JPH07101991A - ヒト単球走化活性化因子の製造方法 - Google Patents
ヒト単球走化活性化因子の製造方法Info
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- JPH07101991A JPH07101991A JP5245494A JP24549493A JPH07101991A JP H07101991 A JPH07101991 A JP H07101991A JP 5245494 A JP5245494 A JP 5245494A JP 24549493 A JP24549493 A JP 24549493A JP H07101991 A JPH07101991 A JP H07101991A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mcaf
- monocyte chemotactic
- chromatography
- human monocyte
- carrier
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 粗ヒト単球走化活性化因子溶液を、シリカ系
吸着担体を用いたクロマトグラフィー、陽イオン交換体
を用いたクロマトグラフィーおよび疎水性担体を用いた
クロマトグラフィーにより精製する。 【効果】 医薬として利用できるヒト単球走化活性化因
子を、高純度で製造することができる。
吸着担体を用いたクロマトグラフィー、陽イオン交換体
を用いたクロマトグラフィーおよび疎水性担体を用いた
クロマトグラフィーにより精製する。 【効果】 医薬として利用できるヒト単球走化活性化因
子を、高純度で製造することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は粗ヒト単球走化活性化因
子原液から純度の高いヒト単球走化活性化因子（monocy
te chemotactic and activating factor，以後ＭＣＡＦ
と呼ぶ）を製造する方法に関する。
子原液から純度の高いヒト単球走化活性化因子（monocy
te chemotactic and activating factor，以後ＭＣＡＦ
と呼ぶ）を製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＭＣＡＦは、従来から知られる単球に対
して走化性および活性化作用を有する因子である。この
因子は１９８９年ＹｏｓｉｍｕｒａらによりそのｃＤＮ
Ａがクローニングされ、構造が明らかにされた単球特異
的な遊走因子である（Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍら Annu.Re
v.Immunol.,9,617(1991) など）。ＭＣＰ−１（Monocyt
e chemo- atractant protein-1)やＧＤＣＦ（Glioma-de
rived monocyte chemotactic factor）とも称されるこ
の物質はアミノ酸７６残基からなる蛋白質であり、４残
基のシステイン基を持つ。
して走化性および活性化作用を有する因子である。この
因子は１９８９年ＹｏｓｉｍｕｒａらによりそのｃＤＮ
Ａがクローニングされ、構造が明らかにされた単球特異
的な遊走因子である（Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍら Annu.Re
v.Immunol.,9,617(1991) など）。ＭＣＰ−１（Monocyt
e chemo- atractant protein-1)やＧＤＣＦ（Glioma-de
rived monocyte chemotactic factor）とも称されるこ
の物質はアミノ酸７６残基からなる蛋白質であり、４残
基のシステイン基を持つ。
【０００３】このＭＣＡＦの精製についてはＣ．Ｏ．
Ｃ．ＺａｃｈａｒｉａｅらはｒＴＮＦ−αで刺激した腫
瘍細胞上清から透析／ヘパリンカラム／ゲル濾過／カル
ボキシメチル−シリカゲルカラム（ＨＰＬＣ）／逆相Ｈ
ＰＬＣの方法で均一な標品を得ている（J.Exp.Med.,17
1.2177(1990) ）。
Ｃ．ＺａｃｈａｒｉａｅらはｒＴＮＦ−αで刺激した腫
