JPH067155A - 糸状性細菌溶菌能を有するバチルス ズブチリス ｋｗｉ−８菌株 - Google Patents
糸状性細菌溶菌能を有するバチルス ズブチリス ｋｗｉ−８菌株Info
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- JPH067155A JPH067155A JP16766092A JP16766092A JPH067155A JP H067155 A JPH067155 A JP H067155A JP 16766092 A JP16766092 A JP 16766092A JP 16766092 A JP16766092 A JP 16766092A JP H067155 A JPH067155 A JP H067155A
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- kwi
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 バチルス属に属し、かつ糸状性細菌溶菌能を
有するバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＫＷＩ−８）菌株。この菌
株は活性汚泥から分離されたもので、バチルス ズブチ
リスの新規な菌株である。 【効果】 この菌株を培養した培養液は糸状性細菌を溶
菌することができるので、この培養液を活性汚泥と混合
することにより、活性汚泥の有用微生物や環境に悪影響
を及ぼすことなく、効果的に糸状性バルキングを防止で
きる。
有するバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＫＷＩ−８）菌株。この菌
株は活性汚泥から分離されたもので、バチルス ズブチ
リスの新規な菌株である。 【効果】 この菌株を培養した培養液は糸状性細菌を溶
菌することができるので、この培養液を活性汚泥と混合
することにより、活性汚泥の有用微生物や環境に悪影響
を及ぼすことなく、効果的に糸状性バルキングを防止で
きる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規なバチルス ズブチ
リス ＫＷＩ−８（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ ＫＷＩ−８）菌株に関し、さらに詳しくは糸状性細
菌を溶菌する新規なバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８
菌株に関する。
リス ＫＷＩ−８（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ ＫＷＩ−８）菌株に関し、さらに詳しくは糸状性細
菌を溶菌する新規なバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８
菌株に関する。
【０００２】
【従来の技術】生物処理において、活性汚泥の圧密性が
低下する現象はバルキングとして知られている。このよ
うなバルキングが発生すると、活性汚泥の分離性が悪化
し、処理効率が低下するので、生物処理を安定して行う
ために、バルキングの発生を防止することが重要であ
る。バルキングの原因の大半は糸状性細菌の異常増殖に
よるとされている。このため糸状性細菌の増殖を阻止し
て、バルキングを防止し、活性汚泥の圧密性を回復させ
るために、次亜塩素酸等の化学殺菌剤、第四級アミン等
の界面活性剤、各種凝集剤、沈降助剤のほか、栄養塩と
微生物からなる生物製剤などが現在使用されている。
低下する現象はバルキングとして知られている。このよ
うなバルキングが発生すると、活性汚泥の分離性が悪化
し、処理効率が低下するので、生物処理を安定して行う
ために、バルキングの発生を防止することが重要であ
る。バルキングの原因の大半は糸状性細菌の異常増殖に
よるとされている。このため糸状性細菌の増殖を阻止し
て、バルキングを防止し、活性汚泥の圧密性を回復させ
るために、次亜塩素酸等の化学殺菌剤、第四級アミン等
の界面活性剤、各種凝集剤、沈降助剤のほか、栄養塩と
微生物からなる生物製剤などが現在使用されている。
【０００３】しかし、化学薬剤および界面活性剤は、そ
の作用が劇的かつ無差別的であるため、活性汚泥の有用
微生物の増殖を阻害することがあるほか、放流水に残存
