RU2103355C1 - Способ получения аттенуированных иммуногенных штаммов pasteurella multocida - Google Patents
Способ получения аттенуированных иммуногенных штаммов pasteurella multocida Download PDFInfo
- Publication number
- RU2103355C1 RU2103355C1 RU95119337A RU95119337A RU2103355C1 RU 2103355 C1 RU2103355 C1 RU 2103355C1 RU 95119337 A RU95119337 A RU 95119337A RU 95119337 A RU95119337 A RU 95119337A RU 2103355 C1 RU2103355 C1 RU 2103355C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- streptomycin
- pasteurella multocida
- resistance
- strains
- mcg
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Использование: биотехнология, ветеринария, ветеринарная микробиология, живые вакцины из аттенуированных штаммов Pasteurella multocida. Сущность изобретения: заключается в двуступенчатом отборе спонтанных и индуцированных 2-аминопурином мутантов возбудителя Pasteurella multocida, устойчивых к стрептомицину. Получаемые аттенуированные штаммы характеризуются наличием двух независимых мутаций, первая из которых придает клеткам устойчивость к 1000 мкг/мл стрептомицина, а вторая обеспечивает повышение уровня устойчивости к этому антибиотику до 10000 мкг/мл и приводит к частичной стрептомицинзависимости. Каждая из мутаций обуславливает значительное снижение вирулентности штаммов возбудителя. В целом наличие двух независимых мутаций обеспечивает гарантию от реверсий к исходному вирулентному состоянию и характеризует надежность способа аттенуации.
Description
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к ветеринарной микробиологии и может быть использовано для получения живых вакцин из патогенных штаммов Pasteurella multocida.
Пастереллез - высококонтагиозное инфекционное заболевание, поражающее многие виды сельскохозяйственных животных с летальностью 50-80 %. Наиболее эффективным средством профилактики инфекции, вызванной Pasteurella multocida, являются живые вакцины, приготовленные на основе ослабленных или авирулентных штаммов возбудителя. Известны различные способы получения мутаций в геноме бактерий, приводящие к снижению вирулентности и сохраняющие иммуногенные свойства штаммов.
Известен способ получения стрептомицинзависимого штамма Pasteurella multocida, обладающего иммуногенными свойствами, путем отбора устойчивых к стрептомицину мутантов (Lab. Anim. Sci - 1989, - 39,3 p.229-233).
Однако используемый подход не привел к получению эффективной вакцины.
Наиболее близким к предлагаемому способу является способ получения иммуногенных штаммов Pasteurella multocida в результате обработки бактерий мутагеном N-метил-N'-нитро-N-нитрозогуамидином (НГ) (патент США N 4999191, A 61 K 39/07).
Недостатком этого способа является вероятность возникновения реверсий т. е. мутаций, приводящих к возврату к дикому типу штамма. Это объясняется плейотропным характером мутаций, индуцируемых НГ.
Задачей изобретения является разработка более эффективного способа аттенуации патогенных штаммов Pasteurella multocida.
Задача решается тем, что аттенуация вирулентных культур достигается за счет последовательного получения в геноме Pasteurella multocida двух независимых мутаций, первая из которых возникает спонтанно и придает клеткам устойчивость к 1000 мкг/мл стрептомицина, а вторая индуцируется под воздействием 2-аминопурина, и обеспечивает повышение устойчивости к этому антибиотику до 10 000 мкг/мл и приводит к частичной стрептомицинзависимости. Каждая мутация обуславливает значительное снижение вирулентности Pasteurella multocida. В то же время наличие двух независимых мутаций создает невозможность реверсий аттенуированных штаммов к исходному состоянию вирулентности.
Пример. Исходный выделенный от павшей индюшки, высоковирулентный для мышей (LD50 10 бактерий) штамм Pasteurella multocida чувствительный к стрептомицину в концентрации 1010 кл/мл высеивают на плотную питательную среду, содержащую 100 мкг/мл стрептомицина и инкубируют при 37oC в течение 24-40 ч. В этих условиях образуются отдельные редкие колонии с частотой 1 - 5•10-9. Мутантные клоны, МПК стрептомицина, для которых не превышает 1000 мкг/мл, исследуют с целью оценки вирулентности для беспородных белых мышей в дозах 104 - 107 м. кл. путем подкожного заражения. Далее используют штаммы со сниженной не менее чем на 4 порядка вирулентностью (LD50 - 5•105).
С целью дальнейшего снижения вирулентности проводят отбор второго поколения Strr мутантов. Для этого клетки отобранных штаммов инкубируют в течение 24 ч при 37oC в жидкой среде в присутствии 2 - амминопурина (80 мкг/мл). Бактерии в концентрации 1010 кл/мл высевают не плотную среду, содержащую 10000 мкг/мл стрептомицина и инкубируют 24 ч при 37oC. У полученных мутантов определяют вирулентность путем подкожного заражения белых мышей бактериями в концентрации 105 - 108 м.кл. и отбирают штаммы с максимальным ее снижением (LD50 5 - 106 - 1•107 м.кл.), а также характеризующиеся стабильностью сохранения приобретенных свойств.
Изучение иммуногенности полученных штаммов Pasteurella multocida проводят путем подкожного введения 104 - 107 клеток (иммунизация) белым мышам с последующим через 14 дн заражением исходным штаммом в дозах 10 и 100 LD50. Согласно полученным данным иммунизация животных в дозах 106 - 107 обеспечивает защиту 90-100% животных при заражении клетками вирулентного штамма в дозе 10 LD50.
