JPH07165786A - ５位置換ウリジン類、その製造方法及びその用途 - Google Patents
５位置換ウリジン類、その製造方法及びその用途Info
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- JPH07165786A JPH07165786A JP34133493A JP34133493A JPH07165786A JP H07165786 A JPH07165786 A JP H07165786A JP 34133493 A JP34133493 A JP 34133493A JP 34133493 A JP34133493 A JP 34133493A JP H07165786 A JPH07165786 A JP H07165786A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 ５位置換ウリジン類、その製造方法、及びそ
の用途を提供する。 【構成】 式（１）〔式中、Ｒは水素原子又はＯＨ基を
表わし、ＸはＮＨＹ基、Ｎ［（ＣＨ2 ）2 ＮＨＹ］2 基
又はＳＳ（ＣＨ2 ）2 ＮＨＹ基を表わし、Ｙは水素原
子、ＣＯＣＦ3 基又は標識試薬基を表わし、ｎは２，３
又は６を表わす〕で表わされる５位置換ウリジン類、そ
の製造方法、及びその用途。 【効果】 本発明の５位置換ウリジン類はチミン基の５
位に標識化合物を導入したオリゴヌクレオチド類を化学
合成するためのモノマー原料として有用である。 【化１】
の用途を提供する。 【構成】 式（１）〔式中、Ｒは水素原子又はＯＨ基を
表わし、ＸはＮＨＹ基、Ｎ［（ＣＨ2 ）2 ＮＨＹ］2 基
又はＳＳ（ＣＨ2 ）2 ＮＨＹ基を表わし、Ｙは水素原
子、ＣＯＣＦ3 基又は標識試薬基を表わし、ｎは２，３
又は６を表わす〕で表わされる５位置換ウリジン類、そ
の製造方法、及びその用途。 【効果】 本発明の５位置換ウリジン類はチミン基の５
位に標識化合物を導入したオリゴヌクレオチド類を化学
合成するためのモノマー原料として有用である。 【化１】
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、５位置換ウリジン類、
その製造方法、及びその用途特に所定部位に標識物質が
結合している標識化オリゴヌクレオチド類を製造する際
のモノマー成分としての用途に関するものである。
その製造方法、及びその用途特に所定部位に標識物質が
結合している標識化オリゴヌクレオチド類を製造する際
のモノマー成分としての用途に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】標識機能を有する物質、例えば蛍光物
質、発光物質、酵素、放射性物質等が結合したオリゴヌ
クレオチド類は、特定の配列を持った核酸の検出を行な
う上で必要不可欠である。このため、前記オリゴヌクレ
オチド類に関して、従来、多くの研究及び応用がなされ
てきた。前記研究及び応用において、当初は放射性物質
である32Ｐ−燐酸を酵素的に結合させたオリゴヌクレオ
チド類が用いられたが、放射性物質を扱うための施設が
必要であること、放射性物質を扱う安全性の問題、又は
32Ｐの半減期が２週間と短いため保存が困難であること
等、種々の問題点があった。
質、発光物質、酵素、放射性物質等が結合したオリゴヌ
クレオチド類は、特定の配列を持った核酸の検出を行な
う上で必要不可欠である。このため、前記オリゴヌクレ
オチド類に関して、従来、多くの研究及び応用がなされ
てきた。前記研究及び応用において、当初は放射性物質
である32Ｐ−燐酸を酵素的に結合させたオリゴヌクレオ
チド類が用いられたが、放射性物質を扱うための施設が
必要であること、放射性物質を扱う安全性の問題、又は
32Ｐの半減期が２週間と短いため保存が困難であること
等、種々の問題点があった。
【０００３】一方、前記問題点を回避するために、非放
射性物質である蛍光物質、発光物質又は酵素などの標識
化物質をオリゴヌクレオチドに結合させた核酸類の化学
合成法の開発及びその応用研究がなされている。特に自
動合成機械による核酸の化学合成法が確立して１００量
体程度の長いオリゴヌクレオチドの化学合成が容易にな
って以来、標識化物質を結合させたオリゴヌクレオチド
類の化学合成の開発がなされてきた。
射性物質である蛍光物質、発光物質又は酵素などの標識
化物質をオリゴヌクレオチドに結合させた核酸類の化学
合成法の開発及びその応用研究がなされている。特に自
動合成機械による核酸の化学合成法が確立して１００量
体程度の長いオリゴヌクレオチドの化学合成が容易にな
って以来、標識化物質を結合させたオリゴヌクレオチド
類の化学合成の開発がなされてきた。
【０００４】これらのオリゴヌクレオチド類の合成法は
以下の３種類の方法に大別される。一番目の方法は、オ
リゴヌクレオチドの５′−末端あるいは３′−末端の水
酸基あるいは燐酸基を介して標識化合物を結合させる方
法である〔エヌ．ディー．シンハ（N. D. Sinha ）及び
エス．ストリーペカ（S. Striepeka）, “オリゴヌクレ
オチド及び同族体，応用研究（Oligonuclotides and An
alogues,A PracticalApproach）” ,エフ．エックシュ
タイン（F. Eckstein ）編，第１８５−２１０頁，アイ
アールエル出版（IRL Press ）（１９９１年）参照〕。
二番目の方法は、オリゴヌクレオチドの燐酸ジエステル
結合の部分にチオ燐酸エステル結合、トリエステル結合
又は燐酸アミド結合を介して標識化合物を結合させる方
法である〔エヌ．イー．コンウェイ（N. E. Conway），
ジェイ．エイ．フィダンザ（J. A. Fidanza ），エム．
ジェイ．オドネル（M. J. O'Donnel），ディー．ナレキ
アン（D. Narekian ），エッチ．オザキ（H. Ozaki）及
びエル．ダブリュ．マクローリン（L. W. McLaughli
n），“オリゴヌクレオチド及び同族体，応用研究（Oli
gonuclotides and Analogues,A Practical Approac
h）” ,エフ．エックシュタイン（F. Eckstein ）編，
第２１１−２３９頁，アイアールエル出版（IRL Press
）（１９９１年）参照〕。三番目の方法は、オリゴヌ
クレオチドの核酸塩基部に標識化合物を結合させる方法
である〔ジェイ．エル．ルース（J. L. Ruth）,“オリ
ゴヌクレオチド及び同族体，応用研究（Oligonuclotide
s and Analogues,A Practical Approach）” ,エフ．エ
ックシュタイン（F. Eckstein ）編，第２５５−２８２
頁，アイアールエル出版（IRL Press ）（１９９１年）
参照〕。第一番目ないし第三番目の方法のうちの何れの
方法も一長一短があるので、個々の場合に応じて最も良
い方法を選ぶ必要がある。
以下の３種類の方法に大別される。一番目の方法は、オ
リゴヌクレオチドの５′−末端あるいは３′−末端の水
酸基あるいは燐酸基を介して標識化合物を結合させる方
法である〔エヌ．ディー．シンハ（N. D. Sinha ）及び
エス．ストリーペカ（S. Striepeka）, “オリゴヌクレ
オチド及び同族体，応用研究（Oligonuclotides and An
alogues,A PracticalApproach）” ,エフ．エックシュ
タイン（F. Eckstein ）編，第１８５−２１０頁，アイ
アールエル出版（IRL Press ）（１９９１年）参照〕。
二番目の方法は、オリゴヌクレオチドの燐酸ジエステル
結合の部分にチオ燐酸エステル結合、トリエステル結合
又は燐酸アミド結合を介して標識化合物を結合させる方
法である〔エヌ．イー．コンウェイ（N. E. Conway），
ジェイ．エイ．フィダンザ（J. A. Fidanza ），エム．
ジェイ．オドネル（M. J. O'Donnel），ディー．ナレキ
アン（D. Narekian ），エッチ．オザキ（H. Ozaki）及
びエル．ダブリュ．マクローリン（L. W. McLaughli
n），“オリゴヌクレオチド及び同族体，応用研究（Oli
gonuclotides and Analogues,A Practical Approac
h）” ,エフ．エックシュタイン（F. Eckstein ）編，
第２１１−２３９頁，アイアールエル出版（IRL Press
）（１９９１年）参照〕。三番目の方法は、オリゴヌ
クレオチドの核酸塩基部に標識化合物を結合させる方法
である〔ジェイ．エル．ルース（J. L. Ruth）,“オリ
ゴヌクレオチド及び同族体，応用研究（Oligonuclotide
s and Analogues,A Practical Approach）” ,エフ．エ
ックシュタイン（F. Eckstein ）編，第２５５−２８２
頁，アイアールエル出版（IRL Press ）（１９９１年）
参照〕。第一番目ないし第三番目の方法のうちの何れの
