JPH067130B2 - 凝集反応試験用水性溶媒 - Google Patents
凝集反応試験用水性溶媒Info
- Publication number
- JPH067130B2 JPH067130B2 JP61008704A JP870486A JPH067130B2 JP H067130 B2 JPH067130 B2 JP H067130B2 JP 61008704 A JP61008704 A JP 61008704A JP 870486 A JP870486 A JP 870486A JP H067130 B2 JPH067130 B2 JP H067130B2
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- Japan
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- antibody
- aqueous solvent
- antigenic determinant
- sensitized
- agglutination
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、凝集反応試薬用の希釈液に関するものであ
る。すなわち、凝集試験用の水性溶媒に関するものであ
る。
る。すなわち、凝集試験用の水性溶媒に関するものであ
る。
可溶性抗原を感作させた水不溶性微粒子（担体）を用い
て抗体を検出する方法は受身凝集反応と呼ばれる。ま
た、これとは逆に、抗体を感作させた担体により抗原を
検出する方法は逆受身凝集反応と呼ばれる。これらは感
度が鋭敏であることや、操作が簡単であることに加え、
反応が肉眼的に観察しやすいため、臨床検査や研究分野
で広く用いられる。
て抗体を検出する方法は受身凝集反応と呼ばれる。ま
た、これとは逆に、抗体を感作させた担体により抗原を
検出する方法は逆受身凝集反応と呼ばれる。これらは感
度が鋭敏であることや、操作が簡単であることに加え、
反応が肉眼的に観察しやすいため、臨床検査や研究分野
で広く用いられる。
かかる凝集反応は、原理的には１種類であるが担体の種
類に従っていくつかに分類される。
類に従っていくつかに分類される。
即ち、担体としては、赤血球、ラテックス、カオリン、
活性炭などが用いられる。担体として赤血球を用いた場
合には、受身赤血球凝集反応（ＰＨＡ法）、逆受身赤血
球凝集反応（ＲＰＨＡ法）と呼ばれている。さらに例え
ば、ＲＰＨＡ法では、精製したＨＢＳ抗体を担体である
赤血球に感作してＨＢＳ抗体感作赤血球を製し、このも
のと検体とを混合した時に水性溶媒中で凝集反応がみら
れるか否かによって、検体中にＨＢＳ抗原が含まれてい
るか否かを検知することができる。
活性炭などが用いられる。担体として赤血球を用いた場
合には、受身赤血球凝集反応（ＰＨＡ法）、逆受身赤血
球凝集反応（ＲＰＨＡ法）と呼ばれている。さらに例え
ば、ＲＰＨＡ法では、精製したＨＢＳ抗体を担体である
赤血球に感作してＨＢＳ抗体感作赤血球を製し、このも
のと検体とを混合した時に水性溶媒中で凝集反応がみら
れるか否かによって、検体中にＨＢＳ抗原が含まれてい
るか否かを検知することができる。
凝集反応を利用した分析方法は、簡便でかつ測定感度も
高いので各種抗原や抗体の検査に広く利用されているこ
とは周知の通りである。
高いので各種抗原や抗体の検査に広く利用されているこ
とは周知の通りである。
しかし、これら水性溶媒中での凝集試験に共通した欠点
として、特にモノクローナル抗体を感作したＲＰＨＡ法
においては、抗原の種類により時として凝集反応が弱く
不安定な場合がある。
として、特にモノクローナル抗体を感作したＲＰＨＡ法
においては、抗原の種類により時として凝集反応が弱く
不安定な場合がある。
本発明は、凝集反応が強く安定な凝集試験を行いうる凝
集反応試薬用水性溶媒を提供することである。
集反応試薬用水性溶媒を提供することである。
かかる問題点を解決するために本発明者らは種々研究を
重ねてきたところ、モノクローナル抗体を使用した場合
には、一種の抗原決定基としか反応しないために凝集反
応が弱く不安定な場合があるのではないかと考えた。し
かして、本発明者らはこのような弱い凝集反応を示す検
体に対しては、感作に用いたモノクローナル抗体が認識
する抗原決定基以外の抗原決定基に対する抗体を少量添
加することにより、安定した凝集反応を示すことを初め
て見出した。
重ねてきたところ、モノクローナル抗体を使用した場合
