JPH07248323A - アミノ酸分析装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】ニンヒドリン法用緩衝液（１〜６）と蛍光法用
緩衝液（１′〜６′）を切換弁（１７）により、および
ニンヒドリン試薬（１１）と第１反応液（１１Ａ）を三
方電磁弁（１７Ａ）により一斉に切換える。ニンヒドリ
ン法用反応コイル(１９)と第１反応コイル（１８）は、
六方切換弁（２４）によって手動または自動で切換えら
れる。ニンヒドリン用光度計(２３）と蛍光光度計(２
０）は三方弁(２８)によって切換えられる。 【効果】クロマトグラフィ法を利用してアミノ酸分析を
行う場合に、多方切換弁の操作により、ニンヒドリン方
式分析系と蛍光方式分析系をワンタッチで選択できるの
で、簡便に操作できるようになる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、アミノ酸分析装置に係
り、特に液体クロマトグラフィを利用したアミノ酸分析
装置に関する。

【０００２】

【従来の技術】反応系を備えたアミノ酸分析には大きく
分けて２つの反応検出方法が用いられている。１つはニ
ンヒドリン試薬の反応検出によるアミノ酸分析方法（以
下ニンヒドリン法という）。もう１つは蛍光試薬の反応
検出によるアミノ酸分析方法（以下蛍光法という）であ
る。ニンヒドリン法についての一例は特公平2−59428号
公報に述べられている。もう１つの蛍光法についての一
例は特公平2−33985号公報に述べられている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】ここで２つの分析法を
比較してみると、ニンヒドリン法は、ベースラインの安
定性およびデータの安定性はすぐれているが、検出感度
には限界がある（約１０pmolが検出限界）。一方蛍光法
は検出感度はすぐれているが(約０.５pmolが検出限
界）、ベースラインが不安定で、データの再現性に乏し
い。そこで、この２つの異なる方法を同一分析計内で、
切換えて行いたいという要求が生まれる。すなわち通常
はニンヒドリン法で分析するが、時々感度的に試料量が
不足の場合は蛍光法で行うことができるのが望まれる。

【０００４】本発明の目的は、ニンヒドリン法と蛍光法
の両方を１台の分析装置によって簡単な操作で選択的に
実行できるアミノ酸分析装置を提供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、第１緩衝液系
と第２緩衝液系を選択的に切換える緩衝液切換弁を送液
ポンプの上流側に設け、この送液ポンプによって送られ
た液が導入される分離カラムの下流に反応系切換弁を設
け、分離カラムと反応系切換弁を接続する流路に、ニン
ヒドリン試薬又は酸化剤試薬が緩衝液系の選択に応じて
選択的に流通される共用流路を接続し、ニンヒドリン反
応流路および吸光光度計を有する第１反応系と、酸化反
応流路，蛍光試薬導入口および蛍光光度計を有する第２
反応系とを、反応系切換弁によって切換えるように構成
したことを特徴とする。

【０００６】

【作用】クロマトグラフィを利用するアミノ酸分析方法
におけるニンヒドリン法と蛍光法とでは、用いる緩衝
液，反応用試薬および検出器が異なる。本発明では、緩
衝液送液ポンプ，分離カラム，反応流路の一部および試
薬供給流路の一部を、ニンヒドリン法および蛍光法のい
ずれの場合にも使用可能とし、緩衝液切換弁および反応
系切換弁を切換えることによって、測定しようとするア
ミノ酸含有試料に適した流路系を得ることができるよう
にした。