方法も一長一短があるので、個々の場合に応じて最も良
い方法を選ぶ必要がある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】ところで、前記の第三
番目の方法において、核酸塩基部に標識化合物を導入し
たオリゴヌクレオチドは検出の対象となる核酸と安定な
相補的塩基対結合を造らねばならない。このためには立
体的な障害が少なく且つ相補的塩基対結合の形成に関係
の無いチミジンの５位のメチル基の部分にリンカーを介
して標識化合物を結合させる方法が最も優れている。然
して、このようなチミジンの５位の部分に標識化合物を
導入したオリゴヌクレオチドの化学合成にはモノマーと
して５位置換ウリジン誘導体が必要である。このため、
従来は天然から得られるウリジンを出発原料にして標識
化合物を結合させることが可能な５位置換ウリジン誘導
体を合成する方法が行なわれていた。
番目の方法において、核酸塩基部に標識化合物を導入し
たオリゴヌクレオチドは検出の対象となる核酸と安定な
相補的塩基対結合を造らねばならない。このためには立
体的な障害が少なく且つ相補的塩基対結合の形成に関係
の無いチミジンの５位のメチル基の部分にリンカーを介
して標識化合物を結合させる方法が最も優れている。然
して、このようなチミジンの５位の部分に標識化合物を
導入したオリゴヌクレオチドの化学合成にはモノマーと
して５位置換ウリジン誘導体が必要である。このため、
従来は天然から得られるウリジンを出発原料にして標識
化合物を結合させることが可能な５位置換ウリジン誘導
体を合成する方法が行なわれていた。
【０００６】以下に前記の従来方法を説明する。先ず、
ウリジンを２′−デオキシウリジンに変換した後、２′
−デオキシウリジンを臭素又は塩素と反応させて５位の
ハロゲン化を行なうか又は２′−デオキシウリジンを酢
酸水銀と反応させて５位の水銀化反応を行ない、５−ハ
ロゲノ−２′−デオキシウリジン又は５−クロロ水銀化
−２′−デオキシウリジンを合成する。次いで５−ハロ
ゲノ−２′−デオキシウリジンあるいは５−クロロ水銀
化−２′−デオキシウリジンとアクリル酸誘導体とのク
ロスカップリング反応をパラジウム錯体触媒を用いて行
なうことにより、種々の標識物質を結合可能な５位置換
２′−デオキシウリジンを合成する。この５位置換２′
−デオキシウリジンをモノマーとして用いてオリゴヌク
レオチドを合成し、更に標識物質をこのオリゴヌクレオ
チドに導入する方法が文献や特許に記載されている〔ジ
ェイ．エル．ルース（J. L. Ruth）, “オリゴヌクレオ
チド及び同族体，応用研究（Oligonuclotides and Anal
ogues,A Practical Approach）”，エフ．エックシュタ
イン（F. Eckstein ）編，第２５５−２８２頁，アイア
ールエル出版（IRL Press ）（１９９１年）；ジェイ．
エル．ルース（J. L. Ruth），米国特許第４９４８８８
２号；平成３年特許第８６８９７号参照〕。しかしなが
ら、前記合成法では出発原料である５−クロロ水銀化−
２′−デオキシウリジン又は触媒のパラジウム錯体が高
価であり、又、有害な水銀化合物を扱うという難点があ
る。
ウリジンを２′−デオキシウリジンに変換した後、２′
−デオキシウリジンを臭素又は塩素と反応させて５位の
ハロゲン化を行なうか又は２′−デオキシウリジンを酢
酸水銀と反応させて５位の水銀化反応を行ない、５−ハ
ロゲノ−２′−デオキシウリジン又は５−クロロ水銀化
−２′−デオキシウリジンを合成する。次いで５−ハロ
ゲノ−２′−デオキシウリジンあるいは５−クロロ水銀
化−２′−デオキシウリジンとアクリル酸誘導体とのク
ロスカップリング反応をパラジウム錯体触媒を用いて行
なうことにより、種々の標識物質を結合可能な５位置換
２′−デオキシウリジンを合成する。この５位置換２′
−デオキシウリジンをモノマーとして用いてオリゴヌク
レオチドを合成し、更に標識物質をこのオリゴヌクレオ
チドに導入する方法が文献や特許に記載されている〔ジ
ェイ．エル．ルース（J. L. Ruth）, “オリゴヌクレオ
チド及び同族体，応用研究（Oligonuclotides and Anal
ogues,A Practical Approach）”，エフ．エックシュタ
イン（F. Eckstein ）編，第２５５−２８２頁，アイア
ールエル出版（IRL Press ）（１９９１年）；ジェイ．
エル．ルース（J. L. Ruth），米国特許第４９４８８８
２号；平成３年特許第８６８９７号参照〕。しかしなが
ら、前記合成法では出発原料である５−クロロ水銀化−
２′−デオキシウリジン又は触媒のパラジウム錯体が高
価であり、又、有害な水銀化合物を扱うという難点があ
る。
【０００７】一方、従来技術として、アラビノースとシ
アンアミドよりアラビノアミノオキサゾリンを合成した
後、アセチレン誘導体と反応させることにより２、２′
−アンヒドロシチジン又は２、２′−アンヒドロウリジ
ンを合成する方法が報告されている〔アール．エイ．サ
ンチェス（R. A. Sanchez ）ら, ジャーナル オブオー
ガニック ケミストリー（J. Org. Chem. ），第３８
巻，第５９３頁（１９７３年）参照〕。しかし、この方
法ではアセチレン誘導体を用いるため５位置換ウリジン
類を合成することは不可能である。更に最近アラビノア
ミノオキサゾリンとα−ブロモメチルアクリル酸誘導体
との反応でチミジン誘導体を合成する方法が報告された
〔沢井ら、特願平第４−２６９７６４号参照〕。しか
し、この方法で合成されるチミジン誘導体には、標識物
質を結合させることは不可能である。
アンアミドよりアラビノアミノオキサゾリンを合成した
後、アセチレン誘導体と反応させることにより２、２′
−アンヒドロシチジン又は２、２′−アンヒドロウリジ
ンを合成する方法が報告されている〔アール．エイ．サ
ンチェス（R. A. Sanchez ）ら, ジャーナル オブオー
ガニック ケミストリー（J. Org. Chem. ），第３８
巻，第５９３頁（１９７３年）参照〕。しかし、この方
法ではアセチレン誘導体を用いるため５位置換ウリジン
類を合成することは不可能である。更に最近アラビノア
ミノオキサゾリンとα−ブロモメチルアクリル酸誘導体
との反応でチミジン誘導体を合成する方法が報告された
〔沢井ら、特願平第４−２６９７６４号参照〕。しか
し、この方法で合成されるチミジン誘導体には、標識物
質を結合させることは不可能である。
【０００８】本発明者らは上記実情に鑑み、アラビノー
スとシアンアミドから容易に得られるアラビノアミノオ
キサゾリンから直接標識物質を結合させることが可能な
５位置換ウリジン類を合成する方法を鋭意研究した結
果、アラビノアミノオキサゾリンとα−ブロモメチルフ
マル酸誘導体との反応で、標識物質を結合させることが
可能な新規な５位置換ウリジン類の合成に成功し、更に
この５位置換ウリジンをモノマーとして用いてオリゴヌ
クレオチドを合成し、このオリゴヌクレオチドに蛍光物
質などの標識物質を導入することに成功し、本発明を完
成するに至った。
スとシアンアミドから容易に得られるアラビノアミノオ
キサゾリンから直接標識物質を結合させることが可能な
５位置換ウリジン類を合成する方法を鋭意研究した結
果、アラビノアミノオキサゾリンとα−ブロモメチルフ
マル酸誘導体との反応で、標識物質を結合させることが
可能な新規な５位置換ウリジン類の合成に成功し、更に
この５位置換ウリジンをモノマーとして用いてオリゴヌ
クレオチドを合成し、このオリゴヌクレオチドに蛍光物
質などの標識物質を導入することに成功し、本発明を完
成するに至った。
【０００９】
【課題を解決するための手段】即ち、本発明の５位置換
ウリジン類は次式（１）：
ウリジン類は次式（１）：
【化９】 〔式中、Ｒは水素原子又はＯＨ基を表わし、ＸはＮＨＹ
基、Ｎ［（ＣＨ2 ）2 ＮＨＹ］2 基又はＳＳ（ＣＨ2 ）
2 ＮＨＹ基を表わし、Ｙは水素原子、ＣＯＣＦ3 基又は
標識試薬基を表わし、ｎは２，３又は６を表わす〕で表
わされることを特徴とする。標識試薬基を構成する標識
物質としては、非放射性の慣用の標識物質を用いること
ができる。このような標識物質の例は、例えば蛍光物
質、発光物質、酵素等である。
基、Ｎ［（ＣＨ2 ）2 ＮＨＹ］2 基又はＳＳ（ＣＨ2 ）
2 ＮＨＹ基を表わし、Ｙは水素原子、ＣＯＣＦ3 基又は
標識試薬基を表わし、ｎは２，３又は６を表わす〕で表
わされることを特徴とする。標識試薬基を構成する標識
物質としては、非放射性の慣用の標識物質を用いること
ができる。このような標識物質の例は、例えば蛍光物
質、発光物質、酵素等である。
【００１０】又、本発明は式（１）で表わされる５位置
換ウリジン類の製造方法にも関するものであり、本製造
方法は、（ａ） 次式（２）：
換ウリジン類の製造方法にも関するものであり、本製造
方法は、（ａ） 次式（２）：
【化１０】 で表わされるアラビノアミノアキサゾリンを次式
（３）：
（３）：
【化１１】 で表わされるα−ブロモメチルフマル酸ジメチルと反応
