JPH11246435A - 免疫調整剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】ヒトの免疫性疾患の改善、治療、予防のため経
口摂取が可能でマクロファージや単球等の酸化、還元状
態を制御し得る斬新な方法を提供する。 【解決手段】マクロファージの還元型グルタチオン量を
変化させる作用を有する物質を含有させることによりヒ
トの免疫性疾患の治療、改善、予防を目的とした経口摂
取ができる免疫調整剤。特に、シスチン誘導体を免疫抑
制剤として使用することができ、肝硬変、肝炎、炎症性
腸疾患（潰瘍性大腸炎、クローン病等）等ヒトの消化管
炎症を中心とする炎症性疾患等の治療、改善、予防のた
めに期待できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規免疫調整剤、詳し
くはマクロファージ（以下、Ｍφと略することもあ
る。）や、単球等の機能の斬新な制御作用を含み、特
に、ヒトの免疫性疾患である肝硬変、肝炎、糖尿病、炎
症性腸疾患（潰瘍性大腸炎、クローン病等）等の消化管
炎症、過敏性肺臓炎、肺線維症、慢性関節リウマチ、喘
息、皮膚アトピー症等の自己免疫疾患、アレルギー性疾
患、癌等の治療、改善、予防を目的とした経口摂取可能
な免疫調整剤（例えば、免疫増強剤、免疫抑制剤。）、
及びこれを含む医薬品並びに食品（医療用食品、健康食
品、特定保健食品等を含む。）、栄養剤及び輸液製剤等
に関する。

【０００２】

【従来の技術】免疫系は、ウイルス、細菌等の外部から
の感染、又は自己由来細胞が異常を来たすことで生成す
る細胞（癌細胞等）による生体侵襲から自己を防衛する
ためのシステムである。しかしながら、この免疫系が異
常を来たし、過剰に働いたり、自己成分を排除する方向
に免疫系が働いたりすると伴に、逆に、排除機能が不全
状態に陥ることがある。このような状態を惹起する疾患
は総称して免疫性疾患と呼ばれる。例えばアトピー性皮
膚炎、花粉症、喘息、ザルコイドーシス等の急性並びに
慢性炎症性疾患、アレルギー性疾患、慢性関節リウマ
チ、糖尿病（ＩＤＤＭ）、ＳＬＥ、慢性疲労性症候群等
の自己免疫疾患や、肝炎、肝硬変、潰瘍性大腸炎、クロ
ーン病等炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、癌悪液質状態等数多
くの疾患が含まれる。これら免疫性疾患の原因は様々で
あるが、サイトカイン、炎症性メディエーターの局所で
の産生を介して、特定の細胞の増殖、分化、壊死を伴う
炎症を引き起こすことを発端として全身性の免疫不全、
機能不全状態に至る。

【０００３】免疫を担当する細胞としてはＴリンパ球、
Ｂリンパ球が良く知られ、各々細胞性免疫、液性免疫の
担い手として多彩な機能を発揮する。一方、マクロファ
ージ／単球等は細胞性免疫及び液性免疫に深く関与する
細胞で、アレルギー、リウマチ等の免疫性疾患、癌、細
菌感染等の非自己である異物排除に深く関わっている。
マクロファージ／単球等の機能は、分泌機能、抗原呈
示を中心とした免疫調節機能、異物、老廃物の処理、貪
食機能、標的細胞の障害処理機能の４種に大別され、Ｔ
ＮＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＧＦβ、Ｉ
Ｌ−８等のサイトカイン、ネオプテリン（ＮＰＴ）、ジ
ハイドロキシエピアンドロステン（ＤＨＥＡ）等のホル
モン様分子、ＰＧＥ２やＬＴＢ４等のアラキドン酸代謝
産物、Ｃ５ａ，Ｃ３等の補体系分子、活性酸素、活性窒
素等炎症像を規定する種々の分子を産生することが知ら
れている。これらの多彩な機能が単一のマクロファージ
／単球等によって担われているのか、機能を異にするマ
クロファージ／単球等集団によって担われているのかは
不明であり、リンパ球がその細胞表面マーカーによって
分類されその機能との対応が明確になっているのに対
し、マクロファージ／単球等の機能の多様性と細胞亜集
団の対応については全く不明である。このため、上述の
ような炎症性、アレルギー性、免疫性疾患の発症と病態
進展に、マクロファージ／単球等は極めて重要な役割を
有しているにも拘らず、マクロファージ／単球等の細胞
亜集団の存在を想定しての機能分類のヒトの疾患の治
療、改善、予防への応用は全く為されておらず、想定さ
れたことすらなかった。

【０００４】近年、アレルギー疾患、慢性関節リウマチ
等の自己免疫性疾患や悪性腫瘍患者において、末梢血中
のヘルパーＴ細胞亜集団のタイプの片寄りが疾患と対応
づけられつつあり、Ｔリンパ球中の亜集団であるヘルパ
ーＴリンパ球が更に２つの亜集団Ｔｈ１とＴｈ２に分類
され、その２種の存在比が生体の免疫機能の重要な指標
になることが立証されつつある。本指標を基に疾患の病
態を診断したり、その存在比を改善することにより、よ
り適切な治療法を樹立しようとの試みがなされつつあ
る。即ち、Ｂ細胞からのＩｇＥ産生を引き起こすＴｈ２
がＴｈ１より多い場合（Ｔｈ１＜Ｔｈ２）、アレルギー
性疾患が悪化することが分かってきており、Ｔｈ１／Ｔ
ｈ２を測定することにより、免疫の状態を検定したり、
Ｔｈ１＞Ｔｈ２にすることによりアレルギーを抑制しよ
うとする試みがなされつつある。逆に、Ｔｈ１が支配的
な状況で引き起こされる疾患の存在も慢性関節リウマチ
や慢性期の喘息炎症を始め、次々に指摘されつつある。

【０００５】

【本発明が解決しようとする課題】生物材料を用いてＴ
ｈ１とＴｈ２のバランスを測定し、Ｔリンパ球を標的に
この２つの亜集団の機能を調節しようとしても、局所慢
性炎症やアレルギー性疾患の検定、診断に利用すること
には、現在のところ成功していない。最近、Ｔｈ１病や
Ｔｈ２病という言葉も用いられるが、必ずしも２者に明
確に区別できないのが実態である。

【０００６】Ｔｈ１／Ｔｈ２の存在比は、リンパ球亜集
団の指標でしかなく、リンパ球亜集団の生体内での動態
は本発明で取り扱うマクロファージを始めとするアクセ
ソリー細胞と呼ばれる細胞群の機能と実際には複雑に関
わっているため、Ｔｈ１／Ｔｈ２の存在比だけで疾患の
病態を適切に診断し、その情報を基に治療することは困
難である。後述するが、マクロファージ／単球等の機能
状態によってＴｈ１／Ｔｈ２のバランスは制御されてい
るのである。治療のためにＴｈ１＞Ｔｈ２に傾斜させる
ことを意図しても、それだけでは複雑なサイトカインネ
ットワークにおいては効果が得難く、新たな診断、治療
のための指標が待ち望まれている。

【０００７】炎症反応に深く関与しているマクロファー
ジにおいて、酸化ストレス、サイトカイン刺激、ウイル
ス、細菌感染等の環境因子により細胞の機能が変化する
ことが判明しているが、その機能とマクロファージの細
胞亜集団分類の対応については全く不明である。それら
機能、分類において新たな知見が必要であり、それらの
知見が得られることにより、飛躍的に有用な新たな治療
方法の開発に繋がる。以上の状況下に、免疫を調整する
優れた薬剤、即ち免疫調整剤の開発が望まれる。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、前記課題
解決に向けて鋭意検討した結果、次の知見を得た。即
ち、免疫抑制、悪液質誘導、癌細胞の悪性化誘導作用、
炎症の遷延化作用の強いマクロファージ（単球、クップ
ファー細胞及び樹状細胞等を含む）と、免疫調整性のマ
クロファージとの区別を、マクロファージのレドックス
状態（ポテンシャル）の相違から試み、それを可能とし
た。その指標としてはマクロファージ細胞内の還元型グ
ルタチオン（ＧＳＨ）含量を採用する。

【０００９】グルタチオンは、ほ乳類のあらゆる細胞に
存在し、内因性の抗酸化物質として良く知られ、細胞内
においてラジカルや過酸化物の除去、プロスタグランジ
ン等のエイコサノイドの代謝、生体異物の解毒、アミノ
酸輸送等多様な機能を有しているトリペプチドである。
還元型（ＧＳＨ）と酸化型（ＧＳＳＧ）が存在し、両者
間で共役サイクルを形成する。通常の細胞では、ＧＳＨ
の濃度は還元状態の方が圧倒的に多く、酸化ストレス、
特にＨ₂Ｏ₂に対して防御的に作用する。

【００１０】既に、Ｒｕｄｅ等は、ＧＭ−ＣＳＦにより
分化したマクロファージと、Ｍ−ＣＳＦにより分化した
マクロファージでは、細胞内ＧＳＨ濃度は前者の方が高
濃度であることから、細胞内ＧＳＨ濃度の相違がマクロ
ファージの機能に関与している可能性を報告（ German
n, T., Mattner, F., Partenheimer, A., etal.:
Different accessory function for Ｔｈ１ cel
ls of bone marrow derived macrophages cultur
ed in granulocyte macrophage colonystimulating
factor or macrophage colony stimulating fac
tor. Int. Immunol., 4:755, 1992; Frosch, S.,
Bonifas, U., Eck, H.-P.,et al.: The effici
ent bovine insulin presentation capacity of
bone marrow-derived macrophages activated by
grnulocyte-macrophagecolony-stimulating factor c
orrelates with a high level of intracellular
reducing thiols. Eur. J. Immunol., 23: 43
0, 1993 )しているが、本発明者等は、マクロファー
ジ中の還元型ＧＳＨ含量を測定するとともに、ＧＳＨ含
量を異にするマクロファージの免疫機能に及ぼす効果に
大きな差のあること（図１参照。）、本測定法で生体の
免疫能を検定しその酸化還元状態を経口投与可能な低分
子物質で人為的に調整できること、及び本法が疾患の治
療に広範に応用できること並びに食品として活用できる
ことを見出し（図１参照。）、本発明を完成するに至っ
た。

【００１１】図１は、本発明により見出された知見に基
づき、マクロファージ又は単球、クップファー細胞及び
樹状細胞等（本発明ではこれらを併せてマクロファージ
と称する。）の機能の相違、並びに、Ｔｈ１及びＴｈ２
バランスに及ぼす効果、更にはマクロファージの機能の
相違によって引き起こされる免疫抑制、悪疫質状態、癌
細胞の悪性化誘導の機序、局所炎症等との関係の模式図
を示したもので、例えば、担癌進行に従い、局所のＴｈ
１／Ｔｈ２バランスが崩れ、液性免疫に傾き、サイトカ
インレセプター複合体構成と機能が変化し、ＧＳＨ含量
の少ない酸化型マクロファージが増加し、活性酸素や、
ＰＧＥ２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０，ＩＬ−８等の炎症伝
達因子の産生が高まり、全身性の免疫抑制、悪液質状態
となるとともにアレルギー状態や臓器障害を随伴する慢
性炎症が遷延化する。

【００１２】本発明者等は上記知見に基づき、更に研究
を重ねた結果、炎症反応に重要な役割を果たしているマ
クロファージ細胞中の酸化型グルタチオンと還元型グル
タチオンの含量を検定することにより、不均一なマクロ
ファージ集団が２つのタイプ即ち酸化型マクロファージ
と還元型マクロファージとに分類することができ、酸化
型マクロファージが免疫疾患に伴う局所慢性炎症やアレ
ルギー反応を引き起こし、液性免疫と細胞性免疫のバラ
ンスに関与するＴｈ１／Ｔｈ２バランスはマクロファー
ジの酸化／還元状態によって制御されていること、当該
マクロファージの酸化還元状態が免疫性疾患の病態に重
要な役割を果たしており当該酸化還元状態を検定し、そ
の状態を人為的に制御、修飾することにより当該疾患の
診断及び治療に役立つこと、しかもその制御が経口摂取
可能な低分子物質によって簡便に行えることを見出し
た。

【００１３】本発明での酸化型マクロファージ及び還元
型マクロファージの定義は、還元型グルタチオン（ＧＳ
Ｈ）に特異的な化学試薬モノクロロバイメイン（ＭＯＮ
ＯＣＨＬＯＲＯＢＩＭＡＮＥ）と反応させることで細胞
内ＧＳＨ量を定量し、無刺激のマクロファージに比較し
てＧＳＨ含量が増加しているものを還元型マクロファー
ジ、逆に含量の低下しているものを酸化型マクロファー
ジとするものである。更に、経口摂取可能な低分子物質
をマクロファージと２〜２４時間接触させることで、Ｇ
ＳＨ含量が２ｎｍｏｌｅｓ／５×１０⁵マクロファージ
細胞以上のものを還元型マクロファージ（又は単球
等）、０．１ｎｍｏｌｅｓ／５×１０⁵マクロ ファージ
細胞以下のものを酸化型マクロファージとすることが好
ましい。或いは、無刺激のマクロファージのＧＳＨ含量
に比較してＧＳＨ量が２倍以上になっているのを還元型
マクロファージ、１／５以下になっているものを酸化型
マクロファージとすることもできる。