する可能性があり、環境への悪影響が懸念される。凝集
剤および沈降助剤は、汚泥の凝集および沈降に関与する
だけで本質的な解決にはならないうえ、連続投入が要求
される。生物製剤は効果がはっきりするまでに多大な時
間を要し、即効性がない。このため有用微生物や周囲の
環境に悪影響を与えず、しかも短期間で確実に糸状性細
菌だけを除去する方法が求められている。従って溶菌微
生物や溶菌酵素の利用は、この問題に対する一つの解決
策になり得る。
の作用が劇的かつ無差別的であるため、活性汚泥の有用
微生物の増殖を阻害することがあるほか、放流水に残存
する可能性があり、環境への悪影響が懸念される。凝集
剤および沈降助剤は、汚泥の凝集および沈降に関与する
だけで本質的な解決にはならないうえ、連続投入が要求
される。生物製剤は効果がはっきりするまでに多大な時
間を要し、即効性がない。このため有用微生物や周囲の
環境に悪影響を与えず、しかも短期間で確実に糸状性細
菌だけを除去する方法が求められている。従って溶菌微
生物や溶菌酵素の利用は、この問題に対する一つの解決
策になり得る。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、バチ
ルス属に属し、かつ糸状性細菌溶菌能を有する新規な微
生物を提供することである。
ルス属に属し、かつ糸状性細菌溶菌能を有する新規な微
生物を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは糸状性細菌
を溶菌する微生物を広く自然界から探索し、活性汚泥か
ら単離したバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８菌株が糸
状性細菌を溶菌することを見いだし、本発明を完成し
た。すなわち本発明は、バチルス属に属し、かつ糸状性
細菌溶菌能を有するバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８
菌株である。
を溶菌する微生物を広く自然界から探索し、活性汚泥か
ら単離したバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８菌株が糸
状性細菌を溶菌することを見いだし、本発明を完成し
た。すなわち本発明は、バチルス属に属し、かつ糸状性
細菌溶菌能を有するバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８
菌株である。
【０００６】本発明のバチルス ズブチリス ＫＷＩ−
８菌株は、活性汚泥、土壌など、自然界から分離される
新規な菌株であり、通商産業省工業技術院微生物工業技
術研究所に、微工研菌寄第１２９２６号（ＦＥＲＭ Ｐ
−１２９２６）の微生物受託番号で寄託されている。
８菌株は、活性汚泥、土壌など、自然界から分離される
新規な菌株であり、通商産業省工業技術院微生物工業技
術研究所に、微工研菌寄第１２９２６号（ＦＥＲＭ Ｐ
−１２９２６）の微生物受託番号で寄託されている。
【０００７】本発明のバチルス ズブチリス ＫＷＩ−
８菌株は、活性汚泥、土壌などの分離源からスクリーニ
ングにより単離される。分離源は予め約８０℃で２０分
間程度の加熱処理を施しておくのが好ましい。スクリー
ニングは、分離源となる試料を糸状性細菌を含む選択培
地中で培養し、溶菌斑を形成した菌を採取することによ
り行う。このようなスクリーニングとしては、次の一次
スクリーニングおよび二次スクリーニングを組合せて行
うのが好ましい。
８菌株は、活性汚泥、土壌などの分離源からスクリーニ
ングにより単離される。分離源は予め約８０℃で２０分
間程度の加熱処理を施しておくのが好ましい。スクリー
ニングは、分離源となる試料を糸状性細菌を含む選択培
地中で培養し、溶菌斑を形成した菌を採取することによ
り行う。このようなスクリーニングとしては、次の一次
スクリーニングおよび二次スクリーニングを組合せて行
うのが好ましい。
【０００８】（一次スクリーニング）糸状性細菌を含む
活性汚泥を遠心分離し、さらにホモジェナイズした後、
ポリペプトン、酵母エキス、リン酸二水素カリウム、硫
酸マグネシウムおよび塩化カルシウムを含む培地（ｐＨ
７．２）に添加し、ｐＨを７．０に調整した後、１１０
℃で１５分間オートクレーブで処理して糸状性細菌を滅
菌した後、プレートにする。このプレートに滅菌水で適