には、一種の抗原決定基としか反応しないために凝集反
応が弱く不安定な場合があるのではないかと考えた。し
かして、本発明者らはこのような弱い凝集反応を示す検
体に対しては、感作に用いたモノクローナル抗体が認識
する抗原決定基以外の抗原決定基に対する抗体を少量添
加することにより、安定した凝集反応を示すことを初め
て見出した。
本発明はかかる知見に基づいて完成されたものであり、
その要旨は、水不溶性微粒子を担体とした凝集反応試験
に使用される水性溶媒であって、検出対象物質に対する
抗体を存在させてなることを特徴とする凝集反応試験用
水性溶媒である。
その要旨は、水不溶性微粒子を担体とした凝集反応試験
に使用される水性溶媒であって、検出対象物質に対する
抗体を存在させてなることを特徴とする凝集反応試験用
水性溶媒である。
本発明で使用される抗体は、ポリクローナルおよびモノ
クローナル抗体のどちらであってもよく、通常感作に用
いたモノクローナル抗体が認識する抗原決定基以外の抗
原決定基に対する抗体が使用される。その際、感作に用
いたモノクローナル抗体が認識する抗原決定基と同じ抗
原決定基を認識する抗体を含むポリクローナル抗体でも
良いが、その場合少なくとも感作に用いたモノクローナ
ルが認識する抗原決定基以外の抗原決定基を認識する抗
体を含むものが使用される。
クローナル抗体のどちらであってもよく、通常感作に用
いたモノクローナル抗体が認識する抗原決定基以外の抗
原決定基に対する抗体が使用される。その際、感作に用
いたモノクローナル抗体が認識する抗原決定基と同じ抗
原決定基を認識する抗体を含むポリクローナル抗体でも
良いが、その場合少なくとも感作に用いたモノクローナ
ルが認識する抗原決定基以外の抗原決定基を認識する抗
体を含むものが使用される。
また、水性溶媒中に添加する抗体量は、溶媒中での終濃
度がＰＨＡ法で測った場合１：０．２５〜１：１、また
は特異抗体量として0.25〜１ng／mlに相当する量であ
る。
度がＰＨＡ法で測った場合１：０．２５〜１：１、また
は特異抗体量として0.25〜１ng／mlに相当する量であ
る。
水性溶媒としては、従来既知のあらゆる凝集試験用水性
溶媒が使用でき、例えば水、生理食塩水、各種緩衝液
（リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、グリシン緩衝液）、ア
ルブミン溶液、デキストラン溶液、正常ヒト及び動物血
清溶液、合成高分子物質の溶液、界面活性剤含有水溶
液、およびこれらの組み合わせからなる溶液が例示され
る。当該水性溶媒のPHは、約6.0〜8.5が好ましく、かか
るPHへの調整は緩衝液で行われることが好ましい。水性
溶媒の塩濃度は、比較的低濃度であることが好ましく、
より好ましくは、生理的等張な溶液である。なお、さら
にこの溶液に従来既知の非特異凝集反応阻止物質を混合
してもよい。
溶媒が使用でき、例えば水、生理食塩水、各種緩衝液
（リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、グリシン緩衝液）、ア
ルブミン溶液、デキストラン溶液、正常ヒト及び動物血
清溶液、合成高分子物質の溶液、界面活性剤含有水溶
液、およびこれらの組み合わせからなる溶液が例示され
る。当該水性溶媒のPHは、約6.0〜8.5が好ましく、かか
るPHへの調整は緩衝液で行われることが好ましい。水性
溶媒の塩濃度は、比較的低濃度であることが好ましく、
より好ましくは、生理的等張な溶液である。なお、さら
にこの溶液に従来既知の非特異凝集反応阻止物質を混合
してもよい。
本発明に係る水性溶媒を用いる凝集試験用担体は特に限
定されるものではなく、例示すればラテックス樹脂類、
ゴム類、無機吸着剤、多糖類粒子および動物（例えばヒ
ツジ、モルモット、Ｏ型の人、ニワトリなど）の赤血球
や白血球をホルマリン、グルタルアルデヒドなどで固定
したものである。このような担体としては約２０μ以
下、特に５〜１５μ程度の粒状のものを使用するのが有
利である。このような担体に抗体を感作させる処理は自
体公知の方法に準じて行うことができる。
定されるものではなく、例示すればラテックス樹脂類、
ゴム類、無機吸着剤、多糖類粒子および動物（例えばヒ
ツジ、モルモット、Ｏ型の人、ニワトリなど）の赤血球
や白血球をホルマリン、グルタルアルデヒドなどで固定
したものである。このような担体としては約２０μ以
下、特に５〜１５μ程度の粒状のものを使用するのが有
利である。このような担体に抗体を感作させる処理は自
体公知の方法に準じて行うことができる。