させて次式（４）：
させて次式（４）：
【化１２】 で表わされる２，２′−アンヒドロ−５−メトキシカル
ボニルメチルウリジンを得、次いで臭化アセチルと反応
させて次式（５）：
ボニルメチルウリジンを得、次いで臭化アセチルと反応
させて次式（５）：
【化１３】 で表わされる２′−デオキシ−２′−ブロモ−３′，
５′−ジアセチル−５−メトキシカルボニルメチルウリ
ジンを合成する工程、（ｂ） 前記式（５）で表わされ
る２′−デオキシ−２′−ブロモ−３′，５′−ジアセ
チル−５−メトキシカルボニルメチルウリジンをトリ−
ｎ−ブチルズズヒドリドで還元して次式（６）：
５′−ジアセチル−５−メトキシカルボニルメチルウリ
ジンを合成する工程、（ｂ） 前記式（５）で表わされ
る２′−デオキシ−２′−ブロモ−３′，５′−ジアセ
チル−５−メトキシカルボニルメチルウリジンをトリ−
ｎ−ブチルズズヒドリドで還元して次式（６）：
【化１４】 で表わされる５−メトキシカルボニルメチル−３′，
５′−ジアセチル−２′−デオキシウリジンを合成する
工程、及び（ｃ） 前記式（６）で表わされる５−メト
キシカルボニルメチル−３′，５′−ジアセチル−２′
−デオキシウリジンをジアミン類と反応させた後、トリ
フルオロ酢酸エチルと反応させて次式(1-a) ：
５′−ジアセチル−２′−デオキシウリジンを合成する
工程、及び（ｃ） 前記式（６）で表わされる５−メト
キシカルボニルメチル−３′，５′−ジアセチル−２′
−デオキシウリジンをジアミン類と反応させた後、トリ
フルオロ酢酸エチルと反応させて次式(1-a) ：
【化１５】 で表わされる５位置換ウリジン類を合成する工程、又は
（ｄ） 前記式（６）で表わされる５−メトキシカルボ
ニルメチル−３′，５′−ジアセチル−２′−デオキシ
ウリジンを無水酢酸／酢酸と反応させて２′，３′，
５′−トリアセチル−５−メトキシカルボニルメチルウ
リジンを得た後、アンモニア／メタノール溶液を用いて
加水分解して５−メトキシカルボニルメチルウリジンを
合成し、次いでジアミン類と反応させた後、トリフルオ
ロ酢酸エチルと反応させて次式(1-b) ：
（ｄ） 前記式（６）で表わされる５−メトキシカルボ
ニルメチル−３′，５′−ジアセチル−２′−デオキシ
ウリジンを無水酢酸／酢酸と反応させて２′，３′，
５′−トリアセチル−５−メトキシカルボニルメチルウ
リジンを得た後、アンモニア／メタノール溶液を用いて
加水分解して５−メトキシカルボニルメチルウリジンを
合成し、次いでジアミン類と反応させた後、トリフルオ
ロ酢酸エチルと反応させて次式(1-b) ：
【化１６】 で表わされる５位置換ウリジン類を合成する工程、とか
らなることを特徴とする。本製造方法における諸反応条
件例えば各反応物の比率、反応温度、反応時間、溶媒等
は適宜選択する。
らなることを特徴とする。本製造方法における諸反応条
件例えば各反応物の比率、反応温度、反応時間、溶媒等
は適宜選択する。
【００１１】前記工程（ｃ）及び（ｄ）において用いる
ジアミン類の例としては、例えばエチレンジアミン、ヘ
キサメチレンジアミン、トリス（トリエチルアミン）又
はシスタミンが挙げられる。これらは単独で又は組み合
わせて用いてよい。
ジアミン類の例としては、例えばエチレンジアミン、ヘ
キサメチレンジアミン、トリス（トリエチルアミン）又
はシスタミンが挙げられる。これらは単独で又は組み合
わせて用いてよい。
【００１２】本発明は前記５位置換ウリジン類を用いる
オリゴヌクレオチド類にも関するものであり、本発明の
オリゴヌクレオチド類は、式（１）で表わされる５位置
換ウリジン類をモノマー単位として１個又はそれより多
く有することを特徴とする。モノマー単位としての５位
置換ウリジン類の数は、得られるオリゴヌクレオチド類
の用途に応じて適宜選択する。
オリゴヌクレオチド類にも関するものであり、本発明の
オリゴヌクレオチド類は、式（１）で表わされる５位置
換ウリジン類をモノマー単位として１個又はそれより多
く有することを特徴とする。モノマー単位としての５位
置換ウリジン類の数は、得られるオリゴヌクレオチド類
の用途に応じて適宜選択する。
【００１３】本発明は又、前記オリゴヌクレオチド類の
製造方法に関するものであり、本発明のオリゴヌクレオ
チド類の製造方法は、式（１）で表わされる５位置換ウ
リジン類と、該５位置換ウリジン類と反応性を有するヌ
クレオシド類とをＤＮＡ自動合成機を用いて反応させる
ことを特徴とする。前記ヌクレオシド類も、得られるオ
リゴヌクレオチド類の用途に応じて適宜選択する。又、
ＤＮＡ自動合成機は市販品をそのまま用いてよい。
製造方法に関するものであり、本発明のオリゴヌクレオ
チド類の製造方法は、式（１）で表わされる５位置換ウ
リジン類と、該５位置換ウリジン類と反応性を有するヌ
クレオシド類とをＤＮＡ自動合成機を用いて反応させる
ことを特徴とする。前記ヌクレオシド類も、得られるオ
リゴヌクレオチド類の用途に応じて適宜選択する。又、
ＤＮＡ自動合成機は市販品をそのまま用いてよい。
【００１４】本発明は更に、標識化されたオリゴヌクレ
オチド類に関するものであり、本発明の標識化オリゴヌ
クレオチド類は、前記本発明のオリゴヌクレオチド類の
チミン基の５位に標識物質が結合していることを特徴と
する。標識物質としては、非放射性の蛍光物質、発光物
質、酵素等を用いてよい。
オチド類に関するものであり、本発明の標識化オリゴヌ
クレオチド類は、前記本発明のオリゴヌクレオチド類の
チミン基の５位に標識物質が結合していることを特徴と
する。標識物質としては、非放射性の蛍光物質、発光物
質、酵素等を用いてよい。
【００１５】
【作用】本発明の５位置換ウリジン類は、出発原料が入
手し易く、且つ合成時に高価な触媒を必要とせず、製造
が容易である等の利点を有し、チミン基の５位の部分に
標識化合物を導入したオリゴヌクレオチド類を化学合成
するためのモノマー原料として好適である。
手し易く、且つ合成時に高価な触媒を必要とせず、製造
が容易である等の利点を有し、チミン基の５位の部分に
標識化合物を導入したオリゴヌクレオチド類を化学合成
するためのモノマー原料として好適である。
【００１６】
【実施例】以下に本発明の５位置換ウリジン類及びその
製造方法、前記５位置換ウリジン類をモノマー単位とし
て有するオリゴヌクレオチド類及びその製造方法、並び
に前記オリゴヌクレオチド類のチミン基の５位の部分に
標識化合物を導入した標識化オリゴヌクレオチドに関す
る実施例を挙げる。なお、前記実施例は本発明の範囲を
制限するものと解釈してはならず、単に本発明の例示で
あり、代表例と解釈すべきものである。
製造方法、前記５位置換ウリジン類をモノマー単位とし
て有するオリゴヌクレオチド類及びその製造方法、並び
に前記オリゴヌクレオチド類のチミン基の５位の部分に
標識化合物を導入した標識化オリゴヌクレオチドに関す
る実施例を挙げる。なお、前記実施例は本発明の範囲を
制限するものと解釈してはならず、単に本発明の例示で
あり、代表例と解釈すべきものである。
【００１７】実施例１：α−ブロモメチルフマル酸ジメ
チル（３）の合成 イタコン酸ジメチル５０ｇを塩化メチレン１００ｍｌに
溶解した溶液に、撹拌しながら、臭素６１ｇ及び少量の
ヨウ素を塩化メチレン５０ｍｌに溶解した溶液を少量づ
つ滴下して反応させた。滴下終了後、更に室温で１５時
間撹拌して反応させた後、溶媒を減圧留去した。得られ
た油状物質をクロロホルム１００ｍｌに溶解した後、撹
拌しながら、トリエチルアミン３８ｇを徐々に滴下し
た。滴下終了後２時間加熱還流した。反応液に水を加え
た後、有機層を分離した。有機層を更に水で洗浄した
後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、次いで溶媒
を減圧蒸留してα−ブロモメチルフマル酸ジメチル
（３）を５４ｇ得た（収率７２％）。 沸点 ：１１３〜１１７℃／３ｍｍＨｇ ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：６．８５（１Ｈ，ｓ）、４．７
１（２Ｈ，ｓ）、３．８９（３Ｈ，ｓ）、３．８４（３
Ｈ，ｓ） 反応式を以下に示す。
チル（３）の合成 イタコン酸ジメチル５０ｇを塩化メチレン１００ｍｌに
溶解した溶液に、撹拌しながら、臭素６１ｇ及び少量の
ヨウ素を塩化メチレン５０ｍｌに溶解した溶液を少量づ
つ滴下して反応させた。滴下終了後、更に室温で１５時
間撹拌して反応させた後、溶媒を減圧留去した。得られ
た油状物質をクロロホルム１００ｍｌに溶解した後、撹
拌しながら、トリエチルアミン３８ｇを徐々に滴下し
た。滴下終了後２時間加熱還流した。反応液に水を加え
た後、有機層を分離した。有機層を更に水で洗浄した
後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、次いで溶媒
を減圧蒸留してα−ブロモメチルフマル酸ジメチル
（３）を５４ｇ得た（収率７２％）。 沸点 ：１１３〜１１７℃／３ｍｍＨｇ ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：６．８５（１Ｈ，ｓ）、４．７