【００１４】現在、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスはＩＬ−６
若しくはＩＬ−４と、ＩＬ−１２が生体内でどのような
割合で産生されるかによって規定されるとされている。
前２者によって液性免疫に関与するＴｈ２が、ＩＬ−１
２によってＴｈ１が誘導されることが既に知られてい
る。しかしながら、ＩＬ−６、ＩＬ−１２はマクロファ
ージから産生されることは判明しているが、同一のマク
ロファージ細胞がＩＬ−６もＩＬ−１２も産生すると仮
定すると、Ｔｈ１誘導にもＴｈ２誘導にも関与する１種
のマクロファージが存在することとなり、生体の免疫応
答を考えるに当り大きな矛盾にぶつかる。

【００１５】本発明者等はＧＳＨ含量の高い還元型マク
ロファージによってのみＩＬ−１２が産生されＴｈ１誘
導に働き、酸化型マクロファージによってはＩＬ−６の
産生が亢進し、Ｔｈ２が誘導されることを見出した。ま
た、Ｔｈ１サイトカインの代表であるＩＦＮγが産生さ
れてもマクロファージが酸化型に傾斜していると、ＩＦ
Ｎγの作用でＴｈ２を誘導するＩＬ−６が大量に産生さ
れることも見出された。逆に、還元型マクロファージが
存在するとＴｈ１サイトカインの代表であるＩＦＮγに
よってマクロファージの還元型形質が一層増強されるこ
とも判明した。酸化型マクロファージが誘導されている
ところにＴｈ２サイトカインの代表であるＩＬ−４が作
用すると酸化型マクロファージの形質がさらに増強され
る。これらの知見は液性免疫と細胞性免疫という対局に
ある免疫応答がマクロファージの酸化還元状態によって
一義的に規定されていることを示すもので、免疫学の根
幹に関わる重要な知見である（図２参照）。この知見に
より免疫系疾患の病態診断と治療法について、従来の混
沌とした免疫性疾患治療法に代わる頗る有用で独創的な
発明を既に完成しており、この発明に基づき鋭意検討し
た結果、新しく本発明を完成するに至った。

【００１６】即ち本発明は、マクロファージの細胞内の
還元型グルタチオン量を変化させる作用を有する物質を
含有することに特徴を有する免疫調整剤である。本発明
においてはマクロファージには単球、クップファー細胞
及び樹状細胞等も含められる。当該物質としては、マク
ロファージの細胞内の還元型グルタチオン量を増加させ
ることでインターロイキン１２の産生を惹起するものが
好ましく、例えばＮーアセチルシステイン（ＮＡＣ）、
γ−グルタミルシステインジエチルエステル等の細胞内
でＧＳＨに代謝されるＧＳＨの前駆体、グルタチオンモ
ノエステル及びグルタチオンジエステル等のグルタチオ
ン誘導体、リポ酸（ＬＩＰＯＩＣ ＡＣＩＤ）及びその
誘導体、オルテン（ＯＲＴＥＮＥ）等の低分子物質がよ
り好ましく、経口投与又は経皮投与が可能である。フラ
ボノイド及びその誘導体等の抗酸化物質のうち、マクロ
ファージと接触させることでＧＳＨ含量を上げ、ＩＬ−
１２産生を上げ、ＩＬ−６の産生を下げるものを用いる
ことも可能である。また、これらと併用される物質とし
て、例えばβ（１−３）グルカン、サイトカイン等の高
分子物質は、静脈内投与、ＤＤＳ（ドラッグデリバリー
システム）等を用いての投与において好ましい。当該サ
イトカインとしては、例えばＩＬ−４、ＩＬ−２、ＩＬ
−１２、ＴＧＦβ、ＩＦＮγ等のサイトカインが好まし
く、細胞性免疫を増強したい場合にはＩＬ−２及び／又
はＩＦＮγが特に好ましく、細胞性免疫を減弱したい場
合にはＩＬ−４及び／又はＴＧＦβが特に好ましい。こ
れらの物質は１又は２以上含有することが可能であり、
低分子の経口可能な免疫調製剤と高分子の静脈投与に適
した免疫調製剤を併用することでより高い効果が期待さ
れる。

【００１７】また、本発明には、細胞内の還元型グルタ
チオン量に差のある酸化型マクロファージ及び還元型マ
クロファージの２種マクロファージの何れか一方を選択
的に除去し得る物質を含有することを特徴とする免疫調
整剤も含まれる。当該物質としては、例えば、細胞毒性
を有するＤＮＡアルキル化剤をグルタチオンに共役させ
た物質、酸化型又は還元型マクロファージ特異的抗体と
マクロファージに細胞毒性を有する低分子化合物並びに
マクロファージに取り込まれた後に細胞毒性を示す物質
とを直接又はリンカーを介して結合させた物質等があ
る。当該アルキル化剤としては、例えばサイクロフォス
ファミド、ニムスチン（ＡＣＮＵ）、マイトマイシン
Ｃ、メルファラン等がある。アルキル化剤とグルタチオ
ンとを直接又はリンカーを介して共有結合させることに
より、グルタチオンＳートランスフェレース酵素が活性
化されている酸化型マクロファージでは、当該酵素の働
きによりＤＮＡアルキル化剤が遊離し、酸化型マクロフ
ァージを特異的に殺傷することにより除去することがで
きる。また、インビトロでは、殺細胞性が無いものの酸
化型又は還元型の何れかのマクロファージ中で増大して
いる酵素の作用により、殺細胞性を示すようになる物質
をプロドラッグとして用いることもできる。

【００１８】本発明者等は前記知見に基づき更に研究を
消化管炎症に特化し、マクロファージ細胞内の還元型グ
ルタチオン量を減少させる物質を探索し、極めて低投与
量でその効果を発揮する物質を見出し、ヒトの消化管炎
症に類似する動物モデルを作製し、医薬品としての免疫
抑制剤、医療用食品、健康食品、特定保健食品等に用い
る免疫抑制作用を有する食品、栄養剤及び輸液製剤の開
発に研究深化発展させ、その物質としてシスチン誘導体
に着目し、特に下記の構造式（１）で示される化合物を
用いて、試験管内の免疫活性の抑制効果、動物投与下に
おける免疫抑制効果を広く検定し、更には自発的に消化
管炎症を発症する遺伝子ノックアウトマウスを用いて候
補物質の薬効を検討し、マクロファージ及び単球等の細
胞内の還元型グルタチオン量を減少させる作用を有する
薬理物質として、シスチン誘導体、特に下記構造式
（１）で示されるシスチン誘導体が有効であることを見
出した。 但し、上記式中、Ｒ¹及びＲ²はそれぞれ独立していて、
アルキル基を、Ｒ³及びＲ⁴はそれぞれ独立していて、ア
シル基及びペプチジル基の何れかを、それぞれ表す。特
に、潰瘍性大腸炎、クローン病等の炎症性腸疾患、肝炎
／肝硬変等の消化管炎症の疾患に対する免疫抑制剤とし
て極めて有効である。

【００１９】更に、本発明には、前記免疫調整剤として
の医薬品を含むが、前記免疫調整剤を含有する食品（医
療用食品、健康食品、特定保健食品等を含む。）、栄養
剤又は輸液製剤も含まれる。食品としては、通常の食品
や、歯磨きやチューインガム等口の中に運ばれるものも
含まれ、特に健康志向の食品に含有されるのが好まし
い。また、食品に添加する添加剤の形で用いられてもよ
い。栄養剤としては、例えばビタミン剤、カルシウム剤
等の何れの栄養剤でもよい。輸液製剤としては、例えば
高カロリー輸液、生理食塩水、血液製剤等の通常用いら
れる輸液製剤に含有することができる。

【００２０】また、本発明の免疫調整剤、食品、栄養剤
又は輸液製剤は、特に癌患者の悪液質状態の改善、糖尿
病、消化管炎症、慢性関節リウマチ、肝炎／肝硬変、前
記自己免疫性炎症性疾患及び／又は癌の化学予防を目的
として用いられるのが好ましい。

【００２１】特に、ヒトマクロファージ細胞内の還元型
グルタチオン量を減少させる作用を有する免疫調整剤の
場合には、特に単独若しくは混合物として広く前記自己
免疫性炎症性疾患等の免疫抑制剤として医薬用途に限ら
ず、前記食品等に使用でき、免疫抑制作用を有する食品
並びに栄養剤、輸液製剤としても有用性を発揮する。

【００２２】更に詳細に述べると、本発明は次の通りで
ある。ヒトから分離・採取した体液／細胞試料を用い
て、マクロファージ細胞内の酸化型及び／又は還元型グ
ルタチオン量を検定することにより、マクロファージを
それぞれ異なった機能を有する酸化型マクロファージと
還元型マクロファージとに分類し、その存在割合を経口
摂取できる物質で人為的に制御したり、片方の（酸化型
若しくは還元型の）マクロファージを人為的に除去する
ことでヒトの免疫関連疾患患者の治療に有用な免疫調整
剤や病態改善に役に立つ食品、栄養剤、輸液を提供する
ことである。ヒトからの分離・採取した体液／細胞試料
とは、例えば末梢血や腹腔、胸腔、固形癌局所組織、関
節腔、各種臓器より分離した細胞である。

【００２３】グルタチオンの測定方法としては、直接的
に酵素リサイクリング法で生化学的に酸化型又は還元型
グルタチオン含量を測定する（活性酵素実験プロトコー
ル（細胞工学別冊）、秀潤社、頁84-88,1994年、ANALYT
ICAL CHEMISTRY, VOL. 106,PP207-212, 1980; CELLULAR
IMMUNOLOGY, VOL. 164, PP73-80, 1995等参照。）のみ
ならず、間接的な測定、例えば酸化型又は還元型マクロ
ファージに対する特異的なモノクローナル抗体又はポリ
クローナル抗体を用いて測定したり、モノクロロバイメ
インのようにＧＳＨに特異的に反応し、錯体を形成し、
レーザー光励起により蛍光を発するような試薬を用いれ
ばよい。

【００２４】

【発明の実施の形態】本発明の実施の形態を説明する。
本発明におけるグルタチオンとは、別名５−Ｌ−グルタ
ミル−Ｌ−システイニルグリシンであり、生体内に最も
多く存在するＳＨ化合物で、一般にＧＳＨと記述され
る。グルタチオンは、その分子の酸化状態により還元型
グルタチオンと酸化型グルタチオンに分類される。還元
型グルタチオンとは、前記のグルタチオン（ＧＳＨ）の
ことであり、酸化型グルタチオンは、別名グルタチオン
ジスルフィドと呼ばれるもので、ＧＳＳＧと記述され
る。

【００２５】本発明におけるマクロファージには、前述
の通り単球も含まれる。同時に、樹状細胞やクップファ
ー細胞と呼ばれるマクロファージの類縁細胞も含まれ
る。マクロファージは、様々なサイトカインや炎症性メ
ディエーター等の情報伝達物質をその細胞から遊離、放
出することが知られているが、その活性化状態、分化状
態により、放出されるか否か、また放出される量が異な
る。本発明によれば、例えばマクロファージ細胞内の酸
化型グルタチオンと還元型グルタチオンとの量に着目
し、酸化型マクロファージと還元型マクロファージに分
類後免疫状態を確認して、本発明の免疫調整剤等によ
り、これらマクロファージのバランスを調整することに
より、生体内の免疫状態を改善し、様々な疾患の治療や
予防に役立てられる。

【００２６】還元型マクロファージでは、細胞内の還元
型グルタチオンが酸化型マクロファージより相対的に多
いのに対して、酸化型マクロファージでは、還元型グル
タチオンが還元型より相対的に少ない。また、還元型マ
クロファージと酸化型マクロファージでは、還元型ＧＳ
Ｈ含量の違いのために転写制御因子の活性化に違いが生
じ、サイトカインや炎症伝達因子の遺伝子発現に違いが
起こり、産生される炎症性サイトカインや炎症性メディ
エーターの種類や量が変化し、炎症の質が変化する。

