JPH07112987A - スタウロスポリン糖部分変換誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【構成】 下記式（Ｉ）； 〔式中、ＸはＣＨＲ_１を、ＹはＣＲ_２Ｒ_３を表すか、Ｘ
−ＹがＣＨ＝ＣＨを表す。且つ、Ｒ_１はＨ，ＯＨ，Ｃ
_１〜４アシルオキシを表し、Ｒ_２，Ｒ_３はＨ，ＯＨ，Ｃ
_１〜４アシルオキシ、ＮＨ_２モノ（もしくはジ）Ｃ
_１〜４アルキルアミノを表し、またはＲ_１とＲ_２あるい
はＲ_１とＲ_３は一緒になって−Ｏ−ＣＯ−Ｏ，−Ｏ−Ｃ
Ｓ−Ｏ−を、更にＲ_２とＲ_３が一緒になって＝Ｏ，＝Ｎ
−ＯＨを表してもよい〕で示される化合物と、それらの
医薬として許容されうる塩。 【効果】 本発明の化合物は、ミオシン軽鎖キナーゼに
対する阻害活性を示し、抗血小板作用、抗血管レン縮作
用、抗腫瘍活性、血圧降下作用などの効果を生じる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、プロテインキナーゼの
阻害剤であるスタウロスポリン誘導体およびその塩、お
よびそれらの合成に重要な中間体となる化合物に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】スタウロスポリンが強力なプロテインキ
ナーゼ類の阻害剤であることは知られている［玉置ら
著，バイオケミカル アンド バイオフィジカル リサ
ーチ コミュニケーションズ，１３５巻，３９７頁（１
９８６年）．］。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】生体内には数種類のプ
ロテインキナーゼ（プロテインキナーゼＣ、ｃＡＭＰ依
存性キナーゼ、ミオシン軽鎖キナーゼなど）が存在し、
それらに対する阻害剤は血小板凝集阻害機能、血管拡張
作用、抗腫瘍活性、抗炎症作用など広く利用が考えられ
ている。現在、その課題となっているのはプロテインキ
ナーゼ間の阻害選択性であり、例えば、スタウロスポリ
ンは選択性が低く、その結果、高い毒性を有することに
なり、療法上の使用に適さない。現在、プロテインキナ
ーゼＣに対して選択的な阻害剤は、抗腫瘍活性が期待で
きることから広く研究されているが、抗血小板作用、抗
血管レン縮、血圧降下作用が期待できるミオシン軽鎖キ
ナーゼに対して選択的な阻害剤は開発されていない。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者は、新規なスタ
ウロスポリン誘導体を合成し、それぞれについて代表的
なプロテインキナーゼであるプロテインキナーゼＣ、ミ
オシン軽鎖キナーゼに対する阻害活性を測定した。その
結果の知見に基づいてミオシン軽鎖キナーゼに選択的な
阻害剤、およびそれらの合成の際重要となる中間体を発
明することができた。すなわち、本発明は、前記式
（Ｉ）で示されるスタウロスポリン誘導体およびその塩
に関する。これらの式中においてＣ１−４のアシルオキ
シ基の具体例としては、例えば、アセトキシ基、プロピ
オニルオキシ基、ブチリルオキシ基、イソブチリルオキ
シ基などが、Ｃ１−４のアルキル基の具体例としては、
例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピ
ル基、ブチル基、イソブチル基などが、Ｃ１−４のアシ
ル基の具体例としては、例えば、アセチル基、プロピオ
ニル基、ブチリル基、イソブチリル基などがあげられ
る。酸付加塩の場合、付加する酸としては、例えば、塩
酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、蟻酸、酢酸、安息香酸、
マレイン酸、フマル酸、琥珀酸、酒石酸、クエン酸、シ
ュウ酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、アス
パラギン酸、グルタミン酸などがある。 以下に前記式
（Ｉ）で示されるスタウロスポリン誘導体の製造方法を
示すが、これらは単なる例示であって、これらに限定さ
れるものではない。

【０００５】前記式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）で示される化
合物の有用な中間体である前記式（ＩＩ）で示される化
合物は、スタウロスポリンより数段階の反応を経て効率
よく合成することができる。すなわち、スタウロスポリ
ンに対して、アセトニトリル、ジクロロメタン、エタノ
ール、メタノール、ピリジン、ジオキサンなどの不活性
溶媒中、好ましくはアセトニトリル中で、５０〜１００
当量、好ましくは６０〜９０当量のホルムアルデヒド、
アセトアルデヒド、またはアセトンのようなアルデヒ
ド、ケトン化合物、好ましくはホルムアルデヒドと、５
〜２０当量、好ましくは７〜１０当量のシアノ水素化ホ
ウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウム、水素化
ホウ素ナトリウムなどの還元剤、好ましくはシアノ水素
化ホウ素ナトリウムを同時に、または順次０〜５０℃、
好ましくは１０〜３０℃で１２〜４８時間、好ましくは
２０〜３０時間作用させることにより、下記式（Ｖ）

