻類（以下、「ボツリオコッカス属藻類」とい
う）は、光エネルギーを利用して二酸化炭素を固定し、
炭化水素を生産する微細藻類である。近年、化石エネル
ギーの枯渇が懸念されており、光エネルギーの活用が重
要となっている状況においては、ボツリオコッカス属藻
類による二酸化炭素固定は有効なエネルギー獲得法であ
ると考えられている。
【０００３】また、化石エネルギーの燃焼等に伴う二酸
化炭素量の増加による地球温暖化も問題となっており、
二酸化炭素を炭化水素に変換する能力を有するボツリオ
コッカス属藻類の利用は、光エネルギーの利用のみでな
く二酸化炭素量の減少という面からも大きな期待がかけ
られている。
化炭素量の増加による地球温暖化も問題となっており、
二酸化炭素を炭化水素に変換する能力を有するボツリオ
コッカス属藻類の利用は、光エネルギーの利用のみでな
く二酸化炭素量の減少という面からも大きな期待がかけ
られている。
【０００４】しかしながら、ボツリオコッカス属藻類
は、純化株を得ることは困難であるといわれており、そ
のためにボツリオコッカス属藻類の培養は培地の種類や
培養条件によって再現性に乏しく、その利用を困難なも
のとしている。
は、純化株を得ることは困難であるといわれており、そ
のためにボツリオコッカス属藻類の培養は培地の種類や
培養条件によって再現性に乏しく、その利用を困難なも
のとしている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】従来、ボツリオコッカ
ス属藻類を純化する方法として、いわゆるパスツールピ
ペット洗浄法、すなわちボツリオコッカス属藻類の培養
液から、顕微鏡下でパスツールピペットを用いて１コロ
ニーづつ、滅菌した培養液に移す操作を繰返して純化株
を得る方法が行われている。
ス属藻類を純化する方法として、いわゆるパスツールピ
ペット洗浄法、すなわちボツリオコッカス属藻類の培養
液から、顕微鏡下でパスツールピペットを用いて１コロ
ニーづつ、滅菌した培養液に移す操作を繰返して純化株
を得る方法が行われている。
【０００６】しかしながら、この方法は煩雑であり、ま
たボツリオコッカス属藻類のコロニーに雑菌が付着した
場合には純化株を得ることは困難である。さらに、上記
方法では得られるボツリオコッカス属藻類の藻体量が少
なく、その後の増殖に長期間を要するという問題があ
る。
たボツリオコッカス属藻類のコロニーに雑菌が付着した
場合には純化株を得ることは困難である。さらに、上記
方法では得られるボツリオコッカス属藻類の藻体量が少
なく、その後の増殖に長期間を要するという問題があ
る。
【０００７】本発明はかかる観点からなされたものであ
り、再現性が高く、長期間安定したボツリオコッカス属
藻類の培養を可能とするために、ボツリオコッカス属藻
類の純化株を簡便な操作で短期間に得ることができる方
法を提供することを課題とする。
り、再現性が高く、長期間安定したボツリオコッカス属
藻類の培養を可能とするために、ボツリオコッカス属藻
類の純化株を簡便な操作で短期間に得ることができる方
法を提供することを課題とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決するために鋭意検討を行った結果、ボツリオコッカ
ス属藻類を有効塩素で処理し、これを平板培養して生じ
た単一コロニーを採取することにより、ボツリオコッカ
ス属藻類の純化株が得られることを見出し、本発明に至
った。
解決するために鋭意検討を行った結果、ボツリオコッカ
ス属藻類を有効塩素で処理し、これを平板培養して生じ
た単一コロニーを採取することにより、ボツリオコッカ
ス属藻類の純化株が得られることを見出し、本発明に至
った。
【０００９】すなわち本発明は、ボツリオコッカス属藻
類とこの藻類以外の微生物とを含む混合物に有効塩素を
作用させ、この混合物を平板培地に塗布して培養するこ
