JPH07188054A - 生ワクチン - Google Patents
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- JPH07188054A JPH07188054A JP6266355A JP26635594A JPH07188054A JP H07188054 A JPH07188054 A JP H07188054A JP 6266355 A JP6266355 A JP 6266355A JP 26635594 A JP26635594 A JP 26635594A JP H07188054 A JPH07188054 A JP H07188054A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
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- A61K2039/542—Mucosal route oral/gastrointestinal
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- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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- Y10S424/821—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving temperature-sensitive mutant virus
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 通常の条件下で、使用における安定性を増大
させた生ワクチンを提供する。 【構成】 表面膜変異と、宿主たる種の感受性に適合さ
せた最適な減衰レベルを備えるかまたは備えない、少な
くとも１つの、代謝浮動減衰し免疫原性であって安定し
た単一または多重マ−カ−生ワクチンから製造される生
ワクチンの安定性は、ワクチン株として、このワクチン
株の復帰変異体を、減衰または／及び表面膜マ−カ−を
猶も有するサプレッサ−変異体の形で使用することによ
り増加させられる。
させた生ワクチンを提供する。 【構成】 表面膜変異と、宿主たる種の感受性に適合さ
せた最適な減衰レベルを備えるかまたは備えない、少な
くとも１つの、代謝浮動減衰し免疫原性であって安定し
た単一または多重マ−カ−生ワクチンから製造される生
ワクチンの安定性は、ワクチン株として、このワクチン
株の復帰変異体を、減衰または／及び表面膜マ−カ−を
猶も有するサプレッサ−変異体の形で使用することによ
り増加させられる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、高い安定性を有する生
ワクチンに関する。公知の生ワクチンに比べこの生ワク
チンの安定度は少なくとも因数１０-7分だけ高い。ま
た、このワクチンは、表面膜変異と、宿主たる種に対し
て最適に適合させた減衰レベルとを備えるかもしくは備
えない、少なくとも１個の、代謝浮動減衰させた免疫抗
原性の生ワクチン株から成る。宿主たる種として挙げら
れるのは生きた動物やヒトである。実施例の１つでは、
サルモネラ菌に対する免疫のためのヒナ及びニワトリ用
生ワクチンを提案している。
ワクチンに関する。公知の生ワクチンに比べこの生ワク
チンの安定度は少なくとも因数１０-7分だけ高い。ま
た、このワクチンは、表面膜変異と、宿主たる種に対し
て最適に適合させた減衰レベルとを備えるかもしくは備
えない、少なくとも１個の、代謝浮動減衰させた免疫抗
原性の生ワクチン株から成る。宿主たる種として挙げら
れるのは生きた動物やヒトである。実施例の１つでは、
サルモネラ菌に対する免疫のためのヒナ及びニワトリ用
生ワクチンを提案している。
【０００２】前記のワクチン株の構成並びにその製造方
法を、以下に説明する。
法を、以下に説明する。
【０００３】細菌性生ワクチン株の安全性は国際的に、
（遺伝的に関連する大腸菌に対する単一マ−カ−赤痢菌
の生体内修復から計算され、志願者についての試験によ
り証明された）約１０-12 のレンジの安定度を持つ『欠
失』により保証されている（参照：フォ−マル他並びに
デユポン他編、免疫生物学基準、カ−ガ−（Ｋａｒｇｅ
ｒ）、バ−ゼル／ミュンヘン／ニュ−ヨ−ク １９７１
年版第１５巻７３〜７８頁及び２１３〜２１８頁）。公
知の二重マ−カ−（スポット変異）減衰によれば最も不
利なケ−スの場合、（個々の安定度からの積としての）
総合的な安定度は、少なくとも１０-14 と成る。一方、
本発明によればこの総合的安定度は少なくとも１０-21
まで増加し、（個別の遺伝子位置に設定した）（恒常的
ではなく規則的な）２つの減衰した欠失の安定が達成さ
れる。
（遺伝的に関連する大腸菌に対する単一マ−カ−赤痢菌
の生体内修復から計算され、志願者についての試験によ
り証明された）約１０-12 のレンジの安定度を持つ『欠
失』により保証されている（参照：フォ−マル他並びに
デユポン他編、免疫生物学基準、カ−ガ−（Ｋａｒｇｅ
ｒ）、バ−ゼル／ミュンヘン／ニュ−ヨ−ク １９７１
年版第１５巻７３〜７８頁及び２１３〜２１８頁）。公
知の二重マ−カ−（スポット変異）減衰によれば最も不
利なケ−スの場合、（個々の安定度からの積としての）
総合的な安定度は、少なくとも１０-14 と成る。一方、
本発明によればこの総合的安定度は少なくとも１０-21
まで増加し、（個別の遺伝子位置に設定した）（恒常的
ではなく規則的な）２つの減衰した欠失の安定が達成さ
れる。
【０００４】実際的な条件下での生ワクチンの使用にお
ける不安定性に対して為されている指摘に関しての、世
界保健機構の強い要請と世論とを受けて、既存の安定度
１０-14 の安全緩衝液を、減衰率を少なくとも因数１０
-21 まで更に増加させることにより強化することと、表
面膜マ−カ−により備わる抗流行病潜在能の安定度を少
なくとも１０-14 まで上げることとが必要と成ってきて
いる。そしてこのように安定度を高めた生ワクチン構造
において、公知の十分に確立された原理が使用され、詳
細に説明されることが必要である。
ける不安定性に対して為されている指摘に関しての、世
界保健機構の強い要請と世論とを受けて、既存の安定度
１０-14 の安全緩衝液を、減衰率を少なくとも因数１０
-21 まで更に増加させることにより強化することと、表
面膜マ−カ−により備わる抗流行病潜在能の安定度を少
なくとも１０-14 まで上げることとが必要と成ってきて
いる。そしてこのように安定度を高めた生ワクチン構造
において、公知の十分に確立された原理が使用され、詳
細に説明されることが必要である。
【０００５】また、有効で且つ十分に毒物耐性を持たさ
れるワクチン株の研究における特別な困難さが、マ−カ
−を条件とする減衰レベル（「代謝欠陥」）と、問題の
病原体に対する宿主種の感受性特性とが、下記のように
即ち： − ワクチン株の、制限はされているが十分ではある生
体内伸長が可能であり、それ故に実際上妥当な免疫性が
生じるとか、 −感受性が極端に低く、同時に、ワクチン株の「代謝障
害」が比較的厳しい場合に多少とも明瞭な過剰減衰が生
じ、これにより、（実際上は妥当ではないが）いくつか
の予防接種が（例えば、Ｓ．ｔｙｐｈｉ ｇａｌ−Ｅ
２１ａの場合のように）必要と成るとか、更には、 − 感受性が極端に高く、同時に、ワクチン株の「代謝
障害」が比較的小規模な場合に「残存する菌力（毒
力）」が、許容不可能な副作用の引き金と成る等のよう
に相関関係するか否かという点に存在することが知られ
ている。
れるワクチン株の研究における特別な困難さが、マ−カ
−を条件とする減衰レベル（「代謝欠陥」）と、問題の
病原体に対する宿主種の感受性特性とが、下記のように
即ち： − ワクチン株の、制限はされているが十分ではある生
体内伸長が可能であり、それ故に実際上妥当な免疫性が
生じるとか、 −感受性が極端に低く、同時に、ワクチン株の「代謝障
害」が比較的厳しい場合に多少とも明瞭な過剰減衰が生
じ、これにより、（実際上は妥当ではないが）いくつか
の予防接種が（例えば、Ｓ．ｔｙｐｈｉ ｇａｌ−Ｅ
２１ａの場合のように）必要と成るとか、更には、 − 感受性が極端に高く、同時に、ワクチン株の「代謝
障害」が比較的小規模な場合に「残存する菌力（毒
力）」が、許容不可能な副作用の引き金と成る等のよう
に相関関係するか否かという点に存在することが知られ
ている。
【０００６】マ−カ−を条件とする減衰レベルと、宿主
たる種の感受性と、免疫原性との相関関係の古典的な例
として挙げられるのは、マウス、子ウシ、ニワトリにお
けるズ−サロラル（Ｚｏｏｓａｌｏｒａｌ）ワクチン
（ネズミチフス菌Ｈｉｓ- （付属突然変異により減衰）
／Ｐｕｒ- 、腹腔内半数（５０％）致死量マウス１０8.
2 ｃｆｕ（野生株は約１０1 ｃｆｕ））の有効性であ
り、この場合、体重１ｋｇについて（感受性の度合とし
ての）非経口的な半数致死量（ＬＤ50）は、マウスにお
いては細菌数約１０3 個、子ウシの場合約５×１０6
個、ヒナ／ニワトリの場合約５×１０8 個である。従っ
て、単一の経口免疫化の場合ズ−サロラルは、（病原菌
による）致死的挑戦（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）に対しマウ
スについては９５％を越える率で保護し、子ウシの場合
は実用上妥当な範囲で保護する（例えば７５％致死量の
挑戦の場合、免疫化された子ウシのうち３６％だけが死
亡している）が、ヒナ／ニワトリに関しては過剰減衰の
ため、保護し得ない（参照：リンデ・ケ−他著、「ワク
チン」１９９０年版第８巻２７８〜２８２頁）。
たる種の感受性と、免疫原性との相関関係の古典的な例
として挙げられるのは、マウス、子ウシ、ニワトリにお
けるズ−サロラル（Ｚｏｏｓａｌｏｒａｌ）ワクチン
（ネズミチフス菌Ｈｉｓ- （付属突然変異により減衰）
／Ｐｕｒ- 、腹腔内半数（５０％）致死量マウス１０8.