Стабильность сохранения штаммами Pasteurella multocida приобретенных признаков (сниженная вирулентность, иммуногенность, устойчивость к стрептомицину) изучают путем анализа свойств после многократного пассирования (до 10 пассажей) штаммов через организм белых мышей, пересевов на плотных и жидких питательных средах (не менее 50 пересевов) сохранения в течении одного года в лиофилиированном состоянии. Согласно результатам анализа, полученные с помощью описанного выше способа аттенуированные штаммы Pasteurella multocida не утрачивает приобретенных свойств, а именно: устойчивость к стрептомицину (МПК 10 000 мкг/мл), вирулентность (LD50 5 10 м.кл.), иммуногенность (LD50 104).
Claims (1)
- Способ получения аттенуированных иммуногенных штаммов Pasteurella multocida путем посева бактериальной взвеси на питательную среду, содержащую стрептомицин, с последующим инкубированием и отбором стрептомицинустойчивых мутантов, отличающийся тем, что отбор проводят двухступенчато: вначале отбирают спонтанные мутанты с устойчивостью к 1000 мкг/мл стрептомицина, подвергают их обработке мутагеном 2-аминопурином, а затем отбирают мутанты с устойчивостью к 10000 мкг/мл стрептомицина.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95119337A RU2103355C1 (ru) | 1995-11-23 | 1995-11-23 | Способ получения аттенуированных иммуногенных штаммов pasteurella multocida |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95119337A RU2103355C1 (ru) | 1995-11-23 | 1995-11-23 | Способ получения аттенуированных иммуногенных штаммов pasteurella multocida |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95119337A RU95119337A (ru) | 1997-12-27 |
RU2103355C1 true RU2103355C1 (ru) | 1998-01-27 |
Family
ID=20173810
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95119337A RU2103355C1 (ru) | 1995-11-23 | 1995-11-23 | Способ получения аттенуированных иммуногенных штаммов pasteurella multocida |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2103355C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008085406A2 (en) * | 2006-12-28 | 2008-07-17 | Newport Laboratories, Inc. | Modified live (jmso strain) haemophilus parasuis vaccine |
RU2481393C2 (ru) * | 2001-10-26 | 2013-05-10 | Бёрингер Ингельхайм Ветмедика С.А. Де С.В. | Новые бактерии, вызывающие заболевания домашней птицы, и полученная из них вакцина |
-
1995
- 1995-11-23 RU RU95119337A patent/RU2103355C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Lab. Anim. Sci. - 1989, v.39, N 3, p.229 - 233. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2481393C2 (ru) * | 2001-10-26 | 2013-05-10 | Бёрингер Ингельхайм Ветмедика С.А. Де С.В. | Новые бактерии, вызывающие заболевания домашней птицы, и полученная из них вакцина |
WO2008085406A2 (en) * | 2006-12-28 | 2008-07-17 | Newport Laboratories, Inc. | Modified live (jmso strain) haemophilus parasuis vaccine |
WO2008085406A3 (en) * | 2006-12-28 | 2008-09-18 | Newport Lab Inc | Modified live (jmso strain) haemophilus parasuis vaccine |
US8404253B2 (en) | 2006-12-28 | 2013-03-26 | Newport Laboratories, Inc. | Modified live (JMSO strain) Haemophilus parasuis vaccine |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US6656478B1 (en) | Cross-protective salmonella vaccines | |
CA1117416A (en) | Fowl cholera vaccine | |
US4404186A (en) | Vaccines obtained from bacterial mutant strains | |
Barrow | Immunity to experimental fowl typhoid in chickens induced by a virulence plasmid-cured derivative of Salmonella gallinarum | |
KR970003054B1 (ko) | 마이코플라즈마 백신 | |
US5378615A (en) | Process for the production of vaccine for prevention of Pasteurella haemolytica pneumonia in bovine | |
EP0625190B1 (en) | New bacterium causing poultry disease and vaccine derived thereof | |
RU2103355C1 (ru) | Способ получения аттенуированных иммуногенных штаммов pasteurella multocida | |
US5792452A (en) | Live salmonella vaccine having an increased stability | |
DE2843295C2 (ru) | ||
US3364117A (en) | Vaccine for combating salmonella choleraesuis infection | |
US6077516A (en) | Live vaccine against colibacillosis | |
US2787576A (en) | Attenuating b. abortus and p. multocida | |
DE60032293T2 (de) | Lebende attenuierte bakterien zur verwendung als impfstoff | |
Chengappa et al. | A streptomycin-dependent live Pasteurella multocida type-3 vaccine for the prevention of fowl cholera in turkeys | |
US5641491A (en) | Escherichia coli strain 364 and use of said strain as a vaccine | |
Hertman et al. | Attenuated Live Fowl Cholera Vaccine I. Development of Vaccine Strain M3G of Pasteurella multocida | |
US4999191A (en) | Pasteurella multocida vaccine | |
US6991793B2 (en) | Method of protecting fish against columnaris disease with modified live Flavobacterium columnare | |
Cimolai | Non-primate animal models for pertussis: back to the drawing board? | |
US3529056A (en) | Method of producing jowl abscess vaccine | |
US4770875A (en) | Process for preparation of improved mutant strain of Bordetella bronchiseptica useful for live attenuated vaccine for protection of B. bronchiseptica infection and live attenuated AR vaccine produced therefrom | |
RICE et al. | Vaccination of chickens through the drinking water with a live, Pasteurella multocida, vaccine | |
Hanna et al. | Evaluation of a live Salmonella choleraesuis vaccine by intranasal challenge | |
US6096322A (en) | Pathogenicity and protective attributes of major clones of Escherichia coli recovered from chickens during processing |