１（２Ｈ，ｓ）、３．８９（３Ｈ，ｓ）、３．８４（３
Ｈ，ｓ） 反応式を以下に示す。
【化１７】
【００１８】実施例２：２，２′−アンヒドロ−５−メ
トキシカルボニルメチルウリジン（４）の合成 アラビノアミノオキサゾリン２．０ｇ、α−ブロモメチ
ルフマル酸ジメチル３．３ｇ、トリエチルアミン１．６
０ｍｇ及びメタノ−ル６０ｍｌよりなる反応溶液を撹拌
しながら２時間加熱還流した。溶媒のメタノールをエバ
ポレーターで一部留去し、アセトンを加えて放置した。
析出した沈澱のトリエチルアミン・臭化水素塩を濾過し
て除いた。濾液から揮発分をエバポレーターで留去し、
残部を真空乾燥して２，２′−アンヒドロ−５−メトキ
シカルボニルメチルウリジン（４）の粗製品５．６５ｇ
を得た。次の２′−デオキシ−２′−ブロモ−３′，
５′−ジアセトキシ−５−メトキシカルボニルメチルウ
リジン（５）の合成にはこの粗製品をそのまま用いた。
又、この粗製品の２，２′−アンヒドロ−５−メトキシ
カルボニルメチルウリジン（４）をエタノールより再結
晶して精製した２，２′−アンヒドロ−５−メトキシカ
ルボニルメチルウリジン（４）を得た。 沸点 ：１１１〜１１３℃ マススペクトル（ＦＤ）：２９８（Ｍ+ ）ｚ／ｍ ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ） ：７．９６（１Ｈ，ｓ）、６．
５６（１Ｈ，ｄ）、５．４７（１Ｈ，ｄ）、４．６７
（１Ｈ，ｓ）、４．４１（１Ｈ，ｔ）、３．７３（３
Ｈ，ｓ）、３．５７（２Ｈ，ｍ）、３．４９（２Ｈ，
ｓ） 反応式（実施例２、及び後述の実施例３，４に相当す
る）を以下に示す。
トキシカルボニルメチルウリジン（４）の合成 アラビノアミノオキサゾリン２．０ｇ、α−ブロモメチ
ルフマル酸ジメチル３．３ｇ、トリエチルアミン１．６
０ｍｇ及びメタノ−ル６０ｍｌよりなる反応溶液を撹拌
しながら２時間加熱還流した。溶媒のメタノールをエバ
ポレーターで一部留去し、アセトンを加えて放置した。
析出した沈澱のトリエチルアミン・臭化水素塩を濾過し
て除いた。濾液から揮発分をエバポレーターで留去し、
残部を真空乾燥して２，２′−アンヒドロ−５−メトキ
シカルボニルメチルウリジン（４）の粗製品５．６５ｇ
を得た。次の２′−デオキシ−２′−ブロモ−３′，
５′−ジアセトキシ−５−メトキシカルボニルメチルウ
リジン（５）の合成にはこの粗製品をそのまま用いた。
又、この粗製品の２，２′−アンヒドロ−５−メトキシ
カルボニルメチルウリジン（４）をエタノールより再結
晶して精製した２，２′−アンヒドロ−５−メトキシカ
ルボニルメチルウリジン（４）を得た。 沸点 ：１１１〜１１３℃ マススペクトル（ＦＤ）：２９８（Ｍ+ ）ｚ／ｍ ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ） ：７．９６（１Ｈ，ｓ）、６．
５６（１Ｈ，ｄ）、５．４７（１Ｈ，ｄ）、４．６７
（１Ｈ，ｓ）、４．４１（１Ｈ，ｔ）、３．７３（３
Ｈ，ｓ）、３．５７（２Ｈ，ｍ）、３．４９（２Ｈ，
ｓ） 反応式（実施例２、及び後述の実施例３，４に相当す
る）を以下に示す。
【化１８】
【００１９】実施例３：２′−デオキシ−２′−ブロモ
−３′，５′−ジアセチル−５−メトキシカルボニルメ
チルウリジン（５）の合成 ２，２′−アンヒドロ−５−メトキシカルボニルメチル
ウリジン（４）の粗製品５．６５ｇ及びアセトニトリル
６０ｍｌよりなる反応液に臭化アセチル４．１ｍｌを滴
下し、１時間加熱還流・撹拌しながら反応させた。溶媒
のアセトニトリルをエバポレーターで留去した後、残部
に酢酸エチル１５０ｍｌを加えた。５％炭酸水素ナトリ
ウム水溶液（１００ｍｌ×２）、次いで飽和食塩水（１
００ｍｌ×２）で洗浄した。酢酸エチル相を無水硫酸マ
グネシウムで乾燥後、エバポレーターで酢酸エチルを留
去し、次いでシリカゲルのカラムクロマトグラフィー
（シリカゲル；２００ｇ、展開溶媒；５％メタノール／
塩化メチレン）に付して生成物を単離精製し、２′−デ
オキシ−２′−ブロモ−３′，５′−ジアセチル−５−
メトキシカルボニルメチルウリジン（５）２．０ｇ（ア
ラビノアミノオキサゾリンからの通算収率３７％）を得
た。 ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：８．４９（１Ｈ，ｓ）、７．５
２（１Ｈ，ｓ）、６．２３（１Ｈ，ｄ）、５．１７（１
Ｈ，ｑ）、４．５７（１Ｈ，ｔ）、４．４２−４．３５
（３Ｈ，ｍ）、３．７３（３Ｈ，ｓ）、３．３８（２
Ｈ，ｄ）、２．１９（３Ｈ，ｓ）、２．１５（３Ｈ，
ｓ）
−３′，５′−ジアセチル−５−メトキシカルボニルメ
チルウリジン（５）の合成 ２，２′−アンヒドロ−５−メトキシカルボニルメチル
ウリジン（４）の粗製品５．６５ｇ及びアセトニトリル
６０ｍｌよりなる反応液に臭化アセチル４．１ｍｌを滴
下し、１時間加熱還流・撹拌しながら反応させた。溶媒
のアセトニトリルをエバポレーターで留去した後、残部
に酢酸エチル１５０ｍｌを加えた。５％炭酸水素ナトリ
ウム水溶液（１００ｍｌ×２）、次いで飽和食塩水（１
００ｍｌ×２）で洗浄した。酢酸エチル相を無水硫酸マ
グネシウムで乾燥後、エバポレーターで酢酸エチルを留
去し、次いでシリカゲルのカラムクロマトグラフィー
（シリカゲル；２００ｇ、展開溶媒；５％メタノール／
塩化メチレン）に付して生成物を単離精製し、２′−デ
オキシ−２′−ブロモ−３′，５′−ジアセチル−５−
メトキシカルボニルメチルウリジン（５）２．０ｇ（ア
ラビノアミノオキサゾリンからの通算収率３７％）を得
た。 ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：８．４９（１Ｈ，ｓ）、７．５
２（１Ｈ，ｓ）、６．２３（１Ｈ，ｄ）、５．１７（１
Ｈ，ｑ）、４．５７（１Ｈ，ｔ）、４．４２−４．３５
（３Ｈ，ｍ）、３．７３（３Ｈ，ｓ）、３．３８（２
Ｈ，ｄ）、２．１９（３Ｈ，ｓ）、２．１５（３Ｈ，
ｓ）
【００２０】実施例４：５−メトキシカルボニルメチル
−３′，５′−ジアセチル−２′−デオキシウリジン
（６）の合成 ２′−デオキシ−２′−ブロモ−３′，５′−ジアセチ
ル−５−メトキシカルボニルメチルウリジン（５）１．
９５ｇ及びベンゼン１０ｍｌよりなる溶液にトリ−ｎ−
ブチルスズヒドリド３．７ｇのベンゼン溶液２５ｍｌを
滴下後アゾビスイソブチロニトリル３０ｇ加え、次いで
３０分間加熱還流した。この溶液のベンゼンを一部エバ
ポレーターで留去後、残部をシリカゲルのカラムクロマ
トグラフィー（シリカゲル；２００ｇ）に付して精製し
た。展開溶媒として先ず酢酸エチル／ベンゼン（１：
１）、次いで酢酸エチル／ベンゼン（３：１）を用い
た。酢酸エチル／ベンゼン（３：１）で溶出してきた画
分より５−メトキシカルボニルメチル−３′，５′−ジ
アセチル−２′−デオキシウリジン（６）の白色結晶を
１．１６ｇ（収率７２％）得た。 ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：９．０１（１Ｈ，ｓ）、７．５
５（１Ｈ，ｓ）、６．２９（１Ｈ，ｑ）、５．２１（１
Ｈ，ｄ）、４．４５−４．２１（３Ｈ，ｍ）、３．７１
（３Ｈ，ｓ）、３．３６（２Ｈ，ｑ）、２．６０−２．
４５（１Ｈ，ｍ）、２．２８−２．１５（１Ｈ，ｍ）、
２．１２（３Ｈ，ｓ）、２．１１（３Ｈ，ｓ）
−３′，５′−ジアセチル−２′−デオキシウリジン
（６）の合成 ２′−デオキシ−２′−ブロモ−３′，５′−ジアセチ
ル−５−メトキシカルボニルメチルウリジン（５）１．
９５ｇ及びベンゼン１０ｍｌよりなる溶液にトリ−ｎ−
ブチルスズヒドリド３．７ｇのベンゼン溶液２５ｍｌを
滴下後アゾビスイソブチロニトリル３０ｇ加え、次いで
３０分間加熱還流した。この溶液のベンゼンを一部エバ
ポレーターで留去後、残部をシリカゲルのカラムクロマ
トグラフィー（シリカゲル；２００ｇ）に付して精製し
た。展開溶媒として先ず酢酸エチル／ベンゼン（１：
１）、次いで酢酸エチル／ベンゼン（３：１）を用い
た。酢酸エチル／ベンゼン（３：１）で溶出してきた画
分より５−メトキシカルボニルメチル−３′，５′−ジ
アセチル−２′−デオキシウリジン（６）の白色結晶を
１．１６ｇ（収率７２％）得た。 ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：９．０１（１Ｈ，ｓ）、７．５
５（１Ｈ，ｓ）、６．２９（１Ｈ，ｑ）、５．２１（１
Ｈ，ｄ）、４．４５−４．２１（３Ｈ，ｍ）、３．７１
（３Ｈ，ｓ）、３．３６（２Ｈ，ｑ）、２．６０−２．
４５（１Ｈ，ｍ）、２．２８−２．１５（１Ｈ，ｍ）、
２．１２（３Ｈ，ｓ）、２．１１（３Ｈ，ｓ）
【００２１】実施例５：５−メトキシカルボニルメチル
ウリジン（７）の合成 ２，２′−アンヒドロ−５−メトキシカルボニルメチル
ウリジン（４）１００ｍｇを酢酸２ｍｌ及び無水酢酸
０．１ｍｌからなる混合液に溶解し、一昼夜加熱還流し