2 ｃｆｕ（野生株は約１０1 ｃｆｕ））の有効性であ
り、この場合、体重１ｋｇについて（感受性の度合とし
ての）非経口的な半数致死量（ＬＤ50）は、マウスにお
いては細菌数約１０3 個、子ウシの場合約５×１０6
個、ヒナ／ニワトリの場合約５×１０8 個である。従っ
て、単一の経口免疫化の場合ズ−サロラルは、（病原菌
による）致死的挑戦（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）に対しマウ
スについては９５％を越える率で保護し、子ウシの場合
は実用上妥当な範囲で保護する（例えば７５％致死量の
挑戦の場合、免疫化された子ウシのうち３６％だけが死
亡している）が、ヒナ／ニワトリに関しては過剰減衰の
ため、保護し得ない（参照：リンデ・ケ−他著、「ワク
チン」１９９０年版第８巻２７８〜２８２頁）。
【０００７】これは、個々の病原菌に対する宿主種の特
徴的感受性レベルを、これに対応する減衰レベルにより
補償して、単一の免疫化による弾力的な免疫性を達成す
る必要のあることを意味している。この、それ自体論理
的な（但し観察もされていないし公式化されてもいない
ことが明白な）法則が満足されるのは、（例えばリファ
ンピシン、ストレプトマイシン、ナリジキシン酸抵抗な
ど染色体により分離した）ＲＮＡポリメラ−ゼ、ジャイ
レ−ス、リボソ−ムタンパク質などの必須酵素並びに代
謝部分において「代謝浮動変異による減衰」という原理
が示されて、実用上の妥当性が存在する場合である。こ
の原理においては（感受性の高い実験動物で測定した）
ＬＤ50の対数は、（延長した）世代時間とリニアに相関
関係するのでこの（延長した）世代時間も、適当な（即
ち、感受性の高い）実験動物がいない場合病原体に関す
る減衰等量として用いることが可能である。尚、この
「代謝浮動変異による減衰」原理は、ＤＤ１５５２９
４、ＤＤ２１８８３４、ＤＤ２３５８２８、ＤＤ２５３
１８２、ＤＤ２５３１８４、ＤＤ２８１１１８、ＤＤ２
９４４２０、ＥＰ０２６３５２８、並びに下記の刊行物
に、詳細に記載されている。 − リンデ・ケ−著、主要細菌衛生学（Ｚｂｌ．Ｂａｋ
ｔ．Ｈｙｇ．）Ｉ、要約１９８１年第２４９巻３５０〜
３６１頁。 − リンデ・ケ−著、生物学基準（Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．
Ｓｔａｎｄａｒｄ）１９８３年第５３巻１５〜２８頁。 − リンデ・ケ−著、獣医学実験（Ａｒｃｈ．ｅｘｐｅ
ｒ．Ｖｅｔ．ｍｅｄ．）１９８２年第３６巻６４７〜６
５６頁。 − リンデ・ケ−他著、獣医学実験（Ａｒｃｈ．ｅｘｐ
ｅｒ．Ｖｅｔ．ｍｅｄ．）１９８３年第３７巻３５３〜
３６０頁。 − リンデ・ケ−他著、ワクチン１９９０第８巻２５〜
２９頁。 − リンデ・ケ−他著、ワクチン１９９０第８巻２７８
〜２８２頁。 − リンデ・ケ−他著、ワクチン１９９１第９巻１０１
〜１１０５頁。 − リンデ・ケ−他著、ワクチン１９９２第１０巻３３
７〜３４０頁。 − リンデ・ケ−他著、ワクチン１９９３第１１巻１９
７〜２００頁。 − マラクシャ・ビ−・アイ他著、定期刊行物「微生物
学・疫学・免疫学」１９８７／４月、３〜８頁。これら
のワクチン株においては、減衰のための代謝浮動マ−カ
−のうち１つが通常、染色体ナリジキシン酸抵抗（ジャ
イレ−ス）変異である。而して、これらのワクチン株
は、ｈｓｔマ−カ−（テンシド（ｔｅｎｓｉｄｅ）及び
マクロライド抗生物質に対する高感受性）、ｒｂｔマ−
カ−（胆汁耐性への復帰）もしくはｒｔｔマ−カ−（テ
ンシド耐性への復帰）を用いて最適化することが出来
る。これらのマ−カ−は、当該環境下でのワクチン株の
排出と生存能力とを、非経口的な菌力（ヴィルレンス）
作用への実質的な影響無しに、減少させる。
徴的感受性レベルを、これに対応する減衰レベルにより
補償して、単一の免疫化による弾力的な免疫性を達成す
る必要のあることを意味している。この、それ自体論理
的な（但し観察もされていないし公式化されてもいない
ことが明白な）法則が満足されるのは、（例えばリファ
ンピシン、ストレプトマイシン、ナリジキシン酸抵抗な
ど染色体により分離した）ＲＮＡポリメラ−ゼ、ジャイ
レ−ス、リボソ−ムタンパク質などの必須酵素並びに代
謝部分において「代謝浮動変異による減衰」という原理
が示されて、実用上の妥当性が存在する場合である。こ
の原理においては（感受性の高い実験動物で測定した）
ＬＤ50の対数は、（延長した）世代時間とリニアに相関
関係するのでこの（延長した）世代時間も、適当な（即
ち、感受性の高い）実験動物がいない場合病原体に関す
る減衰等量として用いることが可能である。尚、この
「代謝浮動変異による減衰」原理は、ＤＤ１５５２９
４、ＤＤ２１８８３４、ＤＤ２３５８２８、ＤＤ２５３
１８２、ＤＤ２５３１８４、ＤＤ２８１１１８、ＤＤ２
９４４２０、ＥＰ０２６３５２８、並びに下記の刊行物
に、詳細に記載されている。 − リンデ・ケ−著、主要細菌衛生学（Ｚｂｌ．Ｂａｋ
ｔ．Ｈｙｇ．）Ｉ、要約１９８１年第２４９巻３５０〜
３６１頁。 − リンデ・ケ−著、生物学基準（Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．
Ｓｔａｎｄａｒｄ）１９８３年第５３巻１５〜２８頁。 − リンデ・ケ−著、獣医学実験（Ａｒｃｈ．ｅｘｐｅ
ｒ．Ｖｅｔ．ｍｅｄ．）１９８２年第３６巻６４７〜６
５６頁。 − リンデ・ケ−他著、獣医学実験（Ａｒｃｈ．ｅｘｐ
ｅｒ．Ｖｅｔ．ｍｅｄ．）１９８３年第３７巻３５３〜
３６０頁。 − リンデ・ケ−他著、ワクチン１９９０第８巻２５〜
２９頁。 − リンデ・ケ−他著、ワクチン１９９０第８巻２７８
〜２８２頁。 − リンデ・ケ−他著、ワクチン１９９１第９巻１０１
〜１１０５頁。 − リンデ・ケ−他著、ワクチン１９９２第１０巻３３
７〜３４０頁。 − リンデ・ケ−他著、ワクチン１９９３第１１巻１９
７〜２００頁。 − マラクシャ・ビ−・アイ他著、定期刊行物「微生物
学・疫学・免疫学」１９８７／４月、３〜８頁。これら
のワクチン株においては、減衰のための代謝浮動マ−カ
−のうち１つが通常、染色体ナリジキシン酸抵抗（ジャ
イレ−ス）変異である。而して、これらのワクチン株
は、ｈｓｔマ−カ−（テンシド（ｔｅｎｓｉｄｅ）及び
マクロライド抗生物質に対する高感受性）、ｒｂｔマ−
カ−（胆汁耐性への復帰）もしくはｒｔｔマ−カ−（テ
ンシド耐性への復帰）を用いて最適化することが出来
る。これらのマ−カ−は、当該環境下でのワクチン株の
排出と生存能力とを、非経口的な菌力（ヴィルレンス）
作用への実質的な影響無しに、減少させる。
【０００８】前記の抗流行病マ−カ−はＤＤ２１８８３
６、ＤＤ２３１４９１、ＤＤ２５３１８２、ＤＤ２５３
１８３、ＤＤ２５３１８４、ＥＰ０２６３５２８並びに
下記の刊行物に、詳細に記載されている。 − リンデ・ケ−著、獣医学実験（Ａｒｃｈ．ｅｘｐｅ
ｒ．Ｖｅｔ．ｍｅｄ．）１９８２年第３６巻６５７〜６
６２頁。 − リンデ・ケ−著、生物学基準（Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．
Ｓｔａｎｄａｒｄ）１９８３年第５３巻１５〜２８頁。 − リンデ・ケ−他著、ワクチン１９９０第８巻２７８
〜２８２頁。
６、ＤＤ２３１４９１、ＤＤ２５３１８２、ＤＤ２５３
１８３、ＤＤ２５３１８４、ＥＰ０２６３５２８並びに
下記の刊行物に、詳細に記載されている。 − リンデ・ケ−著、獣医学実験（Ａｒｃｈ．ｅｘｐｅ
ｒ．Ｖｅｔ．ｍｅｄ．）１９８２年第３６巻６５７〜６
６２頁。 − リンデ・ケ−著、生物学基準（Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．
Ｓｔａｎｄａｒｄ）１９８３年第５３巻１５〜２８頁。 − リンデ・ケ−他著、ワクチン１９９０第８巻２７８
〜２８２頁。
【０００９】尚、抗流行病マ−カ−の構造に安全性／治
療マ−カ−の構造を組合わせた表面膜マ−カ−も既に示
唆されている。このような表面膜マ−カ−の原型は所謂
Ｓｓｑマ−カ−（フロウルキノロン（ｆｌｏｕｒ−ｑｕ
ｉｎｏｌｏｎｅｓ）に対する超感受性）であり、このＳ
ｓｑマ−カ−は、Ｓｍ／Ｒｉｆ代謝浮動コンビネ−ショ
ンにおいて抗流行病潜在能に続くａ．ｏ．部分が、現在
最もサルモネラ菌に対し有効である抗生物質シプロフロ
キサシン（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）に対する超感
受性を備えている。
療マ−カ−の構造を組合わせた表面膜マ−カ−も既に示
唆されている。このような表面膜マ−カ−の原型は所謂
Ｓｓｑマ−カ−（フロウルキノロン（ｆｌｏｕｒ−ｑｕ
ｉｎｏｌｏｎｅｓ）に対する超感受性）であり、このＳ
ｓｑマ−カ−は、Ｓｍ／Ｒｉｆ代謝浮動コンビネ−ショ
ンにおいて抗流行病潜在能に続くａ．ｏ．部分が、現在
最もサルモネラ菌に対し有効である抗生物質シプロフロ
キサシン（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）に対する超感
受性を備えている。
【００１０】２つの各別に減衰された代謝浮動マ−カ
−、並びに、代謝浮動マ−カ−と表面膜マ−カ−と抗流
行病マ−カ−との組み合わせを使って製造された各ワク
チン株の共通の態様は、減衰されたマ−カ−に対して復
帰頻度が通常、因数１０-14 以下に規制されており、ま
た、選択されたクロ−ンの、表面膜マ−カ−を条件とす
る抗流行病潜在能に対して復帰頻度が、実際的な条件の
下で通常十分である、因数１０-8に規制されている点で
ある。
−、並びに、代謝浮動マ−カ−と表面膜マ−カ−と抗流
行病マ−カ−との組み合わせを使って製造された各ワク
チン株の共通の態様は、減衰されたマ−カ−に対して復
帰頻度が通常、因数１０-14 以下に規制されており、ま
た、選択されたクロ−ンの、表面膜マ−カ−を条件とす
る抗流行病潜在能に対して復帰頻度が、実際的な条件の
下で通常十分である、因数１０-8に規制されている点で
ある。
【００１１】以上のことから、本発明の目的は、ワクチ
ン株製造のためのワクチンの安定度を、減衰に関しては
少なくとも１０-21 の安定度を、そして、抗流行病潜在
能に関しては少なくとも１０-14 の安定度を達成するよ
うに、増加させる点にある。この場合、宿主たる種の感
受性と、この環境におけるワクチン株の排出並びに生存
能力とに応じて減衰を適用するための公知の有用な原理
を維持し、且つ、更に改良する必要がある。
ン株製造のためのワクチンの安定度を、減衰に関しては
少なくとも１０-21 の安定度を、そして、抗流行病潜在
能に関しては少なくとも１０-14 の安定度を達成するよ
うに、増加させる点にある。この場合、宿主たる種の感
受性と、この環境におけるワクチン株の排出並びに生存
能力とに応じて減衰を適用するための公知の有用な原理
を維持し、且つ、更に改良する必要がある。
【００１２】この目的は独立の特許請求の範囲第１項記
載の生ワクチン、独立の特許請求の範囲第７項記載のニ
ワトリ及びヒナ用の特別なワクチン、独立の特許請求の
範囲第８項及び第１２項記載の前記生ワクチン製造方
法、独立の特許請求の範囲第１６項、第１７項、第１８
項、第１９項記載の生ワクチン株並びに独立の特許請求
の範囲第２０項及び第２１項に記載されたその生ワクチ
