JPH07108236B2 - １，５−アンヒドログルシトールの定量法 - Google Patents
１，５−アンヒドログルシトールの定量法Info
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- JPH07108236B2 JPH07108236B2 JP4324259A JP32425992A JPH07108236B2 JP H07108236 B2 JPH07108236 B2 JP H07108236B2 JP 4324259 A JP4324259 A JP 4324259A JP 32425992 A JP32425992 A JP 32425992A JP H07108236 B2 JPH07108236 B2 JP H07108236B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、糖尿病の診断マーカー
である１，５−アンヒドログルシトール（以下１，５−
ＡＧという）の簡便かつ迅速で自動分析装置への適用も
可能な酵素的測定方法に関するものである。
である１，５−アンヒドログルシトール（以下１，５−
ＡＧという）の簡便かつ迅速で自動分析装置への適用も
可能な酵素的測定方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】１，５−ＡＧはヒト髄液および血液中に
存在し、ある種の疾患、特に糖尿病において著しい濃度
低下が報告されている化合物であり（赤沼安夫、戸部一
之：日本内科学会誌、８０ １１９８〜１２０４ １９
９１）、糖尿病の診断マーカーとして重要と目されるも
のである。
存在し、ある種の疾患、特に糖尿病において著しい濃度
低下が報告されている化合物であり（赤沼安夫、戸部一
之：日本内科学会誌、８０ １１９８〜１２０４ １９
９１）、糖尿病の診断マーカーとして重要と目されるも
のである。
【０００３】これまでの１，５−ＡＧの測定方法として
は、ガスクロマトグラフィーによる方法（糖尿病２５
巻、１１１５〜１１１８、１９８２年、吉岡。以下、Ｇ
Ｃ法と称する。）と、ピラノースオキシダーゼ（以下、
ＰＲＯＤと称する。）またはＬ−ソルボースオキシダー
ゼを用いる方法（特開昭６３−１８５３９７号公報。以
下、このような測定法を酵素法と称する。）が知られて
いる。
は、ガスクロマトグラフィーによる方法（糖尿病２５
巻、１１１５〜１１１８、１９８２年、吉岡。以下、Ｇ
Ｃ法と称する。）と、ピラノースオキシダーゼ（以下、
ＰＲＯＤと称する。）またはＬ−ソルボースオキシダー
ゼを用いる方法（特開昭６３−１８５３９７号公報。以
下、このような測定法を酵素法と称する。）が知られて
いる。
【０００４】１，５−ＡＧ測定の対象となる検体は主と
して糖尿病患者の血清または血漿である。その糖尿病患
者の血中においてグルコース濃度は健常者に比べて高
く、その値は、健常者が６０〜１００ｍｇ／ｄｌ程度で
あるのに対し、糖尿病患者においては１００〜１０００
ｍｇ／ｄｌの範囲で広く分布している。一方、血中の
１，５−ＡＧ濃度は、健常者が１．６４〜２．６８ｍｇ
／ｄｌであるのに対し、糖尿病患者においては０．１８
〜０．２１ｍｇ／ｄｌという著しく低い数値を示す（日
本臨床 ４７巻 １９８９年増刊号広範囲血液・尿化学
検査免疫学的検査上巻 ４３９〜４４２ 川合）。この
ため、糖尿病患者血中の１，５−ＡＧの濃度はグルコー
スの約４７０分の１以下になる。加えて、グルコースと
１，５−ＡＧは構造が近似しているため、現在の技術水
準では共存下の選択的測定は不可能であり、グルコース
を選択的に除去するか、あるいは適切に修飾する検体前
処理が不可欠である。
して糖尿病患者の血清または血漿である。その糖尿病患
者の血中においてグルコース濃度は健常者に比べて高
く、その値は、健常者が６０〜１００ｍｇ／ｄｌ程度で
あるのに対し、糖尿病患者においては１００〜１０００
ｍｇ／ｄｌの範囲で広く分布している。一方、血中の
１，５−ＡＧ濃度は、健常者が１．６４〜２．６８ｍｇ
／ｄｌであるのに対し、糖尿病患者においては０．１８
〜０．２１ｍｇ／ｄｌという著しく低い数値を示す（日
本臨床 ４７巻 １９８９年増刊号広範囲血液・尿化学
検査免疫学的検査上巻 ４３９〜４４２ 川合）。この
ため、糖尿病患者血中の１，５−ＡＧの濃度はグルコー
スの約４７０分の１以下になる。加えて、グルコースと
１，５−ＡＧは構造が近似しているため、現在の技術水
準では共存下の選択的測定は不可能であり、グルコース
を選択的に除去するか、あるいは適切に修飾する検体前
処理が不可欠である。
【０００５】その前処理において、ＧＣ法は、グルコー
ス除去のほかに１，５−ＡＧのラベル化が必要であり、
これは手技が繁雑な上、分析に長時間を要する。このた
めＧＣ法による多数の検体の測定は困難であり、臨床的
な定量法として適用するには問題がある。
ス除去のほかに１，５−ＡＧのラベル化が必要であり、
これは手技が繁雑な上、分析に長時間を要する。このた
めＧＣ法による多数の検体の測定は困難であり、臨床的
な定量法として適用するには問題がある。
【０００６】酵素法による測定では、前処理としてグル
コース除去をイオン交換カラムを用いて行うか、リン酸
化によるグルコース修飾を行う。これらの操作の欠点と
されるところは、イオン交換カラムによる除去では分離
操作の著しい繁雑さである。一方リン酸化によるグルコ
ース修飾では、最適 pＨの相違を初めとして、リン酸化
の反応至適条件と１，５−ＡＧ定量反応の至適条件が異
なるため、リン酸化反応と１，５−ＡＧの測定をそれぞ
れ異なった反応条件で行わなければならない。加えてリ
ン酸化に用いるアデノシン−５’−三リン酸（以下ＡＴ
Ｐと言う）はＰＲＯＤに対して阻害作用を有するので、
リン酸化反応を促進するためにＡＴＰを測定系に加える
ことには濃度的に限界があり、速やかにリン酸化反応を
終了させることは困難であった。いずれにせよ迅速な定
量が不可能であって、特に各種の臨床検査に広く用いら
れている自動分析装置への適用はなされるに至っていな
い。