た。溶媒を減圧留去後、１０％メタノール／クロロホル
ムを展開溶媒とする分取薄層クロマトグラフィーに付し
て分離精製し、２′，３′，５′−トリアセチル−５−
メトキシカルボニルメチルウリジンを９３ｇ（収率６２
％）得た。（融点 ５０〜５３℃） 次いでこの２′，３′，５′−トリアセチル−５−メト
キシカルボニルメチルウリジン９０ｍｇをアンモニアで
飽和したメタノール溶液２ｍｌに溶解し、室温にて２時
間放置した。溶媒を減圧留去後、１５％メタノール／ク
ロロホルムを展開溶媒とする分取薄層クロマトグラフィ
ーに付して分離精製し、白色結晶の５−メトキシカルボ
ニルメチルウリジン（７）を６３ｍｇ（収率７９％）得
た。 沸点 ：１６４〜１６５℃ ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：７．９８（１Ｈ，ｓ）、５．８
９（１Ｈ，ｄ）、４．１８−４．１５（２Ｈ，ｍ）、
３．９９（１Ｈ，ｍ）、３．８２（１Ｈ，ｄ）、３．７
５（１Ｈ，ｄ）、３．６８（３Ｈ，ｓ）、３．３０（２
Ｈ，ｓ） 反応式を以下に示す。
ウリジン（７）の合成 ２，２′−アンヒドロ−５−メトキシカルボニルメチル
ウリジン（４）１００ｍｇを酢酸２ｍｌ及び無水酢酸
０．１ｍｌからなる混合液に溶解し、一昼夜加熱還流し
た。溶媒を減圧留去後、１０％メタノール／クロロホル
ムを展開溶媒とする分取薄層クロマトグラフィーに付し
て分離精製し、２′，３′，５′−トリアセチル−５−
メトキシカルボニルメチルウリジンを９３ｇ（収率６２
％）得た。（融点 ５０〜５３℃） 次いでこの２′，３′，５′−トリアセチル−５−メト
キシカルボニルメチルウリジン９０ｍｇをアンモニアで
飽和したメタノール溶液２ｍｌに溶解し、室温にて２時
間放置した。溶媒を減圧留去後、１５％メタノール／ク
ロロホルムを展開溶媒とする分取薄層クロマトグラフィ
ーに付して分離精製し、白色結晶の５−メトキシカルボ
ニルメチルウリジン（７）を６３ｍｇ（収率７９％）得
た。 沸点 ：１６４〜１６５℃ ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：７．９８（１Ｈ，ｓ）、５．８
９（１Ｈ，ｄ）、４．１８−４．１５（２Ｈ，ｍ）、
３．９９（１Ｈ，ｍ）、３．８２（１Ｈ，ｄ）、３．７
５（１Ｈ，ｄ）、３．６８（３Ｈ，ｓ）、３．３０（２
Ｈ，ｓ） 反応式を以下に示す。
【化１９】
【００２２】実施例６：５−トリフロロアセチルアミノ
ヘキシルアミノカルボニルメチル−２′−デオキシウリ
ジン（８）の合成 ５−メトキシカルボニルメチル−３′，５′−ジアセチ
ル−２′−デオキシウリジン（６）４５０ｍｇ、ヘキサ
メチレンジアミン１．５ｇ、ジメチルアミノピリジン１
３ｍｇ及びメタノール６ｍｌを含む反応液を５０℃で１
８時間撹拌して反応させた。エバポレーターで反応液を
濃縮後、真空ポンプで減圧下、未反応のヘキサメチレン
ジアミンを昇華させて除いた。残部を少量のメタノール
に溶解し、ベンゼン中に撹拌しながら少しづつ滴下して
油状物質を得た。ベンゼンをデカンテーションで除き、
残部の油状物質をメタノール１５ｍｌに溶解し、ジメチ
ルアミノピリジン１５ｍｇ及びトリフロロ酢酸エチル
１．０ｍｌを加え、室温で１６時間撹拌して反応させ
た。反応液を濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（溶出液；１５％メタノール／塩化メチレン）に付
して分離精製し、５−トリフロロアセチルアミノヘキシ
ルアミノカルボニルメチル−２′−デオキシウリジン
（８）を５０１ｍｇ（収率９０％）得た。 沸点 ：１５８〜１５９℃ ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：７．９１（１Ｈ，ｓ）、６．２
９（１Ｈ，ｔ）、４．４１（１Ｈ，ｑ）、３．９１（１
Ｈ，ｑ）、３．７６（２Ｈ，ｍ）、２．２７（２Ｈ，
ｍ）、３．３３−３．１２（６Ｈ，ｍ）、１．６０−
１．２９（８Ｈ，ｍ） 反応式を以下に示す。
ヘキシルアミノカルボニルメチル−２′−デオキシウリ
ジン（８）の合成 ５−メトキシカルボニルメチル−３′，５′−ジアセチ
ル−２′−デオキシウリジン（６）４５０ｍｇ、ヘキサ
メチレンジアミン１．５ｇ、ジメチルアミノピリジン１
３ｍｇ及びメタノール６ｍｌを含む反応液を５０℃で１
８時間撹拌して反応させた。エバポレーターで反応液を
濃縮後、真空ポンプで減圧下、未反応のヘキサメチレン
ジアミンを昇華させて除いた。残部を少量のメタノール
に溶解し、ベンゼン中に撹拌しながら少しづつ滴下して
油状物質を得た。ベンゼンをデカンテーションで除き、
残部の油状物質をメタノール１５ｍｌに溶解し、ジメチ
ルアミノピリジン１５ｍｇ及びトリフロロ酢酸エチル
１．０ｍｌを加え、室温で１６時間撹拌して反応させ
た。反応液を濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（溶出液；１５％メタノール／塩化メチレン）に付
して分離精製し、５−トリフロロアセチルアミノヘキシ
ルアミノカルボニルメチル−２′−デオキシウリジン
（８）を５０１ｍｇ（収率９０％）得た。 沸点 ：１５８〜１５９℃ ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：７．９１（１Ｈ，ｓ）、６．２
９（１Ｈ，ｔ）、４．４１（１Ｈ，ｑ）、３．９１（１
Ｈ，ｑ）、３．７６（２Ｈ，ｍ）、２．２７（２Ｈ，
ｍ）、３．３３−３．１２（６Ｈ，ｍ）、１．６０−
１．２９（８Ｈ，ｍ） 反応式を以下に示す。
【化２０】
【００２３】実施例７：５−トリフロロアセチルアミノ
エチルアミノカルボニルメチル−２′−デオキシウリジ
ン（９）の合成 ５−メトキシカルボニルメチル−３′，５′−ジアセチ
ル−２′−デオキシウリジン（６）１０９ｍｇ、エチレ
ンジアミン０．２５ｍｌ、ジメチルアミノピリジン２ｍ
ｇ及びメタノール２ｍｌを含む反応液を５０℃で２１時
間撹拌して反応させた。溶媒を減圧留去後、真空ポンプ
で減圧下、未反応のエチレンジアミンを留去して除い
た。残部を２ｍｌのメタノールに溶解し、ジメチルアミ
ノピリジン５ｍｇ、トリフロロ酢酸エチル０．５ｍｌを
加え、室温で１９時間撹拌して反応させた。溶媒をエバ
ポレーターで留去後、シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（溶出液；１５％メタノール／塩化メチレン）に付
して分離精製し、５−トリフロロアセチルアミノエチル
アミノカルボニルメチル−２′−デオキシウリジン
（９）を４２ｍｇ（収率３５％）得た。 ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：７．８２（１Ｈ，ｓ）、６．３
１（１Ｈ，ｔ）、４．４７（１Ｈ，ｑ）、４．０６（１
Ｈ，ｑ）、３．８８−３．７８（２Ｈ，ｍ）、３．５２
−３．４０（４Ｈ，ｍ）、３．３０（２Ｈ，ｓ）、２．
４７−２．３８（２Ｈ，ｍ） 反応式を以下に示す。
エチルアミノカルボニルメチル−２′−デオキシウリジ
ン（９）の合成 ５−メトキシカルボニルメチル−３′，５′−ジアセチ
ル−２′−デオキシウリジン（６）１０９ｍｇ、エチレ
ンジアミン０．２５ｍｌ、ジメチルアミノピリジン２ｍ
ｇ及びメタノール２ｍｌを含む反応液を５０℃で２１時
間撹拌して反応させた。溶媒を減圧留去後、真空ポンプ
で減圧下、未反応のエチレンジアミンを留去して除い
た。残部を２ｍｌのメタノールに溶解し、ジメチルアミ
ノピリジン５ｍｇ、トリフロロ酢酸エチル０．５ｍｌを
加え、室温で１９時間撹拌して反応させた。溶媒をエバ
ポレーターで留去後、シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（溶出液；１５％メタノール／塩化メチレン）に付
して分離精製し、５−トリフロロアセチルアミノエチル
アミノカルボニルメチル−２′−デオキシウリジン
（９）を４２ｍｇ（収率３５％）得た。 ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：７．８２（１Ｈ，ｓ）、６．３
１（１Ｈ，ｔ）、４．４７（１Ｈ，ｑ）、４．０６（１
Ｈ，ｑ）、３．８８−３．７８（２Ｈ，ｍ）、３．５２
−３．４０（４Ｈ，ｍ）、３．３０（２Ｈ，ｓ）、２．
４７−２．３８（２Ｈ，ｍ） 反応式を以下に示す。
【化２１】
【００２４】実施例８：５−［ビス（トリフロロアセチ
ルアミノエチル）アミノエチルカルボニルメチル］−
２′−デオキシウリジン（１０）の合成 ５−メトキシカルボニルメチル−３′，５′−ジアセチ
ル−２′−デオキシウリジン（６）２２６ｍｇ、トリス
（トリエチルアミノ）アミン９７０ｍｇ、ジメチルアミ
ノピリジン６ｍｇ及びメタノール２ｍｌを含む反応液を
５０℃で１８時間反応させた。溶媒を減圧留去後、真空
ポンプで減圧下、未反応のトリス（トリアミノ）アミン
を留去して除いた。残部を４ｍｌのメタノールに溶解
し、ジメチルアミノピリジン９ｍｇ、トリフロロ酢酸エ
チル０．７ｍｌを加え、室温で１８時間撹拌して反応さ
