JPH072119B2 - 牛乳中の抗生物質の測定用試験セット及び牛乳中の抗生物質の測定方法 - Google Patents
牛乳中の抗生物質の測定用試験セット及び牛乳中の抗生物質の測定方法Info
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- JPH072119B2 JPH072119B2 JP63086222A JP8622288A JPH072119B2 JP H072119 B2 JPH072119 B2 JP H072119B2 JP 63086222 A JP63086222 A JP 63086222A JP 8622288 A JP8622288 A JP 8622288A JP H072119 B2 JPH072119 B2 JP H072119B2
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は牛乳中の抗生物質の測定に適した試験セットに
関する。本発明は、さらに該試験セットに使用されるべ
き新規ストレプトコッカス テルモフィラス（Streptoc
occus thermophilus）菌株、及び前記試験セットによる
牛乳中の抗生物質の測定法に関する。
関する。本発明は、さらに該試験セットに使用されるべ
き新規ストレプトコッカス テルモフィラス（Streptoc
occus thermophilus）菌株、及び前記試験セットによる
牛乳中の抗生物質の測定法に関する。
数多い状況の中で、少量の抗生物質の存在を検出できる
ことは、きわめて重大なことである。例えば、食品産業
の場合には、動物の治療の際の抗生物質及び化学療法剤
の増大した使用により、簡便で信頼性が高く且つ感度の
良い測定方法が必要になっている。抗生物質が乳牛の治
療にも使用されるため、そして牛乳中の残留抗生物質が
健康に危険をもたらしうること及び食品科学技術上の理
由から不利益でありうることの両方のため、正確で迅速
な牛乳のスクリーニングに適した方法の開発が特に重要
である。
ことは、きわめて重大なことである。例えば、食品産業
の場合には、動物の治療の際の抗生物質及び化学療法剤
の増大した使用により、簡便で信頼性が高く且つ感度の
良い測定方法が必要になっている。抗生物質が乳牛の治
療にも使用されるため、そして牛乳中の残留抗生物質が
健康に危険をもたらしうること及び食品科学技術上の理
由から不利益でありうることの両方のため、正確で迅速
な牛乳のスクリーニングに適した方法の開発が特に重要
である。
牛乳中の残留抗生物質は、一般に、菌が寒天培地上で酸
を産生し、退色し、増殖できるという事実を利用する微
生物学的方法により、測定されている。これらの方法
は、特定の微生物に対する抗生物質の殺菌性、阻害性及
び形態学的効果に基づいている。
を産生し、退色し、増殖できるという事実を利用する微
生物学的方法により、測定されている。これらの方法
は、特定の微生物に対する抗生物質の殺菌性、阻害性及
び形態学的効果に基づいている。
サーモカルト ディスク（Thermocult disk）法は、フ
ィンランドで広く使用され、公定の抗生物質測定法とし
て受け入れられている寒天拡散法である。この方法にお
いて、試験微生物はビー・ステアロテルモフィラス・バ
ー・カリドラクティス（B.Stearothermophilus var.cal
idolactis）である。それはIDF標準方法［IDF1970年
平板試験法による牛乳中のペニシリン検出（Detection
of penicillin in Milk by a Disk Assay Techniqu
e）、国際標準FIL−IDF57ブルッセル］に基づいて開発
された。
ィンランドで広く使用され、公定の抗生物質測定法とし
て受け入れられている寒天拡散法である。この方法にお
いて、試験微生物はビー・ステアロテルモフィラス・バ
ー・カリドラクティス（B.Stearothermophilus var.cal
idolactis）である。それはIDF標準方法［IDF1970年
平板試験法による牛乳中のペニシリン検出（Detection
of penicillin in Milk by a Disk Assay Techniqu
e）、国際標準FIL−IDF57ブルッセル］に基づいて開発
された。
対応感度の方法は、バンオーエス（Van OS）氏等著、
「牛乳中の残留抗生物質の測定の為の拡散試験（Diffus
ion Test for the Determination of Antibiotic Resid
ues in Milk）」「ネザーランド ミルク アンド デ
ァリィ ジェイ（Neth.Milk and Dairy J.）第29巻 16
頁 1975年］に開示されている。該検出試験もまたビー
・ステロテルモフィラス・バー・カリドラクティス（B.