瘍細胞上清から透析／ヘパリンカラム／ゲル濾過／カル
ボキシメチル−シリカゲルカラム（ＨＰＬＣ）／逆相Ｈ
ＰＬＣの方法で均一な標品を得ている（J.Exp.Med.,17
1.2177(1990) ）。
【０００４】また、ＧＤＣＦとしてＹｏｓｉｍｕｒａら
はヒトグリオーマ細胞株Ｕ−１０５ＭＧを培養した上清
から透析／オレンジＡ−セファロースカラム／カルボキ
シメチルＨＰＬＣ／逆相ＨＰＬＣの方法で精製している
（J.Exp.Med.,169.1449(1989) ）。
はヒトグリオーマ細胞株Ｕ−１０５ＭＧを培養した上清
から透析／オレンジＡ−セファロースカラム／カルボキ
シメチルＨＰＬＣ／逆相ＨＰＬＣの方法で精製している
（J.Exp.Med.,169.1449(1989) ）。
【０００５】さらにＢ．Ｄｅｃｏｃｋらは腫瘍細胞をポ
リＩ：ポリＣで刺激した上清をcontrolled pore glass
beads あるいはシリカ酸／ヘパリンカラム／Ｓ陽イオン
交換体／Ｃ8 逆相高速液体クロマトグラフィーの方法で
精製している（Biochem Biophys Res.Commun.,167,904
(1990) ）。
リＩ：ポリＣで刺激した上清をcontrolled pore glass
beads あるいはシリカ酸／ヘパリンカラム／Ｓ陽イオン
交換体／Ｃ8 逆相高速液体クロマトグラフィーの方法で
精製している（Biochem Biophys Res.Commun.,167,904
(1990) ）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】上記のような実験室レ
ベルの方法では構造解析用のＭＣＡＦ標品を得ることが
できるが、動物への投与を目的とした薬理試験用の高品
位なＭＣＡＦ標品を得ることは困難である。本発明の目
的は、工業的規模の生産が可能な精製方法を見出すこと
と、得られたＭＣＡＦ標品が無菌で低発熱性の動物への
投与可能な高品質な標品を得ることにある。
ベルの方法では構造解析用のＭＣＡＦ標品を得ることが
できるが、動物への投与を目的とした薬理試験用の高品
位なＭＣＡＦ標品を得ることは困難である。本発明の目
的は、工業的規模の生産が可能な精製方法を見出すこと
と、得られたＭＣＡＦ標品が無菌で低発熱性の動物への
投与可能な高品質な標品を得ることにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明の課題を解決する
ために、本発明は以下の構成を有する。すなわち本発明
は、粗ヒトＭＣＡＦ溶液をシリカ系吸着担体を用いたク
ロマトグラフィー、陽イオン交換体を用いたクロマトグ
ラフィーおよび疎水性担体を用いたクロマトグラフィー
により精製することを特徴とするヒトＭＣＡＦの製造方
法である。さらに本発明は、得られたＭＣＡＦ溶液に揮
発性無機塩を添加し、凍結乾燥および脱塩を行うことに
よりＭＣＡＦ標品を製造する方法も提供する。
ために、本発明は以下の構成を有する。すなわち本発明
は、粗ヒトＭＣＡＦ溶液をシリカ系吸着担体を用いたク
ロマトグラフィー、陽イオン交換体を用いたクロマトグ
ラフィーおよび疎水性担体を用いたクロマトグラフィー
により精製することを特徴とするヒトＭＣＡＦの製造方
法である。さらに本発明は、得られたＭＣＡＦ溶液に揮
発性無機塩を添加し、凍結乾燥および脱塩を行うことに
よりＭＣＡＦ標品を製造する方法も提供する。
【０００８】粗ヒトＭＣＡＦ溶液としては、ヒト細胞を
刺激する方法、あるいは遺伝子工学的生産法、さらには
化学合成法など、いかなる方法で産生されたＭＣＡＦで
も適用可能であるが、ヒト細胞を合成核酸などの誘導刺
激剤を用いて産生せしめたものが望ましい。特に好まし
くは、ヒト細胞の中でも線維芽細胞を用いたものがよ
い。
刺激する方法、あるいは遺伝子工学的生産法、さらには
化学合成法など、いかなる方法で産生されたＭＣＡＦで
も適用可能であるが、ヒト細胞を合成核酸などの誘導刺
激剤を用いて産生せしめたものが望ましい。特に好まし
くは、ヒト細胞の中でも線維芽細胞を用いたものがよ
い。
【０００９】本発明で用いるシリカ系吸着担体として
は、二酸化ケイ素（シリカ）、ケイ酸塩ガラスなどが用
いられるが、好ましくは、担体自身を微小球状に製した