とにより前記藻類のコロニーを形成させ、このコロニー
を平板培地から採取することを特徴とするボツリオコッ
カス属藻類純化株の製造法である。
類とこの藻類以外の微生物とを含む混合物に有効塩素を
作用させ、この混合物を平板培地に塗布して培養するこ
とにより前記藻類のコロニーを形成させ、このコロニー
を平板培地から採取することを特徴とするボツリオコッ
カス属藻類純化株の製造法である。
【００１０】また本願発明は、その一態様として上記方
法において、ボツリオコッカス属藻類とこの藻類以外の
微生物とを含む混合物を次亜塩素酸又はその塩の水溶液
に懸濁させることにより、前記混合物に有効塩素を作用
させることを特徴とするボツリオコッカス属藻類純化株
の製造法、さらに、平板培地からのコロニーの採取を実
体顕微鏡で観察しながら行うことを特徴とするボツリオ
コッカス属藻類純化株の製造法を提供する。
法において、ボツリオコッカス属藻類とこの藻類以外の
微生物とを含む混合物を次亜塩素酸又はその塩の水溶液
に懸濁させることにより、前記混合物に有効塩素を作用
させることを特徴とするボツリオコッカス属藻類純化株
の製造法、さらに、平板培地からのコロニーの採取を実
体顕微鏡で観察しながら行うことを特徴とするボツリオ
コッカス属藻類純化株の製造法を提供する。
【００１１】さらに本願発明は、上記の方法により純化
されたボツリオコッカス属藻類を培養することを特徴と
するボツリオコッカス属藻類培養物の製造法、及びボツ
リオコッカス属藻類以外の微生物を含まないボツリオコ
ッカス・ブラウニー ＣＣＡＰ ８０７／２純化株を提供
する。
されたボツリオコッカス属藻類を培養することを特徴と
するボツリオコッカス属藻類培養物の製造法、及びボツ
リオコッカス属藻類以外の微生物を含まないボツリオコ
ッカス・ブラウニー ＣＣＡＰ ８０７／２純化株を提供
する。
【００１２】以下、本発明を詳細に説明する。本発明が
適用されるボツリオコッカス属藻類として特に制限はな
いが、例えばボツリオコッカス・ブラウニー（Botryoco
ccus braunii）等が挙げられる。ボツリオコッカス属藻
類は、池、湖等からプランクトンネットにより採取する
こともできるが、Culture collection of Algae and Pr
otozoaなどの菌株寄託機関から入手することもできる。
このような株としては、ボツリオコッカス・ブラウニー
ＣＣＡＰ ８０７／１、ボツリオコッカス・ブラウニー
ＣＣＡＰ ８０７／２、ボツリオコッカス・ブラウニー
ＵＴＥＸＬＢ５７２などが例示される。これらは、いず
れもボツリオコッカス属藻類以外の細菌あるいはカビ等
の微生物が混在している。尚、ボツリオコッカス・ブラ
ウニー ＣＣＡＰ ８０７／２の純化株は知られていな
い。
適用されるボツリオコッカス属藻類として特に制限はな
いが、例えばボツリオコッカス・ブラウニー（Botryoco
ccus braunii）等が挙げられる。ボツリオコッカス属藻
類は、池、湖等からプランクトンネットにより採取する
こともできるが、Culture collection of Algae and Pr
otozoaなどの菌株寄託機関から入手することもできる。
このような株としては、ボツリオコッカス・ブラウニー
ＣＣＡＰ ８０７／１、ボツリオコッカス・ブラウニー
ＣＣＡＰ ８０７／２、ボツリオコッカス・ブラウニー
ＵＴＥＸＬＢ５７２などが例示される。これらは、いず
れもボツリオコッカス属藻類以外の細菌あるいはカビ等
の微生物が混在している。尚、ボツリオコッカス・ブラ
ウニー ＣＣＡＰ ８０７／２の純化株は知られていな
い。
【００１３】次に、ボツリオコッカス属藻類とこの藻類
以外の微生物とを含む混合物からボツリオコッカス属藻
類を純化する方法を説明する。まず、前記混合物に有効
塩素を作用させ、ボツリオコッカス属藻類以外の微生物
を殺菌する。処理するボツリオコッカス藻類は、有効塩