Stearothermophilus var. calidolactis）を試験微生物
として使用する。アンプル中の寒天培地上に試料（0.1m
l）をピペットで測りこみ、栄養素及びpH指示薬を含む
タブレットを該アンプルに加える。この方法は、試験微
生物の酸産生能力に基づくものである。アンプルを64℃
で２時間半培養する。寒天培地層の色の変化に基づいて
評価する。
「牛乳中の残留抗生物質の測定の為の拡散試験（Diffus
ion Test for the Determination of Antibiotic Resid
ues in Milk）」「ネザーランド ミルク アンド デ
ァリィ ジェイ（Neth.Milk and Dairy J.）第29巻 16
頁 1975年］に開示されている。該検出試験もまたビー
・ステロテルモフィラス・バー・カリドラクティス（B.
Stearothermophilus var. calidolactis）を試験微生物
として使用する。アンプル中の寒天培地上に試料（0.1m
l）をピペットで測りこみ、栄養素及びpH指示薬を含む
タブレットを該アンプルに加える。この方法は、試験微
生物の酸産生能力に基づくものである。アンプルを64℃
で２時間半培養する。寒天培地層の色の変化に基づいて
評価する。
標準的な方法には、さらにインターテスト（Intertes
t）（BCP−試験）がある。その方法に使用される試験細
菌は、ストレプトコッカス テルモフィラス（Streptoc
occus thermophilus）である。試験細菌の凍結乾燥培養
菌、栄養素、及びpH指示薬（ブロモクレゾールパーブ
ル）が入った試験用タブレットを牛乳試料に添加する。
培養時間は45℃で４時間である。試料に抗生物質が含ま
れていない場合、溶液の色は青色から緑色に変化し、さ
らに黄色に変化する。抗生物質の量は、カラーマップと
色を比較することに基づいてある程度まで測定可能であ
る［ソログート（THOROGOOD）氏等著、「チャーム テ
スト（Charm Test）の評価−牛乳中のペニシリンの検出
の為の迅速な方法（An Evaluation on the Charm Test
−A Rapid Method for the Detection of Penicillin i
n Milk）」ジェイ・デァリィ・リサーチ（J.Dairy Rese
arch）第50巻 185頁 1983年］。
t）（BCP−試験）がある。その方法に使用される試験細
菌は、ストレプトコッカス テルモフィラス（Streptoc
occus thermophilus）である。試験細菌の凍結乾燥培養
菌、栄養素、及びpH指示薬（ブロモクレゾールパーブ
ル）が入った試験用タブレットを牛乳試料に添加する。
培養時間は45℃で４時間である。試料に抗生物質が含ま
れていない場合、溶液の色は青色から緑色に変化し、さ
らに黄色に変化する。抗生物質の量は、カラーマップと
色を比較することに基づいてある程度まで測定可能であ
る［ソログート（THOROGOOD）氏等著、「チャーム テ
スト（Charm Test）の評価−牛乳中のペニシリンの検出
の為の迅速な方法（An Evaluation on the Charm Test
−A Rapid Method for the Detection of Penicillin i
n Milk）」ジェイ・デァリィ・リサーチ（J.Dairy Rese
arch）第50巻 185頁 1983年］。
牛乳生産技術の必要性から見ると、これらの方法の欠点
は、それらの感度が不充分であることである。
は、それらの感度が不充分であることである。
化学的若しくは物理化学的な方法による牛乳中の残留抗
生物質の測定は、通常微生物学的方法に比べてほとんど
用いられない。比色測定法及びクロマトグラフィ法は、
熟練者並びに、しばしば複雑で高価な分析装置を必要と
する。該方法はルーチン分析には殆んど適さない。
生物質の測定は、通常微生物学的方法に比べてほとんど
用いられない。比色測定法及びクロマトグラフィ法は、
熟練者並びに、しばしば複雑で高価な分析装置を必要と
する。該方法はルーチン分析には殆んど適さない。
