RU2376365C1 - Способ культивирования микобактерий туберкулеза - Google Patents
Способ культивирования микобактерий туберкулеза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2376365C1 RU2376365C1 RU2008117497/13A RU2008117497A RU2376365C1 RU 2376365 C1 RU2376365 C1 RU 2376365C1 RU 2008117497/13 A RU2008117497/13 A RU 2008117497/13A RU 2008117497 A RU2008117497 A RU 2008117497A RU 2376365 C1 RU2376365 C1 RU 2376365C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ozone
- growth
- mycobacteria
- concentration
- days
- Prior art date
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и касается способа культивирования микобактерий туберкулеза. Способ предусматривает измельчение патологического материала до образования суспензии, заливку 6%-ным раствором серной кислоты, центрифугирование, отмывку и ресуспендирование осадка физиологическим раствором, озонированным в концентрации 0,25-0,5 мг/л озона. Полученный материал высевают на плотную питательную среду, подходящую для роста. Использование изобретения позволяет ускорить рост микобактерий, повысить выделяемость последних из патологического материала и, как следствие, эффективность диагностики. 2 табл.
Description
Изобретение относится к микробиологии, а именно к способу культивирования микобактерий туберкулеза, и может быть использовано в научно-исследовательских и производственных лабораториях для ускорения постановки диагноза на туберкулез.
Известен способ культивирования микобактерий на плотных питательных средах Левенштейна-Йенсена, ФАСТ-3Л, Финн-2, Гельберга, Петраньяни. Подготовленный для исследования материал высевают в 5-10 пробирок с питательной средой Левенштейна-Йенсена и одну из сред: Гельберга, Петраньяни, Финн-2, ФАСТ-3Л. Посев проводят пастеровской пипеткой или платиновой петлей. Засеянные пробирки укладывают в наклонном положении и помещают в термостат с температурой 37-38°С. Через 2 суток посевы просматривают и определяют восстановление цвета среды. Если цвет среды не восстановился, обработку и посев повторяют. Пробирки, в которых появился рост посторонней микрофлоры, удаляют. В остальных ватно-марлевые пробки парафинируют. Посевы инкубируют в течение 3 месяцев. (Наставление по диагностике туберкулеза животных. - М., 2004. - С.25-36). По мнению многих исследователей, бактериологическое исследование при постановке диагноза на туберкулез - длительный процесс. Рост микобактерий бычьего вида чаще обнаруживают на 20-60 сутки, человеческого - на 20-30, птичьего - на 10-20, атипичных микобактерий - на 3-30 сутки. Сокращение срока культивирования микобактерий туберкулеза является важным.
В научной литературе описаны свойства озонированных растворов, которые находят все больше применение в медицине и ветеринарии. Действие озонированного физиологического раствора на микроорганизмы проявляется в зависимости от дозы озона в растворе и длительности его воздействия. Известно, что добавление озона в небольших количествах (до 0,005 мг/л) в жидкие питательные среды приводит к стимуляции роста выращиваемых на них бактериальных культур (В.И.Пантелеев, И.П.Погорельский, М.К.Бакулин. Санитарно-микробиологические аспекты использования озона при обеззараживании питьевой воды / Вятский медицинский вестник. - 1999. - №2. - С.66-68).
Бактерицидное и бактериостатическое действие растворенного озона на различные штаммы микобактерий туберкулеза также зависит от дозы озона и времени обработки (А.А.Приймак, А.Н.Калюк, А.Г.Киргинцев. Воздействие озоно-кислородной смеси на микобактерий туберкулеза и условно-патогенные микроорганизмы / Пробл. туб. - 1991. - №4. - С.7-10).
Механизм действия озона заключается в воздействии озона на клеточные мембраны бактерий, вызывая окисление и образование пероксидов из фосфолипидов и липопротеинов клеточной мембраны бактерий, при высоких концентрациях происходит ее разрыв. Низкие концентрации озона (до 0,5 мкг/мл) стимулируют дыхание и репродуктивную способность клеток микро- и макроорганизмов. (С.В.Конев, В.К.Матус. Озонобиология: молекулярно-мембранные основы./ 1-я Всероссийская научно-практическая конференция «Озон в биологии и медицине». - Н.Новгород. - 1992. - С.3-4).
Задачей изобретения является ускорение роста микобактерий на плотных питательных средах, повышение выделяемости и эффективности диагностики.
