JPH07228888A - 高度不飽和脂肪酸の精製方法 - Google Patents
高度不飽和脂肪酸の精製方法Info
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- JPH07228888A JPH07228888A JP4525194A JP4525194A JPH07228888A JP H07228888 A JPH07228888 A JP H07228888A JP 4525194 A JP4525194 A JP 4525194A JP 4525194 A JP4525194 A JP 4525194A JP H07228888 A JPH07228888 A JP H07228888A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】微生物により生産された高度不飽和脂肪酸をメ
タノールに溶解させ、次いで炭素原子数６〜８のアルカ
ンを添加することにより該アルカンとメタノールとから
構成される２層を形成させ、２層間における分配を利用
して高度不飽和脂肪酸をアルカン層に濃縮して精製する
ことを特徴とする高度不飽和脂肪酸の精製方法、並びに
この精製方法により部分精製された高度不飽和脂肪酸。 【効果】本発明の方法によれば、微生物の産生する高度
不飽和脂肪酸を、短時間で簡易かつ容易にしかも極めて
安全に濃縮精製することができる。また、こうして得ら
れる部分精製高度不飽和脂肪酸は、医薬品または機能性
食品の優れた素材を提供する。
タノールに溶解させ、次いで炭素原子数６〜８のアルカ
ンを添加することにより該アルカンとメタノールとから
構成される２層を形成させ、２層間における分配を利用
して高度不飽和脂肪酸をアルカン層に濃縮して精製する
ことを特徴とする高度不飽和脂肪酸の精製方法、並びに
この精製方法により部分精製された高度不飽和脂肪酸。 【効果】本発明の方法によれば、微生物の産生する高度
不飽和脂肪酸を、短時間で簡易かつ容易にしかも極めて
安全に濃縮精製することができる。また、こうして得ら
れる部分精製高度不飽和脂肪酸は、医薬品または機能性
食品の優れた素材を提供する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は微生物により生産された
高度不飽和脂肪酸を部分精製する簡易な方法、及び該方
法により得られる部分精製高度不飽和脂肪酸に関する。
高度不飽和脂肪酸を部分精製する簡易な方法、及び該方
法により得られる部分精製高度不飽和脂肪酸に関する。
【０００２】
【従来の技術・発明が解決しようとする課題】高度不飽
和脂肪酸は、様々な生理活性を持つことが知られてい
る。例えば、ドコサヘキサエン酸（以下、ＤＨＡと略記
することがある）は、記憶、学習能の改善、視力低下抑
制、抗腫瘍作用、免疫抑制作用等の薬理効果があるとし
て最近注目を集めている。また、エイコサペンタエン酸
（以下にＥＰＡと略記することがある）は、血栓溶解作
用、抗動脈硬化作用、血圧降下作用等の薬理作用を持
つ。これらの高度不飽和脂肪酸は医薬品として用いられ
ることが期待される重要な脂肪酸である。
和脂肪酸は、様々な生理活性を持つことが知られてい
る。例えば、ドコサヘキサエン酸（以下、ＤＨＡと略記
することがある）は、記憶、学習能の改善、視力低下抑
制、抗腫瘍作用、免疫抑制作用等の薬理効果があるとし
て最近注目を集めている。また、エイコサペンタエン酸
（以下にＥＰＡと略記することがある）は、血栓溶解作
用、抗動脈硬化作用、血圧降下作用等の薬理作用を持
つ。これらの高度不飽和脂肪酸は医薬品として用いられ
ることが期待される重要な脂肪酸である。
【０００３】現在、これらの高度不飽和脂肪酸の供給源
は主として魚油または海洋微細藻類であるが、魚油由来
のＤＨＡは魚臭が強く品質が悪いのに対し、海洋微細藻
類由来のＤＨＡは、魚臭がなく、良質なＤＨＡである。
しかし、海洋微細藻類の生産性が高くないため、優れた
精製法が要望されている。
は主として魚油または海洋微細藻類であるが、魚油由来
のＤＨＡは魚臭が強く品質が悪いのに対し、海洋微細藻
類由来のＤＨＡは、魚臭がなく、良質なＤＨＡである。
しかし、海洋微細藻類の生産性が高くないため、優れた
精製法が要望されている。
【０００４】従来、高度不飽和脂肪酸を魚油や海洋微細
藻類から分離精製するには、尿素付加法、分子蒸留法、
溶剤分別法、クロマトグラフィー法（例えば、特開平４
−９５０４８）、銀塩との錯体形成による抽出法（特開
平４−１０３５５８、特開平４−１５９３９８）等が知
られているが、これらの方法を工業的に採用するには、
種々の欠点がある。即ち、尿素付加法は、得られる高度
不飽和脂肪酸の純度が低く、分子蒸留法は重合や異性化
が生じ変性し易い。また、溶剤分別法はクロロホルム等
のハロゲン化炭化水素を使用するため得られるＤＨＡ等
が食品や医薬の原料として不適当となる。さらに、クロ
マトグラフィー法は時間と費用がかかり非効率的であ
る。銀塩を用いる方法は、銀化合物が高価である。
藻類から分離精製するには、尿素付加法、分子蒸留法、
溶剤分別法、クロマトグラフィー法（例えば、特開平４
−９５０４８）、銀塩との錯体形成による抽出法（特開
平４−１０３５５８、特開平４−１５９３９８）等が知
られているが、これらの方法を工業的に採用するには、
種々の欠点がある。即ち、尿素付加法は、得られる高度
不飽和脂肪酸の純度が低く、分子蒸留法は重合や異性化
が生じ変性し易い。また、溶剤分別法はクロロホルム等
のハロゲン化炭化水素を使用するため得られるＤＨＡ等
が食品や医薬の原料として不適当となる。さらに、クロ
マトグラフィー法は時間と費用がかかり非効率的であ
る。銀塩を用いる方法は、銀化合物が高価である。
【０００５】本発明の目的は、微生物により産生された
高度不飽和脂肪酸を有機溶媒相互間に形成される２層へ
の分配を利用して簡易かつ安全に濃縮精製する方法を提
供することである。本発明の他の目的は、こうして得ら
れた部分精製高度不飽和脂肪酸を、医薬品または機能性
食品の素材として提供することにある。
高度不飽和脂肪酸を有機溶媒相互間に形成される２層へ
の分配を利用して簡易かつ安全に濃縮精製する方法を提
供することである。本発明の他の目的は、こうして得ら
れた部分精製高度不飽和脂肪酸を、医薬品または機能性
食品の素材として提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、海洋微細