マイクロビーズ状のシリカ系ゲルを用いるのが良い。さ
らに粒子径としては１００〜２００メッシュのものが好
ましく用いられる。例えば、”マイクロビーズシリカゲ
ル”やＣＰＧ（Controlled pore glass)等が用いられ
る。通常これらの担体にはポアが存在するが、ポアサイ
ズとしては１００〜５００オングストロームのものが好
ましい。回収液としては、エチレングリコール等の有機
溶媒や、酸性水溶液が用いられる。好ましくは、塩酸な
どの鉱酸を希釈した酸性水溶液が用いられる。
は、二酸化ケイ素（シリカ）、ケイ酸塩ガラスなどが用
いられるが、好ましくは、担体自身を微小球状に製した
マイクロビーズ状のシリカ系ゲルを用いるのが良い。さ
らに粒子径としては１００〜２００メッシュのものが好
ましく用いられる。例えば、”マイクロビーズシリカゲ
ル”やＣＰＧ（Controlled pore glass)等が用いられ
る。通常これらの担体にはポアが存在するが、ポアサイ
ズとしては１００〜５００オングストロームのものが好
ましい。回収液としては、エチレングリコール等の有機
溶媒や、酸性水溶液が用いられる。好ましくは、塩酸な
どの鉱酸を希釈した酸性水溶液が用いられる。
【００１０】本発明では、ＭＣＡＦの純度を向上させる
ために、さらに陽イオン交換体を用いたクロマトグラフ
ィーを組み合わせることが有利である。陽イオン交換体
としてはカルボキシル基やスルホン酸基、リン酸基を持
つ担体をさすが、特にスルホプロピル基、ヘパリンを有
する担体が望ましい。また、担体の骨格としては、セル
ロース、アガロース、デキストランなどを材料とする多
糖類およびポリビニルアルコール系などの合成高分子系
などいずれでも良い。陽イオン交換体を使用する順序
は、シリカ系吸着担体の後段に使用することが好まし
い。回収液としては、中性条件で無機塩を添加する方法
が良い。特に好ましいのは、リン酸ナトリウム緩衝液に
塩化ナトリウムを添加したものである。
ために、さらに陽イオン交換体を用いたクロマトグラフ
ィーを組み合わせることが有利である。陽イオン交換体
としてはカルボキシル基やスルホン酸基、リン酸基を持
つ担体をさすが、特にスルホプロピル基、ヘパリンを有
する担体が望ましい。また、担体の骨格としては、セル
ロース、アガロース、デキストランなどを材料とする多
糖類およびポリビニルアルコール系などの合成高分子系
などいずれでも良い。陽イオン交換体を使用する順序
は、シリカ系吸着担体の後段に使用することが好まし
い。回収液としては、中性条件で無機塩を添加する方法
が良い。特に好ましいのは、リン酸ナトリウム緩衝液に
塩化ナトリウムを添加したものである。
【００１１】そしてさらに純度を向上させるために疎水
性担体を利用したクロマトグラフィーを用いることが望
ましい。ここに用いる疎水性担体は、アルキル基（Ｃ1
〜Ｃ18）、フェニル基、オクチル基などが担体骨格に化
学的に結合されたものならいずれでもよいが、アルキル
基を有するものが好ましい。骨格担体としては、セルロ
ース、アガロースなどを材料とする多糖類系および合成
高分子系などの不溶性担体を用いることができる。ま
た、特に逆相の高速液体クロマトグラフィーを用いる場
合、極めて高い純度のＭＣＡＦが得られる。回収液とし
てはこの場合、トリフロロ酢酸を含むアセトニトリル−
水系を用いることが好ましい。
性担体を利用したクロマトグラフィーを用いることが望
ましい。ここに用いる疎水性担体は、アルキル基（Ｃ1
〜Ｃ18）、フェニル基、オクチル基などが担体骨格に化
学的に結合されたものならいずれでもよいが、アルキル
基を有するものが好ましい。骨格担体としては、セルロ
ース、アガロースなどを材料とする多糖類系および合成
高分子系などの不溶性担体を用いることができる。ま
た、特に逆相の高速液体クロマトグラフィーを用いる場
合、極めて高い純度のＭＣＡＦが得られる。回収液とし
てはこの場合、トリフロロ酢酸を含むアセトニトリル−
水系を用いることが好ましい。
【００１２】さらに本発明では上記の結果得られた高純
度ＭＣＡＦ溶液の後処理として、疎水性クロマトグラフ
ィー時に使用可能な有機溶媒の除去や固形化の方法を含
む。すなわち、得られた高純度ＭＣＡＦ溶液に揮発性無
機塩を添加し、その後、凍結乾燥および脱塩するもので
ある。揮発性無機塩としては炭酸アンモニウム、酢酸ア