【化５】 〔式中、Ｒ₁₀はメチル基、エチル基、イソプロピル基な
どのアルキル基を表す。〕で示されるＮ，Ｎ−ジアルキ
ル誘導体を得ることができる。

【０００６】以下の工程でも同様であるが、生成物の単
離、精製は通常用いられる方法、例えば、抽出、結晶
化、クロマトグラフィーなどを組み合わせることにより
行うことができる。また、本発明における反応溶媒は、
以下の工程でも同様であるが、反応に不活性な溶媒また
はそれらの混合物を使用することができる。続いて式
（Ｖ）で示される化合物にクロロホルム、ジクロロメタ
ン、アセトン、ｔ−ブタノールなどの不活性溶媒中、好
ましくはクロロホルム中で１〜５当量の、好ましくは１
〜２当量のｍ−クロロ過安息香酸、ジメチルジオキシラ
ン、ｔ−ブチルヒドロペルオキシドなどの酸化剤、好ま
しくはｍ−クロロ過安息香酸を−１０℃〜５０℃、好ま
しくは０〜３０℃で、１〜１０時間、好ましくは１〜５
時間作用させて下記式（ＶＩ）

【化６】 〔式中、Ｒ₁₀はメチル基、エチル基、イソプロピル基な
どのアルキル基を表す。〕で示されるアミンオキシド誘
導体を得ることができる。

【０００７】続いて式（ＶＩ）で示される化合物を約
０．０１〜０．１ｍｍＨｇ、好ましくは０．１ｍｍＨｇ
の減圧下、１５０〜２００℃、好ましくは１６０℃付近
で加熱することによって式（ＩＩ）で示される化合物と
することができる。前記式（ＩＩＩ）で示される化合物
は、前記式（ＩＩ）で示される化合物より合成すること
ができる。すなわち、前記式（ＩＩ）で示される化合物
をテトラヒドロフラン、アセトン、ピリジンなどの不活
性溶媒中、好ましくはテトラヒドロフラン中、５〜１０
当量、好ましくは７当量の４−メチルモルホリンＮ−オ
キシド存在下で、０．１〜０．７当量、好ましくは０．
２〜０．３当量の四酸化オスミウムを０〜５０℃、好ま
しくは室温付近で１２〜４８時間、好ましくは２０〜３
０時間作用させることにより下記式（ＶＩＩ）

【化７】 で示されるジオール誘導体とすることができる。

【０００８】式（ＶＩＩ）で示される化合物は、クロロ
ホルム、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、ジオキ
サンなどの不活性溶媒中、好ましくはクロロホルム中、
２〜１０当量、好ましくは３〜６当量の無水酢酸、塩化
アセチル、塩化プロピオニル、塩化ブチリル、塩化イソ
ブチリルなどのアシル化剤、好ましくは無水酢酸と過剰
のピリジン、トリエチルアミン、ルチジンなどの酸補足
剤、好ましくはピリジンを０〜５０℃、好ましくは２０
〜４０℃で２〜２４時間、好ましくは２〜１２時間作用
させることによって下記式（ＶＩＩＩ）

【化８】 〔式中、Ｒ₁₁はアセチル基、プロピオニル基、ブチリル
基などのアシル基を表す。〕で示されるジアシル誘導体
とすることができる。

【０００９】または式（ＶＩＩ）で示されるジオール誘
導体に対してテトラヒドロフラン、ジオキサン、ジクロ
ロメタン、クロロホルム、ピリジン、トルエンなどの不
活性溶媒中、好ましくはテトラヒドロフラン中、１〜５
当量、好ましくは２〜３当量のカルボニルジイミダゾー
ル、塩化オキザリルなどの炭酸エステル化剤、好ましく
はカルボニルジイミダゾールを２０〜１００℃、好まし
くは２０〜７０℃で１〜１２時間、好ましくは１〜５時
間作用させ下記式（ＩＸ）

【化９】 で示される炭酸エステル誘導体とすることができる。

【００１０】または式（ＶＩＩ）で示されるジオール誘
導体に対してテトラヒドロフラン、ジオキサン、ジクロ
ロメタン、クロロホルム、ピリジン、トルエンなどの不
活性溶媒中、好ましくはテトラヒドロフラン中、１〜５
当量、好ましくは２〜３当量のチオカルボニルジイミダ
ゾールを５０〜７０℃、好ましくは６０℃付近で２０〜
３０時間、好ましくは２４時間作用させ下記式（Ｘ）