藻類から高度不飽和脂肪酸を分離精製する工業的に有利
な方法を開発するため鋭意研究を進めたところ、有機溶
媒相互間で２層を形成するｎ−ヘプタンとメタノールを
用い、より極性の小さなｎ−ヘプタンと極性の大きなメ
タノールとの間で高度不飽和脂肪酸の分配が可能となる
ことを見いだした。即ち、高度不飽和脂肪酸はメタノー
ルよりもｎ−ヘプタンにより多く溶解するため、ｎ−ヘ
プタンとメタノールの混合溶液で高度不飽和脂肪酸を抽
出した後静置すると２層を形成し、高度不飽和脂肪酸は
ｎ−ヘプタンにより多く分配する。この分配の差を利用
して高度不飽和脂肪酸を簡易かつ容易に精製することが
できることを発見し、さらに研究を進めて本発明を完成
するに至った。
藻類から高度不飽和脂肪酸を分離精製する工業的に有利
な方法を開発するため鋭意研究を進めたところ、有機溶
媒相互間で２層を形成するｎ−ヘプタンとメタノールを
用い、より極性の小さなｎ−ヘプタンと極性の大きなメ
タノールとの間で高度不飽和脂肪酸の分配が可能となる
ことを見いだした。即ち、高度不飽和脂肪酸はメタノー
ルよりもｎ−ヘプタンにより多く溶解するため、ｎ−ヘ
プタンとメタノールの混合溶液で高度不飽和脂肪酸を抽
出した後静置すると２層を形成し、高度不飽和脂肪酸は
ｎ−ヘプタンにより多く分配する。この分配の差を利用
して高度不飽和脂肪酸を簡易かつ容易に精製することが
できることを発見し、さらに研究を進めて本発明を完成
するに至った。
【０００７】すなわち、本発明の要旨は、微生物により
生産された高度不飽和脂肪酸をメタノールに溶解させ、
次いで炭素原子数６〜８のアルカンを添加することによ
り該アルカンとメタノールとから構成される２層を形成
させ、２層間における分配を利用して高度不飽和脂肪酸
をアルカン層に濃縮して精製することを特徴とする高度
不飽和脂肪酸の精製方法、並びにこの方法により部分精
製された高度不飽和脂肪酸に関する。
生産された高度不飽和脂肪酸をメタノールに溶解させ、
次いで炭素原子数６〜８のアルカンを添加することによ
り該アルカンとメタノールとから構成される２層を形成
させ、２層間における分配を利用して高度不飽和脂肪酸
をアルカン層に濃縮して精製することを特徴とする高度
不飽和脂肪酸の精製方法、並びにこの方法により部分精
製された高度不飽和脂肪酸に関する。
【０００８】本発明における高度不飽和脂肪酸とは、特
に限定されるものではないが、通常不飽和結合４〜６個
を有する炭素原子数１８〜２２の脂肪酸を意味する。具
体的には、不飽和結合６個を有し炭素原子数２２のドコ
サヘキサエン酸（ＤＨＡ）、不飽和結合５個を有し炭素
原子数２０のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、不飽和
結合４個を有し炭素原子数１８のｃｉｓ−６，９，１
２，１５−オクタデカテトラエン酸等が挙げられる。
に限定されるものではないが、通常不飽和結合４〜６個
を有する炭素原子数１８〜２２の脂肪酸を意味する。具
体的には、不飽和結合６個を有し炭素原子数２２のドコ
サヘキサエン酸（ＤＨＡ）、不飽和結合５個を有し炭素
原子数２０のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、不飽和
結合４個を有し炭素原子数１８のｃｉｓ−６，９，１
２，１５−オクタデカテトラエン酸等が挙げられる。
【０００９】本発明で対象とされる、前記のような高度
不飽和脂肪酸は、微生物により生産されたものである。
ここでいう微生物とはこれらの高度不飽和脂肪酸の産生
能を有するものであれば特に限定されるものではない
が、海洋微細藻類、海洋微生物等が挙げられる。例え
ば、本発明者らの一人がＤＨＡ生産性海洋微細藻類とし
て発見したハプト藻に属するイソクリシス・ガルバナ
（Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎａ）、ツノケイ
藻に属するカエトセロス・グラシリス（Ｃｈａｅｔｏｃ
ｅｒｏｓ ｇｒａｃｉｌｉｓ）、カエトセロス・カルシ
トランス（Ｃｈａｅｔｏｃｅｒｏｓ ｃａｌｃｉｔｒａ
ｎｓ）、クリプト藻に属するクリプトモナス属菌（Ｃｒ
ｙｐｔｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）、その他パブロバ属菌
（Ｐａｖｌｏｖａｌｕｔｈｅｒｉ）およびクリコスファ
エラ属菌（Ｃｒｉｃｏｓｐｈａｅｒａｃａｒｔｅｒａ
ｅ）などを適当な条件下で培養して得られる藻体や菌体
中に含まれるものが挙げられる。また、エイコサペンタ
エン酸生産菌として知られる海洋微生物、例えばシュー
ドモナス属菌、アルテロモナス属菌、シーワネラ属菌等
の培養菌体中に含まれるもの（特開平４−１０３５５
８）等が挙げられる。
不飽和脂肪酸は、微生物により生産されたものである。
ここでいう微生物とはこれらの高度不飽和脂肪酸の産生
能を有するものであれば特に限定されるものではない
が、海洋微細藻類、海洋微生物等が挙げられる。例え
ば、本発明者らの一人がＤＨＡ生産性海洋微細藻類とし
て発見したハプト藻に属するイソクリシス・ガルバナ
（Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎａ）、ツノケイ
藻に属するカエトセロス・グラシリス（Ｃｈａｅｔｏｃ
ｅｒｏｓ ｇｒａｃｉｌｉｓ）、カエトセロス・カルシ
トランス（Ｃｈａｅｔｏｃｅｒｏｓ ｃａｌｃｉｔｒａ
ｎｓ）、クリプト藻に属するクリプトモナス属菌（Ｃｒ
ｙｐｔｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）、その他パブロバ属菌
（Ｐａｖｌｏｖａｌｕｔｈｅｒｉ）およびクリコスファ
エラ属菌（Ｃｒｉｃｏｓｐｈａｅｒａｃａｒｔｅｒａ
ｅ）などを適当な条件下で培養して得られる藻体や菌体
中に含まれるものが挙げられる。また、エイコサペンタ
エン酸生産菌として知られる海洋微生物、例えばシュー
ドモナス属菌、アルテロモナス属菌、シーワネラ属菌等
の培養菌体中に含まれるもの（特開平４−１０３５５
８）等が挙げられる。
【００１０】上記の菌体（以下、藻体を含めて菌体とい
う）中に含まれる高度不飽和脂肪酸は通常脂質の構成成
分として存在するので、まず菌体から脂質を抽出し、得
られた脂質をケン化して高度不飽和脂肪酸を遊離させた
後、本発明の精製方法に付するのが好ましい。菌体から
脂質を抽出するには、通常の方法によれば足り、特に限