当に希釈した分離源をスプレッドし、３０℃で２〜３日
間インキュベートする。そしてコロニーの周囲に溶菌斑
を形成した菌を採取し、二次スクリーニングに供すると
ともに、再度プレートにまいて単一であることを確認す
る。
活性汚泥を遠心分離し、さらにホモジェナイズした後、
ポリペプトン、酵母エキス、リン酸二水素カリウム、硫
酸マグネシウムおよび塩化カルシウムを含む培地（ｐＨ
７．２）に添加し、ｐＨを７．０に調整した後、１１０
℃で１５分間オートクレーブで処理して糸状性細菌を滅
菌した後、プレートにする。このプレートに滅菌水で適
当に希釈した分離源をスプレッドし、３０℃で２〜３日
間インキュベートする。そしてコロニーの周囲に溶菌斑
を形成した菌を採取し、二次スクリーニングに供すると
ともに、再度プレートにまいて単一であることを確認す
る。
【０００９】（二次スクリーニング）一次スクリーニン
グではオートクレーブで滅菌した糸状性細菌を用いてス
クリーニングしているので、二次スクリーニングでは、
一次スクリーニングでスクリーニングされた菌株につい
て、生きている糸状性細菌を用いて溶菌活性を判定し、
スクリーニングを行う。二次スクリーニングの具体的な
方法は、まず一次スクリーニングと同じ液体培地に一次
スクリーニングで分離した菌を植菌し、３０℃で２日間
培養する。次にこの培養液を１００００Ｇで１０分間遠
心分離した後、上清の溶菌活性を判定する。
グではオートクレーブで滅菌した糸状性細菌を用いてス
クリーニングしているので、二次スクリーニングでは、
一次スクリーニングでスクリーニングされた菌株につい
て、生きている糸状性細菌を用いて溶菌活性を判定し、
スクリーニングを行う。二次スクリーニングの具体的な
方法は、まず一次スクリーニングと同じ液体培地に一次
スクリーニングで分離した菌を植菌し、３０℃で２日間
培養する。次にこの培養液を１００００Ｇで１０分間遠
心分離した後、上清の溶菌活性を判定する。
【００１０】溶菌活性の判定は、生きている糸状性細菌
を含む汚泥を前記上清に加え、３０℃で一晩インキュベ
ートした後、位相差顕微鏡により観察し、糸状性細菌の
溶菌具合を判定する。対照としては、前記上清の代りに
滅菌した上清を用いる。以上の位相差顕微鏡による観察
から、一次スクリーニングされた菌株の糸状性細菌に対
する溶菌活性を判定し、糸状性細菌に対する溶菌能を確
認する。
を含む汚泥を前記上清に加え、３０℃で一晩インキュベ
ートした後、位相差顕微鏡により観察し、糸状性細菌の
溶菌具合を判定する。対照としては、前記上清の代りに
滅菌した上清を用いる。以上の位相差顕微鏡による観察
から、一次スクリーニングされた菌株の糸状性細菌に対
する溶菌活性を判定し、糸状性細菌に対する溶菌能を確
認する。
【００１１】次に本発明のバチルス ズブチリス ＫＷ
Ｉ−８菌株の糸状性細菌溶菌能の活性測定法および菌学
的性質について説明する。 （活性測定法）活性測定法の原理はＳｈｕｇａｒ Ｄ．
ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
Ａｃｔａ． ８：３０２−３０９（１９５２）に記され
た溶菌酵素リゾチームの活性測定法と原理的に同じであ
り、この方法を糸状性細菌に適するように修飾した。
Ｉ−８菌株の糸状性細菌溶菌能の活性測定法および菌学
的性質について説明する。 （活性測定法）活性測定法の原理はＳｈｕｇａｒ Ｄ．
ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
Ａｃｔａ． ８：３０２−３０９（１９５２）に記され
た溶菌酵素リゾチームの活性測定法と原理的に同じであ
り、この方法を糸状性細菌に適するように修飾した。
【００１２】すなわち糸状性細菌スファエロチルス ナ
タンスを５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）に懸
濁し、ホモジェナイズする。この懸濁液Ｘｍｌに本発明
のバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８菌株の培養液Ｙｍ
ｌを加えて、添加直後（０時間）の吸光度を６６０ｎｍ
で測定する。続いて４０℃でインキュベーションし、１
時間後に再度吸光度を測定する。また対照として培養液
を含まないものについても測定する。この測定値を下記
の式に代入して活性を求める。
