JPH07165694A - Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−シアノ−３−ヒドロキシ−クロトン酸アミド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−
２−シアノ−３−ヒドロキシ−クロトン酸アミド。 【効果】 上記化合物は自己免疫疾患特に全身性エリテ
マトーデスの治療剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規なＮ−（４−トリフ
ルオロメチルフェニル）−２−シアノ−３−ヒドロキシ
−クロトン酸アミドに関する。本発明の化合物は自己免
疫疾患特に全身性エリテマトーデスの治療剤として有用
である。

【０００２】

【従来の技術】ヨーロッパ特許第１３,３７６号の記載
から５−メチルイソオキサゾール−４−カルボン酸−
（４−トリフルオロメチル）−アニリド（化合物１）が
消炎剤として知られている。この化合物の製法も同じく
そこに記載されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】今、この化合物１およ
びその代謝産物Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニ
ル）−２−シアノ−３−ヒドロキシ−クロトン酸アミド
（化合物２）〔Strecher氏他、「Ann. Report Med. Che
m.」18, 171〜179(1983)〕

【化２】 が慢性対宿主移植片疾患(chronic graft-versus-host d
iseases)(ｃＧｖＨ)ならびに自己免疫疾患特に全身性エ
リテマトーデス(systemic lupus erythematosus)(ＳＬ
Ｅ)に対する医薬として適する免疫調節性質を有するこ
とが見出された。

【０００４】

【課題を解決するための手段】それゆえ本発明は２種類
の前記化合物１および２の使用に関するものであり、こ
こで化合物２はそのまままたは生理学的に受容されうる
塩の形態で使用されることができるものとし、また、本
発明は慢性対宿主移植片疾患ならびに自己免疫疾患特に
全身性エリテマトーデスに対する医薬の製法に関する。
塩としては例えばアルカリ金属塩、アルカリ土類金属
塩、および生理学的に受容されうる有機アンモニウム塩
基を含むアンモニウム塩が適当である。

【０００５】Ａ） 慢性対宿主移植片（ｃＧｖＨ）疾患 移植に際し比較的しばしば移植片に対する拒絶反応が存
在する。しかしながらこの移植片−宿主の関係は宿主器
官による拒絶反応のみに限定されない。ある場合には移
植片に由来し宿主組織に向けられた免疫反応が存在しう
る。これらは急性および慢性反応に区別される。急性の
対宿主移植片反応は脾臓肥大、肝臓腫脹、リンパ節肥
大、溶血性貧血、低い免疫グロブリンレベルおよび補体
レベルならびに免疫反応低下により特徴づけられる。急
性に進行する反応はほとんど常に死をもって終わる。こ
の他に慢性に経過する疾患形が存在する。これはリンパ
節障害、免疫複合体糸球体腎炎および多くの抗体形成を
来たす。これらの進行形態は急性形より緩和でありそし
て短期間内では死に至らない。このｃＧｖＨ反応により
惹起される症候は全身性エリテマトーデスのそれと非常
によく類似している。

【０００６】Ｂ） 全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ） 全身性エリテマトーデスは非器官特異的な自己免疫疾患
である。この疾患は多数の器官を侵しそして急性シュー
ブを伴って慢性に経過する。ＳＬＥの外部的徴候は顔面
の皮膚変化である。大抵の場合他の皮膚領域ならびに粘
膜も侵される。腎炎、心内膜炎、溶血性貧血、白血球減
少症および中枢神経系への関与も観察される。ＳＬＥに
おいては多数の免疫学的現象が観察された。ある種の内
生的抗原に対する抗体が形成される。ＳＬＥ患者におい
て検出されうるこれら抗体は例えば皮膚の基底膜、白血
球、赤血球および核抗原に対するものである。まず第一
に二本鎖ＤＮＡ（ｄｓ ＤＮＡ）に対する抗体が、それ
と複合体を形成し、そしてこの複合体が補体と一緒にな
って小さな血管に沈着しそしてしばしば血管炎を生ず
る。この沈着はそれが腎臓糸球体中で起ると特に危険で
ある。何故なら糸球体腎炎および腎不全を生ずるからで
ある。臨床的に捕捉しうる腎臓関与の頻度は文献では５
０〜８０％と報告されている。