定されるものではない。例えば、高度不飽和脂肪酸を含
む凍結乾燥菌体を適量のメタノール中に懸濁し、氷冷下
にNissei AM-77ホモゲナイザーによりホモゲナイズし、
必要があればこれを数回繰り返した後、得られる懸濁液
を合わせ、遠心分離（通常、約１２０００ｒｐｍ×３０
分）によりセルデブリスからなる沈澱物を除き、脂質を
含む上清画分を取得する。
う）中に含まれる高度不飽和脂肪酸は通常脂質の構成成
分として存在するので、まず菌体から脂質を抽出し、得
られた脂質をケン化して高度不飽和脂肪酸を遊離させた
後、本発明の精製方法に付するのが好ましい。菌体から
脂質を抽出するには、通常の方法によれば足り、特に限
定されるものではない。例えば、高度不飽和脂肪酸を含
む凍結乾燥菌体を適量のメタノール中に懸濁し、氷冷下
にNissei AM-77ホモゲナイザーによりホモゲナイズし、
必要があればこれを数回繰り返した後、得られる懸濁液
を合わせ、遠心分離（通常、約１２０００ｒｐｍ×３０
分）によりセルデブリスからなる沈澱物を除き、脂質を
含む上清画分を取得する。
【００１１】脂質成分をケン化する方法も特に限定され
るものではなく、例えば次のように行うことができる。
上記のようにして得られた脂質を含む上清画分を例にと
れば、上清画分のメタノールを留去し、得られる残留物
を適量のエタノールに溶かし、１Ｍ−水酸化カリウム、
水酸化ナトリウム等のアルカリ水溶液を適量添加し、約
８０℃において約１時間程加温する。ケン化の終了後、
塩酸を添加して中和し、溶媒を留去する。この残留物を
メタノールに溶かし、遠心分離（通常、約１２０００ｒ
ｐｍ×３０分）により不溶物を除く。
るものではなく、例えば次のように行うことができる。
上記のようにして得られた脂質を含む上清画分を例にと
れば、上清画分のメタノールを留去し、得られる残留物
を適量のエタノールに溶かし、１Ｍ−水酸化カリウム、
水酸化ナトリウム等のアルカリ水溶液を適量添加し、約
８０℃において約１時間程加温する。ケン化の終了後、
塩酸を添加して中和し、溶媒を留去する。この残留物を
メタノールに溶かし、遠心分離（通常、約１２０００ｒ
ｐｍ×３０分）により不溶物を除く。
【００１２】本発明に用いられる炭素原子数６〜８のア
ルカンとしては、メタノールと混合して２層を形成する
ものであれば何れでもよく、例えばｎ−ヘキサン、シク
ロヘキサン、ｎ−ヘプタン、およびｎ−オクタンからな
る群より選択される１種以上が挙げられる。これらは、
アルカン過剰の割合でメタノールと混合した場合に攪拌
後静置すると２層を形成し得る性質を有する。また、石
油エーテルを用いてもよい。具体的には、上記のアルカ
ンをそれぞれ単独で使用してもよく、混合溶媒として使
用してもよい。混合溶媒としては、ｎ−ヘキサンとｎ−
ヘプタンまたはｎ−オクタン、シクロヘキサンとｎ−ヘ
プタンまたはｎ−オクタン、あるいはｎ−ヘプタンとｎ
−オクタンの混合溶媒等が挙げられる。混合割合は、精
製しようとする目的の高度不飽和脂肪酸の種類や共存す
る不純物の性質に応じて、適宜変更可能である。
ルカンとしては、メタノールと混合して２層を形成する
ものであれば何れでもよく、例えばｎ−ヘキサン、シク
ロヘキサン、ｎ−ヘプタン、およびｎ−オクタンからな
る群より選択される１種以上が挙げられる。これらは、
アルカン過剰の割合でメタノールと混合した場合に攪拌
後静置すると２層を形成し得る性質を有する。また、石
油エーテルを用いてもよい。具体的には、上記のアルカ
ンをそれぞれ単独で使用してもよく、混合溶媒として使
用してもよい。混合溶媒としては、ｎ−ヘキサンとｎ−
ヘプタンまたはｎ−オクタン、シクロヘキサンとｎ−ヘ
プタンまたはｎ−オクタン、あるいはｎ−ヘプタンとｎ
−オクタンの混合溶媒等が挙げられる。混合割合は、精
製しようとする目的の高度不飽和脂肪酸の種類や共存す
る不純物の性質に応じて、適宜変更可能である。
【００１３】上記のアルカンとメタノールとを混合攪拌
した後静置すると２層を形成する。上層は主としてアル
カン層であり、下層は主としてメタノール層であるが、
アルカンは一部メタノールに溶解し、メタノールは一部
アルカンに溶解するため、両層とも混合溶媒となる。従
って、高度不飽和脂肪酸の分配は、実際はこれらの混合
溶媒に対する溶解度の差により決定されることになる。
した後静置すると２層を形成する。上層は主としてアル
カン層であり、下層は主としてメタノール層であるが、
アルカンは一部メタノールに溶解し、メタノールは一部
アルカンに溶解するため、両層とも混合溶媒となる。従
って、高度不飽和脂肪酸の分配は、実際はこれらの混合
溶媒に対する溶解度の差により決定されることになる。
【００１４】次に、本発明の骨子である高度不飽和脂肪
酸の精製方法について述べる。前記のようにしてケン化
して得られる高度不飽和脂肪酸を含む試料をまず適量の
メタノールに溶解する。こうして得られるメタノール溶
液にアルカンを添加し、攪拌した後静置すると２層系が
形成される。１回の抽出操作におけるアルカンの添加量
は、メタノール溶液とするのに用いたメタノール量に対
して通常１〜６倍量である。抽出操作は常法のとおり
で、振盪したのち静置し、２層に分液させたのちアルカ
ン層を取得する。メタノール層には、さらに新たなアル
カンを添加し抽出操作を繰り返す。抽出回数は特に限定
されるものではないが、通常３〜１０回であり、メタノ
ール層から高度不飽和脂肪酸が検出できなくなった時点
で終了する。アルカンまたはメタノールに例えば鉱酸や
酢酸を添加して溶液を酸性として抽出を行うと一層効率
的な抽出を行うことができる場合がある。電離していた
高度不飽和脂肪酸が酸に戻り、アルカン／メタノールの
分配比が高くなるからである。鉱酸や酢酸の添加量は通
常メタノールの５％以下、好ましくは０．１〜２％であ
る。上記の本発明の精製方法によれば、従来用いられて
きた有害なクロロホルム、メチレンクロライド等のハロ
ゲン化炭化水素溶媒を使用する必要がないというメリッ
トがある。
酸の精製方法について述べる。前記のようにしてケン化
して得られる高度不飽和脂肪酸を含む試料をまず適量の
メタノールに溶解する。こうして得られるメタノール溶
液にアルカンを添加し、攪拌した後静置すると２層系が
形成される。１回の抽出操作におけるアルカンの添加量
は、メタノール溶液とするのに用いたメタノール量に対
して通常１〜６倍量である。抽出操作は常法のとおり
で、振盪したのち静置し、２層に分液させたのちアルカ
ン層を取得する。メタノール層には、さらに新たなアル