ンモニウム、アンモニウム水などが用いられる。また、
揮発性無機塩を添加後のＭＣＡＦ溶液のｐＨは中性付近
（ｐＨ６〜８）に調整することが好ましい。その後、凍
結乾燥機により乾燥することで固形化ができる。脱塩す
る場合の凍結乾燥は、完全に乾燥する前に、すなわち、
有機溶媒が除去された段階で停止し、次いで、解凍した
溶液をゲル濾過クロマトグラフィーなどにより脱塩し、
液組成置換を行なうのが好ましい。このようにして、蛋
白質としての活性を保持したまま、揮発性有機溶媒の除
去が可能であり、高純度で安全性の高い標品の提供がで
きる。
度ＭＣＡＦ溶液の後処理として、疎水性クロマトグラフ
ィー時に使用可能な有機溶媒の除去や固形化の方法を含
む。すなわち、得られた高純度ＭＣＡＦ溶液に揮発性無
機塩を添加し、その後、凍結乾燥および脱塩するもので
ある。揮発性無機塩としては炭酸アンモニウム、酢酸ア
ンモニウム、アンモニウム水などが用いられる。また、
揮発性無機塩を添加後のＭＣＡＦ溶液のｐＨは中性付近
（ｐＨ６〜８）に調整することが好ましい。その後、凍
結乾燥機により乾燥することで固形化ができる。脱塩す
る場合の凍結乾燥は、完全に乾燥する前に、すなわち、
有機溶媒が除去された段階で停止し、次いで、解凍した
溶液をゲル濾過クロマトグラフィーなどにより脱塩し、
液組成置換を行なうのが好ましい。このようにして、蛋
白質としての活性を保持したまま、揮発性有機溶媒の除
去が可能であり、高純度で安全性の高い標品の提供がで
きる。
【００１３】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的
に説明する。
に説明する。
【００１４】実施例１ 線維芽細胞をポリＩ：ポリＣで刺激し、得られた上清を
粗ＭＣＡＦ原液とした。この上清２０リットルに対し、
シリカ系無機吸着剤としてマイクロビーズシリカゲル
（富士デビソン製、ポアサイズ：１００オングストロー
ム）を１００ミリリットル用いた。この担体はあらかじ
め、リン酸ナトリウム緩衝液中で高圧蒸気滅菌（１２１
℃、３０分）した後、内径２６ミリメートルのガラスカ
ラムに充填した。これに細胞片を除去する目的でフィル
ターで濾過しながら、粗ＭＣＡＦ原液を流速２５０ミリ
リットル／時で流し、吸着させた。全量流した後、１Ｍ
ＮａＣｌを含むリン酸ナトリウム緩衝液４００ミリリ
ットルおよび０．１３５ＭＮａＣｌを含む１０ｍＭリン
酸ナトリウム緩衝液５００ミリリットルで順次洗浄を行
ってから、２０ｍＭの塩酸（ｐＨ２）を通じることでＭ
ＣＡＦを含む画分を回収した。この画分を０．３Ｍリン
酸水素三ナトリウム水溶液を添加してｐＨ７．０に調節
した。この時の液量は２７０ミリリットルであった。
粗ＭＣＡＦ原液とした。この上清２０リットルに対し、
シリカ系無機吸着剤としてマイクロビーズシリカゲル
（富士デビソン製、ポアサイズ：１００オングストロー
ム）を１００ミリリットル用いた。この担体はあらかじ
め、リン酸ナトリウム緩衝液中で高圧蒸気滅菌（１２１
℃、３０分）した後、内径２６ミリメートルのガラスカ
ラムに充填した。これに細胞片を除去する目的でフィル
ターで濾過しながら、粗ＭＣＡＦ原液を流速２５０ミリ
リットル／時で流し、吸着させた。全量流した後、１Ｍ
ＮａＣｌを含むリン酸ナトリウム緩衝液４００ミリリ
ットルおよび０．１３５ＭＮａＣｌを含む１０ｍＭリン
酸ナトリウム緩衝液５００ミリリットルで順次洗浄を行
ってから、２０ｍＭの塩酸（ｐＨ２）を通じることでＭ
ＣＡＦを含む画分を回収した。この画分を０．３Ｍリン
酸水素三ナトリウム水溶液を添加してｐＨ７．０に調節
した。この時の液量は２７０ミリリットルであった。
【００１５】次にこの時の生成する沈殿物を濾過しなが
らスルホン酸基を有する”Ｓ−セファロースＦＦ”（フ
ァルマシア製）２ミリリットルのカラムに流速３０ミリ
リットル／時の速さで流した。次に１０ｍＭリン酸ナト
リウム緩衝液（ｐＨ７．０）１０ミリリットルで洗浄
後、２ＭＮａＣｌを含む２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝
液（ｐＨ７．２）２３ミリリットルを通液し、ＭＣＡＦ
画分を得た。
らスルホン酸基を有する”Ｓ−セファロースＦＦ”（フ
ァルマシア製）２ミリリットルのカラムに流速３０ミリ