ン株の使用方法を用いることにより達成される。
載の生ワクチン、独立の特許請求の範囲第７項記載のニ
ワトリ及びヒナ用の特別なワクチン、独立の特許請求の
範囲第８項及び第１２項記載の前記生ワクチン製造方
法、独立の特許請求の範囲第１６項、第１７項、第１８
項、第１９項記載の生ワクチン株並びに独立の特許請求
の範囲第２０項及び第２１項に記載されたその生ワクチ
ン株の使用方法を用いることにより達成される。
【００１３】特許請求の範囲第１項に開示したものは、
表面膜変異と、宿主種の感受性に適合させた最適な減衰
レベルとを備えるかもしくは備えない、少なくとも１個
の、代謝浮動減衰させた免疫原性の、安定な単一または
多重マ−カ−ワクチン株から製造される生ワクチンであ
る。本発明によれば、ワクチン株として、減衰マ−カ−
または／及び表面膜マ−カ−を有するサプレッサ−変異
体などの、前記ワクチン株の復帰変異体を用いる。
表面膜変異と、宿主種の感受性に適合させた最適な減衰
レベルとを備えるかもしくは備えない、少なくとも１個
の、代謝浮動減衰させた免疫原性の、安定な単一または
多重マ−カ−ワクチン株から製造される生ワクチンであ
る。本発明によれば、ワクチン株として、減衰マ−カ−
または／及び表面膜マ−カ−を有するサプレッサ−変異
体などの、前記ワクチン株の復帰変異体を用いる。
【００１４】好ましい実施例においては、ワクチン株と
して、このワクチン株の、短縮した世代時間を有する復
帰変異体を用い、この場合、この復帰変異体は例えばサ
プレッサ−変異体であり、１つもしくはそれ以上の減衰
用代謝浮動マ−カ−を有している。尚、復帰変異体は元
のワクチン株と同様の減衰レベルか、それよりわずかに
低い減衰レベルを持つ。
して、このワクチン株の、短縮した世代時間を有する復
帰変異体を用い、この場合、この復帰変異体は例えばサ
プレッサ−変異体であり、１つもしくはそれ以上の減衰
用代謝浮動マ−カ−を有している。尚、復帰変異体は元
のワクチン株と同様の減衰レベルか、それよりわずかに
低い減衰レベルを持つ。
【００１５】更に別に実施例においては、ワクチン株と
して、このワクチン株の、マクロライド耐性復帰変異体
を用い、この場合、この復帰変異体は例えばサプレッサ
−変異体であり、表面膜マ−カ−を有している。尚、こ
の復帰変異体は元のワクチン株と同様か、それよりわず
かに高い抗流行病潜在能を持つ。
して、このワクチン株の、マクロライド耐性復帰変異体
を用い、この場合、この復帰変異体は例えばサプレッサ
−変異体であり、表面膜マ−カ−を有している。尚、こ
の復帰変異体は元のワクチン株と同様か、それよりわず
かに高い抗流行病潜在能を持つ。
【００１６】第３の実施例においては、ワクチン株とし
て、このワクチン株の二重復帰変異体を用い、この場
合、この復帰変異体はサプレッサ−変異体として、短縮
された世代時間とマクロライド耐性を有しており、１つ
乃至それ以上の減衰用代謝浮動マ−カ−を持つと共に、
表面膜マ−カ−をも有している。
て、このワクチン株の二重復帰変異体を用い、この場
合、この復帰変異体はサプレッサ−変異体として、短縮
された世代時間とマクロライド耐性を有しており、１つ
乃至それ以上の減衰用代謝浮動マ−カ−を持つと共に、
表面膜マ−カ−をも有している。
【００１７】驚くべきことに、別途の表面膜マ−カ−を
備えるか備えない代謝浮動減衰ワクチン株から出発した
（短縮した世代時間または／及びマクロライド耐性を持
つ）復帰変異体が、不変の減衰と抗流行病潜在能を所有
することが確認できた。これにより、元のワクチン株の
代謝浮動減衰または／及び表面膜マ−カ−が復帰変異体
の中でも猶も存在することが証明された。更に、元のワ
クチン株からその復帰変異体／サプレッサ−変異体への
移行時、宿主たる種の感受性への適合という意味合いで
の減衰が猶も小さな範囲で変化し得ることが示された。
この現象は抗流行病潜在能を表現するものである。
備えるか備えない代謝浮動減衰ワクチン株から出発した
（短縮した世代時間または／及びマクロライド耐性を持
つ）復帰変異体が、不変の減衰と抗流行病潜在能を所有
することが確認できた。これにより、元のワクチン株の
代謝浮動減衰または／及び表面膜マ−カ−が復帰変異体
の中でも猶も存在することが証明された。更に、元のワ
クチン株からその復帰変異体／サプレッサ−変異体への
移行時、宿主たる種の感受性への適合という意味合いで
の減衰が猶も小さな範囲で変化し得ることが示された。
この現象は抗流行病潜在能を表現するものである。
【００１８】独立の特許請求の範囲第７項記載の本発明
生ワクチンの例として下記の、サルモネラ菌感染に対す
るヒナの経口免疫化、並びに、ニワトリの経口または非
経口的免疫化／追加免疫のための生ワクチン用の、サル
モネラワクチン株を提案している。このサルモネラワク
チン株は、約３１〜３２分の世代時間及び／または≦５
μｇ／ｍｌのエリスロマイシンのＭＩＣを持った元のワ
クチン株から抽出されるものである。各復帰変異体は下
記の如く短縮化世代時間を有しており、 ・ Ｓ．ｔｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ ６０／Ｒｉｆ ４２／−
ＧＶＲ ＩＩ ３０ 世代時間 約２６．０分 ・ Ｓ．ｅｎｔ Ｓｓｑ／Ｓｍ ２４／Ｒｉｆ １２／
−ＧＶＲ ＩＩ ３０ 世代時間 約２７．０分 ・ Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ／Ｓｍ １５３／Ｒｉｆ ７／
−ＧＶＲ ＩＩ ３０ 世代時間 約２５．０分 ・ Ｓ．ａｎａ Ｓｓｑ／Ｓｍ ８１／Ｒｉｆ ２１／
−ＧＶＲ ＩＩ ３０ 世代時間 約２６．５分 最高２７分以下までの世代時間を示す。また、下記のよ
うなマクロライド耐性を持つ復帰変異体の場合は、 ・ Ｓ．ｔｍ Ｓｓｑ−ＭＴＲ １６／Ｓｍ ６０／Ｒ
ｉｆ ４２ ・ Ｓ．ｅｎｔ Ｓｓｑ−ＭＴＲ ２５／Ｓｍ ２４／
Ｒｉｆ １２ ・ Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ−ＭＴＲ １２／Ｓｍ １５３
／Ｒｉｆ ７ ・ Ｓ．ａｎａ Ｓｓｑ−ＭＴＲ ２３／Ｓｍ ８１／
Ｒｉｆ ２１ エリスロマイシンのＭＩＣ（最小阻止濃度）は≦５μｇ
／ｍｌから≧２０μｇ／ｍｌまで増加した。
生ワクチンの例として下記の、サルモネラ菌感染に対す
るヒナの経口免疫化、並びに、ニワトリの経口または非
経口的免疫化／追加免疫のための生ワクチン用の、サル
モネラワクチン株を提案している。このサルモネラワク
チン株は、約３１〜３２分の世代時間及び／または≦５
μｇ／ｍｌのエリスロマイシンのＭＩＣを持った元のワ
クチン株から抽出されるものである。各復帰変異体は下
記の如く短縮化世代時間を有しており、 ・ Ｓ．ｔｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ ６０／Ｒｉｆ ４２／−
ＧＶＲ ＩＩ ３０ 世代時間 約２６．０分 ・ Ｓ．ｅｎｔ Ｓｓｑ／Ｓｍ ２４／Ｒｉｆ １２／
−ＧＶＲ ＩＩ ３０ 世代時間 約２７．０分 ・ Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ／Ｓｍ １５３／Ｒｉｆ ７／
−ＧＶＲ ＩＩ ３０ 世代時間 約２５．０分 ・ Ｓ．ａｎａ Ｓｓｑ／Ｓｍ ８１／Ｒｉｆ ２１／
−ＧＶＲ ＩＩ ３０ 世代時間 約２６．５分 最高２７分以下までの世代時間を示す。また、下記のよ
うなマクロライド耐性を持つ復帰変異体の場合は、 ・ Ｓ．ｔｍ Ｓｓｑ−ＭＴＲ １６／Ｓｍ ６０／Ｒ
ｉｆ ４２ ・ Ｓ．ｅｎｔ Ｓｓｑ−ＭＴＲ ２５／Ｓｍ ２４／
Ｒｉｆ １２ ・ Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ−ＭＴＲ １２／Ｓｍ １５３
／Ｒｉｆ ７ ・ Ｓ．ａｎａ Ｓｓｑ−ＭＴＲ ２３／Ｓｍ ８１／
Ｒｉｆ ２１ エリスロマイシンのＭＩＣ（最小阻止濃度）は≦５μｇ
／ｍｌから≧２０μｇ／ｍｌまで増加した。
【００１９】また、前記した復帰変異体／サプレッサ−
変異体はＤＳＭ（ドイッチェ・サムラング・フォン・マ
イクロオ−ガニズメン・ウント・ツエルクルツ−レンＧ
ｍｂＨ、ドイツ、ブラウンシュヴァイク、Ｄ−３８１２
４）に寄託した下記のサルモネラワクチン株から抽出し
たものである。 ・ Ｓ．ｔｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ ６０／Ｒｉｆ ４２
ＤＳＭ ８４３３ ・ Ｓ．ｅｎｔ Ｓｓｑ／Ｓｍ ２４／Ｒｉｆ １２
ＤＳＭ ８４３５ ・ Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ／Ｓｍ １５３／Ｒｉｆ ７
ＤＳＭ ８４３４ ・ Ｓ．ａｎａ Ｓｓｑ／Ｓｍ ８１／Ｒｉｆ ２１
ＤＳＭ ８４４１
変異体はＤＳＭ（ドイッチェ・サムラング・フォン・マ
イクロオ−ガニズメン・ウント・ツエルクルツ−レンＧ
ｍｂＨ、ドイツ、ブラウンシュヴァイク、Ｄ−３８１２
４）に寄託した下記のサルモネラワクチン株から抽出し
たものである。 ・ Ｓ．ｔｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ ６０／Ｒｉｆ ４２
ＤＳＭ ８４３３ ・ Ｓ．ｅｎｔ Ｓｓｑ／Ｓｍ ２４／Ｒｉｆ １２
ＤＳＭ ８４３５ ・ Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ／Ｓｍ １５３／Ｒｉｆ ７
ＤＳＭ ８４３４ ・ Ｓ．ａｎａ Ｓｓｑ／Ｓｍ ８１／Ｒｉｆ ２１
ＤＳＭ ８４４１
【００２０】本発明による復帰変異体／サプレッサ−変
異体は、安定性の増大したワクチン株の新世代を呈示す
る（総合的安定度＝元のワクチン株とサプレッサ−変異
体のマ−カ−の積（ｐｒｏｄｕｃｔ））。また、この復
帰変異体／サプレッサ−変異体は、不変のもしくは若干
低い減衰レベル及び／または不変のもしくは若干変化す
る抗流行病潜在能を伴った偽野生タイプに対する復帰変
異／サプレッサ−変異が、復帰突然変異より実質的に一
層頻繁に発生するという、驚くべく発見された規則を用
いている。また、この規則が、どの程度まで代謝浮動減
衰と表面膜マ−カ−の実際の安定度の試験に使用可能で
あるかの実験と、同時に、ＷＨＯからの安定性／安全性
要件（ＷＨＯ科学グル−プレポ−ト「経口腸内細菌ワク
チン」世界保健機構技術報告シリ−ズＮｏ．５００、１
９７２年）に理想的に準拠し、且つ、前記の新規の三重
マ−カ−減衰ワクチン株から見て、ワクチン導入を阻む
二重マ−カ−ワクチン株の安定性に関する論議を不合理
なものと成し得る、極端に安定したワクチン株の新世代
を得るためにどの程度まで使用可能であるかの実験も行
った。（先にも述べたように）細菌性生ワクチン株の安
全性は国際的に（遺伝的に関連する大腸菌に対する単一
マ−カ−赤痢菌の生体内修復から計算され、志願者につ
いての試験により証明された）約１０-12 のレンジの安
定度を持つ『欠失』により保証されている（参照：フォ
−マル他並びにデユポン他編、免疫生物学基準、カ−ガ
−（Ｋａｒｇｅｒ）、バ−ゼル／ミュンヘン／ニュ−ヨ
−ク１９７１年版第１５巻７３〜７８頁及び２１３〜２
１８頁）。公知の二重マ−カ−（スポット変異）減衰に
