JPH0349688A

JPH0349688A - ジホモ―γ―リノレン酸の製造法および脂肪酸の△５位不飽和化反応抑制剤

Info

Publication number: JPH0349688A
Application number: JP18378989A
Authority: JP
Inventors: Toshiaki Nakajima; 中島　寿昭
Original assignee: Idemitsu Petrochemical Co Ltd
Current assignee: Idemitsu Petrochemical Co Ltd
Priority date: 1989-07-18
Filing date: 1989-07-18
Publication date: 1991-03-04
Anticipated expiration: 2013-04-15
Also published as: JP2740854B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明はジホモーγ−リノレン酸（Δ８，１１．１４エ
イコサトリエン酸）を発酵法により安価に大量生産する
方法および微生物や動物細胞の脂肪酸に対するΔ５位不
飽和化反応抑制剤に関する。

〔従来の技術および発明が解決しようとする課題〕ジホ
モーγ−リノレン酸を生産する方法として、グルコース
を主原料とする培地にゴマ油を添加してモルティエレラ
属微生物を培養することにより、ジホモ−γ−リノレン
酸を含む脂質を生産する方法が知られている（Ｈ．Ｙａ
ｍａｄａ．　ｅｔ　ａｔ．，　Ｊ．＾ｍ　ＯｉｌＣｈｅ
ｗ．　　Ｓｏｃ．，　　Ｖｏｌ　　６６．　　ｐ２３７
〜２４１（１９８９））。

また、脂肪酸のΔ５位不飽和化反応抑制剤としては、ゴ
マ油中のセサ果ン．エビセサミンが知られている（ｌｌ
．Ｙａｍａｄａ．　ｅｔ　ａｌ．＋日本農芸化学会誌６
３巻，　ｐ６７６（１９８９））．Ｌかしながら、セサ
ミンやエビセサミンの純品を大量に採ることはコスト的
に高く、実用性に劣るという欠点があった。

〔課題を解決するための手段〕

そこで、本発明者らはジホモ−γ−リノレン酸の発酵法
による大量生産について鋭意研究した結果、特定の化合
物を培地に添加することにより目的を達威できること、
並びに該化合物が脂肪酸のΔ５位不飽和化反応を抑制す
る作用を有することを見出し、本発明を完或するに至っ
た。

すなわち、本発明はジホモーγ−リノレン酸生産能を有
する微生物を、クルクミンを添加した培地で培養し、培
養物からジホモ−γ−リノレン酸を採取することを特徴
とするジホモ−γ−リノレン酸の製造法、およびクルク
ミンを主成分とする脂肪酸のΔ５位不飽和化反応抑制剤
を提供するものである。

本発明で使用する微生物は、ジホモーγ−リノレン酸生
産能を有するものであればよく、例えばコニディオボラ
ス属やモルティエレラ属に属するジホモ−γ−リノレン
酸生産能を有する微生物を挙げることができる。具体的
には、コニディオボラス・ナノデス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂ
ｏｌｕｓ　ｎａｎｏｄｅｓ）ＣＢＳ　１８３／６２＋コ
ニディオボラス・ランプラウジエス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂ
ｏｌｕｓ貝肚■ｕ聾）ＡＴＣＣ　１２５８５．モルティ
エレラ・アルビナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　紅鮭並）
　ＩＦ０　８５６８等が挙げられる。

本発明では、上記微生物を培養してジホモ−γリノレン
酸を製造するための培地に、クルクミンを含むことが必
須である。クルクミンはウコンに含まれる黄色色素の主
成分であり、入手が容易である上に、純品も安価で手に
入る。ウコンはカレー粉，たくあん．漬物等の着色料と
して用いられており、その安全性にも問題はない。培地
に添加するクルクミンは、ウコン粉末またはクルクミン
純品のいずれであってもよいが、不純物等の影響を考慮
するとクルクミン純品の方が好ましい。

クルクミンの添加量は培地Ｉｆあたり０．０１〜ｉ　ｏ
　ｇ，好ましくは０．０５〜２ｇである。クルクミンの
添加方法は、エタノールやジクロロメタンなどの適当な
溶媒に溶解して添加することもできるが、培地の炭素源
として用いる油脂に均一に混合して添加するのが好まし
い。また、添加する時期は培養を始める前が好ましいが
、培養途中から加えてもよい。

上記微生物を培養するための培地としては、炭素源，窒
素源，無機塩類などを含むものが用いられる。炭素源と
しては、ブドウ糖．オリーブ油，サフラワー油，γ−リ
ノレン酸含有油などの炭水化物や油脂等が用いられる。