タンスを５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）に懸
濁し、ホモジェナイズする。この懸濁液Ｘｍｌに本発明
のバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８菌株の培養液Ｙｍ
ｌを加えて、添加直後（０時間）の吸光度を６６０ｎｍ
で測定する。続いて４０℃でインキュベーションし、１
時間後に再度吸光度を測定する。また対照として培養液
を含まないものについても測定する。この測定値を下記
の式に代入して活性を求める。
【００１３】
【数１】ＡＣＴＩＶＩＴＹ＝｛（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−
Ｄ）｝＊（Ｘ＋Ｙ）／Ｙ Ａ＝培養液を加えた１時間後の吸光度 Ｂ＝培養液を加えた０時間の吸光度 Ｃ＝培養液を加えない１時間後の吸光度 Ｄ＝培養液を加えない０時間の吸光度 Ｘ＝糸状性細菌の懸濁液の量（ｍｌ） Ｙ＝培養液の量（ｍｌ） つまり１ユニット（Ｕ）は、酵素液（培養液）１ｍｌが
４０℃で１時間に１ｍｌの懸濁液の吸光度を０．００１
下げる能力である。
Ｄ）｝＊（Ｘ＋Ｙ）／Ｙ Ａ＝培養液を加えた１時間後の吸光度 Ｂ＝培養液を加えた０時間の吸光度 Ｃ＝培養液を加えない１時間後の吸光度 Ｄ＝培養液を加えない０時間の吸光度 Ｘ＝糸状性細菌の懸濁液の量（ｍｌ） Ｙ＝培養液の量（ｍｌ） つまり１ユニット（Ｕ）は、酵素液（培養液）１ｍｌが
４０℃で１時間に１ｍｌの懸濁液の吸光度を０．００１
下げる能力である。
【００１４】（菌学的性質）次に本発明のバチルス ズ
ブチリス ＫＷＩ−８菌株の菌学的性質について説明す
る。なお菌学的性質の試験および分類方法は、下記の文
献に基づいて行った。長谷川武治ら著、学会出版センタ
ー発行「＜改訂版＞微生物の同定」（１９８４）および
バージェイス マニュアル オブ システマティック
バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ
ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ）（１９８４）
ブチリス ＫＷＩ−８菌株の菌学的性質について説明す
る。なお菌学的性質の試験および分類方法は、下記の文
献に基づいて行った。長谷川武治ら著、学会出版センタ
ー発行「＜改訂版＞微生物の同定」（１９８４）および
バージェイス マニュアル オブ システマティック
バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ
ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ）（１９８４）
【００１５】（１）形態 １．細胞の形および大きさ：幅０．６〜１．０μｍ、長
さ１．５〜４μｍの桿菌 ２．運動性：あり ３．胞子：あり ４．グラム染色：陽性 ５．抗酸性：陰性
さ１．５〜４μｍの桿菌 ２．運動性：あり ３．胞子：あり ４．グラム染色：陽性 ５．抗酸性：陰性
【００１６】（２）生育状態（培地ｐＨ７．２） １．肉汁寒天平板培養：円形または偏平状である。縁は
ギザギザで培養時間の経過とともにシワが生ずる。 ２．肉汁寒天斜面培養：拡帯状に生育する。培養時間の
経過につれてシワが生じ、寒天は茶褐色に変化する。 ３．肉汁液体培養：生育は良好で、培養液は混濁する。 ４．リトマスミルク：酸性を呈する。
ギザギザで培養時間の経過とともにシワが生ずる。 ２．肉汁寒天斜面培養：拡帯状に生育する。培養時間の
経過につれてシワが生じ、寒天は茶褐色に変化する。 ３．肉汁液体培養：生育は良好で、培養液は混濁する。 ４．リトマスミルク：酸性を呈する。
【００１７】（３）生理学的性質 １．硝酸塩の還元：陽性 ２．脱窒反応：陰性 ３．ＭＲテスト：陰性 ４．ＶＰテスト：陽性 ５．インドールの産生：陰性 ６．硫化水素の生成：陰性 ７．デンプンの加水分解：陽性 ８．クエン酸の利用：Ｋｏｓｅｒの培地、Ｃｈｒｉｓｔ
ｅｎｓｅｎの培地、Ｓｉｍｍｏｎｓの培地とも全て利用
する。 ９．無機窒素原の利用：硝酸塩、硫安ともに陽性 １０．色素の生成：水溶性の褐色の色素を生成する。 １１．ウレアーゼ：陰性 １２．オキシダーゼ：陽性 １３．カタラーゼ：陽性 １４．生育の範囲：ｐＨ；４〜１１で生育、６〜８が最