【化１０】 で示されるチオ炭酸エステル誘導体とすることができ
る。

【００１１】前記式（ＩＶ）で示される化合物も前記式
（ＩＩ）で示される化合物より合成することができる。
すなわち、前記式（ＩＩ）で示される化合物に対してテ
トラヒドロフラン、ジオキサンなどの不活性溶媒中、好
ましくはテトラヒドロフラン中、２〜５当量、好ましく
は２〜３当量のボラン錯体、過剰の過酸化水素と水酸化
ナトリウム水溶液を順次０〜５０℃、好ましくは０℃〜
室温で３〜１０時間、好ましくは５〜７時間作用させ下
記式（ＸＩ）

【化１１】 で示されるアルコール誘導体とすることができる。

【００１２】式（ＸＩ）で示される化合物は、クロロホ
ルム、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、ジオキサ
ンなどの不活性溶媒中、好ましくはクロロホルム中、２
〜１０当量、好ましくは３〜６当量の無水酢酸、塩化ア
セチル、塩化プロピオニル、塩化ブチリル、塩化イソブ
チリル、好ましくは無水酢酸などのアシル化剤と過剰の
ピリジン、トリエチルアミン、ルチジンなどの酸補足
剤、好ましくはピリジンを０〜５０℃、好ましくは２０
〜４０℃で２〜２４時間、好ましくは２〜１２時間作用
させることによって下記式（ＸＩＩ）

【化１２】 〔式中、Ｒ₁₁はアセチル基、プロピオニル基、ブチリル
基などのアシル基を表す。〕で示されるアシル誘導体と
することができる。

【００１３】式（ＸＩ）で示されるアルコール誘導体に
ジクロロメタン、クロロホルム、ジオキサン、テトラヒ
ドロフランなどの不活性溶媒中、好ましくはジクロロメ
タン中、１〜１０当量、好ましくは２〜５当量のジメチ
ルスルホキシドと、１〜１０当量、好ましくは２〜５当
量のジシクロヘキシルカルボジイミド、無水トリフルオ
ロ酢酸、塩化オキザリル、好ましくは塩化オキザリルな
どの親電子剤を−７８℃〜室温で１〜２４時間作用させ
ることで下記式（ＸＩＩＩ）

【化１３】 で示されるケトン誘導体とすることができる。

【００１４】式（ＸＩＩＩ）で示されるケトン誘導体
は、クロロホルム、ジクロロメタン、エタノール、メタ
ノール、ピリジン、ジオキサン、アセトニトリルなどの
不活性溶媒中、好ましくはアセトニトリル中、５〜２０
当量、好ましくは７から１０当量の酢酸アンモニウム、
メチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、ジイソ
プロピルアミンなどのアミン類と、５〜２０当量、好ま
しくは７〜１０当量のシアノ水素化ホウ素ナトリウム、
水素化リチウムアルミニウム、水素化ホウ素ナトリウム
などの還元剤、好ましくはシアノ水素化ホウ素ナトリウ
ムを０〜５０℃、好ましくは室温付近で１２〜４８時
間、好ましくは２４時間作用させ、下記式（ＸＩＶ）

【化１４】 〔式中、Ｒ_12, Ｒ₁₃は同一または異なって水素原子か、
またはメチル基、エチル基、イソプロピル基のようなア
ルキル基を表す。〕で示されるアミン誘導体を得ること
ができる。

【００１５】また、式（ＸＩ）で示されるケトン誘導体
は、エタノール、メタノール、クロロホルム、ジクロロ
メタン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニト
リルなどの不活性溶媒中、好ましくはエタノール中でヒ
ドロキシルアミンを４０〜９０℃、好ましくは７０℃で
３０分〜２時間、好ましくは３０分〜１時間作用させ下
記式（ＸＶ）

【化１５】 で示されるオキシム誘導体を得ることができる。なお、
以上に示した製造方法において、定義した基が実施方法
の条件下変化するか、または方法を実施するのに不適切
な場合、有機合成化学で常用される方法（例えば、プロ
テクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセ
サイズ、グリーン著・ジョン・ウィリー・アンド・サン
ズ・インコーポレイテッド第２版（１９９１年）参照）
に付すことにより容易に実施することができる。次に、
上記製法によって得られる化合物（Ｉ）の代表例を表１
に、その中間体を表２に示す。また、これらの化合物
（Ｉ）の製造例を実施例に、その中間体の製造例を参考
例に、代表的な化合物（Ｉ）の生理活性を試験例にそれ
ぞれ示す。