カンを添加し抽出操作を繰り返す。抽出回数は特に限定
されるものではないが、通常３〜１０回であり、メタノ
ール層から高度不飽和脂肪酸が検出できなくなった時点
で終了する。アルカンまたはメタノールに例えば鉱酸や
酢酸を添加して溶液を酸性として抽出を行うと一層効率
的な抽出を行うことができる場合がある。電離していた
高度不飽和脂肪酸が酸に戻り、アルカン／メタノールの
分配比が高くなるからである。鉱酸や酢酸の添加量は通
常メタノールの５％以下、好ましくは０．１〜２％であ
る。上記の本発明の精製方法によれば、従来用いられて
きた有害なクロロホルム、メチレンクロライド等のハロ
ゲン化炭化水素溶媒を使用する必要がないというメリッ
トがある。
【００１５】前記の精製方法において、アルカン層また
はメタノール層中の高度不飽和脂肪酸の濃度を測定する
には、逆相ＨＰＬＣ法が便利である。例えば、次のよう
な測定条件により微量測定が可能である。島津製作所社
製ＬＣ８Ａ調製用液体クロマトグラフ装置を用い、カラ
ム：SynProPep RP-C18, 4.6 ×150mm 、流速（圧力）：
０．４ｍｌ／ｍｉｎ、溶媒：メタノール／水（０．１％
酢酸）＝９０：１０の一液溶出、検出：２１２ｎｍのＵ
Ｖの諸条件で測定する。各ピークは、ＤＨＡ等の標準品
のクロマトグラフィー上の溶出時間の比較とマススペク
トルにより同定することができる。
はメタノール層中の高度不飽和脂肪酸の濃度を測定する
には、逆相ＨＰＬＣ法が便利である。例えば、次のよう
な測定条件により微量測定が可能である。島津製作所社
製ＬＣ８Ａ調製用液体クロマトグラフ装置を用い、カラ
ム：SynProPep RP-C18, 4.6 ×150mm 、流速（圧力）：
０．４ｍｌ／ｍｉｎ、溶媒：メタノール／水（０．１％
酢酸）＝９０：１０の一液溶出、検出：２１２ｎｍのＵ
Ｖの諸条件で測定する。各ピークは、ＤＨＡ等の標準品
のクロマトグラフィー上の溶出時間の比較とマススペク
トルにより同定することができる。
【００１６】本発明の精製方法は上記のように簡易、迅
速、低コストかつ安全な方法であり、得られる高度不飽
和脂肪酸の純度は著しく高くなる。
速、低コストかつ安全な方法であり、得られる高度不飽
和脂肪酸の純度は著しく高くなる。
【００１７】本発明の精製方法により得られる高度不飽
和脂肪酸の構成成分は、原料となる海洋微細藻類や海洋
微生物の菌体中の高度不飽和脂肪酸の構成成分により定
まるものであり、本発明の精製方法は特定の高度不飽和
脂肪酸を選択的に濃縮することを目的とするものではな
い。
和脂肪酸の構成成分は、原料となる海洋微細藻類や海洋
微生物の菌体中の高度不飽和脂肪酸の構成成分により定
まるものであり、本発明の精製方法は特定の高度不飽和
脂肪酸を選択的に濃縮することを目的とするものではな
い。
【００１８】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明はこれらの実施例等によりなんら限定
されるものではない。
明するが、本発明はこれらの実施例等によりなんら限定
されるものではない。
【００１９】実施例１ ＤＨＡ含量の高いハプト藻Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａ
ｌｂａｎａ UTEX LB2307の乾燥菌体の調製 本発明者らの一人が先に発見した高ＤＨＡ含量のハプト
藻Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎａ UTEX LB2307
をフォトバイオリアクターを用いて培養し、藻体を得
た。ここにフォトバイオリアクターとは、例えば次のよ
うな培養装置をいう。即ち、アクリル製カラム（７０ｍ
ｍ×９００ｍｍ）を培養器とし、そこに外径１ｍｍの側
面から光が分散する処理を施した光ファイバーが１ｍｍ
間隔で６６１本挿入してある。ファイバーの両端は結束
してある。光源はキセノンランプ（３００Ｗ、ラフォー
レエンジニアリング社製）を用い、結束した光ファイバ
ーの一端から光を導入する。ファイバーに入射した光
は、ファイバー表面から光を放ちながらファイバーの中
を通って行く（Matsunaga T, Takeyama H, Sudo H, Oya
ma N, Ariura S, Takano H, Hirano M, BurgessJG, Sod
e K, Nakamura N (1991) Glutamate production from C
O2 by marinecya-nobacterium Synechococcus sp. usin
ga novel biosolar reactor employing light-diffusin
g optical fibers. ApplBiochem Biotechnol 28/29:157
-167）。ファイバー表面の光強度はキセノンランプの光
量を変化させることによって制御することができる。キ
セノンランプ光源装置は電圧によって光量を変化させる
ことが可能である。培養液へのガス供給は、リアクター
の底に取り付けた２つのノズル（φ２ｍｍ）を用いて、
８００ｍｌ／ｍｉｎの速度で行なう。
ｌｂａｎａ UTEX LB2307の乾燥菌体の調製 本発明者らの一人が先に発見した高ＤＨＡ含量のハプト
藻Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎａ UTEX LB2307
をフォトバイオリアクターを用いて培養し、藻体を得
た。ここにフォトバイオリアクターとは、例えば次のよ
うな培養装置をいう。即ち、アクリル製カラム（７０ｍ
ｍ×９００ｍｍ）を培養器とし、そこに外径１ｍｍの側
面から光が分散する処理を施した光ファイバーが１ｍｍ
間隔で６６１本挿入してある。ファイバーの両端は結束
してある。光源はキセノンランプ（３００Ｗ、ラフォー
レエンジニアリング社製）を用い、結束した光ファイバ
ーの一端から光を導入する。ファイバーに入射した光
は、ファイバー表面から光を放ちながらファイバーの中
を通って行く（Matsunaga T, Takeyama H, Sudo H, Oya
ma N, Ariura S, Takano H, Hirano M, BurgessJG, Sod
e K, Nakamura N (1991) Glutamate production from C
O2 by marinecya-nobacterium Synechococcus sp. usin