Задача достигается путем использования суспензии микобактерий туберкулеза, а также суспензии из патологического материала, которую готовят по методу Гона, Аликаевой, как описано в Наставлении (см. «Наставление по диагностике туберкулеза животных», 2002). Подготовка биоматериала состоит из следующих этапов.
Кусочки лимфатических узлов и органов измельчают и растирают пестиком со стерильным песком до гомогенной массы.
Заливают 6%-ным раствором серной кислоты в соотношении 1:4 и тщательно перемешивают.
Пробы центрифугируют 15 минут при 3000 об/мин.
Полученную надосадочную жидкость сливают, осадок ресуспендируют и дважды отмывают физиологическим раствором, центрифугируя 5 минут при 3000 об/мин. Предложенный способ отличается тем, что используют озонированный физиологический раствор с концентрацией растворенного озона 0,25-0,5 мг/л, приготовленный прямым барбатированием озоно-кислородной смесью на синтезаторе озона А-с-ГОКСф-5-04-ОЗОН.
Ресуспензированный озонированным физиологическим раствором осадок высевают в 5-10 пробирок с питательной средой Левенштейна-Йенсена. Посев проводят пастеровской пипеткой или платиновой петлей. Засеянные пробирки укладывают в наклонном положении и помещают в термостат с температурой 37-38°С. Посевы инкубируют 30 дней и регистрируют начало и интенсивность роста микобактерий туберкулеза ежедневно до 21 дня и на 30 день. При отсутствии роста микобактерий пробирки продолжают инкубировать и вести наблюдение в течение 3 месяцев.
Сущность изобретения поясняется на конкретном примере выполнения способа.
Пример 1. Определение оптимальной концентрации озона для стимуляции скорости и интенсивности роста микобактерий туберкулеза на плотных питательных средах.
Физиологический раствор озонировали прямым барбатированием озоно-кислородной смесью на синтезаторе озона А-с-ГОКСф-5-04-ОЗОН. Синтезатор озона предназначен для получения озоно-кислородной смеси с концентрацией озона на выходе аппарата до 50 мг/л из газообразного кислорода (ГОСТ 5583-78) путем электросинтеза. Озоно-кислородная смесь, получаемая в синтезаторе, предназначена для использования в медицинских целях и проведения научно-исследовательских работ по использованию озона в экологии, биологии, медицине и ветеринарии с целью отработки научно-обоснованных методик применения озона. Синтезатор озона представляет собой автоматизированный прибор непрерывного действия. Концентрация озона в озоно-кислородной смеси регулируется за счет изменения частоты питающего озонатор напряжения, а также за счет изменения расхода кислорода, продуваемого через озонатор.
Флакон с нужным количеством физиологического раствора соединяют со штуцером прибора через озоностойкую трубку и устанавливают прибор в режим получения озонированного физиологического раствора с необходимой концентрацией растворенного озона. Готовят суспензию M.bovis штамм 14 на озонированном физиологическом растворе, концентрации которого составляют 0,1; 0,25; 0,5 и 1 мг/л. Каждую пробу суспензии микобактерий засевают в 5 пробирок с плотной питательной средой Левенштейна-Йенсена и ведут учет начала и интенсивности роста ежедневно до 21 и на 30 день. Скорость появления первичного и интенсивного роста микобактерий в зависимости от концентрации озона в суспензии показана в таблице 1.
Таблица 1. Первичный и интенсивный рост M.bovis штамм 14 на плотных питательных средах с различной концентрацией озона сутки (М±m) |
||||||
Концентрация озона, мг/л | Питательная среда | |||||
Левенштейна-Йенсена | Финн-2 | Гельберга | ||||
0,1 | Первич. | Интенсив. | Первич. | Интенсив. | Первич. | Интенсив. |
16,0±0,44 | 21,8±0,49 | 13,6±0,98 | 22,6±0,40 | 12,6±1,03 | 21,2±0,49 | |
0,25 | 5,8±0,37 | 13,0±0,63 | 6,0±0,44 | 12,8±1,15 | 5,8±0,37 | 12,4±1,07 |
0,5 | 6,0±0,31 | 12,2±1,12 | 6,0±0,44 | 12,8±1,15 | 5,8±0,37 | 12,2±1,15 |
1,0 | 17,2±0,37 | 23,6±0,4 | роста нет | роста нет | 13,2±0,91 | 25,6±0,6 |
контроль | 13,2±0,97 | 22,2±0,49 | 8,83±0,6 | 21,0±0,54 | 8,0±0,89 | 21,8±0,49 |
Из таблицы видно, что концентрация озона 0,1 мг/л не только не стимулирует, но тормозит первичный рост микобактерий (р<0,05), тогда как концентрация озона 0,25 и 0,5 мг/л стимулирует (р<0,001) первичный и интенсивный рост, причем первичный рост регистрируется на 5-7 сутки, интенсивный - 10-12 сутки, а в контрольных пробирках соответственно - 10-15; 21-23 сутки. Концентрация озона 1,0 мг/л тормозит первичный рост микобактерий (р<0,01) и не изменяет интенсивность роста (р>0,05). Появление первичного роста микобактерий регистрируют на 16-18 сутки.