【００１６】

【表１】

【００１７】

【表２】

【００１８】

【実施例】以下に実施例を示す。 （実施例１）参考例２で得られる化合物ｂ（９．７５
ｇ，２０ｍｍｏｌ）を１６０℃に加熱して、真空ポンプ
で減圧（０．１ｍｍＨｇ）下に５時間熱分解し、化合物
１（７．３２ｇ，収率８５．６％）を得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｃ₅Ｄ₅Ｎ）：９．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝
７．６Ｈｚ），９．１２（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，
１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝
７．６Ｈｚ），７．３４−７．０６（ｍ，５Ｈ），６．
６６（ｓ，１Ｈ），５．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２
Ｈｚ），５．３３−５．４０（ｍ，１Ｈ），４．７４
（ｓ，２Ｈ），３．９７（ｓ，１Ｈ），３．１２（ｓ，
３Ｈ），１．９０（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ ４３５
（Ｍ⁺）． （実施例２）実施例１で得られる化合物１（１．００
ｇ，２．３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２０ｍ
ｌ）に溶解し、４−メチルモルホリン Ｎ−オキシド
１．９２ｇ（１６．４ｍｍｏｌ）、０．０５Ｍ四酸化オ
スミウム ｔ−ブタノール溶液（１２ｍｌ，０．６ｍｏ
ｌ）を加え、アルゴン雰囲気下室温で２４時間撹拌し
た。亜硫酸ナトリウム０．３ｇを加え、十分撹拌後酢酸
エチル（５０ｍｌ×３）で抽出、水（１００ｍｌ）で洗
浄し、硫酸ナトリウムにて乾燥後濃縮した。得られた残
渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホル
ム：メタノール １００：１−２０：１）で精製して化
合物２（０．７０ｇ，収率６５％）を緑黄色固体として
得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｃ₅Ｄ₅Ｎ）：１０．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ
＝７．６Ｈｚ），９．４０（ｓ，１Ｈ），８．２１
（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），８．０２（ｄ，１Ｈ，
Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．４１−７．６３（ｍ，５Ｈ），
７．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．３Ｈｚ），４．７９−
５．１４（ｍ，７Ｈ），４．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．
６Ｈｚ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．５７（ｓ，３
Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ ４７０（Ｍ⁺＋１）．

【００１９】（実施例３）実施例２で得られる化合物２
（１００ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラ
ン（２ｍｌ）に溶解し、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダ
ゾール１０４ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ）を加え１時間加
熱還流した。反応液に水を加え、クロロホルム（１０ｍ
ｌ×３）で抽出し、有機層を水洗（５０ｍｌ）した。硫
酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して得られる残渣をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノ
ール＝５０：１）にて精製して、化合物３（６４ｍｇ，
収率６１％）を微黄色粉末として得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：９．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝
７．９Ｈｚ），７．９８（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄ，
１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．０５−７．４４（ｍ，６
Ｈ），６．３４（ｓ，１Ｈ），４．３７−４．７７
（ｍ，４Ｈ），３．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈ
ｚ），３．３０（ｓ，３Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ）；
ＭＳ ｍ／ｚ ４９５（Ｍ⁺）． （実施例４）実施例２で得られる化合物２（５０ｍｇ，
０．１１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１ｍｌ）に
溶解し、Ｎ，Ｎ’−チオカルボニルジイミダゾール７６
ｍｇ（０．４４ｍｍｏｌ）を加え、２６時間還流した。
反応液に水を加え、クロロホルム（１０ｍｌ×３）で抽
出後、水洗（５０ｍｌ）した。クロロホルム層は無水硫
酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して得られる粗生成物をシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メ
タノール＝５０：１）で精製し、化合物４（３４．６ｍ
ｇ，収率６３％）を白色粉末として得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：９．３２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝
７．６Ｈｚ），８．０６（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄ，
１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．０４−７．４５（ｍ，６
Ｈ），６．４６（ｓ，１Ｈ），４．４４−４．８０
（ｍ，４Ｈ），３．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈ
ｚ），３．４４（ｓ，３Ｈ），２．１４（ｓ，３Ｈ）；
ＭＳ ｍ／ｚ ５１１（Ｍ⁺）．

【００２０】（実施例５）実施例１で得られる化合物１
（５０ｍｇ，０．１１５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラ
ン溶液（１ｍｌ）を氷冷し、１Ｍボラン−テトラヒドロ
フラン錯体２３３μｌ（０．２３３ｍｍｏｌ）を滴下
し、室温で６時間撹拌した。３Ｎ水酸化ナトリウム１１
８μｌ、３０％過酸化水素水１１８μｌを加え、２４時
間撹拌した。反応混液を酢酸エチル（１０ｍｌ×３）で
抽出し、有機層を水洗した（３０ｍｌ）。硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラム
クロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０
０：１から２０：１）で精製し、化合物５（４１．６ｍ
ｇ，収率８０％）を得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｃ₅Ｄ₅Ｎ）：１０．３２（ｄ，１Ｈ，Ｊ
＝７．６Ｈｚ），９．５０（ｓ，１Ｈ），８．２８
（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），８．０９（ｄ，１Ｈ，
Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．３６−７．６７（ｍ，５Ｈ），
６．８６（ｓ，１Ｈ），５．１７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝４．
３Ｈｚ），４．７７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１
２．２Ｈｚ），４．６６（ｓ，１Ｈ），３．４５（ｓ，
３Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ），２．４３（ｔ，１Ｈ，
Ｊ＝８．９Ｈｚ），１．９４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．２
Ｈｚ）；ＭＳ ｍ／ｚ ４５３（Ｍ⁺）．