よれば最も不利なケ−スの場合、（個々の安定度の積と
しての）総合的な安定度は、少なくとも１０-14 と成
る。従って、追加的なサプレッサ−変異が総合的安定度
を少なくとも１０-21 まで増大させるのでこれにより、
（個別の遺伝子位置に設定した）（恒常的ではなく規則
的な）２つの減衰する欠失の安定が達成される。２つの
減衰する代謝浮動マ−カ−に表面膜変異を組み合わせ、
且つ、これに伴う、前記２つの原理両方を備えたサプレ
ッサ−変異の発生時、総合的な安定度は≦１０-35 と成
るが、これほどまでの値は必要では無い。なぜなら、Ｗ
ＨＯの規定によればワクチン株の感染連鎖を中断させる
変異は減衰マ−カ−として観測されるべきことが規定さ
れているからである（ＷＨＯ技術報告シリ−ズＮｏ．５
００、１９７２年）。
異体は、安定性の増大したワクチン株の新世代を呈示す
る（総合的安定度＝元のワクチン株とサプレッサ−変異
体のマ−カ−の積（ｐｒｏｄｕｃｔ））。また、この復
帰変異体／サプレッサ−変異体は、不変のもしくは若干
低い減衰レベル及び／または不変のもしくは若干変化す
る抗流行病潜在能を伴った偽野生タイプに対する復帰変
異／サプレッサ−変異が、復帰突然変異より実質的に一
層頻繁に発生するという、驚くべく発見された規則を用
いている。また、この規則が、どの程度まで代謝浮動減
衰と表面膜マ−カ−の実際の安定度の試験に使用可能で
あるかの実験と、同時に、ＷＨＯからの安定性／安全性
要件（ＷＨＯ科学グル−プレポ−ト「経口腸内細菌ワク
チン」世界保健機構技術報告シリ−ズＮｏ．５００、１
９７２年）に理想的に準拠し、且つ、前記の新規の三重
マ−カ−減衰ワクチン株から見て、ワクチン導入を阻む
二重マ−カ−ワクチン株の安定性に関する論議を不合理
なものと成し得る、極端に安定したワクチン株の新世代
を得るためにどの程度まで使用可能であるかの実験も行
った。（先にも述べたように）細菌性生ワクチン株の安
全性は国際的に（遺伝的に関連する大腸菌に対する単一
マ−カ−赤痢菌の生体内修復から計算され、志願者につ
いての試験により証明された）約１０-12 のレンジの安
定度を持つ『欠失』により保証されている（参照：フォ
−マル他並びにデユポン他編、免疫生物学基準、カ−ガ
−（Ｋａｒｇｅｒ）、バ−ゼル／ミュンヘン／ニュ−ヨ
−ク１９７１年版第１５巻７３〜７８頁及び２１３〜２
１８頁）。公知の二重マ−カ−（スポット変異）減衰に
よれば最も不利なケ−スの場合、（個々の安定度の積と
しての）総合的な安定度は、少なくとも１０-14 と成
る。従って、追加的なサプレッサ−変異が総合的安定度
を少なくとも１０-21 まで増大させるのでこれにより、
（個別の遺伝子位置に設定した）（恒常的ではなく規則
的な）２つの減衰する欠失の安定が達成される。２つの
減衰する代謝浮動マ−カ−に表面膜変異を組み合わせ、
且つ、これに伴う、前記２つの原理両方を備えたサプレ
ッサ−変異の発生時、総合的な安定度は≦１０-35 と成
るが、これほどまでの値は必要では無い。なぜなら、Ｗ
ＨＯの規定によればワクチン株の感染連鎖を中断させる
変異は減衰マ−カ−として観測されるべきことが規定さ
れているからである（ＷＨＯ技術報告シリ−ズＮｏ．５
００、１９７２年）。
【００２１】各マ−カ−に応じて２種類の復帰変異体が
区別されるが、それらについては以下に説明する。
区別されるが、それらについては以下に説明する。
【００２２】短縮した世代時間を持つ復帰変異体（ＧＶ
Ｒ） （ヒナ／ニワトリのためサルモネラワクチン株において
２２分から３１〜３２分まで延長させた）世代時間延長
を伴った代謝浮動（抗生物質抵抗変異）減衰の安定度
は、受けた抵抗とここに定義された延長世代時間とによ
り間接的にだけ証明し得る。
Ｒ） （ヒナ／ニワトリのためサルモネラワクチン株において
２２分から３１〜３２分まで延長させた）世代時間延長
を伴った代謝浮動（抗生物質抵抗変異）減衰の安定度
は、受けた抵抗とここに定義された延長世代時間とによ
り間接的にだけ証明し得る。
【００２３】但し、ゆっくりと成長する代謝浮動減衰ワ
クチン株はクロ−ンにとって選択的な利点を備えてお
り、更なる変異は（それだけでは何等遺伝的安定性が生
じないので）「訂正された」代謝シ−ケンスを介して短
めの世代時間へとつながる。これは、ＧＶＲ株の富裕性
が、一層ゆっくりと成長するワクチン株個体群における
選択圧力の下に計算可能であることを意味している。
クチン株はクロ−ンにとって選択的な利点を備えてお
り、更なる変異は（それだけでは何等遺伝的安定性が生
じないので）「訂正された」代謝シ−ケンスを介して短
めの世代時間へとつながる。これは、ＧＶＲ株の富裕性
が、一層ゆっくりと成長するワクチン株個体群における
選択圧力の下に計算可能であることを意味している。
【００２４】「世代時間の延長が減衰につながり」それ
故に「世代時間の短縮が（逆比例的に）、増加した菌力
につながる」という公知技術に基づく結論はここにおい
て、（復帰突然変異よりも実質的に頻繁に発生する）復
帰／サプレッサ−変異体の重要性に関して誤った認識で
あることが立証される。（リンデ・ケ−著「獣医学実験
（Ａｒｃｈ．ｅｘｐｅｒ．Ｖｅｔ．ｍｅｄ．）１９７８
年第３２巻９４３頁）
故に「世代時間の短縮が（逆比例的に）、増加した菌力
につながる」という公知技術に基づく結論はここにおい
て、（復帰突然変異よりも実質的に頻繁に発生する）復
帰／サプレッサ−変異体の重要性に関して誤った認識で
あることが立証される。（リンデ・ケ−著「獣医学実験
（Ａｒｃｈ．ｅｘｐｅｒ．Ｖｅｔ．ｍｅｄ．）１９７８
年第３２巻９４３頁）
【００２５】後記する実施例１では、十分確立された実
験動物であるネズミチフス菌／マウスを用いて、（元の
ワクチン株に関連した）ＧＶＲの減衰は不変もしくは若
干低めとなり、それ故、ＧＶＲは猶も元の減衰マ−カ−
を有するという事実に関する直接的な証明を行う。
験動物であるネズミチフス菌／マウスを用いて、（元の
ワクチン株に関連した）ＧＶＲの減衰は不変もしくは若
干低めとなり、それ故、ＧＶＲは猶も元の減衰マ−カ−
を有するという事実に関する直接的な証明を行う。
【００２６】而して、短縮した世代時間を持つ上記の復
帰／サプレッサ−変異体は新しいタイプの極端に安定し
たワクチン株を呈示し、復帰頻度は最大で≦１０-21 で
ある（この場合、単一マ−カ−について発生度合いの低
い≦１０-7という高スケ−ルを前提とし、総合的安定度
＝個々の安定度の積、即ち、Ｓｍ×Ｒｉｆ×サプレッサ
−変異である）。
帰／サプレッサ−変異体は新しいタイプの極端に安定し
たワクチン株を呈示し、復帰頻度は最大で≦１０-21 で
ある（この場合、単一マ−カ−について発生度合いの低
い≦１０-7という高スケ−ルを前提とし、総合的安定度
＝個々の安定度の積、即ち、Ｓｍ×Ｒｉｆ×サプレッサ
−変異である）。
【００２７】マクロライド耐性復帰変異体（ＭＴＲ） ２０μｇのエリスロマイジン耐性クロ−ンの数から得ら
れる表面膜変異の復帰頻度は概ね、１０-6から１０-8の
レンジであり、幾つか選択した株の場合のみ≦１０-8で
ある。マクロライド耐性クロ−ンは、エリスロマイシン
に対する改めて得られる野生株耐性や、シプロフロキサ
シン（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、ドキシサイクリ
ン（ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）、クロラムフェニコ−ル
に対する超感受性のロスにも関わらず、抗流行病作用
（当該環境における減少した生存能力と、ヒナにおける
短縮された排出）がほぼ、元の株と一致するか、もしく
は、その値を中心としてわずかながら変化し、これによ
り、猶も、元の表面膜変異を有していることが確認され
ている。
れる表面膜変異の復帰頻度は概ね、１０-6から１０-8の
レンジであり、幾つか選択した株の場合のみ≦１０-8で
ある。マクロライド耐性クロ−ンは、エリスロマイシン
に対する改めて得られる野生株耐性や、シプロフロキサ
シン（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、ドキシサイクリ
ン（ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）、クロラムフェニコ−ル
に対する超感受性のロスにも関わらず、抗流行病作用
（当該環境における減少した生存能力と、ヒナにおける
短縮された排出）がほぼ、元の株と一致するか、もしく
は、その値を中心としてわずかながら変化し、これによ
り、猶も、元の表面膜変異を有していることが確認され
ている。
【００２８】その詳細については後記する実施例２にゆ
ずる。
ずる。
【００２９】而して、これらのマクロライド耐性復帰変
異体／サプレッサ−変異体は新しいタイプの極めて安定
なワクチン株を呈示するものであり、その復帰頻度は抗
流行病潜在能において最大で１０-14 である（総合的安
定度＝元の表面膜マ−カ−とサプレッサ−変異の積）。
異体／サプレッサ−変異体は新しいタイプの極めて安定
なワクチン株を呈示するものであり、その復帰頻度は抗
流行病潜在能において最大で１０-14 である（総合的安
定度＝元の表面膜マ−カ−とサプレッサ−変異の積）。
【００３０】従って、追加的な抗流行病表面膜マ−カ−
を備えるか備えない代謝浮動減衰した単一もしくは多重
マ−カ−型オリジナルワクチン株から抽出した、短縮し
た世代時間及び／またはマクロライド耐性を持つ復帰変
異体は、現実的な条件の下での生ワクチン使用のための
厳しい要件に大きく準拠したワクチン株を生み出すもの
となる。
を備えるか備えない代謝浮動減衰した単一もしくは多重
マ−カ−型オリジナルワクチン株から抽出した、短縮し
た世代時間及び／またはマクロライド耐性を持つ復帰変
異体は、現実的な条件の下での生ワクチン使用のための
厳しい要件に大きく準拠したワクチン株を生み出すもの
となる。
【００３１】増大した安定性を有する生ワクチンを製造
するという目的は、特許請求の範囲第８項に従い、表面
膜変異と、宿主たる種に対し最適に適合させた減衰レベ
ルとを備えたもしくは備えない少なくとも１個の、代謝
浮動減衰させた免疫原性の、安定した単一もしくは多重
マ−カ−生ワクチン株の使用により達成できる。本発明
によれば、別途の表面膜変異と、宿主たる種に対し適合
させた減衰と、更に同時に、限定した延長世代時間とを
備えたもしくは備えない代謝浮動減衰させた元のワクチ
ン株から出発して、短縮化世代時間及びマクロライド耐
性を有する復帰変異体が分離される。オリジナルのワク
チン株の減衰または／及び表面膜マ−カ−を猶も有する
このサプレッサ−変異体を、益々安定なワクチン株とし
て使用しこのワクチン株から所定の方法により生ワクチ
ンが製造される。
するという目的は、特許請求の範囲第８項に従い、表面
膜変異と、宿主たる種に対し最適に適合させた減衰レベ
ルとを備えたもしくは備えない少なくとも１個の、代謝
浮動減衰させた免疫原性の、安定した単一もしくは多重
マ−カ−生ワクチン株の使用により達成できる。本発明
によれば、別途の表面膜変異と、宿主たる種に対し適合
させた減衰と、更に同時に、限定した延長世代時間とを
備えたもしくは備えない代謝浮動減衰させた元のワクチ
ン株から出発して、短縮化世代時間及びマクロライド耐