せた。溶媒をエバポレーターで留去後、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（溶出液；１５％メタノール／塩
化メチレン）に付して分離精製し、５−［ビス（トリフ
ロロアセチルアミノエチル）アミノエチルカルボニルメ
チル］−２′−デオキシウリジン（１０）を２０９ｍｇ
（収率６２％）得た。 ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：７．７４（１Ｈ，ｓ）、６．２
３（１Ｈ，ｔ）、４．３９（１Ｈ，ｑ）、３．９９（１
Ｈ，ｑ）、３．７５（２Ｈ，ｍ）、３．３９−３．２１
（８Ｈ，ｍ）、２．７３−２．６１（６Ｈ，ｍ）、２．
３４（２Ｈ，ｍ） 反応式を以下に示す。
ルアミノエチル）アミノエチルカルボニルメチル］−
２′−デオキシウリジン（１０）の合成 ５−メトキシカルボニルメチル−３′，５′−ジアセチ
ル−２′−デオキシウリジン（６）２２６ｍｇ、トリス
（トリエチルアミノ）アミン９７０ｍｇ、ジメチルアミ
ノピリジン６ｍｇ及びメタノール２ｍｌを含む反応液を
５０℃で１８時間反応させた。溶媒を減圧留去後、真空
ポンプで減圧下、未反応のトリス（トリアミノ）アミン
を留去して除いた。残部を４ｍｌのメタノールに溶解
し、ジメチルアミノピリジン９ｍｇ、トリフロロ酢酸エ
チル０．７ｍｌを加え、室温で１８時間撹拌して反応さ
せた。溶媒をエバポレーターで留去後、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（溶出液；１５％メタノール／塩
化メチレン）に付して分離精製し、５−［ビス（トリフ
ロロアセチルアミノエチル）アミノエチルカルボニルメ
チル］−２′−デオキシウリジン（１０）を２０９ｍｇ
（収率６２％）得た。 ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：７．７４（１Ｈ，ｓ）、６．２
３（１Ｈ，ｔ）、４．３９（１Ｈ，ｑ）、３．９９（１
Ｈ，ｑ）、３．７５（２Ｈ，ｍ）、３．３９−３．２１
（８Ｈ，ｍ）、２．７３−２．６１（６Ｈ，ｍ）、２．
３４（２Ｈ，ｍ） 反応式を以下に示す。
【化２２】
【００２５】実施例９：５−トリフロロアセチルシスタ
ミルカルボニルメチル−２′−デオキシウリジン（１
１）の合成 ５−メトキシカルボニルメチル−３′，５′−ジアセチ
ル−２′−デオキシウリジン（６）とシスタミンとを用
い、実施例６〜８に記載した方法と同様の方法で、５−
トリフロロアセチルシスタミルカルボニルメチル−２′
−デオキシウリジン（１１）を得た。収率，物性値等を
ご記入下さい。
ミルカルボニルメチル−２′−デオキシウリジン（１
１）の合成 ５−メトキシカルボニルメチル−３′，５′−ジアセチ
ル−２′−デオキシウリジン（６）とシスタミンとを用
い、実施例６〜８に記載した方法と同様の方法で、５−
トリフロロアセチルシスタミルカルボニルメチル−２′
−デオキシウリジン（１１）を得た。収率，物性値等を
ご記入下さい。
【００２６】実施例１０：５−トリフロロアセチルアミ
ノヘキシルアミノカルボニルメチルウリジン（１２）の
合成 ５−メトキシカルボニルメチルウリジン（７）とヘキサ
ンメチレンジアミンを用い、実施例６に記載した方法と
同様の方法で、相当する５−トリフロロアセチルアミノ
ヘキシルアミノカルボニルメチルウリジン（１２）を得
た。収率，物性値等をご記入下さい。
ノヘキシルアミノカルボニルメチルウリジン（１２）の
合成 ５−メトキシカルボニルメチルウリジン（７）とヘキサ
ンメチレンジアミンを用い、実施例６に記載した方法と
同様の方法で、相当する５−トリフロロアセチルアミノ
ヘキシルアミノカルボニルメチルウリジン（１２）を得
た。収率，物性値等をご記入下さい。
【００２７】実施例１１：５′−ジメトキシトリチル−
５−トリフロロアセチルアミノヘキシルアミノカルボニ
ルメチル−２′−デオキシウリジン（１３）の合成 ５−トリフロロアセチルアミノヘキシルアミノカルボニ
ルメチル−２′−デオキシウリジン（８）１００ｍｇを
無水ピリジンを用いて２回共沸脱水（？）し、次いで無
水ピリジン１．５ｍｌを加え撹拌して溶解した。ジメト
キシトリチルクロリド（ＤＭＴ−Ｃｌ）８０ｍｇを加
え、室温にて１６時間撹拌した。反応液に水を加え、次
いで塩化メチレン（２０ｍｌ×３）で抽出した。有機層
を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を留去して油状
残部を得た。この残部をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィー（溶出液；０．２％トリエチルアミン／１０％メ
タノール／塩化メチレン）に付して単離精製し、白色結
晶の５′−ジメトキシトリチル−５−トリフロロアセチ
ルアミノヘキシルアミノカルボニルメチル−２′−デオ
キシウリジン（１３）を１４４ｍｇ（収率８９％）得
た。 沸点 ：９８〜１０１℃ ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：７．７３（１Ｈ，ｓ）、７．０
９−７．３９（１０Ｈ，ｍ）、６．８２−６．８８（３
Ｈ，ｍ）、６．３２（１Ｈ，ｔ）、６．２１（１Ｈ，
ｔ）、４．５５（１Ｈ，ｍ）、４．０２（１Ｈ，ｍ）、
３．８１（３Ｈ，ｓ）、３．８０（３Ｈ，ｓ）、３．４
１（２Ｈ，ｄ）、３．３４（２Ｈ，ｔ）、３．１８（２
Ｈ，ｔ）、２．３７（２Ｈ，ｍ）、、１．６０−１．２
６（８Ｈ，ｍ） 反応式を以下に示す。
５−トリフロロアセチルアミノヘキシルアミノカルボニ
ルメチル−２′−デオキシウリジン（１３）の合成 ５−トリフロロアセチルアミノヘキシルアミノカルボニ
ルメチル−２′−デオキシウリジン（８）１００ｍｇを
無水ピリジンを用いて２回共沸脱水（？）し、次いで無
水ピリジン１．５ｍｌを加え撹拌して溶解した。ジメト
キシトリチルクロリド（ＤＭＴ−Ｃｌ）８０ｍｇを加
え、室温にて１６時間撹拌した。反応液に水を加え、次
いで塩化メチレン（２０ｍｌ×３）で抽出した。有機層
を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を留去して油状
残部を得た。この残部をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィー（溶出液；０．２％トリエチルアミン／１０％メ
タノール／塩化メチレン）に付して単離精製し、白色結
晶の５′−ジメトキシトリチル−５−トリフロロアセチ
ルアミノヘキシルアミノカルボニルメチル−２′−デオ
キシウリジン（１３）を１４４ｍｇ（収率８９％）得
た。 沸点 ：９８〜１０１℃ ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：７．７３（１Ｈ，ｓ）、７．０
９−７．３９（１０Ｈ，ｍ）、６．８２−６．８８（３
Ｈ，ｍ）、６．３２（１Ｈ，ｔ）、６．２１（１Ｈ，
ｔ）、４．５５（１Ｈ，ｍ）、４．０２（１Ｈ，ｍ）、
３．８１（３Ｈ，ｓ）、３．８０（３Ｈ，ｓ）、３．４
１（２Ｈ，ｄ）、３．３４（２Ｈ，ｔ）、３．１８（２
Ｈ，ｔ）、２．３７（２Ｈ，ｍ）、、１．６０−１．２
６（８Ｈ，ｍ） 反応式を以下に示す。
【化２３】
【００２８】実施例１２：５′−ジメトキシトリチル−
５−トリフロロアセチルアミノヘキシルアミノカルボニ
ルメチル−２′−デオキシウリジン−３′−Ｏ−（２−
シアノエチル−Ｎ，Ｎ′−ジイソプロピルホスホアミダ
イト）（１４）の合成 ５′−ジメトキシトリチル−５−トリフロロアセチルア
ミノヘキシルアミノカルボニルメチル−２′−デオキシ
ウリジン（１３）２５０ｍｇ、ジイソプルエチルアミン
２２３μｌ及び無水塩化メチレン３ｍｌを含む溶液に、
２−シアノエトキシジクロロホスフィン８１μｌの塩化
エチレン溶液５ｍｌにジイソプロピルアミン１８０μｌ
を加えて調製した２−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ′−ジイ
ソプロピルアミノクロロホスフィンの塩化メチレン溶液
を滴下し、室温で１時間撹拌して反応させた。反応液に
無水メタノール５０μｌを加えて反応を停止させた後、
酢酸エチルを加えた。５％炭酸水素ナトリウム水溶液で
洗浄した後、有機層を分離し、無水硫酸マグネシウムで
乾燥後濃縮し、シリカゲカラムクロマトグラフィー（溶
出液，酢酸エチル：塩化メチレン：トリエチルアミン＝
４５：４５：１０）に付して単離精製し、５′−ジメト
キシトリチル−５−トリフロロアセチルアミノヘキシル
アミノカルボニルメチル−２′−デオキシウリジン−
３′−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ′−ジイソプロ
ピルホスホアミダイト）（１４）を２３７ｍｇ（収率７
６％）得た。 沸点 ：７６〜７９℃ ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：７．７４（１Ｈ，ｄ）、７．２