コース除去をイオン交換カラムを用いて行うか、リン酸
化によるグルコース修飾を行う。これらの操作の欠点と
されるところは、イオン交換カラムによる除去では分離
操作の著しい繁雑さである。一方リン酸化によるグルコ
ース修飾では、最適 pＨの相違を初めとして、リン酸化
の反応至適条件と１，５−ＡＧ定量反応の至適条件が異
なるため、リン酸化反応と１，５−ＡＧの測定をそれぞ
れ異なった反応条件で行わなければならない。加えてリ
ン酸化に用いるアデノシン−５’−三リン酸（以下ＡＴ
Ｐと言う）はＰＲＯＤに対して阻害作用を有するので、
リン酸化反応を促進するためにＡＴＰを測定系に加える
ことには濃度的に限界があり、速やかにリン酸化反応を
終了させることは困難であった。いずれにせよ迅速な定
量が不可能であって、特に各種の臨床検査に広く用いら
れている自動分析装置への適用はなされるに至っていな
い。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】以上に示すこれまでの
１，５−ＡＧ測定方法の欠点を解決し、検体中の１，５
−ＡＧを濾過、遠心分離、吸着などの分離操作を必要と
せずに簡便かつ迅速に測定できる方法、さらに自動分析
装置を用いて測定できる方法を提供する事が本発明の目
的である。
１，５−ＡＧ測定方法の欠点を解決し、検体中の１，５
−ＡＧを濾過、遠心分離、吸着などの分離操作を必要と
せずに簡便かつ迅速に測定できる方法、さらに自動分析
装置を用いて測定できる方法を提供する事が本発明の目
的である。
【０００８】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
本発明者は鋭意検討を重ねた結果、酵素法による測定で
１，５−ＡＧに作用させるＰＲＯＤについて、従来用い
られてきた酵素より適切なものを選択することによっ
て、ＡＴＰによるＰＲＯＤの阻害反応を回避すると共に
リン酸化の反応条件と１，５−ＡＧ定量反応の条件を同
調させると言った従来の困難を解決することに成功し、
本発明を完成させた。
本発明者は鋭意検討を重ねた結果、酵素法による測定で
１，５−ＡＧに作用させるＰＲＯＤについて、従来用い
られてきた酵素より適切なものを選択することによっ
て、ＡＴＰによるＰＲＯＤの阻害反応を回避すると共に
リン酸化の反応条件と１，５−ＡＧ定量反応の条件を同
調させると言った従来の困難を解決することに成功し、
本発明を完成させた。
【０００９】すなわち、本発明は、ＰＲＯＤとしてバシ
ジオマイセタウス・フンギ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔ
ｏｕｓ ｆｕｎｇｉ）Ｎｏ．５２由来のＰＲＯＤを用い
て１，５−ＡＧを定量する方法を第１の要旨とし、検体
中の１，５−ＡＧ以外の糖類を、１，５−ＡＧが残留す
るようにリン酸化により選択的に除去し、得られる試料
中の該１，５−ＡＧに対し、バシジオマイセタウス・フ
ンギＮｏ．５２由来のＰＲＯＤを用いて１，５−ＡＧを
定量する方法を第２の要旨とし、上記の１，５−ＡＧ以
外の糖類の選択的除去、それに続く１，５−ＡＧの定量
を、 pＨ６〜９の範囲で実施する１，５−ＡＧの定量法
を第３の要旨とし、上記の１，５−ＡＧ以外の糖類の選
択的除去を大過剰のＡＴＰを用いて実施し、次いで１，
５−ＡＧの定量を行う１，５−ＡＧの定量法を第４の要
旨とするものである。
ジオマイセタウス・フンギ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔ
ｏｕｓ ｆｕｎｇｉ）Ｎｏ．５２由来のＰＲＯＤを用い
て１，５−ＡＧを定量する方法を第１の要旨とし、検体
中の１，５−ＡＧ以外の糖類を、１，５−ＡＧが残留す
るようにリン酸化により選択的に除去し、得られる試料
中の該１，５−ＡＧに対し、バシジオマイセタウス・フ
ンギＮｏ．５２由来のＰＲＯＤを用いて１，５−ＡＧを
定量する方法を第２の要旨とし、上記の１，５−ＡＧ以
外の糖類の選択的除去、それに続く１，５−ＡＧの定量
を、 pＨ６〜９の範囲で実施する１，５−ＡＧの定量法
を第３の要旨とし、上記の１，５−ＡＧ以外の糖類の選
択的除去を大過剰のＡＴＰを用いて実施し、次いで１，
５−ＡＧの定量を行う１，５−ＡＧの定量法を第４の要
旨とするものである。
【００１０】以下本発明を詳細に説明する。本発明にお
ける検体とは、１，５−ＡＧの濃度を測定したいもので
あれば特に制限はなく、例えばすでに触れた通り血清ま
たは血漿などかあげられる。本発明で用いるＰＲＯＤは
バシジオマイセタウス・フンギ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃ
ｅｔｏｕｓ ｆｕｎｇｉ）Ｎｏ．５２由来のＰＲＯＤ
（以下特にＢｆ−ＰＲＯＤと称する）である。バシジオ
マイセタウス・フンギＮｏ．５２は、特開平２−４２９
８０号公報に記載されているように昭和６３年６月２７
日付で工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第
１０１０６号として寄託された担子菌の菌株であり、Ａ
ｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．ｃｈｅｍ．，５４（３）７９９−
８０１（１９９０）及びＡｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．ｃｈｅ
ｍ．，５４（６）１３９３−１３９９（１９９０）にも
報告されており、よく知られた菌株である。この菌株
は、pＨ３〜８で好気性で生育し、最適生育温度は３０
℃であり、分生子などの無性胞子、担子胞子などの有性
胞子は観察されない菌株である。この菌体より得られる
Ｂｆ−ＰＲＯＤは、ゲル濾過法により測定される分子量
が約３０万、焦点電気泳動法により測定される等電点が
６．２で、ＰＡＳ染色法で赤紫に染色される糖タンパク
質であり、さらに本発明者が確認したその１，５−ＡＧ
に対する酵素学的性質は、至適 pＨが７．０〜８．０、
該酵素が活性を有する pＨの範囲が６〜９、該酵素が活