適。温度；１６〜４７℃で生育、３０〜３７℃が最適。 １５．酸素に対する態度：通性嫌気性 １６．ＯＦテスト：Ｆ １７．糖類から酸およびガスの生成の有無：Ｄ−グルコ
ース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−アラビノース、Ｄ−ラク
トース、Ｄ−トレハロース、Ｄ−マンニトール、Ｄ−マ
ルトース、Ｄ−シュクロース、Ｄ−グリセロール、Ｄ−
デンプン、Ｄ−マンノース、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−イ
ノシトールを利用し、酸を生成するが、ガスの発生は認
められない。Ｄ−キシロース、Ｄ−ガラクトースは利用
しない。
ｅｎｓｅｎの培地、Ｓｉｍｍｏｎｓの培地とも全て利用
する。 ９．無機窒素原の利用：硝酸塩、硫安ともに陽性 １０．色素の生成：水溶性の褐色の色素を生成する。 １１．ウレアーゼ：陰性 １２．オキシダーゼ：陽性 １３．カタラーゼ：陽性 １４．生育の範囲：ｐＨ；４〜１１で生育、６〜８が最
適。温度；１６〜４７℃で生育、３０〜３７℃が最適。 １５．酸素に対する態度：通性嫌気性 １６．ＯＦテスト：Ｆ １７．糖類から酸およびガスの生成の有無：Ｄ−グルコ
ース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−アラビノース、Ｄ−ラク
トース、Ｄ−トレハロース、Ｄ−マンニトール、Ｄ−マ
ルトース、Ｄ−シュクロース、Ｄ−グリセロール、Ｄ−
デンプン、Ｄ−マンノース、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−イ
ノシトールを利用し、酸を生成するが、ガスの発生は認
められない。Ｄ−キシロース、Ｄ−ガラクトースは利用
しない。
【００１８】（４）その他の性質 １．塩化ナトリウムの耐性：１０％塩化ナトリウム存在
下でも生育する。 ２．ゼラチンの液化：陽性 ３．Ｔｗｅｅｎの分解：Ｔｗｅｅｎ４０、６０および８
０を分解する。 ４．ＤＮａｓｅ：陰性 ５．β−ガラクトシダーゼ：陰性 ６．アルギニンジヒドラーゼ：陰性 ７．リジンデカルボキシラーゼ：陰性 ８．オルニチンデカルボキシラーゼ：陰性 ９．トリプトファンデアミナーゼ：陰性
下でも生育する。 ２．ゼラチンの液化：陽性 ３．Ｔｗｅｅｎの分解：Ｔｗｅｅｎ４０、６０および８
０を分解する。 ４．ＤＮａｓｅ：陰性 ５．β−ガラクトシダーゼ：陰性 ６．アルギニンジヒドラーゼ：陰性 ７．リジンデカルボキシラーゼ：陰性 ８．オルニチンデカルボキシラーゼ：陰性 ９．トリプトファンデアミナーゼ：陰性
【００１９】上記の菌学的性質から前記文献の分類方法
に基づいて検索した結果、バチルス属と決定した。バチ
ルス属の公知の菌種と比較すると、本発明の菌株はバチ
ルスズブチリスと酷似している。しかしキシロースの資
化性（バチルス ズブチリスは資化する）という点で、
本発明の菌株とバチルス ズブチリスとは異なってい
る。
に基づいて検索した結果、バチルス属と決定した。バチ
ルス属の公知の菌種と比較すると、本発明の菌株はバチ
ルスズブチリスと酷似している。しかしキシロースの資
化性（バチルス ズブチリスは資化する）という点で、
本発明の菌株とバチルス ズブチリスとは異なってい
る。
【００２０】以上の通り、本発明の菌株は公知の菌株と
は区別されるため、バチルス ズブチリスに属する新菌
株と判断され、バチルス ズブチリス ＫＷＩ−８と命
名し、前記の通り、平成４年４月２１日に通商産業省工
業技術院微生物工業技術研究所に寄託された。
は区別されるため、バチルス ズブチリスに属する新菌
株と判断され、バチルス ズブチリス ＫＷＩ−８と命
名し、前記の通り、平成４年４月２１日に通商産業省工
業技術院微生物工業技術研究所に寄託された。
【００２１】本発明のバチルス ズブチリス ＫＷＩ−
８菌株を培養するために用いられる培地の栄養源として
は、炭素源、窒素源、無機塩等、微生物の生育に必要で
あって、この菌株が資化可能な栄養源であればいかなる
ものでも使用でき、通常の好気的な培養方法により培養
することができる。
８菌株を培養するために用いられる培地の栄養源として
は、炭素源、窒素源、無機塩等、微生物の生育に必要で
あって、この菌株が資化可能な栄養源であればいかなる
ものでも使用でき、通常の好気的な培養方法により培養
することができる。
【００２２】好ましい培養方法としては、炭素源および
窒素源としてペプトン、トリプトン、酵母エキス等、無