素処理及びその後の処理をしやすくするために、予め適
当な培地で培養して藻体量を増やしておいてもよい。培
地としては、ＣＨＵ培地、ＪＭ培地、ＭＤＭ培地など無
機培地が挙げられるが、ボツリオコッカス属藻類の培養
に適したものであれば、特に制限されない。また、有効
塩素で処理するのは培養液そのものでもよく、培養液か
ら遠心分離等により得た藻体又は濃縮液でもよい。
以外の微生物とを含む混合物からボツリオコッカス属藻
類を純化する方法を説明する。まず、前記混合物に有効
塩素を作用させ、ボツリオコッカス属藻類以外の微生物
を殺菌する。処理するボツリオコッカス藻類は、有効塩
素処理及びその後の処理をしやすくするために、予め適
当な培地で培養して藻体量を増やしておいてもよい。培
地としては、ＣＨＵ培地、ＪＭ培地、ＭＤＭ培地など無
機培地が挙げられるが、ボツリオコッカス属藻類の培養
に適したものであれば、特に制限されない。また、有効
塩素で処理するのは培養液そのものでもよく、培養液か
ら遠心分離等により得た藻体又は濃縮液でもよい。
【００１４】一方、ボツリオコッカス属藻類を含む混合
物に有効塩素を作用させるには、例えば、次亜塩素酸水
溶液、または次亜塩素酸ナトリウムもしくは次亜塩素酸
カルシウム等の次亜塩素酸塩の水溶液（以下、単に「次
亜塩素酸」という）に前記混合物を懸濁させる方法が挙
げられる。ボツリオコッカス属藻類の処理に用いる次亜
塩素酸の濃度は、通常、有効塩素の濃度として０．０１
〜１０００ｐｐｍ、好ましくは０．１〜１００ｐｐｍ、
さらに好ましくは１〜２０ｐｐｍである。この濃度が
０．０１ｐｐｍよりも低いと雑菌が十分に殺菌されない
ことがあり、また、１０００ｐｐｍを越えるとボツリオ
コッカス属藻類自体が死滅することがある。したがっ
て、上記範囲が好ましいが、最適な濃度はボツリオコッ
カス属藻類の種類、次亜塩素酸の処理時間等によっても
異なるので、処理濃度を変えて予備実験を行うことが好
ましい。
物に有効塩素を作用させるには、例えば、次亜塩素酸水
溶液、または次亜塩素酸ナトリウムもしくは次亜塩素酸
カルシウム等の次亜塩素酸塩の水溶液（以下、単に「次
亜塩素酸」という）に前記混合物を懸濁させる方法が挙
げられる。ボツリオコッカス属藻類の処理に用いる次亜
塩素酸の濃度は、通常、有効塩素の濃度として０．０１
〜１０００ｐｐｍ、好ましくは０．１〜１００ｐｐｍ、
さらに好ましくは１〜２０ｐｐｍである。この濃度が
０．０１ｐｐｍよりも低いと雑菌が十分に殺菌されない
ことがあり、また、１０００ｐｐｍを越えるとボツリオ
コッカス属藻類自体が死滅することがある。したがっ
て、上記範囲が好ましいが、最適な濃度はボツリオコッ
カス属藻類の種類、次亜塩素酸の処理時間等によっても
異なるので、処理濃度を変えて予備実験を行うことが好
ましい。
【００１５】ボツリオコッカス属藻類の培養液を次亜塩
素酸で処理する場合には、次亜塩素酸を上記濃度となる
ように加えればよく、また、藻体を次亜塩素酸で処理す
る場合には、上記濃度となるように希釈した次亜塩素酸
水溶液あるいは培養液で希釈した次亜塩素酸に藻体を懸
濁させればよい。
素酸で処理する場合には、次亜塩素酸を上記濃度となる
ように加えればよく、また、藻体を次亜塩素酸で処理す
る場合には、上記濃度となるように希釈した次亜塩素酸
水溶液あるいは培養液で希釈した次亜塩素酸に藻体を懸
濁させればよい。
【００１６】上記のようにしてボツリオコッカス属藻類
を次亜塩素酸で処理した後に、藻体を濾過又は遠心分離
等により分離し、培養液又は緩衝液に懸濁する操作を繰
り返すことなどによって洗浄し、あるいはチオ硫酸ナト
リウム等を加えること等により有効塩素を除去すること
が好ましい。加えるチオ硫酸ナトリウムの量は、加えた
次亜塩素酸から生じる有効塩素の全量を除去するのに必
要な量であることが好ましい。
を次亜塩素酸で処理した後に、藻体を濾過又は遠心分離
等により分離し、培養液又は緩衝液に懸濁する操作を繰