性を有する温度範囲が２５℃〜４０℃であり、加えて該
酵素の１，５−ＡＧ酸化反応の際のＡＴＰによる阻害作
用を受けにくいものである。
ける検体とは、１，５−ＡＧの濃度を測定したいもので
あれば特に制限はなく、例えばすでに触れた通り血清ま
たは血漿などかあげられる。本発明で用いるＰＲＯＤは
バシジオマイセタウス・フンギ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃ
ｅｔｏｕｓ ｆｕｎｇｉ）Ｎｏ．５２由来のＰＲＯＤ
（以下特にＢｆ−ＰＲＯＤと称する）である。バシジオ
マイセタウス・フンギＮｏ．５２は、特開平２−４２９
８０号公報に記載されているように昭和６３年６月２７
日付で工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第
１０１０６号として寄託された担子菌の菌株であり、Ａ
ｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．ｃｈｅｍ．，５４（３）７９９−
８０１（１９９０）及びＡｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．ｃｈｅ
ｍ．，５４（６）１３９３−１３９９（１９９０）にも
報告されており、よく知られた菌株である。この菌株
は、pＨ３〜８で好気性で生育し、最適生育温度は３０
℃であり、分生子などの無性胞子、担子胞子などの有性
胞子は観察されない菌株である。この菌体より得られる
Ｂｆ−ＰＲＯＤは、ゲル濾過法により測定される分子量
が約３０万、焦点電気泳動法により測定される等電点が
６．２で、ＰＡＳ染色法で赤紫に染色される糖タンパク
質であり、さらに本発明者が確認したその１，５−ＡＧ
に対する酵素学的性質は、至適 pＨが７．０〜８．０、
該酵素が活性を有する pＨの範囲が６〜９、該酵素が活
性を有する温度範囲が２５℃〜４０℃であり、加えて該
酵素の１，５−ＡＧ酸化反応の際のＡＴＰによる阻害作
用を受けにくいものである。
【００１１】検体中の１，５−ＡＧを定量するに際して
は、先ず検体中に存在する１，５−ＡＧ以外の糖類を選
択的に除去する。検体中の１，５−ＡＧ以外の糖類とは
主にグルコースを指すが、ヘキソキナーゼによってリン
酸化される他の糖類も対象とされる。検体中の糖類の選
択的除去は、自動分析装置への適用のためにグルコース
などの糖類を反応溶液中でなんらかの固相に依存するこ
となく消去できる方法を選択するのが好ましい。そのよ
うな方法として、従来知られているものに、６Ｎ塩酸を
用いて糖類を酸分解する方法、水素化ホウ素ナトリウム
による還元処理、グルコースオキシダーゼを用いてグル
コースをグルコン酸に変換する方法、ヘキソキナーゼを
用いて糖類をリン酸化する方法などがあるが、これらの
うちでは、糖類の選択的除去反応に関与する物質及び反
応生成物が１，５−ＡＧ定量反応に影響を与えずに済ま
せることができ、かつ短時間で反応が終了させることが
できる、ヘキソキナーゼを用いて糖類をリン酸化する方
法が最も好ましい。なお、本発明において自動分析装置
と総称されているものは、具体的に機種を挙げて例示す
れば、日立７０５０型、日立７０５型、日立７３６型な
どであるが、例示の機種に限定されず、これらに類する
ものであればいずれでもよい。
は、先ず検体中に存在する１，５−ＡＧ以外の糖類を選
択的に除去する。検体中の１，５−ＡＧ以外の糖類とは
主にグルコースを指すが、ヘキソキナーゼによってリン
酸化される他の糖類も対象とされる。検体中の糖類の選
択的除去は、自動分析装置への適用のためにグルコース
などの糖類を反応溶液中でなんらかの固相に依存するこ
となく消去できる方法を選択するのが好ましい。そのよ
うな方法として、従来知られているものに、６Ｎ塩酸を
用いて糖類を酸分解する方法、水素化ホウ素ナトリウム
による還元処理、グルコースオキシダーゼを用いてグル
コースをグルコン酸に変換する方法、ヘキソキナーゼを
用いて糖類をリン酸化する方法などがあるが、これらの
うちでは、糖類の選択的除去反応に関与する物質及び反
応生成物が１，５−ＡＧ定量反応に影響を与えずに済ま
せることができ、かつ短時間で反応が終了させることが
できる、ヘキソキナーゼを用いて糖類をリン酸化する方
法が最も好ましい。なお、本発明において自動分析装置
と総称されているものは、具体的に機種を挙げて例示す
れば、日立７０５０型、日立７０５型、日立７３６型な
どであるが、例示の機種に限定されず、これらに類する
ものであればいずれでもよい。
【００１２】グルコースをグルコース−６−リン酸に変
換するのをはじめとして糖類をリン酸化する際に用いる
ヘキソキナーゼは、酵母由来のＡ型またはＢ型のヘキソ
ナーゼ、あるいは動物由来のタイプＩ〜ＩＶのヘキソナ
ーゼのいずれも用いることができ、特に、国際生化学連
合の分類に従い、ＥＣ ２．７．１．１と分類されるも
のを用いるのが好ましい。この変換反応では該酵素と合
わせてＡＴＰ及びマグネシウムイオンか用いられる。マ
グネシウムイオンの供給源は、マグネシウムの脂肪酸塩
などの有機酸塩、ハロゲン化塩、硫酸塩、硝酸塩、リン
酸塩などの無機酸塩を用いることができ、その中でも好
ましいのは、酢酸塩、塩酸塩などである。
換するのをはじめとして糖類をリン酸化する際に用いる
ヘキソキナーゼは、酵母由来のＡ型またはＢ型のヘキソ
ナーゼ、あるいは動物由来のタイプＩ〜ＩＶのヘキソナ
ーゼのいずれも用いることができ、特に、国際生化学連
合の分類に従い、ＥＣ ２．７．１．１と分類されるも
のを用いるのが好ましい。この変換反応では該酵素と合
わせてＡＴＰ及びマグネシウムイオンか用いられる。マ
グネシウムイオンの供給源は、マグネシウムの脂肪酸塩
などの有機酸塩、ハロゲン化塩、硫酸塩、硝酸塩、リン
酸塩などの無機酸塩を用いることができ、その中でも好
ましいのは、酢酸塩、塩酸塩などである。
【００１３】上記反応において用いられるヘキソキナー
ゼ、ＡＴＰ及びマグネシウムイオンの好適な量は、ヘキ
ソキナーゼは５〜１００Ｕ／ｍｌ、ＡＴＰは５〜５００
ｍＭ、マグネシウムイオンは５〜５０ｍＭである。反応