チャーム テスト（Charm test）「チャーム エス・イ
ー（CHARM,S.E.）氏著、「ペニシリン及び他の抗生物質
のための15分試験（A15−minute Assay for Penicillin
and other Antibiotics）」カルチャード デァリィ
プロダクツ ジェイ（Cultured Dairy Products J.）第
14巻 24頁1979年］は放射能の検出に基づいている。ビ
ー・ステアロサーモフィルス（B.stearothermo-philu
s）培養菌の凍結乾燥培養菌及び凍結乾燥した14Cで標識
ペニシリンを試料に添加する。該菌の細胞に含まれる14
Cの量をガイガーカウンターにより検出する；試料のペ
ニシリン濃度が低い程、ガイガーカウンターの読みは高
くなる。検出時間はわずか15分であり、且つこの方法の
感度は、0.005I.U.ペニシリン/mlである。この方法もま
たルーチン使用には適さないばかりでなく該方法は高価
で、複雑で、且つ、実施するためには、熟練者、及び高
価な装置を必要とする。
ー（CHARM,S.E.）氏著、「ペニシリン及び他の抗生物質
のための15分試験（A15−minute Assay for Penicillin
and other Antibiotics）」カルチャード デァリィ
プロダクツ ジェイ（Cultured Dairy Products J.）第
14巻 24頁1979年］は放射能の検出に基づいている。ビ
ー・ステアロサーモフィルス（B.stearothermo-philu
s）培養菌の凍結乾燥培養菌及び凍結乾燥した14Cで標識
ペニシリンを試料に添加する。該菌の細胞に含まれる14
Cの量をガイガーカウンターにより検出する；試料のペ
ニシリン濃度が低い程、ガイガーカウンターの読みは高
くなる。検出時間はわずか15分であり、且つこの方法の
感度は、0.005I.U.ペニシリン/mlである。この方法もま
たルーチン使用には適さないばかりでなく該方法は高価
で、複雑で、且つ、実施するためには、熟練者、及び高
価な装置を必要とする。
従って、可能なかぎり広域抗菌スペクトルの感度の良い
方法に対するまだ実用上の要求がある。該方法はまた簡
便でなければならないし、直ちに使用できるように調整
された装置によって該方法を実施することが可能でなけ
ればならない。該装置による試験は熟練者を必要としな
いし、例えば農場でも実施することができる。
方法に対するまだ実用上の要求がある。該方法はまた簡
便でなければならないし、直ちに使用できるように調整
された装置によって該方法を実施することが可能でなけ
ればならない。該装置による試験は熟練者を必要としな
いし、例えば農場でも実施することができる。
これらの利益は、本発明に従う試験セットにより得られ
る。本発明は、該試験セットがストレプトコッカス テ
ルモフィラス（Streptococcus thermophilus）T101濃縮
物及び水性保護剤からなり、該菌の水性保護剤への希釈
率が４〜５×10-2であることを特徴とする。
る。本発明は、該試験セットがストレプトコッカス テ
ルモフィラス（Streptococcus thermophilus）T101濃縮
物及び水性保護剤からなり、該菌の水性保護剤への希釈
率が４〜５×10-2であることを特徴とする。
本発明に従って、測定を次のように実施する；即ち、ス
トレプトコッカス テルモフィラス（Streptococcus th
ermophilus）T101濃縮物、水性保護剤（該濃縮物の保護
剤への希釈率は４〜５×10-2である）及び、場合によ
り、指示薬からなる試験セットに試料に加え、もし前記
試験セットに指示薬が含まれていない場合、指示薬も加
え； 38〜42℃で約４時間、試験セット及び試料を培養し；そ
して 色調を評価する。
トレプトコッカス テルモフィラス（Streptococcus th
ermophilus）T101濃縮物、水性保護剤（該濃縮物の保護
剤への希釈率は４〜５×10-2である）及び、場合によ
り、指示薬からなる試験セットに試料に加え、もし前記
試験セットに指示薬が含まれていない場合、指示薬も加