本発明の水性溶媒は、例えば、抗体感作担体と検体血液
との凝集反応によって、検体中のＨＢｅ抗原を定量的に
測定する場合の希釈溶媒として、また当該凝集反応を段
階的に希釈して反応陰性になるまでの希釈倍数をもとめ
ることによって検体中のＨＢｅ抗原を定量的に測定する
場合の希釈溶媒等として使用される。
との凝集反応によって、検体中のＨＢｅ抗原を定量的に
測定する場合の希釈溶媒として、また当該凝集反応を段
階的に希釈して反応陰性になるまでの希釈倍数をもとめ
ることによって検体中のＨＢｅ抗原を定量的に測定する
場合の希釈溶媒等として使用される。
実施例１ 0.075Ｍ塩化ナトリウム加0.075Ｍリン酸緩衝液に1/200
容量の正常マウス血清、1/100容量のヒツジ赤血球膜ス
トローマ及び0.2ｗ／ｖ％ウシアルブミンを添加した水
溶液を得る。当該水溶液に、ＰＨＡ法での抗体価が終濃
度１：0.25〜１：１になる量のＨＢｅ抗体（ヒト）を添
加して凝集反応試薬用水性溶媒を製造した。
容量の正常マウス血清、1/100容量のヒツジ赤血球膜ス
トローマ及び0.2ｗ／ｖ％ウシアルブミンを添加した水
溶液を得る。当該水溶液に、ＰＨＡ法での抗体価が終濃
度１：0.25〜１：１になる量のＨＢｅ抗体（ヒト）を添
加して凝集反応試薬用水性溶媒を製造した。
実施例２ 0.075Ｍ塩化ナトリウム加0.075Ｍリン酸緩衝液に1/200
容量の正常マウス血清、1/100容量のヒツジ赤血球膜ス
トローマ及び0.2ｗ／ｖ％ウシアルブミンを添加した水
溶液を得る。当該水溶液に、ＰＨＡ法での抗体価が終濃
度１：0.25〜１：１になる量のＨＢＳ抗体（モルモッ
ト）を添加して凝集反応試験用水性溶媒を製造した。
容量の正常マウス血清、1/100容量のヒツジ赤血球膜ス
トローマ及び0.2ｗ／ｖ％ウシアルブミンを添加した水
溶液を得る。当該水溶液に、ＰＨＡ法での抗体価が終濃
度１：0.25〜１：１になる量のＨＢＳ抗体（モルモッ
ト）を添加して凝集反応試験用水性溶媒を製造した。
実験例１ ＨＢｅ抗原に対するマウスモノクローナル抗体をグルタ
ルアルデヒドで固定化処理したヒツジ赤血球またはラテ
ックス（日本合成ゴム社製）に感作し、ＨＢｅ抗体感作
ヒツジ赤血球（ＲＰＨＡ試薬）またはＨＢｅ抗体感作テ
ラックス粒子（ラテックス試薬）を得た。
ルアルデヒドで固定化処理したヒツジ赤血球またはラテ
ックス（日本合成ゴム社製）に感作し、ＨＢｅ抗体感作
ヒツジ赤血球（ＲＰＨＡ試薬）またはＨＢｅ抗体感作テ
ラックス粒子（ラテックス試薬）を得た。
他方、0.075Ｍ塩化ナトリウム加0.075Ｍリン酸緩衝液に
1/200容量の正常マウス血清、1/100容量のヒツジ赤血球
膜ストローマおよび0.2ｗ／ｖ％ウシアルブミンを添加
し、測定用希釈液を調製した。
1/200容量の正常マウス血清、1/100容量のヒツジ赤血球
膜ストローマおよび0.2ｗ／ｖ％ウシアルブミンを添加
し、測定用希釈液を調製した。
この希釈液にＰＨＡ法での抗体価が終濃度１：０（無添
加）〜１：４になる量のＨＢｅ抗体（ヒト）を添加し、
上記のＲＰＨＡ試薬およびラテックス試薬を用い、ＨＢ
ｅ抗原の定量試験を行い、その結果を第１表に示す。
加）〜１：４になる量のＨＢｅ抗体（ヒト）を添加し、
上記のＲＰＨＡ試薬およびラテックス試薬を用い、ＨＢ
ｅ抗原の定量試験を行い、その結果を第１表に示す。
試験はマイクロプレートを用いたマイクロタイトレーシ
ョン法に準じて行った。
ョン法に準じて行った。
上記の結果から明らかなように、ＨＢｅ抗体を１：0.25
〜１：１量添加した希釈液を用いることにより、ＨＢｅ
抗原価（検出感度）は１〜２管（２〜４倍）上昇した。
〜１：１量添加した希釈液を用いることにより、ＨＢｅ
抗原価（検出感度）は１〜２管（２〜４倍）上昇した。
本発明の水性溶媒を凝集反応試験用試薬の調製等に用い
ることにより、上記凝集反応の安定化および測定感度の
改善を達成することができる。
ることにより、上記凝集反応の安定化および測定感度の
改善を達成することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭59−46856（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−92353（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−127167（ＪＰ，Ａ) Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｕｔｏｍａｔ ｉｃ Ｃｈｅｍｌ ｓｔｒｙ Ｖｏｌ. ２，Ｎｏ．３，（1980）Ｐ．149−152