ここでγ−リノレン酸含有油としては、月見草油，るり
じさ油等の植物油：モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅ
ｌｌａ）属，ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属，カニンガメラ
（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｓ＋ｅｌｌａ）属等に属する糸状
菌から抽出された微生物油があげられる．また、窒素源
としては酵母エキス，ベプトン．大豆粕などの有機窒素
源が好ましく、無機塩類としてはリン酸カリウム（ＫＨ
！ＰＯ．），＆塩（Ｆ　ｅ　Ｓ　０４　・７　ＨｚＯ）
．？グネシウム塩（Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ．　−　７　Ｈ．Ｏ
）．亜鉛塩（ＺｎＳＯ．）などが用いられる。その他、
必要に応じて微量元素や栄養源を添加することもできる
。

上記微生物の培養は通常、液体培地にて振とう培養や通
気撹拌培養などにより行なわれる。培養条件は培養温度
ｌＯ〜４０゜Ｃ１好ましくは２０〜３０″Ｃ１培養日数
は１〜２０日であり、コニディオボラス属に属する微生
物を用いる場合は３〜１０日が好ましいが、これらの条
件は用いる微生物の性質等を考慮してジホモ〜Ｔ−リノ
レン酸の生産量が高くなるように設定すればよい。

このようにして培養物中にジホモーγ−リノレン酸が生
産されるので、培養物からジホモ−γリノレン酸を採取
する。ジホモ−γ−リノレン酸は培養物よりそのまま採
取してもよいが、培養物には炭素源として加えた油脂等
が含まれるため、培養物より菌体を分離し、この菌体か
らジホモーγ−リノレン酸を採取するのが好ましい。ジ
ホモーｒ−リノレン酸の採取は、溶媒抽出やクロマトグ
ラフイーなどの常法により行なわれる。

次に、本発明の脂肪酸のΔ５位不飽和化反応抑制剤につ
いて説明する。本発明でぃうΔ５位不飽和化反応とは、
例えばジホモーγ−リノレン酸からアラキドン酸への変
換反応を指す。

本発明の脂肪酸のΔ５位不飽和化反応抑制剤は、クルク
ミンを主成分とするものである。その使用にあたっては
、微生物や動物細胞に脂肪酸を加えたものにクルクミン
を０．Ｏｌ〜ｌｏｏ■／ｇ乾燥菌体、好ましくは０．１
〜２０■／ｇ乾燥菌体添加すればよく、これにより微生
物や動物細胞の脂肪酸に対するΔ５位不飽和化反応を抑
制することができる．〔実施例〕次に、本発明を実施例により説明するが、本発明はこれ
らによって制限されるものではない。

比較例ｌ第１表に示した組戒の培地に炭素源として１６％γ−リ
ノレン酸含有油（オレイン酸４０％．リノール酸１０％
．Ｔ−リノレン酸１６％）を３０ｇ／ｌ加えた培地を作
製した。この培地Ｌｏｏｍを５００−の三角フラスコに
入れ、１２１″Ｃで１５分間滅菌処理した。このフラス
コにコニディオボラス・ナノデスＣＢ５　１８３／６２
を接種し、３０゜Ｃで４日間振とう培養した．第１表　培地組或ＫＨ．ＰＯ．Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏａ・　７　Ｈ２０ペブトンイーストエキストラクＦｅ　ＳＯ４・７　Ｈ２０３ｇＩｇ１０ｇト　　　　　　　　　　　５　ｇ０．０１ｇ培養終了後、遠心分離により菌体を集菌し、リン酸緩衝
液（ｐＨ　７．　０　）を用いて洗浄した後、吸引ろ過
により菌体を採取した。この菌体をアルξ製のカップに
入れ、ガラスビーズ，メタノール．クロロホルムを加え
てホモジナイザーで菌体を破砕し、菌体内の脂質を抽出
した。抽出した脂質をＢＰ，−メタノールを用いてメチ
ルエステル化して、ガスクロマトグラフィーにより脂肪
酸組戒を調べた結果を第２表に示す。

なお、ジホモーγ−リノレン酸の同定は以下の方法によ
り行なった。ジホモーγ−リノレン酸の標品と本サンプ
ルを混合してキャビラリーガスクロマトグラフィー（カ
ラム：ＰＥＧ２０Ｍ）で分析したところ、ジホモ−γ−
リノレン酸両分のピークが大きくなった。また、本サン
プルを硝酸銀含浸薄層クロマトグラフィーによりトリエ
ン画分を分取した。この画分にはＴ−リノレン酸とジホ
モ−γ−リノレン酸が含まれていた。分取したトリエン
画分から液体クロマトグラフィー（カラム：　ＯＤＳ）
によりジホモ−γ−リノレン酸を分取した。このジホモ
−γ−リノレン酸をピコリニルｍ４体化し、キャピラリ
ーガスマススペクトラムにより同定した．その結果、Δ
Ｂ，１１．１４エイコサトリエン酸、すなわちジホモ−
γ−リノレン酸であることが確認された。