性を有する復帰変異体が分離される。オリジナルのワク
チン株の減衰または／及び表面膜マ−カ−を猶も有する
このサプレッサ−変異体を、益々安定なワクチン株とし
て使用しこのワクチン株から所定の方法により生ワクチ
ンが製造される。
【００３２】本発明による更に別の実施例において、元
のワクチン株との比較における条件付けの態様は、サプ
レッサ−変異体を介して猶も影響を受け得る。
のワクチン株との比較における条件付けの態様は、サプ
レッサ−変異体を介して猶も影響を受け得る。
【００３３】短縮された世代時間と若干低めの減衰レベ
ルとを有する復帰変異体の、株に基づいた所望の分離の
ケ−スにおいては、高めの（恐らく過剰減衰限度まで
の）減衰を伴う元のワクチン株が、最適に減衰されたサ
プレッサ−変異体の分離のために使用される。
ルとを有する復帰変異体の、株に基づいた所望の分離の
ケ−スにおいては、高めの（恐らく過剰減衰限度まで
の）減衰を伴う元のワクチン株が、最適に減衰されたサ
プレッサ−変異体の分離のために使用される。
【００３４】抗流行病潜在能について増加した安定性を
有するワクチン製造のために、元のワクチン株と比較し
てこれと同様かもしくは若干高めの抗流行病潜在能を有
する復帰変異体が使用される。
有するワクチン製造のために、元のワクチン株と比較し
てこれと同様かもしくは若干高めの抗流行病潜在能を有
する復帰変異体が使用される。
【００３５】任意の順序でこの方法を使用することによ
り、マクロライド感度（表面膜）マ−カ−を有する代謝
浮動減衰されたオリジナルのワクチン株から、短縮され
た世代時間とマクロライド耐性とを持つ復帰変異体が得
られる。
り、マクロライド感度（表面膜）マ−カ−を有する代謝
浮動減衰されたオリジナルのワクチン株から、短縮され
た世代時間とマクロライド耐性とを持つ復帰変異体が得
られる。
【００３６】前述の方法の例として、本発明に基づくヒ
ナもしくはニワトリに対し最適に適合させた下記のワク
チン製造方法のうち１つを提案する。
ナもしくはニワトリに対し最適に適合させた下記のワク
チン製造方法のうち１つを提案する。
【００３７】前記ワクチン製造のため、安定性を増すワ
クチン株を選択する。このワクチン株の元となるワクチ
ン株はこの野生株に比べ世代時間を約２２分から約３１
〜３２分まで延長されており、また、この世代時間は、
短縮された世代時間を持つ復帰変異体の場合、最高２７
分以下に短縮される。
クチン株を選択する。このワクチン株の元となるワクチ
ン株はこの野生株に比べ世代時間を約２２分から約３１
〜３２分まで延長されており、また、この世代時間は、
短縮された世代時間を持つ復帰変異体の場合、最高２７
分以下に短縮される。
【００３８】更に別の方法は、抗流行病潜在能に関し増
加した安定性を持つワクチン株を選択することを特徴と
しており、このワクチン株の元となるワクチン株は、マ
クロライド耐性復帰変異体の場合結果的にエリスロマイ
シンのＭＩＣの≦５μｇ／ｍｌから≧２０μｇ／ｍｌへ
の増加と成るマクロライド感度を有している。
加した安定性を持つワクチン株を選択することを特徴と
しており、このワクチン株の元となるワクチン株は、マ
クロライド耐性復帰変異体の場合結果的にエリスロマイ
シンのＭＩＣの≦５μｇ／ｍｌから≧２０μｇ／ｍｌへ
の増加と成るマクロライド感度を有している。
【００３９】最後に、前記二つの方法を、マクロライド
感受性（表面膜）マ−カ−を備え代謝浮動減衰されたオ
リジナルのワクチン株から、短縮された世代時間とマク
ロライド耐性とを持つ復帰変異体を選択することによ
り、任意の順序で組み合わせて、増加した安定性を有す
る生ワクチンを製造することも可能である。ワクチン株
として特許請求の範囲第７項で請求したワクチン株のう
ち１つ乃至それ以上が使用される。
感受性（表面膜）マ−カ−を備え代謝浮動減衰されたオ
リジナルのワクチン株から、短縮された世代時間とマク
ロライド耐性とを持つ復帰変異体を選択することによ
り、任意の順序で組み合わせて、増加した安定性を有す
る生ワクチンを製造することも可能である。ワクチン株
として特許請求の範囲第７項で請求したワクチン株のう
ち１つ乃至それ以上が使用される。
【００４０】以下に示す各実施例において本発明の生ワ
クチン並びにこの生ワクチン製造方法を詳細に説明す
る。
クチン並びにこの生ワクチン製造方法を詳細に説明す
る。
【００４１】材料並びに方法 使用した株 − 野生株 ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ（Ｓ．）ｔｙｐ
ｈｉｍｕｒｉｕｍ）、腸炎菌（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄ
ｉｓ）、サルモネラ・インファンティス（Ｓ．ｉｎｆａ
ｎｔｉｓ）、サルモネラ・アナタム（Ｓ．ａｎａｔｕ
ｍ） − 別途の表面膜マ−カ−と、階層化減衰／階層化延長
世代時間（ＧＴ）（減衰等量）並びに下記の寄託済ワク
チン株を備えた代謝浮動二重（三重）マ−カ−（個々の
安全度の積としての総合安定度）ワクチン株のセット。 ・ Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ ６０
／Ｒｉｆ ４２ 寄託番号 ＤＳＭ ８４３３ 世代時間：
＝ ３１分 ・ Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ Ｓｓｑ／Ｓｍ ２４
／Ｒｉｆ １２ 寄託番号 ＤＳＭ ８４３５ 世代時間：
＝ ３２分 ・ Ｓ．ｉｎｆａｎｔｉｓ Ｓｓｑ／Ｓｍ １５３／Ｒ
ｉｆ ７ 寄託番号 ＤＳＭ ８４３４ 世代時間：
＝ ３１分 ・ Ｓ．ａｎａｔｕｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ ８１／Ｒｉｆ
２１ 寄託番号 ＤＳＭ ８４４１ 世代時間：
＝ ３２分 ・ Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ Ｎａｌ ２／Ｒｉｆ
９／Ｒｔｔ 世代時間： ＝ ３２分 （寄託場所： ＤＳＭ（ドイッチェ・サムラング・フォ
ン・マイクロオ−ガニズメン・ウント・ツエルクルツ−
レンＧｍｂＨ、ブラウンシュヴァイク、Ｄｅｕｔｓｃｈ
ｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎ
ｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ Ｇｍ
ｂＨ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ） − 各ワクチン株セットの変異体を然るべく知られた方
法により試験するための試験／実験動物 ・ニワトリのヒナ（茶色の卵を産む。マレック病予防接
種済） ・ＩＣＲ、Ｐｒｏｂ０１マウス
ｈｉｍｕｒｉｕｍ）、腸炎菌（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄ
ｉｓ）、サルモネラ・インファンティス（Ｓ．ｉｎｆａ
ｎｔｉｓ）、サルモネラ・アナタム（Ｓ．ａｎａｔｕ
ｍ） − 別途の表面膜マ−カ−と、階層化減衰／階層化延長
世代時間（ＧＴ）（減衰等量）並びに下記の寄託済ワク
チン株を備えた代謝浮動二重（三重）マ−カ−（個々の
安全度の積としての総合安定度）ワクチン株のセット。 ・ Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ ６０
／Ｒｉｆ ４２ 寄託番号 ＤＳＭ ８４３３ 世代時間：
＝ ３１分 ・ Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ Ｓｓｑ／Ｓｍ ２４
／Ｒｉｆ １２ 寄託番号 ＤＳＭ ８４３５ 世代時間：
＝ ３２分 ・ Ｓ．ｉｎｆａｎｔｉｓ Ｓｓｑ／Ｓｍ １５３／Ｒ
ｉｆ ７ 寄託番号 ＤＳＭ ８４３４ 世代時間：
＝ ３１分 ・ Ｓ．ａｎａｔｕｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ ８１／Ｒｉｆ
２１ 寄託番号 ＤＳＭ ８４４１ 世代時間：
＝ ３２分 ・ Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ Ｎａｌ ２／Ｒｉｆ
９／Ｒｔｔ 世代時間： ＝ ３２分 （寄託場所： ＤＳＭ（ドイッチェ・サムラング・フォ
ン・マイクロオ−ガニズメン・ウント・ツエルクルツ−
レンＧｍｂＨ、ブラウンシュヴァイク、Ｄｅｕｔｓｃｈ
ｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎ
ｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ Ｇｍ
ｂＨ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ） − 各ワクチン株セットの変異体を然るべく知られた方
法により試験するための試験／実験動物 ・ニワトリのヒナ（茶色の卵を産む。マレック病予防接
種済） ・ＩＣＲ、Ｐｒｏｂ０１マウス
【００４２】実施例１ 短縮された世代時間を有する復帰変異体（ＧＶＲ） 減衰について増加した安定度を有するワクチン株として
ヒナ／ニワトリ用（表面膜マ−カ−を備えた）代謝浮動
減衰サルモネラオリジナルワクチン株から抽出したも
の。（表面膜マ−カ−を備えた）オリジナルワクチン株
を栄養ブイヨン５０ｍｌ（もしくはその他の液体培地）
に接種し、その後、≦１：１０００の希釈率により連続
的に継代させる。 マ−カ−制御：４回の継代の度毎に、（１ｍｌ当たり１
２．５μｇのナリジキシン酸または）１ｍｌ当たり２０
０μｇのストレプトマイシン並びに１ｍｌ当たり２００
μｇのリファンピシンによる栄養寒天上に受けた増殖
（並びに２０μｇのエリスロマイシンによる欠落した増
殖）を、ワクチン綿棒（ｓｗａｂ）を使い試験する。制
御された継代３０回以内では、各マ−カ−が安定してい
た。 ＭＳ−２実験システム（アボット、Ａｂｂｏｔｔ）での
世代時間の測定：液体培養（栄養、ＬＢ、最少培地ブイ
ヨン）において、世代時間は第５番の継代まででも実質
的に変化しない。第６番の継代以降、早く成長するＧＶ
Ｒクロ−ン（世代時間の階層的短縮）が元のワクチン株
個体群に蓄積する（世代時間、約３１〜３２分； 野生
株、約２２分）。このプロセスは別々のステップにおい
てそれぞれ異なる速度で発生する。第１０番と第１５番
の継代の世代時間は２９分と２７分であり、３０番目の
継代までで２５分以下の世代時間が発生し得る。それ以
降の継代では、世代時間が短めとなるクロ−ンが多くな
る。 注）： 固体培地上で世代時間は、第２０番目の継代に
ついての試験（低い分割数（ル−プによる過度の予防接
種）＝個体群レベルまで希釈もしくはその他の選択的な
プレッシャ−によるものか？）が行われるまで不変であ
る。 ネズミチフス菌ＧＶＲ株の、オリジナルのワクチン株と
の比較において不変もしくは若干低めの減衰レベル： − オリジナル株及びＧＶＲ株： マウス５匹（Ｐｒｏ
ｂ ０１：ライプチヒ大学研究所）各マウスとも、腹腔
内に１０5 、１０6 、１０7 ｃｆｕを受ける。 − 野生株： マウス５匹、各マウスとも、腹腔内に１
０3 、１０5 ｃｆｕを受ける。２週間以内に死亡したマ
ウスを測定する。