Claims (4)
- 【請求項１】水不溶性微粒子を担体とし、これにモノク
ローナル抗体を感作したものを用い凝集反応により抗原
を検出する凝集反応試験に使用される水性溶媒であっ
て、感作される抗体が認識する抗原決定基以外の抗原決
定基に対する抗体を存在させてなることを特徴とする凝
集反応試験用水性溶媒。 - 【請求項２】感作される抗体が認識する抗原決定基以外
の抗原決定基に対する抗体がポリクローナルあるいはモ
ノクローナル抗体であることを特徴とする特許請求の範
囲第(1)項に記載の水性溶媒。 - 【請求項３】水不溶性微粒子が赤血球、白血球、ラテッ
クスまたは多糖類粒子である特許請求の範囲第(1)項ま
たは第(2)項に記載の水性溶媒。 - 【請求項４】感作される抗体が認識する抗原決定基以外
の抗原決定基に対する抗体を水性溶媒中に存在させる量
が、ＰＨＡ法での抗体価として１：0.25〜１：１（終濃
度）または特異抗体量として0.25〜１ng／ml（終濃度）
である特許請求の範囲第(1)〜(3)項のいずれかに記載の
水性溶媒。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61008704A JPH067130B2 (ja) | 1986-01-17 | 1986-01-17 | 凝集反応試験用水性溶媒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61008704A JPH067130B2 (ja) | 1986-01-17 | 1986-01-17 | 凝集反応試験用水性溶媒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62168051A JPS62168051A (ja) | 1987-07-24 |
| JPH067130B2 true JPH067130B2 (ja) | 1994-01-26 |
Family
ID=11700322
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61008704A Expired - Lifetime JPH067130B2 (ja) | 1986-01-17 | 1986-01-17 | 凝集反応試験用水性溶媒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH067130B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02120664A (ja) * | 1988-10-31 | 1990-05-08 | Tetsuo Tomiyama | 免疫学的抗原検出法 |
| DE4309393A1 (de) * | 1993-03-23 | 1994-09-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verringerung des Hook-Effekts in Immuntests mit teilchenförmigem Trägermaterial |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3366740D1 (en) * | 1982-08-06 | 1986-11-13 | Int Inst Cellular Molecul Path | Particle agglutination assay of antigens |
| JPS5992353A (ja) * | 1982-11-19 | 1984-05-28 | Shinotesuto Kenkyusho:Kk | 不溶性担体粒子を用いる凝集反応測定方法 |
-
1986
- 1986-01-17 JP JP61008704A patent/JPH067130B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｕｔｏｍａｔｉｃＣｈｅｍｌｓｔｒｙＶｏｌ．２，Ｎｏ．３，（１９８０）Ｐ．１４９−１５２ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62168051A (ja) | 1987-07-24 |
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