ga novel biosolar reactor employing light-diffusin
g optical fibers. ApplBiochem Biotechnol 28/29:157
-167）。ファイバー表面の光強度はキセノンランプの光
量を変化させることによって制御することができる。キ
セノンランプ光源装置は電圧によって光量を変化させる
ことが可能である。培養液へのガス供給は、リアクター
の底に取り付けた２つのノズル（φ２ｍｍ）を用いて、
８００ｍｌ／ｍｉｎの速度で行なう。
【００２０】フォトバイオリアクターにおける培養条件
は以下のとおりである。まず、光強度は培養中、一定の
範囲に制御される。一定の範囲とは、ファイバー表面の
光強度を３〜５μＥｍ-2ｓ-1の範囲で制御することを意
味する。培養温度は、２８℃、培養時間は５日間であ
る。培地はＥｐｐｌｅｙの培地（Eppley R Wら、J. Ex
p. Marine Biology and Ecology 1，191 (1967)）を用
いるのが便利である。Ｅｐｐｌｅｙの培地は、海水９０
０ｍｌと蒸留水１００ｍｌ中に５０．５ｍｇ ＫＮ
Ｏ3 、８．７ｍｇ Ｋ2 ＨＰＯ4 、１ｍｌの微量金属混
液、１ｍｌのビタミン混液から成る。微量金属混液の組
成は、蒸留水１リットルに１９．６ｍｇ ＣｕＳＯ4 ・
５Ｈ2 Ｏ、４４．０ｍｇ ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、２
０．０ｍｇ ＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ、３６０ｍｇ Ｍｎ
Ｃｌ2 ・４Ｈ2 Ｏ、１２．６ｍｇ Ｎａ2 ＭｏＯ4 ・２
Ｈ2 Ｏ、１０ｍｇ Ｆｅ−ＥＤＴＡであり、ビタミン混
液の組成は、２００ｍｇチアミン、１ｍｇビオチン、
０．２ｍｇビタミンＢ12である。種培養は、前培養した
培養液を遠心分離し、得られた細胞を用いる。
は以下のとおりである。まず、光強度は培養中、一定の
範囲に制御される。一定の範囲とは、ファイバー表面の
光強度を３〜５μＥｍ-2ｓ-1の範囲で制御することを意
味する。培養温度は、２８℃、培養時間は５日間であ
る。培地はＥｐｐｌｅｙの培地（Eppley R Wら、J. Ex
p. Marine Biology and Ecology 1，191 (1967)）を用
いるのが便利である。Ｅｐｐｌｅｙの培地は、海水９０
０ｍｌと蒸留水１００ｍｌ中に５０．５ｍｇ ＫＮ
Ｏ3 、８．７ｍｇ Ｋ2 ＨＰＯ4 、１ｍｌの微量金属混
液、１ｍｌのビタミン混液から成る。微量金属混液の組
成は、蒸留水１リットルに１９．６ｍｇ ＣｕＳＯ4 ・
５Ｈ2 Ｏ、４４．０ｍｇ ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、２
０．０ｍｇ ＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ、３６０ｍｇ Ｍｎ
Ｃｌ2 ・４Ｈ2 Ｏ、１２．６ｍｇ Ｎａ2 ＭｏＯ4 ・２
Ｈ2 Ｏ、１０ｍｇ Ｆｅ−ＥＤＴＡであり、ビタミン混
液の組成は、２００ｍｇチアミン、１ｍｇビオチン、
０．２ｍｇビタミンＢ12である。種培養は、前培養した
培養液を遠心分離し、得られた細胞を用いる。
【００２１】上記の条件で５日間培養した後、得られた
培養液を６０００Ｇで１０分間遠心分離し、ｐＨ９のホ
ウ酸緩衝液で洗浄し、凍結乾燥した。７０リットルの培
養液から２６ｇの凍結乾燥菌体が得られた。
培養液を６０００Ｇで１０分間遠心分離し、ｐＨ９のホ
ウ酸緩衝液で洗浄し、凍結乾燥した。７０リットルの培
養液から２６ｇの凍結乾燥菌体が得られた。
【００２２】実施例２ Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎａ UTEX LB2307の
乾燥菌体からの高度不飽和脂肪酸の抽出および精製 （１）高度不飽和脂肪酸の抽出 Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎａ UTEX LB2307の
乾燥菌体５００ｍｇを１０ｍｌのメタノール／クロロホ
ルム混液（２：１，ｖ／ｖ）に懸濁し、NisseiAM-77ホ
モゲナイザーを用いて、１１０００ＲＰＭ、１０分間の
条件で２回摩砕した。得られた懸濁液を１２０００ＲＰ
Ｍで３０分間遠心分離し、上清のメタノール溶液を得
た。
乾燥菌体からの高度不飽和脂肪酸の抽出および精製 （１）高度不飽和脂肪酸の抽出 Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎａ UTEX LB2307の
乾燥菌体５００ｍｇを１０ｍｌのメタノール／クロロホ
ルム混液（２：１，ｖ／ｖ）に懸濁し、NisseiAM-77ホ
モゲナイザーを用いて、１１０００ＲＰＭ、１０分間の
条件で２回摩砕した。得られた懸濁液を１２０００ＲＰ
Ｍで３０分間遠心分離し、上清のメタノール溶液を得
た。
【００２３】（２）抽出された脂質のケン化 上記のようにして得られたメタノール溶液のメタノール
を留去した後、残留物に９．５ｍｌのエタノールと０．
５ｍｌの１Ｍの水酸化カリウム水溶液を添加し、８０℃
に加温して１時間攪拌した。その後、塩酸で中和し、次
いで溶媒を留去した。得られた残留物をメタノールに溶
解し、１２０００ＲＰＭで３０分間遠心分離を行い、不
溶物を除いた後メタノールを留去して高度不飽和脂肪酸
を含む残留物（摩砕・ケン化物）を得た。
を留去した後、残留物に９．５ｍｌのエタノールと０．
５ｍｌの１Ｍの水酸化カリウム水溶液を添加し、８０℃
に加温して１時間攪拌した。その後、塩酸で中和し、次
いで溶媒を留去した。得られた残留物をメタノールに溶
解し、１２０００ＲＰＭで３０分間遠心分離を行い、不
溶物を除いた後メタノールを留去して高度不飽和脂肪酸
を含む残留物（摩砕・ケン化物）を得た。
【００２４】（３）ｎ−ヘキサン／メタノールまたはｎ
−ヘプタン／メタノール間の分配による高度不飽和脂肪
酸の精製 乾燥菌体の摩砕・ケン化物１４５ｍｇを１０ｍｌのメ
タノールに溶解した。この溶液のＨＰＬＣの溶出パター
ンを図１に示す。図１は、精製前の摩砕・ケン化物中に
含まれる高度不飽和脂肪酸の割合が３４％程度にすぎ
ず、６６％が不純物であることを示す。尚、ＨＰＬＣ
は、島津製作所製ＬＣ８Ａ調製用液体クロマトグラフ装
置を用い、試料１０μｌ、カラムSynProPep RP-C18, 4.