６−７．３９（１０Ｈ，ｍ）、６．８７−６．８１（３
Ｈ，ｍ）、６．３８（１Ｈ，ｔ）、５．９９（１Ｈ，
ｔ）、４．６７（１Ｈ，ｍ）、４．１４（１Ｈ，ｍ）、
３．８０（６Ｈ，ｓ）、３．６９−３．５０（５Ｈ，
ｍ）、３．３４（２Ｈ，ｔ）、３．１６（２Ｈ，ｔ）、
２．６７（２Ｈ，ｔ）、２．５７（１Ｈ，ｍ）、２．４
６（１Ｈ，ｍ）、１．６８−１．５６（８Ｈ，ｍ）、
１．２０−１．１５（６Ｈ，ｄ） 反応式を以下に示す。
５−トリフロロアセチルアミノヘキシルアミノカルボニ
ルメチル−２′−デオキシウリジン−３′−Ｏ−（２−
シアノエチル−Ｎ，Ｎ′−ジイソプロピルホスホアミダ
イト）（１４）の合成 ５′−ジメトキシトリチル−５−トリフロロアセチルア
ミノヘキシルアミノカルボニルメチル−２′−デオキシ
ウリジン（１３）２５０ｍｇ、ジイソプルエチルアミン
２２３μｌ及び無水塩化メチレン３ｍｌを含む溶液に、
２−シアノエトキシジクロロホスフィン８１μｌの塩化
エチレン溶液５ｍｌにジイソプロピルアミン１８０μｌ
を加えて調製した２−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ′−ジイ
ソプロピルアミノクロロホスフィンの塩化メチレン溶液
を滴下し、室温で１時間撹拌して反応させた。反応液に
無水メタノール５０μｌを加えて反応を停止させた後、
酢酸エチルを加えた。５％炭酸水素ナトリウム水溶液で
洗浄した後、有機層を分離し、無水硫酸マグネシウムで
乾燥後濃縮し、シリカゲカラムクロマトグラフィー（溶
出液，酢酸エチル：塩化メチレン：トリエチルアミン＝
４５：４５：１０）に付して単離精製し、５′−ジメト
キシトリチル−５−トリフロロアセチルアミノヘキシル
アミノカルボニルメチル−２′−デオキシウリジン−
３′−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ′−ジイソプロ
ピルホスホアミダイト）（１４）を２３７ｍｇ（収率７
６％）得た。 沸点 ：７６〜７９℃ ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ）：７．７４（１Ｈ，ｄ）、７．２
６−７．３９（１０Ｈ，ｍ）、６．８７−６．８１（３
Ｈ，ｍ）、６．３８（１Ｈ，ｔ）、５．９９（１Ｈ，
ｔ）、４．６７（１Ｈ，ｍ）、４．１４（１Ｈ，ｍ）、
３．８０（６Ｈ，ｓ）、３．６９−３．５０（５Ｈ，
ｍ）、３．３４（２Ｈ，ｔ）、３．１６（２Ｈ，ｔ）、
２．６７（２Ｈ，ｔ）、２．５７（１Ｈ，ｍ）、２．４
６（１Ｈ，ｍ）、１．６８−１．５６（８Ｈ，ｍ）、
１．２０−１．１５（６Ｈ，ｄ） 反応式を以下に示す。
【化２４】
【００２９】実施例１３：５位置換ウリジンを１個又は
それより多く有するオリゴヌクレオチド（１５）の合成 核酸塩基部にチミン、Ｎ−ベンゾイルアデニン、Ｎ−ベ
ンゾイルシトシン及びＮ−イソブチリルグアニンを有す
る市販の５′−ジメトキシトリチル−２′−デオキシヌ
クレオシド−３′−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ′
−ジイソプロピルホスホアミダイト）、及び実施例１２
で合成した５′−ジメトキシトリチル−５−トリフロロ
アセチルアミノヘキシルアミノカルボニルメチル−２′
−デオキシウリジン−３′−Ｏ−（２−シアノエチル−
Ｎ，Ｎ′−ジイソプロピルホスホアミダイト）（１４）
を用い、アプライドバイオシステム社ＤＮＡ自動合成機
で化合物（１４）を１個又は３個含むオリゴヌクレオチ
ドを１μモルスケールで常法により合成した。合成反応
終了後、常法により濃アンモニア水２ｍｌで処理するこ
とにより固相担体からオリゴヌクレオチドを切り出し、
５０℃で８時間反応させることにより保護基を除去し
た。エバポレーターでアンモニアを除去後、凍結乾燥し
た。凍結乾燥したオリゴヌクレオチドを少量の水に溶解
し、ＯＤＳ−シリカゲルをカラムとする高速液体クロマ
トグラフィーに付して分離精製した。分取したジメトキ
シトリチル基の結合したオリゴヌクレオチドを凍結乾燥
後、８０％酢酸２ｍｌを加え、室温で２０分反応するこ
とによりジメトキシトリチル基を除去し、直ちに溶媒を
減圧下で留去した。残部を水に溶かし、酢酸エチルで抽
出し、水層を濃縮した。得られた残部を水に溶解し、セ
ファデックス（Sephadex）Ｇ−２５のゲル濾過クロマト
グラフィーに付して分離精製し、５位置換ウリジンを有
するオリゴヌクレオチド（１５）を５６〜６０ ＯＤＵ
（収率２４〜２６％）得た。なお、合成したオリゴヌク
レオチドの配列は下記のものであり、Ｔの部分が５位置
換ウリジンを含んでいる。オリゴヌクレオチド（１５−
ａ）は化合物（１４）を１個含み、オリゴヌクレオチド
（１５−ｂ）は化合物（１４）を３個含み、又、オリゴ
ヌクレオチド（１５−ｃ）は化合物（１４）を含まない
対照試料である。 （１５−ａ）：５′−ＡＣＡＴＧＣＡＴＣＣＣＧＴＧＣ
ＴＣＣＴＡＴＣＣＧＧ−３′ （１５−ｂ）：５′−ＡＣＡＴＧＣＡＴＣＣＣＧＴＧＣ
ＴＣＣＴＡＴＣＣＧＧ−３′ （１５−ｃ）：５′−ＡＣＡＴＧＣＡＴＣＣＣＧＴＧＣ
ＴＣＣＴＡＴＣＣＧＧ−３′
それより多く有するオリゴヌクレオチド（１５）の合成 核酸塩基部にチミン、Ｎ−ベンゾイルアデニン、Ｎ−ベ
ンゾイルシトシン及びＮ−イソブチリルグアニンを有す
る市販の５′−ジメトキシトリチル−２′−デオキシヌ
クレオシド−３′−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ′
−ジイソプロピルホスホアミダイト）、及び実施例１２
で合成した５′−ジメトキシトリチル−５−トリフロロ
アセチルアミノヘキシルアミノカルボニルメチル−２′
−デオキシウリジン−３′−Ｏ−（２−シアノエチル−
Ｎ，Ｎ′−ジイソプロピルホスホアミダイト）（１４）
を用い、アプライドバイオシステム社ＤＮＡ自動合成機
で化合物（１４）を１個又は３個含むオリゴヌクレオチ
ドを１μモルスケールで常法により合成した。合成反応
終了後、常法により濃アンモニア水２ｍｌで処理するこ
とにより固相担体からオリゴヌクレオチドを切り出し、
５０℃で８時間反応させることにより保護基を除去し
た。エバポレーターでアンモニアを除去後、凍結乾燥し
た。凍結乾燥したオリゴヌクレオチドを少量の水に溶解
し、ＯＤＳ−シリカゲルをカラムとする高速液体クロマ
トグラフィーに付して分離精製した。分取したジメトキ
シトリチル基の結合したオリゴヌクレオチドを凍結乾燥
後、８０％酢酸２ｍｌを加え、室温で２０分反応するこ
とによりジメトキシトリチル基を除去し、直ちに溶媒を
減圧下で留去した。残部を水に溶かし、酢酸エチルで抽
出し、水層を濃縮した。得られた残部を水に溶解し、セ
ファデックス（Sephadex）Ｇ−２５のゲル濾過クロマト
グラフィーに付して分離精製し、５位置換ウリジンを有
するオリゴヌクレオチド（１５）を５６〜６０ ＯＤＵ
（収率２４〜２６％）得た。なお、合成したオリゴヌク
レオチドの配列は下記のものであり、Ｔの部分が５位置
換ウリジンを含んでいる。オリゴヌクレオチド（１５−
ａ）は化合物（１４）を１個含み、オリゴヌクレオチド
（１５−ｂ）は化合物（１４）を３個含み、又、オリゴ
ヌクレオチド（１５−ｃ）は化合物（１４）を含まない
対照試料である。 （１５−ａ）：５′−ＡＣＡＴＧＣＡＴＣＣＣＧＴＧＣ
ＴＣＣＴＡＴＣＣＧＧ−３′ （１５−ｂ）：５′−ＡＣＡＴＧＣＡＴＣＣＣＧＴＧＣ
ＴＣＣＴＡＴＣＣＧＧ−３′ （１５−ｃ）：５′−ＡＣＡＴＧＣＡＴＣＣＣＧＴＧＣ
ＴＣＣＴＡＴＣＣＧＧ−３′
【００３０】実施例１４：蛍光物質フルオレセインを結
合させたオリゴヌクレオチド（１６）の合成 実施例（１３）で合成した５位置換ウリジンを含むオリ
ゴヌクレオチド（１５−ａ）１．０ ＯＤＵを６８μｌ
の水に溶解し、１ＭのｐＨ９．０の炭酸ナトリウム水溶
液１０μｌ及びフルオレセインイソチオシアナート２ｍ
ｇをＤＭＦ１００μｌに溶解した溶液のうち１０μｌを
加え、室温で１昼夜放置した。濃アンモニア水１０μｌ
を加え反応を停止した。次いで、セファデックス（Seph
adex）Ｇ−２５を用いたゲル濾過クロマトグラフィーに
付し、２６０ｎｍ及び４９０ｎｍに吸収がある５番目か
ら１１番目のフラクションを集め、フルオレセインの結
合したオリゴヌクレオチド（１６）０．１３ ＯＤＵを
得た（収率１３％）。ＯＤＳ−シリカゲルをカラムとす
る高速液体クロマトグラフィーにより、オリゴヌクレオ
チド（１６）がＵＶ吸収と蛍光を有し、単一成分である
ことを確認した。 高速液体クロマトグラフィーのＲｆ値：２７．５分 （対照：未反応の２５量体オリゴヌクレオチドのＲｆ
値：２５．３分） ＵＶ：λmax ２６２ｎｍ，４９０ｎｍ
合させたオリゴヌクレオチド（１６）の合成 実施例（１３）で合成した５位置換ウリジンを含むオリ
ゴヌクレオチド（１５−ａ）１．０ ＯＤＵを６８μｌ
の水に溶解し、１ＭのｐＨ９．０の炭酸ナトリウム水溶
液１０μｌ及びフルオレセインイソチオシアナート２ｍ
ｇをＤＭＦ１００μｌに溶解した溶液のうち１０μｌを
加え、室温で１昼夜放置した。濃アンモニア水１０μｌ