【０００７】

【実施例】以下、本発明に基づく実施例を説明する。液
体クロマトグラフィを利用してアミノ酸分析を行う場合
に、ニンヒドリン法によるときは、緩衝液系としてニン
ヒドリン陽性物質を含まないクエン酸ナトリウム溶液を
用い、反応用試薬としてニンヒドリン試薬を用い、反応
流路として摂氏１３０度に維持された反応コイルを用
い、検出器として吸光光度計を用いる。また、蛍光法に
よるときは、緩衝液系として蛍光物質を含まないクエン
酸ナトリウム溶液を用い、第１の反応用試薬として次亜
塩素酸ナトリウム等の酸化剤を含むホウ酸緩衝液を用
い、第２の反応用試薬としてオルトフタルアルデヒド
（ＯＰＡと称することがある）等の蛍光物質を含む溶液
を用い、反応流路として摂氏５０度に維持された反応コ
イルを用い、検出器として蛍光光度計を用いる。

【０００８】ニンヒドリン法測定モードと蛍光法測定モ
ードを切換えるために、緩衝液送液ポンプの上流側に設
けた緩衝液切換弁および反応系切換弁を自動的に、又は
手動で切換える。ニンヒドリン反応流路と吸光光度計の
間に切換弁を設ける場合と設けない場合がある。蛍光試
薬を加えた後の反応流路は、両方のモードで共用する場
合と蛍光法測定モード専用にする場合がある。以下、図
面を参照して本発明の実施例を説明する。図１は、本発
明に基づく一実施例の概略流路構成を示す図である。

【０００９】まずニンヒドリン法の場合について説明す
る。第１緩衝液系としての第１〜第５緩衝液１〜５およ
び再生液６は、それぞれに設けた電磁弁７によって１つ
ずつ、または最大６液までのグラジェント混合により選
択されて、緩衝液ポンプ８によってアンモニアフィルタ
カラム１３とアミノ酸サンプルを導入するオートサンプ
ラ１４を経由し、分離カラム１５に送られる。ここで分
離されたアミノ酸成分は、ニンヒドリンポンプ９によっ
て送られたニンヒドリン試薬１１と試薬導入口となるミ
キサ１６において混合され、反応系切換弁としての六方
弁２４の実線部分を経由して反応コイル１９で反応す
る。ミキサ１６は分離カラムと六方弁２４の接続流路５
５に設ける。ここで発色したアミノ酸は、三方弁２８の
実線部分を経由して吸光光度計２３で連続的に検知さ
れ、クロマトグラムがデータ処理装置３０に表示され
る。

【００１０】次に蛍光法について説明する。第２緩衝液
系としての蛍光法用緩衝液１′〜６′および酸化剤液１
１Ａは、スイッチに連動した緩衝液切換弁としての三方
電磁弁１７および弁１７Ａによって同時に切換えられ
る。そして選択電磁弁７で選ばれた緩衝液は、緩衝液ポ
ンプ８によって、アンモニアフィルタカラム１３とオー
トサンプラ１４を経由して分離カラム１５に送られる。
ここで分離したアミノ酸成分は、共用流路５１を通して
ポンプ９によって送られた酸化剤液と蛍光試薬導入口と
してのミキサ１６にて混合される。六方弁２４のループ
５２に設けた酸化反応流路としての第１反応コイル１８
を破線のように通り反応する。次にポンプ１０によって
送られた蛍光試薬１２はループ５２上のミキサ２７で混
合し、再び六方弁２４の破線部分を経由して蛍光反応流
路としての反応コイル１９で反応する。ここで蛍光性を
持ったアミノ酸は、三方弁２８の破線部分を通り、蛍光
光度計２０で検知され、データ処理装置３０でクロマト
グラムとして示される。図中２１，２２はポンプの脈動
を少なくするためのダンパコイル、２６は流路抵抗２９
を含んだドレインチューブである。六方弁２４と三方弁
２８とは、電気的に連動されるが、手動で別々に操作で
きるようにしても良い。３１および３１Ａは恒温反応槽
である。ポート２５は閉栓されている。