【００２７】酸化型マクロファージでは、ＩＬ−６，Ｉ
Ｌ−１，ＩＬ−８，ＩＬ−１０、ＴＮＦ，過酸化水素、
スーパーオキシド、ＰＧＥ２等の炎症性サイトカイン及
びメディエータが産生されるのに対して、還元型マクロ
ファージでは、一酸化窒素（ＮＯ）、ＩＬ−１２、ＬＴ
Ｂ４等が産生される。更に、酸化型マクロファージ及び
還元型マクロファージは、刺激等により変換する。例え
ば、炎症や敗血症性シヨックを誘導するＬＰＳやＰＭＡ
や、ＩＬ−４、ＴＧＦβ等のサイトカンイにより人為的
に刺激することにより、還元型マクロファージは酸化型
に変換され、逆に、ＩＦＮγ、ＩＬ−２、抗腫瘍性多糖
であるレンチナン（ＬＮＴ）やリポ酸等の抗酸化剤を添
加することにより、酸化型マクロファージを還元型に変
換することができる。このことにより、免疫性疾患等の
治療に応用することができる。

【００２８】病態により酸化型マクロファージ及び還元
型マクロファージの量は異なる。アレルギー性疾患患者
や末期癌患者から採取した体液又は細胞試料中に含まれ
る酸化型マクロファージは、健常人より相対的に多い。
このことを利用することにより、免疫性疾患、癌性悪液
質の診断のための検定、それに引き続く治療に用いるこ
とができる。

【００２９】また、消化管炎症疾患モデル動物（肝炎、
クローン病、潰瘍性大腸炎）より採取したマクロファー
ジ中の還元型グルタチオン量は、正常動物より相対的に
減少していることが、Adherent cell analysing system
( ACAS ) を用いる画像解析や酵素リサイクリング法を
用いる生化学的定量により判明した。このことは炎症性
腸疾患や消化管炎症においてマクロファージは酸化型に
傾斜していることを示し、発症若しくは病態進展への防
御機構の何れかに酸化型マクロファージが関与すること
を示す。発症に関与する場合には、還元型に変換するこ
とが必要であり、病態進展への防御機構を担うものとし
て酸化型マクロファージが関与する場合には、薬剤の投
与によりマクロファージの酸化型状態を持続することを
意図する必要がある。本発明者等はこの二つの可能性の
何れが病態の本質であるかを鋭意検討した結果、消化管
を中心とした慢性炎症、自己免疫性臓器炎症において酸
化型マクロファージは炎症病態進展への防御機構を担う
ものとして機能することを世界で初めて見出し、これら
消化管の病態改善、治療の手段としてマクロファージ中
の還元型グルタチオン量を減少させることが有益である
ことを見出したものである。

【００３０】本発明に従えば、マクロファージの細胞内
の還元型グルタチオン量を上記方法で測定した後に、当
該マクロファージの細胞内の還元型グルタチオン量を変
化させる作用を有する低分子化合物で経口摂取でも活性
が保持されるものを医薬品として通常の製剤化を行い、
病態をモニターしつつ連日若しくは一定の期間をあけ患
者に摂取させれば良い。慢性期においては長期間の服用
継続により効果が著明となる。

【００３１】本発明での酸化型マクロファージ及び還元
型マクロファージの定義は、還元型グルタチオン（ＧＳ
Ｈ）に特異的な化学試薬モノクロロバイメインと反応さ
せることで細胞内ＧＳＨ量を定量し、無刺激のマクロフ
ァージに比較してＧＳＨ含量が増加しているものを還元
型マクロファージ、逆に含量の低下しているものを酸化
型マクロファージとするものである。更に、経口摂取可
能な低分子物質をマクロファージと２〜２４時間接触さ
せることで、ＧＳＨ含量が２ｎｍｏｌｅｓ／５×１０⁵
マクロファージ細胞以上のものを還元型マクロファー
ジ、０．１ｎｍｏｌｅｓ／５×１０5マクロファージ細
胞以下のものを酸化型マクロファージとすることが好ま
しい。或いは、無刺激のマクロファージのＧＳＨ含量に
比較してＧＳＨ量が２倍以上になっているのを還元型マ
クロファージ、１／５以下になっているものを酸化型マ
クロファージとすることもできる。

【００３２】マクロファージの細胞内の還元型グルタチ
オン量を変化させる作用を有する物質としては、マクロ
ファージ（又は単球等）を９６穴マイクロプレートで、
５×１０⁵細胞／２００μｌ／穴宛培養し、被験物質を
０．０１μＭ〜５ｍＭ添加し、 ３７℃で５％ＣＯ2イン
キュベーターで培養し、２〜２４時間後に対照群に対し
還元型ＧＳＨ量を増加又は減少させるものならば何れ
も用いることができる。２ｎｍｏｌｅｓ／５×１０⁵マ
クロファージ細胞以上に増加させる物質又は０．１ ｎ
ｍｏｌｅｓ／５×１０⁵マクロファージ細胞以下に減少
させることもできるも のが望ましい。これらの物質と
して、例えばＮーアセチルシステイン（ＮＡＣ）、γ−
グルタミルシステインジエチルエステル等の細胞内でＧ
ＳＨに代謝されるＧＳＨの前駆体、グルタチオンモノエ
ステル及びグルタチオンジエステル等のグルタチオン誘
導体、リポ酸（ＬＩＰＯＩＣ ＡＣＩＤ）及びその誘導
体、オルテン（ＯＲＴＥＮＥ）等、並びにフラボノイド
及びその誘導体等の抗酸化物質等の低分子物質で、イン
ビトロでマクロファージと数時間培養して細胞内のグル
タチオン量を変化させる作用を有する物質を挙げること
ができる。これらの薬剤は単独若しくはそれらの混合物
として用いることができる。その効果は摂取若しくは投
与後炎症局所や末梢血から単核球を採取し、前述の方法
で細胞内還元型グルタチオン量の治療前に対する変化を
検定することで判定できる。このことで免疫調整剤とし
ての有用性は明確に判定され、疾患に対して効果を有す
る。シスチン誘導体について、特に免疫抑制剤として使
用する場合にも上記免疫調整剤に含まれ、勿論上記同様
に実施することができる。

【００３３】対象として用いることのできる疾患として
は、癌患者の悪液質状態の改善、糖尿病、慢性関節リウ
マチ、ＳＬＥ、肺線維症等の自己免疫疾患、肝炎／肝硬
変、炎症性腸疾患等の消化管炎症を中心とする炎症性疾
患、過敏性肺臓炎、喘息、皮膚アトピー、ザルコイドシ
ス等のアレルギー性疾患等が挙げられる。

【００３４】特に、免疫抑制剤を適用可能な疾患として
は、自己免疫性の炎症性疾患であれば効果が期待され
る。なかんずく肝炎／肝硬変、潰瘍性大腸炎、クローン
病等炎症性腸疾患と呼称される疾患群を含む消化管に生
じる慢性炎症性疾患に免疫抑制剤として適用することが
望ましい。

【００３５】Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの異常やマクロフ
ァージの機能不全等が関連する疾患であれば広範に適用
することができる。癌の化学予防等にも免疫調整剤とし
て有効であることは、一個の正常細胞が個体の中で発
癌、癌化した後に臨床的に発見される１０⁹個になるま
での間、生体が還元状態に存在することの有益な こと
は明らかである。即ち、生体内の炎症で産生される活性
酸素等が癌化の進展に寄与していることは科学的に証明
されているからである。

【００３６】本発明で取扱う免疫調整剤は実際の医療現
場では単独で投与することもできるが、本発明に含まれ
る経口摂取可能な免疫調整剤同士、若しくは、経口摂取
不可能であるが異なる作用機転でマクロファージの細胞
内の還元型グルタチオン量を変化させる他の免疫調整
剤、例えばレンチナンを代表とするβ（１−３）グルカ
ンや、インターロイキン２（ＩＬ−２）を代表とするサ
イトカイン等生体外由来並びに生体内由来の物質と混合
若しくは併用することもできる。特に、細胞性免疫を増
強したい場合にはＩＬ−２と併用したり、γインターフ
エロン（γＩＦＮ）と併用すると還元型マクロファージ
より大量にインターロイキン１２（ＩＬ−１２）が生体
内で産生され本発明の効果を一層増強する。逆に、細胞
性免疫を減弱することで治療効果を意図する場合にはイ
ンターロイキン４（ＩＬ−４）やＴＧＦβと併用すると
ＩＬ−１２の産生が減弱し効果を増強する。これらサイ
トカインはそれ自体がマクロファージの細胞内の還元型
グルタチオン量を変化させることも本発明の過程で見出
され、本発明の有用性とその範囲を補強するものであ
る。

【００３７】生体外由来の物質としては抗体以外にもＩ
Ｌ−１２の産生や機能を阻害する物質であれば併用する
ことにより更なる相乗効果が期待される。

【００３８】細胞内の還元型グルタチオン量に差のあ
る、即ち、還元型ＧＳＨ含量の低いマクロファージ（酸
化型マクロファージ）、若しくは高いマクロファージ
（還元型マクロファージ）の何れか一方を選択的に除去
することも本発明に含まれる。その際に用いられる物質
は低分子化合物、高分子化合物の何れでも良く、中でも
抗体及びその誘導体は効率的である。

【００３９】既に述べた通り、マクロファージ／単球等
の機能の多様性と細胞亜集団の対応については今まで全
く不明であった。このため、炎症性、アレルギー性、免
疫性疾患の発症と病態進展に、マクロファージ／単球等
は極めて重要な役割を有しているにも拘らず、マクロフ
ァージ／単球等細胞亜集団の存在を想定しての機能分類
のヒトの疾患の治療、改善、予防への応用は全く為され
ておらず、想定されたことすら無かった。本発明完成の
前段階として、マクロファージの還元型ＧＳＨ含量を測
定するとともに、世界で始めて、ＧＳＨ含量を異にする
マクロファージの免疫機能に及ぼす効果に大きな差のあ
ることを見出し、炎症反応に重要な役割を果たしている
マクロファージ細胞中の酸化型グルタチオンと還元型グ
ルタチオンの含量を検定することにより、不均一なマク
ロファージ集団が２つのタイプ即ち酸化型マクロファー
ジと還元型マクロファージとに分類され、酸化型マクロ
ファージが免疫疾患に伴う局所慢性炎症やアレルギー反
応を引き起こし、液性免疫と細胞性免疫のバランスに関
与するＴｈ１／Ｔｈ２バランスはマクロファージの酸化
／還元状態によって制御されていること、当該マクロフ
ァージの酸化還元状態が免疫性疾患の病態に重要な役割
を果たしていることが見出された。この２種のマクロフ
ァージの存在割合を人為的に制御するには前述の経口摂
取可能な低分子物質を医薬品として用いる以外に、何れ
か片方のマクロファージを選択的に除去することも頗る
有用な方法である。このことはリンパ球に対する各種モ
ノクローナル抗体が免疫抑制剤として上市されている事
実からも明らかである。片方のマクロファージにのみ若
しくは多量に発現されているマーカーに対する抗体を用
いればよいことは当該業者には容易に想定できるところ
である。

【００４０】また、細胞に対して毒性を有する物質やそ
の誘導体を用いることができるが、還元型マクロファー
ジと酸化型マクロファージの間には細胞内の各種酵素活
性に大きな違いがあるのでプロドラッグの形のもので還
元型マクロファージ若しくは酸化型マクロファージの何
れかの細胞内で選択的に細胞毒性を有する物質に変換で
きるもの等は、本発明に最も叶う。酸化型マクロファー
ジ内で活性が上昇するピリミジンヌクレオチドホスホリ
レース酵素活性やグルタチオンーＳートランスフエレー
ス酵素活性の活用等がその例であり、細胞毒性を有する
アルキル化剤にグルタチオンを共役させたもの等があ
る。

【００４１】本発明の免疫調整剤は広範な免疫性疾患に
適用できることは、マクロファージからの炎症性伝達因
子の分泌を基本的なところで制御することから明白であ
る。例えば、非ステロイド性酸性抗炎症剤（アスピリン
等）は、プロスタグランジン産生、遊離を抑制すること
でその薬効を発揮するといわれる。一方、ビタミンＥ等
の抗酸化剤は活性酸素の産生を抑制することで薬効を発
揮する等、その作用が図１に示す炎症性細胞たるマクロ
ファージの多彩な機能の１局面を制御するのみである。
そのため、その効果も著明ではなく、特に慢性炎症には
効果は殆ど認められない。それに対して本発明になる免
疫調整剤はマクロファージの酸化／還元状態を制御する
ことを基本とするもので、有害な炎症伝達因子の産生を
一度に多数抑制できるものである。従来の薬物の概念を
基本から変革するものといえる。