【０００７】全身性エリテマトーデスを有する患者が生
き延びるにはグルココルチコイドおよび他の免疫抑制
剤、例えばシクロホスファミド（ＣＰＡ）が決定的に重
要である。特異的な治療剤はこれまで存在しない。治療
はこれまで急性増悪を阻止または克服しそして再発を防
ぐことを目的としていた。この目的には患者をグルココ
ルチコイドおよび他の免疫抑制剤で治療するが、しかし
ながらこれらはそれ自体危険な副作用を有する。ＳＬＥ
を研究するのに種々の動物モデルが存在する。少数の系
統のマウスでは、ニュージーランド系マウスまたはＭＲ
Ｌ／１−系マウスのように自然発生的にＳＬＥが生成
し、これらは米国メイン州、ジャクソン(Jackson）ラボ
ラトリーズに由来しそして我々の動物舎で特殊な病原体
のない（ＳＰＦ）状態でさらに飼育された動物である。
しかしながら非自己免疫マウスに実験的処置によりＳＬ
Ｅ類似疾患を惹起することも可能である。

【０００８】以下の記載において量の表示mg／kgは体重
のkgに基づくものとする。ＣＭＣはカルボキシメチルセ
ルロースのナトリウム塩を、そしてＮ.Ｓ.は「試験物質
なし」を意味する。図１〜図５においては化合物１がア
ニリド１としてそして化合物２がアニリド２として示さ
れる。活性化合物はＣＭＣと混合して経口投与された。
「Ｎ.Ｃ.」は負の対照を意味する。

【０００９】Ｃ） 薬理試験およびその結果 １） 慢性の対宿主移植片疾患 この動物モデルはグライヒマン(Gleichmann)氏他により
種々の刊行物に記載されている。異常なＴ−Ｂ細胞協力
によりＧｖＨ反応を惹起することによりＳＬＥを誘発さ
せる〔Gleichmann氏他、「Euro. J. Immunol.」12, 152
〜159(1982)参照〕。ｃＧｖＨ疾患は脾臓および胸腺細
胞を２回注射することにより惹起された。Gleichmann氏
他による（ＤＢＡ／２×Ｃ５７Ｂ１／６）Ｆ１−世代の
マウスに第１日目および第８日目にそれぞれ７０×１０
⁶個のＤＢＡ／２−細胞を培地０.２ml中で静脈注射し
た。ドナー細胞の第１回の注射後第１７日目に動物の第
１回目の治療を行った。３種の独立した実験１.１〜１.
３が行われ、その際全３種の実験において雌の動物のみ
が提供者および受容者として用いられた。それぞれ実験
１.１〜１.３に記載される量の活性化合物およびそれと
並んで１００mg／リットルのＣＭＣを含有するもの１ml
を各動物に経口投与した。

【００１０】実 験 1.1) １７日目から１日１回投与 ＣＭＣ，Ｎ.Ｓ. ８mg／kg ＣＰＡまたは ５mg／kgの化合物１または １０mg／kgの化合物１または ２０mg／kgの化合物１ 負の対照（ｃＧｖＨなしの動物）には各１０匹ずつの動
物が、そして残りの群にはそれぞれ１８匹が用いられ
た。

【００１１】1.2) 第１７日目から投与 ＣＭＣ，Ｎ.Ｓ. 週２回、 ２８mg／kgの化合物１を１日１回、または １４mg／kgのＣＰＡを週２回、または ２８mg／kgのＣＰＡを週２回、または ５０mg／kgのＣＰＡを週２回 各ｃＧｖＨ−群には動物２０〜２１匹、そして負の対照
には各９匹が用いられた。

【００１２】1.3) 第１７日目から１日１回投与 ＣＭＣ，Ｎ.Ｓ． １mg／kgのインドメタシン、または ２mg／kgのプレドニソロン、または ２０mg／kgの化合物２、または ３０mg／kgの化合物２ 各群は動物１０〜１１匹が用いられた。

【００１３】ａ） 蛋白尿 実験期間中（９〜１０週）動物の尿中における蛋白質の
量を毎週確認した（アルブ・スティック(Albu・stick）
試薬片、ElkhartのMiles Laboratories、AmesDivision
製）。これらの調査結果を図１〜図３に示す。 ｂ） 糸球体腎炎−組織学的調査 蛋白尿は糸球体の基底膜への免疫複合体沈着によるネフ
ロン破壊の結果生ずる。化合物の投与がこの沈着をどの
程度まで阻止するか確認するために、腎臓を剔出しそし
て薄い切片を調製した（腎臓１個当り１０片）。切片を
固定しそして乾燥したのち、これらを家兎の抗マウス免
疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）とインキュベーションした。
続いてこれを洗いそして蛍光標識された豚の抗家兎Ｉｇ
Ｇとインキュベーションした。このインキュベーション
ののちもう一度洗浄し、封埋しそしてライツ(Leitz)蛍
光顕微鏡で観察すると蛍光性糸球体の数が確認された。
これらの結果を表１に示す。