え； 38〜42℃で約４時間、試験セット及び試料を培養し；そ
して 色調を評価する。
本発明は新規ストレプトコッカス テルモフィラス（St
reptococcus thermophilus）T101菌株に基づいており、
その菌株は、バリオ（Valio）のラミー（Lammi）バター
チーズ製造所で分離された。該菌株は、寄託番号DSM第4
022番なる番号で1987年３月３日にドイツの微生物寄託
収集機関（the Deutsche Sammlung von Mikro−organis
men）に寄託された。そして、該菌株は次の特性を有す
る： グラム陽性； 長い連鎖状の球菌を形成する； 増殖温度： 50℃で増殖し、10℃で増殖しない； 塩抵抗性： 濃度２％のNaClで増殖し、濃度6.5％のＮ aClで増殖しない； 42℃で７時間培養した後の滴定酸度： 25〜29°SH（滅菌済10％粉乳牛乳）； 乳酸％： 0.8％（42℃で２日間培養、粉乳牛乳より） ラクトース、サッカロース及びグルコースを発酵する。
reptococcus thermophilus）T101菌株に基づいており、
その菌株は、バリオ（Valio）のラミー（Lammi）バター
チーズ製造所で分離された。該菌株は、寄託番号DSM第4
022番なる番号で1987年３月３日にドイツの微生物寄託
収集機関（the Deutsche Sammlung von Mikro−organis
men）に寄託された。そして、該菌株は次の特性を有す
る： グラム陽性； 長い連鎖状の球菌を形成する； 増殖温度： 50℃で増殖し、10℃で増殖しない； 塩抵抗性： 濃度２％のNaClで増殖し、濃度6.5％のＮ aClで増殖しない； 42℃で７時間培養した後の滴定酸度： 25〜29°SH（滅菌済10％粉乳牛乳）； 乳酸％： 0.8％（42℃で２日間培養、粉乳牛乳より） ラクトース、サッカロース及びグルコースを発酵する。
従来技術で与えられる価から判断すると、上記新規微生
物菌株は明らかに公知のストレプトコッカス テルモフ
ィラス（Streptococcus thermophilus）菌株より一層感
度が良く、特にペニシリン及びオキシテトラサイクリン
に対して感度が良い。
物菌株は明らかに公知のストレプトコッカス テルモフ
ィラス（Streptococcus thermophilus）菌株より一層感
度が良く、特にペニシリン及びオキシテトラサイクリン
に対して感度が良い。
本試験セットは以下の方法で調製される：前記新規微生
物菌株を、ホエーパーミエート（Whey permeate）ベー
ス培地中で、pH6.2〜6.5でかつ38〜42℃で発酵槽中で増
殖する。増殖を観察し、対数的増殖段階の最終時で増殖
を停止する。その後培養ブロスを20倍の濃度まで過に
よって濃縮する。該濃縮物を、保護剤中に、希釈率が約
４〜５×10-2、好ましくは約５×10-2になるように測
る。保護剤は、凍結乾燥微生物試料の調製に使用される
水性保護剤よりなってもよい。好ましくは該保護剤は1.
1％のグルタミン酸ナトリウム、1.1％のアスコルビン
酸、及び場合により７％のラクトースからなる水溶液で
あり、且つそのpHは6.5である。指示薬を保護剤に添加
するか、又は、指示薬を測定と関連させて試験セットに
添加することができる。該指示薬は例えば、ブロムクレ
ゾールパープル等の酸塩基指示薬である。前記濃縮物を
通常のアンプル、栓付試験管、試料瓶等の容器に測りこ
む該容器を炭酸−スルフィットアルコール浴中で冷却
し、その後凍結乾燥し、そして真空下で貯蔵する。完成
した試験セットは、1ml当り約１〜２×106の菌を含む。
物菌株を、ホエーパーミエート（Whey permeate）ベー
ス培地中で、pH6.2〜6.5でかつ38〜42℃で発酵槽中で増
殖する。増殖を観察し、対数的増殖段階の最終時で増殖
を停止する。その後培養ブロスを20倍の濃度まで過に
よって濃縮する。該濃縮物を、保護剤中に、希釈率が約
４〜５×10-2、好ましくは約５×10-2になるように測
る。保護剤は、凍結乾燥微生物試料の調製に使用される
水性保護剤よりなってもよい。好ましくは該保護剤は1.