【００４２】以上のように、本発明の免疫調整剤の医療
現場における有用な薬効は、その有用な免疫活性からし
て自明であり、疾患の急性期、慢性期の何れにも有用で
ある。特に、癌患者の悪液質状態の改善、糖尿病、慢性
関節リウマチ、ＳＬＥ、肺線維症等の自己免疫疾患、肝
炎／肝硬変、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎、クローン病
等）を中心とする消化管炎症等の慢性炎症性疾患、過敏
性肺臓炎、喘息、皮膚アトピー、ザルコイドーシス等の
アレルギー性疾患等Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの異常やマ
クロファージの機能不全、異常が関連する疾患であれば
広範に適用することができる。癌の化学的予防等にも免
疫調整剤として有効である。癌患者の悪液質状態の改善
については、延命効果が期待されるとともに特にＱＯＬ
の改善にも大いに有益と考えられる。

【００４３】以下に、特に本発明の免疫調整剤をシスチ
ン誘導体について免疫抑制剤として使用する場合につい
て詳細に説明する。還元型グルタチオン量を減少させる
作用を有する物質については前記の通りであるが、シス
チン誘導体としては、Ｎ，Ｎ’−ジアセチルシスチン、
（(NAC)₂）、Ｎ，Ｎ’−ジプロピルシスチン（(NP
C)₂）、Ｎ，Ｎ’−ジアセチルシスチンジメチルエステ
ル（(NAC-OMe)₂）、Ｎ，Ｎ’−ジアセチルシスチンジイ
ソプロピルエステル(（NAC-OiPr）₂）、Ｎ，Ｎ’−ジ−
Ｌ−アラニルシスチンジメチルエステル（(NAlaC-OM
e)₂）等、前記構造式（１）に示され、マクロファージ
細胞内の還元型グルタチオン量を減少させる作用を有す
る化合物であれば全て本発明に使用するシスチン誘導体
に含まれる。

【００４４】この化合物の骨子としては、ジスルフイド
結合によりマクロフアージ細胞内の還元型グルタチオン
が酸化されて酸化型マクロフアージに誘導されるもので
あれば、Ｒ¹−Ｒ⁴を表す置換基には、広範な範囲のもの
が許容される。例えば、Ｒ¹及びＲ²はそれぞれ独立して
いて、炭素数１−１２のアルキル基を、Ｒ³及びＲ⁴はそ
れぞれ独立していて、炭素数１−１２のアシル基及び炭
素数１−１２のペプチジル基の何れかを、それぞれ表
す。尚、ペプチジル基は式：ＲＮＨＣＯ−で示される置
換基（Ｒは有機基を表す。）である。

【００４５】これらの薬剤は単独若しくはそれらの混合
物として用いることができる。その効果は摂取若しくは
投与後炎症局所や末梢血から単核球を採取し、前述の方
法で細胞内還元型グルタチオン量の治療前に対する変化
を検定し、生体の免疫活性の変動を測定することで判定
できる。このことで、特に免疫抑制剤としての有用性は
明確に判定され、疾患に対して効果を有する。

【００４６】投与形態としては、注射投与、経口投与等
特に制限はないが、経口投与可能ということで有利であ
る。有効成分である還元型グルタチオン量を変化させる
作用を有する物質の投与量は、患者等投与対象者の症状
や使用目的に応じて選択されるが、重症患者で例えば末
期胃癌患者の場合１日当たり１ｍｇ〜５０００ｍｇ（経
口剤）程度、好ましくは１０〜５００ｍｇ程度である。
製剤を製造する場合は特に困難はなく、経口剤、注射
剤、経皮剤等所望の剤型において、それぞれ公知の方法
を利用して製造することができる。

【００４７】以上、本発明になる免疫調整剤が狭義の医
薬品として如何に有用で、新規性に優れるかを説明し
た。本発明による免疫調整剤は経口摂取可能な物質をそ
の主要成分とするため、その用途は、医療現場における
医薬品に限られない。即ち、ヒトマクロファージ（単
球、クップファー細胞及び樹状細胞等を含む。）細胞内
の還元型グルタチオン量を変化させる作用を有する物質
を単独若しくは混合物として含有する医療用食品、健康
食品、特定保健食品等として食品（チューインガムや歯
磨き等の口に入れるものは全て含まれる。）並びに栄養
剤、輸液製剤の形態で提供することも可能で有り、本発
明に含まれる。液体成分に含有させることも、固形の食
品の形をとることも可能である。

【００４８】対象としては医薬品として提供する場合と
同じである。癌患者の悪液質状態の改善、糖尿病、消化
管炎症、慢性関節リウマチ、肝炎／肝硬変、炎症性腸疾
患（潰瘍性大腸炎、クローン病）を中心とする消化管炎
症、自己免疫性炎症性疾患、癌の化学予防等を対象薬効
として、免疫調整作用を有する食品並びに栄養剤、輸液
製剤の形態で提供することのできるものである。有効成
分の使用量については、前記医薬品の場合に説明した内
容に準じて行うとよい。発症、慢性化した疾患だけでな
く、成人病等のハイリスクの人に予防的に摂取させるこ
とを可能にする。

【００４９】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に
説明するが、これらは本発明の範囲を制限するものでは
ない。

【００５０】（実施例１） ＜酸化型マクロファージ及び還元型マクロファージの機
能の検定＞ （方法）酸化型マクロファージは、ＬＰＳ（リポポリサ
ッカライド）２０μｇをマウス腹腔内に投与して誘導さ
れること、還元型マクロファージはレンチナン１００μ
ｇを同じく腹腔内に１日おきに３回投与することにより
誘導されていることが、腹腔浸出細胞をプラスチック表
面に付着させた後、モノクロロバイメイン１０μＭと３
７℃、３０分間反応させ、ＡＣＡＳで解析することで判
明した。酸化型の増量は反応産物が殆ど認められないこ
と、即ちネズミ色や青色の画像になること、還元型の増
量は赤色や黄色の画像が得られることから肉眼的に容易
に検定できる。

【００５１】そこで、腹腔浸出付着細胞を以下のように
して酸化型及び還元型に誘導して産生されるＮＯ，ＩＬ
−６，ＰＧＥ２を測定した。 （１）材料 細胞：上記のように刺激して得られた腹腔浸出付着細
胞、即ちマクロファージを９６穴マイクロプレートに１
×１０⁵細胞／２００μｌ宛添加。 培地：フエノールレッドフリーのＲＰＭＩ１６４０：２
００μｌ／穴。 ＬＰＳ：リポポリサッカライド（シグマ社製）（由来：
Ｅ．ｃｏｌｉ）１００ｎｇ／ｍｌ。 ＩＦＮγ：１００単位／ｍｌ。 （２）培養方法 ５％ ＣＯ₂インキュベーター中３７℃で、４８時間培
養。 （３）測定方法 上記培養終了後、培養上清を回収し、ＩＬ−６はＩＬ−
６依存性の細胞株のＭＨ６０を用いて増殖反応で、ＰＧ
Ｅ２はエライザキットを用いて、ＮＯはグリースロイミ
ン試薬を用いて、何れも当該業者が日常に行う方法で各
々の産生量を測定した。

【００５２】（結果）結果を図３に示した。図３から明
らかなように、酸化型マクロファージと還元型マクロフ
ァージとでは、産生する炎症性サイトカインＩＬ−６、
炎症性メディエーターＰＧＥ２、ＮＯの産生強度、種類
が異なることが明らかである。即ち、酸化型マクロファ
ージではＴｈ２サイトカインであるＩＬ−６の産生と免
疫抑制性でＴｈ１誘導を抑制するＰＧＥ２産生が上昇
し、ＮＯ産生は低下する。これとは対照的に還元型マク
ロファージからはＮＯの産生が上昇し、ＰＧＥ２産生や
ＩＬ−６産生は抑制される。両マクロファージの間に機
能的な差異が存在することが明確である。

【００５３】（実施例２） ＜遺伝子をノックアウトして免疫不全状態にした病態動
物を用いた検定＞酸化型Ｍφと還元型Ｍφにおいて、何
故炎症メディエーターやサイトカインの産生に違いが生
じるのかを物質レベルで解析することは、炎症の慢性
化、増悪のメカニズムを解明するために重要である。一
般に、外からの刺激（リガンド等）は、細胞表面上に存
在する受容体（レセプター）を介して細胞内に伝達す
る。レセプターからの信号により、種々のキナーゼが活
性化され、更に転写因子が活性化され、転写因子が核内
に移行し、標的となる遺伝子に結合して発現する。最近
の研究により、細胞内の酸化還元系は、転写因子の活性
化、核内への移行、遺伝子との結合に関与していること
が明らかとなりつつある（ANNUAL REV. IMMUNOLOGY,
VOL.8, PP453-475,1990, EMBO J.,10,2247-2251,
1991))。Ｍφにおけるレセプターを介した遺伝子発現
系に、細胞内の酸化還元系がどのように関与しているか
は現在のところ明らかではない。明らかにする一つの手
段として、レセプターからの信号伝達系に関与する分子
を欠損しているノックアウトマウスよりＭφを調製し、
酸化還元系の機能を解析した。具体的には、ＩＬ−２、
ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９及びＩＬ−１５のレセプ
ター構成分子として共通に用いられているｃｏｍｍｏｎ
γ鎖（γｃ）及びその下流に存在し、γｃからの信号を
伝達する分子であるＪａｋ３を標的分子とした。

【００５４】（サイトカイン、刺激剤）マウスＩＦＮγ
には、ゲンザイム社製のリコンビナント体を用いた。ヒ
トＩＬ−２及びヒトＩＬ−６には、味の素社の作製した
リコンビナント体を用いた。ヒトＩＬ−１２には、ファ
ーミンジェン社製のリコンビナント体を用いた。ＬＰＳ
には、ディフコ社製のＥ．Ｃｏｌｉ．０５５；Ｂ５由来
のものを用いた。レンチナンとしては、味の素社で製造
した製剤品を用いた。

【００５５】（使用したマウス）γｃノックアウトマウ
スには、東北大医学部・菅村先生より、Ｊａｋ３ノック
アウトマウスには、千葉大医学部・斉藤先生よりそれぞ
れ導入したものを用いた。交配、及び対照として用いた
野生型マウスは、ＣＲＪより購入したＣ５７ＢＬ／６を
用いた。

【００５６】（腹腔Ｍφの採取）腹腔細胞の採取は、エ
ーテルにより犠牲死させたマウスの腹腔内に、氷冷した
５ｍｌのフェノールレッドフリーのＤＭＥＭ培地（日研
生物社製）を２２ゲージの針を付けた注射筒により注入
し、しごいた後、培地を抜き取ることにより行った。

【００５７】（ＩＬ−６の定量）１×１０⁶個のＭφに
刺激剤を添加し、３７℃のＣＯ₂インキュベーターにて
２日間培養した。遠心後培養上清を採取した。ＩＬ−６
の定量は、ＩＬ−６に依存的に増殖するマウスハイブリ
ドーマＭＨ６０細胞を用いて行った（J.EUR.IMMUNOL.,V
OL. 18, PP 951, 1988)。１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭ
Ｉ培地で１×１０⁵個／ｍｌに調製したＭＨ６０細胞液
１００μｌに、培養上清１００μｌを添加し、３７℃の
ＣＯ₂インキュベーターにて、２日間培養した。その
後、同培地にて５ｍｇ／ｍｌの濃度に調製したＭＴＴ
（シグマ社製）を１０μｌ加え、３７℃にて５時間反応
させた。反応終了後遠心し、上清を１６０μｌ取り除
き、塩酸−プロパノールを１００μｌ加えて、ピペット
マンで懸濁することにより細胞を溶解した。溶解後直ち
に５７０ｎｍの吸光度をイムノメーター（バイオラッド
社製）により測定した。

【００５８】（ＮＯ₂−濃度の測定）１×１０⁶個のＭφ
に刺激剤を添加し、３７℃のＣＯ₂インキュベーターに
て２日間培養した。遠心後培養上清を採取した。

【００５９】１００μｌの培養上清に、５０ｍｇ／ｍｌ
の濃度に蒸留水で調製したグリースロイミン試薬（和光
純薬社製）を１００μｌ加えて室温で１５分間反応させ
た。反応終了後、５４０ｎｍの吸光度を測定した。な
お、スタンダードとして、ＮａＮＯ₂を用いた。

【００６０】（ＡＣＡＳによる細胞内ＧＳＨの検出）Ｃ
ｈａｍｂｅｒｅｄ ｃｏｖｅｒｇｌａｓｓ（Ｎｕｎｃ社
製、＃１３６４３９）に、ＲＰＭＩ１６４０培地（フェ
ノールレッドフリー）にて調製した３×１０ ⁵個／ｍｌ
の細胞懸濁液を３００μｌ入れ、３７℃のＣＯ₂インキ
ュベーターにて２時間培養した。同培地にて洗浄後、同
培地にて調製した１０μＭの モノクロロバイメイン
（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｌｏｂｅ社製）を３００μｌ
添加し、３７℃のＣＯ₂インキュベーターに入れ、３０
分反応させた後、ＡＣＡＳにて蛍光強度を測定した。な
お、ＡＣＡＳではＵＶレーザーを用いた。