【００１４】

【表１】

【００１５】ｃ） 対宿主移植片インデックス（ＧｖＨ
−インデックス）の抑制 ｃＧｖＨ疾患の進行において脾臓が免疫防御の結果相当
に肥大する。脾臓の重量を罹患した動物の体重と関連さ
せそしてこの割合を健康な動物における相当する関連値
と比較すると対宿主移植片インデックスが得られる。

【００１６】

【数１】 （ここでＸは調査される（罹患した）動物そしてｇは健
康な動物である）

【００１７】ＧｖＨ−インデックスにより疾病の重さの
確立ができる。すなわちインデックスが大きければ大き
いほど疾病が重い。その結果を表２に示す。

【表２】

【００１８】２） ＳＬＥのモデルとしてのＭＲＬ−１
pr／１pr−マウス（ＭＲＬ−１） この動物で自然発生ＳＬＥ疾患が起る。ＭＲＬ−１系マ
ウスは核成分に対する抗体、過ガンマグロブリンおよび
循環性免疫複合体を有する。糸球体腎炎が通常死因とな
る。

【００１９】実験 ２.１ 雄および雌のＭＲＬ−１系マウスにおけるＳＬＥ疾患の
発達に及ぼす化合物１の影響を調べた。動物が９週令に
なったのち、これらを群に分け（ｎ＝２０）そして化合
物での処置を開始した。各動物に、それぞれ実験２.１
で記載される量の活性化合物およびその他に１００mg／
リットルの濃度のＣＭＣを含有するもの１mlを経口投与
した。 未処置ＭＲＬ／１−マウス（正の対照） ＭＲＬ／１マウス１日当り５mg／kgの化合物１ ＭＲＬ／１マウス１日当り２０mg／kgの化合物１ ＭＲＬ／１マウス１日当り２８mg／kgの化合物１ ＭＲＬ／１マウス１日当り３５mg／kgの化合物１ 未処置ＮＭＲＩ−マウス（負の対照）

【００２０】ａ） 蛋白尿 尿中における蛋白排泄を、１ａ）項記載のようにして測
定した。雌の動物の結果を図４に示す。雄の動物での結
果も同様であった。 ｂ） 二本鎖ＤＮＡ（ｄｓ ＤＮＡ）に対する抗体の力
価 ＳＬＥは核成分に対する抗体の存在により特徴づけられ
る。ＩｇＧクラスの抗−ｄｓ ＤＮＡ抗体はＳＬＥ特異
的でありそして診断に用いられる。動物が３５週令にな
ったのち、これらから採血しそして血清の抗体力価をエ
リザ（ＥＬＩＳＡ）法〔Enzyme Linked Immunosorbento
Assay, Kavai氏他の「J. Immunol. Meth.」48, 169〜1
75(1982)；Pisetsky氏他の「J. Immunol. Methods」74,
217〜227(1984)参照〕を用いて測定した。その結果を
表３にまとめる。

【００２１】

【表３】

【００２２】ｃ） Ｔ−リンパ球を増殖させる能力 ＭＲＬ／１−マウスにおいてはＴ−リンパ球サブクラス
の大量に増殖が起るが、マイトジエンによる増殖は減少
する。この異常なＴ−細胞機能がＭＲＬ／１−マウスの
自己免疫疾患において基本的な病因的役割を果している
ことが想定される。この低下したＴ−細胞機能の治療的
回復が好ましいであろう。脾臓を滅菌条件下に剔出しそ
してバートレット(Bartlett)およびシュライヤーバッハ
(Schleyerbach)氏により記載されるようにして（「Int.
J. Immunopharmacol. 」７, 7〜18(1985))処理した。
図５に示される結果は、化合物１が植物血球凝集素(phy
tohemagglutinin)(ＰＨＡ)およびコンカナバリン−Ａ(c
oncanavalin A)(Ｃｏｎ−Ａ)により刺激されたＴ−リン
パ球の増殖が薬量依存的に改善を惹起することを示して
いる。ＰＨＡにより誘発された増殖は非自己免疫ＮＭＲ
Ｉ系マウスのリンパ球の増殖と同程度の高さでさえあ
る。