1％のグルタミン酸ナトリウム、1.1％のアスコルビン
酸、及び場合により７％のラクトースからなる水溶液で
あり、且つそのpHは6.5である。指示薬を保護剤に添加
するか、又は、指示薬を測定と関連させて試験セットに
添加することができる。該指示薬は例えば、ブロムクレ
ゾールパープル等の酸塩基指示薬である。前記濃縮物を
通常のアンプル、栓付試験管、試料瓶等の容器に測りこ
む該容器を炭酸−スルフィットアルコール浴中で冷却
し、その後凍結乾燥し、そして真空下で貯蔵する。完成
した試験セットは、1ml当り約１〜２×106の菌を含む。
抗生物質の測定を試験セットに液状試料及びもし必要な
ら指示薬を添加することにより実施する。該試験セット
及び試料を培養し、色の変化を観察する。もし試料が抗
生物質を含むなら、試験セットの微生物は増殖できず、
色は変化しない。一方、もし試料が抗生物質を含まない
なら、該微生物は増殖し且つ増殖中に色の変化を起こ
す。
ら指示薬を添加することにより実施する。該試験セット
及び試料を培養し、色の変化を観察する。もし試料が抗
生物質を含むなら、試験セットの微生物は増殖できず、
色は変化しない。一方、もし試料が抗生物質を含まない
なら、該微生物は増殖し且つ増殖中に色の変化を起こ
す。
本発明の方法の感度を、対応する市販用のサーモカルト
（THERMOCULT）［オリオン ダイアグノスティカ（Orio
n Diagnostica）」及びデルボテスト（DELVOTEST）Ｐ
［ギスト−ブロカデス（Gist−Brocades）］法並びにチ
ャーム（CHARM）II法と比較した。試料は95℃の温度で
５分間予備加温した牛乳からなり、測定を製造業者によ
って与えられた指図に従って実施した。結果を次の表に
示す。この表には、さらにインターテスト（INTER−TES
T）に関する製造業者のインターベット（Intervet）に
より与えられたデータも示した。結果は、本発明に従っ
た方法は他の方法により一層感度が良く、すべての種類
の抗生物質／その組み合せの存在を明確に検出すること
を示している。
（THERMOCULT）［オリオン ダイアグノスティカ（Orio
n Diagnostica）」及びデルボテスト（DELVOTEST）Ｐ
［ギスト−ブロカデス（Gist−Brocades）］法並びにチ
ャーム（CHARM）II法と比較した。試料は95℃の温度で
５分間予備加温した牛乳からなり、測定を製造業者によ
って与えられた指図に従って実施した。結果を次の表に
示す。この表には、さらにインターテスト（INTER−TES
T）に関する製造業者のインターベット（Intervet）に
より与えられたデータも示した。結果は、本発明に従っ
た方法は他の方法により一層感度が良く、すべての種類
の抗生物質／その組み合せの存在を明確に検出すること
を示している。
（実施例１） 試験セットの調製 ストレプトコッカス テルモフィラス（Streptococcus
thermophilus）T101の菌を次の組織を有する培地に接種
した： ホエーパーミエート粉末 ５％ カゼイン水解物 1.5％ トリプトン 0.5％ 酵母エキス １％ 培地は120℃の温度で15〜20分間滅菌し、滅菌後のpHは
6.4であった。
thermophilus）T101の菌を次の組織を有する培地に接種
した： ホエーパーミエート粉末 ５％ カゼイン水解物 1.5％ トリプトン 0.5％ 酵母エキス １％ 培地は120℃の温度で15〜20分間滅菌し、滅菌後のpHは
6.4であった。
該試験菌株をpH約6.2及び約42℃の温度で発酵槽中で増
殖し、且つ増殖を、培地ブロスの濁度を観察することに
よって監視した。対数的増殖段階の最終時点で増殖を停
止し、そして培地ブロスを20倍の濃度までミリポア ペ
リコン（Milli−pore Pellicon）過装置（0.45μｍ）
を使用して過によって濃縮した。該操作によって菌濃
縮物の濃度は２×109菌数/mlとなった。
殖し、且つ増殖を、培地ブロスの濁度を観察することに
よって監視した。対数的増殖段階の最終時点で増殖を停