【００６１】（ＩＬ−１２の定量）ＩＬ−１２定量は、
ヒトＴ細胞株２Ｄ６細胞を用いたバイオアッセイで行っ
た(J.LEUKOCYTE BIOLOGY, VOL 61, PP346, 199
7))。

【００６２】５００ｐｇ／ｍｌのリコンビナントヒトＩ
Ｌ−１２、５０μＭの２−メルカプトエタノール、１０
％ＦＣＳ（牛胎児血清）を含むＲＰＭＩ１６４０培地に
て培養しておいた２Ｄ６細胞をチューブに移し、ＩＬ−
１２を除いた同培地にて３回遠心洗浄し、細胞濃度を１
×１０⁵／ｍｌに調製した。予め５０μＭの２−メルカ
プトエタノール、１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０
培地により系列希釈したサンプルを１００μｌづつ入れ
た９６穴平底プレートに、細胞懸濁液を１００μｌづつ
加えた。その後、３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーター
に入れ、４８時間培養した。最後の６時間で、3Ｈ−Ｔ
ｄＲをパルスした（５０μＭの２−メルカプトエタノー
ル、１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地により、
３７０ｋＢｑ／ｍｌに調製したものを５０μｌづつ添
加）。細胞をハーベストし、βカウンター（マトリック
ス９６；パッカード社製）で放射活性を測定した。

【００６３】（ノックアウトマウスより調製したＭφの
ＧＳＨ濃度の測定）それぞれのノックアウトマウスの腹
腔細胞を調製し、ＭＣＢ試薬を用いたＡＣＡＳにより、
細胞内ＧＳＨ量を解析した。対照のマウス（Ｃ５７ＢＬ
／６）に比べ、何れのマウスにおいても、還元型グルタ
チオンの量は著明に減少した。

【００６４】（ノックアウトマウスより調製したＭφの
機能）野生型マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）と、それぞれの
ノックアウトマウスより腹腔細胞を調製し、ＬＰＳ、Ｉ
Ｌ−２、ＩＦＮγ及びその組み合わせにより刺激し、Ｎ
Ｏ産生、ＩＬ−６産生及びＩＬ−１２産生能を測定し
た。ＮＯ産生に関しては、無刺激では何れのマウスでも
殆ど産生がみられないが、ＬＰＳとＩＦＮγ刺激の組み
合わせにおいて、γｃノックアウトマウスでは、ＩＬ−
２の併用添加効果が殆どみられず、対照マウスに比較し
てＮＯ産生は半分以下に低下した。Ｊａｋ３ノックアウ
トマウスについてもγｃと同様の結果であった。次に、
ＩＬ−６の産生能について解析した。ＬＰＳ刺激では、
γｃノックアウトマウスで亢進がみられ（対照８１ｐｇ
／ｍｌに対し９６２ｐｇ／ｍｌ）、ＩＦＮγ刺激では、
γｃノックアウトマウスで亢進がみられた。この結果
は、ＮＯ産生の抑制パターンと同様であった。次に、Ｌ
ＰＳ及びＩＦＮγ刺激によるＩＬ−１２産生能を検討し
た。しかし、何れのマウスにおいても産生は全くみられ
なかった。このことは、ここに用いた遺伝子ノックアウ
トマウス病態動物は酸化型マクロファージが増量しＴｈ
２主流の液性免疫やアレルギー反応が亢進し、Ｔｈ１に
よって担われる細胞性免疫が低下していることを示す。
病態動物モデルにおいても本発明の免疫調整剤に必要な
免疫系疾患の病態診断が独創的で、有意義であることを
明確に示す例である。

【００６５】（実施例３） ＜担癌末期マウスにおける還元型グルタチオン測定によ
る検定＞ （方法）担癌末期マウス（ＣＯＬＯＮ２６）及び正常マ
ウスの腹腔から採取したマクロファージの酸化型及び還
元型の検定を行った。癌悪液質の産生がよく知られてい
るＣＯＬＯＮ２６移植腫瘍をＣＤＦ１マウスの背部皮下
に５×１０⁵個／個体移植し、腫瘍移植後２１日目にな
って悪液質状態となり、治療に抵抗性となった状態のマ
ウスに生理食塩水５ｍｌを腹腔内注射し、腹腔内マクロ
ファージを採取し３×１０6個／ｍｌになるように１０
％牛胎児血清含有フエノールレッドフリーのＲＰＭＩ１
６４０培地に懸濁し、１００μｌ宛Ｌａｂ−ＴｅｋＣｈ
ａｍｂｅｒＳｌｉｄｅ（ＮＵＮＣ社製、＃１３６４３
９）に添加し、３７℃、５％ＣＯ2条件下、３時間培養
し、浮遊細胞を除去した後、血清非含有の上記培地を２
００μｌ添加し、次いでモノクロロバイメイン（ＭＯＮ
ＯＣＨＬＯＲＯＢＩＭＡＮＥ＝ＭＣＢ）を１０μＭにな
るように添加し、３０分間反応させ、ＡＣＡＳ装置（Ｍ
ＥＲＩＤＩＥＮ社製）にてＵＶ吸収を基に画像解析し
た。

【００６６】（結果）ＡＣＡＳ法により、還元型グルタ
チオンを定量した結果、正常マウスに比べ、担癌末期モ
デルマウスでは、還元型グルタチオン含量が減少したマ
クロファージ、即ち酸化型マクロファージが相対的に増
量した。酸化型マクロファージが増量しているため、上
記マクロファージ培養上清中のＩＬ−６が顕著に増量し
ていた（対照マウスの１２０ｐｇ／ｍｌに対して、６０
０ｐｇ／ｍｌ）。また、ＰＧＥ２量も対照の７．６ｎｇ
／ｍｌに対して３２ｎｇ／ｍｌと５倍以上に増量してお
り、坦癌末期の免疫抑制状態や、悪液質状態がこれらメ
デイエーターの過剰産生に基づくことが判明した。他に
活性酸素産生の増量も認められた。数多くのパラメータ
ーを測定しなくてもマクロファージの酸化還元状態をグ
ルタチオンの含量を測定することで癌患者の病態、免疫
機能診断等のための検定を簡便且つ的確に行うことがで
きることを示す。このこのことにより、本発明の免疫調
整剤の使用に当たり、以上のマクロファージ分類方法に
より、癌患者の病態、免疫機能診断等のための検定を行
うことができる。

【００６７】（実施例４） ＜担癌末期マウスにおけるグルタチオンエチルエステル
の経口投与による還元型マクロファージの誘導＞ＣＯＬ
ＯＮ２６移植腫瘍をＣＤＦ１マウスの背部皮下に５×１
０⁵個／個体移植し、腫瘍移植後２１日目になって悪液
質状態となったマウスに、毎日１ｍｇ／０．５ｍｌ／ｈ
のグルタチオンエチルエステルをゾンデを用いて１０日
間経口投与した。そのマウスより実施例３と同様の方法
で腹腔内細胞を採取し、腹腔内マクロファージを採取し
３×１０⁶個／ｍｌになるように１０％牛胎児血清含有
フエノールレッドフリーのＲＰＭＩ１６４０培地に懸濁
し、１００μｌ宛Ｌａｂ−ＴｅｋＣｈａｍｂｅｒ Ｓｌ
ｉｄｅ（ＮＵＮＣ社製、＃１３６４３９）に添加し、３
７℃、５％ＣＯ₂条件下、３時間培養し、浮遊細胞を除
去した後、血清非含有の上記培地を２００μｌ添加し、
次いでモノクロロバイメインを１０μＭになるように添
加し、３０分間反応させ、ＡＣＡＳ装置（ＭＥＲＩＤＩ
ＥＮ社製）にてＵＶ吸収を基に画像解析した。

【００６８】（結果）ＡＣＡＳ法により、還元型グルタ
チオンを定量した結果、対照生理食塩水投与群マウスに
比べ、グルタチオンエチルエステル投与の担癌末期モデ
ルマウスでは、還元型グルタチオン含量が減少したマク
ロファージ、即ち酸化型マクロファージが相対的に減量
した。還元型マクロファージが増量しているため、上記
マクロファージ培養上清中のＩＬ−６が顕著に減量して
いた（対照マウスの５２００ｐｇ／ｍｌに対して、６４
２ｐｇ／ｍｌ）。また、ＰＧＥ２量も対照の３２ｎｇ／
ｍｌに対して６．５ｎｇ／ｍｌと著明に減量しており、
坦癌末期の免疫抑制状態や、悪液質状態がグルタチオン
エチルエステルの経口投与で改善できることが判明し
た。これに応じて、両群のマウスの平均生存日数は、対
照の４２日から１４８日に延長した。

【００６９】（実施例５） ＜ザルコイドーシス疾患患者から採取したマクロファー
ジの検定とその酸化状態の還元状態への変換＞ザルコイ
ドーシス（類肉腫症）の疾患の患者の末梢血及び胸腔内
より常法により分離・採取した単核球中に含まれるマク
ロファージの酸化型及び還元型マクロファージの量を酵
素リサイクリング法により、還元型グルタチオン（ＧＳ
Ｈ）及び酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）の量を生化学
的に測定することにより検定を行った。対照としては健
常人の末梢血を用いた。

【００７０】（材料）健常人の末梢血及びザルコイドー
シス患者の末梢血をヘパリン採血或は患者の気管支に経
気管支鏡（ＢＲＯＮＣＨＯＦＩＢＥＲ）的に１５０ｍｌ
の生理食塩水を注入し、７５ｍｌを回収して、何れもフ
ィコールーハイペーク（ＬＹＭＰＨＯＰＲＥＰ）で分離
精製した単核球を１０％牛胎児血清含有ＲＰＭＩ１６４
０倍地に懸濁し、３回洗浄後、ガラスシヤーレに３０分
間付着させたマクロファージ／単球画分を用いた。この
後、５ｍＭのＮーアセチルシステイン（ＮＡＣ）を添加
して３時間培養する群及び培地成分のみの群を調製し
た。シャーレからの分離にはラバーポリースマンを用い
た。５×１０⁶個のマクロファージについて以下のよう
に検定を実施した。

【００７１】（方法）還元型と酸化型のグルタチオンの
測定は前述の酵素リサイクリング法によった。

【００７２】（サンプル調製）ＰＢＳにて洗浄した細胞
のペレットに、冷やした５ｍＭＥＤＴＡを含む０．１Ｍ
リン酸バッファー、ｐＨ７．５により調製したＴｒｉｔ
ｏｎＸ−１００を１００μｌ添加し、５分間室温に放置
して細胞を溶解した。０．１ＭのＨＣｌを１５μｌ添加
し、更に５０％ ｓｕｌｆｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃ
ｉｄ（ＳＳＡ）溶液を１５μｌ添加して混合後、１２，
０００ｒｐｍで５分間遠心して上清を採取し［＊］、総
グルタチオン濃度（ＧＳＨ＋ＧＳＳＧ）の測定サンプル
とした。

【００７３】（測定法）０．５ｍＭＥＤＴＡを含む１０
ｍＭリン酸バッファー、ｐＨ７．５を５９０μｌ、６ｕ
／ｍｌの濃度に同バッファーで調製したグルタチオンリ
ダクターゼ（ベーリンガーマンハイム社製）を１００μ
ｌ、５％ＮａＨＣＯ₃にて調製した４ｍＭのＮＡＤＰＨ
（シグマ社製）を５０μｌ、サンプルを１０μｌ加え
て、３７℃にて５分間インキュベートし、５ｍＭＥＤＴ
Ａを含む０．１Ｍリン酸バッファー、ｐＨ７．５により
調製した１０ｍＭの５，５’−ｄｉｔｈｉｏ−ｂｉｓ
（２−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ）（ＤＴＮ
Ｂ；シグマ社製）溶液を５０μｌ加えて、３７℃におけ
る４１２ｎｍの吸光度の経時的変化を分光光度計により
測定した。なお、標準サンプルとして、ＧＳＨ（シグマ
社製）をサンプルと同じ調製法で調製して用いた。別
途、酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）量のみを測定し−
−上記＊印の後に、２μｌの２ービニルピリジン（東京
化成社製）を添加し、室温で１分間混和しｐＨを７．５
に調製後、室温に６０分間放置し、測定サンプルとし、
同様に測定する−−総グルタチオン量より差し引くこと
で還元型グルタチオン（ＧＳＨ）量を求めた。

【００７４】（結果）患者の末梢血中の還元型と酸化型
グルタチオンの量はＧＳＳＧ ５．２９μＭ、ＧＳＨ
２０．４５μＭと還元型ＧＳＨが還元型が約８０％で、
依然として優位であるが（健常人においては９０％以上
が還元型ＧＳＨである）、胸腔内マクロファージでは還
元型ＧＳＨが１．４５μＭであり、酸化型ＧＳＳＧが１
５．８５μＭと酸化型が約８６％とその存在比が完全に
逆転することが判明した。ＮＡＣ添加群においては、還
元型ＧＳＨが２０．４５μＭであり、酸化型ＧＳＳＧが
４．３２μＭと酸化型が急激に減少し、還元型の比率が
８０％を越え、末梢血レベルに回復した。このことは、
本疾患において酸化型マクロファージが病態形成に大き
な位置を占めること、その病態がＮＡＣ投与で改善でき
ることを示し、本発明の有用性が明らかである。