6 ×150mm 、流速（圧力）０．４ｍｌ／ｍｉｎ（５０ｋ
ｇｆ／ｃｍ2 ）、溶媒メタノール／水（０．１％酢酸）
＝９０：１０、室温の諸条件で行い、検出は島津製作所
製ＳＰＤ−６Ａ ＵＶ分光検出計を使用した（以下、同
様の条件である）。次いで４０ｍｌのｎ−ヘキサンを加
え、よく振り混ぜたのち静止し、２層に分離させた後、
上層であるｎ−ヘキサン層を分取し、メタノール層には
再度４０ｍｌのｎ−ヘキサンを加え２回目の抽出を行っ
た。同様にして合計３回の抽出を行い、抽出液を合わ
せ、ＨＰＬＣで抽出液の成分を分析した。その結果を図
２に示す。図１と図２とを比較するとｎ−ヘキサン／メ
タノール間の分配により、不純物の量が減少し、高度不
飽和脂肪酸の精製がかなり進んだことが分かる。図２に
おける高度不飽和脂肪酸の割合は、約５７％であり、不
純物の割合は約４３％に低下した。上記のｎ−ヘキサン
層の溶媒を留去し、残留物として部分精製高度不飽和脂
肪酸６０ｍｇを得た。
−ヘプタン／メタノール間の分配による高度不飽和脂肪
酸の精製 乾燥菌体の摩砕・ケン化物１４５ｍｇを１０ｍｌのメ
タノールに溶解した。この溶液のＨＰＬＣの溶出パター
ンを図１に示す。図１は、精製前の摩砕・ケン化物中に
含まれる高度不飽和脂肪酸の割合が３４％程度にすぎ
ず、６６％が不純物であることを示す。尚、ＨＰＬＣ
は、島津製作所製ＬＣ８Ａ調製用液体クロマトグラフ装
置を用い、試料１０μｌ、カラムSynProPep RP-C18, 4.
6 ×150mm 、流速（圧力）０．４ｍｌ／ｍｉｎ（５０ｋ
ｇｆ／ｃｍ2 ）、溶媒メタノール／水（０．１％酢酸）
＝９０：１０、室温の諸条件で行い、検出は島津製作所
製ＳＰＤ−６Ａ ＵＶ分光検出計を使用した（以下、同
様の条件である）。次いで４０ｍｌのｎ−ヘキサンを加
え、よく振り混ぜたのち静止し、２層に分離させた後、
上層であるｎ−ヘキサン層を分取し、メタノール層には
再度４０ｍｌのｎ−ヘキサンを加え２回目の抽出を行っ
た。同様にして合計３回の抽出を行い、抽出液を合わ
せ、ＨＰＬＣで抽出液の成分を分析した。その結果を図
２に示す。図１と図２とを比較するとｎ−ヘキサン／メ
タノール間の分配により、不純物の量が減少し、高度不
飽和脂肪酸の精製がかなり進んだことが分かる。図２に
おける高度不飽和脂肪酸の割合は、約５７％であり、不
純物の割合は約４３％に低下した。上記のｎ−ヘキサン
層の溶媒を留去し、残留物として部分精製高度不飽和脂
肪酸６０ｍｇを得た。
【００２５】乾燥菌体の摩砕・ケン化物１４５ｍｇを
１０ｍｌのメタノールに溶解し、ｎ−ヘキサンの代わり
にｎ−ヘプタンを用いてと同様な操作を６回繰り返し
た。得られたｎ−ヘプタン溶液を合わせ、ＨＰＬＣで抽
出液の成分を分析した。その結果を図３に示す。さら
に、６回抽出後のメタノール層を１％酢酸で酸性とし、
再度４０ｍｌのｎ−ヘプタンで４回抽出した。抽出液を
合わせ、ＨＰＬＣで抽出液の成分を分析した。その結果
を図４に示す。図３と図４とはほとんど同一の結果を示
しており、ｎ−ヘプタン層中の高度不飽和脂肪酸の割合
はいずれも約７５〜７６％であり、不純物は２４〜２５
％にすぎなかった。上記の６回抽出液、および６回抽出
後酸性下にさらに４回抽出して得た抽出液の溶媒を留去
し、残留物として、ＤＨＡとｃｉｓ−６，９，１２，１
５−オクタデカテトラエン酸をほぼ当量含む部分精製高
度不飽和脂肪酸４２ｍｇを得た。なお、再度の抽出操作
の後のメタノール層には、ＤＨＡもｃｉｓ−６，９，１
２，１５−オクタデカテトラエン酸もほとんど検出され
なかった。
１０ｍｌのメタノールに溶解し、ｎ−ヘキサンの代わり
にｎ−ヘプタンを用いてと同様な操作を６回繰り返し
た。得られたｎ−ヘプタン溶液を合わせ、ＨＰＬＣで抽
出液の成分を分析した。その結果を図３に示す。さら
に、６回抽出後のメタノール層を１％酢酸で酸性とし、
再度４０ｍｌのｎ−ヘプタンで４回抽出した。抽出液を
合わせ、ＨＰＬＣで抽出液の成分を分析した。その結果
を図４に示す。図３と図４とはほとんど同一の結果を示
しており、ｎ−ヘプタン層中の高度不飽和脂肪酸の割合
はいずれも約７５〜７６％であり、不純物は２４〜２５
％にすぎなかった。上記の６回抽出液、および６回抽出
後酸性下にさらに４回抽出して得た抽出液の溶媒を留去
し、残留物として、ＤＨＡとｃｉｓ−６，９，１２，１
５−オクタデカテトラエン酸をほぼ当量含む部分精製高
度不飽和脂肪酸４２ｍｇを得た。なお、再度の抽出操作
の後のメタノール層には、ＤＨＡもｃｉｓ−６，９，１
２，１５−オクタデカテトラエン酸もほとんど検出され
なかった。
【００２６】乾燥菌体の摩砕・ケン化物１４５ｍｇを
１％の酢酸を含む１５ｍｌのメタノールに溶解し、各２
５ｍｌのｎ−ヘプタンで５回抽出を行った。ｎ−ヘプタ
ン層を合わせ、ＨＰＬＣで抽出液の成分を分析した。そ
の結果を図５に示す。また、抽出後のメタノール層の成
分をもＨＰＬＣで分析した。その結果を図６に示す。図
５は、抽出液中の高度不飽和脂肪酸の割合が約６５％で
あり、不純物は約３５％にすぎないことを示す。一方、
抽出後のメタノール溶液中の高度不飽和脂肪酸の割合
は、図６でみる限り約１５％にすぎなかった。上記のｎ
−ヘプタン層の溶媒を留去し、残留物として、ＤＨＡと
ｃｉｓ−６，９，１２，１５−オクタデカテトラエン酸
をほぼ当量含む部分精製高度不飽和脂肪酸６０ｍｇを得
た。
１％の酢酸を含む１５ｍｌのメタノールに溶解し、各２
５ｍｌのｎ−ヘプタンで５回抽出を行った。ｎ−ヘプタ
ン層を合わせ、ＨＰＬＣで抽出液の成分を分析した。そ