【００１１】図１の装置によれば次のような効果が得ら
れる。まず、両モードの流路切換えが、自動化できる。
すなわち、三方電磁弁１７と１７Ａと六方弁２４と三方
弁２８を連動させると１個のスイッチで１回で切換える
ことができる。更にこれをコンピュータに接続してプロ
グラマブル化することができる。必要なら手動でも別々
に切換えることもできる。

【００１２】試薬は、両法が実行できるように設置して
いるので、モード切換えの毎に容器，中味を入れ換える
必要がなく簡便である。また、配管の取外し，付け換え
がないので、流路を開放することがない。だから、接続
を間違えることもない。第１反応コイル１８が半密閉状
態なので、内部液の蒸発がなく、内部液の結晶化によっ
て詰まりを生じることがない。図１の状態でニンヒドリ
ン法を行う場合、反応コイル１９は１００〜１５０℃に
加温されることになる。この時、第１反応コイル１８
は、六方弁２４の実線状態に接続されるので、一方はポ
ート２５で閉塞され、もう一方は流路抵抗２９によって
内部液が封入されることになる。

【００１３】次に他の実施例を説明する。図３の例の如
く図１の六方弁２４の代りに四方弁２４Ｂを設けると、
第１反応コイル１８を完全に密封することができるの
で、長時間蛍光法を使用しない場合でも蒸発を防ぐこと
ができる。もう１つの図２の例では、図１の六方弁２４
の代りに六方弁２４Ａを使用するポート２５，５６に栓
して、第１反応コイル１８を六方の対称側に接続すると
密閉することができる。図２および図３の場合、蛍光試
薬導入路は反応コイル１９の前のミキサ２７Ａに接続さ
れる。

【００１４】さらに別の実施例を図４に示す。この実施
例でも、図１と同じ構成部を省略してある。この例は両
反応系を専用に分割したものである。まずニンヒドリン
法の場合は、分離カラム１５で分離されたアミノ酸成分
は流路５１からのニンヒドリン試薬とミキサ１６で混合
されたあと、三方弁２８Ａの実線部分を通り、ニンヒド
リン用反応コイル１９内で反応し、光度計２３で検出さ
れる。

【００１５】一方、蛍光法の場合は、分離カラム１５で
分離されたアミノ酸成分が流路５１からの第１反応試薬
とミキサ１６で混合し、三方弁２８Ａの破線部分を通
り、第１反応コイル１８内で酸化反応する。次に第２反
応液がミキサ２７Ｂから混合され、第２反応コイル１９
Ａ内で反応し蛍光性を持つ。これを蛍光光度計２０で検
知し、データ処理装置３０でクロマトグラムとして記録
する。

【００１６】

【発明の効果】本発明によれば、１台の分析装置によっ
てニンヒドリン法と蛍光法のアミノ酸分析操作を簡単に
選択して実行することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の一実施例の流路系統図である。

【図２】本発明の他の実施例の要部を示す図である。

【図３】本発明のもう１つの実施例の要部を示す図であ
る。

【図４】本発明の別の実施例の要部を示す図である。

【符号の説明】

１５…分離カラム、１７…緩衝液切換弁、１８，１９，
１９Ａ…反応コイル、２０…蛍光光度計、２３…吸光光
度計、２４，２４Ａ…六方弁、５１…共用流路、５２…
ループ。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】第１緩衝液系と第２緩衝液系を選択的に切
   換える緩衝液切換弁を送液ポンプの上流側に設け、上記
   送液ポンプによって送られた液が導入される分離カラム
   の下流に反応系切換弁を設け、上記分離カラムと上記反
   応系切換弁を接続する流路に、ニンヒドリン試薬又は酸
   化剤試薬が上記緩衝液系の選択に応じて選択的に流通さ
   れる共用流路を接続し、ニンヒドリン反応流路および吸
   光光度計を有する第１反応系と、酸化反応流路，蛍光試
   薬導入口および蛍光光度計を有する第２反応系とを、上
   記反応系切換弁によって切換えるように構成したことを
   特徴とするアミノ酸分析装置。