【００７５】（実施例６） ＜ＮＡＣ、ＧＳＨ−ＯＥｔ経口投与による還元型マクフ
アージの誘導＞レセプターからの信号伝達系に関与する
分子を欠損しているノックアウトマウスよりＭφを調製
し、酸化還元系の機能を解析した。具体的には、ＩＬ−
２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９及びＩＬ−１５のレ
セプター構成分子として共通に用いられているｃｏｍｍ
ｏｎγ鎖（γｃ）及びその下流に存在し、γｃからの信
号を伝達する分子であるＪａｋ３を標的分子とした。実
施例２と同様の方法で実施した。ＪＡＫ３ノックアウト
マウスを３群に分類し対照群としては通常の水道水の自
由摂取群、ＮＡＣ群としては１ｍｇ／ｍｌのＮＡＣを溶
解した水道水の自由摂取群、ＧＳＨ−ＯＥｔ群としては
１ｍｇ／ｍｌのＧＳＨ−ＯＥｔを溶解した水道水の自由
摂取群とし、ＳＰＦ条件下での飼育を２４日間継続し、
そこで腹腔浸出付着細胞、即ちマクロファージを同様に
得た。

【００７６】（サイトカイン、刺激剤）マウスＩＦＮγ
には、ゲンザイム社製のリコンビナント体を用いた。ヒ
トＩＬ−２及びヒトＩＬ−６には、味の素社の作製した
リコンビナント体を用いた。ヒトＩＬ−１２には、ファ
ーミンジェン社製のリコンビナント体を用いた。

【００７７】ＬＰＳには、ディフコ社製のＥ．Ｃｏｌ
ｉ．０５５；Ｂ５由来のものを用いた。レンチナンとし
ては、味の素社で製造した製剤品を用いた。 （ＩＬ−６の定量） （ＮＯ₂−濃度の測定） （ＡＣＡＳによる細胞内ＧＳＨの検出） （ＩＬ−１２の定量）これらは全て実施例２に準じて実
施された。

【００７８】（ノックアウトマウスより調製したＭφの
ＧＳＨ濃度の測定）それぞれの処置を受けたノックアウ
トマウスの腹腔細胞を調製し、ＭＣＢ試薬を用いたＡＣ
ＡＳにより、細胞内ＧＳＨ量を解析した。対照のマウス
（水道水自由飲水群）に比べ、ＮＡＣ、ＧＳＨ−ＯＥｔ
溶解水道水自由飲水群の何れのマウスにおいても、還元
型グルタチオンの量は著明に増加し、正常マウスにＮＡ
Ｃ腹腔内投与で誘導される還元型Ｍφの画像を示した。

【００７９】（ノックアウトマウス処置の各群より調製
したＭφの機能）３群、それぞれのノックアウトマウス
より腹腔細胞を調製し、ＬＰＳ、ＩＬ−２、ＩＦＮγ及
びその組み合わせにより刺激し、ＮＯ産生、ＩＬ−６産
生及びＩＬ−１２産生能を測定した。ＮＯ産生に関して
は、無刺激では何れのマウスでも殆ど産生がみられな
い。次に、ＩＬ−６の産生能について解析した。ＬＰＳ
刺激では、ノックアウトマウスで９６２ｐｇ／ｍｌ、Ｎ
ＡＣ群で１２２ｐｇ／ｍｌ、ＧＳＨ−ＯＥｔ群で８２ｐ
ｇ／ｍｌとなり、還元型に変換できることが機能面から
も確認された。ＩＬ−６がＴｈ２を誘導する主たるサイ
トカインであることを考えると、これらの物質の経口摂
取で生体のＴｈ１／Ｔｈ２バランスを制御できることを
明確に示す。この結果は、ＮＯ産生の抑制と薬物による
回復パターンと逆相関した。次に、ＬＰＳ及びＩＦＮγ
刺激によるＩＬ−１２産生能を検討した。対照群におい
ては産生は全くみられなかった。このことは、ここに用
いたＪＡＫ３遺伝子ノックアウトマウス病態動物は酸化
型マクロファージが増量しＴｈ２主流の液性免疫やアレ
ルギー反応が亢進し、Ｔｈ１によって担われる細胞性免
疫が低下していることを示す。一方、ＮＡＣ、ＧＳＨ−
ＯＥｔ投与群では各々、４２０ｐｇ／ｍｌ、６１０ｐｇ
／ｍｌのＩＬ−１２産生が認められた。病態動物モデル
においても本発明が免疫系疾患の病態改善に有用な免疫
調整剤として独創的で、有意義であることを明確に示す
例である。

【００８０】（実施例７） ＜還元型、酸化型マクロファージからのＩＬ−１２産生
の差異＞Ｔ細胞の分化過程、選択過程、機能発現過程に
異常があると、生体の免疫系が破綻することから、免疫
系の中心的役割は、Ｔ細胞により担われていると考えら
れる。Ｔ細胞の亜集団の一つであるヘルパーＴ細胞（Ｔ
ｈ）は、リンホカインを産生することにより、免疫担当
細胞や炎症性細胞を制御している細胞であるが、最近、
Ｔｈは、産生するリンホカインの種類により、更にＴｈ
１とＴｈ２の２種類に分けられ、それぞれが異なった免
疫機能を担っているという考えが提唱されている（J.
IMMUNOL., VOL. 136, PP 2348. 1986)。即ち、Ｔ
ｈ１は、ＩＬ−２やＩＦＮγを産生し、細胞性免疫の調
節の主体であり、Ｔｈ２はＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−
６やＩＬ−１０を産生し、液性免疫の調節の主体であ
り、生体内の免疫調節の恒常性は、Ｔｈ１とＴｈ２のバ
ランスにより保たれているとする考えである。通常は、
Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスがどちらかに傾くと、それを是
正することにより恒常性が維持されるが、何らかの原因
によりバランスが是正されない状態が持続すると免疫病
が発症すると考えられている。Ｔｈ１とＴｈ２は、Ｔｈ
０という段階からそれぞれに分化するが、Ｔｈ０からＴ
ｈ１への分化にはＭφの産生するＩＬ−１２が重要であ
り(IMMUNOLOGY TODAY, VOL.335, PP 14, 1993)、
Ｔｈ０からＴｈ２への分化にはＮＫＴ細胞が産生するＩ
Ｌ−４が重要である(J. EXP. MEDICINE, VOL.179,
PP 1285, 1994)。

【００８１】前述の実施例でＭφのレドックス状態の相
違によりＭφ機能が異なることが明らかである。Ｍφに
は、ＧＳＨ量の相違から酸化型Ｍφと還元型Ｍφの２種
類のＭφが存在し、ＮＯやＩＬ−６産生パターンが異な
る。Ｔｈ０からＴｈ１への分化を誘導し、Ｔｈ１／Ｔｈ
２バランス制御の鍵の分子であるＩＬ−１２の主な産生
細胞はＭφと考えられるが、その詳細な解析はこれまで
報告されていない。ＩＬ−１２の産生は、酸化型Ｍφと
還元型Ｍφで異なるのか否かは、免疫病の発症メカニズ
ムの観点からも興味深い点である。本発明者等は、ＩＬ
−１２が還元型Ｍφからのみ産生することを見いだすと
ともに、ＩＬ−１２と同じくＴｈ１／Ｔｈ２バランス制
御を行っていると考えられているＩＬ−４が、酸化型Ｍ
φ、還元型Ｍφに作用し、Ｔｈ２側へシフトさせている
こと見出した。本発明の完成に先立って得られた知見を
基に、Ｍφのレドックス状態が、Ｔｈ１／Ｔｈ２バラン
スを制御していることを示し、本発明を使用する上で免
疫系疾患の病態診断に如何に有用かを説明する。

【００８２】（ＩＬ−１２は還元型Ｍφから産生され
る）実施例１において、レンチナン（ＬＮＴ）を腹腔内
注射して調製したＭφは、ＧＳＨ量の高い還元型であ
り、ＬＰＳを腹腔内注射して調製したＭφは、ＧＳＨ量
の低い酸化型であることを示した。ＬＮＴ誘導ＭφとＬ
ＰＳ誘導Ｍφにおいて、ＩＬ−１２産生能が異なるか否
かを検討した。ＬＰＳとＩＦＮγの刺激により、ＬＮＴ
誘導Ｍφでは著明なＩＬ−１２産生（１３１２ｐｇ／ｍ
ｌ）がみられたが、ＬＰＳ誘導Ｍφ及び対照のレジデン
トＭφでは産生がみられなかった（図４）。次に、細胞
内ＧＳＨ量を変化させる物質を腹腔内注射して調製した
Ｍφを用いて同様の解析を行った。細胞内ＧＳＨ量を増
加させる物質であるＧＳＨ−ＯＥｔ、低下させる物質で
あるＤＥＭをそれぞれ投与し調製したＭφでは、ＧＳＨ
−ＯＥｔ投与マウス由来Ｍφでのみ、ＬＰＳとＩＦＮγ
刺激によりＩＬ−１２が産生された（３５７０ｐｇ／ｍ
ｌ）。これらの結果は、細胞内のＧＳＨ量の多い還元型
Ｍφでのみ、ＩＬ−１２が産生されることを示す。

【００８３】（還元型ＭφからのＩＬ−１２産生は、細
胞内ＧＳＨ量を低下させることにより抑制される）細胞
内のＧＳＨ量の多い還元型Ｍφでのみ、ＩＬ−１２が産
生されることを示したが、この産生は、Ｍφを酸化型に
することにより抑制されるか否かを検討した。即ち、レ
ンチナン誘導Ｍφを、ＤＥＭ刺激することにより、ＩＬ
−１２の産生が抑制されるかを解析した。その結果、レ
ンチナン誘導ＭφからのＩＬ−１２産生（８２８ｐｇ／
ｍｌ）は、ＤＥＭを添加することにより、完全に抑制さ
れる（０ｐｇ／ｍｌ）ことが明らかとなった。即ち、Ｄ
ＥＭ処理により細胞内の還元型グルタチオンを枯渇さ
せ、還元型Ｍφを酸化型Ｍφへと変換することにより、
ＩＬ−１２産生は抑制されることが示唆された。

【００８４】（ＩＬ−４は、還元型ＭφからのＩＬ−１
２産生を抑制する）ＩＬ−４は、Ｍφに作用し、抑制的
に働くとされているサイトカインである。ＩＬ−４は、
Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの制御においても、ＩＬ−１２
と相対する作用を有していると考えられている。そこ
で、ＩＬ−４が、還元型ＭφからのＩＬ−１２産生に対
し、抑制的に作用するか否かを検討した。ＬＮＴ誘導Ｍ
φからのＩＬ−１２産生及びＧＳＨ投与マウス由来Ｍφ
からのＩＬ−１２産生ともに、ＩＬ−４で前処理するこ
とによりは著明に抑制することが明らかとなった（各々
１５８０ｐｇ／ｍｌより３７０ｐｇ／ｍｌへ、４９０ｐ
ｇ／ｍｌより２５８ｐｇ／ｍｌへ）。即ち、ＩＬ−４は
Ｍφに作用し、ＩＬ−１２産生を抑制することにより、
Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスをＴｈ２側にシフトしている可
能性が示唆された。この際、ＩＬ−４はＭφ中の還元型
グルタチオン量を著明に減少させることがＡＣＡＳによ
る画像解析で判明した。

【００８５】（ＩＬ−４は、ＮＯ産生を抑制し、ＩＬ−
６産生を亢進する）還元型Ｍφは、酸化型Ｍφに比較し
てＩＦＮγ刺激でのＮＯ産生が亢進し、逆にＩＬ−６産
生は抑制される。ＩＦＮγは、Ｔｈ１細胞から産生され
るサイトカインとして知られており、ＩＬ−４がＩＦＮ
γによるＮＯ産生及びＩＬ−６産生に対し、どのような
作用を示すか、それぞれのＭφを用いて解析した。ＩＬ
−４で前処理したＭφ（レジデント、ＬＰＳ誘導、ＬＮ
Ｔ誘導）にＩＦＮγを作用させ、ＮＯ産生量を測定した
ところ、ＩＬ−４で処理していないＭφに比較して、Ｉ
Ｌ−４処理したＭφからのＮＯ産生は有意に抑制され
た。また、ＧＳＨ−ＯＥｔ刺激により細胞内ＧＳＨ量を
増加させたＭφ及びＤＥＭ刺激により細胞内ＧＳＨ量を
低下させたＭφをＩＬ−４で前処理後、ＩＦＮγとＬＰ
Ｓを作用させてＮＯ産生量を測定したところ、ＩＬ−４
未処理に比較して、著明にＮＯ産生が抑制された。