の至適 pＨは７．５であるが、 pＨ６〜９の範囲が許容
される。尚、本発明では、ＰＲＯＤとしてバシジオマイ
セタウス・フンギＮｏ．５２由来のＰＲＯＤを１，５−
ＡＧの定量に用いており、このＰＲＯＤはＡＴＰによる
阻害作用を受けにくいものである。従って、糖類の除去
反応の際にＡＴＰを大過剰、例えば１００ｍＭ〜５００
ｍＭの量を用いて除去反応を行い。次いでそのままＡＴ
Ｐを除去することなくＰＲＯＤによる酵素反応に付すこ
とができる。更には、本発明で用いるバシジオマイセタ
ウス・フンギＮｏ．５２由来のＰＲＯＤは pＨ６〜９の
範囲において１，５−ＡＧと酵素反応するため、上記し
た糖類の除去反応と同じ pＨ範囲で１，５−ＡＧの定量
が可能となる。従って、本発明によれば、糖類の除去反
応並びに１，５−ＡＧの酵素反応を同一 pＨ条件、例え
ば pＨ７．０〜８．０の範囲で実施することができ、ま
た両反応を極めて短時間で連続して実施することができ
る。それ故、本発明の１，５−ＡＧの定量法は自動分析
装置により極めて効率よく実施することができる。
ゼ、ＡＴＰ及びマグネシウムイオンの好適な量は、ヘキ
ソキナーゼは５〜１００Ｕ／ｍｌ、ＡＴＰは５〜５００
ｍＭ、マグネシウムイオンは５〜５０ｍＭである。反応
の至適 pＨは７．５であるが、 pＨ６〜９の範囲が許容
される。尚、本発明では、ＰＲＯＤとしてバシジオマイ
セタウス・フンギＮｏ．５２由来のＰＲＯＤを１，５−
ＡＧの定量に用いており、このＰＲＯＤはＡＴＰによる
阻害作用を受けにくいものである。従って、糖類の除去
反応の際にＡＴＰを大過剰、例えば１００ｍＭ〜５００
ｍＭの量を用いて除去反応を行い。次いでそのままＡＴ
Ｐを除去することなくＰＲＯＤによる酵素反応に付すこ
とができる。更には、本発明で用いるバシジオマイセタ
ウス・フンギＮｏ．５２由来のＰＲＯＤは pＨ６〜９の
範囲において１，５−ＡＧと酵素反応するため、上記し
た糖類の除去反応と同じ pＨ範囲で１，５−ＡＧの定量
が可能となる。従って、本発明によれば、糖類の除去反
応並びに１，５−ＡＧの酵素反応を同一 pＨ条件、例え
ば pＨ７．０〜８．０の範囲で実施することができ、ま
た両反応を極めて短時間で連続して実施することができ
る。それ故、本発明の１，５−ＡＧの定量法は自動分析
装置により極めて効率よく実施することができる。
【００１４】糖類が選択的に除去された検体中に残留す
る１，５−ＡＧは、ＰＲＯＤを作用させて測定する。
１，５−ＡＧにＰＲＯＤを作用させることにより、過酸
化水素が発生する。その過酸化水素をパーオキシダー
ゼ、すなわち国際生化学連合の分類によってＥＣ １．
１１．１．７と分類される酵素を用いて、２，２’−ア
ジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン
酸）、ｏ−フェニレンジアミン、５−アミノサリチル
酸、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン並び
に４−アミノアンチピリン及びＮ−エチル−Ｎ−（２−
ヒドロキシスルホプロピル）−ｍ−トルイジンの組み合
わせなどの公知のパーオキシダーゼ用基質に作用させ、
基質から生成する色素を吸光度測定する。過酸化水素を
測定するのに用いるパーオキシダーゼは、ホースラディ
ッシュパーオキシダーゼが好ましい。吸光度測定に用い
る色素を生成する基質は、４−アミノアンチピリン及び
Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスルホプロピル）−
ｍ−トルイジンの組み合わせが好ましい。４−アミノア
ンチピリン及びＮ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスル
ホプロピル）−ｍ−トルイジンを用いる際の吸光度測定
域の波長は、５００ｎｍ〜８００ｎｍであり、この範囲
で２波長以上の波長を用いて測定することもできる。
る１，５−ＡＧは、ＰＲＯＤを作用させて測定する。
１，５−ＡＧにＰＲＯＤを作用させることにより、過酸
化水素が発生する。その過酸化水素をパーオキシダー
ゼ、すなわち国際生化学連合の分類によってＥＣ １．
１１．１．７と分類される酵素を用いて、２，２’−ア
ジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン
酸）、ｏ−フェニレンジアミン、５−アミノサリチル
酸、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン並び
に４−アミノアンチピリン及びＮ−エチル−Ｎ−（２−
ヒドロキシスルホプロピル）−ｍ−トルイジンの組み合
わせなどの公知のパーオキシダーゼ用基質に作用させ、
基質から生成する色素を吸光度測定する。過酸化水素を
測定するのに用いるパーオキシダーゼは、ホースラディ
ッシュパーオキシダーゼが好ましい。吸光度測定に用い
る色素を生成する基質は、４−アミノアンチピリン及び
Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスルホプロピル）−
ｍ−トルイジンの組み合わせが好ましい。４−アミノア
ンチピリン及びＮ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスル
ホプロピル）−ｍ−トルイジンを用いる際の吸光度測定
域の波長は、５００ｎｍ〜８００ｎｍであり、この範囲
で２波長以上の波長を用いて測定することもできる。
【００１５】上記反応において用いられるＰＲＯＤ、ホ
ースラディッシュパーオキシダーゼ、４−アミノアンチ
ピリン及びＮ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスルホプ
ロピル）−ｍ−トルイジンの好適な量は、ＰＲＯＤは５
〜５００Ｕ／ｍｌ、ホースラデイッシュパーオキシダー
ゼは２〜２０Ｕ／ｍｌ、４−アミノアンチピリンは０．
１〜１０ｍＭ、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスル
ホプロピル）−ｍ−トルイジンは０．１〜１０ｍＭであ
る。また、反応に有効な pＨ範囲はヘキソキナーゼと同
様７．５付近すなわち６〜９の範囲である。
ースラディッシュパーオキシダーゼ、４−アミノアンチ
ピリン及びＮ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスルホプ
ロピル）−ｍ−トルイジンの好適な量は、ＰＲＯＤは５
〜５００Ｕ／ｍｌ、ホースラデイッシュパーオキシダー
ゼは２〜２０Ｕ／ｍｌ、４−アミノアンチピリンは０．
１〜１０ｍＭ、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスル
ホプロピル）−ｍ−トルイジンは０．１〜１０ｍＭであ
る。また、反応に有効な pＨ範囲はヘキソキナーゼと同
様７．５付近すなわち６〜９の範囲である。
【００１６】検体中の１，５−ＡＧを測定する反応全体
において、反応温度は５〜４０℃、好ましくは２５〜４
０℃であり、反応時間は２〜６０分、好ましくは２〜３
０分である。反応液の調製の際は、反応全体を pＨ７．
０〜８．０、好ましくは７．５〜８．０で進行させるた
め、試薬を構成する反応液のうち、緩衝液であるものに
ついては、該反応液の pＨを７．０〜８．０、好ましく
は７．５〜８．０、最大幅６〜９の範囲で安定させるた
め、バッファーとしてリン酸バッファー、トリス塩酸バ
ッファー、ＨＥＰＥＳバッファーなどを用いる。ＨＥＰ
ＥＳバッファーであれば５０〜５００ｍＭの濃度が好ま
しい。またイオン強度調節のためハロゲン化アルカリ金
属塩、好ましくは塩化ナトリウムなどを用いる事ができ
る。ＰＲＯＤとして、特開平２−４２９８０号公報に記
載されているＢｆ−ＰＲＯＤを用いて反応全体を pＨ６
〜９、好ましくは pＨ７．０〜８．０で進行させる事に
より、グルコースなど検体中の糖類のリン酸化反応及び
ＰＲＯＤの作用による過酸化水素の発生を測定するため
の発色反応は、共に５分間以内に終了させることができ
る。
において、反応温度は５〜４０℃、好ましくは２５〜４
０℃であり、反応時間は２〜６０分、好ましくは２〜３
０分である。反応液の調製の際は、反応全体を pＨ７．
０〜８．０、好ましくは７．５〜８．０で進行させるた
め、試薬を構成する反応液のうち、緩衝液であるものに
ついては、該反応液の pＨを７．０〜８．０、好ましく
は７．５〜８．０、最大幅６〜９の範囲で安定させるた
め、バッファーとしてリン酸バッファー、トリス塩酸バ
ッファー、ＨＥＰＥＳバッファーなどを用いる。ＨＥＰ
ＥＳバッファーであれば５０〜５００ｍＭの濃度が好ま
しい。またイオン強度調節のためハロゲン化アルカリ金
属塩、好ましくは塩化ナトリウムなどを用いる事ができ
る。ＰＲＯＤとして、特開平２−４２９８０号公報に記
載されているＢｆ−ＰＲＯＤを用いて反応全体を pＨ６
〜９、好ましくは pＨ７．０〜８．０で進行させる事に
より、グルコースなど検体中の糖類のリン酸化反応及び
ＰＲＯＤの作用による過酸化水素の発生を測定するため
の発色反応は、共に５分間以内に終了させることができ
る。
【００１７】本方法で１，５−ＡＧを測定するときは、
上記した各成分を１つの溶液に加えて用いてもよく、各
成分を適宜な組み合わせとなるように分割して用いても
良い。それらは溶液状でも凍結乾燥させても良いが、長
期の保存を意図する場合は凍結乾燥することが好まし
い。また、測定反応を阻害しない濃度範囲内ならば界面
活性剤の添加も可能であり、測定系を凍結乾燥する場合
には、安定化剤を適当量加えても良い。
上記した各成分を１つの溶液に加えて用いてもよく、各
成分を適宜な組み合わせとなるように分割して用いても
良い。それらは溶液状でも凍結乾燥させても良いが、長
期の保存を意図する場合は凍結乾燥することが好まし
い。また、測定反応を阻害しない濃度範囲内ならば界面
活性剤の添加も可能であり、測定系を凍結乾燥する場合
には、安定化剤を適当量加えても良い。
【００１８】
【実施例】以下、本発明を実施例により更に詳細に説明
する。勿論、本発明はこれらの実施例によって限定され
るものではない。 実施例１ ＰＲＯＤの１，５−ＡＧに対する至適 pＨ Ｂｆ−ＰＲＯＤの１，５−ＡＧに対する至適 pＨを測定
し、その結果を図１に示した。測定の際の反応条件は下
記の通りである。１０００Ｕ／１のＰＲＯＤの溶液１０
μｌに対し以下の組成の第１試薬２８０μｌ、第２試薬
７０μｌを反応させ日立７１５０型自動分析装置により
主波長５４６ｎｍ、副波長７００ｎｍとし、該分析装置
の機能で３０〜４０測光ポイント間において吸光度変化
率を追跡した。この時に得られた最大吸光度変化率（ p
Ｈ７．５のとき）を１００％として相対活性として示し
た。図１に示されているようにＰＲＯＤはグッド緩衝液
中において１，５−ＡＧに対し pＨ７．０〜８．０にお
いて最大の活性を示す。
する。勿論、本発明はこれらの実施例によって限定され
るものではない。 実施例１ ＰＲＯＤの１，５−ＡＧに対する至適 pＨ Ｂｆ−ＰＲＯＤの１，５−ＡＧに対する至適 pＨを測定
し、その結果を図１に示した。測定の際の反応条件は下
記の通りである。１０００Ｕ／１のＰＲＯＤの溶液１０
μｌに対し以下の組成の第１試薬２８０μｌ、第２試薬
７０μｌを反応させ日立７１５０型自動分析装置により
主波長５４６ｎｍ、副波長７００ｎｍとし、該分析装置
の機能で３０〜４０測光ポイント間において吸光度変化
率を追跡した。この時に得られた最大吸光度変化率（ p
Ｈ７．５のとき）を１００％として相対活性として示し
た。図１に示されているようにＰＲＯＤはグッド緩衝液
中において１，５−ＡＧに対し pＨ７．０〜８．０にお
いて最大の活性を示す。