ヒナ／ニワトリ用（表面膜マ−カ−を備えた）代謝浮動
減衰サルモネラオリジナルワクチン株から抽出したも
の。（表面膜マ−カ−を備えた）オリジナルワクチン株
を栄養ブイヨン５０ｍｌ（もしくはその他の液体培地）
に接種し、その後、≦１：１０００の希釈率により連続
的に継代させる。 マ−カ−制御：４回の継代の度毎に、（１ｍｌ当たり１
２．５μｇのナリジキシン酸または）１ｍｌ当たり２０
０μｇのストレプトマイシン並びに１ｍｌ当たり２００
μｇのリファンピシンによる栄養寒天上に受けた増殖
（並びに２０μｇのエリスロマイシンによる欠落した増
殖）を、ワクチン綿棒（ｓｗａｂ）を使い試験する。制
御された継代３０回以内では、各マ−カ−が安定してい
た。 ＭＳ−２実験システム（アボット、Ａｂｂｏｔｔ）での
世代時間の測定：液体培養（栄養、ＬＢ、最少培地ブイ
ヨン）において、世代時間は第５番の継代まででも実質
的に変化しない。第６番の継代以降、早く成長するＧＶ
Ｒクロ−ン（世代時間の階層的短縮）が元のワクチン株
個体群に蓄積する（世代時間、約３１〜３２分； 野生
株、約２２分）。このプロセスは別々のステップにおい
てそれぞれ異なる速度で発生する。第１０番と第１５番
の継代の世代時間は２９分と２７分であり、３０番目の
継代までで２５分以下の世代時間が発生し得る。それ以
降の継代では、世代時間が短めとなるクロ−ンが多くな
る。 注）： 固体培地上で世代時間は、第２０番目の継代に
ついての試験（低い分割数（ル−プによる過度の予防接
種）＝個体群レベルまで希釈もしくはその他の選択的な
プレッシャ−によるものか？）が行われるまで不変であ
る。 ネズミチフス菌ＧＶＲ株の、オリジナルのワクチン株と
の比較において不変もしくは若干低めの減衰レベル： − オリジナル株及びＧＶＲ株： マウス５匹（Ｐｒｏ
ｂ ０１：ライプチヒ大学研究所）各マウスとも、腹腔
内に１０5 、１０6 、１０7 ｃｆｕを受ける。 − 野生株： マウス５匹、各マウスとも、腹腔内に１
０3 、１０5 ｃｆｕを受ける。２週間以内に死亡したマ
ウスを測定する。
【００４３】 ネズミチフス菌ＧＶＲ株 継代 世代時間 Ｆ／１５ マウス 番号 （分） Ｎａｌ ２／Ｒｉｆ ９− ＧＶＲ：Ｍｍ Ａ １１／Ｒｔｔ １１ ２８．０ ３ Ｗｈ ３ ＧＶＲ：Ｍｍ Ｃ １１／Ｒｔｔ １１ ２８．５ １ ＧＶＲ：Ｍｍ Ｅ １１／Ｒｔｔ １１ ２７．０ ７ ＧＶＲ：Ｎｂ Ａ １５／Ｒｔｔ １５ ２９．０ ４ ＧＶＲ：Ｎｂ Ｂ １５／Ｒｔｔ １５ ２８．５ ７ Ｗｈ ４ ＧＶＲ：Ｎｂ Ｂ ２５／Ｒｔｔ ２５ ２７．０ ２ ＧＶＲ：Ｎｂ Ｃ １５／Ｒｔｔ １５ ２８．５ ０ Ｗｈ ０ ＧＶＲ：Ｎｂ Ｄ １５／Ｒｔｔ １５ ２８．５ ２ ＧＶＲ：Ｎｂ Ｄ ２５／Ｒｔｔ ２５ ２８．０ １ ＧＶＲ：Ｎｂ Ｅ １５／Ｒｔｔ １５ ２８．５ ２ ＧＶＲ：ＬＢ Ａ １５／Ｒｔｔ １５ ２８．５ ３ ＧＶＲ：ＬＢ Ｂ １５／Ｒｔｔ １５ ２８．５ ５ ＧＶＲ：ＬＢ Ｃ １５／Ｒｔｔ １５ ２８．０ ７ Ｗｈ ４ ＧＶＲ：ＬＢ Ｃ ２５／Ｒｔｔ ２５ ２６．０ ７ ＧＶＲ：ＬＢ Ｄ １５／Ｒｔｔ １５ ２８．５ ０ Ｗｈ ０ ＧＶＲ：ＬＢ Ｄ ２５／Ｒｔｔ ２５ ２６．５ ０ ＧＶＲ：ＬＢ Ｅ １５／Ｒｔｔ １５ ２７．０ ７ Ｗｈ ４ ＊Ｓｓｑ／Ｓｍ ６０／Ｒｉｆ ４２− ＧＶＲ ＩＩＩ １２ １２ ２９．０ ７ ＧＶＲ ＩＩＩ １６ １６ ２８．０ ８ ＧＶＲ Ｉ ３０ ３０ ２８．５ ８ ＧＶＲ ＩＩ ３０ ３０ ２６．０ ９ Nal 2/Rif 9/Rtt ３つの平行な試験 ３２．０ ４ Wh 6、 7 原型 ４つの試験 1992-1990 ５、 8、 5、 6 野生株制御 ：腹腔内１０3cfu= ≧14 ; 腹腔内１０5cfu = 15 Ｍｍ： 液体最少培地 Ｎｂ： 栄養ブイヨン ＬＢ： ＬＢ−ブイヨン Ｗｈ： 同一株により繰り返す動物実験 ＊ Ｓ．ｔｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ ６０／Ｒｉｆ ４２オリ
ジナル株； 世代時間：３１分。
ジナル株； 世代時間：３１分。
【００４４】幾つかの明らかに若干高め（もしくは若干
低め）の減衰クロ−ンとは別に、試験対象となった各Ｇ
ＶＲ株は７つの各別の方法１９９３−１９９０で測定さ
れたオリジナル株の値の変化に対応し、且つ、試験条件
の下での変化の範囲内である減衰作用の変化を示す。幾
つかのＧＶＲ株が若干低めに減衰された場合でも、この
ことは実際面とは関連せず、また、野生株（腹腔内５０
％致死量マウスにおいて約１０1 ｃｆｕ）と比較して５
０％致死量マウスでの対数約５段階の相違は維持され
る。
低め）の減衰クロ−ンとは別に、試験対象となった各Ｇ
ＶＲ株は７つの各別の方法１９９３−１９９０で測定さ
れたオリジナル株の値の変化に対応し、且つ、試験条件
の下での変化の範囲内である減衰作用の変化を示す。幾
つかのＧＶＲ株が若干低めに減衰された場合でも、この
ことは実際面とは関連せず、また、野生株（腹腔内５０
％致死量マウスにおいて約１０1 ｃｆｕ）と比較して５
０％致死量マウスでの対数約５段階の相違は維持され
る。
【００４５】ほぼ実質的に低めの減衰レベルを持ち（恐
らくは、許容可能な副作用に結びつかない）ＧＶＲの、
株に応じた分離の場合は、（過剰減衰の限度までの）高
めの減衰を持ったワクチン株を用いて、最適に減衰され
たサプレッサ−変異体を分離することが好ましい。
らくは、許容可能な副作用に結びつかない）ＧＶＲの、
株に応じた分離の場合は、（過剰減衰の限度までの）高
めの減衰を持ったワクチン株を用いて、最適に減衰され
たサプレッサ−変異体を分離することが好ましい。
【００４６】即ちＧＶＲは、（リンデ・ケ−著「獣医学
実験、Ａｒｃｈ．ｅｘｐｅｒ．Ｖｅｔ．ｍｅｄ．」１９
７８年第３２巻９４３−９４９頁の、Ｓｍ−ｉｄ株やＴ
−ｔｏｌ株と同様に）復帰変異体では無いが、同様の減
衰マ−カ−と、ワクチン株のオリジナル値を中心として
変化する減衰レベルとを猶も有する遺伝子内及び遺伝子
間のサプレッサ−変異体であることは明白である。
実験、Ａｒｃｈ．ｅｘｐｅｒ．Ｖｅｔ．ｍｅｄ．」１９
７８年第３２巻９４３−９４９頁の、Ｓｍ−ｉｄ株やＴ
−ｔｏｌ株と同様に）復帰変異体では無いが、同様の減
衰マ−カ−と、ワクチン株のオリジナル値を中心として
変化する減衰レベルとを猶も有する遺伝子内及び遺伝子
間のサプレッサ−変異体であることは明白である。
【００４７】元のワクチン株に比較した不変の侵入能力
の検出のためには、生後３６時間以下のヒナに経口で１
０9 ｃｆｕのＧＶＲを飲ませる。５日後と８日後に細菌
数／グラム肝臓を定量的に（実施例２参照）且つ蓄積
（Ｓｓｑ／Ｓｍ／Ｒｉｆ株のＧＶＲの場合１ｍｌ当たり
１００μｇのストレプトマイシン及びリファンピシンに
より、また、Ｎａｌ／Ｒｉｆ／Ｒｔｔ株のＧＶＲの場合
１ｍｌ当たり１００μｇのリファンピシンと１２．５μ
ｇのナリジキシン酸による栄養培地）により定性的に測
定した。この場合、ヒナの肝臓におけるＧＶＲの細菌数
は多少ともオリジナルのワクチン株の値に一致する。サ
ルモネラ・インファンティスと、サルモネラ・アナタム
に関しては、腸炎菌とネズミチフス菌に比べて少なめの
細菌数が野生株、オリジナル株並びに選択されたＧＶＲ
において確認されており、この点は「サルモネラ・イン
ファンティスはニワトリへの侵入性が低い」とのユ−・
メスナ−の観察結果（ライプチヒ大学、博士号論文「獣
医学医療能力」１９９１年）と一致している。
の検出のためには、生後３６時間以下のヒナに経口で１
０9 ｃｆｕのＧＶＲを飲ませる。５日後と８日後に細菌
数／グラム肝臓を定量的に（実施例２参照）且つ蓄積
（Ｓｓｑ／Ｓｍ／Ｒｉｆ株のＧＶＲの場合１ｍｌ当たり
１００μｇのストレプトマイシン及びリファンピシンに
より、また、Ｎａｌ／Ｒｉｆ／Ｒｔｔ株のＧＶＲの場合
１ｍｌ当たり１００μｇのリファンピシンと１２．５μ
ｇのナリジキシン酸による栄養培地）により定性的に測
定した。この場合、ヒナの肝臓におけるＧＶＲの細菌数
は多少ともオリジナルのワクチン株の値に一致する。サ
ルモネラ・インファンティスと、サルモネラ・アナタム
に関しては、腸炎菌とネズミチフス菌に比べて少なめの
細菌数が野生株、オリジナル株並びに選択されたＧＶＲ
において確認されており、この点は「サルモネラ・イン
ファンティスはニワトリへの侵入性が低い」とのユ−・
メスナ−の観察結果（ライプチヒ大学、博士号論文「獣
医学医療能力」１９９１年）と一致している。
【００４８】従って、Ｓ．ｔｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ ６０／
Ｒｉｆ ４２−ＧＶＲ ＩＩ ３０、Ｓ．ｅｎｔ Ｓｓ
ｑ／Ｓｍ ２４／Ｒｉｆ １２−ＧＶＲ ＩＩ ３０、
Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ／Ｓｍ １５３／Ｒｉｆ ７−ＧＶ
Ｒ ＩＩ ３０、Ｓ．ａｎａＳｓｑ／Ｓｍ ８１／Ｒｉ
ｆ ２１−ＧＶＲ ＩＩ ３０など、短縮された世代時
間を持つ復帰変異体は、減衰について極端な安定性を有
するサルモネラワクチン株として理想的である（菌力を
少なくとも１０-21 以下に減少させる減衰マ−カ−の総
合的安定度： Ｓｍ×Ｒｉｆ×サプレッサ−変異）。
（本文末尾の表も参照のこと。）
Ｒｉｆ ４２−ＧＶＲ ＩＩ ３０、Ｓ．ｅｎｔ Ｓｓ
ｑ／Ｓｍ ２４／Ｒｉｆ １２−ＧＶＲ ＩＩ ３０、
Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ／Ｓｍ １５３／Ｒｉｆ ７−ＧＶ
Ｒ ＩＩ ３０、Ｓ．ａｎａＳｓｑ／Ｓｍ ８１／Ｒｉ
ｆ ２１−ＧＶＲ ＩＩ ３０など、短縮された世代時
間を持つ復帰変異体は、減衰について極端な安定性を有
するサルモネラワクチン株として理想的である（菌力を
少なくとも１０-21 以下に減少させる減衰マ−カ−の総
合的安定度： Ｓｍ×Ｒｉｆ×サプレッサ−変異）。
（本文末尾の表も参照のこと。）
【００４９】実施例２ マクロライド耐性復帰変異体（ＭＴＲ） ヒナ／ニワトリ用のＳｍ／Ｒｉｆ代謝浮動減衰ワクチン
株のＳｓｑ（表面膜） マ−カ−から、抗流行病潜在能の高めた安定性を有する
サルモネラワクチン株として抽出するもの。
株のＳｓｑ（表面膜） マ−カ−から、抗流行病潜在能の高めた安定性を有する
サルモネラワクチン株として抽出するもの。
【００５０】ヘラを使って、Ｓｓｑ／Ｓｍ／Ｒｉｆオリ
ジナル株１０8 〜１０9 ｃｆｕを、１ｍｌ当たり２０μ
ｇのエリスロマイシンを含んだ栄養寒天上に移し（もし
くは２段階手順の場合は、まず、１ｍｌ当たり５〜１０
μｇのエリスロマイシンに移し、その後この培地から１
ｍｌ当たり２０μｇのエリスロマイシンに移す）、そし
て、成長したコロニ−／クロ−ンを、栄養寒天上での約
１０回の継代後、獲得されているマクロライド耐性につ
いて試験する。これらのマクロライド耐性復帰変異体
の、Ｎａ−デソキシコレ−ト（Ｎａ−ｄｅｓｏｘｙｃｈ
ｏｌａｔｅ）、Ｎａ−ドデシルサルフェ−ト（Ｎａ−ｄ
ｏｄｅｃｙｌｓｕｌｐｈａｔｅ）並びにエ−・オ−・シ
プロフロキサシン（ａ．ｏ．ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉ
ｎ）（現在のところサルモネラ菌に対し最も有効な抗生