【００８６】一方、ＩＬ−６産生は、レジデントＭφ、
ＬＰＳ誘導Ｍφ、ＬＮＴ誘導Ｍφ何れともＩＬ−４によ
り前処理することにより、ＩＦＮγでの産生が著しく亢
進した。更に、ＧＳＨ−ＯＥｔ刺激により細胞内ＧＳＨ
量を増加させたＭφ及びＤＥＭ刺激により細胞内ＧＳＨ
量を低下させたＭφをＩＬ−４で前処理後、ＩＦＮγを
作用させてＩＬ−６産生量を測定したところ、ＩＬ−４
未処理に比較して、著明にＩＬ−６産生が亢進された。
これらの結果より、ＩＬ−４は、細胞内還元型グルタチ
オン量を減少させることにより、酸化型マクロファージ
を誘導し、ＩＦＮγ刺激によるＮＯ産生を抑制し、ＩＬ
−６産生を亢進することが明らかとなった。このこと
は、ＩＬ−４はＩＦＮγの作用、即ちＴｈ１型の作用と
考えられるＮＯ産生を抑制し、本来ＩＦＮγは弱い作用
であったＩＬ−６産生誘導を亢進させ、Ｔｈ２型の作用
を増強させる活性を有していることを示すものである。
本知見は本発明になる免疫調整剤の有用性を科学的に証
明するものである。

【００８７】（実施例８） ＜経口摂取ＮＡＣとＩＬ−２の併用によるＩＬ−１２産
生の増強＞ＤＢＡ／２♀の８週令のマウスに実施例６同
様の方法で水道水を自由飲水させる群とＮＡＣ１ｍｇ／
ｍｌ濃度の水道水を自由飲水させる２群を作り、更に各
々の群にヒトリコンビナントＩＬ−２：２μｇ／０．５
ｍｌ／ｈを１日２回隔日に２週間腹腔内投与を併用する
群を設定した。１４日目に実施例６同様にＭφからのＩ
Ｌ−１２産生量を検定した。

【００８８】（調製したＭφのＧＳＨ濃度の測定）それ
ぞれの処置を受けたマウスの腹腔細胞を調製し、ＭＣＢ
試薬を用いたＡＣＡＳにより、細胞内ＧＳＨ量を解析し
た。対照のマウス（水道水自由飲水群）に比べ、ＮＡＣ
溶解水道水自由飲水群及びＩＬ−２投与群において、還
元型グルタチオンの量は著明に増加し、還元型Ｍφの画
像を示した。ＮＡＣ溶解水道水自由飲水にＩＬ−２投与
を併用する群においては何れの単独群よりも還元型グル
タチオンの量は更に増加し、還元型Ｍφの誘導における
併用効果がＡＣＡＳ画像解析で明瞭に認められた。併用
群では、全てのＭφ中に還元型グルタチオンの量の増如
が認められた（単独処置群の増量が４０−５０％のＭφ
に認められることと対照的で有る）。

【００８９】（各群より調製したＭφの機能）４群、そ
れぞれのマウスより腹腔細胞を調製し、ＬＰＳ＋ＩＦＮ
γにより刺激し、ＮＯ産生、ＩＬ−６産生、及びＩＬ−
１２産生能を測定した。単独投与、併用群の３群何れも
対照群に対して還元型マクロファージが増量しているた
め、上記マクロファージ培養上清中のＩＬ−６量が減少
した（対照マウスの１２４０ｐｇ／ｍｌに対して、ＮＡ
Ｃ溶解水道水自由飲水群３２０ｐｇ／ｍｌ、 ＩＬ−２
投与群５２０ｐｇ／ｍｌ、ＮＡＣ溶解水道水自由飲水に
ＩＬ−２投与を併用する群６７ｐｇ／ｍｌ）。ＩＬ−６
がＴｈ２を誘導する主たるサイトカインであること考え
ると、これらのＮＡＣ経口摂取にＩＬ−２なるサイトカ
インの注射による併用で生体のＴｈ１／Ｔｈ２バランス
がより強力に制御できることを明確に示す。ＮＯ産生の
増強パターンはＩＬ−６産生と逆相関した。ＩＬ−１２
産生については、対照マウスの０ｐｇ／ｍｌに対して、
ＮＡＣ溶解水道水自由飲水群６２０ｐｇ／ｍｌ、 ＩＬ
−２投与群９４６ｐｇ／ｍｌ、ＮＡＣ溶解水道水自由飲
水にＩＬ−２投与を併用する群２３８６ｐｇ／ｍｌと著
明な併用効果が認められた。本発明が、サイトカイン類
との併用で、免疫系疾患の著しい病態改善に有益な免疫
調整剤として独創的で、有意義であること示す。

【００９０】（実施例９） ＜(NAC-OMe)₂、(NAC)₂投与による酸化型マクロファージ
の誘導＞酸化型マクロファージは (NAC-OMe)₂若しくは
(NAC)2 ２０μｇ／0.5ml／hをd１、d２にマウス腹腔内
に投与して誘導されること、還元型マクロファージは N
AC 2 mｇ／0.5ml／hを同じく腹腔内にd１、d２投与す
ることにより誘導されていることが、投与終了後20時間
後に腹腔浸出細胞を採取し、プラスチック表面に付着さ
せた後、モノクロロバイメイン１０μＭと３７℃、３０
分間反応させ、ＡＣＡＳで解析することで判明した。酸
化型の増量はモノクロロバイメインとの反応産物が殆ど
認められないこと、即ちネズミ色や青色の画像になるこ
と、還元型の増量は赤色や黄色の画像が得られることか
ら肉眼的に容易に検定できる。免疫抑制作用の良く知ら
れるステロイド剤の代表であるデキサメサゾン40 μｇ
／0.1ml／hを マウス背部皮下にd１、d２に投与して20
時間後に誘導されるマクロファージは殆どネズミ色の画
像になること、即ち酸化型マクロファージが強力に誘導
されることが判明した。一方、N-アセチルシステイン
（NAC）2mg投与後20時間目の腹腔浸出細胞を採取して同
様に検定したところ赤色や黄色の画像が得られ還元型マ
クロファージが誘導されることが確認された。

【００９１】＜(NAC-OMe)₂、(NAC)₂ 投与によって誘導
されたマクロフアージからのNO,IL-6産生＞そこで、腹
腔浸出付着細胞を以下のように培養し、培養上清に産生
されるNO,IL-12を測定した。IL-6産生量は刺激剤不在下
の自発産生量を測定した。

【００９２】（１）材料 細胞：上記のように刺激して得られた腹腔浸出付着細胞
即ちマクロフアージを９６穴マイクロプレートに１Ｘ１
０⁵細胞／２００μｌ宛添加 培地：フエノールレッドフリーのRPMI1640 ２００μｌ
／穴 ＬＰＳ：リポポリサッカライド（シグマ社製）（由来：
E.coli）１００ｎｇ／ｍｌ ＩＦＮγ：１００単位／ｍｌ

【００９３】（２）測定方法 （腹腔Ｍφの採取）腹腔細胞の採取は、エーテルにより
犠牲死させたマウスの腹腔内に、氷冷した５ｍｌのフェ
ノールレッドフリーのＤＭＥＭ培地（日研生物社製）を
２２ゲージの針をつけた注射筒により注入し、しごいた
後、培地を抜き取ることにより行った。 （ＩＬ−６の定量）実施例２の場合と同様に定量した。 (ＮＯ₂−濃度の測定)実施例２の場合と同様に測定し
た。 (ＡＣＡＳによる細胞内ＧＳＨの検出)実施例２の場合と
同様に検出した。 (ＩＬ−１２の定量)実施例２の場合と同様に定量した。 （結果）マクロフアージからのNO、IL-6、IL-12産生の
抑制効果についての結果を表１に示す。

【００９４】表１

【００９５】表１から明らかなように、(NAC-OMe)₂、(N
AC)₂投与により誘導された酸化型マクロファージでは、
産生される炎症性サイトカインIL-6、NO、IL-12の産生
量が変動することが明らかである。即ち、薬剤投与で得
られた酸化型マクロファージではIL-6の産生は増強さ
れ、臓器障害性に働くNO産生も細胞性免疫を増強するIL
-12産生も低下する。この効果は典型的免疫抑制剤であ
るステロイドのデキサメサゾンより強いか同等である。
これと対照的にN-アセチルシステイン（NAC）により誘
導される還元型マクロファージからはNOの産生、IL-12
の産生が上昇し、IL-6産生は抑制される。

【００９６】（実施例１０） ＜卵白アルブミン抗原に対する遅延型過敏症反応の抑制
効果＞(NAC-OMe)₂、(NAC)₂、NAC、デキサメサゾンを実
施例９と同様にd１からd５まで連日投与、抗原として卵
白アルブミンとコンプリートH３７Raアジュバント(DIFC
O)１：１懸濁液１００μl（含む２５０μg卵白アルブミ
ン）を感作抗原としてd２に背部皮下に投与、惹起抗原
としてd８に左耳に皮下投与し２４時間の左耳の腫脹厚
を右耳と比較した。

【００９７】卵白アルブミン抗原に対する遅延型過敏症
反応の抑制効果についての結果は表２に示す通りであ
り、(NAC-OMe)₂、(NAC)₂投与によって卵白アルブミン抗
原に対する遅延型過敏症反応は著明に抑制された。この
ことはこれらの物質の投与により細胞性免疫が抑制され
たことを示す。

【００９８】表２

【００９９】（実施例１１） ＜遺伝子をノックアウトしてマクロフアージを酸化状態
にした動物のマクロフアージの機能＞酸化型Ｍφと還元
型Ｍφにおいて、何故炎症メディエーターやサイトカイ
ンの産生に違いが生じるのかを物質レベルで解析するこ
とは、炎症の慢性化、増悪のメカニズムを解明するため
に重要である。一般に、外からの刺激（リガンド等）
は、細胞表面上に存在する受容体（レセプター）を介し
て細胞内に伝達する。レセプターからの信号により、種
々のキナーゼが活性化され、更に転写因子が活性化さ
れ、転写因子が核内に移行し、標的となる遺伝子に結合
して発現する。最近の研究により、細胞内の酸化還元系
は、転写因子の活性化、核内への移行、遺伝子との結合
に関与していることが明らかとなりつつある（ANNUAL R
EV. IMMUNOLOGY, VOL.8, PP453-475,1990； EMBO J.,1
0,2247-2251, 1991等参照。）。Ｍφにおけるレセプタ
ーを介した遺伝子発現系に、細胞内の酸化還元系がどの
ように関与しているかは現在のところ明らかではない。
明らかにする一つの手段として、レセプターからの信号
伝達系に関与する分子を欠損しているノックアウトマウ
スよりＭφを調製し、酸化還元系の機能を解析した。具
体的には、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、
及びＩＬ−１５のレセプター構成分子として共通に用い
られているcommonγ鎖（γc）を標的分子とした。

【０１００】（サイトカイン、刺激剤）マウスＩＦＮγ
は、ゲンザイム社製のリコンビナント体を用いた。ヒト
ＩＬ−２、及びヒトＩＬ−６は、味の素社の作成したリ
コンビナント体を用いた。ヒトＩＬ−１２は、ファーミ
ンジェン社製のリコンビナント体を用いた。ＬＰＳは、
ディフコ社製のE.Coli.055;B5由来のものを用いた。レ
ンチナンは味の素（株）製造の製剤品を用いた。

【０１０１】（使用したマウス）γcノックアウトマウ
スは、東北大医学部・菅村先生より導入したものを用い
た。交配、及び対照として用いた野生型マウスは、ＣＲ
Ｊより購入したＣ５７ＢＬ／６を用いた。

【０１０２】（ノックアウトマウスより調製したＭφの
ＧＳＨ濃度の測定）γcノックアウトマウスの腹腔細胞
を調製し、ＭＣＢ試薬を用いたＡＣＡＳにより、細胞内
ＧＳＨ量を解析した。対照のマウス（Ｃ５７ＢＬ／６）
に比べ、γcノックアウトマウス由来のマクロフアージ
細胞内の還元型グルタチオンの量は著明に減少した。