【００２３】これらの研究の結果は、化合物１および２
がマウスにおけるｃＧｖＨ疾患およびＳＬＥ疾患の生成
を抑制することを示している。これらの化合物により、 １） 両疾患における糸球体腎炎の発生が阻止される。
このことは尿中における蛋白質排泄の低下および腎臓で
の組織学的調査により示された。 ２） 抗−ｄｓＤＮＡ−抗体力価が低下される。 ３） ＧｖＨインデックスが低下される。 ４） 低下したＴ−リンパ球増殖が薬量依存的に改善さ
れる。

【００２４】化合物１および２はシクロホスファミドま
たはグルココルチコイドのような免疫抑制剤に比較して
有利である、何故ならこれらは何ら免疫系の一般的な抑
制を惹起せずしかも低下したＴ−細胞機能を回復させさ
えする。これらが慢性的なＧｖＨ疾患およびＳＬＥに対
し良好な効力を有するという事実はなおさら驚くべきこ
とである。

【００２５】化合物１および２は単独で、場合によりマ
イクロカプセルの形態で、または慣用の生理学的に受容
されうる賦形剤、希釈剤および／または成分と混合して
投与されうる。薬剤は経口、直腸から、静脈からまたは
非経口で投与でき、その際経口投与または直腸使用が好
ましい。適当な固形および液状の医薬製剤形は例えば顆
粒、粉末、錠剤、被覆錠、カプセル、坐薬、シロップ、
乳濁液、懸濁液、エーロゾル、滴剤またはアンプル中の
注射溶液（その際乾燥アンプルも特殊な製剤形として包
含される）ならびに活性物質放出遅延性製剤であり、そ
れらの製造においては慣用の助剤例えば賦形剤、崩壊
剤、結合剤、被覆剤、膨潤剤、滑沢剤または潤滑剤、香
味剤、甘味料、緩衝物質、酸化防止剤および／または可
溶化剤が使用される。しばしば用いられる助剤は例えば
炭酸マグネシウムまたは炭酸カルシウム、燐酸カルシウ
ム、二酸化チタン、マンニット、乳糖およびその他の
糖、タルク、乳アルブミン、ゼラチン、殿粉、ビタミ
ン、セルロースおよびそれらの誘導体、動物油および植
物油、ポリエチレングリコールおよび生理学的に受容さ
れうる溶媒例えば滅菌水、アルコール、グリセリンおよ
びその他の多価アルコールである。

【００２６】医薬製剤は薬量単位にて製造され投与され
るのが好ましく、その場合各単位は活性成分として定め
られた量の化合物１および／または２を含有する。固形
の薬量単位例えば錠剤、カプセルおよび坐薬において
は、この量は１０〜２００mgであることができるが、し
かし好ましくは５０〜１００mgであり、アンプル形の注
射溶液（静脈内）特に化合物２またはその塩に基づく場
合は１〜３０mg好ましくは５〜１０mg、そして直腸投与
の場合は５０〜３００mg好ましくは１００〜２００mgで
ある。

【００２７】成人患者を治療するには、経口投与におい
ては１日量５０〜２００mg、静脈投与においては１０〜
３０mgそして直腸投与においては１００〜３００mgの活
性化合物が指示される。しかしながら事情によってはそ
れより高いかまたは低い一日量も好適である。一日量の
投与は１個の薬量単位または数個の比較的小さい薬量単
位の形態で１回投与することによるかあるいはまた小分
けした薬量で定められた間隔で何回か投与することによ
っても行われうる。本発明化合物はまた他の適当な活性
化合物例えば抗尿酸病剤血小板集合阻害剤、鎮痛剤およ
びステロイド系または非ステロイド系消炎剤と組み合せ
て使用することもできる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ｃＧｖＨにかかったマウスに種々の薬物を９〜
１０週間投与後の動物の尿蛋白量の変化を示す。

【図２】ｃＧｖＨにかかったマウスに種々の薬物を９〜
１０週間投与後の動物の尿蛋白量の変化を示す。

【図３】ｃＧｖＨにかかったマウスに種々の薬物を９〜
１０週間投与後の動物の尿蛋白量の変化を示す。

【図４】ＳＬＥマウスに対する種々の薬物投与後の尿蛋
白量の変化を示す。

【図５】植物血球凝集素（ＰＨＡ）およびコンカナバリ
ン−Ａ（Ｃｏｎ−Ａ）により刺激されたＴ−リンパ球増
殖の薬量依存性改良を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 フリードリヒ−ヨハネス・ケメラー ドイツ連邦共和国デー−6203ホーホハイ ム・アム・マイン．アム・ゲンスボルン３ アー

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式２ 【化１】 を有するＮ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２
   −シアノ−３−ヒドロキシ−クロトン酸アミドまたはそ
   の生理学的に許容しうる塩。