止し、そして培地ブロスを20倍の濃度までミリポア ペ
リコン（Milli−pore Pellicon）過装置（0.45μｍ）
を使用して過によって濃縮した。該操作によって菌濃
縮物の濃度は２×109菌数/mlとなった。
該濃縮物を少量の保護剤で洗條し、約5mlの濃縮物を100
mlの保護剤に添加して試験セットとした。（又該試験セ
ットに1mlのブロモクレゾールパープル着色剤（0.8％溶
液）を添加したものも試験セットとすることができ
た。）その様にして得られた菌濃縮物の溶液は、約１×
108菌数/mlであった。1mlの溶液を、乾燥に耐え且つ真
空密封が可能な通常の10mlアンプルに加えた。該アンプ
ルを−60℃の温度の炭酸−スルフィットアルコール浴中
で急冷（20〜60秒）し、その後、凍結乾燥し、貯蔵用に
真空密封した。この様にして調製したアンプルは、１〜
２×106菌数/mlであった。
mlの保護剤に添加して試験セットとした。（又該試験セ
ットに1mlのブロモクレゾールパープル着色剤（0.8％溶
液）を添加したものも試験セットとすることができ
た。）その様にして得られた菌濃縮物の溶液は、約１×
108菌数/mlであった。1mlの溶液を、乾燥に耐え且つ真
空密封が可能な通常の10mlアンプルに加えた。該アンプ
ルを−60℃の温度の炭酸−スルフィットアルコール浴中
で急冷（20〜60秒）し、その後、凍結乾燥し、貯蔵用に
真空密封した。この様にして調製したアンプルは、１〜
２×106菌数/mlであった。
（実施例２） 牛乳試料中の抗生物質の測定 牛乳を95℃の温度で５分間加温した。2mlの加温済牛乳
及び20μｌの着色指示薬を実施例１に従って調製した試
験セットに添加した。該試験セットを４時間約42℃の温
度で培養し、その色調を評価した。対照標準として発酵
した牛乳粉末から調製し、且つ95℃の温度で５分間加温
した牛乳を使用した。牛乳が抗生物質を含む場合、色は
青色に変化した。黄色は陰性の結果を示した。
及び20μｌの着色指示薬を実施例１に従って調製した試
験セットに添加した。該試験セットを４時間約42℃の温
度で培養し、その色調を評価した。対照標準として発酵
した牛乳粉末から調製し、且つ95℃の温度で５分間加温
した牛乳を使用した。牛乳が抗生物質を含む場合、色は
青色に変化した。黄色は陰性の結果を示した。
Claims (6)
- 【請求項１】ストレプトコッカス テルモフィラス（St
reptococcus thermophilus）T101濃縮物及び水性保護剤
からなり該濃縮物の水性保護剤に対する希釈率が４〜５
×10-2であることを特徴とする、牛乳中の抗生物質の測
定に適した試験セット。 - 【請求項２】前記保護剤が1.1％のグルタミン酸ナトリ
ウム、1.1％のアスコルビン酸、及び場合により７％の
ラクトースからなる水溶液からなり、且つ該水溶液のpH
が6.5であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記
載の試験セット。 - 【請求項３】試験セットがさらに指示薬を含むことを特
徴とする特許請求の範囲第１項記載の試験セット。 - 【請求項４】指示薬がブロムクレゾールパープルである
ことを特徴とする特許請求の範囲第３項記載の試験セッ
ト。 - 【請求項５】ストレプトコッカス テルモフィラス（St
reptococcus thermophilus）T101,DSM4022. - 【請求項６】（ｉ）水性保護剤への希釈率が４〜５×10
-2であるストレプトコッカス テルモフィラス（Strept
ococcus thermophilus）T101濃縮物、水性保護剤及び、
場合により、指示薬からなる試験セットに試料を加え、
もし前記試験セットに指示薬が含まれていない場合、指
示薬も加え； （ii）38〜42℃で約４時間、試験セット及び試料を培養
し；そして （iii）色調を評価する 各行程によって特徴づけられる牛乳中の抗生物質を測定
する方法。
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