を加え反応を停止した。次いで、セファデックス（Seph
adex）Ｇ−２５を用いたゲル濾過クロマトグラフィーに
付し、２６０ｎｍ及び４９０ｎｍに吸収がある５番目か
ら１１番目のフラクションを集め、フルオレセインの結
合したオリゴヌクレオチド（１６）０．１３ ＯＤＵを
得た（収率１３％）。ＯＤＳ−シリカゲルをカラムとす
る高速液体クロマトグラフィーにより、オリゴヌクレオ
チド（１６）がＵＶ吸収と蛍光を有し、単一成分である
ことを確認した。 高速液体クロマトグラフィーのＲｆ値：２７．５分 （対照：未反応の２５量体オリゴヌクレオチドのＲｆ
値：２５．３分） ＵＶ：λmax ２６２ｎｍ，４９０ｎｍ
【００３１】
【発明の効果】上述の如く、本発明の５位置換ウリジン
類は製造が容易であり、且つチミン基の５位の部分に標
識化合物を導入し得る基を有しているため、チミン基の
５位の部分に標識化合物を導入したオリゴヌクレオチド
類を化学合成するためのモノマーとして有用である。本
発明の５位置換ウリジン類の製造方法は、出発原料が入
手し易く且つ取り扱い易く、又、収率が高い。更に、合
成時に高価な触媒を必要としない。本発明のオリゴヌク
レオチド類は、本発明の５位置換ウリジン類をモノマー
単位として１個又はそれより多く有するため、チミン基
の５位の部分に標識化合物を容易に導入することができ
る。本発明のオリゴヌクレオチド類の製造方法は、本発
明の５位置換ウリジン類と所定のヌクレオシド類とをＤ
ＮＡ自動合成機を用いて反応させるので、本発明のオリ
ゴヌクレオチド類を簡便に得ることができる。又、本発
明の標識化オリゴヌクレオチド類は、本発明のオリゴヌ
クレオチド類のチミン基の５位に標識物質が結合してい
るため、特定の配列を持った核酸の検出を行なう上で有
用である。
類は製造が容易であり、且つチミン基の５位の部分に標
識化合物を導入し得る基を有しているため、チミン基の
５位の部分に標識化合物を導入したオリゴヌクレオチド
類を化学合成するためのモノマーとして有用である。本
発明の５位置換ウリジン類の製造方法は、出発原料が入
手し易く且つ取り扱い易く、又、収率が高い。更に、合
成時に高価な触媒を必要としない。本発明のオリゴヌク
レオチド類は、本発明の５位置換ウリジン類をモノマー
単位として１個又はそれより多く有するため、チミン基
の５位の部分に標識化合物を容易に導入することができ
る。本発明のオリゴヌクレオチド類の製造方法は、本発
明の５位置換ウリジン類と所定のヌクレオシド類とをＤ
ＮＡ自動合成機を用いて反応させるので、本発明のオリ
ゴヌクレオチド類を簡便に得ることができる。又、本発
明の標識化オリゴヌクレオチド類は、本発明のオリゴヌ
クレオチド類のチミン基の５位に標識物質が結合してい
るため、特定の配列を持った核酸の検出を行なう上で有
用である。
Claims (5)
- 【請求項１】 次式（１）： 【化１】 〔式中、 Ｒは水素原子又はＯＨ基を表わし、 ＸはＮＨＹ基、Ｎ［（ＣＨ2 ）2 ＮＨＹ］2 基又はＳＳ
（ＣＨ2 ）2 ＮＨＹ基を表わし、 Ｙは水素原子、ＣＯＣＦ3 基又は標識試薬基を表わし、 ｎは２，３又は６を表わす〕で表わされることを特徴と
する５位置換ウリジン類。 - 【請求項２】 （ａ） 次式（２）： 【化２】 で表わされるアラビノアミノアキサゾリンを次式
（３）： 【化３】 で表わされるα−ブロモメチルフマル酸ジメチルと反応
させて次式（４）： 【化４】 で表わされる２，２′−アンヒドロ−５−メトキシカル
ボニルメチルウリジンを得、次いで臭化アセチルと反応
させて次式（５）： 【化５】 で表わされる２′−デオキシ−２′−ブロモ−３′，
５′−ジアセトキシ−５−メトキシカルボニルメチルウ
リジンを合成する工程、（ｂ） 前記式（５）で表わさ
れる２′−デオキシ−２′−ブロモ−３′，５′−ジア
セチル−５−メトキシカルボニルメチルウリジンをトリ
−ｎ−ブチルズズヒドリドで還元して次式（６）： 【化６】 で表わされる５−メトキシカルボニルメチル−３′，
５′−ジアセチル−２′−デオキシウリジンを合成する
工程、及び（ｃ） 前記式（６）で表わされる５−メト
キシカルボニルメチル−３′，５′−ジアセチル−２′
−デオキシウリジンをジアミン類と反応させた後、トリ
フルオロ酢酸エチルと反応させて次式(1-a) ： 【化７】 で表わされる５位置換ウリジン類を合成する工程、又は
（ｄ） 前記式（６）で表わされる５−メトキシカルボ
ニルメチル−３′，５′−ジアセチル−２′−デオキシ
ウリジンを無水酢酸／酢酸と反応させて２′，３′，
５′−トリアセチル−５−メトキシカルボニルメチルウ
リジンを得た後、アンモニア／メタノール溶液を用いて
加水分解して５−メトキシカルボニルメチルウリジンを
合成し、次いでジアミン類と反応させた後、トリフルオ
ロ酢酸エチルと反応させて次式(1-b) ： 【化８】 で表わされる５位置換ウリジン類を合成する工程、とか
らなることを特徴とする請求項１記載の式（１）で表わ
される５位置換ウリジン類の製造方法。 - 【請求項３】 請求項１記載の式（１）で表わされる５
位置換ウリジン類をモノマー単位として１個又はそれよ
り多く有することを特徴とするオリゴヌクレオチド類。 - 【請求項４】 請求項１記載の式（１）で表わされる５
位置換ウリジン類と、該５位置換ウリジン類と反応性を
有するヌクレオシド類とをＤＮＡ自動合成機を用いて反
応させることを特徴とする請求項３記載のオリゴヌクレ
オチド類の製造方法。 - 【請求項５】 請求項３記載のオリゴヌクレオチド類の
チミン基の５位に標識物質が結合していることを特徴と
する標識化オリゴヌクレオチド類。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34133493A JPH07165786A (ja) | 1993-12-10 | 1993-12-10 | ５位置換ウリジン類、その製造方法及びその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34133493A JPH07165786A (ja) | 1993-12-10 | 1993-12-10 | ５位置換ウリジン類、その製造方法及びその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07165786A true JPH07165786A (ja) | 1995-06-27 |
Family
ID=18345259
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34133493A Pending JPH07165786A (ja) | 1993-12-10 | 1993-12-10 | ５位置換ウリジン類、その製造方法及びその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07165786A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002522446A (ja) * | 1998-08-07 | 2002-07-23 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ | アミン塩基及びヌクレオシドの構造的類似体 |
-
1993
- 1993-12-10 JP JP34133493A patent/JPH07165786A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002522446A (ja) * | 1998-08-07 | 2002-07-23 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ | アミン塩基及びヌクレオシドの構造的類似体 |
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Legal Events
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| A131 | Notification of reasons for refusal |
Effective date: 20040818 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 |
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| A521 | Written amendment |
Effective date: 20041018 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 |
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| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20051116 |