り返すことなどによって洗浄し、あるいはチオ硫酸ナト
リウム等を加えること等により有効塩素を除去すること
が好ましい。加えるチオ硫酸ナトリウムの量は、加えた
次亜塩素酸から生じる有効塩素の全量を除去するのに必
要な量であることが好ましい。
【００１７】続いて、次亜塩素酸処理を行ったボツリオ
コッカス属藻類を、ボツリオコッカス属藻類の培養に適
した平板培地、例えば、グルコース等の炭素源を加えた
ＣＨＵ培地、ＪＭ培地、ＭＤＭ培地などの無機平板培地
に塗布して培養を行う。ここで用いる培地には、ボツリ
オコッカス属藻類の生育に影響を与えない抗生物質等を
添加してもよい。また、平板培地に塗布する際に、塗布
量が多すぎると、平板培地に生じるコロニーが近接し、
コロニーを分離しにくくなるので、数段階で希釈したも
のを塗布するとよい。
コッカス属藻類を、ボツリオコッカス属藻類の培養に適
した平板培地、例えば、グルコース等の炭素源を加えた
ＣＨＵ培地、ＪＭ培地、ＭＤＭ培地などの無機平板培地
に塗布して培養を行う。ここで用いる培地には、ボツリ
オコッカス属藻類の生育に影響を与えない抗生物質等を
添加してもよい。また、平板培地に塗布する際に、塗布
量が多すぎると、平板培地に生じるコロニーが近接し、
コロニーを分離しにくくなるので、数段階で希釈したも
のを塗布するとよい。
【００１８】培養は、増殖を早めるために、蛍光灯等を
用いて光照射下で行うことが好ましいが、照射照度が高
すぎるとかえって増殖が阻害されるので、通常０〜１０
０μＥ／ｍ2・ｓ、好ましくは５〜３０μＥ／ｍ2・ｓで
照射するのがよい。また、培養温度としては、通常０〜
８０℃、好ましくは１５〜３５℃がよい。
用いて光照射下で行うことが好ましいが、照射照度が高
すぎるとかえって増殖が阻害されるので、通常０〜１０
０μＥ／ｍ2・ｓ、好ましくは５〜３０μＥ／ｍ2・ｓで
照射するのがよい。また、培養温度としては、通常０〜
８０℃、好ましくは１５〜３５℃がよい。
【００１９】培養は、通常１〜６０日、好ましくは１〜
３０日行う。培養中に生じるコロニーが、残存する雑菌
のコロニーであるか、あるいは単一のボツリオコッカス
属藻類のコロニーであるかを判明するにはある程度の培
養期間が必要であり、培養期間が長すぎると雑菌が繁茂
するので、上記期間内で培養するのが好ましいが、培地
や培養条件、雑菌の残存の程度等によっても異なるの
で、培養中にコロニーを観察し、適宜培養を打ち切れば
よい。
３０日行う。培養中に生じるコロニーが、残存する雑菌
のコロニーであるか、あるいは単一のボツリオコッカス
属藻類のコロニーであるかを判明するにはある程度の培
養期間が必要であり、培養期間が長すぎると雑菌が繁茂
するので、上記期間内で培養するのが好ましいが、培地
や培養条件、雑菌の残存の程度等によっても異なるの
で、培養中にコロニーを観察し、適宜培養を打ち切れば
よい。
【００２０】上記のようにして平板培地上に生じたボツ
リオコッカス属藻類の単一コロニーを採取することによ
り、ボツリオコッカス属藻類の純化株が得られる。平板
培地からコロニーを分離する際には、顕微鏡、好ましく
は実体顕微鏡観察下で行うと、ボツリオコッカス属藻類
のコロニーであることを確認しながら採取できる点で好
ましい。コロニーの採取の方法は特に問わず、例えば滅
菌した白金線でかき取り、あるいはパスツールピペット
で吸い上げればよい。この際、空中の雑菌による汚染を
防止するために、無菌室またはクリーベンチ内で操作を
行うとよい。
リオコッカス属藻類の単一コロニーを採取することによ
り、ボツリオコッカス属藻類の純化株が得られる。平板
培地からコロニーを分離する際には、顕微鏡、好ましく
は実体顕微鏡観察下で行うと、ボツリオコッカス属藻類
のコロニーであることを確認しながら採取できる点で好
ましい。コロニーの採取の方法は特に問わず、例えば滅
菌した白金線でかき取り、あるいはパスツールピペット