【００２１】（実施例６）実施例５で得られる化合物５
（２００ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）のベンゼン溶液
（８．８ｍｌ）にジメチルスルホキシド（６６２μ
ｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（２７２ｍｇ，
１．３２ｍｍｏｌ），無水トリフルオロ酢酸（１６．８
μｌ）、ピリジン（８０．４μｌ）を加え、２０時間室
温で撹拌した。反応液を濃縮し、酢酸エチル（２０ｍ
ｌ）を加え、沈殿物を濾別した。ろ液を濃縮乾固し、得
られる残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ク
ロロホルム：メタノール＝１００：１−５０：１）にて
精製し、化合物６（１７５．９ｍｇ，収率８８％）を白
色粉末として得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｃ₅Ｄ₅Ｎ）：１０．２３（ｄ，１Ｈ，Ｊ
＝７．３Ｈｚ），９．５６（ｓ，１Ｈ），８．３１
（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），８．１０（ｄ，１Ｈ，
Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．４５−７．６９（ｍ，５Ｈ），
６．９１（ｓ，１Ｈ），５．１５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝３．
６Ｈｚ），４．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１
１．５Ｈｚ），３．３６（ｓ，３Ｈ），３．２２（ｄ，
１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），２．９６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝
３．６Ｈｚ，１１．９Ｈｚ），２．４９（ｓ，３Ｈ）；
ＭＳ ｍ／ｚ ４５１（Ｍ⁺）．

【００２２】（実施例７）実施例６で得られる化合物６
（５０ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン
溶液（１ｍｌ）に１Ｍ Ｋ−セレクトライド テトラヒ
ドロフラン溶液４４０μｌ（０．４４ｍｍｏｌ）を氷冷
下滴下し，１０分間室温で撹拌した。反応液に水を加え
（１０ｍｌ）、酢酸エチルで抽出（１０ｍｌ×３）し、
硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して得られる残渣をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタ
ノール＝１００：１から２０：１）で精製し、化合物７
（３０．７ｍｇ，６１％）を白色粉末として得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｃ₅Ｄ₅Ｎ）：１０．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ
＝７．９Ｈｚ），９．４０（ｓ，１Ｈ），８．２７
（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），８．１４（ｄ，１Ｈ，
Ｊ＝８．３Ｈｚ），８．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈ
ｚ），７．４４−７．６５（ｍ，４Ｈ），７．００
（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），５．１１（ｄ，２Ｈ，
Ｊ＝８．９Ｈｚ），４．７９−４．８６（ｍ，１Ｈ），
４．０３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１１．９Ｈ
ｚ），３．４８（ｓ，３Ｈ），３．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ
＝６．９Ｈｚ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．７（ｑ，
１Ｈ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ）；ＭＳ ｍ／ｚ ４５３（Ｍ
⁺）．

【００２３】（実施例８）実施例６で得られる化合物６
（５５ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）をエタノール（２．１
６ｍｌ）およびクロロホルム（０．３４４ｍｌ）に溶解
し、ヒドロキシアミン塩酸塩４２．５ｍｇ（０．６０ｍ
ｍｏｌ）を加え、３０分間加熱還流した。反応液を冷却
後、濃縮乾固して得られた残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１００：
１）で精製して、化合物８（４０．２ｍｇ，収率７８
％）を白色粉末として得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｃ₅Ｄ₅Ｎ）：１３．６６（ｓ，１Ｈ），
９．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），９．１３
（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈ
ｚ），７．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．６
１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．０５−７．２５
（ｍ，４Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），４．７４（ｄ，
２Ｈ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），３．２４−３．７８（ｍ，２
Ｈ），３．０３（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），
１．８７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ）；ＭＳ ｍ／
ｚ ４６６（Ｍ⁺）．