機塩としてリン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、
塩化カルシウム等を用い、培地のｐＨ４〜１１、好まし
くは６〜８、最も好ましくは７付近、温度１６〜４７
℃、好ましくは３０〜３７℃、最も好ましくは３０℃で
好気的に培養するのが望ましい。
窒素源としてペプトン、トリプトン、酵母エキス等、無
機塩としてリン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、
塩化カルシウム等を用い、培地のｐＨ４〜１１、好まし
くは６〜８、最も好ましくは７付近、温度１６〜４７
℃、好ましくは３０〜３７℃、最も好ましくは３０℃で
好気的に培養するのが望ましい。
【００２３】このような条件で培養することにより、培
養開始後２４〜７２時間で糸状性細菌を溶菌する培養液
を得ることができる。この培養液はそのまま、または遠
心分離等の手段により固形分を除去した後、糸状性細
菌、例えばスファエロチルスナタンス（Ｓｐｈａｅｒｏ
ｔｉｌｕｓ ｎａｔａｎｓ）、タイプ０２１Ｎ、タイプ
１７０１等の溶菌に使用できる。なお溶菌作用はバチル
ス ズブチリス ＫＷＩ−８菌株の生産する酵素による
ものと推測される。
養開始後２４〜７２時間で糸状性細菌を溶菌する培養液
を得ることができる。この培養液はそのまま、または遠
心分離等の手段により固形分を除去した後、糸状性細
菌、例えばスファエロチルスナタンス（Ｓｐｈａｅｒｏ
ｔｉｌｕｓ ｎａｔａｎｓ）、タイプ０２１Ｎ、タイプ
１７０１等の溶菌に使用できる。なお溶菌作用はバチル
ス ズブチリス ＫＷＩ−８菌株の生産する酵素による
ものと推測される。
【００２４】本発明のバチルス ズブチリス ＫＷＩ−
８菌株は糸状性細菌溶菌能を有するので、菌自体を活性
汚泥と混合して増殖させることにより糸状性細菌の増殖
を阻止し、バルキングを防止することができる。またこ
のバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８菌株を培養した培
養液は、糸状性細菌を短期間に確実に溶菌することがで
きるので、この培養液を活性汚泥と混合することによ
り、活性汚泥の有用微生物や環境に悪影響を及ぼすこと
なく、効果的に糸状性バルキングを防止できる。本発明
のバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８菌株および培養液
は、活性汚泥のバルキングの防止だけでなく、その他糸
状性細菌による阻害、例えばスライム障害などの防止に
も有用である。
８菌株は糸状性細菌溶菌能を有するので、菌自体を活性
汚泥と混合して増殖させることにより糸状性細菌の増殖
を阻止し、バルキングを防止することができる。またこ
のバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８菌株を培養した培
養液は、糸状性細菌を短期間に確実に溶菌することがで
きるので、この培養液を活性汚泥と混合することによ
り、活性汚泥の有用微生物や環境に悪影響を及ぼすこと
なく、効果的に糸状性バルキングを防止できる。本発明
のバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８菌株および培養液
は、活性汚泥のバルキングの防止だけでなく、その他糸
状性細菌による阻害、例えばスライム障害などの防止に
も有用である。
【００２５】
【実施例】次に本発明の実施例について説明する。 参考例１ 各種活性汚泥を分離源とし、次のようなスクリーニング
によりバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８菌株を単離し
た。なお分離源は予め８０℃で２０分間加熱処理を施し
たものをスクリーニングに供した。
によりバチルス ズブチリス ＫＷＩ−８菌株を単離し
た。なお分離源は予め８０℃で２０分間加熱処理を施し
たものをスクリーニングに供した。
【００２６】（一次スクリーニング）糸状性細菌タイプ
０２１Ｎを含む活性汚泥を３０００Ｇで遠心分離し、純
水で洗浄後、同条件で再遠心分離した。さらにワーリン
グブレンダーを用いて１００００ｒｐｍで２分間ホモジ
ェナイズした後、１０００ｍｌ中にポリペプトン９ｇ、
酵母エキス１ｇ、リン酸二水素カリウム０．５ｇ、硫酸
マグネシウム０．２ｇおよび塩化カルシウム０．１ｇを