の結果を図５に示す。また、抽出後のメタノール層の成
分をもＨＰＬＣで分析した。その結果を図６に示す。図
５は、抽出液中の高度不飽和脂肪酸の割合が約６５％で
あり、不純物は約３５％にすぎないことを示す。一方、
抽出後のメタノール溶液中の高度不飽和脂肪酸の割合
は、図６でみる限り約１５％にすぎなかった。上記のｎ
−ヘプタン層の溶媒を留去し、残留物として、ＤＨＡと
ｃｉｓ−６，９，１２，１５−オクタデカテトラエン酸
をほぼ当量含む部分精製高度不飽和脂肪酸６０ｍｇを得
た。
【００２７】実施例３ ｎ−オクタン／メタノール分配系による高度不飽和脂肪
酸の精製 乾燥菌体の摩砕・ケン化物１４５ｍｇを１０ｍｌのメタ
ノールに溶解し、ｎ−オクタン各４０ｍｌを用いて実施
例２（３）と同様な操作を６回繰り返した。得られた
ｎ−オクタン溶液を合わせ、溶媒を留去して３５ｍｇの
部分精製高度不飽和脂肪酸を得た。
酸の精製 乾燥菌体の摩砕・ケン化物１４５ｍｇを１０ｍｌのメタ
ノールに溶解し、ｎ−オクタン各４０ｍｌを用いて実施
例２（３）と同様な操作を６回繰り返した。得られた
ｎ−オクタン溶液を合わせ、溶媒を留去して３５ｍｇの
部分精製高度不飽和脂肪酸を得た。
【００２８】実施例４ ｎ−オクタン／ｎ−ヘプタン（１：１）／メタノール分
配系による高度不飽和脂肪酸の精製 乾燥菌体の摩砕・ケン化物１４５ｍｇを１０ｍｌのメタ
ノールに溶解し、ｎ−オクタン／ｎ−ヘプタン（１：
１）混合溶液各４０ｍｌを用いて実施例２（３）と同
様な操作を６回繰り返した。得られたｎ−オクタン／ｎ
−ヘプタン（１：１）混合溶液を合わせ、溶媒を留去し
て４０ｍｇの部分精製高度不飽和脂肪酸を得た。
配系による高度不飽和脂肪酸の精製 乾燥菌体の摩砕・ケン化物１４５ｍｇを１０ｍｌのメタ
ノールに溶解し、ｎ−オクタン／ｎ−ヘプタン（１：
１）混合溶液各４０ｍｌを用いて実施例２（３）と同
様な操作を６回繰り返した。得られたｎ−オクタン／ｎ
−ヘプタン（１：１）混合溶液を合わせ、溶媒を留去し
て４０ｍｇの部分精製高度不飽和脂肪酸を得た。
【００２９】実施例５ 石油エーテル／メタノール分配系による高度不飽和脂肪
酸の精製 乾燥菌体の摩砕・ケン化物１４５ｍｇを１０ｍｌのメタ
ノールに溶解し、石油エーテル各４０ｍｌを用いて実施
例２（３）と同様な操作を６回繰り返した。得られた
石油エーテル溶液を合わせ、溶媒を留去して３６ｍｇの
部分精製高度不飽和脂肪酸を得た。
酸の精製 乾燥菌体の摩砕・ケン化物１４５ｍｇを１０ｍｌのメタ
ノールに溶解し、石油エーテル各４０ｍｌを用いて実施
例２（３）と同様な操作を６回繰り返した。得られた
石油エーテル溶液を合わせ、溶媒を留去して３６ｍｇの
部分精製高度不飽和脂肪酸を得た。
【００３０】本発明の実施の態様としては、上記の実施
例のほか、以下の態様のものがある。 （１） 微生物により生産された高度不飽和脂肪酸をメ
タノールに溶解させ、次いで炭素原子数６〜８のアルカ
ンを添加することにより該アルカンとメタノールとから
構成される２層を形成させ、２層間における分配を利用
して高度不飽和脂肪酸をアルカン層に濃縮して精製する
ことを特徴とする高度不飽和脂肪酸の精製方法におい
て、２層間における分配を酸性下で行うことを特徴とす
る高度不飽和脂肪酸の精製方法。この方法によれば、本
発明の高度不飽和脂肪酸の精製をさらに効率的に行うこ
とが可能となる。メタノール中で電離している高度不飽
和脂肪酸が酸に戻り脂溶性が高くなるからである。
例のほか、以下の態様のものがある。 （１） 微生物により生産された高度不飽和脂肪酸をメ
タノールに溶解させ、次いで炭素原子数６〜８のアルカ
ンを添加することにより該アルカンとメタノールとから
構成される２層を形成させ、２層間における分配を利用
して高度不飽和脂肪酸をアルカン層に濃縮して精製する
ことを特徴とする高度不飽和脂肪酸の精製方法におい
て、２層間における分配を酸性下で行うことを特徴とす
る高度不飽和脂肪酸の精製方法。この方法によれば、本
発明の高度不飽和脂肪酸の精製をさらに効率的に行うこ
とが可能となる。メタノール中で電離している高度不飽
和脂肪酸が酸に戻り脂溶性が高くなるからである。
【００３１】
【発明の効果】本発明の方法によれば、微生物の産生す
る高度不飽和脂肪酸を、短時間で簡易かつ容易にしかも
極めて安全に濃縮精製することができる。また、こうし
て得られる部分精製高度不飽和脂肪酸は、医薬品または
機能性食品の優れた素材を提供する。
る高度不飽和脂肪酸を、短時間で簡易かつ容易にしかも
極めて安全に濃縮精製することができる。また、こうし
て得られる部分精製高度不飽和脂肪酸は、医薬品または
機能性食品の優れた素材を提供する。
【図１】図１は、Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎ
ａの凍結乾燥菌体の摩砕・ケン化物のメタノール溶液の
ＬＣ−８Ａ 調製用液体クロマトグラフィーを示す図で
ある。
ａの凍結乾燥菌体の摩砕・ケン化物のメタノール溶液の
ＬＣ−８Ａ 調製用液体クロマトグラフィーを示す図で
ある。
【図２】図２は、Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎ
ａ凍結乾燥菌体の摩砕・ケン化物を１０ｍｌメタノール
に溶解しｎ−ヘキサン各４０ｍｌで３回抽出した場合の
抽出液のＬＣ−８Ａ 調製用液体クロマトグラフィーを
示す図である。
ａ凍結乾燥菌体の摩砕・ケン化物を１０ｍｌメタノール
に溶解しｎ−ヘキサン各４０ｍｌで３回抽出した場合の