【００２４】（実施例９）実施例５で得られる化合物５
（５０ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）をピリジン（１ｍｌ）
に溶解し、無水酢酸（１００μｌ）を氷冷下加え、室温
で１時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水
溶液５ｍｌを加えた後酢酸エチル（１０ｍｌ×３）で抽
出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥、濃縮し得られた
粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロ
ロホルム：メタノール＝１００：１）にて精製して化合
物９（３６ｍｇ，収率６６％）を白色粉末として得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｃ₅Ｄ₅Ｎ）：９．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝
７．６Ｈｚ），９．１６（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄ，
１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝
７．９Ｈｚ），７．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈ
ｚ），７．０８−７．２８（ｍ，４Ｈ），６．４８
（ｓ，１Ｈ），５．２２（ｓ，１Ｈ），４．７７（ｄ，
２Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），４．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝
３．６，１２．２Ｈｚ），３．０６（ｓ，３Ｈ），２．
１１（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．２
Ｈｚ），１．８０（ｓ，３Ｈ），１．６５（ｔ，１Ｈ，
Ｊ＝１４．９Ｈｚ）；ＭＳ ｍ／ｚ ４９５（Ｍ⁺）．

【００２５】（参考例１）スタウロスポリン（１０ｇ，
２１ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（１８０ｍｌ）に
シアノ水素化ホウ素ナトリウム１０ｇ（１６０ｍｍｏ
ｌ）を加え、続いてホルムアルデヒド水溶液（１６０ｍ
ｌ）を１０分間かけ加え、２４時間室温で撹拌した。反
応終了後、反応液を水で希釈し、クロロホルム（１００
ｍｌ×３）で抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥、
濃縮し化合物ａ（１１．０ｇ，収率１００％）を得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：８．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝
７．９Ｈｚ），７．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈ
ｚ），７．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．３
０−６．６４（ｍ，６Ｈ），６．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝
２．３Ｈｚ），４．６３−５．１９（ｍ，２Ｈ），３．
６４（ｓ，１Ｈ），２．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．
６，５．３Ｈｚ），２．３９（ｓ，３Ｈ），２．３５
（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．３Ｈｚ），２．１３（ｄ，１Ｈ，
Ｊ＝１０．６Ｈｚ），２．０６（ｓ，３Ｈ），１．６３
（ｓ，６Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ ４８０（Ｍ⁺）．

【００２６】（参考例２）参考例１で得られる化合物ａ
（１１．０ｇ，２３ｍｍｏｌ）のクロロホルム溶液（１
２０ｍｌ）を０℃に冷却し、ｍ−クロロ過安息香酸４．
３１ｇ（２４ｍｍｏｌ）のクロロホルム溶液（８０ｍ
ｌ）を滴下した。室温で２時間撹拌した後、１０％炭酸
ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）を加え、さらに３０分間
撹拌した。水（２００ｍｌ）で希釈し析出する固体を濾
過し、化合物ｂ（９．７５ｇ，収率９２％）を得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）：９．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝
７．６Ｈｚ），８．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈ
ｚ），７．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．４
８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２１−７．４４
（ｍ，３Ｈ），７．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈ
ｚ），６．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），５．３
１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ），５．００（ｄ，１
Ｈ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ），４．６１（ｍ，１Ｈ），３．
７６（ｍ，１Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ），３．２５
（ｍ，１Ｈ），２．８６（ｓ，３Ｈ），２．４９（ｓ，
３Ｈ），２．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），１．
９１（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ４９７（Ｍ⁺＋１）．

【００２７】実施例の項に記載した化合物についての各
種プロテインキナーゼ阻害活性について、以下の試験例
に示す。 （試験例１） ミオシン軽鎖キナーゼ（ＭＬＣＫ）の活性阻害測定法 阻害剤の阻害活性測定にはリン酸化されたミオシン軽鎖
（ＭＬＣ）を特異的に認識する抗体（ＭＬＣＰ抗体）を
用いたＭＬＣＫ活性測定系を用いた。ＭＬＣはニワトリ
砂嚢よりペリーらの方法［ジャーナル・オブ・バイオケ
ミストリー，２１１巻，２６７−２７２頁（１９８３
年）］に従って、分子量２０ｋＤａのＭＬＣを精製し
た。ＭＬＣＫはウォルシュらの方法［メソッズ・イン・
エンザイモロジー，９９巻，２７９−２８８頁（１９８
３年）］の方法に従って精製した。カルモジュリンは豚
脳よりヤザワ［ジャーナル・オブ・バイオケミストリ
ー，８７巻，１３１３−１３２０頁（１９８０年）］の
方法に従って精製したものを用いた。ＭＬＣＰ抗体は、
ＭＬＣのリン酸化部位のセリンを含む前後１２残基の配
列を持った合成ペプチドを抗原として用い作成した。