含む培地（ｐＨ７．２）に添加し、ｐＨを７．０に調整
した後、１１０℃で１５分間オートクレーブで処理して
糸状性細菌を滅菌した後、プレートにした。このプレー
トに滅菌水で適当に希釈した分離源０．１ｍｌをスプレ
ッドし、３０℃で２〜３日間インキュベートした。そし
てコロニーの周囲に溶菌斑を形成した菌を採取し、二次
スクリーニングに供するとともに、再度プレートにまい
て単一であることを確認した。
０２１Ｎを含む活性汚泥を３０００Ｇで遠心分離し、純
水で洗浄後、同条件で再遠心分離した。さらにワーリン
グブレンダーを用いて１００００ｒｐｍで２分間ホモジ
ェナイズした後、１０００ｍｌ中にポリペプトン９ｇ、
酵母エキス１ｇ、リン酸二水素カリウム０．５ｇ、硫酸
マグネシウム０．２ｇおよび塩化カルシウム０．１ｇを
含む培地（ｐＨ７．２）に添加し、ｐＨを７．０に調整
した後、１１０℃で１５分間オートクレーブで処理して
糸状性細菌を滅菌した後、プレートにした。このプレー
トに滅菌水で適当に希釈した分離源０．１ｍｌをスプレ
ッドし、３０℃で２〜３日間インキュベートした。そし
てコロニーの周囲に溶菌斑を形成した菌を採取し、二次
スクリーニングに供するとともに、再度プレートにまい
て単一であることを確認した。
【００２７】（二次スクリーニング）一次スクリーニン
グではオートクレーブで滅菌した糸状性細菌を用いてス
クリーニングしているので、二次スクリーニングでは、
一次スクリーニングでスクリーニングされた菌株につい
て、生きている糸状性細菌を用いて溶菌活性を判定し、
スクリーニングを行った。二次スクリーニングの具体的
な方法は、まず一次スクリーニングと同じ液体培地に一
次スクリーニングで分離した菌を植菌し、３０℃で２日
間培養した。次にこの培養液を１００００Ｇで１０分間
遠心分離した後、前記上清の溶菌活性を下記方法で判定
した。
グではオートクレーブで滅菌した糸状性細菌を用いてス
クリーニングしているので、二次スクリーニングでは、
一次スクリーニングでスクリーニングされた菌株につい
て、生きている糸状性細菌を用いて溶菌活性を判定し、
スクリーニングを行った。二次スクリーニングの具体的
な方法は、まず一次スクリーニングと同じ液体培地に一
次スクリーニングで分離した菌を植菌し、３０℃で２日
間培養した。次にこの培養液を１００００Ｇで１０分間
遠心分離した後、前記上清の溶菌活性を下記方法で判定
した。
【００２８】溶菌活性の判定は、生きている糸状性細菌
タイプ０２１Ｎを含む汚泥０．５ｍｌを前記上清５ｍｌ
に加え、３０℃で一晩インキュベートした後、位相差顕
微鏡により観察し、糸状性細菌の溶菌具合を判定した。
対照としては、前記上清の代りに滅菌した上清を用い
た。このような位相差顕微鏡による観察から、一次スク
リーニングされた菌株の糸状性細菌に対する溶菌活性を
判定し、糸状性細菌に対する溶菌能を確認した。
タイプ０２１Ｎを含む汚泥０．５ｍｌを前記上清５ｍｌ
に加え、３０℃で一晩インキュベートした後、位相差顕
微鏡により観察し、糸状性細菌の溶菌具合を判定した。
対照としては、前記上清の代りに滅菌した上清を用い
た。このような位相差顕微鏡による観察から、一次スク
リーニングされた菌株の糸状性細菌に対する溶菌活性を
判定し、糸状性細菌に対する溶菌能を確認した。
【００２９】実施例１ ポリペプトン０．９％、酵母エキス０．１％、リン酸二
水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０５％お
よび塩化カルシウム０．０１％からなる滅菌された液体
培地（ｐＨ７．０）２００ｍｌを５００ｍｌのフラスコ
に入れ、参考例１で単離したバチルス ズブチリス Ｋ
ＷＩ−８菌株を接種し、ロータリーシェイカーにて３０
℃で７２時間培養した。この培養液を遠心分離して固形
分を取除き、溶菌用の培養液とした。前述した活性測定
法で測定したこの培養液の溶菌活性は５００Ｕ／ｍｌで
あった。
水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０５％お
よび塩化カルシウム０．０１％からなる滅菌された液体
培地（ｐＨ７．０）２００ｍｌを５００ｍｌのフラスコ
に入れ、参考例１で単離したバチルス ズブチリス Ｋ
ＷＩ−８菌株を接種し、ロータリーシェイカーにて３０
℃で７２時間培養した。この培養液を遠心分離して固形