【０１０３】（ノックアウトマウスより調製したＭφの
機能）野生型マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）、γcノックア
ウトマウスより腹腔細胞を調製し、ＬＰＳ、ＩＬ−２、
ＩＦＮγ、及びその組み合わせにより刺激し、ＮＯ産
生、ＩＬ−６産生、及びＩＬ−１２産生能を測定した。
ＮＯ産生に関しては、無刺激では何れのマウスでも殆ど
産生がみられないが、ＬＰＳとＩＦＮγ刺激組み合わせ
において、γcノックアウトマウスでは、対照マウスに
比較してＮＯ産生は半分以下に低下した。次に、ＩＬ−
６の産生能について解析した。ＬＰＳ刺激では、γcノ
ックアウトマウスで亢進が見られ（対照８１ｐｇ／ｍｌ
に対し９６２ｐｇ／ｍｌ）、ＩＦＮγ刺激では、γcノ
ックアウトマウスで亢進が見られた。次に、ＬＰＳ及び
ＩＦＮγ刺激によるＩＬ−１２産生能を検討した。しか
し、何れのマウスにおいても産生は全く見られなかっ
た。このことは、ここに用いた遺伝子ノックアウトマウ
ス病態動物は酸化型マクロフアージが増量しＴＨ２主流
の液性免疫やアレルギー反応が亢進し、ＴＨ１によって
担われる細胞性免疫が低下していることを示す。病態動
物モデルにおいても本発明が免疫系疾患の病態診断に独
創的で、有意義であることを明確に示す例である。

【０１０４】（実施例１２） ＜γcノックアウトマウスにおける消化管炎症の自然発
症＞正常マウスやγcノックアウトマウスの野性型（遺
伝子形質+/+、+/Y）においては通常のSPF飼育条件下で
は消化管炎症は全く見られない。ところが、γcノック
アウトマウス（遺伝子形質-/-、-/+、-/Y）においては
消化管炎症が高頻発し、-/-、-/Yというホモノックアウ
トマウスにおいては４ヶ月以内に約７０％が、+/-にお
いても６ヶ月以内に約６０％が消化管炎症を自然発症す
る。即ち、腸管短縮、血便、下痢、軟便、脱肛、大腸肥
厚等が認められる。

【０１０５】腸管炎症モデルとしてはデキストラン硫酸
の経口摂取が良く知られているが、人の消化管炎症には
γcノックアウトマウスの炎症像が遥かに良く類似す
る。病理標本を用いての組織化学的解析では以下のよう
な事実が明らかとなった。人消化管炎症モデルの病理標
本の解析；肛門から2-3cm部分の結腸に対応する大腸の
ホルマリン固定HE染色標本について実施した。標本の評
価を１）炎症の縦方向への広がり、粘膜上皮-粘膜固有
層-粘膜筋板-粘膜下層-内輪筋層-外縦筋層-奬膜方向へ
の浸潤２）横方向への広がり３）浸潤細胞の種類４）血
管新生の程度５）粘膜下層の肥厚の５点を中心に実施し
た。γcノックアウトマウスの野性型である+/Yの正常標
本には炎症性細胞の浸潤は殆ど認められず、粘膜構造は
杯細胞、粘膜上皮細胞とも良好に保持する。本野性型+/
YマウスにDS1％飲料水自由飲水群では、腺腔内への好中
球、炎症性細胞の脱落が見られ、杯細胞の変性、消失
（degeneration）、粘膜上皮の化生と変性が高度に認め
られた。リンパ球、Ｍφ、好中球の高度浸潤、血管新
生、血管拡張も高度に起こっていた。グレード４の炎症
と判定した。

【０１０６】γcノックアウトマウス-/-の無処置マウス
標本では、粘膜上皮はintactに近いが、増生が見られ炎
症性細胞の腺腔内への脱落はなく、粘膜下層にも浮腫は
なく、筋層、粘膜下層への浸潤はない。粘膜固有層にの
みＭφ、リンパ球の浸潤があり、DS誘発モデルと異なり
好中球の浸潤は見られなかった。単なる急性炎症像とは
異なり、人の炎症性腸疾患像に近い。

【０１０７】γcノックアウトマウス-/Yの無処置マウス
標本では、粘膜上皮が野性型の2-3倍になっており粘膜
固有層にのみ炎症性細胞の浸潤が限局クラスターとして
存在。クラスターに接する粘膜γcノックアウトマウス+
/-の無処置マウス標本は、-/-,-/Yのものに比較して正
常に近い。炎症性細胞の浸潤クラスターが粘膜固有層底
部に軽度に認められるのみである。

【０１０８】以上より、人の炎症性腸疾患に類似するの
はγcノックアウトマウス-/-、-/Yマウスであり、DS誘
発モデルはγcノックアウトマウス自然発症モデルとは
機序が異なると考えられる。

【０１０９】（実施例１３） ＜γcノックアウトマウスにおける消化管炎症の自然発
症の抑制効果＞上記知見に基づいて、人クローン病、潰
瘍性大腸炎モデルに関し、γcノックアウトマウスにお
ける消化管炎症の自然発症の抑制効果を検定した。酸化
型Ｍφに傾斜するγcノックアウトマウス♂+/Ｙと-/Ｙ
各６匹に生食若しくは（NAC-OMe)₂若しくは(NAC)₂:20μ
ｇ／ｈを週２回計５回投与投与し、-/Ｙにおける消化管
炎症自然発症を抑制するか否かを検討。-／Y非投与群、
投与群で投与開始後14日目において、（NAC-OMe)₂の場
合、発症率は８３％対２５％。３１日目において、発症
率８３％対２５％、生存率３３％対１００％、４５日目
で発症率１００％対２５％、生存率３３％対７５％とな
り、(NAC)₂の場合各々、30,40,100,40,75％となり、本
発明に使用する物質が消化管炎症自然発症マウスにおい
て、明確な延命効果及び発症予防効果を有することが認
められた。尚、+/Yマウスの投与非投与群では発症は見
られず差はない。

【０１１０】（実施例１４） ＜γcノックアウトマウスにおけるデキストラン硫酸誘
発消化管の抑制効果＞γcノックアウトマウス+/-3ケ月令
マウスについて、（NAC-OMe)₂:20μｇ／ｈを週３回２週
間投与、１６日目にDS1％自由飲水を開始。３０日目に
おける消化管炎症発症率は非投与群100％投与群16.6％
と本薬剤の効果が認められた。また、生存率は非投与群
５７％に対して投与群１００％と著明な効果が認められ
た。+/+マウスでも投与群対非投与群で発症率は６０％
たい８０％と効果の傾向を認めた。尚、γcノックアウ
トマウス及びその野性型♂+/Ｙ、-/Ｙ、♀+/+、+/-、-/
-に消化管炎症モデルとしてデキストラン硫酸を１％濃
度に飲料水に溶解し、自由飲水させた。雌の方が抵抗性
であり、抵抗性は-/Y，+/Y，雌では-/-、+/-、+/+の順
であることが判明した。デキストラン硫酸投与開始後の
生存率は１３日目において80,0,100,100％となり、デキ
ストラン硫酸誘発消化管炎症に酸化型Ｍφ主流のマウス
の方が抵抗性があることを示しており、本発明の妥当性
を間接的に支持するものである。

【０１１１】

【発明の効果】本発明の免疫調整剤により、マクロファ
ージ（単球、クップファー細胞及び樹状細胞等を含
む。）の機能の斬新な制御が可能となり、特にヒトの免
疫性疾患である肝硬変、肝炎、糖尿病、消化管炎症、慢
性関節リウマチ、喘息、皮膚アトピー症等の自己免疫疾
患、アレルギー性疾患、癌等の治療、改善、予防を可能
とする。

【０１１２】免疫調整剤のうち免疫抑制剤、特にシスチ
ン誘導体を使用することにより、マクロファージ、単球
等の機能の斬新な制御が可能となり、特に、ヒトの炎症
性疾患である肝硬変、肝炎、潰瘍性大腸炎、クローン病
等の炎症性腸疾患を中心とする消化管炎症等の治療、改
善、予防を目的とした免疫抑制剤から成る医薬品並びに
食品、栄養剤、輸液製剤を提供することができる。特
に、経口摂取することができ、医薬品並びに食品、栄養
剤及び輸液製剤として使用可能である。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、想定される、マクロファージの機能の
相違並びにＴｈ１及びＴｈ２による免疫抑制、悪疫質状
態、癌細胞の悪性化誘導の機序、局所炎症等との関係の
模式図を示す。

【図２】図２は、酸化型、還元型マクロファージの存在
比がＴｈ１型、Ｔｈ２型サイトカインの選択的な産生制
御を介して免疫機能を制御していることを説明したもの
である。本発明者等の新しい知見に基づくものであり、
マクロファージの酸化還元状態がｉｎ ｖｉｖｏにおけ
る免疫能の傾きを増幅する要になっていることを示す。

【図３】図３は、実施例１における両マクロファージの
機能の検定の結果を表す図で、酸化型マクロファージ及
び還元型マクロファージにおける機能の差を示したグラ
フである。

【図４】図４は、ＬＮＴ誘導ＭφとＬＰＳ誘導Ｍφにお
いて、ＩＬ−１２産生能が異なるか否かを検討した結果
を表す図で、酸化型、還元型マクロファージによってＴ
ｈ１サイトカインであるＩＬ−１２の産生量が全く異な
り、ＩＬ−１２は還元型グルタチオン含量の高い還元型
マクロファージからのみ産生されることを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/00 ６１１ Ａ６１Ｋ 31/00 ６１１Ｃ ６１７ ６１７ ６２９ ６２９ ６３５ ６３５ ６３７ ６３７Ｄ ６３７Ｅ ６３７Ｃ ６４３ ６４３Ｄ 31/02 31/02 31/195 ６０３ 31/195 ６０３ 31/215 31/215 31/35 31/35 31/385 31/385 31/66 ６０１ 31/66 ６０１ 31/715 ６０１ 31/715 ６０１ 38/00 37/02

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】マクロファージ細胞内の還元型グルタチオ
   ン量を変化させる作用を有する物質を含有することを特
   徴とする免疫調整剤。
2. 【請求項２】当該物質が、マクロファージ細胞内の還元
   型グルタチオン量を増加させることでインターロイキン
   １２の産生を惹起するものである請求項１に記載の免疫
   調整剤。
3. 【請求項３】当該物質が、Ｎーアセチルシステイン（Ｎ
   ＡＣ）等のグルタチオンの前駆体、グルタチオンモノエ
   ステル及びグルタチオンジエステル等のグルタチオン誘
   導体、リポ酸（ＬＩＰＯＩＣ ＡＣＩＤ）及びその誘導
   体、オルテン（ＯＲＴＥＮＥ）、並びにフラボノイド及
   びその誘導体等の抗酸化物質から選択される少なくとも
   １種を含むものである請求項１に記載の免疫調整剤。
4. 【請求項４】請求項１に記載の免疫調整剤と組み合わせ
   てなるβ（１−３）グルカン及びサイトカインから選択
   される少なくとも１種を含む免疫調整剤。
5. 【請求項５】細胞内の還元型グルタチオン量に差のある
   酸化型マクロファージ及び還元型マクロファージの２種
   のマクロファージの何れか一方を選択的に除去し得る物
   質を含有することを特徴とする免疫調整剤。
6. 【請求項６】当該物質が、細胞毒性を有するＤＮＡアル
   キル化剤にグルタチオンを共役させた物質又は前駆体と
   してマクロファージに取り込まれた後に細胞毒性を示す
   物質である請求項５に記載の免疫調整剤。
7. 【請求項７】当該物質がマクロファージ細胞内の還元型
   グルタチオン量を減少させる物質であり、免疫抑制剤で
   ある請求項１に記載の免疫調整剤。
8. 【請求項８】当該物質がシスチン誘導体で、マクロファ
   ージ細胞内の還元型グルタチオン量を減少させる作用を
   有する誘導体である請求項７記載の免疫調整剤。
9. 【請求項９】シスチン誘導体が下記構造式（１）で示さ
   れる化合物である請求項８に記載の免疫調整剤。 但し、上記式中、Ｒ¹及びＲ²はそれぞれ独立していて、
   アルキル基を、Ｒ³及びＲ⁴はそれぞれ独立していて、ア
   シル基及びペプチジル基の何れかを、それぞれ表す。
10. 【請求項１０】癌患者の悪液質状態の改善、糖尿病、消
    化管炎症、慢性関節リウマチ、肝炎／肝硬変、過敏性肺
    臓炎、肺線維症及び自己免疫性炎症性疾患の何れかを対
    象薬効とするに適した請求項７〜９何れかに記載の免疫
    調整剤。
11. 【請求項１１】請求項１〜１０何れかに記載の免疫調整
    剤を含有することを特徴とする食品、栄養剤又は輸液製
    剤。
12. 【請求項１２】癌患者の悪液質状態の改善、糖尿病、消
    化管炎症、慢性関節リウマチ、肝炎／肝硬変、過敏性肺
    臓炎、肺線維症、自己免疫性炎症性疾患及び／又は癌の
    化学予防を目的としたものである請求項１〜９何れかに
    記載の免疫調整剤又は請求項１１に記載の食品、栄養剤
    又は輸液製剤。