物質）、クロラムフェニコ−ル、ドキシサイクリンに対
する耐性／感受性は、腸炎菌の野生株、個々の復帰変異
体の値にほぼ一致するが、シプロフロキサシンに対して
はオリジナル株の４倍までの高めの（超）感受性を猶も
有している。
ジナル株１０8 〜１０9 ｃｆｕを、１ｍｌ当たり２０μ
ｇのエリスロマイシンを含んだ栄養寒天上に移し（もし
くは２段階手順の場合は、まず、１ｍｌ当たり５〜１０
μｇのエリスロマイシンに移し、その後この培地から１
ｍｌ当たり２０μｇのエリスロマイシンに移す）、そし
て、成長したコロニ−／クロ−ンを、栄養寒天上での約
１０回の継代後、獲得されているマクロライド耐性につ
いて試験する。これらのマクロライド耐性復帰変異体
の、Ｎａ−デソキシコレ−ト（Ｎａ−ｄｅｓｏｘｙｃｈ
ｏｌａｔｅ）、Ｎａ−ドデシルサルフェ−ト（Ｎａ−ｄ
ｏｄｅｃｙｌｓｕｌｐｈａｔｅ）並びにエ−・オ−・シ
プロフロキサシン（ａ．ｏ．ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉ
ｎ）（現在のところサルモネラ菌に対し最も有効な抗生
物質）、クロラムフェニコ−ル、ドキシサイクリンに対
する耐性／感受性は、腸炎菌の野生株、個々の復帰変異
体の値にほぼ一致するが、シプロフロキサシンに対して
はオリジナル株の４倍までの高めの（超）感受性を猶も
有している。
【００５１】また、（環境的な抵抗についての間接的な
目安としての）３７℃の水中での死滅反応速度（出発細
菌数１０6 ｃｆｕ／ｍｌ）は野生株の値を示さない。そ
の理由は、約２／３に短縮されたワクチン株の寿命にお
いて（野生株対表面膜マ−カ−無しのワクチン株の比較
における）変化が生じるからである。
目安としての）３７℃の水中での死滅反応速度（出発細
菌数１０6 ｃｆｕ／ｍｌ）は野生株の値を示さない。そ
の理由は、約２／３に短縮されたワクチン株の寿命にお
いて（野生株対表面膜マ−カ−無しのワクチン株の比較
における）変化が生じるからである。
【００５２】元のワクチン株と比べて水中での同様また
は短めの寿命に関して、並びに、腸炎菌、即ち、シプロ
フロキサシンに対する残存する超感受性に関しての、上
述の復帰変異体の選択を、侵入及び排出作用についてワ
クチン株と比較してヒナのモルモットを使って試験し
た。この実験のため、生後３６時間以下のヒナに経口で
オリジナルのワクチン株それぞれと、それらから抽出し
たマクロライド耐性復帰変異体それぞれを１０9 ｃｆｕ
ずつ飲ませた。 − 侵入能力の検出： ５日後と８日後に細菌数／グラ
ム肝臓を定量的に（５ｍｌのＰＢＳ中の肝臓ホモジネ−
ト、ヘラで３×０．１ｍｌに広げる。検出境界は１グラ
ム当たり菌数２０以下）、また、抗生物質添加剤（実施
例１参照）を含んだ栄養ブイヨンへの蓄積により定性的
に測定した。 − 排出作用の試験： １２日間に渡って大腸菌個体群
の千分の一を単位として便中のサルモネラ菌数を測定
し、これらの値を、（例えばＳ．ｔｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ
６０／Ｒｉｆ ４２などと同じ腹腔内５０％致死量マウ
ス及び同様の世代時間延長を備え）表面膜マ−カ−の無
い追加的な比較用ワクチン株Ｓ．ｔｍ Ｎａｌ ２／Ｒ
ｉｆ ９の値と比較する。またこのモルモットにおいて
マクロライド耐性復帰変異体が（表面膜マ−カ−を備え
た）元のワクチン株と同様の作用を示している。 − 侵入能力： ニワトリ肝臓における復帰変異体の菌
数は元のワクチン株の値と一致する。サルモネラ・イン
ファンティスとサルモネラ・アナタムに関しては野生
株、元のワクチン株並びに選択された復帰変異体におい
て腸炎菌とネズミチフス菌と比較して少なめの菌数が確
認されるが、これは、「サルモネラ・インファンティス
はニワトリへの侵入性が低い」とのユ−・メスナ−の観
察結果（ライプチヒ大学、博士号論文「獣医学医療能
力」１９９１年）と一致している。 − 排出作用： 腸内細菌の千分の一部から測定された
マクロライド耐性復帰変異体の定量的排出作用は元のワ
クチン株のものとほぼ一致し、５〜６日以内に千分の
０．１の限度よりも降下する。 換言すると： 元のワクチン株と、ヒナにおける事実上
同一の排出作用（及び不変の侵入能力）とに比較して、
被験のマクロライド耐性復帰変異体の、それらと同様ま
たは部分的に同一となる水中での速めの死亡率は、これ
らの株が表面膜マ−カ−における復帰変異体ではなく、
それ故、元の株のＳｓｑマ−カ−が系統的経路で与えら
れる１０-8以下の復帰頻度より相当に高めの安定性を有
していることを間接的に証明している。従って、例え
ば、Ｓ．ｔｍ Ｓｓｑ−ＭＴＲ １６／Ｓｍ ６０／Ｒ
ｉｆ ４２、Ｓ．ｅｎｔ Ｓｓｑ−ＭＴＲ ２５／Ｓｍ
２４／Ｒｉｆ １２、 Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ−ＭＴＲ
１２／Ｓｍ １５３／Ｒｉｆ ７、Ｓ．ａｎａ Ｓｓ
ｑ−ＭＴＲ ２３／Ｓｍ ８１／Ｒｉｆ ２１などのマ
クロライド耐性復帰変異体は、抗流行病潜在能が高めの
安定度を有しているワクチンとして理想的である（総合
的安定度 ＝ Ｓｓｑマ−カ−の個々の安定度と、サプ
レッサ−変異体との積）。（下記の表を参照のこと。） 付録： 実施例１及び実施例２に関する表 表面膜を備えた代謝浮動減衰した二重マ−カ−（オリジ
ナル）ワクチン株並びにＭＴＲ＊から抽出したＧＶＲ：
事実上不変の侵入能力（生後３６時間以下のヒナに１
０9 ｃｆｕを経口適用して５日後と８日後のφ菌数／グ
ラム肝臓）；ＭＴＲ＊の残存抗流行病潜在能（３７℃の
水中での１０6 ｃｆｕ／ｍｌの死滅反応速度。 サルモ 株 世代 φ菌数／グラム肝臓 ｃｆｕ水 ネラ・ 時間 ５日め ８日め ９日め （分） 野生株 22.0 6.0 x 103 不詳 4 x 105 Ssq/Sm 60/Rif 42 31.0 1.5 x 103 2.8 x 102 4 x 103 ネズミ GVR II/30 26.0 2.5 x 103 6.3 x 102 チフス GVR III/16 28.0 1.5 x 103 2.8 x 102 菌 MTR 16 1.0 x 103 1.4 x 102 1 x 104 MTR 40 1.5 x 103 5.6 x 102 1 x 104 野生株 22.0 5.0 x 103 不詳 3 x 105 Ssq/Sm 24/Rif 12 32.0 4.0 x 103 不詳 2 x 104 腸炎菌 GVR II/30 28.0 4.5 x 103 5.3 x 102 GVR IV/16 27.0 2.0 x 103 不詳 MTR 2 2.5 x 103 1.9 x 102 5 x 103 MTR 25 2.5 x 103 5.6 x 102 7 x 103 野生株 22.0 1.5 x 102 不詳 4 x 104 Ssq/Sm 81/Rif 21 32.0 3.5 x 101 蓄積は 1 x 104 アナタム GVR II/30 26.5 1.0 x 102 ほとんど GVR III/16 27.5 2.0 x 102 正。 MTR 5 3.5 x 101 1 x 104 MTR 23 7.0 x 101 1 x 104 野生株 22.0 2.0 x 102 不詳 5 x 105 Ssq/Sm 153/Rif 7 31.0 1.0 x 102 蓄積は 6 x 104 インファ GVR II/30 25.0 7.0 x 101 ほとんど ンティス GVR III/24 28.5 1.0 x 102 正。 MTR 12 2.0 x 102 7 x 104 MTR 28 2.0 x 102 6 x 104 ＊ＭＴＲ： アドラ−・ティ−及びジャンスク・シ−の
博士号論文（１９９３／９４）
は短めの寿命に関して、並びに、腸炎菌、即ち、シプロ
フロキサシンに対する残存する超感受性に関しての、上
述の復帰変異体の選択を、侵入及び排出作用についてワ
クチン株と比較してヒナのモルモットを使って試験し
た。この実験のため、生後３６時間以下のヒナに経口で
オリジナルのワクチン株それぞれと、それらから抽出し
たマクロライド耐性復帰変異体それぞれを１０9 ｃｆｕ
ずつ飲ませた。 − 侵入能力の検出： ５日後と８日後に細菌数／グラ
ム肝臓を定量的に（５ｍｌのＰＢＳ中の肝臓ホモジネ−
ト、ヘラで３×０．１ｍｌに広げる。検出境界は１グラ
ム当たり菌数２０以下）、また、抗生物質添加剤（実施
例１参照）を含んだ栄養ブイヨンへの蓄積により定性的
に測定した。 − 排出作用の試験： １２日間に渡って大腸菌個体群
の千分の一を単位として便中のサルモネラ菌数を測定
し、これらの値を、（例えばＳ．ｔｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ
６０／Ｒｉｆ ４２などと同じ腹腔内５０％致死量マウ
ス及び同様の世代時間延長を備え）表面膜マ−カ−の無
い追加的な比較用ワクチン株Ｓ．ｔｍ Ｎａｌ ２／Ｒ
ｉｆ ９の値と比較する。またこのモルモットにおいて
マクロライド耐性復帰変異体が（表面膜マ−カ−を備え
た）元のワクチン株と同様の作用を示している。 − 侵入能力： ニワトリ肝臓における復帰変異体の菌
数は元のワクチン株の値と一致する。サルモネラ・イン
ファンティスとサルモネラ・アナタムに関しては野生
株、元のワクチン株並びに選択された復帰変異体におい
て腸炎菌とネズミチフス菌と比較して少なめの菌数が確
認されるが、これは、「サルモネラ・インファンティス
はニワトリへの侵入性が低い」とのユ−・メスナ−の観
察結果（ライプチヒ大学、博士号論文「獣医学医療能
力」１９９１年）と一致している。 − 排出作用： 腸内細菌の千分の一部から測定された
マクロライド耐性復帰変異体の定量的排出作用は元のワ
クチン株のものとほぼ一致し、５〜６日以内に千分の
０．１の限度よりも降下する。 換言すると： 元のワクチン株と、ヒナにおける事実上
同一の排出作用（及び不変の侵入能力）とに比較して、
被験のマクロライド耐性復帰変異体の、それらと同様ま
たは部分的に同一となる水中での速めの死亡率は、これ
らの株が表面膜マ−カ−における復帰変異体ではなく、
それ故、元の株のＳｓｑマ−カ−が系統的経路で与えら
れる１０-8以下の復帰頻度より相当に高めの安定性を有
していることを間接的に証明している。従って、例え
ば、Ｓ．ｔｍ Ｓｓｑ−ＭＴＲ １６／Ｓｍ ６０／Ｒ
ｉｆ ４２、Ｓ．ｅｎｔ Ｓｓｑ−ＭＴＲ ２５／Ｓｍ
２４／Ｒｉｆ １２、 Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ−ＭＴＲ
１２／Ｓｍ １５３／Ｒｉｆ ７、Ｓ．ａｎａ Ｓｓ
ｑ−ＭＴＲ ２３／Ｓｍ ８１／Ｒｉｆ ２１などのマ
クロライド耐性復帰変異体は、抗流行病潜在能が高めの
安定度を有しているワクチンとして理想的である（総合
的安定度 ＝ Ｓｓｑマ−カ−の個々の安定度と、サプ
レッサ−変異体との積）。（下記の表を参照のこと。） 付録： 実施例１及び実施例２に関する表 表面膜を備えた代謝浮動減衰した二重マ−カ−（オリジ
ナル）ワクチン株並びにＭＴＲ＊から抽出したＧＶＲ：
事実上不変の侵入能力（生後３６時間以下のヒナに１
０9 ｃｆｕを経口適用して５日後と８日後のφ菌数／グ
ラム肝臓）；ＭＴＲ＊の残存抗流行病潜在能（３７℃の