Таким образом, опытным путем установлено, что оптимальная концентрация озона для ускорения и повышения интенсивности роста микобактерий является концентрация 0,25-0,5 мг/л. Существенных различий в культивировании микобактерий на различных питательных средах с использованием озонированного физиологического раствора не установлено.
Пример 2. Определение скорости и интенсивности роста микобактерий M.bovis штамм 14, изолированного из биологического материала морских свинок.
Десять морских свинок инфицируют суспензией культуры M.bovis штамм 14 подкожно в дозе 1 мг/мл. Через 30 дней после заражения животных убивают и при патологоанатомическом исследовании устанавливают индекс пораженности по 4-бальной системе у каждого животного и по группе (Г.Ф.Коромыслов, Н.П.Овдиенко, В.А. Шаров и другие. Методические рекомендации по проведению лабораторных исследований при туберкулезе животных / М.:ВИЭВ, 1992. С.-74-76). Мазки-отпечатки внутренних органов животных готовят по 3 мазка на предметных стеклах и окрашивают по Цилю-Нильсену. Под иммерсией просматривают 50-100 полей зрения каждого мазка. Результаты исследований показали, что все морские свинки были больны туберкулезом, индекс пораженности составил 18,6 баллов.
Затем проводят посев биоматериала от морских свинок на среде Левенштейна-Йенсена по общепринятой методике и с использованием озонированного физиологического раствора при концентрации в нем 0,25-0,5 мг/л озона.
Результаты изучения скорости появления первичного роста представлены в таблице 2.
Таблица 2. Рост культуры из штамма 14 M.bovis на среде Левенштейна-Йенсена |
|||||
№ п/п | Биоматериал от морских свинок, проба | Первичный рост, сутки (M±m) | Интенсивность роста, число колоний на 21 сутки (М±m) | ||
+озон (О3) | Контроль | +озон (О3) | Контроль | ||
1 | №1 | 11,8±0,2 | 19,6±0,24 | 23,0±3,99 | 7,8±1,46 |
2 | №2 | 11,8±0,2 | 19,4±0,24 | 21,6±2,01 | 10,2±0,99 |
3 | №3 | 11,8±0,2 | 19,4±0,24 | 25,2±2,03 | 7,2±1,91 |
4 | №4 | 12,0±0,01 | 19,2±0,2 | 27,0±3,05 | 9,0±1,22 |
5 | №5 | 11,6±0,24 | 19,4±0,24 | 23,2±3,99 | 7,8±0,86 |
6 | №6 | 11,4±0,24 | 19,4±0,24 | 21,8±2,96 | 9,8±0,66 |
7 | №7 | 11,8±0,2 | 19,4±0,24 | 21,2±2,37 | 7,8±1,5 |
8 | №8 | 11,8±0,2 | 19,6±0,24 | 23,6±2,16 | 9,4±0,86 |
9 | №9 | 11,6±0,24 | 19,4±0,24 | 24,0±2,6 | 6,6±1,12 |
10 | №10 | 11,6±0,24 | 19,2±0,2 | 24,4±3,93 | 7,2±1,83 |
По группе | 11,7±0,2 | 19,4±0,23 | 23,5±2,91 | 8,28±1,24 |
Из таблицы видно что, первичный рост микобактерий при использовании озонированного физиологического раствора проявляется на 11,7±0,2 сутки, в контроле на 19,8±0,23 сутки (р<0,001).
По результатам изучения интенсивности роста культуры из биоматериала от инфицированных морских свинок на 21 сутки видно что, интенсивность роста колоний микобактерий при добавлении озонированного физиологического раствора составила 23,5±2,91, а в контроле 8,28±1,24.
Предлагаемый способ культивирования микобактерий туберкулеза ускоряет и повышает интенсивность роста микобактерий 1,8-2 раза, тем самым сокращает сроки постановки диагноза на туберкулез.