リットル／時の速さで流した。次に１０ｍＭリン酸ナト
リウム緩衝液（ｐＨ７．０）１０ミリリットルで洗浄
後、２ＭＮａＣｌを含む２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝
液（ｐＨ７．２）２３ミリリットルを通液し、ＭＣＡＦ
画分を得た。
【００１６】さらにこのＭＣＡＦ画分の一部をＣ18逆相
高速液体クロマトグラフィーにかけた。条件としては
０．１％トリフロロ酢酸を含むアセトニトリルの直線グ
ラジエント方式を用いた。これにより出現するＭＣＡＦ
ピークを分取することで９９．１％の純度のＭＣＡＦを
得た。
高速液体クロマトグラフィーにかけた。条件としては
０．１％トリフロロ酢酸を含むアセトニトリルの直線グ
ラジエント方式を用いた。これにより出現するＭＣＡＦ
ピークを分取することで９９．１％の純度のＭＣＡＦを
得た。
【００１７】実施例２ 実施例１で得た高純度ＭＣＡＦ溶液１ミリリットルに対
し、０．１Ｍ炭酸アンモニウムを０．１ミリリットルの
割合で添加し、混合した（ｐＨ７．１）。これを凍結乾
燥機に入れ、アセトニトリル臭がなくなるまで凍結乾燥
させた（約３０分）。その後、凍結乾燥機から取り出
し、室温で融解させた。
し、０．１Ｍ炭酸アンモニウムを０．１ミリリットルの
割合で添加し、混合した（ｐＨ７．１）。これを凍結乾
燥機に入れ、アセトニトリル臭がなくなるまで凍結乾燥
させた（約３０分）。その後、凍結乾燥機から取り出
し、室温で融解させた。
【００１８】こうして脱有機溶媒したＭＣＡＦ溶液２．
１ミリリットルをリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．
０、等張液）を展開溶液とするＧ２５カラム（ファルマ
シア製、ゲル体積２５ミリリットル）にかけ、蛋白質溶
出画分４．３ミリリットルを得た。Ｇ２５カラムは使用
前処理として、あらかじめ０．１Ｍ ＮａＯＨ溶液を流
して滅菌したのち、１％ヒト血清アルブミン水溶液（リ
ン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７．０）を流して担体表面を
蛋白質でコーティングし、さらにリン酸ナトリウム緩衝
液を流して、未吸着のヒト血清アルブミンを洗浄してお
いた。
１ミリリットルをリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．
０、等張液）を展開溶液とするＧ２５カラム（ファルマ
シア製、ゲル体積２５ミリリットル）にかけ、蛋白質溶
出画分４．３ミリリットルを得た。Ｇ２５カラムは使用
前処理として、あらかじめ０．１Ｍ ＮａＯＨ溶液を流
して滅菌したのち、１％ヒト血清アルブミン水溶液（リ
ン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７．０）を流して担体表面を
蛋白質でコーティングし、さらにリン酸ナトリウム緩衝
液を流して、未吸着のヒト血清アルブミンを洗浄してお
いた。
【００１９】こうして得られたＭＣＡＦ溶液（等張）を
さらに無菌濾過（０．２マイクロメートル，ゲルマン
製）した。この標品のエンドトキシン含量は”エンドス
ペーシー”（生化学工業製）による測定で０．０５エン
ドトキシンユニット／ミリリットルであった。また、Ｃ
18逆相高速液体クロマトグラフィーによる分析では９
８．９％であった。このようにして高純度で安全性が高
いＭＣＡＦ標品を得た。
さらに無菌濾過（０．２マイクロメートル，ゲルマン
製）した。この標品のエンドトキシン含量は”エンドス
ペーシー”（生化学工業製）による測定で０．０５エン
ドトキシンユニット／ミリリットルであった。また、Ｃ
18逆相高速液体クロマトグラフィーによる分析では９
８．９％であった。このようにして高純度で安全性が高
いＭＣＡＦ標品を得た。
【００２０】精製したＭＣＡＦを、特願平４−３３２９
４３に記載した分析法によって分析したところ、２１０
マイクログラム／ミリリットルであった。この分析法に
おいて、Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ社から入手したヒトＭＣ
ＡＦを標準品として分析したところ、ＭＣＡＦ濃度は１
９７マイクログラム／ミリリットルであった。