【００２８】まず、ＭＬＣのＮ末端を基準として１１番
目のリジンから２２番目のフェニルアラニンまでの配列
にシステインをＣ末端に加えたペプチドを合成する（Ｋ
ＫＲＰＱＲＡＴＳＮＶＦＣ）。この合成ペプチドに対し
てＡＴＰ存在下でＭＬＣＫによるリン酸化を行い、高速
液体クロマトグラフィーにて精製する。このペプチドを
シャミセン貝ヘモシアニン（ＫＬＨ）とコンジュゲート
する。このときのコンジュゲート効率は１１０−１４８
ｎｍｏｌペプチド／ｍｇＫＬＨであった。このコンジュ
ゲート体をウサギ１羽あたり１回につき０．２ｍｇをア
ジュバントと混合してウサギに免疫した。５回の免疫の
後、ＭＬＣＰ抗体の抗体価が十分に上昇したのを確認
し、ＩｇＧ画分として精製し保存した。

【００２９】ＭＬＣＫ活性測定は以下のように行った。
ＭＬＣをリン酸バッファー（ＰＢＳ）で希釈して５μｇ
／ｍｌに調製し、９６穴イムノプレートに一穴あたり１
００μｌ分注し、吸着させる。４℃で１晩放置後、未吸
着のＭＬＣをＰＢＳにて洗浄する。各穴に２５ｍＭトリ
ス緩衝液（ｐＨ７．５），３ｍＭ塩化マグネシウム，１
ｍＭ塩化カルシウム，０．１％ ２−メルカプトエタノ
ール，１ｍｇ／ｍｌ牛血清アルブミン，２０μｇ／ｍｌ
カルモジュリン，０．１μｇ／ｍｌ ＭＬＣＫ，および
２０，３０，５０，１００μＭのＡＴＰを含む反応混液
を加え反応を開始する。３分後に１００μｌの２０％リ
ン酸を加え反応を停止し、０．２％トライトンＸ−１０
０を含むＰＢＳ（ＴｒＰＢＳ）でプレートを３回洗浄す
る。洗浄した各穴に０．０５％トゥイーン２０を含むＰ
ＢＳ（ＴｗＰＢＳ）で５００倍希釈したＭＬＣＰ抗体を
一次抗体として各穴に１００μｌ加え、１時間室温で放
置する。

【００３０】ＴｒＰＢＳで３回洗浄後、二次抗体として
ペルオキシダーゼ標識したヤギの抗ウサギＩｇＧ抗体
（カッペル社）をＴｗＰＢＳで１０００倍希釈した溶液
を各穴１００μｌ加え室温で１時間放置する。ＴｒＰＢ
Ｓで３回洗浄後、２ｍｇ／ｍｌオルトフェニレンジアミ
ン、０．０４％過酸化水素水を含む発色液を各穴１００
μｌ加え、十分発色後４．５Ｍ硫酸を３０μｌ加えて発
色を停止し、バイオラッド社製のマイクロプレートリー
ダーで吸光度を測定する。この吸光度はリン酸化を受け
たＭＬＣ量に比例するので、ＭＬＣＫ活性とすることが
できる。阻害剤の阻害活性測定時には反応混液中に適当
な濃度の阻害剤を加え、その際の反応活性を測定し、二
重逆数プロットにより阻害活性を求めた。

【００３１】（試験例２） プロテインキナーゼＣの活性阻害測定法 各阻害剤の阻害能測定には、医学生物研究所のプロテイ
ンキナーゼＣ活性測定キットを用いた。ＰＫＣはラット
脳より稲垣ら［（ジャーナル・オブ・バイオケミストリ
ー，２６０巻，２９２２−２９２５頁（１９８５
年）．］の方法に従って精製したものを用いた。測定キ
ットの９６穴プレートに反応混液（２５ｍＭトリス緩衝
液ｐＨ＝７．５、３ｍＭ 塩化マグネシウム，１ｍＭ
塩化カルシウム，０．１％ ２−メルカプトエタノー
ル，１ｍｇ／ｍｌ 牛血清アルブミン，５０μｇ／ｍｌ
ホスファチジルセリン，１０μｇ／ｍｌ ＰＫＣ，お
よび１，３，５，１０μＭ ＡＴＰ）を１穴あたり１０
０μｌ加える。なお、あらかじめ各穴にはＰＫＣの基質
となるペプチドが吸着させてある。３分後、１００μｌ
２０％リン酸で反応を停止する。各穴をＴｒＰＢＳで３
回洗浄後、キットに含まれる１次抗体をＴｗＰＢＳで１
０倍希釈したものを各穴１００μｌ加え、室温で１時間
放置する。ＴｒＰＢＳで３回洗浄後、ペルオキシダーゼ
で標識した抗マウスＩｇＧ（バイオラッド社製）をＴｗ
ＰＢＳで１０００倍希釈したものを各穴１００μｌ加
え、室温で１時間放置する。ＴｒＰＢＳで３回洗浄後、
２ｍｇ／ｍｌオルトフェニレンジアミン、０．０４％過
酸化水素水を含む発色液を１００μｌ加え十分に発色し
た後、４．５Ｍ硫酸を３０μｌ加えて発色をを停止し、
バイオラッド社製マイクロプレートリーダーで発色を定
量する。阻害能測定には反応混液中に適当な濃度の阻害
剤を加え、その際のＰＫＣ活性を測定して、２重逆数プ
ロット法を用いて阻害能を求めた。