Claims (1)
- Способ культивирования микобактерий туберкулеза, включающий приготовление суспензии патологического материала: измельчение, заливку 6%-ным раствором серной кислоты, центрифугирование, отмывание, ресуспендирование осадка физиологическим раствором, посев на плотную питательную среду, отличающийся тем, что отмывают и ресуспендируют осадок патологического материала физиологическим раствором, который озонируют в концентрации 0,25-0,5 мг/л озона.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2008117497/13A RU2376365C1 (ru) | 2008-04-30 | 2008-04-30 | Способ культивирования микобактерий туберкулеза |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2008117497/13A RU2376365C1 (ru) | 2008-04-30 | 2008-04-30 | Способ культивирования микобактерий туберкулеза |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2376365C1 true RU2376365C1 (ru) | 2009-12-20 |
Family
ID=41625685
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008117497/13A RU2376365C1 (ru) | 2008-04-30 | 2008-04-30 | Способ культивирования микобактерий туберкулеза |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2376365C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2447419C2 (ru) * | 2010-07-15 | 2012-04-10 | Учреждение Российской академии медицинских наук Научный центр клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения РАМН (НЦКЭМ СО РАМН) | СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗНЫХ ГРАНУЛЕМ В КУЛЬТУРЫ in vitro |
-
2008
- 2008-04-30 RU RU2008117497/13A patent/RU2376365C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. БИРГЕРА М.О. - М.: Медицина, 1982 г., с.268-271. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2447419C2 (ru) * | 2010-07-15 | 2012-04-10 | Учреждение Российской академии медицинских наук Научный центр клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения РАМН (НЦКЭМ СО РАМН) | СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗНЫХ ГРАНУЛЕМ В КУЛЬТУРЫ in vitro |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN107523542B (zh) | 一种草鱼肠巨噬细胞的分离、纯化与原代培养方法 | |
RU2433170C1 (ru) | Питательная среда жидкая для культивирования чумного микроба вакцинного штамма ев | |
CN108048327A (zh) | 一种高效分离硅藻的新方法 | |
EP3760212A1 (en) | Living microorganism-containing composition and production method thereof | |
RU2376365C1 (ru) | Способ культивирования микобактерий туберкулеза | |
CN117568235A (zh) | 一种产亚硝酸盐氧化还原酶的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
CN102634447B (zh) | 一种微阵列透析室及利用该透析室的富集培养方法 | |
CN111035771A (zh) | 纳米超声造影剂及其制备方法 | |
CN103141425B (zh) | 无菌斑马鱼的生产方法 | |
EA002366B1 (ru) | Способ и устройство для выращивания (концентрирования) и исследования микробиологических проб | |
Glaser et al. | The culture of Paramecium caudatum free from living microorganisms | |
WO2018176066A2 (en) | Cord blood therapy to treat chronic disease caused by l-form bacteria | |
CN114164183A (zh) | 一株南非诺卡氏菌噬菌体p69及其应用 | |
RU2190220C1 (ru) | Способ выявления микобактерий туберкулеза | |
RU2542481C2 (ru) | Способ получения бактериологически чистых культур морских сине- зеленых микроводорослей | |
CN106566802A (zh) | 一种脐血间充质干细胞培养试剂盒的制备方法 | |
JP2021079381A (ja) | バチルス優占化装置、バチルス属菌量の相対的評価方法、及びこれを用いた排水処理方法 | |
Alexander et al. | Mechanism of emergence of resistance to streptomycin of H. pertussis and H. parapertussis during treatment with this antibiotic | |
RU2400746C2 (ru) | Способ определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в пищевых продуктах | |
RU2732222C1 (ru) | Способ диагностики бактериемии | |
Tedeschi et al. | Cocci and diphtheroids in blood cultures from patients in various pathological situations | |
RU2593712C2 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЦЕНТРАТА КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК БРУЦЕЛЛ ИЗ ШТАММА Brucella abortus 19 ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНЫХ АНТИГЕНОВ, БРУЦЕЛЛЕЗНЫЕ АНТИГЕНЫ (ТРИ ВАРИАНТА), СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОЙ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ И ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ (ТРИ ВАРИАНТА) | |
CN116590192B (zh) | 一种幽门螺杆菌固体分离培养基及其制备方法和应用 | |
RU2328526C1 (ru) | Способ выявления микобактерий туберкулеза крупного рогатого скота | |
RU2709720C1 (ru) | Способ обработки культуры staphylococcus aureus кислородосодержащим газом из портативного озонатора |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130501 |