で吸い上げればよい。この際、空中の雑菌による汚染を
防止するために、無菌室またはクリーベンチ内で操作を
行うとよい。
【００２１】上記のようにして分離した株を再び培養
し、雑菌が生育しないことを確認することによって、純
化株であることを確認することができる。さらに、得ら
れた純化株が、ボツリオコッカス属藻類のみであること
を顕微鏡観察等により確認しておくとよい。
し、雑菌が生育しないことを確認することによって、純
化株であることを確認することができる。さらに、得ら
れた純化株が、ボツリオコッカス属藻類のみであること
を顕微鏡観察等により確認しておくとよい。
【００２２】上記のようにして製造されたボツリオコッ
カス属藻類純化株をさらに培養して増殖させることによ
り、ボツリオコッカス属藻類の培養物が得られる。この
培養物は、二酸化炭素固定による炭化水素の製造やその
研究に利用することができる。
カス属藻類純化株をさらに培養して増殖させることによ
り、ボツリオコッカス属藻類の培養物が得られる。この
培養物は、二酸化炭素固定による炭化水素の製造やその
研究に利用することができる。
【００２３】尚、後記実施例で得られたボツリオコッカ
ス・ブラウニー ＣＣＡＰ ８０７／２の純化株（ＣＣＡ
Ｐ ８０７／２ｐ）は、本発明により初めて得られたも
のである。本純化株の工業技術院生命工学工業技術研究
所への寄託は拒否された。
ス・ブラウニー ＣＣＡＰ ８０７／２の純化株（ＣＣＡ
Ｐ ８０７／２ｐ）は、本発明により初めて得られたも
のである。本純化株の工業技術院生命工学工業技術研究
所への寄託は拒否された。
【００２４】
【作用】ボツリオコッカス属藻類を適度な濃度の次亜塩
素酸で処理してから平板培養することにより、ボツリオ
コッカス属藻類以外の雑菌を死滅させ、ボツリオコッカ
ス属藻類のコロニーを選択的に形成させることができ、
純化されたボツリオコッカス属藻類を得ることができ
る。また、平板培地からボツリオコッカス属藻類のコロ
ニーを採取する際に、実体顕微鏡観察下で行うと、より
確実なボツリオコッカス属藻類の採取が可能となる。
素酸で処理してから平板培養することにより、ボツリオ
コッカス属藻類以外の雑菌を死滅させ、ボツリオコッカ
ス属藻類のコロニーを選択的に形成させることができ、
純化されたボツリオコッカス属藻類を得ることができ
る。また、平板培地からボツリオコッカス属藻類のコロ
ニーを採取する際に、実体顕微鏡観察下で行うと、より
確実なボツリオコッカス属藻類の採取が可能となる。
【００２５】
【実施例】以下に、本発明を実施例によりさらに具体的
に説明する。
に説明する。
【００２６】
【実施例１】ボツリオコッカス・ブラウニー ＣＣＡＰ
８０７／２をＪＭ培地で培養した培養液を６本の試験管
に分け、各々に有効塩素濃度が１、５、１０、２０ｐｐ
ｍとなるように次亜塩素酸ナトリウムを加え、１０分
間、室温で静置した。その後、有効塩素を除去するため
にチオ硫酸ナトリウムを、有効塩素１ｍｇあたり７．１
６ｇとなるように加えた。
８０７／２をＪＭ培地で培養した培養液を６本の試験管
に分け、各々に有効塩素濃度が１、５、１０、２０ｐｐ
ｍとなるように次亜塩素酸ナトリウムを加え、１０分
間、室温で静置した。その後、有効塩素を除去するため
にチオ硫酸ナトリウムを、有効塩素１ｍｇあたり７．１
６ｇとなるように加えた。
【００２７】上記処理液を、グルコース０．１％、寒天
１．５％を含むＪＭ培地の平板培地に塗布し、蛍光灯を
光源として約１５μＥ／ｍ2・ｓになるように照射し、
２５℃にて１週間培養した。尚、ＪＭ培地の組成は以下
のとおりである。
１．５％を含むＪＭ培地の平板培地に塗布し、蛍光灯を
光源として約１５μＥ／ｍ2・ｓになるように照射し、
２５℃にて１週間培養した。尚、ＪＭ培地の組成は以下
のとおりである。
【００２８】〔ＪＭ培地の組成〕下記表１中１〜９のス
トック溶液１ｍｌづつを混合し、蒸留水又は脱イオン水