【００１９】第１試薬 pＨ５．５〜６．５の範囲の第１試薬 ＭＥＳ ２００ ｍＭ 塩化ナトリウム １５０ ｍＭ 酢酸マグネシウム １０ ｍＭ Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスルホプロピル）− ｍ−トルイジン １ ｍＭ パーオキシターゼ ５ ＫＵ／ｌ ヘキソキナーゼ ２０ ＫＵ／ｌ pＨ６．５〜７．５の範囲の第１試薬 ＰＩＰＥＳ ２００ ｍＭ 塩化ナトリウム １５０ ｍＭ 酢酸マグネシウム １０ ｍＭ Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスルホプロピル）− ｍ−トルイジン １ ｍＭ パーオキシターゼ ５ ＫＵ／ｌ ヘキソキナーゼ ２０ ＫＵ／ｌ pＨ７．５〜８．５の範囲の第１試薬 ＨＥＰＥＳ ２００ ｍＭ 塩化ナトリウム １５０ ｍＭ 酢酸マグネシウム １０ ｍＭ Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスルホプロピル）− ｍ−トルイジン １ ｍＭ パーオキシターゼ ５ ＫＵ／ｌ ヘキソキナーゼ ２０ ＫＵ／ｌ
【００２０】第２試薬 ４−アミノアンチピリン ４ ｍＭ 塩化ナトリウム １５０ ｍＭ １，５−ＡＧ １００ ｍＭ 緩衝剤 無し
【００２１】実施例２ ＡＴＰのＰＲＯＤに対する阻害
程度の pＨにおける変化 Ｂｆ−ＰＲＯＤの１，５−ＡＧに対する反応がＡＴＰに
より影響される程度をグッド緩衝液中 pＨ５．５〜８．
５の範囲で検討した。１０００Ｕ／ｌのＰＲＯＤ溶液１
０μｌに対し以下の組成の第１試薬２８０μｌ、第２試
薬７０μｌを反応させて日立７１５０型自動分析装置に
より主波長５４６ｎｍ、副波長７００ｎｍとし該分析装
置の機能で３０〜４０測光ポイント間において吸光度変
化率を追跡した。ＡＴＰによる阻害程度は各 pＨの緩衝
液中に１００ｍＭのＡＴＰを新たに加えた条件において
ＡＴＰが存在しない各場合のＰＲＯＤ活性を１００％と
して、同一 pＨ内でＡＴＰが存在した場合のＰＲＯＤ活
性を相対活性として得られた結果を図２に示した。図２
に示されるように、グッド緩衝液中においてＰＲＯＤは
ＡＴＰによりなんら阻害せず、むしろ活性が増強されこ
の傾向は pＨが上昇するに従いより顕著となった。図１
及び図２の結果から、グッド緩衝液中においては pＨ
７．０〜８．０のヘキソキナーゼの至適 pＨ範囲におい
てＢｆ−ＰＲＯＤはＡＴＰにより全く阻害されず、むし
ろ増強され１，５−ＡＧに対して良好な反応性を示すこ
とが明らかである。従って、この pＨ範囲において、好
ましくはは pＨ７．５において、効率良くグルコースを
リン酸化することができ、引続き良好な１，５−ＡＧの
検出反応が行える。
程度の pＨにおける変化 Ｂｆ−ＰＲＯＤの１，５−ＡＧに対する反応がＡＴＰに
より影響される程度をグッド緩衝液中 pＨ５．５〜８．
５の範囲で検討した。１０００Ｕ／ｌのＰＲＯＤ溶液１
０μｌに対し以下の組成の第１試薬２８０μｌ、第２試
薬７０μｌを反応させて日立７１５０型自動分析装置に
より主波長５４６ｎｍ、副波長７００ｎｍとし該分析装
置の機能で３０〜４０測光ポイント間において吸光度変
化率を追跡した。ＡＴＰによる阻害程度は各 pＨの緩衝
液中に１００ｍＭのＡＴＰを新たに加えた条件において
ＡＴＰが存在しない各場合のＰＲＯＤ活性を１００％と
して、同一 pＨ内でＡＴＰが存在した場合のＰＲＯＤ活
性を相対活性として得られた結果を図２に示した。図２
に示されるように、グッド緩衝液中においてＰＲＯＤは
ＡＴＰによりなんら阻害せず、むしろ活性が増強されこ
の傾向は pＨが上昇するに従いより顕著となった。図１
及び図２の結果から、グッド緩衝液中においては pＨ
７．０〜８．０のヘキソキナーゼの至適 pＨ範囲におい
てＢｆ−ＰＲＯＤはＡＴＰにより全く阻害されず、むし
ろ増強され１，５−ＡＧに対して良好な反応性を示すこ
とが明らかである。従って、この pＨ範囲において、好
ましくはは pＨ７．５において、効率良くグルコースを
リン酸化することができ、引続き良好な１，５−ＡＧの
検出反応が行える。
【００２２】 第１試薬 pＨ５．５〜６．５の範囲の第１試薬 ＭＥＳ ２００ ｍＭ 塩化ナトリウム １５０ ｍＭ 酢酸マグネシウム １０ ｍＭ Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスルホプロピル）− ｍ−トルイジン １ ｍＭ パーオキシターゼ ５ ＫＵ／ｌ ヘキソキナーゼ ２０ ＫＵ／ｌ ＡＴＰ ０ ｍＭまたは １００ ｍＭ pＨ６．５〜７．５の範囲の第１試薬 ＰＩＰＥＳ ２００ ｍＭ 塩化ナトリウム １５０ ｍＭ 酢酸マグネシウム １０ ｍＭ Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスルホプロピル）− ｍ−トルイジン １ ｍＭ パーオキシターゼ ５ ＫＵ／ｌ ヘキソキナーゼ ２０ ＫＵ／ｌ ＡＴＰ ０ ｍＭまたは １００ ｍＭ pＨ７．５〜８．５の範囲の第１試薬 ＨＥＰＥＳ ２００ ｍＭ 塩化ナトリウム １５０ ｍＭ 酢酸マグネシウム １０ ｍＭ Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスルホプロピル）− ｍ−トルイジン １ ｍＭ パーオキシターゼ ５ ＫＵ／ｌ ヘキソキナーゼ ２０ ＫＵ／ｌ ＡＴＰ ０ ｍＭまたは １００ ｍＭ
【００２３】第２試薬 ４−アミノアンチピリン ４ ｍＭ 塩化ナトリウム １５０ ｍＭ １，５−ＡＧ １００ ｍＭ 緩衝剤 無し
【００２４】実施例３ 本発明における測定反応タイム
コース 生理食塩水のブランク、５ｍｇ／ｄｌの１，５−ＡＧ水
溶液、および２種類のヒト血清（サンプル１及び２）を
検体として、以下の組成の第１試薬、第２試薬と反応さ
せた場合の反応タイムコースの測定を行い、得られた結
果を図３に示した。反応条件は、検体容量７μｌ、第１
試薬容量２８０μｌ、第２試薬容量７０μｌとし、主波
長５４６ｎｍ、副波長７００ｎｍで日立７１５０型自動
分析装置を用いて２ポイントアッセイにて行なった。測
定反応は５分でほぼ完了している。
コース 生理食塩水のブランク、５ｍｇ／ｄｌの１，５−ＡＧ水
溶液、および２種類のヒト血清（サンプル１及び２）を
検体として、以下の組成の第１試薬、第２試薬と反応さ
せた場合の反応タイムコースの測定を行い、得られた結
果を図３に示した。反応条件は、検体容量７μｌ、第１
試薬容量２８０μｌ、第２試薬容量７０μｌとし、主波