４３に記載した分析法によって分析したところ、２１０
マイクログラム／ミリリットルであった。この分析法に
おいて、Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ社から入手したヒトＭＣ
ＡＦを標準品として分析したところ、ＭＣＡＦ濃度は１
９７マイクログラム／ミリリットルであった。
【００２１】
【発明の効果】本発明によればヒト細胞や動物細胞、大
腸菌由来のＭＣＡＦを高純度で製造することができる。
本発明に係るＭＣＡＦは単球遊走作用や、単球自身の活
性化作用があるため、免疫活性化作用や抗腫瘍作用への
用途や創傷治癒剤などの医薬として利用しうる有用な物
質である。また、診断薬として血中などのＭＣＡＦ濃度
を測定するための標準品としても利用できる。
腸菌由来のＭＣＡＦを高純度で製造することができる。
本発明に係るＭＣＡＦは単球遊走作用や、単球自身の活
性化作用があるため、免疫活性化作用や抗腫瘍作用への
用途や創傷治癒剤などの医薬として利用しうる有用な物
質である。また、診断薬として血中などのＭＣＡＦ濃度
を測定するための標準品としても利用できる。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 1/18 8318−4Ｈ 1/20 8318−4Ｈ 1/36 8318−4Ｈ // Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＢＤ ＡＤＳ ＡＤＵ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＵ
Claims (2)
- 【請求項１】 粗ヒト単球走化活性化因子溶液を、シリ
カ系吸着担体を用いたクロマトグラフィー、陽イオン交
換体を用いたクロマトグラフィーおよび疎水性担体を用
いたクロマトグラフィーにより精製することを特徴とす
るヒト単球走化活性化因子の製造方法。 - 【請求項２】 請求項１で得られたヒト単球走化活性化
因子溶液に、さらに揮発性無機塩を添加し、凍結乾燥お
よび脱塩を行うことを特徴とするヒト単球走化活性化因
子の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5245494A JPH07101991A (ja) | 1993-09-30 | 1993-09-30 | ヒト単球走化活性化因子の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5245494A JPH07101991A (ja) | 1993-09-30 | 1993-09-30 | ヒト単球走化活性化因子の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07101991A true JPH07101991A (ja) | 1995-04-18 |
Family
ID=17134506
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5245494A Pending JPH07101991A (ja) | 1993-09-30 | 1993-09-30 | ヒト単球走化活性化因子の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07101991A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6559290B1 (en) | 1996-03-18 | 2003-05-06 | Kaneka Corporation | Method for removing a chemokine |
-
1993
- 1993-09-30 JP JP5245494A patent/JPH07101991A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6559290B1 (en) | 1996-03-18 | 2003-05-06 | Kaneka Corporation | Method for removing a chemokine |
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