抽出液のＬＣ−８Ａ 調製用液体クロマトグラフィーを
示す図である。
【図３】図３は、Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎ
ａ凍結乾燥菌体の摩砕・ケン化物を１０ｍｌメタノール
に溶解しｎ−ヘプタン各４０ｍｌで６回抽出した場合の
抽出液のＬＣ−８Ａ 調製用液体クロマトグラフィーを
示す図である。
ａ凍結乾燥菌体の摩砕・ケン化物を１０ｍｌメタノール
に溶解しｎ−ヘプタン各４０ｍｌで６回抽出した場合の
抽出液のＬＣ−８Ａ 調製用液体クロマトグラフィーを
示す図である。
【図４】図４は、Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎ
ａ凍結乾燥菌体の摩砕・ケン化物を１０ｍｌメタノール
に溶解しｎ−ヘプタン各４０ｍｌで６回抽出した後、さ
らにメタノール層に１％酢酸を添加し、ｎ−ヘプタン各
４０ｍｌで４回抽出した場合の抽出液のＬＣ−８Ａ 調
製用液体クロマトグラフィーを示す図である。
ａ凍結乾燥菌体の摩砕・ケン化物を１０ｍｌメタノール
に溶解しｎ−ヘプタン各４０ｍｌで６回抽出した後、さ
らにメタノール層に１％酢酸を添加し、ｎ−ヘプタン各
４０ｍｌで４回抽出した場合の抽出液のＬＣ−８Ａ 調
製用液体クロマトグラフィーを示す図である。
【図５】図５は、Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎ
ａ凍結乾燥菌体の摩砕・ケン化物を１５ｍｌの１％酢酸
含有メタノールに溶解しｎ−ヘプタン各２５ｍｌで５回
抽出した場合の抽出液のＬＣ−８Ａ 調製用液体クロマ
トグラフィーを示す図である。
ａ凍結乾燥菌体の摩砕・ケン化物を１５ｍｌの１％酢酸
含有メタノールに溶解しｎ−ヘプタン各２５ｍｌで５回
抽出した場合の抽出液のＬＣ−８Ａ 調製用液体クロマ
トグラフィーを示す図である。
【図６】図６は、Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎ
ａ凍結乾燥菌体の摩砕・ケン化物を１５ｍｌの１％酢酸
含有メタノールに溶解しｎ−ヘプタン各２５ｍｌで５回
抽出した場合のメタノール層のＬＣ−８Ａ 調製用液体
クロマトグラフィーを示す図である。
ａ凍結乾燥菌体の摩砕・ケン化物を１５ｍｌの１％酢酸
含有メタノールに溶解しｎ−ヘプタン各２５ｍｌで５回
抽出した場合のメタノール層のＬＣ−８Ａ 調製用液体
クロマトグラフィーを示す図である。
Claims (3)
- 【請求項１】 微生物により生産された高度不飽和脂肪
酸をメタノールに溶解させ、次いで炭素原子数６〜８の
アルカンを添加することにより該アルカンとメタノール
とから構成される２層を形成させ、２層間における分配
を利用して高度不飽和脂肪酸をアルカン層に濃縮して精
製することを特徴とする高度不飽和脂肪酸の精製方法。 - 【請求項２】 １回の抽出操作におけるアルカンの使用
量がメタノールの使用量に対して１〜６倍量である請求
項１記載の精製方法。 - 【請求項３】 請求項１又は２記載の精製方法により部
分精製された高度不飽和脂肪酸。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4525194A JPH07228888A (ja) | 1994-02-17 | 1994-02-17 | 高度不飽和脂肪酸の精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4525194A JPH07228888A (ja) | 1994-02-17 | 1994-02-17 | 高度不飽和脂肪酸の精製方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07228888A true JPH07228888A (ja) | 1995-08-29 |
Family
ID=12714061
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4525194A Pending JPH07228888A (ja) | 1994-02-17 | 1994-02-17 | 高度不飽和脂肪酸の精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07228888A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8143383B2 (en) | 2001-01-25 | 2012-03-27 | Abbott Laboratories | Δ-6 desaturase and uses thereof |
-
1994
- 1994-02-17 JP JP4525194A patent/JPH07228888A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8143383B2 (en) | 2001-01-25 | 2012-03-27 | Abbott Laboratories | Δ-6 desaturase and uses thereof |
| US8143486B2 (en) | 2001-01-25 | 2012-03-27 | Abbott Laboratories | Delta-5 desaturase and uses thereof |
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