を用いて１Ｌとし、ｐＨを７付近に調整する。
トック溶液１ｍｌづつを混合し、蒸留水又は脱イオン水
を用いて１Ｌとし、ｐＨを７付近に調整する。
【００２９】
【表１】
【００３０】培養後、クリーンベンチ内で実体顕微鏡
（倍率２０倍）を用いて観察しながら単一コロニーを白
金線でかき取り、グルコース０．１％、寒天１．５％を
含むＪＭ平板培地に移植した。これを、蛍光灯による約
１５μＥ／ｍ2・ｓの光照射下で、２５℃で４週間培養
した。
（倍率２０倍）を用いて観察しながら単一コロニーを白
金線でかき取り、グルコース０．１％、寒天１．５％を
含むＪＭ平板培地に移植した。これを、蛍光灯による約
１５μＥ／ｍ2・ｓの光照射下で、２５℃で４週間培養
した。
【００３１】得られたボツリオコッカス・ブラウニー
ＣＣＡＰ ８０７／２の藻体を白金線を用いてかき取
り、ＪＭ液体培地に移し、光照射下でさらに２週間培養
した。白金耳で培養液の一部をとり、普通寒天培地の平
板培地に塗布し、２５℃で７日間培養し、雑菌が生育し
ないことを確認した。また、こうして得られた純化株を
顕微鏡観察し、ボツリオコッカス・ブラウニーのみであ
ることを、コロニー形状等の本藻類特有の性質により確
認した。
ＣＣＡＰ ８０７／２の藻体を白金線を用いてかき取
り、ＪＭ液体培地に移し、光照射下でさらに２週間培養
した。白金耳で培養液の一部をとり、普通寒天培地の平
板培地に塗布し、２５℃で７日間培養し、雑菌が生育し
ないことを確認した。また、こうして得られた純化株を
顕微鏡観察し、ボツリオコッカス・ブラウニーのみであ
ることを、コロニー形状等の本藻類特有の性質により確
認した。
【００３２】尚、分譲を受けた直後のボツリオコッカス
・ブラウニー ＣＣＡＰ ８０７／２の一部を普通寒天培
地（１Ｌ中に、肉エキス ５ｇ、ペプトン １０ｇ、塩化
ナトリウム ５ｇ、寒天 １５ｇを含む；ｐＨ７．０）の
平板培地に塗布して培養したところ、雑菌の生育が観察
され、ボツリオコッカス属藻類の増殖は認められなかっ
た。尚、いずれの有効塩素濃度で上記操作を行った場合
にも、純化株が得られた。
・ブラウニー ＣＣＡＰ ８０７／２の一部を普通寒天培
地（１Ｌ中に、肉エキス ５ｇ、ペプトン １０ｇ、塩化
ナトリウム ５ｇ、寒天 １５ｇを含む；ｐＨ７．０）の
平板培地に塗布して培養したところ、雑菌の生育が観察
され、ボツリオコッカス属藻類の増殖は認められなかっ
た。尚、いずれの有効塩素濃度で上記操作を行った場合
にも、純化株が得られた。
【００３３】
【実施例２】ボツリオコッカス・ブラウニー ＣＣＡＰ
８０７／２の代わりにボツリオコッカス・ブラウニー
ＣＣＡＰ ８０７／１を用いた以外は実施例１と同様に
して、ボツリオコッカス・ブラウニー ＣＣＡＰ ８０７
／１の純化株を得た。
８０７／２の代わりにボツリオコッカス・ブラウニー
ＣＣＡＰ ８０７／１を用いた以外は実施例１と同様に
して、ボツリオコッカス・ブラウニー ＣＣＡＰ ８０７
／１の純化株を得た。
【００３４】
【実施例３】ボツリオコッカス・ブラウニー ＣＣＡＰ
８０７／２の代わりにボツリオコッカス・ブラウニー
ＵＴＥＸＬＢ５７２を用いた以外は実施例１と同様にし
て、ボツリオコッカス・ブラウニー ＵＴＥＸＬＢ５７
２の純化株を得た。
８０７／２の代わりにボツリオコッカス・ブラウニー
ＵＴＥＸＬＢ５７２を用いた以外は実施例１と同様にし
て、ボツリオコッカス・ブラウニー ＵＴＥＸＬＢ５７
２の純化株を得た。
【００３５】
【発明の効果】本発明により、従来純化が煩雑であった
ボツリオコッカス属藻類の純化株を簡便に得ることがで
きる。また、雑菌が付着するために純化が困難であった
ボツリオコッカス属藻類の純化も可能となる。さらに、
本発明の方法によれば、十分な藻体量の純化株が得られ
る。
ボツリオコッカス属藻類の純化株を簡便に得ることがで
きる。また、雑菌が付着するために純化が困難であった