長５４６ｎｍ、副波長７００ｎｍで日立７１５０型自動
分析装置を用いて２ポイントアッセイにて行なった。測
定反応は５分でほぼ完了している。
【００２５】第１試薬 ＨＥＰＥＳ ２００ ｍＭ 塩化ナトリウム １５０ ｍＭ 酢酸マグネシウム １０ ｍＭ Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシスルホプロピル）− ｍ−トルイジン １ ｍＭ パーオキシターゼ ５ ＫＵ／ｌ ヘキソキナーゼ ２０ ＫＵ／ｌ ＡＴＰ １００ ｍＭ pＨ７．５
【００２６】第２試薬 ＨＥＰＥＳ ２００ ｍＭ 塩化ナトリウム １５０ ｍＭ ４−アミノアンチピリン ４ ｍＭ ＰＲＯＤ ６２．５ ＫＵ／ｌ pＨ７．５
【００２７】実施例４ １，５−ＡＧ検量線及び検体中
のグルコース消去性 ０．５ｍｇ／ｄｌ刻みで調製された０〜５ｍｇ／ｄｌの
１，５−ＡＧ水溶液を実施例３の測定条件において反応
させ、それぞれの吸光度を測定した。結果を図４にし
た。また、１５０ｍｇ／ｄｌ刻みで調製された０〜１５
００ｍｇ／ｄｌのグルコース水溶液を同様に反応させた
場合の吸光度を測定した。結果は図４に示した。図４か
ら判るように、１，５−ＡＧを反応させた場合は５ｍｇ
／ｄｌまで原点を通る良好な直線性を示した。グルコー
スを反応させた場合は１５００ｍｇ／ｄｌまでほぼ試薬
ブランクと同一の吸光度が得られ、グルコースは１５０
０ｍｇ／ｄｌまでほぼ完全に消去されている。従って本
測定条件は、充分なグルコース消去性を有し、良好な
１，５−ＡＧ定量が行えるものと判断できる。
のグルコース消去性 ０．５ｍｇ／ｄｌ刻みで調製された０〜５ｍｇ／ｄｌの
１，５−ＡＧ水溶液を実施例３の測定条件において反応
させ、それぞれの吸光度を測定した。結果を図４にし
た。また、１５０ｍｇ／ｄｌ刻みで調製された０〜１５
００ｍｇ／ｄｌのグルコース水溶液を同様に反応させた
場合の吸光度を測定した。結果は図４に示した。図４か
ら判るように、１，５−ＡＧを反応させた場合は５ｍｇ
／ｄｌまで原点を通る良好な直線性を示した。グルコー
スを反応させた場合は１５００ｍｇ／ｄｌまでほぼ試薬
ブランクと同一の吸光度が得られ、グルコースは１５０
０ｍｇ／ｄｌまでほぼ完全に消去されている。従って本
測定条件は、充分なグルコース消去性を有し、良好な
１，５−ＡＧ定量が行えるものと判断できる。
【００２８】実施例５ 添加回収試験 １，５−ＡＧの含有量が既知の患者血清を用い、それら
に１，５−ＡＧを添加して調製した検体を上記実施例３
の測定条件で反応させ、上記実施例で得られた検量線を
用いて１，５−ＡＧの定量を行った。実際に得られた定
量値（実測値）を患者血清の１，５−ＡＧ含有量と後か
らの１，５−ＡＧ添加量の和である値（理論値）で割り
算して得た値を回収率とする。結果を表１に示す。
に１，５−ＡＧを添加して調製した検体を上記実施例３
の測定条件で反応させ、上記実施例で得られた検量線を
用いて１，５−ＡＧの定量を行った。実際に得られた定
量値（実測値）を患者血清の１，５−ＡＧ含有量と後か
らの１，５−ＡＧ添加量の和である値（理論値）で割り
算して得た値を回収率とする。結果を表１に示す。
【００２９】
【表１】 平均回収率はほぼ１００％であり、本測定法が確度が高
いものであることが示される。
いものであることが示される。
【００３０】実施例６ 従来の測定法との相関性 これまで信頼性の高い１，５−ＡＧの測定法とされてき
たグルコース除去をイオン交換カラムを用いて行う方式
の酵素法（以下カラム酵素法と言う）と本発明の酵素法
の測定値の相関性を調べた。カラム酵素法は、日本化薬
株式会社ラナＡＧ（登録商標）を用いて、ヒト血清５７
検体を使用説明書の記載の通りの操作で測定を行った。
本発明の酵素法については実施例４で作成した検量線を
利用し、カラム酵素法で用いたのと同じヒト血清を検体
にし実施例３と同様の操作で測定を行った。結果は図５
に示した通りである。相関係数は０．９７であり、両測
定法間には高い相関性が認められた。
たグルコース除去をイオン交換カラムを用いて行う方式
の酵素法（以下カラム酵素法と言う）と本発明の酵素法
の測定値の相関性を調べた。カラム酵素法は、日本化薬
株式会社ラナＡＧ（登録商標）を用いて、ヒト血清５７
検体を使用説明書の記載の通りの操作で測定を行った。
本発明の酵素法については実施例４で作成した検量線を
利用し、カラム酵素法で用いたのと同じヒト血清を検体
にし実施例３と同様の操作で測定を行った。結果は図５
に示した通りである。相関係数は０．９７であり、両測
定法間には高い相関性が認められた。
【００３１】
【発明の効果】以上の実施例にも示された通り、本発明
の１，５−ＡＧの測定方法は自動分析装置への適用に即
したものである。すなわち、本発明の方法により、従来
不可能であった１，５−ＡＧの測定の自動化が可能とな
り、その他多くの臨床検査項目と同様に多数の検体を迅
速、正確、かつ多量に処理することができるようになっ
た。
の１，５−ＡＧの測定方法は自動分析装置への適用に即
したものである。すなわち、本発明の方法により、従来
不可能であった１，５−ＡＧの測定の自動化が可能とな
り、その他多くの臨床検査項目と同様に多数の検体を迅
速、正確、かつ多量に処理することができるようになっ
た。
【図１】グッド緩衝液中におけるバシジオマイセタウス
・フンギ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｏｕｓ ｆｕｎｇ
ｉ）Ｎｏ．５２由来のＰＲＯＤの１，５−ＡＧに対する
至適 pＨを示す図である。
・フンギ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｏｕｓ ｆｕｎｇ
ｉ）Ｎｏ．５２由来のＰＲＯＤの１，５−ＡＧに対する
至適 pＨを示す図である。
【図２】ＡＴＰのバシジオマイセタウス・フンギ（Ｂａ
ｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｏｕｓｆｕｎｇｉ）Ｎｏ．５２由
来のＰＲＯＤに対する阻害程度の pＨにおける変化を示
す図である。
ｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｏｕｓｆｕｎｇｉ）Ｎｏ．５２由
来のＰＲＯＤに対する阻害程度の pＨにおける変化を示
す図である。
【図３】本発明における測定反応タイムコースを示す図
である。
である。
【図４】１，５−ＡＧの検量線を示す図である。合せて
反応系のグルコース消去能力を示す図である。
反応系のグルコース消去能力を示す図である。
【図５】本発明の方法とカラム酵素法との相関性を示す
図である。
図である。
Claims (3)
- 【請求項１】 検体中の１，５−アンヒドログルシトー
ルをピラノースオキシダーゼを用いて定量する方法にお
いて、 検体中に存在する、１，５−アンヒドログルシトール以
外の糖類を、ヘキソキナーゼと大過剰のアデノシン−
５′−三リン酸によりリン酸化することにより、検体中
の１，５−アンヒドログルシトールが残留するように該
糖類を選択的に除去し、 次いで、そのまま、得られる試料中の１，５−アンヒド
ログルシトールを、ピラノースオキシダーゼとしてバシ
ジオマイセタウス・フンギ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔ
ｏｕｓ Ｆｕｎｇｉ）Ｎｏ．５２由来のピラノースオキ
シダーゼを用いて定量する、 １，５−アンヒドログルシトールの定量法。 - 【請求項２】 検体中の１，５−アンヒドログルシトー
ルに対し、ピラノースオキシダーゼをｐＨが６〜９で作
用させ、生成する過酸化水素の量から１，５−アンヒド
ログルシトールを定量する請求項１の１，５−アンヒド
ログルシトールの定量法。 - 【請求項３】 １，５−アンヒドログルシトール以外の
糖類の選択的除去をｐＨ６〜９の範囲で実施する請求項
１または２の１，５−アンヒドログルシトールの定量
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4324259A JPH07108236B2 (ja) | 1991-12-18 | 1992-12-03 | １，５−アンヒドログルシトールの定量法 |
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33489291 | 1991-12-18 | ||
| JP3-334892 | 1992-03-02 | ||
| JP4-44715 | 1992-03-02 | ||
| JP4471592 | 1992-03-02 | ||
| JP4324259A JPH07108236B2 (ja) | 1991-12-18 | 1992-12-03 | １，５−アンヒドログルシトールの定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05304997A JPH05304997A (ja) | 1993-11-19 |
| JPH07108236B2 true JPH07108236B2 (ja) | 1995-11-22 |
Family
ID=27292004
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4324259A Expired - Fee Related JPH07108236B2 (ja) | 1991-12-18 | 1992-12-03 | １，５−アンヒドログルシトールの定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07108236B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1895303B1 (en) | 2005-06-13 | 2011-05-11 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Method of assaying 1, 5-anhydroglucitol by using whole blood |
| ES2382397T3 (es) | 2006-12-14 | 2012-06-07 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Procedimiento para medir 1,5-anhidroglucitol en sangre completa |
| WO2010010881A1 (ja) | 2008-07-23 | 2010-01-28 | 日本化薬株式会社 | 溶血させた全血を用いる血中成分の測定方法及びそのキット |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3784610T2 (de) * | 1986-09-22 | 1993-09-23 | Nippon Kayaku Kk | Verfahren zur bestimmung von 1,5-anhydroglucitol und ausruestung dafuer. |
| JP2763551B2 (ja) * | 1988-08-04 | 1998-06-11 | 池田食研株式会社 | ピラノースオキシダーゼおよびその製造法 |
| JPH0771514B2 (ja) * | 1988-10-12 | 1995-08-02 | 天野製薬株式会社 | １，５−アンヒドログルシトールの定量法 |
-
1992
- 1992-12-03 JP JP4324259A patent/JPH07108236B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ＡｇｒｉｃＢｉｏｌＣｈｅｍ．５４（６），Ｐ．１３９３−１３９９，１９９０ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05304997A (ja) | 1993-11-19 |
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