【００３２】（試験例３）上記の実施例で製造した化合
物の、プロテインキナーゼＣ、ミオシン軽鎖キナーゼに
対する阻害活性測定の結果を表３に示す。

【表３】

【００３３】

【発明の効果】上記の試験結果より、本発明の化合物
は、ミオシン軽鎖キナーゼに対する阻害活性を示すた
め、血小板凝集阻害機能、血管拡張作用、抗腫瘍活性、
抗炎症作用などの効果を生じる。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/40 ＡＤＵ 31/71 ＡＥＤ (72)発明者 砂塚 敏明 千葉県船橋市芝山２−５−３−503 (72)発明者 大村 智 東京都世田谷区瀬田５丁目12−７

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記式（Ｉ）； 【化１】 ［式中、−Ｘ−は−ＣＨＲ₁−を、−Ｙ−は−ＣＲ₂Ｒ₃
   −を表すか、または−Ｘ−と−Ｙ−は一体となって−Ｃ
   Ｈ＝ＣＨ−を表す。Ｒ₁は水素原子、水酸基、Ｃ１−４
   のアシルオキシ基を表し、Ｒ₂，Ｒ₃は水素原子、水酸
   基、Ｃ１−４のアシルオキシ基、−ＮＲ₄Ｒ₅（Ｒ₄およ
   びＲ₅は同一または異なって水素原子、Ｃ１−４のアル
   キル基）を表し、また、Ｒ₁とＲ₂、あるいはＲ₁とＲ₃は
   一体となって−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−を表すか、または
   Ｒ₁とＲ₂、あるいはＲ₁とＲ₃は一体となって−Ｏ−（Ｃ
   ＝Ｓ）−Ｏ−を表す。また、Ｒ₂とＲ₃は一体となって＝
   ＮＯＨか、または酸素原子を表してもよい。 ただし、
   Ｒ₁が水素原子の場合には、Ｒ₂およびＲ₃は同一もしく
   は異なり、Ｒ₂およびＲ₃が同一の場合は、Ｒ₂とＲ₃が一
   体となって酸素原子あるいは＝ＮＯＨを表す。また、Ｒ
   ₂およびＲ₃が異なる場合には、そのうち一つが水素原子
   を表し、他方は水酸基、Ｃ１−４のアシルオキシ基、ま
   たは−ＮＲ₄Ｒ₅（部分式中、Ｒ₄およびＲ₅は同一または
   異なって水素原子、Ｃ１−４のアルキル基）を表す。ま
   た、Ｒ₁が水素原子でない場合は、Ｒ₂およびＲ₃のうち
   の一つが水素原子を表し、他方およびＲ₁は同一で水酸
   基、Ｃ１−４のアシルオキシ基を表すか、Ｒ₂およびＲ₃
   のうちの一つが水素原子を表し、他方およびＲ₁は一体
   となって−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−を表すか、または−Ｏ
   −（Ｃ＝Ｓ）−Ｏ−を表す。］で示される化合物と、そ
   れらの医薬として許容されうる塩。
2. 【請求項２】 下記式（ＩＩ）； 【化２】 で示される化合物。
3. 【請求項３】 下記式（ＩＩＩ）； 【化３】 ［式中、Ｒ₆およびＲ₇は同一で、水素原子、Ｃ１−４の
   アシル基を表すか、Ｒ₆およびＲ₇は一体となって−（Ｃ
   ＝Ｏ）−を表すか、または−（Ｃ＝Ｓ）−を表す。］で
   示される化合物。
4. 【請求項４】 下記式（ＩＶ）； 【化４】 ［式中、Ｒ₈およびＲ₉は同一もしくは異なり、Ｒ₈およ
   びＲ₉が同一の場合はＲ₈とＲ₉が一体となって酸素原子
   あるいは＝ＮＯＨを表し、Ｒ₈およびＲ₉が異なる場合に
   はそのうち一つが水素原子を表し、他方は水酸基、Ｃ１
   −４のアシルオキシ基、または−ＮＲ₄Ｒ₅（部分式中、
   Ｒ₄およびＲ₅は同一または異なって水素原子、Ｃ１−４
   のアルキル基）を表す。］で示される化合物と、それら
   の医薬として許容されうる塩。