実施例ｌ比較例１と同様の培地を作成し、これに第２表に示した
所定量のクルクごンを添加した。添力ｎ方注は、所定量
のクルクミンをエタノールに溶解したものを５００−フ
ラスコに入れ、さらに１６％Ｔ−リノレン酸含有油３ｇ
を加え、窒素気流下でエタノールをとばしてクルクミン
を油に混合した後、ここに第１表に示した培地をｌＯＯ
ＩＲ１加えて培地を作成した。この培地を滅菌後、コニ
ディオボラス・ナノデスＣＢ３１８３／６２を接種し、
３０゜Ｃで４日間振とう培養した。培養終了後、比較例
ｌと同様の方法で菌体内脂質の脂肪酸組成を分析した。

この結果を第２表に示す。

第２表第２表より明らかなように、クルクミンの添加によって
ジホモーγ−リノレン酸の含有率が顕著に上昇し、アラ
キドン酸の含有率が相対的に低下しており、Δ５位不飽
和化反応が特異的に阻害されていることがわかった。

実施例２および比較例２第１表に示した培地にグルコース１０ｇ／ｆｆｉとｌ６
％Ｔ−リノレン酸油２０ｇ／ｌを加えた培地（比較例２
）および前記比較例２の培地に実施例ｌと同様の方法に
よりクルクミン０．３ｇ／／！を加えた培地（実施例２
）を作威し、１　２　１　’Ｃで１５分間滅菌した。こ
の培地にコニディオポラス・ナノデスＣＢ５　１８３／
６２を接種し、３０’Ｃで４日間振とう培養した。培養
終了後、比較例ｌと同様の方法で菌体内脂質の脂肪酸組
成を分析した。この結果を第３表に示す。

実施例３第ｌ表に示した培地の３倍濃度の培地に１６％γ−リノ
レン酸含有油を９０ｇ／ｌ加え、さらにクルクミンを実
施例１と同様の方法により０．５ｇ／１加えた培地を作
戒した。この培地６ｌを１０ｌジャーファメンターに入
れ、ｌ　２　１　’Ｃで１５分間滅薗した。次いで、コ
ニディオボラス・ナノデスＣＢ３　１８３／６２を第１
表に示した培地にｌ６％Ｔリノレン酸含有油３　０　ｇ
，＃を加えた培地６００一で前培養したものを、上記ジ
ャーファメンターに全量接種し、３０″Ｃで４日間通気
攪拌培養した。

培養終了後、比較例ｌと同様の方法で菌体内脂質の脂肪
酸組戒を分析した。その結果、アラキドン酸含有率はｌ
Ｏ％．ジホモ−γ−リノレ〉′酸含有率は１５％，ジホ
モーγ−リノレン酸収量は培地ｍｅあたり３．３ｇであ
った。

実施例４実施例ｌにおいて、添加したクルクミン量をＯ．ｇ／ｌ
としたことおよび接種した微生物をコニディオボラス・
ランプラウジエスＡＴＣＣ　１２５８５としたこと以外
は実施例ｌと同様の操作を行なった。

その結果、菌体収量は２０．３ｇ／Ｎ，油脂収量は６．
０ｇ／ｆｆｉ，ジホモ−γ−リノレン酸含有率は９．０
％．ジホモ−γ−リノレン酸収量は０．５４ｇ／２，”
７ラキドン酸含有率は８．８％であった。

実施例５．６および比較例３，４第１表に示した培地にｌ６％Ｔ−リノレン酸含有油３０
ｇ／１添加した培地（比較例３．４），第１表に示した
培地にｌ６％γ−リノレン酸含有油３　０　ｇ／ｌおよ
びクルクミン０．５ｇ７１添加した培地（実施例５．６
）を作戒し、これらの培地にモルティエレラ・アルビナ
ＩＰ０　８５６Ｂまたはモルティエレラ・エロンガータ
ＩＦＯ　８５７０　ヲｔｌ＋ｆｆｌし、２０゜Ｃで第４
表に示した所定日数振とう培養した。培養終了後、比較
例ｌと同様の方法で菌体内脂質の脂肪酸組成を分析した
。この結果を第４表に示す．表より明らかなように、モルティエレラ属微生物を用い
た場合においてもアラキドン酸よりもジホモーγ−リノ
レン酸含有率の高い油脂を得ることができた。

〔発明の効果〕

本発明によれば、微生物菌体内のアラキドン酸含有率を
下げ、ジホモ−γ−リノレン酸含有率を上げることがで
きるので、ジホモ−γ−リノレン酸を効率よく安価に大
量生産できる．また、本発明によれば脂肪酸のΔ５位不
飽和化反応を低コストに抑制することができる。得られ
たジホモーγリノレン酸は医薬，生化学用試薬として有
用である。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ジホモ−γ−リノレン酸生産能を有する微生物を
、クルクミンを添加した培地で培養し、培養物からジホ
モ−γ−リノレン酸を採取することを特徴とするジホモ
−γ−リノレン酸の製造法。
（２）クルクミンを主成分とする脂肪酸のΔ５位不飽和
化反応抑制剤。