ボツリオコッカス属藻類の純化も可能となる。さらに、
本発明の方法によれば、十分な藻体量の純化株が得られ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｐ 5/00 8114−4Ｂ (Ｃ１２Ｎ 1/12 Ｃ１２Ｒ 1:89）
Claims (7)
- 【請求項１】 ボツリオコッカス属に属する藻類とこの
藻類以外の微生物とを含む混合物に有効塩素を作用さ
せ、この混合物を平板培地に塗布して培養することによ
り前記藻類の単一コロニーを形成させ、このコロニーを
平板培地から採取することを特徴とするボツリオコッカ
ス属に属する藻類純化株の製造法。 - 【請求項２】 請求項１において、ボツリオコッカス属
に属する藻類とこの藻類以外の微生物とを含む混合物を
次亜塩素酸又はその塩の水溶液に懸濁させることによ
り、前記混合物に有効塩素を作用させることを特徴とす
るボツリオコッカス属に属する藻類純化株の製造法。 - 【請求項３】 請求項１において、平板培地からのコロ
ニーの採取を実体顕微鏡で観察しながら行うことを特徴
とするボツリオコッカス属に属する藻類純化株の製造
法。 - 【請求項４】 ボツリオコッカス属に属する藻類とこの
藻類以外の微生物とを含む混合物に有効塩素を作用さ
せ、この混合物を平板培地に塗布して培養することによ
り前記藻類の単一コロニーを形成させ、このコロニーを
平板培地から採取することを特徴とするボツリオコッカ
ス属に属する藻類の純化法。 - 【請求項５】 請求項４において、ボツリオコッカス属
に属する藻類とこの藻類以外の微生物とを含む混合物を
次亜塩素酸又はその塩の水溶液に懸濁させることによ
り、前記混合物に有効塩素を作用させることを特徴とす
るボツリオコッカス属に属する藻類の純化法。 - 【請求項６】 請求項１〜５のいずれか一項に記載の方
法により純化されたボツリオコッカス属に属する藻類を
培養することを特徴とするボツリオコッカス属に属する
藻類培養物の製造法。 - 【請求項７】 ボツリオコッカス属に属する藻類以外の
微生物を含まないボツリオコッカス・ブラウニー ＣＣ
ＡＰ ８０７／２純化株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6063481A JPH07265059A (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | ボツリオコッカス属純化株の製造法と純化株 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6063481A JPH07265059A (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | ボツリオコッカス属純化株の製造法と純化株 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07265059A true JPH07265059A (ja) | 1995-10-17 |
Family
ID=13230481
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6063481A Pending JPH07265059A (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | ボツリオコッカス属純化株の製造法と純化株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07265059A (ja) |
-
1994
- 1994-03-31 JP JP6063481A patent/JPH07265059A/ja active Pending
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