分を取除き、溶菌用の培養液とした。前述した活性測定
法で測定したこの培養液の溶菌活性は５００Ｕ／ｍｌで
あった。
【００３０】実施例２ 実施例１の培養液の濃縮液０．５ｍｌを糸状性細菌スフ
ァエロチルス ナタンスの５０ｍＭトリスバッファー懸
濁液２．５ｍｌに加え、４０℃で０．５〜１．５時間イ
ンキュベーションした。各懸濁液の吸光度を６６０ｎｍ
で測定した。結果を図１に示す。なお培養液を添加しな
いものを対照にした。図１からわかるように、懸濁液の
吸光度は１．０から１時間後には０．２に大きく低下
し、糸状性細菌の溶菌が明瞭に観察された。
ァエロチルス ナタンスの５０ｍＭトリスバッファー懸
濁液２．５ｍｌに加え、４０℃で０．５〜１．５時間イ
ンキュベーションした。各懸濁液の吸光度を６６０ｎｍ
で測定した。結果を図１に示す。なお培養液を添加しな
いものを対照にした。図１からわかるように、懸濁液の
吸光度は１．０から１時間後には０．２に大きく低下
し、糸状性細菌の溶菌が明瞭に観察された。
【００３１】
【発明の効果】本発明によれば、バチルス属に属し、か
つ糸状性細菌溶菌能を有する新規なバチルス ズブチリ
ス ＫＷＩ−８菌株が得られる。この菌株を培養した培
養液は糸状性細菌を溶菌することができるので、この培
養液を活性汚泥と混合することにより、活性汚泥の有用
微生物や環境に悪影響を及ぼすことなく、効果的に糸状
性バルキングを防止できる。
つ糸状性細菌溶菌能を有する新規なバチルス ズブチリ
ス ＫＷＩ−８菌株が得られる。この菌株を培養した培
養液は糸状性細菌を溶菌することができるので、この培
養液を活性汚泥と混合することにより、活性汚泥の有用
微生物や環境に悪影響を及ぼすことなく、効果的に糸状
性バルキングを防止できる。
【図１】実施例２の結果を示すグラフである。
Claims (1)
- 【請求項１】 バチルス属に属し、かつ糸状性細菌溶菌
能を有するバチルスズブチリス ＫＷＩ−８菌株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16766092A JPH067155A (ja) | 1992-06-25 | 1992-06-25 | 糸状性細菌溶菌能を有するバチルス ズブチリス ｋｗｉ−８菌株 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16766092A JPH067155A (ja) | 1992-06-25 | 1992-06-25 | 糸状性細菌溶菌能を有するバチルス ズブチリス ｋｗｉ−８菌株 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH067155A true JPH067155A (ja) | 1994-01-18 |
Family
ID=15853875
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16766092A Pending JPH067155A (ja) | 1992-06-25 | 1992-06-25 | 糸状性細菌溶菌能を有するバチルス ズブチリス ｋｗｉ−８菌株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH067155A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002125657A (ja) * | 2000-10-20 | 2002-05-08 | Mitsui Eng & Shipbuild Co Ltd | バチルス・サブチリスに属する新規微生物 |
-
1992
- 1992-06-25 JP JP16766092A patent/JPH067155A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002125657A (ja) * | 2000-10-20 | 2002-05-08 | Mitsui Eng & Shipbuild Co Ltd | バチルス・サブチリスに属する新規微生物 |
| JP4540211B2 (ja) * | 2000-10-20 | 2010-09-08 | 三井造船株式会社 | バチルス・サブチリスに属する新規微生物 |
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