水中での１０6 ｃｆｕ／ｍｌの死滅反応速度。 サルモ 株 世代 φ菌数／グラム肝臓 ｃｆｕ水 ネラ・ 時間 ５日め ８日め ９日め （分） 野生株 22.0 6.0 x 103 不詳 4 x 105 Ssq/Sm 60/Rif 42 31.0 1.5 x 103 2.8 x 102 4 x 103 ネズミ GVR II/30 26.0 2.5 x 103 6.3 x 102 チフス GVR III/16 28.0 1.5 x 103 2.8 x 102 菌 MTR 16 1.0 x 103 1.4 x 102 1 x 104 MTR 40 1.5 x 103 5.6 x 102 1 x 104 野生株 22.0 5.0 x 103 不詳 3 x 105 Ssq/Sm 24/Rif 12 32.0 4.0 x 103 不詳 2 x 104 腸炎菌 GVR II/30 28.0 4.5 x 103 5.3 x 102 GVR IV/16 27.0 2.0 x 103 不詳 MTR 2 2.5 x 103 1.9 x 102 5 x 103 MTR 25 2.5 x 103 5.6 x 102 7 x 103 野生株 22.0 1.5 x 102 不詳 4 x 104 Ssq/Sm 81/Rif 21 32.0 3.5 x 101 蓄積は 1 x 104 アナタム GVR II/30 26.5 1.0 x 102 ほとんど GVR III/16 27.5 2.0 x 102 正。 MTR 5 3.5 x 101 1 x 104 MTR 23 7.0 x 101 1 x 104 野生株 22.0 2.0 x 102 不詳 5 x 105 Ssq/Sm 153/Rif 7 31.0 1.0 x 102 蓄積は 6 x 104 インファ GVR II/30 25.0 7.0 x 101 ほとんど ンティス GVR III/24 28.5 1.0 x 102 正。 MTR 12 2.0 x 102 7 x 104 MTR 28 2.0 x 102 6 x 104 ＊ＭＴＲ： アドラ−・ティ−及びジャンスク・シ−の
博士号論文（１９９３／９４）
Claims (21)
- 【請求項１】増大させた安定性を有する生ワクチンであ
って、表面膜変異と、宿主たる種の感受性に適合させた
最適な減衰レベルとを備えるか備えない少なくとも１つ
の、代謝浮動減衰し免疫原性で安定な単一または多重マ
−カ−生ワクチンから製造されるものであって、ワクチ
ン株として、ワクチン株の復帰変異体を、減衰または／
及び表面膜マ−カ−を猶も有するサプレッサ−変異体と
して用いることを特徴とするもの。 - 【請求項２】請求項１記載の生ワクチンであって、ワク
チン株として、短縮された世代時間を有するワクチン株
の復帰変異体を用い、サプレッサ−変異体と成る前記復
帰変異体が１つ乃至それ以上の、減衰する代謝浮動マ−
カ−を有していることを特徴とするもの。 - 【請求項３】請求項１に記載の生ワクチンであってワク
チン株としてワクチン株のマクロライド耐性復帰変異体
を用い、サプレッサ−変異体たる前記復帰変異体が猶も
表面膜マ−カ−を有していることを特徴とするもの。 - 【請求項４】請求項１及び２項に記載の生ワクチンであ
って、復帰変異体が、元のワクチン株と同様かまたは若
干低めの減衰レベルを有することを特徴とするもの。 - 【請求項５】請求項１及び３に記載の生ワクチンであっ
て、復帰変異体が元のワクチン株と同様かまたは若干高
めの抗流行病潜在能を有することを特徴とするもの。 - 【請求項６】請求項１乃至５項に記載の生ワクチンであ
って、ワクチン株として、ワクチン株の二重復帰変異体
を用い、サプレッサ−変異体として、短縮された世代時
間とマクロライド耐性を有している前記復帰変異体が１
つ乃至それ以上の減衰する代謝浮動マ−カ−を持つとと
もに、猶も表面膜マ−カ−を有することを特徴とするも
の。 - 【請求項７】サルモネラ菌感染に対するヒナの経口免疫
化並びにニワトリの経口または非経口的免疫化／追加免
疫のためのサルモネラ菌生ワクチンであって、特許請求
項１乃至６項のうち１つに従い、少なくとも１つの、減
衰した免疫原性生ワクチンから製造されるものであっ
て、ワクチン株が、 ・ Ｓ．ｔｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ ６０／Ｒｉｆ ４２／−
ＧＶＲ ＩＩ ３０ 世代時間約２６．０分 ・ Ｓ．ｅｎｔ Ｓｓｑ／Ｓｍ ２４／Ｒｉｆ １２／
−ＧＶＲ ＩＩ ３０ 世代時間約２７．０分 ・ Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ／Ｓｍ １５３／Ｒｉｆ ７／
−ＧＶＲ ＩＩ ３０ 世代時間約２５．０分 ・ Ｓ．ａｎａ Ｓｓｑ／Ｓｍ ８１／Ｒｉｆ ２１／
−ＧＶＲ ＩＩ ３０ 世代時間約２６．５分 などの、世代時間が約３１〜３２分から最高２７分以下
まで短縮された短縮された世代時間を有する復帰変異体
か、 ・ Ｓ．ｔｍ Ｓｓｑ−ＭＴＲ １６／Ｓｍ ６０／Ｒ
ｉｆ ４２ ・ Ｓ．ｅｎｔ Ｓｓｑ−ＭＴＲ ２５／Ｓｍ ２４／
Ｒｉｆ １２ ・ Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ−ＭＴＲ １２／Ｓｍ １５３
／Ｒｉｆ ７ ・ Ｓ．ａｎａ Ｓｓｑ−ＭＴＲ ２３／Ｓｍ ８１／
Ｒｉｆ ２１ などの、１ｍｌ当たりのエリスロマイシンを５μｇ以下
から２０μｇ以上に増加させたＭＩＣ（最少阻止濃度）
を備えたマクロライド耐性を有する復帰変異体のうち１
つまたはそれ以上から構成されることを特徴とするも
の。 - 【請求項８】 表面膜変異と、宿主たる種の感受性に適
合させた最適な減衰レベルとを備えるかまたは備えない
少なくとも１つの、代謝浮動減衰され、免疫原性で安定
な単一または多重マ−カ−生ワクチンから製造される、
増大させた安定性を有する生ワクチンの製造方法であっ
て、追加的な表面膜変異と、宿主種に適合する減衰と、
更に、明確な延長世代時間とを備えないかまたは備える
代謝浮動減衰したオリジナルのワクチン株から出発し、
短縮した世代時間または／及びマクロライド耐性を有す
る復帰変異体が分離され、サプレッサ−変異体たる前記
復帰変異体が、オリジナルのワクチン株の減衰または／
及び表面膜マ−カ−とともにワクチン株として使用さ
れ、そのようなものとして知られた方法により生ワクチ
ンを製造することを特徴とする前記生ワクチン製造方
法。 - 【請求項９】請求項８に記載の生ワクチン製造方法であ
って、短縮した世代時間と低めの減衰レベルを持った復
帰変異体を株に応じて分離する場合において最適に減衰
されたサプレッサ−変異体の分離のために、（おそらく
過剰減衰の限度までの）高めの減衰を備えるオリジナル
のワクチン株が使用されることを特徴とするもの。 - 【請求項１０】請求項８に記載の生ワクチン製造方法で
あって、抗流行病潜在能に高い安定性を有するワクチン
株の製造のために、元のワクチン株と同様かもしくは若
干高めの抗流行病潜在能を持つ復帰変異体が使用される
ことを特徴とするもの。 - 【請求項１１】請求項８乃至１０に記載の生ワクチン製
造方法であって、元のワクチン株がマクロライド感受性
（表面膜）マ−カ−を有する復帰変異体であって、短縮
された世代時間とマクロライド耐性とを持つものが使用
されることを特徴とするもの。 - 【請求項１２】請求項８及び９に記載の生ワクチン製造
方法であって、ヒナまたはニワトリに最適に適合させた
ワクチン株の製造方法において、安定度の増加するワク
チン株を選択し、この野生株の元のワクチン株は野生株
に比較して世代時間が２２分から約３１〜３２分に延長
されており、前記世代時間が、短縮された世代時間を有
する復帰変異体の場合においては、最高２７分以下まで
短縮されることを特徴とするもの。 - 【請求項１３】請求項８及び１０のうち１つに記載の生
ワクチン製造方法であって、ヒナまたはニワトリに最適
に適合させたワクチン株の製造方法において抗流行病潜
在能について増加させた安定度を持つワクチン株が選択
され、元のワクチン株がマクロライドに対する感受性を
有しており、マクロライド耐性を持つ復帰変異体の場合
においては、エリスロマイシンが１ｍｌ当たり５μｇ以
下から２０μｇ以上となる強化されたＭＩＣに元のワク
チン株自体が示されることを特徴とするもの。 - 【請求項１４】請求項１２及び１３に記載の生ワクチン
製造方法において、オリジナルのワクチン株がマクロラ
イド感受性（表面膜）マ−カ−を持つ復帰変異体であっ
て短縮された世代時間とマクロライド耐性とを有するも
のが選択されることを特徴とするもの。 - 【請求項１５】請求項１２乃至１４のうち１つに記載の
生ワクチン製造方法において、請求項７記載の１つ乃至
それ以上のワクチン株が使用されることを特徴とするも
の。 - 【請求項１６】増大させた安定性を持つサルモネラワク
チン株であって、最高２７分以下までの短縮された世代
時間を有する１つまたはそれ以上のサプレッサ−変異体
から成るもの。 - 【請求項１７】増大させた安定性を持つサルモネラワク
チン株であって、１ｍｌ当たりのエリスロマイシンを５
μｇ以下のＭＩＣ（最少阻止濃度）から２０μｇ以上ま
で増加させたマクロライド耐性を有するサプレッサ−変
異体から成るもの。 - 【請求項１８】増大させた安定性を持つサルモネラワク
チン株であって、短縮された世代時間とマクロライド耐
性とを有するサプレッサ−変異体から成るもの。 - 【請求項１９】請求項１６乃至１８のうち１つに記載の
サルモネラワクチン株であって所定レンジの世代時間ま
たはマクロライド耐性におけるＳ．ｔｍ Ｓｓｑ／Ｓｍ
６０／Ｒｉｆ ４２／−ＧＶＲ ＩＩ ３０、 Ｓ．
ｅｎｔ Ｓｓｑ／Ｓｍ ２４／Ｒｉｆ １２／−ＧＶＲ
ＩＩ ３０、 Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ／Ｓｍ １５３／
Ｒｉｆ ７／−ＧＶＲ ＩＩ ３０、 Ｓ．ａｎａ Ｓ
ｓｑ／Ｓｍ ８１／Ｒｉｆ ２１／−ＧＶＲ ＩＩ ３
０、 Ｓ．ｔｍ Ｓｓｑ−ＭＴＲ １６／Ｓｍ ６０／
Ｒｉｆ ４２、 Ｓ．ｅｎｔ Ｓｓｑ−ＭＴＲ ２５／
Ｓｍ ２４／Ｒｉｆ １２、 Ｓ．ｉｎｆ Ｓｓｑ−Ｍ
ＴＲ １２／Ｓｍ １５３／Ｒｉｆ ７及び／または
Ｓ．ａｎａ Ｓｓｑ−ＭＴＲ ２３／Ｓｍ ８１／Ｒｉ
ｆ ２１及びこれらの変種であることを特徴とするも
の。 - 【請求項２０】請求項１乃至７のうち１つに記載の生ワ
クチン株の、増加させた安定度を持つ生ワクチン株とし
ての使用。 - 【請求項２１】請求項７に記載の生ワクチン株の、サル
モネラ感染に対するヒナの経口免疫化並びにニワトリの
経口または非経口的免疫化／追加免疫のための生ワクチ
ンとしての使用。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4333742A DE4333742A1 (de) | 1993-10-04 | 1993-10-04 | Lebendimpfstoff mit erhöhter Stabilität |
| DE4333742.2 | 1993-10-04 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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